CN109303166A - 耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法 - Google Patents
耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109303166A CN109303166A CN201811193285.XA CN201811193285A CN109303166A CN 109303166 A CN109303166 A CN 109303166A CN 201811193285 A CN201811193285 A CN 201811193285A CN 109303166 A CN109303166 A CN 109303166A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- lactic acid
- microcapsules
- capsule
- preparation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 title claims abstract description 161
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 45
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 title claims abstract description 24
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 title claims abstract description 24
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 161
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 112
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 claims abstract description 88
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims abstract description 82
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 79
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 24
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 23
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 21
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 21
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims abstract description 15
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims abstract description 15
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 14
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 101
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 claims description 82
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 76
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 claims description 76
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 claims description 76
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 35
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 31
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 claims description 29
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 claims description 29
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M sodium bicarbonate Substances [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 16
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 claims description 15
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 15
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 15
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 14
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 claims description 14
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 14
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 12
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 claims description 11
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 10
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 claims description 9
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 8
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 7
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 6
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 abstract description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 abstract description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 26
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 12
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 description 7
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 5
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 5
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000011162 core material Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 4
- 235000013406 prebiotics Nutrition 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 2
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 2
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 229930182843 D-Lactic acid Natural products 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N D-lactic acid Chemical compound C[C@@H](O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 241000218588 Lactobacillus rhamnosus Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004308 accommodation Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229940099352 cholate Drugs 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000002726 cyst fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000006196 deacetylation Effects 0.000 description 1
- 238000003381 deacetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001125 extrusion Methods 0.000 description 1
- 235000021050 feed intake Nutrition 0.000 description 1
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 238000005469 granulation Methods 0.000 description 1
- 230000003179 granulation Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 239000008236 heating water Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 244000039328 opportunistic pathogen Species 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- CEIZFXOZIQNICU-UHFFFAOYSA-N tenuazonic acid Chemical compound CCC(C)C1NC(=O)C(C(C)=O)=C1O CEIZFXOZIQNICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 241001148471 unidentified anaerobic bacterium Species 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K10/00—Animal feeding-stuffs
- A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
- A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
- A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23K—FODDER
- A23K40/00—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs
- A23K40/30—Shaping or working-up of animal feeding-stuffs by encapsulating; by coating
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
- A23V2400/11—Lactobacillus
- A23V2400/175—Rhamnosus
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Physiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明涉及一种耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法，该方法包括如下步骤：（1）配置用于乳酸菌培养的MRS液体培养基与MRS固体培养基；（2）配置壁材溶液：（3）配置固化剂；（4）配置微胶囊释放剂；（5）乳酸菌菌液的制备；（6）微胶囊的制备：将乳酸菌菌液和SA以1:0.5‑1的重量比混合得到混合液，用注射器将混合液滴入CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，搅拌使微囊充分凝固，然后将微囊转移入pH值为4.0‑5.0的CS溶液中搅拌悬浮1‑2小时制得微胶囊。本发明通过调节微囊化材料的配比，在80℃高温下处理15min，与其他微胶囊产品的热处理试验相比，具有处理温度高，处理时间长的特点，且微胶囊耐热效果良好。为乳酸菌微胶囊饲料化的开发提供了新的途径。
Description
技术领域
本发明涉及一种微胶囊的制备，具体涉及一种耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法，属于生物技术领域。
背景技术
在目前动物饲养生产产业化快速发展的阶段，长期使用抗生素与化学药物致使动物病原体产生耐药性，导致动物体内消化道生态失衡，动物抵抗疾病能力下降。乳酸菌是最主要的益生菌之一，是动物机体内必不可少的正常生物菌群。在实际应用中能极好的遏制病原菌的定植，降低胆固醇，控制体内毒素等，对机体生理功能的提升具有极大的促进功效。如何将乳酸菌作为一种高效、安全的天然饲料添加剂应用到养殖生存中已经受到了广泛的关注。
乳酸菌要起到益生菌的益生功能，必须活着通过胃内的低pH环境，使足够的菌数量到达肠道并定植。据研究报道，摄入的食品中乳酸菌的含量应达到108-109cfu/g才能确保达到肠道内的菌量有106-107cfu/g。胃液的低pH环境和与氧气的接触是限制乳酸菌发挥益生作用的不利因素。要减轻或抵消这些不利因素，在现在的研究中，将乳酸菌微囊化是一种方便可行的方法。微囊化是将芯材封装入封装材料或者薄膜中，起到保护芯材免受外界不利条件危害的封装过程。已有研究证实乳酸菌微胶囊可高效的将乳酸菌封装入壁材内，能显著的提高乳酸菌的耐胃酸、胆盐、耐高湿等特点，同时在到达肠道处能从微囊中释放并定植于肠道。
现在仍然有大量抗生素和化学药物应用在畜牧养殖领域，长期使用会导致动物病原菌耐药性的提高，动物肉质受到影响，最终肉内的残留还有可能威胁人类的健康。而益生菌作为改善这一现状的可靠突破点已经受到了人们广泛的关注，动物往往通过灌喂乳酸菌液的方式摄入乳酸菌，一方面导致乳酸菌在经过胃环境的时候就由于强酸作用大量死亡，另一方面则不易定量乳酸菌的摄入量，摄入方式也不够便捷。所以本研究希望通过将乳酸菌以微胶囊的形式添加入饲料，在动物采食的时候直接摄入可知数量的乳酸菌。动物饲料在制粒时需要进行一段几十秒到几分钟的高温时间，由于乳酸菌的不耐高温性质，克服乳酸菌微胶囊的高温压力，提高微胶囊的耐热性能是本试验的主要目的。
发明内容
本发明提供一种耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法，该方法通过双层包埋技术提高乳酸菌的耐热性能。
为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
一种耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法，该方法包括如下步骤：
(1)配置用于乳酸菌培养的MRS液体培养基与MRS固体培养基；
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末加入水中，加热溶解，过滤除菌后制得1.5-2.5％质量浓度的SA溶液；壳聚糖(CS)粉末加入质量浓度1-1.5％的冰醋酸水溶液中振荡，制得1-2％质量浓度的CS溶液，并调节CS溶液的pH值在4.0-5.0范围内；
(3)配置固化剂：将CaCl2颗粒与水混合制得质量浓度为1-2％的CaCl2溶液，灭菌后冷却至室温备用；
(4)配置微胶囊释放剂：称取适量NaHCO3与柠檬酸钠粉末，溶于双蒸水，制得含有0.2M NaHCO3和0.06M柠檬酸钠混合溶液，调节pH值至7.8±0.1，经121℃ 15min灭菌后，冷却至室温备用；
(5)乳酸菌菌液的制备；
(6)乳酸菌微胶囊的制备：将乳酸菌菌液和SA以1:0.5-1的重量比混合得到混合液，用注射器将混合液滴入CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，搅拌使微囊充分凝固，然后将微囊转移入pH值为4.0-5.0的CS溶液中搅拌悬浮1-2小时制得微胶囊。
一、乳酸菌的选择
为验证效果，本发明选用的芯材乳酸菌为鼠李糖乳杆菌LGG(LactobacillusrhamnosusGG,LGG)，LGG是从健康人体肠道分离出的一株乳酸菌，是目前人类研究最广泛的益生菌之一，具有平衡肠道菌群，强化免疫屏障，增强人体免疫能力等多项益生作用。LGG为革兰阳性厌氧菌，无质粒；不能利用乳糖，但可代谢单糖；在厌氧情况下能很好生长。本发明乳酸菌的扩大培养步骤如下：将LGG按2％的接种量，接入灭菌后的MRS培养基，置于37℃恒温培养箱培养18h，4000rpm离心10min，弃上清液，用0.9％生理盐水细菌3次，收集菌泥，并注入新鲜MRS培养基制得作为芯材的乳酸菌液。
二、壁材的选择
本发明选用的壁材为海藻酸钠(sodium alginate,SA)和壳聚糖(chitosan,CS)。
(1)海藻酸钠(sodium alginate,SA)是从天然褐藻中提取的一种线性阴离子高分子多糖，能与二价阳离子Ca2+、Ba2+、Cu2+等交联形成凝胶产物。由于自身具有良好的稳定性，溶解性、成膜性、安全性，已经在食品和医学行业应用广泛。本试验的海藻酸钠溶液制备步骤如下：将海藻酸钠加入蒸馏水中，70℃水浴加热溶解过夜，至海藻酸钠固体溶解完全，形成澄清粘稠液体，试验所需海藻酸钠浓度为0.5％、1％、2％w/w。
(2)壳聚糖(chitosan,CS)从甲壳动物外壳中提取的一种天然的碱性直链阳离子高分子多糖，是甲壳素脱乙酰基后的产物。壳聚糖侧链具有大量的伯氨基，能在溶液中与阴离子高聚物络合形成高分子半透膜，由于具有易被生物酶降解、无毒、经济廉价等特点，已在生物医学中成为了一种广泛使用的高分子生物材料。本试验的壳聚糖溶液制备步骤如下：将壳聚糖加入含有2％冰乙酸的蒸馏水中，搅拌过夜，至壳聚糖固体溶解完全，形成澄清粘稠液体，并用pH试剂调节试验所需的壳聚糖的pH，试验所需壳聚糖浓度为0.5％、1％、2％w/w；所需pH为pH4.0、pH5.0、pH6.0。
三、微囊化方法选择
本发明选用挤压法进行微胶囊的制备，通过使用针头口径为0.45mm的5mL注射器将乳酸菌液和海藻酸钠混合液滴入CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，磁力搅拌器600rpm/min转速搅拌30min，使微囊充分凝固。然后将微囊转移入壳聚糖溶液中搅拌悬浮1小时进行第二层包被。
四、耐热性能测定方法
(1)乳酸菌微胶囊的热处理：将乳酸菌LGG微胶囊等量分成两份，一份置于于80℃烘箱进行15min的加热处理，另一份不进行热处理。
(2)乳酸菌微胶囊的破壁：取适量制备的微胶囊置于0.06mol/L柠檬酸钠和0.2mol/L NaHCO3混合解囊液中(调节pH为7.8)，37℃、180rpm摇床振荡1h，使微胶囊完全崩解，以供计数。
(3)乳酸菌LGG活菌计数：采用平板计数法计数
(4)乳酸菌耐热性能的测定：乳酸菌LGG耐热性(％)＝(Nh/Ni)×100％；Nh是热处理后LGG微胶囊中的活菌数；Ni是LGG未经热处理LGG微胶囊中的活菌数。
五、乳酸菌微胶囊单因素调节试验内容见实施例1。
作为优选，该方法包括如下步骤：
(1)配置用于乳酸菌培养的MRS液体培养基与MRS固体培养基；
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末加入水中，在70-75℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得2％质量浓度的SA溶液；壳聚糖(CS)粉末加入质量浓度1-1.5％的冰醋酸水溶液中振荡，制得1-2％质量浓度的CS溶液，并调节CS溶液的pH值在4.0-5.0范围内；
(3)配置固化剂：将CaCl2颗粒与水混合制得质量浓度为1-2％的CaCl2溶液，经121℃ 15min灭菌后，冷却至室温备用；
(4)配置微胶囊释放剂：称取适量NaHCO3与柠檬酸钠粉末，溶于双蒸水，制得含有0.2M NaHCO3和0.06M柠檬酸钠混合溶液，调节pH值至7.8，经121℃ 15min灭菌后，冷却至室温备用。
(5)乳酸菌菌液的制备；
(6)乳酸菌微胶囊的制备：将乳酸菌菌液和SA以1:0.5-1的重量比混合得到混合液，用注射器将10mL混合液滴入100mL CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，磁力搅拌器600-750rpm/min转速搅拌30-45min，使微囊充分凝固，然后将微囊转移入50mL pH值为5.0的CS溶液中搅拌悬浮1-2小时制得微胶囊。
作为优选，步骤(5)乳酸菌菌液的制备为：将-80℃冰箱中冻存的乳酸菌菌液以1:100的比例加入MRS液体培养基，在37℃恒温培养箱中复苏18h，再以同样的条件转接一代；菌液经过4000rpm速度离心，去上清，用无菌生理盐水冲洗，同样的方法重复清洗2-3遍，使用无菌生理盐水将洗净的乳酸菌菌泥悬浮，得到108数量级的乳酸菌菌液备用。
在乳酸菌工业生产中往往会伴随着高温处理的过程，如喷雾干燥与巴斯德灭菌等。高温会对大多数的益生菌造成伤害，甚至直接导致益生菌的死亡。目前对微囊化的效果调试较少的针对其抵抗高温的能力，本发明通过调节微囊化材料的配比，在80℃高温下处理15min，与其他微胶囊产品的热处理试验相比，具有处理温度高，处理时间长的特点，且微胶囊耐热效果良好。为乳酸菌微胶囊饲料化的开发提供了新的途径。
本发明以乳酸菌LGG为例制备乳酸菌微胶囊，本发明方法不限于该菌株，本发明方法同样适用其他乳酸菌。
附图说明
图1是不同CS pH值条件下LGG微胶囊的耐热性能检测图；
图2是不同LGG：SA比例条件下LGG微胶囊的耐热性能检测图；
图3是不同SA浓度条件下LGG微胶囊的耐热性能检测图；
图4是不同CS浓度条件下LGG微胶囊的耐热性能检测图；
图5是不同CaCl2浓度条件下LGG微胶囊的耐热性能检测图；
图6是在配比为A2B2C2D3E3,即CSpH值为5，VLGG:VSA为1:1，CS浓度为1％，SA浓度为2％,CaCl2浓度为2％条件下测得微胶囊益生菌的活菌数与耐热性能图；
图7是在配比为A2B1C2D3E1,即CSpH值为5，VLGG:VSA为1:0.5，CS浓度为1％，SA浓度为2％,CaCl2浓度为0.5％条件下测得微胶囊益生菌的活菌数与耐热性能图；
图8是在配比为A2B1C2D3E3,即CSpH值为5，VLGG:VSA为1:0.5，CS浓度为1％，SA浓度为2％,CaCl2浓度为2％条件下测得微胶囊益生菌的活菌数与耐热性能图。
注：图6-8中，“LGG ME”代表微胶囊乳酸菌LGG，“H-LGG ME”代表加热后的微胶囊乳酸菌LGG。“Suvival”代表加热后微胶囊内LGG的存活率，即微胶囊益生菌的耐热性能。
具体实施方案
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围
在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。本发明所述高压灭菌为本领域技术常识，在此不做详细说明。
原料来源：海藻酸钠，购自上海麦克林生化科技有限公司；
壳聚糖，购自上海麦克林生化科技有限公司；
柠檬酸钠，购自上海麦克林生化科技有限公司；
碳酸氢钠，购自温州市化学用料厂；
无水氯化钙，购自西陇化工股份有限公司。
实施例1乳酸菌LGG微胶囊单因素调节试验
试验方案一：一种提高乳酸菌微胶囊耐热性的方法(调节CS的pH值)。
(1)配置乳酸菌培养基：高压灭菌适量适用于乳酸菌培养与计数的MRS液体培养基与MRS固体培养基，根据培养基使用说明书称取适量，加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末按1％比例加入蒸馏水中，在70℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得SA溶液；壳聚糖(CS)粉末按1％比例加入含1％冰醋酸的蒸馏水中振荡溶液，制得CS溶液，并分别调节pH值为4.0、5.0、6.0。
(3)配置固化剂：将CaCl2颗粒按1％比例加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(4)配置微胶囊释放剂：称取适量NaHCO3与柠檬酸钠粉末，溶于双蒸水，制得含有0.2M NaHCO3和0.06M柠檬酸钠混合溶液，调节pH值至7.8，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(5)乳酸菌LGG的菌液制备：将-80℃冰箱中冻存的LGG菌液以1:100的比例加入MRS液体培养基，在37℃恒温培养箱中复苏18h，再以同样的条件转接一代。菌液经过4000rpm速度离心，去上清，用无菌生理盐水冲洗，同样的方法重复清洗2遍，使用无菌生理盐水将洗净的LGG菌泥悬浮，得到108数量级LGG菌液备用。
(6)LGG微胶囊的制备：将LGG菌液和SA以1:1的比例混合，注射器将10mL混合液滴入100mL CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，磁力搅拌器600rpm/min转速搅拌30min，使微囊充分凝固。然后将微囊转移入50mL不同CS溶液(pH值为4.0、5.0、6.0)中搅拌悬浮1小时制得微胶囊。
(7)LGG微胶囊的耐热性能检测：将每组LGG微胶囊各称取两份0.01g，一份经过80℃高温处理15min，一份不作处理。然后加入2mL释放剂在摇床中以37℃，180rpm的条件振荡1h，采用平板计数法检测微囊内的活菌数，乳酸菌LGG耐热性(％)＝(Nh/Ni)×100％；Nh是热处理后LGG微胶囊中的活菌数；Ni是LGG未经热处理LGG微胶囊中的活菌数。耐热性能结果如图1所示。
结论：壁材CS在pH值为4的条件下制备的LGG微胶囊耐热性能最佳。
试验方案二：一种提高乳酸菌微胶囊耐热性的方法(调节LGG:SA比例)。
(1)配置乳酸菌培养基：如试验方案一所示。
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末按1％比例加入蒸馏水中，在70℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得SA溶液；壳聚糖(CS)粉末按1％比例加入含1％冰醋酸的蒸馏水中振荡溶液，制得CS溶液，并调节pH值为4。
(3)配置固化剂：如试验方案一所示。
(4)配置微胶囊释放剂：如试验方案一所示。
(5)乳酸菌LGG的菌液制备：如试验方案一所示。
(6)LGG微胶囊的制备：将LGG菌液和SA分别以1:0.5、1:1、1:2、1:4的比例混合，注射器将10mL混合液滴入100mL CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，磁力搅拌器600rpm/min转速搅拌30min，使微囊充分凝固。然后将微囊转移入50mL pH值为4的CS溶液中搅拌悬浮1小时制得微胶囊。
(7)LGG微胶囊的耐热性能检：如试验方案一所示。耐热性能结果如图2所示。
结论：LGG菌液与壁材SA的比例在1:0.5条件下制备的LGG微胶囊耐热性能最佳。
试验方案三：一种提高乳酸菌微胶囊耐热性的方法(调节SA浓度)。
(1)配置乳酸菌培养基：如试验方案一所示。
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末分别按0.5％、1％、2％比例加入蒸馏水中，在70℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得SA溶液；壳聚糖(CS)粉末按1％比例加入含1％冰醋酸的蒸馏水中振荡溶液，制得CS溶液，并调节pH值为4。
(3)配置固化剂：如试验方案一所示。
(4)配置微胶囊释放剂：如试验方案一所示。
(5)乳酸菌LGG的菌液制备：如试验方案一所示。
(6)LGG微胶囊的制备：将LGG菌液和SA以1:0.5的比例混合，注射器将10mL混合液滴入100mL CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，磁力搅拌器600rpm/min转速搅拌30min，使微囊充分凝固。然后将微囊转移入50mL pH值为4的CS溶液中搅拌悬浮1小时制得微胶囊。
(7)LGG微胶囊的耐热性能检：如试验方案一所示。耐热性能结果如图3所示。
结论：SA的浓度在2％条件下制备的LGG微胶囊耐热性能最佳。
试验方案四：一种提高乳酸菌微胶囊耐热性的方法(调节CS浓度)。
(1)配置乳酸菌培养基：如试验方案一所示。
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末按2％比例加入蒸馏水中，在70℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得SA溶液；壳聚糖(CS)粉末分别按一定比例加入含1％冰醋酸的蒸馏水中振荡溶液，制得0.5％、1％、2％CS溶液，并调节pH值为4。
(3)配置固化剂：如试验方案一所示。
(4)配置微胶囊释放剂：如试验方案一所示。
(5)乳酸菌LGG的菌液制备：如试验方案一所示。
(6)LGG微胶囊的制备：如试验方案三所示。
(7)LGG微胶囊的耐热性能检：如试验方案一所示。耐热性能结果如图4所示。
结论：CS的浓度在2％条件下制备的LGG微胶囊耐热性能最佳。
试验方案五：一种提高乳酸菌微胶囊耐热性的方法(调节CaCl2浓度)。
(1)配置乳酸菌培养基：如实施例1所示。
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末按2％比例加入蒸馏水中，在70℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得SA溶液；壳聚糖(CS)粉末按2％比例加入含1％冰醋酸的蒸馏水中振荡溶液，制得CS溶液，并调节pH值为4。
(3)配置固化剂：将CaCl2颗粒分别按0.5％、1％、2％比例加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(4)配置微胶囊释放剂：如实施例1所示。
(5)乳酸菌LGG的菌液制备：如实施例1所示。
(6)LGG微胶囊的制备：如试验方案三所示。
(7)LGG微胶囊的耐热性能检：如实施例1所示。耐热性能结果如图5所示。
结论：CaCl2的浓度在1％条件下制备的LGG微胶囊耐热性能最佳。
试验方案六：一种提高乳酸菌微胶囊耐热性的方法(正交优化)。
(1)配置乳酸菌培养基：如实施例1所示。
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末按一定比例加入蒸馏水中，在70℃水浴锅中加热溶解，分别制得0.5％、1％、2％SA溶液，0.22μm滤膜过滤除菌；壳聚糖(CS)粉末按一定比例加入含1％冰醋酸的蒸馏水中振荡溶解，分别制得0.5％、1％、2％CS溶液，并分别调节pH值为4、5、6。
(3)配置固化剂：将CaCl2颗粒分别按0.5％、1％、2％比例加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(4)配置微胶囊释放剂：如实施例1所示。
(5)乳酸菌LGG的菌液制备：如实施例1所示。
(6)LGG微胶囊的制备：采用正交试验L18(35)正交表1材料配比进行试验，具体步骤如实施例1所示，3次重复。
表1
(7)LGG微胶囊的耐热性能检：如实施例1所示。耐热性能结果如表2所示。
表2
注：*表示活菌数低于2*104cfu/g，平板计数未检测出，a-g表示显著性差异，p<0.05。
结论：在正交试验结果中观察到5个因素影响LGG微胶囊耐热性能的程度大小为D(Conc SA)>B(VLGG:VSA)>E(Conc CaCl2)>C(Conc CS)>A(CS pH)，正交所得最佳配比为A2B1C2D3E3,即CSpH值为5，VLGG:VSA为1:0.5，CS浓度为1％，SA浓度为2％,CaCl2浓度为2％。
总结：通过以上6项实施方案，将单因素与正交相结合，同时结合材料的有效利用，得出耐热性LGG微胶囊的最佳配比为CSpH值为5，VLGG:VSA为1:0.5，CS浓度为1％，SA浓度为2％,CaCl2浓度为2％。
实施例2：
一种耐热性乳酸菌LGG微胶囊的制备方法，具体步骤如下：
(1)配置乳酸菌培养基：高压灭菌适量适用于乳酸菌培养与计数的MRS液体培养基与MRS固体培养基，根据培养基使用说明书称取适量，加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末按2％比例加入蒸馏水中，在70℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得SA溶液；壳聚糖(CS)粉末按1％比例加入含1％冰醋酸的蒸馏水中振荡溶液，制得CS溶液，并调节pH值为5.0。
(3)配置固化剂：将CaCl2颗粒按2％比例加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(4)配置微胶囊释放剂：配置适量0.2M NaHCO3和0.06M柠檬酸钠混合溶液，调节pH值至7.8，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(5)乳酸菌LGG的菌液制备：将-80℃冰箱中冻存的LGG菌液以1:100的比例加入MRS液体培养基，在37℃恒温培养箱中复苏18h，再以同样的条件转接一代。菌液经过4000rpm速度离心，去上清，用无菌生理盐水冲洗，同样的方法重复清洗2遍，使用无菌生理盐水将洗净的LGG菌泥悬浮，得到108数量级LGG菌液备用。
(6)LGG微胶囊的制备：将LGG菌液和SA以1:1的比例混合，注射器将10mL混合液滴入100mL CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，磁力搅拌器600rpm/min转速搅拌30min，使微囊充分凝固。然后将微囊转移入50mLCS溶液(pH值为5.0)中搅拌悬浮1小时制得微胶囊。
(7)LGG微胶囊的耐热性能检测：将每组LGG微胶囊各称取两份0.01g，一份经过80℃高温处理15min，一份不作处理。然后加入2mL释放剂在摇床中以37℃，180rpm的条件振荡1h，采用平板计数法检测微囊内的活菌数，乳酸菌LGG耐热性(％)＝(Nh/Ni)×100％；Nh是热处理后LGG微胶囊中的活菌数；Ni是LGG未经热处理LGG微胶囊中的活菌数。耐热性能结果如图6所示。
结论：经试验论证，在配比CSpH值为5，VLGG:VSA为1:1，CS浓度为1％，SA浓度为2％,CaCl2浓度为2％条件下制得的乳酸菌LGG微胶囊具有较好的耐热性。
实施例3：
一种耐热性乳酸菌LGG微胶囊的制备方法，具体步骤如下：
(1)配置乳酸菌培养基：高压灭菌适量适用于乳酸菌培养与计数的MRS液体培养基与MRS固体培养基，根据培养基使用说明书称取适量，加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末按2％比例加入蒸馏水中，在70℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得SA溶液；壳聚糖(CS)粉末按1％比例加入含1％冰醋酸的蒸馏水中振荡溶液，制得CS溶液，并调节pH值为5.0。
(3)配置固化剂：将CaCl2颗粒按0.5％比例加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(4)配置微胶囊释放剂：配置适量0.2M NaHCO3和0.06M柠檬酸钠混合溶液，调节pH值至7.8，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(5)乳酸菌LGG的菌液制备：将-80℃冰箱中冻存的LGG菌液以1:100的比例加入MRS液体培养基，在37℃恒温培养箱中复苏18h，再以同样的条件转接一代。菌液经过4000rpm速度离心，去上清，用无菌生理盐水冲洗，同样的方法重复清洗2遍，使用无菌生理盐水将洗净的LGG菌泥悬浮，得到108数量级LGG菌液备用。
(6)LGG微胶囊的制备：将LGG菌液和SA以1:0.5的比例混合，注射器将10mL混合液滴入100mL CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，磁力搅拌器600rpm/min转速搅拌30min，使微囊充分凝固。然后将微囊转移入50mL CS溶液(pH值为5.0)中搅拌悬浮1小时制得微胶囊。
(7)LGG微胶囊的耐热性能检测：将每组LGG微胶囊各称取两份0.01g，一份经过80℃高温处理15min，一份不作处理。然后加入2mL释放剂在摇床中以37℃，180rpm的条件振荡1h，采用平板计数法检测微囊内的活菌数，乳酸菌LGG耐热性(％)＝(Nh/Ni)×100％；Nh是热处理后LGG微胶囊中的活菌数；Ni是LGG未经热处理LGG微胶囊中的活菌数。耐热性能结果如图7所示。
结论：经试验论证，在配比CSpH值为5，VLGG:VSA为1:0.5，CS浓度为1％，SA浓度为2％,CaCl2浓度为0.5％条件下制得的乳酸菌LGG微胶囊具有较好的耐热性。
实施例4：
一种耐热性乳酸菌LGG微胶囊的制备方法，具体步骤如下：
(1)配置乳酸菌培养基：高压灭菌适量适用于乳酸菌培养与计数的MRS液体培养基与MRS固体培养基，根据培养基使用说明书称取适量，加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(2)配置壁材溶液：海藻酸钠(SA)粉末按2％比例加入蒸馏水中，在70℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得SA溶液；壳聚糖(CS)粉末按1％比例加入含1％冰醋酸的蒸馏水中振荡溶液，制得CS溶液，并调节pH值为5.0。
(3)配置固化剂：将CaCl2颗粒按2％比例加入蒸馏水溶解，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(4)配置微胶囊释放剂：配置适量0.2M NaHCO3和0.06M柠檬酸钠混合溶液，调节pH值至7.8，经121℃ 15min灭菌后，待冷却至室温备用。
(5)乳酸菌LGG的菌液制备：将-80℃冰箱中冻存的LGG菌液以1:100的比例加入MRS液体培养基，在37℃恒温培养箱中复苏18h，再以同样的条件转接一代。菌液经过4000rpm速度离心，去上清，用无菌生理盐水冲洗，同样的方法重复清洗2遍，使用无菌生理盐水将洗净的LGG菌泥悬浮，得到108数量级LGG菌液备用。
(6)LGG微胶囊的制备：将LGG菌液和SA以1:0.5的比例混合，注射器将10mL混合液滴入100mL CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，磁力搅拌器600rpm/min转速搅拌30min，使微囊充分凝固。然后将微囊转移入50mL CS溶液(pH值为5.0)中搅拌悬浮1小时制得微胶囊。
(7)LGG微胶囊的耐热性能检测：将每组LGG微胶囊各称取两份0.01g，一份经过80℃高温处理15min，一份不作处理。然后加入2mL释放剂在摇床中以37℃，180rpm的条件振荡1h，采用平板计数法检测微囊内的活菌数，乳酸菌LGG耐热性(％)＝(Nh/Ni)×100％；Nh是热处理后LGG微胶囊中的活菌数；Ni是LGG未经热处理LGG微胶囊中的活菌数。耐热性能结果如图8所示。
结论：经试验论证，在配比CSpH值为5，VLGG:VSA为1:0.5，CS浓度为1％，SA浓度为2％,CaCl2浓度为2％条件下制得的乳酸菌LGG微胶囊具有较好的耐热性。
以上所述的实施例只是本发明的三种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
Claims (3)
1.一种耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤：
（1）配置用于乳酸菌培养的MRS液体培养基与MRS固体培养基；
（2）配置壁材溶液：海藻酸钠（SA）粉末加入水中，加热溶解，过滤除菌后制得 1.5-2.5%质量浓度的SA溶液；壳聚糖（CS）粉末加入质量浓度1-1.5%的冰醋酸水溶液中振荡，制得1-2%质量浓度的CS溶液，并调节CS溶液的pH值在4.0-5.0范围内；
（3）配置固化剂：将CaCl2颗粒与水混合制得质量浓度为1-2%的CaCl2溶液，灭菌后冷却至室温备用；
（4）配置微胶囊释放剂：称取适量NaHCO3与柠檬酸钠粉末，溶于双蒸水，制得含有0.2MNaHCO3和0.06M柠檬酸钠混合溶液，调节pH值至7.8±0.1，经121℃ 15min灭菌后，冷却至室温备用；
（5）乳酸菌菌液的制备；
（6）微胶囊的制备：将乳酸菌菌液和SA以1:0.5-1的重量比混合得到混合液，用注射器将混合液滴入CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，搅拌使微囊充分凝固，然后将微囊转移入pH值为4.0-5.0的CS溶液中搅拌悬浮1-2小时制得微胶囊。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：该方法包括如下步骤：
（1）配置用于乳酸菌培养的MRS液体培养基与MRS固体培养基；
（2）配置壁材溶液：海藻酸钠（SA）粉末加入水中，在70-75℃水浴锅中加热溶解，0.22μm滤膜过滤除菌，制得 2%质量浓度的SA溶液；壳聚糖（CS）粉末加入质量浓度1-1.5%的冰醋酸水溶液中振荡，制得1-2%质量浓度的CS溶液，并调节CS溶液的pH值在4.0-5.0范围内；
（3）配置固化剂：将CaCl2颗粒与水混合制得质量浓度为1-2%的CaCl2溶液，经121℃15min灭菌后，冷却至室温备用；
（4）配置微胶囊释放剂：称取适量NaHCO3与柠檬酸钠粉末，溶于双蒸水，制得含有0.2MNaHCO3和0.06M柠檬酸钠混合溶液，调节pH值至7.8，经121℃ 15min灭菌后，冷却至室温备用；
（5）乳酸菌菌液的制备；
（6）微胶囊的制备：将乳酸菌菌液和SA以1:0.5-1的重量比混合得到混合液，用注射器将10mL混合液滴入100mL CaCl2固化剂中形成海藻酸钙微囊，磁力搅拌器600-750rpm/min转速搅拌30-45min，使微囊充分凝固，然后将微囊转移入50mL pH值为5.0的CS溶液中搅拌悬浮1-2小时制得微胶囊。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤（5）乳酸菌菌液的制备为：将-80℃冰箱中冻存的乳酸菌菌液以1:100的比例加入MRS液体培养基，在37℃恒温培养箱中复苏18h，再以同样的条件转接一代；菌液经过4000rpm速度离心，去上清，用无菌生理盐水冲洗，同样的方法重复清洗2-3遍，使用无菌生理盐水将洗净的乳酸菌菌泥悬浮，得到108数量级的乳酸菌菌液备用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811193285.XA CN109303166A (zh) | 2018-10-14 | 2018-10-14 | 耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201811193285.XA CN109303166A (zh) | 2018-10-14 | 2018-10-14 | 耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109303166A true CN109303166A (zh) | 2019-02-05 |
Family
ID=65225163
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201811193285.XA Pending CN109303166A (zh) | 2018-10-14 | 2018-10-14 | 耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109303166A (zh) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110129217A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-08-16 | 华中农业大学 | 一种提高乳酸菌耐热性能的方法及应用 |
| CN110521857A (zh) * | 2019-08-19 | 2019-12-03 | 南京师盛生态环境研究院有限公司 | 一种高密度抗逆性乳酸菌微胶囊的制备方法 |
| CN111154689A (zh) * | 2020-01-20 | 2020-05-15 | 内蒙古农业大学 | 一种提高益生菌耐热存活率的方法 |
| CN112239758A (zh) * | 2019-07-19 | 2021-01-19 | 高雄科技大学 | 益生菌组合物及其制造方法和用途 |
| CN115105487A (zh) * | 2022-08-05 | 2022-09-27 | 绍兴同创生物科技有限公司 | 一种乳酸菌和白藜芦醇的联合制剂及其制备方法和应用 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1969889A (zh) * | 2006-12-04 | 2007-05-30 | 济南赛拜斯生物工程有限公司 | 肠溶性多层包被益生菌微胶囊及其制备方法 |
| CN102210450A (zh) * | 2011-04-06 | 2011-10-12 | 黑龙江省轻工科学研究院 | 益生菌微胶囊及其制备方法 |
| CN103222539A (zh) * | 2013-04-09 | 2013-07-31 | 魏永刚 | 一种微生物发酵前包被多层微胶囊的制备方法 |
| CN103431379A (zh) * | 2013-07-31 | 2013-12-11 | 吉林农业大学 | 一种低耗能制取可悬浮乳酸菌湿胶囊的生产方法 |
| CN103992998A (zh) * | 2014-05-09 | 2014-08-20 | 陕西科技大学 | 一种利用壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法及应用 |
| CN104644612A (zh) * | 2015-01-26 | 2015-05-27 | 天津科技大学 | 聚丙烯酸钠接枝海藻酸钠包埋益生菌微胶囊及其制备方法 |
| CN105310080A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-02-10 | 中山大学 | 益生菌微胶囊及其制备方法和应用 |
-
2018
- 2018-10-14 CN CN201811193285.XA patent/CN109303166A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1969889A (zh) * | 2006-12-04 | 2007-05-30 | 济南赛拜斯生物工程有限公司 | 肠溶性多层包被益生菌微胶囊及其制备方法 |
| CN102210450A (zh) * | 2011-04-06 | 2011-10-12 | 黑龙江省轻工科学研究院 | 益生菌微胶囊及其制备方法 |
| CN103222539A (zh) * | 2013-04-09 | 2013-07-31 | 魏永刚 | 一种微生物发酵前包被多层微胶囊的制备方法 |
| CN103431379A (zh) * | 2013-07-31 | 2013-12-11 | 吉林农业大学 | 一种低耗能制取可悬浮乳酸菌湿胶囊的生产方法 |
| CN103992998A (zh) * | 2014-05-09 | 2014-08-20 | 陕西科技大学 | 一种利用壳聚糖∕黄原胶制备嗜酸乳杆菌微胶囊的方法及应用 |
| CN104644612A (zh) * | 2015-01-26 | 2015-05-27 | 天津科技大学 | 聚丙烯酸钠接枝海藻酸钠包埋益生菌微胶囊及其制备方法 |
| CN105310080A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-02-10 | 中山大学 | 益生菌微胶囊及其制备方法和应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| SUPPHARADA JANTARATHIN 等: "Microencapsulation of probiotic and prebiotic in alginate-chitosan capsules and its effect on viability under heat process in shrimp feeding", 《MATERIALS TODAY》 * |
| 李伟等: "海藻酸钠/壳聚糖双层合生元微胶囊制备及储藏稳定性和控制性释放", 《乳业科学与技术》 * |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110129217A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-08-16 | 华中农业大学 | 一种提高乳酸菌耐热性能的方法及应用 |
| CN110129217B (zh) * | 2019-04-22 | 2021-07-23 | 华中农业大学 | 一种提高乳酸菌耐热性能的方法及应用 |
| CN112239758A (zh) * | 2019-07-19 | 2021-01-19 | 高雄科技大学 | 益生菌组合物及其制造方法和用途 |
| CN110521857A (zh) * | 2019-08-19 | 2019-12-03 | 南京师盛生态环境研究院有限公司 | 一种高密度抗逆性乳酸菌微胶囊的制备方法 |
| CN111154689A (zh) * | 2020-01-20 | 2020-05-15 | 内蒙古农业大学 | 一种提高益生菌耐热存活率的方法 |
| CN115105487A (zh) * | 2022-08-05 | 2022-09-27 | 绍兴同创生物科技有限公司 | 一种乳酸菌和白藜芦醇的联合制剂及其制备方法和应用 |
| CN115105487B (zh) * | 2022-08-05 | 2024-05-17 | 绍兴同创生物科技有限公司 | 一种乳酸菌和白藜芦醇的联合制剂及其制备方法和应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109303166A (zh) | 耐热性乳酸菌微胶囊的制备方法 | |
| Liao et al. | Oligosaccharides as co-encapsulating agents: effect on oral Lactobacillus fermentum survival in a simulated gastrointestinal tract | |
| CN109619593B (zh) | 一种益生菌双层微胶囊及其制备方法 | |
| CN103932186B (zh) | 一种长双歧杆菌微胶囊及其制备方法 | |
| CN101683604B (zh) | 一种乳酸菌微胶囊的制备方法 | |
| Grosso et al. | Stability of free and immobilized Lactobacillus acidophilus and Bifidobacterium lactis in acidified milk and of immobilized B. lactis in yoghurt | |
| CN105639124B (zh) | 一种微胶囊饲料添加剂以及其制备方法和应用 | |
| CN106222158B (zh) | 一种包埋乳酸杆菌的微胶囊制备方法 | |
| CN109674061A (zh) | 一种双层微囊化的益生元、益生菌组合物及其制备方法 | |
| CN106511380A (zh) | 一种粪菌组合物及其制备方法和用途 | |
| CN103704719B (zh) | 一种具有高活菌数的益生菌微胶囊的制备方法 | |
| CN108277178A (zh) | 一种双歧杆菌和乳酸杆菌的工业化高密度混合发酵培养基、发酵培养方法以及菌粉包埋方法 | |
| CN101856604A (zh) | 一种用静电喷雾制备益生菌微胶囊的方法 | |
| CN110353144A (zh) | 一种益生菌固体饮料及其制备工艺 | |
| GONZÁLEZ‐SÁNCHEZ et al. | Viability of microencapsulated Bifidobacterium animalis ssp. lactis BB12 in kefir during refrigerated storage | |
| Xing et al. | Effect of porous starch concentrations on the microbiological characteristics of microencapsulated Lactobacillus acidophilus | |
| CN114287632A (zh) | 一种菊粉益生菌微胶囊的制备方法 | |
| CN102660478A (zh) | 一种唾液乳杆菌及其冻干制剂与应用 | |
| CN105105144B (zh) | 一种益生菌微胶囊及其制备方法 | |
| CN102228235A (zh) | 一种益生菌微胶囊的制备方法及其应用 | |
| CN106701642A (zh) | 一种嗜酸乳杆菌冻干粉的制备方法 | |
| CN102283334A (zh) | 可改善小型犬肠道微生态的复合益生菌微胶囊 | |
| CN110731526A (zh) | 一种益生菌新型包埋壁材的方法 | |
| CN107354097A (zh) | 一种在常温下提高液态乳酸菌存活率的乳酸菌保存剂及其应用 | |
| CN102334684B (zh) | 特定功能微生物制品的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190205 |