CN104543653A - 蜂王浆软胶囊产品及其制备 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蜂王浆软胶囊产品，发明属于食品领域，特别涉及蜂产品。主要原料组成如下：蜂王浆冻干粉40-60，植物油60-80，蜂蜡10-20，食用菌酶解粉1-3，胶囊皮：采用明胶、甘油和水为原料制备。本发明产品主要原料为蜂王浆冻干粉，还添加了食用菌酶解粉、益生菌胶囊，具有缓解体力疲劳的保健功能。加入食用菌酶解粉提供食用菌多糖及其他食用菌保健物质，对于缓解机体疲劳起到有效地作用。加入益生菌胶囊能够有助于维护肠道健康，有助于营养物质的吸收利用。产品能明显解除疲劳的发生，有助缓解体力疲劳。

Description

蜂王浆软胶囊产品及其制备

技术领域：发明属于食品领域，特别涉及蜂产品。

背景技术：

蜂王浆是自然界最有营养的食物之一，含有王浆酸、12种蛋白质、矿物质、30多种氨基酸，20多种脂肪酸，16种以上维生素、微量元素等多种人体必需的营养成份(10-羟基-△2-癸烯酸，人体必需的多种氨基酸、蛋白质、乙酰胆碱、生物活性酶、核酸及多种维生素、微量元素等)，它可以使蜂王的寿命比工蜂长三十倍，蜂王浆已被广泛的用于全面提升健康状况。

蜂王浆软胶囊是以纯蜂王浆冻干粉为原料，经先进工艺科学加工而成，经国家食品药品监督管理局批准，具有增强免疫力的保健食品。含有王浆酸、蛋白质、氨基酸、脂肪酸、维生素、胆碱、矿物质、核酸与核苷酸等对人体有益的30余种营养物质。其中王浆酸是最重要的一种，也是迄今为止仅在蜂王浆中发现的天然存在的有机酸，具有很好的抑菌及强化免疫力的功能。

纯天然鲜蜂王浆的味道应该是辛辣酸的味道，但很清爽。

蜂王浆的作用：可以调节各种神经系统功能：使神经失调状态恢复正常，特别是对神经衰弱有显著疗效，可以迅速改善食欲和睡眠质量，使人精神充沛，完全提高脑力及身体素质。双向调节血压：使高血压患者血压降低，低血压患者血压升高，逐渐趋向正常。抗疲劳。有助于抑制多种病菌和癌细胞，延缓癌症病人的寿命。调节内分泌，对更年期综合征、性机能失调、风湿病等产生明显作用，但其激素含量有很少，成年人长期服用不会产生副作用。协调胃肠功能，改善便秘状况。修复受损肝细胞，促进肝功能恢复，对传染性肝炎有较好疗效，尤其对无黄疸型传染性肝炎疗效非常好，有效高达96.6％。降低血糖。抗衰老。在蜂王浆中还可以找到一种胶原蛋白的替代物---凝胶体。此胶原蛋白替代物是一种强力的抗衰成分它有助于保持身体(特别是皮肤)的年轻、活力。所以，蜂王浆不仅有预防、治疗皮肤病的作用，还有护肤效果，使皮肤润滑、细腻、故被广泛应用于化妆品中。蜂王浆非常适用于身体虚弱，免疫力低下，食欲不振、失眠多梦、贫血、溃疡、冻伤、放化疗恢复及大体力和脑力劳动者和大病初愈的患者食用。

鲜蜂王浆贮存需冷藏或冰冻，4℃左右冷藏期为3个月，-5℃左右冷冻保存一年，-18℃以下保存两年以上。没有冷藏、冷冻条件的，可掺入蜂蜜在室温条件下供临时食用和保存。

蜂王浆冻干粉是用冰箱冷藏的蜂王浆经过真空低温干燥出来的，一般是3公斤的冰箱冷藏的鲜蜂王浆做1公斤的王浆冻干粉。这时做出来的1公斤的蜂王浆干粉中的王浆酸的含量是1公斤冰箱冷藏的鲜蜂王浆的3倍，因为在加工过程中，王浆酸是不会流失的。

蜂王浆冻干粉制作流程

将鲜蜂王浆在低温下快速冻结，然后在压强小于4.6mmHg的真空条件下，供给升华热，使蜂王浆中的细腻冰晶直接升华成水气逸出。由于蜂王浆的干燥处在低温的条件下，故干燥过程中不易产生气泡、氧化、浓缩和生物活性物质的大量破坏，从而保证了产品高质量的特性。

2.加工流程

鲜蜂王浆→加水→搅拌均匀→过滤→分装→冷冻(真空低温干燥)→粉碎→干粉成品→封装→粉碎→真空蒸发

(1)鲜蜂王浆中加入等量的蒸馏水，搅拌均匀，再用100目尼龙纱网过滤，除去其中的杂质。

(2)将经过过滤的鲜蜂王浆分装入真空冷冻干燥机的托盘中，王浆的厚度为8～10mm，或装入安瓶架上的安瓶内，暂不封口，放进冷冻干燥室内。

(3)真空低温干燥：开动真空冷冻干燥机，将真空干燥室的温度降至-40℃，使蜂王浆快速冻结，然后将真空度控制在10mmHg左右，使蜂王浆料温保持在-25℃上下，冷凝器的温度控制在-50℃上下，形成较大的蒸汽压差，促进水蒸气排出。同时给冷冻干燥室部件加热，传给料盘，促进水分升华。每kg冰的升华热为672千卡。1度电的热能为860千卡，所以1度电可满足1kg水升华的热能需要。真空低温干燥持续进行12小时左右后，蜂王浆中的水分已降至10％左右，此时已初步达到干燥的目的，但还不能长期保存，必须继续干燥。此时可以提高干燥室的温度至30℃，最高不超过40℃，持续4～5小时，让水分快速蒸发，使蜂王浆的水分含量降低到2％左右，即完成干燥过程。蜂王浆是否干燥的依据是：王浆干粉和保持恒温的搁板温度或泵组与干燥室的真空度基本一致并能保持一段时间。

(4)粉碎：未加水而直接放入干燥室进行冷冻干燥的鲜蜂王浆通常只需要12小时就可完成干燥过程，但在脱水后质地坚硬，形成块状，需加以粉碎并过筛，以使其便于利用。有时在蜂王浆中加人部分医用淀粉后再进行冷冻干燥，这种产品常呈板结状，加水不能复原，经粉碎过筛，可作为加工蜂王浆胶囊和片剂等产品的原料。

(5)封装保存：蜂王浆冻干粉具有很强的吸湿性，封口必须在相对湿度低于60％的室内进行，因此进行此项操作的车间应该加装空调和除湿机。分装封口和安瓶封口都需快速进行。最好采用真空封口或充氮气封口。

鲜蜂王浆在常温下很难保存，非常容易受空气、日光和水的作用而使其中的活性物质受到破坏，从而影响其功效。科学家发现将蜂王浆通过真空冷冻干燥加工工艺处理，除去其中大部分水分，使其成为结晶粉末，即可解决这一难题。通过这样处理所得到的产品就是蜂王浆冻干粉。

蜂蜡为蜜蜂科昆虫中华蜜蜂或意大利蜂Apis mellifera Linnaeus分泌的蜡。将蜂巢置水中加热，滤过，冷凝取蜡或再精制而成。

蜂蜡用时熔化，澄清，除去杂质。其主要成份有：酸类、游离脂肪酸、游离脂肪醇和碳水化合物。此外，还有类胡萝卜素、维生素A、芳香物质等。

性状为不规则团块，大小不一。呈黄色、淡黄棕色或黄白色，不透明或微透明，表面光滑。体较轻，蜡质，断面砂粒状，用手搓捏能软化。有蜂蜜样香气，味微甘。功能主治：收涩，敛疮，生肌，止痛，调理。外用于溃疡不敛。

市场销售的倍健蜂王浆软胶囊含有12种蛋白质、矿物质、30多种氨基酸、20多种脂肪酸、16种以上维生素、微量元素等多种人体必需的营养成分。生产工艺先进以超微活化技术，将蜂王浆在低温下粉碎成3微米的超微粒子，在经超低温真空冷冻干燥工艺精制而成，保证其活性和易吸收性。

专利名称为枸杞蜂王浆胶囊及其制备方法，专利号为03117913.4，该发明公开了一种用胶囊封装枸杞粉和蜂王浆冻干粉的保健品及其制备方法，原料组成包括蜂王浆冻干粉和枸杞粉，其重量配比为1∶1～5；工艺步骤包括：枸杞粉的生产、蜂王浆冻干粉的生产、用胶囊封装枸杞粉和蜂王浆冻干粉混合物，在混合封装工序中，将蜂王浆冻干粉与枸杞粉的混合物置入离心搅拌器内，以5～25转/小时的速度旋转，搅拌1～3小时后置入真空干燥箱内保持15～45分钟，取出充填入规格为0.2克/粒的胶囊内制成成品；本发明能完好地保留鲜蜂王浆及枸杞的有效成分，更好地促进人体的新陈代谢，其保健免疫功能强，补肾明目效果更佳，且产品便于携带，食用方便，较单一产品有更长的保质期。

西洋参蜂王浆软胶囊及其制备方法，申请号：201010193424.6；发明公开了西洋参蜂王浆软胶囊及其制备方法。按照重量计算，该软胶囊是用蜂王浆冻干粉300～400克、西洋参粉30～50克、山茶油400～800克，加入适量辅料制成胶囊剂2000粒。本发明能完好地保留蜂王浆和西洋参的有效成分，本发明具有滋补强壮、提高免疫能力、促进人体的新陈代谢的特点，同时产品便于携带、食用方便、较单一产品具有更长的保持期，且无任何毒副作用。

一种蜂王浆微胶囊的制备方法及应用，申请号：201410136195.2，发明提供一种蜂王浆微胶囊的制备方法，以玉米微孔淀粉、明胶和阿拉伯胶为壁材，以蜂王浆为芯材，通过冷冻干燥的方法制备蜂王浆微胶囊。本发明方法可增加蜂王浆的保鲜期，降低辛辣涩味，改善口感，控制蜂王浆中活性成分的释放，扩大其应用范围。本发明所得微胶囊包埋率高，具有缓释效果，活性成分稳定，能在常温下密闭避光保存六个月以上，所加壁材无毒副作用，可用于食品、饮料、保健食品以及营养强化食品等方面，具有广泛的应用前景。

蜂王浆软胶囊的配方及加工工艺，申请号：00107423.7；蜂王浆软胶囊的配方及加工工艺,系属医药化工领域,需要解决的技术问题有三:①鲜蜂王浆低温真空冷冻干燥成干粉的技术；②用科学配方使其内溶物均匀,不沉淀；③加工技术、用高速搅拌机搅匀并及时分装。主要技术特点和用途:①采用低温真空冷冻干燥法最大限度保护鲜蜂王浆的有效活性成分；②选用卵磷脂做粉悬剂,蜂蜡做乳化剂分散能力好,分装均匀,提高产品质量。③采用高速搅拌机搅匀并及时分装,防止渗漏,提高产品合格率。

如何有效的改善蜂王浆软胶囊产品营养特性对于更好的发挥其作用具有重要作用。

发明内容：

本发明提供一种蜂王浆软胶囊产品及其制备方法，

蜂王浆软胶囊产品原料的重量份数组成如下：

原料：蜂王浆冻干粉40-60，植物油60-80，蜂蜡10-20，食用菌酶解粉1-3，益生菌微胶囊1-3。

胶囊皮：采用明胶、甘油和水为原料制备。

优选的蜂王浆软胶囊产品原料的重量份数组成如下：

蜂王浆冻干粉50-60，植物油60-70，蜂蜡10-15，食用菌酶解粉1-3，益生菌微胶囊1-2.胶囊皮：采用明胶、甘油和水制备。所述蜂蜡采用市场销售产品。所述植物油为大豆油。

蜂王浆冻干粉的制备工艺如下：

加水过滤：鲜蜂王浆中加入等量的蒸馏水，搅拌均匀，再用100目尼龙纱网过滤，除去其中的杂质。

物料混合：在过滤后鲜蜂王浆液体中添加鲜蜂王浆液体重量5-8％的羊肚菌酶解粉。

真空低温干燥：将经过过滤的鲜蜂王浆分装入真空冷冻干燥机的托盘中，鲜王浆的厚度为8～10mm，或装入安瓶架上的安瓶内，暂不封口，放进冷冻干燥室内。将真空干燥室的温度降至-40℃，使蜂王浆快速冻结，然后将真空度控制在10mmHg左右，使蜂王浆料温保持在-25℃上下，冷凝器的温度控制在-50℃上下，形成较大的蒸汽压差，促进水蒸气排出。同时给冷冻干燥室部件加热，传给料盘，促进水分升华。真空低温干燥持续进行12小时左右后，蜂王浆中的水分已降至10％左右。此时可以提高干燥室的温度至30℃，持续4～5小时，使蜂王浆的水分含量降低到2％左右，即完成干燥过程。

粉碎封装保存。

羊肚菌酶解粉制备方法如下：

(1)羊肚菌子实体干燥粉碎；

(2)水溶均质：将粉碎羊肚菌子实体加入不锈钢筒中，加入子实体3-6倍重量的水，浸泡3-5小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为0.5-1微米，胶体磨流量为0.4-1吨/小时；

(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的混合液转移到不锈钢酶解罐中加热升温到50-60℃，调整pH到4.5-6.0,加入羊肚菌重量0.05-0.1％的纤维素酶、0.01-0.1％的β-葡聚糖酶、0.01-0.1％的蛋白酶，保温酶解0.5-1.5小时；酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥：酶解后的醪液过滤后干燥粉碎获得羊肚菌酶解粉；

食用菌酶解粉制备方法如下：

(1)灵芝子实体和羊肚菌子实体干燥粉碎，灵芝子实体和羊肚菌子实体的质量比为1：8-10；

(2)水溶均质：将粉碎子实体加入不锈钢筒中，加入子实体3-6倍重量的水，浸泡3-5小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为0.5-1微米，胶体磨流量为0.4-1吨/小时；

(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的液体转移到不锈钢酶解罐中加热升温到60-65℃，调整pH到5.5-6.0,加入灵芝子实体重量0.01-0.06％的纤维素酶、0.01-0.05％的β-葡聚糖酶、0.05-0.1％的蛋白酶，保温酶解0.5-1.5小时；酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥：酶解后的醪液过滤后干燥获得食用菌酶解粉；

胶囊皮组成：甘油54克，明胶108克，水108克，

生产工艺如下：

混合乳化：按配方比例将蜂王浆冻干粉，植物油，蜂蜡，食用菌酶解粉，益生菌微胶囊称重置于水浴中加热60℃，使其融化充分混合，得到乳化液作为囊化液待用。

配胶液制备：明胶、甘油、纯净水按2：1：2加入化胶锅，打开蒸汽球阀，通进蒸汽，待气压升至0.1兆帕，温度达到100-105℃时关闭蒸汽球阀，保温保压30分钟后，排气，搅拌均匀，静置4小时去泡，滤去杂质，注入储胶灌保温60-70℃备用。

制备软胶囊：制软胶囊采用自动旋转扎囊机，按每粒450mg囊化液制备软胶囊。

干燥：定型干燥温度为20-25℃，相对湿度50-60％，时间为12小时。

洗丸：用95％酒精洗丸，用量为0.8-1kg/万粒。

凉丸：凉丸时间为4小时，温度低于25℃。

二次干燥：二次干燥的温度为33℃，时间为12小时。

包装入库。

蜂王浆软胶囊和胶囊皮的制备方法也可参见201010193424.6。

有益效果：

软胶囊活性率保持在97％以上，比普通蜂王浆冻干粉高出30％，比鲜蜂王浆高3倍。软胶囊富含多种蛋白质和氨基酸等营养成分、增强免疫力、调节血压和内分泌、降低血糖、滋润皮肤、抗衰老，抗疲劳。增加体能，耐力和精力的水平、减轻压力、增加对疾病的抵抗力；抗衰老：蜂王浆是维他命B6、泛酸最丰富的天然来源之一，且含有防止血管老化的类腮腺激素，加强人体新陈代谢，延缓老化。抗疲劳，安神助眠。

本发明提供的益生菌胶囊，其壁材中添加了改性大豆分离蛋白，改性大豆分离蛋白比大豆分离蛋白乳化能力提高25％、胶凝能力提高15-25％，改性大豆分离蛋白黄原胶和卡拉胶及壳聚糖的配合使用，凝胶强度提高了10％以上，增强了胶囊的耐胃酸性；本发明胶囊采用改性大豆分离蛋白，具有很好的肠溶性，胶囊到达肠道后在1-1.5小时内即可完全崩解释放出益生菌，并迅速增殖成为优势菌群，从而达到抑制病原菌生长等作用。本发明利用羊肚菌酶解粉，经过酶解处理不仅使其营养成分有效释放到产品中，同时也使得羊肚菌的特殊香味通过酶解得到有效释放，使产品兼具羊肚菌的营养特性，具有良好适口性。

本发明产品主要原料为蜂王浆冻干粉，还添加了食用菌酶解粉、益生菌胶囊具有缓解体力疲劳的保健功能。加入食用菌酶解粉提供食用菌多糖及其他食用菌保健物质，对于缓解机体疲劳起到有效地作用。加入益生菌胶囊能够有助于维护肠道健康，有助于营养物质的吸收利用。产品能明显解除疲劳的发生，有助缓解体力疲劳。

每日2次，每次1-2粒

具体实施方法：

实施例1：

蜂王浆软胶囊产品原料的重量份数组成如下：

蜂王浆冻干粉55，植物油65，蜂蜡12，食用菌酶解粉2，益生菌微胶囊1。胶囊皮：采用明胶、甘油和水制备。

所述植物油为大豆油。

蜂王浆冻干粉的制备工艺如下：

加水过滤：蜂王浆中加入等量的蒸馏水，搅拌均匀，再用100目尼龙纱网过滤，除去其中的杂质。

物料混合：在过滤后蜂王浆液体中添加蜂王浆液体重量5-8％的羊肚菌酶解粉。

真空低温干燥：将经过过滤的蜂王浆分装入真空冷冻干燥机的托盘中，王浆的厚度为8～10mm，或装入安瓶架上的安瓶内，暂不封口，放进冷冻干燥室内。将真空干燥室的温度降至-40℃，使蜂王浆快速冻结，然后将真空度控制在10mmHg左右，使蜂王浆料温保持在-25℃上下，冷凝器的温度控制在-50℃上下，形成较大的蒸汽压差，促进水蒸气排出。同时给冷冻干燥室部件加热，传给料盘，促进水分升华。真空低温干燥持续进行12小时左右后，蜂王浆中的水分已降至10％左右。此时可以提高干燥室的温度至30℃，持续4小时，使蜂王浆的水分含量降低到2％左右，即完成干燥过程。

粉碎封装保存：

羊肚菌酶解粉制备方法如下：

(1)羊肚菌子实体干燥粉碎；

(2)水溶均质：将粉碎羊肚菌子实体加入不锈钢筒中，加入子实体5倍重量的水，浸泡4小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为0.6微米，胶体磨流量为0.6吨/小时；

(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的混合液转移到不锈钢酶解罐中加热升温到55℃，调整pH到5.0,加入羊肚菌重量0.08％的纤维素酶、0.05％的β-葡聚糖酶、0.05％的蛋白酶，保温酶解0.8小时；酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥：酶解后的醪液过滤后干燥粉碎获得羊肚菌酶解粉。

食用菌酶解粉制备方法如下：

(1)灵芝子实体和羊肚菌子实体干燥粉碎，灵芝子实体和羊肚菌子实体的质量比为1：9；

(2)水溶均质：将粉碎子实体加入不锈钢筒中，加入子实体5倍重量的水，浸泡5小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为0.5-1微米，胶体磨流量为0.4-1吨/小时；

(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的液体转移到不锈钢酶解罐中加热升温到60-65℃，调整pH到5.5-6.0,加入灵芝子实体重量0.05％的纤维素酶、0.03％的β-葡聚糖酶、0.08％的蛋白酶，保温酶解1小时；酶解过程中不断搅拌。

(4)干燥：酶解后的醪液过滤后干燥获得食用菌酶解粉；

胶囊皮重量分数组成：甘油1，明胶2，水2；

蜂王浆软胶囊产品生产工艺如下：

混合乳化：按配方比例将蜂王浆冻干粉，植物油，蜂蜡，食用菌酶解粉，益生菌微胶囊称重置于水浴中加热60℃，使其融化充分混合，得到乳化液作为囊化液待用。

配胶液制备：明胶、甘油、纯净水按比例加入化胶锅，打开蒸汽球阀，通进蒸汽，待气压升至0.1兆帕，温度达到100-105℃时关闭蒸汽球阀，保温保压30分钟后，排气，搅拌均匀，静置4小时去泡，滤去杂质，注入储胶灌保温60-70℃备用。

制备软胶囊：制软胶囊采用自动旋转扎囊机，按每粒450mg囊化液制备软胶囊。

干燥：定型干燥温度为20-25℃，相对湿度50-60％，时间为12小时。

洗丸：用95％酒精洗丸，用量为0.8-1kg/万粒。

凉丸：凉丸时间为4小时，温度低于25℃。

二次干燥：二次干燥的温度为33℃，时间为12小时。

包装入库。

蜂王浆软胶囊和胶囊皮的制备方法也可参见201010193424.6。

益生菌胶囊产品制备方法如下：

超声波真空喷雾干燥的方法，对乳酸菌进行微胶囊包被的过程如下：益生菌发酵液与壁材溶液混合，得混合溶液；采用超声波真空喷雾干燥的方法，一级真空干燥，二级惰性保护气体加震动流化床干燥，对乳酸菌进行胶囊包被。

超声波喷雾干燥设备使用发明专利201110415081.8中所述方法制备。具体为开启超声波喷雾干燥设备，待干燥室内真空压力维持在2.5-3.0kpa后，调整流速为0-20ml/min,干燥室内的温度在20-30℃左右；二级干燥流化床内充保护气体二氧化碳，温度维持在10-20℃。所述的超声波喷嘴的频率为20kHz-30kHz。发酵液和壁材溶液组成的混合悬浮液经过超声波喷嘴进行雾化后，随即进入真空干燥室进行干燥，液滴在短时间内便形成胶囊，然后经过3-25秒的干燥时间，落到干燥室的底部；然后进入震动流化床，即进行二级震动流化床干燥，经20-40min，在出料口收集，即得到益生菌胶囊。

发酵液制备：将经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3-5％的水苏糖和5-8％的羊肚菌酶解粉；

壁材溶液配制过程如下：按配比独立称取各种组分，称取蒸馏水，并将各成分混合加热溶解；pH自然；冷却至室温，即得。

壁材溶液组成如下：酶解大豆分离蛋白4-10％、壳聚糖0.5-1％、普鲁兰多糖0.2-0.5％、黄原胶0.2-1％、卡拉胶0.1-0.5％、甘油0.5-2％和海藻糖0.2-0.5％；此为重量体积百分比；

酶解大豆分离蛋白的制备方法为：配制浓度为10-13％大豆分离蛋白溶液升温到30-45℃，调整pH到3-5,加入大豆分离蛋白重量0.1-1％的酸性蛋白酶保温酶解0.5-1.5小时；酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白。

羊肚菌酶解粉制备方法同上；

所述益生菌选择植物乳杆菌CGMCC NO.9405。

益生菌胶囊产品人工胃液试验测定将实施例1-2中的胶囊置于37℃的人工胃液中保温并不断搅拌，2h后取出，用灭菌生理盐水洗涤，用解囊液溶解，测定菌存活率，并与未包埋的菌液进行比较。

产品	形态变化	存活率
			实施例1	不崩解	91.5％
实施例2	不崩解	93.3％
			未包被对照		0.68％

本发明中植物乳杆菌CGMCC No.9405菌株特点如下：在显微镜下观察，该菌株为短杆状，革兰氏染色呈阳性，无鞭毛，不产芽孢；在固体培养基上，该菌菌落为白色，表面光滑，致密，形态为圆形，边缘较整齐。

理化特征为：过氧化氢酶(-)，明胶液化(-)，吲哚实验(+)，运动性(-)，发酵产气(-)，亚硝酸盐还原(-)，发酵产气(-)，产硫化氢气体(-)，pH4.0MRS培养基中生长(+)。

本发明植物乳杆菌采用下述流程进行选育：

原始出发菌种→试管活化→硫酸二乙酯(DES)诱变→亚硝基胍(NTG)诱变→等离子体诱变→平板初筛→摇瓶复筛→传代稳定性试验。

本发明所采用的出发菌株在MRS葡萄糖培养基中，其乳酸的生产速率为1.5g/L/d,当培养基pH为3.5时几乎停止生长，对亚硝酸钠的分解速率为0.34mg/h/kg白菜。出发菌株为李政采集于宁夏盐池县育肥羊场的青储饲料，采集时间2013年9月15日。

为了提高其乳酸生产速率、耐酸能力和亚硝酸盐的分解速率，依次采用DES和NTG技术对该菌种进行诱变，诱变后菌株采用MRS碳酸钙平板进行初筛，然后采用500mL摇瓶发酵，生物传感器分析仪对高产菌进行复筛，选育优良的植物乳杆菌菌株，然后做传代实验，评价其遗传稳定性。

植物乳杆菌tlj-2014遗传稳定性结果表明：经过连续传代十次，各项性能指标都比较稳定，遗传性较好，性状没有回复，因此把植物乳杆菌tlj-2014作为选育得到的目的菌株。

经验证发现：该诱变菌株的乳酸生产速率可以达到35g/L/d，该菌株经过71小时发酵后乳酸浓度达到95g/L；能够在pH为1.80的条件下存活。降解亚硝酸盐速度快，分解能力达到9.8mg/h/kg(自然发酵过程亚硝酸盐积累的速率大约为1.1mg/h/kg)，能够耐1％胆盐。

因此采用该菌种生产泡菜，整个发酵过程中亚硝酸盐浓度在5mg/kg以下，远低于国家标准GB2714-2003中规定的含量(20mg/kg)。

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)tlj-2014，该菌株已于2014年7月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,邮编：100101)，保藏号为CGMCC NO.9405。

1.DES诱变选育

1)在超净台上取试管斜面上的植物乳杆菌L一环，接入装有50mL培养基MRS(无琼脂，葡萄糖20g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37℃培养12h左右，使菌体处于对数生长前期。

2)取5mL菌液，5000rpm离心10min收集菌体，用生理盐水洗涤2次。

3)用pH7.0磷酸缓冲液稀释成10⁷个/mL菌悬液。

4)取32mL pH7.0的磷酸钾缓冲液、8mL菌悬液、0.4mL DES在预先放入转子的150mL三角瓶中充分混合，使DES最终浓度为1％(v/v)。

5)在37℃摇床中150rpm反应30min，取1mL混合液，加入0.5mL 25％Na₂S₂O₃溶液中止反应。

6)适当稀释，取最后稀释度的菌液0.2mL，涂布于碳酸钙筛选培养基(含100g/L葡萄糖的碳酸钙MRS培养基)平皿中。在37℃培养2～3天后，采用影印法将该筛选平板的菌株转印到pH为1.5、1.8和2.0的LPHMRS培养基(低pH值改性MRS培养基)上和亚硝酸钠筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)上。

7)在37℃培养2～3天后，挑选菌落较大，分别能在LPHMRS培养基、亚硝酸钠筛选培养基上生长并且在碳酸钙筛选培养基上。经初步筛选，挑取出的菌落命名为植物乳杆菌L1。

2.亚硝基胍诱变

1)在超净台上取试管斜面上的植物乳杆菌L1一环，接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为60g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37℃培养12h左右，使菌体处于对数生长前期。

2)取5mL菌液5000rpm离心10min收集菌体，用生理盐水洗涤2次。

3)用pH6.0磷酸缓冲液稀释成10⁷个/mL菌悬液。

4)取10mL菌悬液转移至100mL三角瓶中，加入10mg的NTG，配制成终浓度为10mg/mL的NTG溶液，并加入4-5滴丙酮，以利于NTG溶解。

5)在37℃下200rpm振荡反应30min，5000rpm离心10min收集菌体，用无菌生理盐水洗涤数次，中止反应。

6)适当稀释，取最后稀释度的菌液0.2mL，涂布于碳酸钙筛选培养基(含100g/L葡萄糖的碳酸钙MRS培养基)平皿中。在37℃培养2～3天后，采用影印法将该筛选平板的菌株转印到pH为1.5、1.8和2.0的LPHMRS培养基(低pH值改性MRS培养基)上和亚硝酸钠筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)上。

7)挑选菌株方法：挑选菌落较大，分别能在LPHMRS培养基、亚硝酸钠筛选培养基上生长并且在碳酸钙筛选培养基上。经初步筛选，挑取100支符合以上条件的菌落。

3.摇瓶复筛

1)在超净台上分别取各试管斜面上的植物乳杆菌一环，接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为100g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37℃培养15h左右，使菌体处于对数生长中期。

2)分别取5mL菌液，接入装有50mL碳酸钙筛选液体培养基(含250g/L葡萄糖的碳酸钙MRS培养基)平皿中、pH为1.5、1.8和2.0的LPHMRS液体培养基(低pH值改性MRS培养基)和亚硝酸钠液体筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)上(注：采用250mL三角瓶)。200rpm，37℃培养3-4天，每天分别检测碳酸钙筛选液体培养基中L-乳酸产生速率、LPHMRS液体培养基中的生物量和亚硝酸钠液体筛选培养基中亚硝酸盐的消耗速率。发酵结束后，比较100株菌种的碳酸钙筛选液体培养基中L-乳酸产生速率、LPHMRS液体培养基中的生物量和亚硝酸钠液体筛选培养基中亚硝酸盐的消耗速率。

3)选择兼具高L-乳酸产生速率、耐受低pH(该菌种仅能在最低为pH1.8的培养基中生长)和亚硝酸盐的消耗速率高的菌株，将其命名为L2菌。

4.遗传稳定性试验

将L2菌在斜面上连续十次传代，并用摇瓶复筛的方法检测每次传代后的发酵情况。实验发现，在斜面上连续十次传代，该菌种性状没有明显变化，各项性能指标都正常，说明该菌种的遗传稳定性较强。菌株命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)tlj-2014。

5.5L发酵罐试验

1)取斜面上的植物乳杆菌L2一环，接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为150g/L)的250mL三角瓶中，200rpm，37℃培养12h左右，使菌体处于对数生长中期。

2)将对数期的菌种接入装有3L MRS液体培养基(初始葡萄糖为150g/L)的5L发酵罐中。接种量为10％，37℃下100rpm培养8小时，对数前期溶氧控制10％(通气0.5L/min)，后期厌氧培养63小时。发酵结束后，植物乳杆菌L2的乳酸产量达到95g/L。这样的产乳酸速率利于泡菜的快速发酵。

3)将对数期的菌种接入装有3L pH为1.8的LPHMRS液体培养基(初始葡萄糖为50g/L)的5L发酵罐中。接种量为10％，37℃下100rpm培养8小时，对数前期溶氧控制10％(通气0.5L/min)，后期厌氧，整个过程用0.5mol/L的氢氧化钠将发酵液pH控制在1.8，总培养时间为48小时。发酵结束后，检测植物乳杆菌L2的生物量为2.5g/L，说明植物乳杆菌L2能够在pH1.8的环境中生存。

4)将对数期的菌种接入装有3L亚硝酸钠液体筛选培养基(单一氮源为2g/L亚硝酸钠的改性MRS筛选培养基)的5L发酵罐中。接种量为10％，37℃下100rpm培养8小时，对数前期溶氧控制10％(通气0.5L/min)，后期厌氧，发酵过程根据亚硝酸盐的消耗速率流加20g/L的亚硝酸钠溶液，培养2-3天。发酵结束后，计算发酵过程植物乳杆菌L2对亚硝酸钠的降解速率。结果发现：在该条件下，L2对亚硝酸钠的降解速率可以达到563mg/h/L。

5)将对数期的菌种10mL接入装有2kg预处理过的白菜中，按照传统泡菜方法进行加工，每12小时测定泡菜中的亚硝酸盐含量。结果发现，在整个发酵过程中，L2菌对亚硝酸钠的分解速率为9.8mg/h/kg白菜。泡菜中的亚硝酸钠含量始终低于5mg/kg，远低于国家标准GB2714-2003中规定的含量(20mg/kg)。

实施例2基本同例1

蜂王浆软胶囊产品原料的重量份数组成如下：

蜂王浆冻干粉40，植物油80，蜂蜡10，食用菌酶解粉3，益生菌微胶囊3。

实施例3基本同例1

蜂王浆软胶囊产品原料的重量份数组成如下：

蜂王浆冻干粉60，植物油60，蜂蜡15，食用菌酶解粉1，益生菌微胶囊1。

实施例4基本同例1

蜂王浆软胶囊产品原料的重量份数组成如下：

蜂王浆冻干粉50，植物油70，蜂蜡15，食用菌酶解粉1，益生菌微胶囊2。

实施例5基本同例1

蜂王浆软胶囊产品原料的重量份数组成如下：

蜂王浆冻干粉55，植物油65，蜂蜡12，食用菌酶解粉2，益生菌微胶囊2。

产品效果实验：

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

实验例1运动耐力实验

1.实验目的

通过运动耐力测试(小鼠游泳试验)，观察本发明蜂王浆组合物的抗疲劳作用，为确定配方用量提供实验依据。

2.实验材料与试剂

2.1供试药物

单位克。

组方一(G1)：蜂王浆冻干粉55g；

组方二(G2)：植物油65g；

组方三(G3)：蜂蜡25g

组方四(G4)：食用菌酶解粉2g，

组方五(G5)：益生菌微胶囊1

组方六(G6)：蜂王浆冻干粉55，植物油65

组方七(G7)：蜂王浆冻干粉55，植物油65，蜂蜡12，；

组方八(G8)：蜂王浆冻干粉55，植物油65，食用菌酶解粉2，

组方九(G9)：蜂王浆冻干粉55，植物油65，益生菌微胶囊1；

组方十(G10)：植物油65，蜂蜡12，

组方十二(G12)：植物油65，蜂蜡12，益生菌微胶囊1；

组方十三(G13)：植物油65，蜂蜡12，食用菌酶解粉2；

组方十四(G14)：蜂王浆冻干粉55，植物油65，蜂蜡12，食用菌酶解粉2，

组方十五(G15)：蜂王浆冻干粉55，植物油65，蜂蜡12，益生菌微胶囊1。

组方十六(G16)：益生菌微胶囊1，食用菌酶解粉2；

组方十七(G17)：益生菌微胶囊1，食用菌酶解粉2，蜂蜡12，

组方十八(G18)：益生菌微胶囊1，食用菌酶解粉2，蜂蜡12，植物油65

组方十九(G19)：蜂王浆冻干粉55，植物油65，蜂蜡12，食用菌酶解粉2，益生菌微胶囊1。

组方二十(G20)：蜂王浆冻干粉60，植物油60，蜂蜡15，食用菌酶解粉1，益生菌微胶囊1。

组方二十一(G21)：蜂王浆冻干粉40，植物油80，蜂蜡10，食用菌酶解粉3，益生菌微胶囊3。

组方二十二(G22)：空白，等体积的双蒸水

2.2试剂：

肝/肌糖原测试盒，生理盐水。

3.实验动物

小鼠，雄性，体重18-22g，实验期间小鼠自由饮食。

4.主要仪器

铝制游泳箱，铅丝，低温高速离心机，水浴锅：电子称

5.实验分组

5.1剂量分组及受试样品给予时间随机将小鼠分为22组，每组10只，第1组至第22组分别给G1～G22的药物，第22组为空白对照组，给予等体积的双蒸水，每组每日均灌胃1次，灌胃体积为0.2g/10g，连续给予受试样品30天。

6.实验方法

6.1负重游泳实验末次给药30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水温25±1℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮，记录小鼠游泳开始至死亡的时间，作为小鼠游泳时间。

6.2肝糖原的测定末次给药30min后，在温度为25±1℃的水中不负重游泳90min，

颈椎脱臼处死小鼠，用生理盐水洗净，并用滤纸吸干水分后，准确称取肝脏100mg，肝糖原检测试剂盒检测小鼠肝糖原含量。

7.观察指标负重游泳时间，肝糖原值

8.统计方法实验数据采用t检验等进行组间比较

9.实验结果

9.1本发明组合物对小鼠体重的影响

各组小鼠在给予G1～G22药物后，前、中，后期体重分别见下表所示,各组小鼠的初始体重和增重体重与对照组比较均无统计学差异(P＞0.05)，表明G1～G21药物均无明显的毒性。实验结果详见表1。

表1 负重游泳实验小鼠的初始体重、中期体重和结束体重

9.2本发明组合物对小鼠负重游泳时间的影响

经口给予小鼠G1～G22药物后，G1～G18药物与空白对照组比较，可以明显延长小鼠负重游泳时间，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明组合物G19～G21药物与空白对照组比较，可以显著延长小鼠负重游泳时间，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G19药物。结果详见表2。

表2 本发明产品对小鼠负重游泳时间的影响

“*”p<0.05vs空白对照；

“**”p<0.01vs空白对照；

9.3本发明组合物对小鼠肝糖原的影响

经口给予小鼠G1～G23药物后，G1～G19药物与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有显著性差异(P＜0.05)，本发明组合物G20～G22药物与与空白对照组比较，小鼠肝糖原含量均有明显的升高，具有极显著性差异(P＜0.01)，且明显优于G1～G19药物。结果详见表4。

表4 本发明产品对小鼠肝糖原含量的影响

“*”p<0.05vs空白对照；

“**”p<0.01vs空白对照；

10.实验结论

本实验主要通过小鼠负重游泳实验，同时检测小鼠肝糖原的储备来观察本发明蜂

王浆组合物的抗疲劳效果。初步研究结果显示如下：

1、本发明G19～G21组合物均能延长小鼠负重游泳时间(P＜0.01)，且效果明显优于其他G1～G18的组合物。

2、本发明G19～G21组合物各剂量组均能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备(P＜0.01)，且效果明显优于其他G1～G18的组合物；

上述实验证明本发明组合物能显著提高小鼠肝脏中糖原的储备，提示其可能通过减少能量代谢中两大主要能量物质蛋白质及葡萄糖的代谢而减少能量的损耗，有助于缓解运动负荷引起的疲劳；能延长小鼠负重游泳至力竭的时间。

本发明组合物主要原料为蜂王浆冻干粉，还添加了食用菌酶解粉、益生菌胶囊

具有缓解体力疲劳的保健功能。加入食用菌酶解粉提供食用菌多糖及其他食用菌保健物质，对于缓解机体疲劳起到有效地作用。加入益生菌胶囊能够有助于维护肠道健康，有助于营养物质的吸收利用；能明显疲劳的发生，有助缓解体力疲劳。

本发明所列实施例均能实现上述实验例所述的效果。

Claims (9)

1.一种蜂王浆软胶囊产品，重量份数组成如下：蜂王浆冻干粉40-60，植物油60-80，蜂蜡10-20，食用菌酶解粉1-3，益生菌微胶囊1-3，胶囊皮：采用明胶、甘油和水为原料制备。

2.根据权利要求1所述蜂王浆软胶囊产品，其特征在于，蜂王浆软胶囊产品重量份数组成如下：蜂王浆冻干粉50-60，植物油60-70，蜂蜡10-15，食用菌酶解粉1-3，益生菌微胶囊1-2。

3.根据权利要求1所述蜂王浆软胶囊产品，其特征在于，蜂王浆冻干粉的制备工艺如下：鲜蜂王浆加水过滤：物料混合：在过滤后鲜蜂王浆液体中添加鲜蜂王浆液体重量5-8％的羊肚菌酶解粉，将经过过滤的鲜蜂王浆分装入真空冷冻干燥机的托盘中，鲜王浆的厚度为8～10mm，或装入安瓶架上的安瓶内，暂不封口，放进冷冻干燥室内；真空低温干燥：粉碎封装保存；羊肚菌酶解粉制备方法如下：(1)羊肚菌子实体干燥粉碎；(2)水溶均质：将粉碎羊肚菌子实体加入不锈钢筒中，加入子实体3-6倍重量的水，浸泡3-5小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为0.5-1微米，胶体磨流量为0.4-1吨/小时；(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的混合液转移到不锈钢酶解罐中加热升温到50-60℃，调整pH到4.5-6.0,加入羊肚菌重量0.05-0.1％的纤维素酶、0.01-0.1％的β-葡聚糖酶、0.01-0.1％的蛋白酶，保温酶解0.5-1.5小时；酶解过程中不断搅拌；(4)干燥：酶解后的醪液过滤后干燥粉碎获得羊肚菌酶解粉。

4.根据权利要求1所述蜂王浆软胶囊产品，其特征在于，食用菌酶解粉制备方法如下：

(1)灵芝子实体和羊肚菌子实体干燥粉碎，灵芝子实体和羊肚菌子实体的质量比为1：8-10；(2)水溶均质：将粉碎子实体加入不锈钢筒中，加入子实体3-6倍重量的水，浸泡3-5小时，然后将此羊肚菌子实体液通过胶体磨，胶体磨操作条件为：调整胶体磨定子与转子的间隙为0.5-1微米，胶体磨流量为0.4-1吨/小时；(3)升温酶解：将经过胶体磨处理的液体转移到不锈钢酶解罐中加热升温到60-65℃，调整pH到5.5-6.0,加入灵芝子实体重量0.01-0.06％的纤维素酶、0.01-0.05％的β-葡聚糖酶、0.05-0.1％的蛋白酶，保温酶解0.5-1.5小时；酶解过程中不断搅拌；(4)干燥：酶解后的醪液过滤后干燥获得食用菌酶解粉。

5.根据权利要求1所述蜂王浆软胶囊产品，其特征在于，蜂王浆软胶囊产品原料的重量份数组成如下：蜂王浆冻干粉55，植物油65，蜂蜡12，食用菌酶解粉2，益生菌微胶囊1。

6.根据权利要求1所述蜂王浆软胶囊产品，其特征在于，益生菌胶囊产品制备方法如下：超声波真空喷雾干燥的方法，对乳酸菌进行微胶囊包被的过程如下：益生菌发酵液与壁材溶液混合，得混合溶液；采用超声波真空喷雾干燥的方法，一级真空干燥，二级惰性保护气体加震动流化床干燥，对乳酸菌进行胶囊包被；

发酵液制备：将经发酵罐发酵培养的植物乳杆菌发酵液中添加发酵液质量3-5％的水苏糖和5-8％的羊肚菌酶解粉；壁材溶液配制过程如下：按配比独立称取各种组分，称取蒸馏水， 并将各成分混合加热溶解；pH自然；冷却至室温，即得；壁材溶液组成如下：酶解大豆分离蛋白4-10％、壳聚糖0.5-1％、普鲁兰多糖0.2-0.5％、黄原胶0.2-1％、卡拉胶0.1-0.5％、甘油0.5-2％和海藻糖0.2-0.5％；此为重量体积百分比；酶解大豆分离蛋白的制备方法为：配制浓度为10-13％大豆分离蛋白溶液升温到30-45℃，调整pH到3-5,加入大豆分离蛋白重量0.1-1％的酸性蛋白酶保温酶解0.5-1.5小时；酶解后溶液喷雾干燥获得酶解大豆分离蛋白，所述益生菌选择植物乳杆菌CGMCC NO.9405。

7.根据权利要求1所述蜂王浆软胶囊产品，其特征在于，蜂王浆软胶囊产品的重量份数组成如下：蜂王浆冻干粉40，植物油80，蜂蜡10，食用菌酶解粉3，益生菌微胶囊3。

8.根据权利要求1所述蜂王浆软胶囊产品，其特征在于，蜂王浆软胶囊产品的重量份数组成如下：蜂王浆冻干粉60，植物油60，蜂蜡15，食用菌酶解粉1，益生菌微胶囊1。

9.根据权利要求1-8任一所述蜂王浆软胶囊产品的制备方法，包括如下步骤：

混合乳化：按配方比例将蜂王浆冻干粉，植物油，蜂蜡，食用菌酶解粉，益生菌微胶囊称重置于水浴中加热60℃，使其融化充分混合，得到乳化液作为囊化液待用；

配胶液制备：明胶、甘油、纯净水按2：1：2加入化胶锅，打开蒸汽球阀，通进蒸汽，待气压升至0.1兆帕，温度达到100-105℃时关闭蒸汽球阀，保温保压30分钟后，排气，搅拌均匀，静置4小时去泡，滤去杂质，注入储胶灌保温60-70℃备用；

制备软胶囊：制软胶囊采用自动旋转扎囊机，按每粒450mg囊化液制备软胶囊。

干燥：定型干燥温度为20-25℃，相对湿度50-60％，时间为12小时；

洗丸：用95％酒精洗丸，用量为0.8-1kg/万粒；凉丸：凉丸时间为4小时，温度低于25℃；二次干燥：二次干燥的温度为33℃，时间为12小时；包装入库。