CN107019226A - 一种蛋白多肽粉及其制备与应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于食品领域，具体涉及一种蛋白多肽粉及其制备与应用。本发明特以大豆、核桃、西兰花、西兰花种子芽为原料，采用低温技术制备蛋白粉，充分利用酵母菌、乳酸菌的发酵，从而大大提高了蛋白多肽粉的溶解度，有效促进机体对蛋白多肽的消化与吸收，不仅营养、保健效果好、易于消化吸收，而且具备护胃、抵抗机体氧化、改善肠道菌群、降低胆固醇等功能，具有良好的感官以及风味，而且无需添加任何防腐剂即可保证蛋白多肽粉货架期的食品安全，克服了普通市售蛋白粉中功能性单一，营养及保健效果不尽理想，且因摄入蛋白较多，导致的人体消化不良等缺陷。

Description

一种蛋白多肽粉及其制备与应用

技术领域：

本发明属于食品领域，具体涉及一种蛋白多肽粉及其制备与应用。

背景技术：

目前，蛋白多肽粉广泛地应用于食品保健等领域，其作为小分子多肽，具有比氨基酸更好的吸收性和生物利用度。其功用是补充基础营养，改善血液品质，维护细胞活力，调整免疫功能，帮助转运物质，维护胃肠微生态平衡，提高身体素质，促进疾病康复。对于体质虚弱、免疫力低下及营养不良人群具有广泛的适用性。

作为基础功能蛋白，能补充人体蛋白，提高细胞中各种免疫因子的活性和含量，促进各种抗体形成，使人体免疫力处于最佳状态，抗病防病，提高体质。维持血浆胶体渗透压，以保持身体内血液分布平衡和体液交换的正常进行。

蛋白多肽粉主要适用于蛋白质摄入不足者：如营养不良，消化吸收功能的慢性胃肠道疾患者。另外，如妇女妊娠后期，哺乳期，儿童，青少年发育期，大运动量，重体力劳动人群需要量增加，而摄入量相对不足者。另外，蛋白多肽粉亦适用于体质较弱，常患感冒，易疲劳者。

目前，有关蛋白多肽粉公开的专利较多。申请号为201210534641.6的发明专利，公开了“一种多肽蛋白粉的制备方法”，其特征在于，该多肽蛋白粉由精选大米为主要原料，淀粉酶为辅助材料，并通过浸泡、磨浆、初次调浆、一次液化、压滤、洗渣、一级胶体磨、二级胶体磨、三级胶体磨、等共十八个工艺流程完成；该方法的原材料成本较低，有机地将酶转化方式与水解方法结合，沉降池技术后使产品提纯进一步提高，完成胶质淀粉与蛋白质粉的分离，肽蛋白粉纯度较高，原材料利用率较高，废水产生率较低。

申请号为200810029984.0的发明专利公开了“一种双蛋白多肽豆浆粉固体饮料”，由下述配比的原料制成，按每生产100千克双蛋白多肽豆浆粉固体饮料计，所用原料为：多肽豆浆按干重计50～60千克，全脂奶粉10～15千克，麦芽糖浆按干重计12～20千克，白糖8～10千克，大豆纤维素1～2千克，食用大豆油3～4千克，大豆低聚糖1.5～2.5千克，食用碳酸钙1.0～1.5千克，维生素A600毫克，维生素D 5毫克；其中多肽豆浆依照下述步骤制得：(1)利用大豆制造豆浆；(2)用蛋白酶将豆浆中的大豆蛋白质酶解为大豆多肽；(3)完成酶解后，进行灭酶，得到多肽豆浆。本发明含有植物蛋白和动物蛋白，并且含有大豆多肽，营养价值高，更有利于人体健康。

而随着蛋白多肽粉领域中行业的竞争，其具备多功能性和多附加值成为目前蛋白多肽粉研发与生产的热点。如申请号为201210241261.3的发明专利公开了“一种具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制备方法”，其特征在于提供了一种具有保肝和抗氧化作用的大豆乳清多肽的制备方法，步骤包括：将大豆乳清废水进行絮凝处理除杂后，按每升乳清水加入0.5g-1.5g半胱氨酸，然后在pH2-3、温度40℃-55℃条件下，以每克蛋白加入1000-2500活力单位的酸性蛋白酶，水解5h-7h；之后按1000-2500U/g加入胃蛋白酶，在35-45℃、pH2-3条件下，水解3h-5h；水解液经灭酶、离心、过滤、浓缩与干燥得到大豆乳清多肽。动物试验证明，本发明大豆乳清多肽具很强的抗氧化和抗急性肝损伤作用。该多肽中，1000Da以下的小分子低聚肽占80％以上。人群试食口感好，没有副作用，可以作为普通营养和保健食品的原料。

申请号为201610845601.1的发明专利公开了“一种抗氧化沙棘多肽的制备方法”，其特征在于将沙棘籽清洗浸泡处理后，用胃蛋白酶酶解提取两次，再经减压浓缩干燥，得沙棘籽多肽。总抗氧化能力(AOV)的测定表明，该多肽溶液在20mg/mL时，羟自由基清除率高达91.35％，超氧阴离子自由基清除率高达64.33％，具有很强抗氧化性，在抗氧化食品和化妆品方面具有广阔的应用前景。

申请号为201410455199.7的发明专利公开了“胃肠模拟消化制备菜籽粕蛋白抗氧化肽液的方法”，其特征在于采用的制备工艺以菜籽榨油副产物高变性蛋白菜籽粕为原料，经粉碎、过筛等常规预处理后，采用模拟胃肠消化技术，由含胃蛋白酶、胰蛋白酶构建双酶模拟胃肠消化体系，沸水浴、调节pH法集成2次离心手段制备菜籽粕蛋白抗氧化肽液。本发明的制备方法采用双酶酶解反应体系，极大地提高菜籽粕蛋白水解效率，充分利用原料；模拟胃肠消化过程，未进行常规酶解的不断添加NaOH维持反应在最适pH进行，反应过程更加绿色，同时，由于模拟最完美的人体胃肠消化手段，在潜在食品安全方面，较微生物发酵更有优势。

上述公开的相关蛋白多肽粉的专利虽营养丰富，但其功能性单一，营养及保健效果不尽理想。与此同时，公开的相关蛋白多肽粉由于具有高营养成分，而在蛋白质在代谢过程中会大量消耗维生素B族，从而会加大机体的消化负担，不仅会影响机体对于蛋白良好的消化吸收，若摄入蛋白较多，不仅会导致人体消化不良，机体代谢不畅，而且会打乱人体的代谢平衡。

另一方面，西兰花，又名绿菜花，为1-2年生草本植物，不仅含有蛋白质、碳水化合物、脂肪、膳食纤维、维生素、矿物质等人体所需的基础营养物质，还含有大量有益人体健康的生物活性物质。其中，西兰花叶色泽鲜艳、柔软多汁，含有丰富的维生素等物质，但水分及有机质含量较高，将其堆放或填埋会产生大量的渗滤液，容易造成环境污染，因此，提高西兰花叶的利用率对减少食品资源的浪费和避免环境污染具有重要意义；此外，对于西兰花的根部，人们通常选择丢弃，但是，西兰花的根部也具有较高的膳食纤维和营养价值，对于肠道健康有很好的作用，有很好的利用价值；西兰花种子芽苗因其丰富的营养及保健功能而受到人们的喜爱，日本、欧美等发达国家已有食用的习惯。研究表明，西兰花芽苗中萝卜硫苷和萝硫素的含量是成熟西兰花的10～100倍，萝卜硫素是目前发现的抗癌活性最强的异硫氰酸酯，除了其显著的抗癌功效外，还具有消炎，抑菌预防心血管疾病等功效。

除此之外，酵母菌具有的众多生理功能，使其在发酵食品中得到广泛的研究与应用，其作用机制总结如下：l)直接营养作用，促进动物生长发育。2)提高肠道消化酶活性。3)促进微生物繁殖和增强活性，调节胃肠道微生态平衡。4)提高机体对纤维素和矿物质的消化率。5)提高免疫力和抗应激能力，吸附致病因子，保障机体健康。

此外，酵母中包含某些抗氧化活性成分，例如谷胱甘肽，其主要功能有：(1)清除自由基、过氧化物、重金属及黄曲霉毒素等毒物；(2)参与氨基酸(谷氨酰氨、半胱氨酸及其它中性氨基酸)的转运；(3)利于铁的吸收、硒的吸收、钙的吸收，谷胱甘肽还可以使饲料中的过氧化脂肪酸在吸收时或吸收后恢复为正常的脂肪；(4)保护胃肠道黏膜上皮，防止因炎症、局部缺血、氧化物质等对肠黏膜的损伤；(5)贮存并提供其组成氨基酸；(6)参与蛋白质和DNA的合成；(7)作为还原物质，利于维生素E、维生素C的还原，维持巯基酶活性。

综上，以大豆、核桃、西兰花为原料，充分利用酵母菌与德式乳杆菌的发酵，从而促进机体对蛋白多肽的消化与吸收，制备一种功能性及溶解性强、营养及保健效果好、易于消化吸收、保质期长的蛋白多肽粉很有必要。

发明内容：

本发明的目的在于克服上述蛋白多肽粉的缺陷，以大豆、核桃、西兰花为原料，充分利用酵母菌、乳酸菌的发酵，从而大大提高了蛋白多肽粉的溶解度，有效促进机体对蛋白多肽的消化与吸收，不仅营养、保健效果好、易于消化吸收，而且具备护胃、抵抗机体氧化、改善肠道菌群、降低胆固醇等功能，具有良好的感官以及风味，而且无需添加任何防腐剂即可保证蛋白多肽粉货架期的食品安全。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种蛋白多肽粉，主要由以下重量份数的原料制备：

大豆蛋白粉5-10份，核桃蛋白粉3-7份，西兰花叶混合粉3-7份，西兰花根蛋白粉3-6份，西兰花种子芽粉2-5份，酵母发酵混合蛋白粉1-4份。

优选地，所述一种蛋白多肽粉，主要由以下重量份数的原料制备：

大豆蛋白粉7-8份，核桃蛋白粉4-6份，西兰花叶混合粉4-6份，西兰花根蛋白粉4-5份，西兰花种子芽粉3-4份，酵母发酵混合蛋白粉2-3份。

更优选地，所述一种蛋白多肽粉，主要由以下重量份数的原料制备：

大豆蛋白粉7.5份，核桃蛋白粉5份，西兰花叶混合粉5份，西兰花根蛋白粉4.5份，西兰花种子芽粉3.5份，酵母发酵混合蛋白粉2.5份。

进一步地，所述大豆蛋白粉以全脂大豆为原料，按照申请号为95119835.1发明专利的制备方法制备。

进一步地，所述核桃蛋白粉按照申请号为201310497733.6发明专利的制备方法制备。

进一步地，所述西兰花种子芽粉的制备，具体如下：

将西兰花种子于功率100-300W，频率20-30KHz，室温20-30℃超声清洗1-4min，于室温20-30℃，清水浸泡1-4h；将浸泡后的西兰花种子进行低频高压脉冲，输出频率：0.1-20Hz，脉冲电场的场强：50-150kV/m，脉宽20-70ms，处理时间0.1-2h；将经过低频高压脉冲处理后的西兰花种子进行高压静电处理，脉冲电场场强：50-150kV/m，场强方向竖直向下，处理时间0.1-2h；将经过高压静电处理的西兰花种子浸没于清水中，浸泡1-2h，将浸泡后的西兰花种子放置于铺有滤纸的恒湿培养箱中，温度28-35℃，进行LED红光照射1-4h，光照强度5-20W，通过调节光源高度，使各处理光量子通量密度均保持在80-90μmol·m ^-2·s^-1，经红光照射后在黑暗条件下培养发芽0.5-3d，得到西兰花种子芽；将所述西兰花种子芽利用粉碎机粉碎，得到西兰花种子芽浆，将所述西兰花种子芽浆于功率10-30W，红外照射0.1-1min，垂直照射高度10-20cm；待处理后，将西兰花种子芽浆放置于恒温油浴温度35-40℃，调整微波功率350-450W，微波提取0.1-1min后，按照西兰花种子芽浆与蒸馏水体积比1:0.1-1加入蒸馏水，得到西兰花种子芽混合液，向混合液中添加0.01-0.06％的复合酶，30-40℃，酶解10-25min，得到酶解液，将所述酶解液4000-5000rpm离心5-15min，去上清，减压浓缩，冷冻干燥，超微粉碎，过80-100目筛即得花种子芽粉；

所述复合酶为纤维素酶、木聚糖酶按质量比2-5：1-3均匀混合。

进一步地，所述酵母发酵混合粉包括酵母蛋白粉以及发酵液粉。

进一步地，所述酵母发酵混合粉的制备，具体如下：

(1)摇瓶培养

取酵母斜面菌种一环，接入摇瓶中,150-200rpm,28-30℃培养20-25h得酵母种子液；

(2)发酵罐培养

将种子液按3-6％接种量，接入发酵罐中，28-30℃,通气量5-7L/min,罐压0.02-0.04MPa，200-300rpm，恒pH6.0-6.4条件下进行发酵培养，发酵至20-25h时，一次性添加终浓度为20-25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵25-30h；

所述最终发酵液中GSH终浓度达到2268-3308mg/L；

(3)发酵液处理

将发酵液4000-5000rpm离心5-15min，分离得到酵母菌体以及酵母发酵液；

(4)酵母蛋白粉的制备

将菌体在-20℃条件下预冻2-4h，置于真空机中抽真空1-50Pa，再充注氮气至大气压,预冷至0℃—-20℃,保持1-2h后,抽真空1-50Pa,升温至0℃—15℃,再降温至0℃—-20℃，保持1-2h，升温至20-30℃，并快速启用高频振荡壁碎机对酵母进行破壁，破壁循环1-2次，获得破壁酵母液，对破壁酵母液，在70-90℃条件下进行高温自溶；高压喷雾干燥，进风温度：260-300℃，排风温度：60-70℃，料液温度：60℃，最终获得酵母蛋白粉；

(5)发酵液蛋白粉的制备

将发酵液调pH值为8.5～10.0在50℃-60℃进行碱提，碱提同时进行超声，所述超声功率为180-200W，超声时间10-20min，然后离心5-10min，转速4000-5000rpm，取离心沉淀物调pH5.0-6.0，离心、洗涤后冷冻干燥、超微粉碎，得到发酵液蛋白粉；

(6)将酵母蛋白粉以及发酵液蛋白粉按照质量比(1-3)：(3-6)混合均匀，最终获得酵母发酵混合粉；

所述摇瓶培养基以g/L计组成为：(NH₄)₂SO₄ 6、葡萄糖35、K₂HPO₄·3H₂O 3、KH₂PO₄0.5、酵母粉11、MnSO₄ 0.1、KCL 0.1、FeSO₄ 0.1、MgSO₄·7H₂O 0.1，余量为水，pH6.0；

所述发酵培养基以g/L计组成为：(NH₄)₂SO₄ 10、葡萄糖100、K₂HPO₄·3H₂O 8、KH₂PO₄0.5、酵母粉11、MnSO₄ 0.1、KCL0.1、FeSO₄ 0.1、MgSO₄·7H₂O 0.1,余量为水，pH6.0；

所述酵母具体为酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)tlj2016，该菌株已于2016年7月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.12789，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101；

所述酿酒酵母tlj2016具有以下特性：1)对葡萄糖的耐受能力达到300g/L，利于其在高浓度葡萄糖条件下生产GSH；2)在5L发酵罐中发酵生产GSH终浓度达到3308mg/L；3)耐受L-半胱氨酸的能力特强，在5mmol/L L-半胱氨酸作用下仍能缓慢生长，在40mmol/L L-半胱氨酸作用下仍能保持GSH大量合成；4)耐盐能力达到18％，有利于扩展其应用领域。

进一步地，所述西兰花叶混合粉的制备，具体如下：

所述西兰花叶混合粉由西兰花叶一阶段提取物以及西兰花二阶段提取物按照质量比3-6:1-2组成；

西兰花叶一阶段提取物的制备：

(1)将西兰花叶置于超声波清洗机中于功率200-400W，频率20-30KHz，室温20-30℃超声清洗3-5min，漂洗，沥干，按照料液质量比0.6-1：1向西兰花叶中加入自来水，并粉碎，获得西兰花叶浆，并用3-6层滤布过滤，获得西兰花叶过滤液；向西兰花叶过滤液中加入酵母发酵液，所述西兰花叶过滤液与酵母发酵液体积比为1：1.5-3，搅拌静置后，获得混合酸溶液；

(2)将所述混合酸溶液置于玻璃平板中，平板中溶液高度为0.5-1.5cm，静置于45-50℃恒温油浴条件下静置1min后，于恒温45-50℃，功率200-300W，微波提取0.5-1min后，通过红外光源进行红外提取0.5-1min，所述红外光源功率为15-30W；待红外提取后，调整恒温油浴温度35-40℃，调整微波功率350-450W，微波提取0.5-1min后，再进行红外提取，功率：15-30W，时间：0.5-1min；最后，在35-40℃恒温油浴条件下，调整微波功率500-600W，微波提取0.5-1min，用离心机以3 000-4000r/mi n的转速离心5-10min，获得沉淀以及上清液，将所述沉淀经蒸馏水洗涤后，冷冻干燥、超微粉碎，得到西兰花叶一阶段提取物；

西兰花叶二阶段提取物的制备：

将上述步骤(1)过滤获得的残渣与步骤(2)离心获得的上清液混合，获得二阶段混合浆，向其中加入质量5-15倍的75％-85％的乙醇溶液，均匀混合，首先于恒温油浴65-75℃，功率400-500W，微波提取5-10min；然后升温至75-85℃，调整功率为500-600W，微波提取5-10min，微波提取的全程同时伴随功率15-30W进行红外辅助提取后，3-6层滤布过滤，得到二阶段过滤液；将所述二阶段过滤液加热回流，温度100℃，时间10-15min，得到回流液，将所述回流液经冷冻干燥、超微粉碎，得到西兰花叶二阶段提取物；

将所述一次提取物和二次提取物均匀混合即得西兰花叶混合粉；

所述红外光源的波长为0.6μm-10μm，所述红外光源功率为15-30W，所述红外光源的辐射高度为0.5-1m。

进一步地，所述西兰花根蛋白粉的制备方法包括如下步骤：

将西兰花根切成0.5-1cm³的正方体，经超高压处理，加压方式：升压速度90-120MPa/min，压箱内温度20-30℃，加压介质为蒸馏水；在250-300MPa的压力下，保压2-4min，待保压结束，在10-20s内瞬时放压；

将经超高压处理的西兰花根经冷冻干燥，超微粉碎，得到一阶段微粉；

将所述一阶段微粉以料液比1∶10-15添加蒸馏水溶解，并将混合液进行脉冲电场处理，脉冲宽度3-8μs，脉冲场强20-45kV/cm、样品流速30-50mL/min、、脉冲时间300-600μs，将脉冲电场处理后的混合液经过8000rpm下离心20-30min得到上清液，将上清液调节pH至4.0-5.0,搅拌静置，6000-8000rpm离心20-40min分离得到沉淀,将沉淀反复水洗和离心分离，冷冻干燥，超微粉碎，得到西兰花根蛋白粉。

本发明的另一目的是提供一种蛋白多肽粉的制备方法，包括如下步骤：(1)混合：按照配方，依次将大豆蛋白粉，核桃蛋白粉，西兰花叶混合粉，西兰花根蛋白粉，酵母发酵混合蛋白粉加入V型混合罐，并加入混合蛋白粉质量体积百分比70-85％(m/v)的纯净水，均匀混合10-20min，搅拌转速50-100rpm，加热至85度，保温25min，得到混合乳液；

(2)胶磨；将所述混合乳液经过三次胶磨处理，每次胶磨时间20-30min；

(3)过滤：将经胶磨后混合乳液，利用管道式过滤机过滤杂质，压力设置0.2-0.6MPa；

(4)均质：利用高压均质机，在40-50MPa条件下，将经过滤后的混合乳液进行均质细化，均质时间20-40min；

(5)酶解：调整经均质后的混合乳液pH至8.0-8.5，添加质量体积千分比为2-6‰(m/v)碱性蛋白酶，搅拌，每10分钟检测一次pH，当pH下降到7.3后，继续向其中添加质量体积千分比为2-6‰(m/v)木瓜蛋白酶、2-6‰(m/v)风味蛋白酶，全程控温55℃，30-80rpm搅拌，酶解时间：20-40min；

(6)灭酶灭菌：升温至100℃保温5-10min；

(7)发酵：向经灭酶灭菌的混合乳液中添加质量百分比为1-4％(m/v)葡萄糖，

0.1-0.4％(m/v)的营养盐，0.1-0.5％(m/v)乳酸菌粉，30-37℃静置培养8-12h后，按接种量1-5％(v/v)接入酵母种子液，转速为100-150rpm，继续培养8-10h，发酵结束，得到发酵混合乳液；

(8)浓缩：在40-50℃条件下，低温真空浓缩发酵混合乳液至固含量为30％(m/v)，得到发酵混合浓缩乳液。

(9)调配：按质量百分比，向所述发酵混合浓缩乳液中加入0.004％～0.1％甜味剂，0.01％～0.1％香料，0.3％～1.0％麦芽糊精。

(10)喷雾干燥：设置进风温度150-160℃，出风温度70-80℃，维持物料温度小于60℃。

(11)灌装：无菌灌装、密封、包装即得蛋白多肽粉。

所述乳酸菌为保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、奶酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌中的一种或几种的混合物。

所述酵母为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789；

所述酵母种子液与酵母发酵混合蛋白粉制备方法中的种子液相同；

所述营养盐为三聚磷酸钠、柠檬酸钠、柠檬酸钾、六偏磷酸钠和焦磷酸钠中的一种或多种。

所述甜味剂为甜菊糖、安赛蜜、阿斯巴甜、蔗糖中的一种或几种。

所述香料为柠檬香精、柑橘香精、菠萝香精、苹果香精、芒果香精、百香果香精中的一种或几种的混合物。

有益效果：

1、高溶解性、高消化吸收率：实验表明，本发明蛋白多肽粉的氮溶指数和蛋白多肽粉水解度显著高于对照组，其溶解性较高，从而说明其蛋白质水化作用较为显著，有利于机体的消化吸收。实验表明：机体对本发明蛋白多肽粉的消化吸收率明显高于对照组A和对照组B，达到92.25％，而对照组A普通蛋白多肽粉的消化吸收率却仅有56.75％，对照组B添加有益生菌，其消化吸收率有所提高，为72.5％，由此，表明本发明的蛋白多肽粉不仅含有大量生物活性物质、消化酶和益生因子，可促进营养物质的消化和吸收。

2、高抗氧化活性：本发明的蛋白多肽粉对羟自由基的清除能力显著。且随着蛋白多肽粉浓度的增加而增大。当浓度为16mg/mL时，对羟自由基清除率可达到98.67％，较市售的蛋白多肽粉的清除率显著提高了38.92％；对超氧阴离子清除率可达到87.67％，较市售的蛋白多肽粉的清除率显著提高了37.22％，故本发明的蛋白多肽粉具有很强的抗氧化功能，从而可达到延缓机体衰老等功效。

3、有效降低胆固醇特性：本发明的蛋白多肽粉具有有效降低胆固醇的特性。实验表明：灌胃样品不同的蛋白多肽粉比较，高脂实验组即食用本发明实施例4中的蛋白多肽粉过程中，血清中TC含量有明显的降低，降幅为38.31％，显著性差异明显(p＜0.01)。

4、有效延缓疲劳

本发明的蛋白多肽粉可有效缓解机体疲劳，促进机体产生乳酸脱氢酶(LDH)，诱导因机体运动所致肌肉中堆积的乳酸转变成为丙酮酸，减少乳酸在肌肉中的堆积。实验证明，在将蛋白多肽粉连续灌胃小鼠15d后，可以看出，小鼠游泳后，喂食本发明的蛋白多肽粉组对应的乳酸脱氢酶活力较实验对照对照组，提高了34.30％，明显高于喂食普通市售的蛋白多肽粉的酶活力，从而食用本发明的多肽粉可以加速肌肉中过多乳酸的清除代谢过程，延缓疲劳或加速疲劳的消除，能更有效提高乳酸脱氢酶活力。

5、有效延长货架期的特性：

本发明的蛋白多肽粉在不添加任何防腐剂的前提条件下可有效延长蛋白多肽粉的货架期。实验表明：，在蛋白多肽粉放置第60天时，对照组的大肠杆菌的MPN值已经超过了国家标准，而实验组的大肠杆菌MPN值为14.67，依然维持在较低的范围内，未超出国标范围。在放置100天后，更可以明显地看出，对照组的大肠杆菌的MPN值为73.24，已经远远超出了国家标准的范围，而实验组MPN值为26.56，始终维持在国家标准大肠菌MPN值的范围之内。

6、良好的感官以及风味：

本发明制备的蛋白多肽粉从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售蛋白多肽粉，特别是外观、风味和口感极好，同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。

具体技术原理如下：

通过加入酵母发酵混合西兰花叶过滤液，可在酸化促进提取过程的同时，防止西兰花叶蛋白以及其他活性有机成分的氧化，进而对其起到保护作用，接下来通过红外辅助微波提取西兰花叶中的蛋白以及其活性成分，从而有效提高了其溶解效率。

通过超高压处理以及脉冲电场处理西兰花根，均可避免高温提取方式导致其活性成分的损失，与此同时，有效提高其溶解度，进而有效提高消化吸收效率。

蛋白多肽粉混合后，通过胶磨、均质后，通过酵母菌以及乳酸菌的发酵作用，可有效利用发酵过程中，生物活性物质以及菌体对蛋白的分解作用，使其细化为小分子多肽，从而有效提高其溶解度，特别针对于消化系统薄弱人群，可减轻胃部负担，不仅做到护胃养胃，且可有效提高机体对其的消化吸收效率；与此同时，该菌体进入肠道过程中，也可有效改善肠道微生物环境，从而促进新陈代谢。

综上，以大豆、核桃、西兰花为原料，充分利用酵母菌、乳酸菌的发酵，从而大大提高了蛋白多肽粉的溶解度，有效促进机体对蛋白多肽的消化与吸收，不仅营养、保健效果好、易于消化吸收，而且具备护胃、抵抗机体氧化、改善肠道菌群等功能，具有良好的感官以及风味，而且无需添加任何防腐剂即可保证蛋白多肽粉货架期的食品安全。

需要说明的是本发明蛋白多肽粉的技术效果是各组分相互协同、相互作用的结果，并非简单的原料功能的叠加，各原料组分的科学复配和提取，产生的效果远远超过各单一组份功能和效果的叠加，具有较好的先进性和实用性。

具体实施方式：

下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。

实施例1西兰花种子芽粉的制备

将西兰花种子于功率200W，频率25KHz，室温25℃超声清洗2.5min，于室温25℃，清水浸泡2.5h；将浸泡后的西兰花种子进行低频高压脉冲，输出频率：10Hz，脉冲电场的场强：110kV/m，脉宽45ms，处理时间1h；将经过低频高压脉冲处理后的西兰花种子进行高压静电处理，脉冲电场场强：100kV/m，场强方向竖直向下，处理时间1h；将经过高压静电处理的西兰花种子浸没于清水中，浸泡1h，将浸泡后的西兰花种子放置于铺有滤纸的恒湿培养箱中，温度30℃，进行LED红光照射2h，光照强度15W，通过调节光源高度，使各处理光量子通量密度均保持在85μmol·m^-2·s^-1，经红光照射后在黑暗条件下培养发芽2d，得到西兰花种子芽；将所述西兰花种子芽利用粉碎机粉碎，得到西兰花种子芽浆，将所述西兰花种子芽浆于功率20W，红外照射0.5min，垂直照射高度15cm；待处理后，将西兰花种子芽浆放置于恒温油浴温度35℃，调整微波功率400W，微波提取1min后，按照西兰花种子芽浆与蒸馏水体积比1:0.5加入蒸馏水，得到西兰花种子芽混合液，向混合液中添加0.03％的复合酶，35℃，酶解20min，得到酶解液，将所述酶解液4500rpm离心10min，去上清，减压浓缩，冷冻干燥，超微粉碎，过100目筛即得花种子芽粉；

所述复合酶为纤维素酶、木聚糖酶按质量比3.5：2均匀混合。

实施例2西兰花叶混合粉的制备方法

所述西兰花叶混合粉由西兰花叶一阶段提取物以及西兰花二阶段提取物按照质量比5:2组成；西兰花叶混合粉的制备方法包括如下步骤：

西兰花叶一阶段提取物的制备：

(1)将西兰花叶置于超声波清洗机中于功率300W，频率25KHz，室温20-30℃超声清洗3-5min，漂洗，沥干，按照料液质量比0.6-1：1向西兰花叶中加入自来水，并粉碎，获得西兰花叶浆，并用3-6层滤布过滤，获得西兰花叶过滤液；向西兰花叶过滤液中加入酵母发酵液，所述西兰花叶过滤液与酵母发酵液体积比为1：2，搅拌静置后，获得混合酸溶液；

(2)将所述混合酸溶液置于玻璃平板中，平板中溶液高度为1cm，静置于45℃恒温油浴条件下静置1min后，于恒温45℃，功率250W，微波提取0.6min后，，通过红外光源进行红外辅助提取0.5min，红外光源功率位20W；调整恒温油浴温度40℃，调整微波功率400W，微波提取0.6min后，再进行红外提取，功率：20W，时间：0.6min；最后，在40℃恒温油浴条件下，调整微波功率550W，微波提取0.6min，用离心机以4000r/mi n的转速离心7mi n，获得沉淀以及上清液，将所述沉淀经蒸馏水洗涤后，冷冻干燥、超微粉碎，得到西兰花叶一阶段提取物。

西兰花叶二阶段提取物的制备：

将上述步骤(1)过滤获得的残渣与步骤(2)离心获得的上清液混合，获得二阶段混合浆，向其中加入质量5倍的80％的乙醇溶液，均匀混合，首先于恒温油浴70℃，功率450W，微波提取7min；然后升温至80℃，调整功率为550W，微波提取7min，微波提取的全程同时伴随功率20W进行红外辅助提取后，6层滤布过滤，得到二阶段过滤液；将所述二阶段过滤液加热回流，温度100℃，时间10-15min，得到回流液，将所述回流液经冷冻干燥、超微粉碎，得到西兰花叶二阶段提取物；

所述红外光源的波长为1.5μm，所述红外光源功率为25W，所述红外光源的辐射高度为0.75m。

将所述一次提取物和二次提取物均匀混合即得西兰花叶提取物。

实施例3西兰花根蛋白粉的制备方法

将西兰花根切成0.5cm³的正方体，经超高压处理，加压方式：升压速度100MPa/min，压箱内温度25℃，加压介质为蒸馏水；在260MPa的压力下，保压3min，待保压结束，在15s内瞬时放压；

将经超高压处理的西兰花根经冷冻干燥，超微粉碎，得到一阶段微粉；

将所述一阶段微粉以料液比1∶13添加蒸馏水溶解，并将混合液进行脉冲电场处理，脉冲宽度5μs，脉冲场强30kV/cm、样品流速40mL/min、、脉冲时间400μs，将脉冲电场处理后的混合液经过8000rpm下离心25min得到上清液，将上清液调节pH至4.5,搅拌静置，7000rpm离心30min分离得到沉淀,将沉淀反复水洗和离心分离，冷冻干燥，超微粉碎，得到西兰花根蛋白粉。

实施例4：酵母发酵混合粉的制备

酵母发酵混合粉包括酵母蛋白粉以及发酵液粉，所述酵母发酵混合粉的制备，具体如下：

(1)摇瓶培养

取酵母斜面菌种一环，接入摇瓶中,190rpm,28℃培养25h得酵母种子液；

(2)发酵罐培养

将种子液按5％接种量，接入发酵罐中，28℃,通气量6L/min,罐压0.03MPa，250rpm，恒pH6.3条件下进行发酵培养，发酵至20h时，一次性添加终浓度为20-25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵26h；

所述最终发酵液中GSH终浓度达到3308mg/L；

(3)发酵液处理

将发酵液4000rpm离心10min，分离得到酵母菌体以及酵母发酵液；

(4)酵母蛋白粉的制备

将菌体在-20℃条件下预冻3h，置于真空机中抽真空10Pa，再充注氮气至大气压,预冷至-10℃,保持1h后,抽真空10Pa,升温至5℃,再降温至-10℃，保持1h，升温至20℃，并快速启用高频振荡壁碎机对酵母进行破壁，破壁循环2次，获得破壁酵母液，对破壁酵母液，在70℃条件下进行高温自溶；高压喷雾干燥，进风温度：260℃，排风温度：60℃，料液温度：60℃；

(5)发酵液蛋白粉的制备

将发酵液调pH值为8.5～10.0在50℃-60℃进行碱提，碱提同时进行超声，所述超声功率为180-200W，超声时间10-20min，然后离心5-10min，转速4000-5000rpm，取离心沉淀物调pH5.0-6.0，离心、洗涤后冷冻干燥、超微粉碎，得到发酵液蛋白粉；

(6)将酵母蛋白粉以及发酵液蛋白粉按照质量比2：5混合均匀，最终获得酵母发酵混合粉；

所述摇瓶培养基以g/L计组成为：(NH₄)₂SO₄ 6、葡萄糖35、K₂HPO₄·3H₂O 3、KH₂PO₄0.5、酵母粉11、MnSO₄ 0.1、KCL 0.1、FeSO₄ 0.1、MgSO₄·7H₂O 0.1，余量为水，pH6.0；

所述发酵培养基以g/L计组成为：(NH₄)₂SO₄ 10、葡萄糖100、K₂HPO₄·3H₂O 8、KH₂PO₄0.5、酵母粉11、MnSO₄ 0.1、KCL 0.1、FeSO₄ 0.1、MgSO₄·7H₂O 0.1,余量为水，pH6.0。

实施例5护胃蛋白多肽粉的制备

依次将大豆蛋白粉7.5份，核桃蛋白粉5份，西兰花叶混合粉5份，西兰花根蛋白粉4.5份，西兰花种子芽粉3.5份，酿酒酵母tlj2016发酵液混合蛋白粉2.5份加入V型混合罐，并加入混合蛋白粉质量体积百分比77％(m/v)的纯净水，均匀混合15min，搅拌转速75rpm，加热至85℃，保温25min，得到混合乳液；

胶磨；将所述混合乳液经过三次胶磨处理，每次胶磨时间25min；

过滤：将经胶磨后混合乳液，利用管道式过滤机过滤杂质，压力设置0.4MPa；

均质：利用高压均质机，在45MPa条件下，将经过滤后的混合乳液进行均质细化，均质时间30min；

酶解：调整经均质后的混合乳液pH至8.2，添加质量体积千分比为4‰(m/v)碱性蛋白酶，搅拌，每10分钟检测一次pH，当pH下降到7.3后，继续向其中添加质量体积千分比为4‰(m/v)木瓜蛋白酶、4‰(m/v)风味蛋白酶，全程控温55℃，55rpm搅拌，酶解时间：30min；

灭酶灭菌：升温至100℃保温7min；

发酵：向经灭酶灭菌的混合乳液中添加质量百分比为2.5％(m/v)葡萄糖，0.25％(m/v)的营养盐，0.3％(m/v)乳酸菌粉，35℃静置培养10h后，按接种量3％(v/v)接入酿酒酵母tlj2016种子液，转速为225rpm，继续培养9h，发酵结束，得到发酵混合乳液；

浓缩：在45℃条件下，低温真空浓缩发酵混合乳液至固含量为30％(m/v)，得到发酵混合浓缩乳液。

调配：按质量百分比，向所述发酵混合浓缩乳液中加入0.05％甜味剂，0.05％香料，0.6％麦芽糊精。

喷雾干燥：设置进风温度155℃，出风温度75℃，维持物料温度小于60℃。

灌装：无菌灌装、密封、包装即得蛋白多肽粉。

所述乳酸菌为保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、瑞士乳杆菌，质量比为1:1:0.5。

所述酵母为酿酒酵母tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789；

所述酵母种子液与酵母发酵混合蛋白粉制备方法中的种子液相同；

所述营养盐为柠檬酸钠、柠檬酸钾，质量比为1:2。

所述甜味剂为阿斯巴甜、蔗糖，质量比1:0.4。

所述香料为百香果香精。

实施例6护胃蛋白多肽粉的制备

将大豆蛋白粉5份，核桃蛋白粉3份，西兰花叶混合粉3份，西兰花根蛋白粉3份，西兰花种子芽粉2份，酿酒酵母tlj2016发酵液混合蛋白粉1份混合，并加入混合蛋白粉质量体积百分比70％(m/v)的纯净水，均匀混合10min，搅拌转速50rpm，加热至85℃，保温25min，得到混合乳液；

胶磨；将所述混合乳液经过三次胶磨处理，每次胶磨时间20min；

过滤：将经胶磨后混合乳液，利用管道式过滤机过滤杂质，压力设置0.2MPa；

均质：利用高压均质机，在40MPa条件下，将经过滤后的混合乳液进行均质细化，均质时间20min；

酶解：调整经均质后的混合乳液pH至8.0，添加质量体积千分比为2‰(m/v)碱性蛋白酶，搅拌，每10分钟检测一次pH，当pH下降到7.3后，继续向其中添加质量体积千分比为2‰(m/v)木瓜蛋白酶、2‰(m/v)风味蛋白酶，全程控温55℃，30rpm搅拌，酶解时间：20min；

灭酶灭菌：升温至100℃保温5min；

发酵：向经灭酶灭菌的混合乳液中添加质量百分比为2％(m/v)葡萄糖，0.1％(m/v)的营养盐，0.1％(m/v)乳酸菌粉，30℃静置培养8h后，按接种量1％(v/v)接入酿酒酵母tlj2016种子液，转速为100rpm，继续培养8h，发酵结束，得到发酵混合乳液；

浓缩：在40℃条件下，低温真空浓缩发酵混合乳液至固含量为30％(m/v)，得到发酵混合浓缩乳液。

调配：按质量百分比，向所述发酵混合浓缩乳液中加入0.004％甜味剂，0.01％香料，0.3％麦芽糊精。

喷雾干燥：设置进风温度150℃，出风温度70℃，维持物料温度小于60℃。

灌装：无菌灌装、密封、包装即得蛋白多肽粉。

乳酸菌为保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌，质量比为1:1:1；

酵母种子液与酵母发酵混合蛋白粉制备方法中的种子液相同；

营养盐为的三聚磷酸钠、柠檬酸钠按，质量比为1:2。

甜味剂为甜菊糖。

香料为柠檬香精。

实施例7护胃蛋白多肽粉的制备

依次将大豆蛋白粉10份，核桃蛋白粉7份，西兰花叶混合粉7份，西兰花根蛋白粉6份，西兰花种子芽粉5份，酿酒酵母tlj2016发酵液混合蛋白粉4份加入V型混合罐，并加入混合蛋白粉质量体积百分比85％(m/v)的纯净水，均匀混合20min，搅拌转速100rpm，加热至85度，保温25min，得到混合乳液；

胶磨；将所述混合乳液经过三次胶磨处理，每次胶磨时间30min；

过滤：将经胶磨后混合乳液，利用管道式过滤机过滤杂质，压力设置0.6MPa；

均质：利用高压均质机，在50MPa条件下，将经过滤后的混合乳液进行均质细化，均质时间40min；

酶解：调整经均质后的混合乳液pH至8.5，添加质量体积千分比为6‰(m/v)碱性蛋白酶，搅拌，每10分钟检测一次pH，当pH下降到7.3后，继续向其中添加质量体积千分比为6‰(m/v)木瓜蛋白酶、6‰(m/v)风味蛋白酶，全程控温55℃，80rpm搅拌，酶解时间：40min；

灭酶灭菌：升温至100℃保温10min；

发酵：向经灭酶灭菌的混合乳液中添加质量百分比为4％(m/v)葡萄糖，0.4％(m/v)的营养盐，0.5％(m/v)乳酸菌粉，37℃静置培养12h后，按接种量5％(v/v)接入酿酒酵母tlj2016种子液，转速为150rpm，继续培养10h，发酵结束，得到发酵混合乳液；

浓缩：在50℃条件下，低温真空浓缩发酵混合乳液至固含量为30％(m/v)，得到发酵混合浓缩乳液。

调配：按质量百分比，向所述发酵混合浓缩乳液中加入0.1％甜味剂，0.1％香料，1.0％麦芽糊精。

喷雾干燥：设置进风温度160℃，出风温度80℃，维持物料温度小于60℃。

灌装：无菌灌装、密封、包装即得蛋白多肽粉。

所述乳酸菌为保加利亚乳杆菌、双歧杆菌、奶酪乳杆菌、瑞士乳杆菌，质量比为1:1:2:1。

酵母种子液与酵母发酵混合蛋白粉制备方法中的种子液相同；

营养盐为柠檬酸钾、六偏磷酸钠，质量比1:2。

甜味剂为安赛蜜、阿斯巴甜，质量比2:3。

香料为菠萝香精、芒果香精，质量比2:1。

实施例8护胃蛋白多肽粉的制备

所述一种蛋白多肽粉，主要由以下重量份数的原料制备：

依次将大豆蛋白粉7份，核桃蛋白粉4份，西兰花叶混合粉4份，西兰花根蛋白粉4份，西兰花种子芽粉3份，酿酒酵母tlj2016发酵液混合蛋白粉2份加入V型混合罐，并加入混合蛋白粉质量体积百分比75％(m/v)的纯净水，均匀混合12min，搅拌转速70rpm，加热至85℃，保温25min，得到混合乳液；

胶磨；将所述混合乳液经过三次胶磨处理，每次胶磨时间22min；

过滤：将经胶磨后混合乳液，利用管道式过滤机过滤杂质，压力设置0.3MPa；

均质：利用高压均质机，在43MPa条件下，将经过滤后的混合乳液进行均质细化，均质时间25min；

酶解：调整经均质后的混合乳液pH至8.2，添加质量体积千分比为4‰(m/v)碱性蛋白酶，搅拌，每10分钟检测一次pH，当pH下降到7.3后，继续向其中添加质量体积千分比为3‰(m/v)木瓜蛋白酶、4‰(m/v)风味蛋白酶，全程控温55℃，45rpm搅拌，酶解时间：40min；

灭酶灭菌：升温至100℃保温6min；

发酵：向经灭酶灭菌的混合乳液中添加质量百分比为2％(m/v)葡萄糖，0.2％(m/v)的营养盐，0.2％(m/v)乳酸菌粉，33℃静置培养9h后，按接种量2％(v/v)接入酿酒酵母tlj2016种子液，转速为120rpm，继续培养8h，发酵结束，得到发酵混合乳液；

浓缩：在43℃条件下，低温真空浓缩发酵混合乳液至固含量为30％(m/v)，得到发酵混合浓缩乳液。

调配：按质量百分比，向所述发酵混合浓缩乳液中加入0.03％甜味剂，0.03％香料，0.4％麦芽糊精。

喷雾干燥：设置进风温度153℃，出风温度73℃，维持物料温度小于60℃。

灌装：无菌灌装、密封、包装即得蛋白多肽粉。

乳酸菌为双歧杆菌、奶酪乳杆菌、瑞士乳杆菌，质量比1:2:1。

酵母种子液与酵母发酵混合蛋白粉制备方法中的种子液相同；

营养盐为三聚磷酸钠、焦磷酸钠，质量比1:2。

甜味剂为阿斯巴甜。

香料为柠檬香精、柑橘香精、菠萝香精，质量比2:1:1。

实施例9护胃蛋白多肽粉的制备

依次将大豆蛋白粉8份，核桃蛋白粉6份，西兰花叶混合粉6份，西兰花根蛋白粉5份，西兰花种子芽粉4份，酵母发酵混合蛋白粉3份加入V型混合罐，并加入混合蛋白粉质量体积百分比80％(m/v)的纯净水，均匀混合18min，搅拌转速80rpm，加热至85度，保温25min，得到混合乳液；

胶磨；将所述混合乳液经过三次胶磨处理，每次胶磨时间28min；

过滤：将经胶磨后混合乳液，利用管道式过滤机过滤杂质，压力设置0.5MPa；

均质：利用高压均质机，在48MPa条件下，将经过滤后的混合乳液进行均质细化，均质时间35min；

酶解：调整经均质后的混合乳液pH至8.4，添加质量体积千分比为5‰(m/v)碱性蛋白酶，搅拌，每10分钟检测一次pH，当pH下降到7.3后，继续向其中添加质量体积千分比为5‰(m/v)木瓜蛋白酶、5‰(m/v)风味蛋白酶，全程控温55℃，70rpm搅拌，酶解时间：50min；

灭酶灭菌：升温至100℃保温8min；

发酵：向经灭酶灭菌的混合乳液中添加质量百分比为3％(m/v)葡萄糖，0.3％(m/v)的营养盐，0.4％(m/v)乳酸菌粉，35℃静置培养11h后，按接种量4％(v/v)接入酿酒酵母tlj2016种子液，转速为140rpm，继续培养9h，发酵结束，得到发酵混合乳液；

浓缩：在48℃条件下，低温真空浓缩发酵混合乳液至固含量为30％(m/v)，得到发酵混合浓缩乳液。

调配：按质量百分比，向所述发酵混合浓缩乳液中加入0.08％甜味剂，0.08％香料，0.8％麦芽糊精。

喷雾干燥：设置进风温度157℃，出风温度78℃，维持物料温度小于60℃。

灌装：无菌灌装、密封、包装即得蛋白多肽粉。

所述乳酸菌为瑞士乳杆菌。

酵母种子液与酵母发酵混合蛋白粉制备方法中的种子液相同；

营养盐为三聚磷酸钠、柠檬酸钠，质量比1:1。

甜味剂为安赛蜜。

香料为苹果香精。

实施例10蛋白多肽粉溶解性测定

测定方法：可溶性氮的测定：利用凯氏定氮法测定；水解度的测定：邻苯二甲醛(OPA)法测定。

对照组为市售普通蛋白多肽粉，实验组1-5分别对应本发明实施例5-9。

根据凯氏定氮法和邻苯二甲醛(OPA)法测定由实施例4-8获得的蛋白多肽粉以及对照组市售普通蛋白多肽粉的相关参数的比较数值如下表1：

表1蛋白多肽粉溶解性测定

由表1可以看出，对照组于本发明的实验组在蛋白含量上基本持平，但在氮溶指数和蛋白多肽粉水解度具有显著差异，实验组氮溶指数和蛋白多肽粉水解度显著高于对照组，其溶解性较高，从而说明其蛋白质水化作用较为显著，有利于机体的消化吸收。

实施例11护胃蛋白多肽粉抗氧化性能测试

(一)护胃蛋白多肽粉对羟自由基的清除作用：

实验采用Fenton反应体系。在试管中加入6mmol/L FeSO₄ 2mL，不同浓度V_C或待测溶液2mL，6mmol/L H₂O₂溶液2mL，摇匀，静置10min，再加入6mmol/L水杨酸-乙醇2mL反应，37℃温浴30min，于510nm测吸光值。

清除率s＝[A₀-(A_i-A_{i O})]/A₀×100％

式中：A₀为对照,不加蛋白多肽粉；A_i为某浓度时的吸光值；A_{i O}为无显色剂时的该浓度的本底值。

表2为对照品VC，市售蛋白多肽粉以及本发明实施例5制备的蛋白多肽粉冲液对羟自由基的清除率的对照表

表2羟自由基的清除率的对照表

数据表明，本发明的蛋白多肽粉对羟自由基的清除能力显著。且随着蛋白多肽粉浓度的增加而增大。当浓度为16mg/mL时，对羟自由基清除率可达到98.67％，较市售的蛋白多肽粉的清除率显著提高了38.92％，故本发明的蛋白多肽粉具有很强的抗氧化功能。这加大了蛋白多肽粉的食用和药用价值，更为今后蛋白多肽粉的深加工指明了方向，并提供了可靠的参考。

(二)护胃蛋白多肽粉对超氧阴离子(O^2-)的清除作用

参照文章“孟丽媛,王凤舞.西兰花多酚提取工艺及其抗氧化活性研究[J].中国食品学报,2013,13(5):62-68”关于测定样品对超氧阴离子(O^2-)的清除作用的方法：蛋白多肽样品对超氧阴离子(O^2-)的清除作用选取1、2、4、8、16mg/mL蛋白多肽样品溶解液，测定其对超氧阴离子的清除率。

表3超氧阴离子的清除率的对照表

需要说明的是：本发明实施例6-9制备的蛋白多肽粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例12蛋白多肽粉的消化吸收率以及增重的性能试验

选择45日龄的雄性，平均体重为21g昆明种小鼠，随机分为实验组、对照组A、对照组B和氯化钠对照组。实验组为本发明实施例5制备的蛋白多肽粉；对照组A为市售普通蛋白多肽粉(不添加益生菌)；对照组B为市售普通蛋白多肽粉(添加益生菌)；

小鼠每组10只。各组动物均用代谢笼单笼词养。实验小鼠于第1天9：00开始禁食不禁水，12h后进行灌胃，正常对照组和实验组动物分别用配好的浓度为0.1g/ml的蛋白多肽粉，每次1mL，每8h灌胃一次，连续4次。氯化钠对照组小鼠每次只给予相同剂量的氯化钠。收集各组小鼠类便并称量湿重和干重，计算粪便含水量和食物消化吸收率。

计算食物消化吸收率：

实验组、对照组A和对照组B样品浓度为0.1g/ml，每次灌胃1mL，共灌胃4次，每只小鼠的样品摄入量为0.4g。

按以下公式计算样品吸收率：

表4空腹小鼠对蛋白多肽粉的吸收率

由本次实验空腹小鼠对蛋白多肽粉的消化吸收率检测结果可见，实验组、对照组A和对照组B的小鼠摄入样品的量是相同的，实验组小鼠的消化吸收率明显高于对照组A和对照组B，达到92.25％，而对照组A普通蛋白多肽粉的消化吸收率却仅有56.75％，对照组B添加有益生菌，其消化吸收率有所提高，为72.5％，由此，表明本发明的蛋白多肽粉不仅含有大量生物活性物质、消化酶和益生因子，可促进营养物质的消化和吸收。

表5小鼠增重情况

从体重更可以看出，较对照组A和B，实验组的小鼠体重有明显的升高，与初始体重21.03g相比提高了4.40g，平均增长率为20.92％。

较对照组A以及对照组B，实验组的增长率分别提高了12.21％以及11.35％，说明本发明制备的蛋白多肽粉不仅易于小鼠的消化吸收，而且含有丰富的营养和保健物质，可以促进机体的快速生长。

需要说明的是：本发明实施例6-9制备的蛋白多肽粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例13食用蛋白多肽粉总胆固醇的变化

选择50日龄的雄性昆明种小鼠，实验小鼠在实验环境下经6d适应性喂饲后，分成6组用于降血脂实验，每组6只，组间体重经t检验无显著差异。

空白对照组，即自然生长组，只喂普通基础饲料。

高脂模型对照组分为：

高脂饲料组：只喂高脂饲料；

高脂药物组：喂食高脂饲料以及0.01g血脂康/kg·d；

高脂对照组：喂食高脂饲料以及0.5g市售蛋白多肽粉/kg·d；

高脂实验组：喂食高脂饲料以及0.5g本实验实施例5制备蛋白多肽粉/kg·d。

实验开始前，先对空白对照组小鼠喂饲基础饲料10天，与此同时，对高脂模型对照组喂饲高脂饲料10天，以此建立高脂小鼠动物模型后，实验开始。高脂药物组每天早晨经口灌胃血脂康胶囊(配制成悬液)，高脂对照组和高脂实验组分别灌胃两种蛋白多肽粉悬液。30d后每组各取体重均匀的3只小鼠摘眼球取血，采用全自动生化分析仪测定小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)含量。

表6为灌胃30d后小鼠的血清中血脂情况

高血脂是指血中胆固醇(TC)或甘油三酯(TG)过高或高密度脂蛋白胆固醇(HDL－C)过低。从表6可以看出，灌胃样品不同的蛋白多肽粉比较，高脂实验组即食用本发明实施例4中的蛋白多肽粉过程中，血清中TC含量有明显的降低，降幅为38.31％，显著性差异明显(p＜0.01)。

需要说明的是：本发明实施例6-9制备的蛋白多肽粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例14蛋白多肽粉抗疲劳实验

选择50日龄的雄性昆明种小鼠，分为7组，正常饲料喂食时间为早8:00，晚6:00；蛋白粉喂食时间为早8:00。空白对照组为仅喂食正常饲料组；实验对照组为喂食市售普通蛋白多肽粉以及普通饲料；实验组1-5分别对应喂食本实验发明实施例5、6、7、8、9的蛋白多肽粉以及普通饲料。连续灌胃15d后，测定蛋白多肽粉对小鼠乳酸脱氢酶活力的影响。

采用小鼠于-2～2℃水中游泳40min的方式造成疲劳。游泳停止后30min左右，每组取3只体重均匀的小鼠，采血测定乳酸脱氢酶(LDH)活力和血尿素氮(BUN)。

乳酸脱氢酶(LDH)活力测定采用吸光度比色法。参考刘胜辉，臧小平，魏长宾.番石榴中VC的高效液相色谱分析[J].食品科学，2007，28(4):292－296。

血尿素氮(BUN)含量的测定采用酰一肟2硫氨脲法。参考王希希，胡燕，孙轶卓，等.反相高效液相色谱法同时测定血清中5种水溶性维生素[J].四川大学学报:医学版，2010，41(1):158－161。

不同蛋白多肽样品对小鼠乳酸脱氢酶(LDH)活力的影响乳酸积累是导致疲劳的重要原因之一。运动过程中产生的乳酸主要是通过在肝脏中转变成丙酮酸进行代谢的。乳酸脱氢酶(LDH)存在于组织细胞内，其功能是将运动所致肌肉中堆积的乳酸转变成为丙酮酸，减少乳酸在肌肉中的堆积。乳酸脱氢酶是机体运动时代谢调节的重要指标之一。

表7是连续灌胃15d后，蛋白多肽粉对小鼠乳酸脱氢酶活力的影响。可以看出，小鼠游泳后，喂食本发明的蛋白多肽粉组对应的乳酸脱氢酶活力较实验对照对照组，提高了34.30％，明显高于喂食普通市售的蛋白多肽粉的酶活力，从而食用本发明的多肽粉可以加速肌肉中过多乳酸的清除代谢过程，延缓疲劳或加速疲劳的消除，能更有效提高乳酸脱氢酶活力。

表7蛋白多肽粉对小鼠乳酸脱氢酶活力的影响

实施例15蛋白多肽粉贮藏实验

分别将对照组和实验组的蛋白多肽粉密封放置于37℃恒温箱，分别在放置第30、60、90、120天时，测定其中大肠杆菌的MPN值，测定方法参照国家标准：“GB/T 4789.3-2003，食品卫生微生物学检验大肠菌群测定”。

对照组为市售普通蛋白多肽粉(不含防腐剂)；实验组为由实施例5制备的蛋白多肽粉。

由表7可以看出，在蛋白多肽粉放置第60天时，对照组的大肠杆菌的MPN值已经超过了国家标准，而实验组的大肠杆菌MPN值为14.67，依然维持在较低的范围内，未超出国标范围。在放置100天后，更可以明显地看出，对照组的大肠杆菌的MPN值为73.24，已经远远超出了国家标准的范围，而实验组MPN值为26.56，始终维持在国家标准大肠菌MPN值的范围之内。

表8不同储藏时间下的MPN值

需要说明的是：本发明实施例6-9制备的蛋白多肽粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例16蛋白多肽粉的感官品评试验

邀请50名人员对本发明蛋白多肽粉与市售两种同类相同生产日期的蛋白多肽粉进行品评，感官打分，其中专业和非专业人员各25名，男女各半；打分包括外观(20分)、质地(25分)、风味(30分)、口感(25分)四个方面，打分人员独立进行，互不影响，以保证品评结果准确。对品评结果进行了统计，均分值取近似值，保留整数，本发明组为由实施例5制备的蛋白多肽粉，具体见表9：

表9感官品评统计结果

注：同一行内标不同小写字母表示差异显著(P＜0.05)，标不同大写字母表示差异极显著(P＜0.01)，标有相同字母表示差异不显著(P＞0.05)。

以上结果表明，本发明制备的蛋白多肽粉从外观、质地、风味和口感任何一方面都要明显优于市售蛋白多肽粉，特别是外观、风味和口感极好，同时也适合不同年龄段、不同消费层次的消费者食用。

需要说明的是：本发明实施例6-9制备的蛋白多肽粉同样具有上述实验效果，各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。

实施例17西兰花种子芽粉成分的测定

分别测定实验组以及对照组西兰花种子芽粉中的抗坏血酸、花色苷以及萝卜硫素的含量。实验组为按照实施例1制备的西兰花种子芽粉，对照组1为取相同的西兰花种子于室温25℃，清水浸泡2.5h；于25℃条件下发芽，16h光照/8h 黑暗，催芽1d后，以后每6h喷去离子水1次，与实施例1采取同样发芽天数：2d后，将西兰花打浆，同样按照实施例1中，按照西兰花种子芽浆与蒸馏水体积比1:0.5加入蒸馏水，得到西兰花种子芽混合液，向混合液中添加0.03％的复合酶，35℃，酶解20min，得到酶解液，将所述酶解液4500rpm离心10min，去上清，减压浓缩，冷冻干燥，超微粉碎，过100目筛即得花种子芽粉；所述复合酶为纤维素酶、木聚糖酶按质量比3.5：2均匀混合。对照组2为市售的西兰花种子芽粉。

表10西兰花种子芽粉成分测定

抗坏血酸、花色苷作为重要活性物质，具有天然的抗氧化性，由表10可知，实验组的抗坏血酸以及花色苷含量显著高于对照组1以及对照组2，实验组抗坏血酸较对照组分别提高了17.00％以及23.51％；实验组花色苷含量较对照组分别提高了3.63mg·(100g FW)^-1以及3.43mg·(100g FW)^-1。与此同时，萝卜硫素是目前发现的抗癌活性最强的异硫氰酸酯，除了其显著的抗癌功效外，还具有消炎，抑菌，预防心血管疾病等功效，利用本发明方法萌发制备的西兰花种子芽粉中的萝卜硫苷以及萝卜硫素含量显著高于对照组，实验组萝卜硫苷含量较对照组分别提高了20mg·(100g FW)^-1以及25mg·(100g FW)^-1，实验组萝卜硫苷较对照组分别显著提高了140mg·(100g FW)^-1以及170mg·(100g FW)^-1。由此可知，由本发明的西兰花种子芽粉具有全面且显著的抗氧化性兼具抗癌、抗疲劳等性能。利用本发明方法萌发制备的西兰花种子芽粉，可全面激发了种子在发芽过程中的有效成分的合成以及后期提取过程中的有效提取。

Claims (10)

1.一种蛋白多肽粉，其特征在于：主要由以下重量份数的原料制备：

大豆蛋白粉5-10份，核桃蛋白粉3-7份，西兰花叶混合粉3-7份，西兰花根蛋白粉3-6份，西兰花种子芽粉2-5份，酵母发酵混合蛋白粉1-4份，所述酵母为酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)tlj2016，保藏编号为CGMCC No.12789。

2.如权利要求1所述的一种蛋白多肽粉，其特征在于：主要由以下重量份数的原料制备：大豆蛋白粉7-8份，核桃蛋白粉4-6份，西兰花叶混合粉4-6份，西兰花根蛋白粉4-5份，西兰花种子芽粉3-4份，酵母发酵混合蛋白粉2-3份。

3.如权利要求1所述的一种蛋白多肽粉，其特征在于：主要由以下重量份数的原料制备：大豆蛋白粉7.5份，核桃蛋白粉5份，西兰花叶混合粉5份，西兰花根蛋白粉4.5份，西兰花种子芽粉3.5份，酵母发酵混合蛋白粉2.5份。

4.如权利要求1或2或3所述的一种蛋白多肽粉，其特征在于：所述酵母发酵混合蛋白粉制备方法，包括如下步骤：

(1)摇瓶培养

取酵母斜面菌种一环，接入摇瓶中,150-200rpm,28-30℃培养20-25h得酵母种子液；

(2)发酵罐培养

将种子液按3-6％接种量，接入发酵罐中，28-30℃,通气量5-7L/min,罐压0.02-0.04MPa，200-300rpm，恒pH6.0-6.4条件下进行发酵培养，发酵至20-25h时，一次性添加终浓度为20-25mmol/L的L-半胱氨酸，继续发酵25-30h；

(3)发酵液处理

将发酵液4000-5000rpm离心5-15min，分离得到酵母菌体以及酵母发酵液；

(4)酵母蛋白粉的制备

将所述酵母菌体在-20℃条件下预冻2-4h，置于真空机中抽真空1-50Pa，再充注氮气至大气压,预冷至0℃—-20℃,保持1-2h后,抽真空1-50Pa,升温至0℃—15℃,再降温至0℃—-20℃，保持1-2h，再次升温至20-30℃，并快速启用高频振荡壁碎机对酵母进行破壁，破壁循环1-2次，获得破壁酵母液，对破壁酵母液，在70-90℃条件下进行高温自溶；高压喷雾干燥，进风温度：260-300℃，排风温度：60-70℃，料液温度：60℃，最终获得酵母蛋白粉；

(5)发酵液蛋白粉的制备

将发酵液调pH值为8.5～10.0在50℃-60℃进行碱提，碱提同时进行超声，所述超声功率为180-200W，超声时间10-20min，然后离心5-10min，转速4000-5000rpm，取离心沉淀物调pH5.0-6.0，离心、洗涤后冷冻干燥、超微粉碎，得到发酵液蛋白粉；

(6)将所述酵母蛋白粉以及发酵液蛋白粉按照质量比(1-3)：(3-6)混合均匀，最终获得酵母发酵混合蛋白粉。

5.如权利要求4所述的一种蛋白多肽粉，其特征在于：所述西兰花叶混合粉的制备方法，包括如下步骤：

(1)将西兰花叶置于超声波清洗机中于功率200-400W，频率20-30KHz，室温20-30℃超声清洗3-5min，漂洗，沥干，按照料液质量比0.6-1：1向西兰花叶中加入自来水，并粉碎，获得西兰花叶浆，并用3-6层滤布过滤，获得西兰花叶过滤液；向西兰花叶过滤液中加入酵母发酵液，所述西兰花叶过滤液与酵母发酵液体积比为1：1.5-3，搅拌静置后，获得混合酸溶液；

(2)将所述混合酸溶液静置于45-50℃恒温油浴条件下静置1min后，于恒温45-50℃，功率200-300W，微波提取0.5-1min后，，通过红外光源进行红外提取0.5-1min，所述红外光源功率为15-30W；待红外提取后，调整恒温油浴温度35-40℃，调整微波功率350-450W，微波提取0.5-1min后，再进行红外提取，功率：15-30W，时间：0.5-1min；最后，在35-40℃恒温油浴条件下，调整微波功率500-600W，微波提取0.5-1min，用离心机以3000-4000r/mi n的转速离心5-10min，获得沉淀以及上清液，将所述沉淀经蒸馏水洗涤后，冷冻干燥、超微粉碎，得到西兰花叶一阶段提取物；

(3)将上述步骤(1)过滤获得的残渣与步骤(2)离心获得的上清液混合，获得二阶段混合浆，向其中加入质量5-15倍的75％-85％的乙醇溶液，均匀混合，首先于恒温油浴65-75℃，功率400-500W，微波提取5-10min；然后升温至75-85℃，调整功率为500-600W，微波提取5-10min，微波提取的全程同时伴随功率15-30W进行红外辅助提取后，3-6层滤布过滤，得到二阶段过滤液；将所述二阶段过滤液加热回流，温度100℃，时间10-15min，得到回流液，将所述回流液经冷冻干燥、超微粉碎，得到西兰花叶二阶段提取物；

(4)所述西兰花叶一阶段提取物以及西兰花二阶段提取物按照质量比3-6:1-2混合即得西兰花叶混合粉；

所述红外光源的波长为0.6μm-10μm，所述红外光源功率为15-30W，所述红外光源的辐射高度为0.5-1m。

6.如权利要求1所述的一种蛋白多肽粉，其特征在于：所述西兰花根蛋白粉的制备方法，包括如下步骤：

将西兰花根切成0.5-1cm³的正方体，经超高压处理，加压方式：升压速度90-120MPa/min，压箱内温度20-30℃，加压介质为蒸馏水；在250-300MPa的压力下，保压2-4min，待保压结束，在10-20s内瞬时放压；

将经超高压处理的西兰花根经冷冻干燥，超微粉碎，得到一阶段微粉；

将所述一阶段微粉以料液比1∶10-15添加蒸馏水溶解，并将混合液进行脉冲电场处理，脉冲宽度3-8μs，脉冲场强20-45kV/cm、样品流速30-50mL/min、、脉冲时间300-600μs，将脉冲电场处理后的混合液经过8000rpm下离心20-30min得到上清液，将上清液调节pH至4.0-5.0,搅拌静置，6000-8000rpm离心20-40min分离得到沉淀,将沉淀反复水洗和离心分离，冷冻干燥，超微粉碎，得到西兰花根蛋白粉。

7.如权利要求1所述的一种蛋白多肽粉，其特征在于：所述西兰花种子芽粉的制备，具体如下：

将西兰花种子于功率100-300W，频率20-30KHz，室温20-30℃超声清洗1-4min，于室温20-30℃，清水浸泡1-4h；将浸泡后的西兰花种子进行低频高压脉冲，输出频率：0.1-20Hz，脉冲电场的场强：50-150kV/m，脉宽20-70ms，处理时间0.1-2h；将经过低频高压脉冲处理后的西兰花种子进行高压静电处理，脉冲电场场强：50-150kV/m，场强方向竖直向下，处理时间0.1-2h；将经过高压静电处理的西兰花种子浸没于清水中，浸泡1-2h，将浸泡后的西兰花种子放置于铺有滤纸的恒湿培养箱中，温度28-35℃，进行LED红光照射1-4h，光照强度5-20W，通过调节光源高度，使各处理光量子通量密度均保持在80-90μmol·m^-2·s^-1，经红光照射后在黑暗条件下培养发芽0.5-3d，得到西兰花种子芽；将所述西兰花种子芽利用粉碎机粉碎，得到西兰花种子芽浆，将所述西兰花种子芽浆于功率10-30W，红外照射0.1-1min，垂直照射高度10-20cm；待处理后，将西兰花种子芽浆放置于恒温油浴温度35-40℃，调整微波功率350-450W，微波提取0.1-1min后，按照西兰花种子芽浆与蒸馏水体积比1:0.1-1加入蒸馏水，得到西兰花种子芽混合液，向混合液中添加0.01-0.06％的复合酶，30-40℃，酶解10-25min，得到酶解液，将所述酶解液4000-5000rpm离心5-15min，去上清，减压浓缩，冷冻干燥，超微粉碎，过80-100目筛即得花种子芽粉；

所述复合酶为纤维素酶、木聚糖酶按质量比2-5：1-3均匀混合。

8.如权利要求1-7任一所述的一种蛋白多肽粉的制备方法，包括如下步骤：(1)混合：按照配方，依次将所述大豆蛋白粉，核桃蛋白粉，西兰花叶混合粉，西兰花根蛋白粉，酵母发酵混合蛋白粉加入V型混合罐，并加入混合蛋白粉质量体积百分比70-85％的纯净水，均匀混合10-20min，搅拌转速50-100rpm，加热至85度，保温25min，得到混合乳液；

(2)胶磨；将所述混合乳液经过三次胶磨处理，每次胶磨时间20-30min；

(3)过滤：将经胶磨后混合乳液，利用管道式过滤机过滤杂质，压力设置0.2-0.6MPa；

(4)均质：利用高压均质机，在40-50MPa条件下，将经过滤后的混合乳液进行均质细化，均质时间20-40min；

(5)酶解：调整经均质后的混合乳液pH至8.0-8.5，添加质量体积千分比为2-6‰碱性蛋白酶，搅拌，每10分钟检测一次pH，当pH下降到7.3后，继续向其中添加质量体积千分比为2-6‰木瓜蛋白酶、2-6‰风味蛋白酶，全程控温55℃，30-80rpm搅拌，酶解时间：20-40min；

(6)灭酶灭菌：升温至100℃保温5-10min；

(7)发酵：向经灭酶灭菌的混合乳液中添加质量百分比为1-4％葡萄糖，0.1-0.4％的营养盐，0.1-0.5％乳酸菌粉，30-37℃静置培养8-12h后，按接种量1-5％接入酵母种子液，转速为100-150rpm，继续培养8-10h，发酵结束，得到发酵混合乳液；

(8)浓缩：在40-50℃条件下，低温真空浓缩发酵混合乳液至固含量为30％，得到发酵混合浓缩乳液；

(9)调配：按质量百分比，向所述发酵混合浓缩乳液中加入0.004％～0.1％甜味剂，0.01％～0.1％香料，0.3％～1.0％麦芽糊精；

(10)喷雾干燥：设置进风温度150-160℃，出风温度70-80℃，维持物料温度小于60℃；

(11)灌装：无菌灌装、密封、包装即得蛋白多肽粉。

9.如权利要求8所述的一种蛋白多肽粉的制备方法，其特征在于：

所述乳酸菌为保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、双歧杆菌、奶酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌中的一种或几种的混合物；

所述营养盐为三聚磷酸钠、柠檬酸钠、柠檬酸钾、六偏磷酸钠和焦磷酸钠中的一种或多种；

所述甜味剂为甜菊糖、安赛蜜、阿斯巴甜、蔗糖中的一种或几种；

所述香料为柠檬香精、柑橘香精、菠萝香精、苹果香精、芒果香精、百香果香精中的一种或几种的混合物。

10.如权利要求1-9任一所述的一种蛋白多肽粉的应用。