CN105852077A - 一种复合真菌及益生菌功能性食品 - Google Patents

一种复合真菌及益生菌功能性食品 Download PDF

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Abstract

本发明属于保健食品领域,具体涉及一种复合真菌及益生菌功能性食品。该功能性食品由以下重量份数的原料组成:黑木耳提取物50‑80份,银耳提取物50‑80份,灵芝提取物30‑50份,猴头菇多糖30‑50份,低聚果糖5‑10份,小麦纤维5‑10份,大豆纤维5‑8份,茶多酚0.01‑0.03份,麦精10‑50份,植物乳杆菌粉剂10‑20份。本发明所提供的多糖提取方法使得多糖提取率得到提高,使产品具有较好的提高免疫力的效果,并且获得的产品具有较好的降解胆固醇的功效。

Description

一种复合真菌及益生菌功能性食品
技术领域:
本发明属于营养保健食品领域,具体涉及一种复合真菌及益生菌功能性食品。
背景技术:
木耳性甘、平,无毒。能补气血,凉血止血,润肺益胃,润燥利肠,舒筋活络,轻身强志。治疗血虚气亏、肺虚咳嗽、产后虚弱等症。黑木耳含有人体必须的八种氨基酸和维生素,具有较高的营养价值和一定的药用价值。黑木耳中含有丰富的胶质,对人体消化系统有良好的清润作用,具有清食道,洗肠,润肺,减少血液凝块,缓和冠状动脉粥状硬化,降低血栓的作用。木耳子实体中含酸性粘多糖,有降血糖、降血脂、抗衰老、抗溃疡、抗放射、抗血栓形成、提高机体免疫功能、增强机体抗病能力等功效。
银耳又称白木耳,古为宫庭食品,是我国传统的滋补品,每100g干品中含蛋白质5.0-6.6g、脂肪0.6-3.0g、碳水化合物68-78g、粗纤维1.0-2.6g。具有强精补肾、强肺、生津止咳、降火、润肠益胃、补气和血、强壮身体、补脑提神、美容嫩肤、延年益寿之功效。银耳多糖是银耳的最主要活性成份,对老年慢性支气管炎、肺源性心脏病有显著疗效,还能保护肝脏和提高机体对原子能辐射的防护能力,促进蛋白质和核酸的合成及抗癌、抗衰老等。也是一种延年益寿的滋补剂。
真菌多糖又称多聚糖,是生物有机体内普遍存在的一类生物大分子,不仅参与组织细胞骨架的构成,而且是多种内源性生物活性分子的重要组成成分。有一定的调节机体免疫功能的作用,其作用是多途径、多环节、多靶点的,如促进免疫细胞增殖与分化,分泌各种淋巴因子,调节神经-内分泌-免疫调节网络(NIM)的平衡等。
真菌多糖对细胞有着极强的修复作用。服用真菌多糖保健食品,能及时补充细胞间质中缺乏的多糖等物质,使受损的细胞得到及时的修复,达到保持细胞健康、延长细胞寿命、从而实现人体健康的目的。上海医科大学李瑞等试验发现,真菌多糖能显著提高细胞膜的流动性和封闭度,衰老的细胞用真菌多糖培养后,封闭度提高11%,流动性提高32%,细胞膜流动性、封闭性的提高,表明细胞生理功能得到提高。
现代科技表明,真菌多糖是食用菌中所含的最重要的药效成分。是一种β-型的多糖,具有广泛的药理活性。灵芝、冬虫夏草、木耳、银耳、香菇、猴头菇、白灵菇、竹黄、云芝、鸡腿蘑、松茸、桑黄等食用菌,都含有真菌多糖。
中国发明专利201110407414.2公布了一种具有保健作用的真菌营养液,该营养液以香菇、灰树花、猴头菇、云芝等真菌为主要原料,辅以低聚木糖、异麦芽酮糖醇、牛磺酸、赖氨酸、维生素E、黄原胶和水等营养素加工而成,原料配伍科学,协同作用,具有提高人体免疫力和促进机体胃粘膜损伤修复双功能保健作用。
益生菌,是一类对宿主有益的活性微生物,是定植于人体肠道、生殖系统内,能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称。其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。
调节肠胃功能紊乱是益生菌最广为人知的功能之一,除此之外,益生菌还具有产生营养物质、抵抗细菌病毒的感染以及预防治疗某些疾病的功能。本发明将提供一种添加有益生菌的复合真菌多糖组合物,兼具真菌及多糖提高免疫力的功能以及益生菌的保健功效,改善目前保健品效果单一、复合功能不理想的问题。
发明内容:
为了解决上述问题,本发明提供一种复合真菌及益生菌功能性食品,由以下重量份数的原料组成:
黑木耳提取物50-80份,银耳提取物50-80份,灵芝提取物30-50份,猴头菇多糖30-50份,低聚果糖5-10份,小麦纤维5-10份,大豆纤维5-8份,茶多酚0.01-0.03份,麦精10-50份,植物乳杆菌粉剂10-20份。
所述黑木耳提取物的制备方法如下:
(1)取黑木耳,装入有0.3-0.5%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min,然后于-21—-25℃冷冻10-30min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的黑木耳与水以1:3-5(m:v)的比例混合,调整温度为40-60℃,pH为5.0-7.0,加入黑木耳子实体质量0.1-0.3%的纤维素酶酶解1-2.5小时后调整温度到80-95℃保持2-5分钟,调整温度到50℃、随后添加黑木耳子实体质量0.1-0.3%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度40-50℃、pH值6-7,酶解时间1-2小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,喷雾干燥,即得黑木耳提取物;
所述黑木耳子实体粉碎至粒径在0.5mm以下;
所述银耳提取物的制备方法同黑木耳提取物;
所述灵芝提取物制备方法如下:
灵芝粉碎,过40-50目筛后,添加灵芝3-6倍重量无水乙醇浸渍提取,控制温度30-45℃,2-4小时后调整温度为55-60℃1-2小时,提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物;乙醇提取后的灵芝残渣中添加75-85℃热水,热水添加量为灵芝残渣重量的2-4倍,处理时间30-50分钟,连续提取2-3次,将提取液真空浓缩后喷雾干燥,得到热水提取物;将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎,过60目筛,即得灵芝提取物;
所述猴头菇多糖的制备方法如下:
(1)取猴头菇子实体,装入有0.3-0.5%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min,然后于-21—-25℃冷冻10-30min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的猴头菇与水以1:3-5(m:v)的比例混合,调整温度为40-60℃,pH为5.0-7.0,加入猴头菇子实体质量0.1-0.3%的纤维素酶酶解1-2.5小时后调整温度到80-95℃保持2-5分钟,调整温度到50℃、随后添加猴头菇子实体质量0.1-0.3%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度40-50℃、pH值6-7,酶解时间1-2小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,添加浓缩液3倍体积的95%乙醇,4℃下醇析24h,弃去上清液,再加入与初始浓缩液等体积的无水乙醇静置30min后,弃去上清液,沉淀洗涤3次,喷雾干燥,即得猴头菇多糖;
所述猴头菇子实体粉碎至粒径在0.5mm以下;
所述植物乳杆菌粉剂由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)tlj-2015制备,该菌已于2015年11月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏号为CGMCC NO.11763,保藏地址为:中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号,中国科学院微生物研究所,邮编:100101;
所述植物乳杆菌粉剂中活菌含量为:7×1012-9×1012cfu/g;
所述植物乳杆菌粉剂的制备方法如下:
(1)取斜面上的植物乳杆菌CGMCC NO.11763一环,接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为150g/L)培养基的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养12-16h,使菌体处于对数生长中期;
(2)将对数期的菌种接入发酵培养基中,接种量为10-15%,35-38℃下100-200rpm培养8-12小时,溶氧控制10%(通气0.5L/min),之后再厌氧培养60-70小时;发酵完毕发酵液静置沉淀、离心得到沉淀物,然后添加沉淀物质量1倍的载体,混合均匀,50℃流化床干燥即得植物乳杆菌粉剂,载体重量份数组成为:酸奶粉25份,糊精12份。
所述发酵培养基组成如下:蛋白胨10-12g,牛肉膏10-12g,酵母膏5-8g,柠檬酸氢二铵2-4g,葡萄糖20-25g,吐温80 1-2mL,乙酸钠5-7g,磷酸氢二钾2-3g,硫酸镁0.58-0.6g,硫酸锰0.25-0.3g,胆固醇100-120mg,中草药粉剂5-8g,蒸馏水1 000mL,pH 6.2~6.6;
所述胆固醇的添加方法为:先用无水乙醇溶解胆固醇,配制浓度为10-12mg/mL的胆固醇溶液,然后按一定比例添加到培养基中,使胆固醇最终浓度为100-120μg/mL;
所述中草药粉剂的制备方法如下:
称取五味子10-20份;党参10-15份;山楂10-20份;分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下,然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水,控制温度45-60℃保持2~4h,加入混合酶制剂进行酶解,调节pH值为6-7,酶解2-4h,最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物,110W功率下超声萃取0.5~1.5h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂;
所述混合酶添加量为混合物料总重量的5-10%;
所述混合酶的重量份数组成为:木聚糖酶15-20份,β-淀粉酶10-15份,果胶酶10-15份,酸性蛋白酶10-15份,酸性磷酸酶5-10份;
所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1-2。
所述复合真菌及益生菌功能性食品的制备方法为:按本领域常规方法加工为片剂、粉剂、颗粒剂、软胶囊、硬胶囊等,直接服用,也可以作为食品原料使用。
有益效果:
1、本发明所提供的复合真菌及益生菌功能性食品中除含有黑木耳、银耳、灵芝、猴头菇多糖外还含有植物乳杆菌CGMCC NO.11763,该菌株①降解亚硝酸盐速度快,分解能力达到10.9mg/h/kg,可有效的分解人们由于饮食不当而摄入的亚硝酸盐;②该菌对胆固醇降解率高,可达到64.76%,尤其适用于肥胖人群及三高患者;③该菌黏附能力高,测定的自凝集率为95.71%,可有效地定植于胃肠道系统中,充分发挥其生理活性作用。
2、本发明所提供的植物乳杆菌培养方法中,发酵培养基中添加有中药成分五味子、党参和山楂,这三种重要成分的添加可有效提高植物乳杆菌的耐酸耐胆盐能力,从而提高其在人体肠道中发挥的作用。
3、本发明所提供的植物乳杆菌培养方法中,发酵培养基中以可溶性形式添加有胆固醇,发酵完成后可有效提高菌株降解胆固醇的能力。由于本发明提供的产品中添加有所述植物乳杆菌,使得本发明除了具有提高人体免疫力能力外,还具有较好的降解胆固醇的能力。
具体实施方式:
实施例1:一种复合真菌及益生菌功能性食品
一种复合真菌及益生菌功能性食品,由以下重量份数的原料组成:
黑木耳提取物50份,银耳提取物50份,灵芝提取物30份,猴头菇多糖30份,低聚果糖5份,小麦纤维5份,大豆纤维5份,茶多酚0.01份,麦精10份,植物乳杆菌粉剂10份。
所述黑木耳提取物的制备方法如下:
(1)取黑木耳,装入有0.3%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5min,然后于-21℃冷冻10min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的黑木耳与水以1:3(m:v)的比例混合,调整温度为40℃,pH为5.0,加入黑木耳子实体质量0.1%的纤维素酶酶解1小时后调整温度到80℃保持2分钟,调整温度到50℃、随后添加黑木耳子实体质量0.1%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度40℃、pH值6,酶解时间1小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,喷雾干燥,即得黑木耳提取物;
所述黑木耳子实体粉碎至粒径在0.5mm以下;
所述银耳提取物的制备方法同黑木耳提取物;
所述灵芝提取物制备方法如下:
灵芝粉碎,过40目筛后,添加灵芝3倍重量无水乙醇浸渍提取,控制温度30℃,2小时后调整温度为55℃1小时,提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物;乙醇提取后的灵芝残渣中添加75℃热水,热水添加量为灵芝残渣重量的2倍,处理时间30分钟,连续提取2次,将提取液真空浓缩后喷雾干燥,得到热水提取物;将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎,过60目筛,即得灵芝提取物;
所述猴头菇多糖的制备方法如下:
(1)取猴头菇子实体,装入有0.3%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5min,然后于-21℃冷冻10min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的猴头菇与水以1:3(m:v)的比例混合,调整温度为40℃,pH为5.0,加入猴头菇子实体质量0.1%的纤维素酶酶解1小时后调整温度到80℃保持2分钟,调整温度到50℃、随后添加猴头菇子实体质量0.1%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度40℃、pH值6,酶解时间1小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,添加浓缩液3倍体积的95%乙醇,4℃下醇析24h,弃去上清液,再加入与初始浓缩液等体积的无水乙醇静置30min后,弃去上清液,沉淀洗涤3次,喷雾干燥,即得猴头菇多糖;
所述猴头菇子实体粉碎至粒径在0.5mm以下;
所述植物乳杆菌粉剂的制备方法如下:
(1)取斜面上的植物乳杆菌CGMCC NO.11763一环,接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为150g/L)培养基的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养12h,使菌体处于对数生长中期;
(2)将对数期的菌种接入发酵培养基中,接种量为10%,35℃下100rpm培养8小时,溶氧控制10%(通气0.5L/min),之后再厌氧培养60小时;发酵完毕发酵液静置沉淀、离心得到沉淀物,然后添加沉淀物质量1倍的载体,混合均匀,50℃流化床干燥即得植物乳杆菌粉剂,载体重量份数组成为:酸奶粉25份,糊精12份。
所述发酵培养基组成如下:蛋白胨10g,牛肉膏10g,酵母膏5g,柠檬酸氢二铵2g,葡萄糖20g,吐温80 1mL,乙酸钠5g,磷酸氢二钾2g,硫酸镁0.58g,硫酸锰0.25g,胆固醇100mg,中草药粉剂5g,蒸馏水1 000mL,pH6.2;
所述胆固醇的添加方法为:先用无水乙醇溶解胆固醇,配制浓度为10mg/mL的胆固醇溶液,然后按一定比例添加到培养基中,使胆固醇最终浓度为100μg/mL;
所述中草药粉剂的制备方法如下:
称取五味子10份;党参10份;山楂10份;分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下,然后于容器中均匀混合并添加3倍重量的水,控制温度45℃保持2h,加入混合酶制剂进行酶解,调节pH值为6,酶解2h,最后添加混合物料0.5倍重量乙醇和丙醇的混合物,110W功率下超声萃取0.5h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂;
所述混合酶添加量为混合物料总重量的5%;
所述混合酶的重量份数组成为:木聚糖酶15份,β-淀粉酶10份,果胶酶10份,酸性蛋白酶10份,酸性磷酸酶5份;
所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1。
实施例2一种复合真菌及益生菌功能性食品
一种复合真菌及益生菌功能性食品,由以下重量份数的原料组成:
黑木耳提取物80份,银耳提取物80份,灵芝提取物50份,猴头菇多糖50份,低聚果糖10份,小麦纤维10份,大豆纤维8份,茶多酚0.03份,麦精50份,植物乳杆菌粉剂20份。
所述黑木耳提取物的制备方法如下:
(1)取黑木耳,装入有0.5%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗10min,然后于-25℃冷冻30min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的黑木耳与水以1:5(m:v)的比例混合,调整温度为60℃,pH为7.0,加入黑木耳子实体质量0.3%的纤维素酶酶解2.5小时后调整温度到95℃保持5分钟,调整温度到50℃、随后添加黑木耳子实体质量0.3%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度50℃、pH值7,酶解时间2小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,喷雾干燥,即得黑木耳提取物;
所述黑木耳子实体粉碎至粒径在0.5mm以下;
所述银耳提取物的制备方法同黑木耳提取物;
所述灵芝提取物制备方法如下:
灵芝粉碎,过50目筛后,添加灵芝6倍重量无水乙醇浸渍提取,控制温度45℃,4小时后调整温度为60℃2小时,提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物;乙醇提取后的灵芝残渣中添加85℃热水,热水添加量为灵芝残渣重量的4倍,处理时间50分钟,连续提取3次,将提取液真空浓缩后喷雾干燥,得到热水提取物;将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎,过60目筛,即得灵芝提取物;
所述猴头菇多糖的制备方法如下:
(1)取猴头菇子实体,装入有0.5%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗10min,然后于-25℃冷冻10-30min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的猴头菇与水以1:5(m:v)的比例混合,调整温度为60℃,pH为7.0,加入猴头菇子实体质量0.3%的纤维素酶酶解2.5小时后调整温度到95℃保持5分钟,调整温度到50℃、随后添加猴头菇子实体质量0.3%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度50℃、pH值7,酶解时间2小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,添加浓缩液3倍体积的95%乙醇,4℃下醇析24h,弃去上清液,再加入与初始浓缩液等体积的无水乙醇静置30min后,弃去上清液,沉淀洗涤3次,喷雾干燥,即得猴头菇多糖;
所述猴头菇子实体粉碎至粒径在0.5mm以下;
所述植物乳杆菌粉剂的制备方法如下:
(1)取斜面上的植物乳杆菌CGMCC NO.11763一环,接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为150g/L)培养基的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养16h,使菌体处于对数生长中期;
(2)将对数期的菌种接入发酵培养基中,接种量为15%,38℃下200rpm培养12小时,溶氧控制10%(通气0.5L/min),之后再厌氧培养70小时;发酵完毕发酵液静置沉淀、离心得到沉淀物,然后添加沉淀物质量1倍的载体,混合均匀,50℃流化床干燥即得植物乳杆菌粉剂,载体重量份数组成为:酸奶粉25份,糊精12份。
所述发酵培养基组成如下:蛋白胨12g,牛肉膏12g,酵母膏8g,柠檬酸氢二铵4g,葡萄糖25g,吐温80 2mL,乙酸钠7g,磷酸氢二钾3g,硫酸镁0.6g,硫酸锰0.3g,胆固醇120mg,中草药粉剂8g,蒸馏水1000mL,pH 6.6;
所述胆固醇的添加方法为:先用无水乙醇溶解胆固醇,配制浓度为12mg/mL的胆固醇溶液,然后按一定比例添加到培养基中,使胆固醇最终浓度为120μg/mL;
所述中草药粉剂的制备方法如下:
称取五味子20份;党参15份;山楂20份;分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下,然后于容器中均匀混合并添加6倍重量的水,控制温度60℃保持4h,加入混合酶制剂进行酶解,调节pH值为7,酶解4h,最后添加混合物料3倍重量乙醇和丙醇的混合物,110W功率下超声萃取1.5h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂;
所述混合酶添加量为混合物料总重量的10%;
所述混合酶的重量份数组成为:木聚糖酶20份,β-淀粉酶15份,果胶酶15份,酸性蛋白酶15份,酸性磷酸酶10份;
所述乙醇和丙醇的质量比例为1:2。
实施例3:一种复合真菌及益生菌功能性食品
一种复合真菌及益生菌功能性食品,由以下重量份数的原料组成:
黑木耳提取物65份,银耳提取物65份,灵芝提取物40份,猴头菇多糖40份,低聚果糖8份,小麦纤维8份,大豆纤维7份,茶多酚0.02份,麦精30份,植物乳杆菌粉剂15份。
所述黑木耳提取物的制备方法如下:
(1)取黑木耳,装入有0.4%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗8min,然后于-23℃冷冻20min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的黑木耳与水以1:4(m:v)的比例混合,调整温度为50℃,pH为6.0,加入黑木耳子实体质量0.2%的纤维素酶酶解2小时后调整温度到90℃保持3分钟,调整温度到50℃、随后添加黑木耳子实体质量0.2%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度45℃、pH值6,酶解时间2小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,喷雾干燥,即得黑木耳提取物;
所述黑木耳子实体粉碎至粒径在0.5mm以下;
所述银耳提取物的制备方法同黑木耳提取物;
所述灵芝提取物制备方法如下:
灵芝粉碎,过45目筛后,添加灵芝5倍重量无水乙醇浸渍提取,控制温度40℃,3小时后调整温度为60℃1小时,提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物;乙醇提取后的灵芝残渣中添加80℃热水,热水添加量为灵芝残渣重量的3倍,处理时间40分钟,连续提取3次,将提取液真空浓缩后喷雾干燥,得到热水提取物;将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎,过60目筛,即得灵芝提取物;
所述猴头菇多糖的制备方法如下:
(1)取猴头菇子实体,装入有0.4%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min,然后于-23℃冷冻20min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的猴头菇与水以1:4(m:v)的比例混合,调整温度为50℃,pH为6.0,加入猴头菇子实体质量0.2%的纤维素酶酶解2小时后调整温度到90℃保持2-5分钟,调整温度到50℃、随后添加猴头菇子实体质量0.2%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度45℃、pH值7,酶解时间2小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,添加浓缩液3倍体积的95%乙醇,4℃下醇析24h,弃去上清液,再加入与初始浓缩液等体积的无水乙醇静置30min后,弃去上清液,沉淀洗涤3次,喷雾干燥,即得猴头菇多糖;
所述猴头菇子实体粉碎至粒径在0.5mm以下;
所述植物乳杆菌菌粉的制备方法如下:
(1)取斜面上的植物乳杆菌CGMCC NO.11763一环,接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为150g/L)培养基的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养12-16h,使菌体处于对数生长中期;
(2)将对数期的菌种接入发酵培养基中,接种量为12%,37℃下150rpm培养10小时,溶氧控制10%(通气0.5L/min),之后再厌氧培养65小时;发酵完毕发酵液静置沉淀、离心得到沉淀物,然后添加沉淀物质量1倍的载体,混合均匀,50℃流化床干燥即得植物乳杆菌粉剂,载体重量份数组成为:酸奶粉25份,糊精12份。
所述发酵培养基组成如下:蛋白胨11g,牛肉膏11g,酵母膏6g,柠檬酸氢二铵3g,葡萄糖22g,吐温80 1.5mL,乙酸钠6g,磷酸氢二钾2.5g,硫酸镁0.6g,硫酸锰0.25g,胆固醇110mg,中草药粉剂6g,蒸馏水1 000mL,pH 6.5;
所述胆固醇的添加方法为:先用无水乙醇溶解胆固醇,配制浓度为11mg/mL的胆固醇溶液,然后按一定比例添加到培养基中,使胆固醇最终浓度为110μg/mL;
所述中草药粉剂的制备方法如下:
称取五味子15份;党参12份;山楂15份;分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下,然后于容器中均匀混合并添加5倍重量的水,控制温度50℃保持3h,加入混合酶制剂进行酶解,调节pH值为6.5,酶解3h,最后添加混合物料2倍重量乙醇和丙醇的混合物,110W功率下超声萃取1h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂;
所述混合酶添加量为混合物料总重量的8%;
所述混合酶的重量份数组成为:木聚糖酶18份,β-淀粉酶12份,果胶酶12份,酸性蛋白酶12份,酸性磷酸酶8份;
所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1.5。
实施例4效果实验
1、植物乳杆菌CGMCC NO.11763的培养
(1)取斜面上的植物乳杆菌CGMCC NO.11763一环,接入装有50mL培养基MRS(无琼脂)(葡萄糖浓度为150g/L)培养基的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养12h左右,使菌体处于对数生长中期。
(2)将对数期的菌种接入装有发酵培养基的5L发酵罐中。接种量为10%,37℃下100rpm培养8小时,对数前期溶氧控制10%(通气0.5L/min),后期厌氧培养63小时。
发酵培养基:
①:蛋白胨11g,牛肉膏11g,酵母膏6g,柠檬酸氢二铵3g,葡萄糖22g,吐温801.5mL,乙酸钠6g,磷酸氢二钾2.5g,硫酸镁0.6g,硫酸锰0.25g,胆固醇110mg,中草药粉剂6g,蒸馏水1 000mL,pH 6.5;
②:删去①中的胆固醇;
③:删去①中的中草药粉剂;
2、降解胆固醇能力测定
步骤1中分别以发酵培养基①和②为发酵培养基完成发酵后,分别取1ml发酵液离心并用无菌水洗涤2遍后重悬于1ml无菌水中,分别接种于10mL的MRS胆固醇液体培养基(胆固醇含量0.1mg/ml,pH 6.2)中,37℃的恒温静置分别培养20h、40h、60h备用,取以上培养不同时间的菌液样品各1ml,9000r/min,4℃下离心10min,得到发酵上清液,邻苯二甲醛法测定上清液中胆固醇含量(具体为:取各上清液0.1ml于相应的试管中,加冰醋酸0.3ml,1mg/ml的邻苯二甲醛0.15ml,缓缓加入浓硫酸1.0ml,混合均匀。室温静置10min,于550nm下测吸光值)。每一处理3个重复,以同样方法制作胆固醇标准曲线,计算上清液中胆固醇含量及降解率,结果见表1。可知,CGMCC NO.11763对胆固醇有很好的降解作用,60h小时后,降解率可达到64.76%。并且,添加有胆固醇的培养基所培养出的CGMCC NO.11763降解胆固醇的能力显著提高。
表1对胆固醇的降解情况。
3、耐胆盐实验
步骤1中分别以发酵培养基①和③为发酵培养基完成发酵后,分别取1ml发酵液离心并用无菌水洗涤2遍后重悬于1ml无菌水中,分别接种于含有不同胆盐(含量梯度为0.0%、0.4%、0.6%、1%)的10mL MRS液体培养基(pH=6.4),置于37℃下分别培养0、2、4h,每个处理3个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀,制备稀释度溶液,取0.1ml稀释液于MRS中涂布,于37℃生化培养箱中倒置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录计算平板上的菌数个数。结果见表2。可知该菌在胆盐浓度为1%处理4h后菌的生长量依然达到0.51±0.92×107(cfu/ml),有很好的耐胆盐能力,而采用添加有中草药成分的培养基,其耐胆盐能力有效提高。
表2耐胆盐能力检测(×107cfu/ml)
4、耐酸实验
步骤1中分别以发酵培养基①和③为发酵培养基完成发酵后,分别取1ml发酵液离心并用无菌水洗涤2遍后重悬于1ml无菌水中,分别接种于不同pH值(pH梯度为1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0)的10mL MRS液体培养基,置于37℃下分别培养0、2、4h,每一处理3个重复。各取1ml样品菌液于9ml生理盐水中混匀,制备稀释溶液,取0.1ml稀释液于MRS中涂布,于37℃生化培养箱中倒置培养48小时(每个稀释度做3个平行)记录平板上的菌落个数。结果见表3。说明该菌具有很强的耐酸能力,且添加有中草药成份的培养基能有效提高该菌的耐酸性。
表3耐酸能力检测(×10 7cfu/ml)
5、亚硝酸盐分解实验
步骤1中以①培养基,发酵过程中根据亚硝酸盐的消耗速率流加20g/L的亚硝酸钠溶液,培养2-3天。发酵结束后,计算发酵过程植物乳杆菌CGMCC NO.11763对亚硝酸钠的降解速率。结果发现:在该条件下,CGMCC NO.11763对亚硝酸钠的降解速率可以达到653mg/h/L。
6、黏附能力测定
培养CGMCC NO.11763(MRS液体培养基)、大肠杆菌DH5α(LB液体培养基)24h得发酵液,分别置于3000r/min、4℃下离心10min,收集菌泥,分别用pH=7.0的无菌磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤菌泥2次(即在菌落中加入PBS,震荡混合均匀后,置于3000r/min、4℃下离心10min,收集菌体)。自凝集率(%):用无菌的PBS将菌泥CGMCC NO.11763制成在波长600nm处的吸光值为0.4±0.1(A0)的悬浮菌液及菌悬液,静置24h后测定吸光值A24,自凝集率(%)公式为(A0—A24)/A0。。测定结果见表5,可知CGMCC NO.11763的自凝集率为95.71%,有很强的黏附能力。
表5黏附能力表
类别 A0平均值±s A24平均值±s 凝集率%
11763磷酸盐混合液 0.5131±0.0045 0.0220±0.0369 95.71
实施例5本发明的益生性试验
将本发明实施例3制备的产品,用无菌水制备成活菌数为2×1010CFU/mL的益生菌溶液,于4℃保存备用;
1、模拟胃液及肠液的耐受试验:
取100g/L的盐酸16.4mL加蒸馏水稀释,使pH值分别为1.5、2.5和3.5,取100mL稀盐酸溶液,分别加入1g胃蛋白酶,使其充分溶解,得模拟胃液,微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。
取磷酸二氢钾6.8g,加水500mL使溶解,用0.1moL/L氢氧化钠溶液调节pH值至6.8;另取胰蛋白酶10g,加水100mL使溶解,将两液混合后,加水稀释至1000ml,得模拟肠液,微孔滤膜除菌(0.22μm)备用。
取1mL保存好的益生菌溶液加入到9mL的模拟胃液中(即十倍逐级稀释),并迅速在振荡器上充分混匀,然后置于30-45℃静置培养2-4h。分别在1h、2h、3h、4h的时候取出培养液并立即计数残存活菌数,与原活菌数进行比较,结果表明,活菌存活率为97%。然后取在人工胃液中消化不同时间的培养液各1mL,分别接种于9mL pH值为6.8的人工肠液中,置于30-45℃静置培养2-4h,并分别在0、3、6、24h取样,测定其活菌数,与原活菌数进行比较,结果表明活菌存活率为99%。
2、模拟胆盐的耐受试验:用胰液素制成1g/L的溶液,并在溶液中加入0.8%的猪胆盐,用10%的NaOH调整pH为8.0,然后用0.45μm微滤膜过滤并除菌。将0.5mL保存好的益生菌溶液接种到4.5mL模拟胆盐中,培养24h后得到培养液,计数残存的活菌数。将培养液在灭菌生理盐水中十倍逐级稀释至10-8,并用MRS倾注,然后置于35℃静置培养24h。
结果表明活菌存活率为99%。
以上试验结果表明,本发明营养保健食品中的益生菌益生性(耐pH性、耐胆盐)较强,非常适合人体胃肠环境,在模拟胃肠环境中存活率大,可有效改善胃肠功能。
需要说明的是:本发明实施例1-3制备的营养保健食品同样具有上述实验效果,各实施例之间及与上述实验效果差异性不大。
实施例6本发明对降胆固醇效果实验
1.实验材料
1.1实验动物及饲料
昆明种小鼠,♂性,体重(20±2)g,由广州中医药大学实验动物中心提供;
普通饲料为市售小鼠饲料;高脂饲料由为60%普通饲料+10%猪油+10%奶粉+10%蛋黄粉+7%白糖+2%花生+0.5%盐+0.5%麻油;
1.2试剂
总胆固醇试剂盒(TCH,浙江东欧诊断产品有限公司)
饲喂试剂配置:
样品液①:2g实施例3产品加入50mL超纯水,振荡混匀,即得;
样品液②:实施例3产品制备过程中CGMCC NO.11763发酵培养基去除胆固醇,其他条件不变制备的产品2g加入50mL超纯水,振荡混匀,即得
对照液:纯水;
2.方法
2.1小鼠的分组与饲养
小鼠适应性喂养5天后,随机分为2组:空白组、实验组,每组20只;饲喂75天;
空白组:高脂饲料,给纯水,体积与样品液溶液体积相同;
实验组①:高脂饲料,给样品液①800mg/kg.d;
实验组②:高脂饲料,给样品液②800mg/kg.d;末次给药后,禁食不禁水12小时,眼眶取血制备血清,依试剂盒说明书方法测定总胆固醇(TC);实验结果如下:
组别 实验前 75天
空白组 2.32±0.25 3.15±0.32
实验组① 2.31±0.12 2.37±0.27
实验组② 2.32±0.31 2.56±0.33
由实验结果可知,实验前后,实验组和对照组小鼠血清中胆固醇差异显著,本发明所述产品对降低血清中胆固醇含量具有明显的效果。
实施例7本发明产品提高免疫力的效果实验
本产品实施例3产品在冬季选择北京地区100位年龄在60-75岁体弱易感冒的老年人连续食用1月,每日食用5克,以食用前和食用后效果比较,结果见表1,结果表明本产品对提高老年人抵抗力、增强身体免疫力有明显效果,产品有良好的食用和营养滋补功效。同时能够显著提高睡眠质量,改善率达到70%(以有质量睡眠时间为评估依据)许多连续食用本产品老人反映久服效果更佳,全年不感冒,身体状况更好.
表6食用效果对照表

Claims (10)

1.一种复合真菌及益生菌功能性食品,由以下重量份数的原料组成:黑木耳提取物50-80份,银耳提取物50-80份,灵芝提取物30-50份,猴头菇多糖30-50份,低聚果糖5-10份,小麦纤维5-10份,大豆纤维5-8份,茶多酚0.01-0.03份,麦精10-50份,植物乳杆菌粉剂10-20份;
所述植物乳杆菌粉剂由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)tlj-2015制备,保藏号为CGMCC NO.11763。
2.如权利要求1所述的一种复合真菌及益生菌功能性食品,其特征在于,所述黑木耳提取物的制备方法如下:
(1)取黑木耳,装入有0.3-0.5%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min,然后于-21—-25℃冷冻10-30min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的黑木耳与水以1:3-5(m:v)的比例混合,调整温度为40-60℃,pH为5.0-7.0,加入黑木耳子实体质量0.1-0.3%的纤维素酶酶解1-2.5小时后调整温度到80-95℃保持2-5分钟,调整温度到50℃、随后添加黑木耳子实体质量0.1-0.3%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度40-50℃、pH值6-7,酶解时间1-2小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,喷雾干燥,即得黑木耳提取物;
所述黑木耳子实体粉碎至粒径在0.5mm以下;
所述银耳提取物的制备方法同黑木耳提取物;
所述灵芝提取物制备方法如下:
灵芝粉碎,过40-50目筛后,添加灵芝3-6倍重量无水乙醇浸渍提取,控制温度30-45℃,2-4小时后调整温度为55-60℃1-2小时,提取液浓缩、干燥得到乙醇提取物;乙醇提取后的灵芝残渣中添加75-85℃热水,热水添加量为灵芝残渣重量的2-4倍,处理时间30-50分钟,连续提取2-3次,将提取液真空浓缩后喷雾干燥,得到热水提取物;将上述乙醇提取物和热水提取物合并粉碎,过60目筛,即得灵芝提取物。
3.如权利要求1所述的一种复合真菌及益生菌功能性食品,其特征在于,所述猴头菇多糖的制备方法如下:
(1)取猴头菇子实体,装入有0.3-0.5%碳酸氢钠溶液的超声波清洗机中于200W、40KHz清洗5-10min,然后于-21—-25℃冷冻10-30min,立即进行粉碎;
(2)粉碎后的猴头菇与水以1:3-5(m:v)的比例混合,调整温度为40-60℃,pH为5.0-7.0,加入猴头菇子实体质量0.1-0.3%的纤维素酶酶解1-2.5小时后调整温度到80-95℃保持2-5分钟,调整温度到50℃、随后添加猴头菇子实体质量0.1-0.3%风味蛋白酶进行酶解,酶解温度40-50℃、pH值6-7,酶解时间1-2小时,离心分离获得上清液;
(3)上清液减压浓缩得浓缩液,添加浓缩液3倍体积的95%乙醇,4℃下醇析24h,弃去上清液,再加入与初始浓缩液等体积的无水乙醇静置30min后,弃去上清液,沉淀洗涤3次,喷雾干燥,即得猴头菇多糖;
所述猴头菇子实体粉碎至粒径在0.5mm以下。
4.如权利要求1所述的一种复合真菌及益生菌功能性食品,其特征在于,所述植物乳杆菌粉剂中活菌含量为:7x1012-9x1012cfu/g。
5.如权利要求1所述的一种复合真菌及益生菌功能性食品,其特征在于,所述植物乳杆菌粉剂的制备方法如下:
(1)取斜面上的植物乳杆菌CGMCC NO.11763一环,接入装有50mL培养基MRS培养基的250mL三角瓶中,200rpm,37℃培养12-16h,使菌体处于对数生长中期;
(2)将对数期的菌种接入发酵培养基中,接种量为10-15%,35-38℃下100-200rpm培养8-12小时,溶氧控制10%,之后再厌氧培养60-70小时;发酵完毕发酵液静置沉淀、离心得到沉淀物,然后添加沉淀物质量1倍的载体,混合均匀,50℃流化床干燥即得植物乳杆菌粉剂,载体重量份数组成为:酸奶粉25份,糊精12份。
6.如权利要求5所述的一种复合真菌及益生菌功能性食品,其特征在于,所述发酵培养基组成如下:蛋白胨10-12g,牛肉膏10-12g,酵母膏5-8g,柠檬酸氢二铵2-4g,葡萄糖20-25g,吐温80 1-2mL,乙酸钠5-7g,磷酸氢二钾2-3g,硫酸镁0.58-0.6g,硫酸锰0.25-0.3g,胆固醇100-120mg,中草药粉剂5-8g,蒸馏水1 000mL,pH 6.2~6.6。
7.如权利要求6所述的一种复合真菌及益生菌功能性食品,其特征在于,所述胆固醇的添加方法为:先用无水乙醇溶解胆固醇,配制浓度为10-12mg/mL的胆固醇溶液,然后按一定比例添加到培养基中,使胆固醇最终浓度为100-120μg/mL。
8.如权利要求6所述的一种复合真菌及益生菌功能性食品,其特征在于,所述中草药粉剂的制备方法如下:
称取五味子10-20份;党参10-15份;山楂10-20份;分别将上述中草药粉碎至粒径为2毫米以下,然后于容器中均匀混合并添加3-6倍重量的水,控制温度45-60℃保持2~4h,加入混合酶制剂进行酶解,调节pH值为6-7,酶解2-4h,最后添加混合物料0.5-3倍重量乙醇和丙醇的混合物,110W功率下超声萃取0.5~1.5h,过滤;滤液真空浓缩后冷冻干燥获得中草药粉剂;
所述混合酶添加量为混合物料总重量的5-10%;
所述混合酶的重量份数组成为:木聚糖酶15-20份,β-淀粉酶10-15份,果胶酶10-15份,酸性蛋白酶10-15份,酸性磷酸酶5-10份;
所述乙醇和丙醇的质量比例为1:1-2。
9.如权利要求1所述的一种复合真菌及益生菌功能性食品,其特征在于,由以下重量份数的原料组成:黑木耳提取物65份,银耳提取物65份,灵芝提取物40份,猴头菇多糖40份,低聚果糖8份,小麦纤维8份,大豆纤维7份,茶多酚0.02份,麦精30份,植物乳杆菌粉剂15份。
10.权利要求1所述一种复合真菌及益生菌功能性食品在保健领域的应用。
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