CN102755589A

CN102755589A - 一种双歧杆菌微胶囊的制备方法

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Publication number: CN102755589A
Application number: CN2012102635486A
Authority: CN
Inventors: 赵振华
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2012-07-28
Filing date: 2012-07-28
Publication date: 2012-10-31

Abstract

本发明属于益生菌制品制备技术领域，具体涉及一种双歧杆菌微胶囊的制备方法，步骤一：复合菌悬液的制备，步骤二：壁材的溶解，步骤三：复合微胶囊的制备，本发明提出了一种新的制备双歧杆菌粉微胶囊的方法，去掉了壳聚糖的成膜反应，降低了生产成本，本发明提供的双歧杆菌用肠溶性材料对其进行包埋，隔绝外界空气，让其在胃酸中几乎不溶，在肠道中缓释，经肠道消化后提高了生物利用度，且存活率高于文献报导。

Description

一种双歧杆菌微胶囊的制备方法

技术领域

本发明属于益生菌制品制备技术领域，具体涉及一种双歧杆菌微胶囊的制备方法。

背景技术

正常人体肠道中存在着大量微生物, 这些菌群的平衡对人体健康发挥着重要的作用。肠道内正常菌群作为一个整体存在, 相互依赖又相互制约，机体肠道内菌群失调则出现一系列的生理功能紊乱, 临床表现为腹泻和感染等。而近年来益生菌(剂) (probiotics)作为一类对人体有益的细菌的总称,它对腹泻和感染等疾病的治疗和预防有特殊的功效, 已成为微生物学的研究热点, 并在保健食工业上得到广泛应用。双歧杆菌是目前开发应用最热门的益生菌之一，与其他药物不同的是: 它起到“已病治病、未病防病、无病保健”的作用。双歧杆菌(Bif idobacterium)是由Tissier 于1899年从健康的母乳儿粪便中分离出来的, 为革兰阳性多形态细长杆菌, 呈X字状、Y字状、弯曲状, 无芽胞、荚膜及鞭毛, 亦无内毒素和外毒素, 对人兽均无致病性, 其典型特征呈分叉生长。它为专性厌氧菌, 最适温度37℃, 最适pH7.0, 能发酵糖, 产生醋酸和乳酸, 以醋酸为主。其代谢产物对宿主的代谢也非常有益，双歧杆菌制剂中的活菌进入人体后,能在消化道等腔道的粘膜表面形成一层具有保护作用的生物学屏障,阻止病原菌的定植和侵入,还能通过争夺营养物质而拮抗病原菌。

随着人年龄的增长、环境污染及抗生素的使用等影响, 使双歧杆菌在人体肠道内的数量逐渐下降,从而造成肠道内微生态平衡破坏, 导致各种疾病或衰老的发生。因此, 人们一直在寻找向肠道内补充双歧杆菌的方法。经文献检索，张微、满朝新等人于2011年9月申请了：“一种婴儿双歧杆菌微胶囊的制备方法”的专利，该专利于2012年1月公开，公开号是CN102302160A。此微胶囊的制备中采用转谷氨酰胺酶对婴儿双歧杆菌、明胶以及阿拉伯胶的混合溶液进行交联反应。任发政于2009年5月申请了：“一种微胶囊化双歧杆菌的制备方法”的专利，该专利于2009年12月公开，公开号是CN101597604。其制备方法是采用脱脂乳作为相分离凝聚法的壁材来源，通过凝乳酶和乳蛋白的相互作用形成微胶囊。上述两项专利存在可操作性不强及生产成本较高的缺陷。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中不足而提供一种双歧杆菌的存活率提高的双歧杆菌复合微胶囊的制备方法，在微胶囊中加入促进双歧杆菌增值的中药等成分和促进人体肠道蠕动和肠道分泌水分的中药成分，以达到使人体肠道有益菌群提高、改善便秘人群的便秘症状的目的。

本发明的目的是这样实现的：

一种双歧杆菌复合微胶囊的制备方法，步骤如下：

步骤一：复合菌悬液的制备

按照每100ml蒸馏水中加入3-5g双歧杆菌菌种、0.5-1g怀山药粉（完全过100目尼龙筛网）、0.5-1g水苏糖（完全过100目尼龙筛网）的比例，在20-30℃条件下，将以上三种加入到蒸馏水中，搅匀，用24目合成纤维筛网过滤，滤液即是菌悬液，备用；

步骤二：壁材的溶解

按照每100ml蒸馏水中加入5-12g果胶、0.5-1g苦杏仁提取物、0.5-1g砂仁提取物的比例，将以上三种加入到蒸馏水中，用蒸馏水在20-30℃条件下溶胀1～1.5小时后，搅拌溶解，在20-30℃条件下放置4-6小时时间，超声除去气泡，备用；

步骤三：按照每100ml蒸馏水中加入3-5g海藻酸钠、0.5-1g橘皮提取物、0.5-1g栀子提取物的比例，将以上三种加入到蒸馏水中，用蒸馏水在20-30℃条件下溶胀1～1.5小时后，搅拌溶解，在20-30℃条件下放置4-6小时时间，超声除去气泡，备用；

步骤四：复合微胶囊的制备

将3%～5%重量百分比浓度的菌悬液与1.0%～1.5%重量百分比浓度的溶解后的果胶等体积混合，充分搅拌均匀后，形成耐酸的保护层；

再与1.5%～2.5%重量百分比的溶解后的海藻酸钠混合均匀，形成双层包埋；

然后用注射的方式将含有双层包埋的混合液注入到的2.5%～4%重量百分比浓度的氯化钙溶液中进行固化30min，得到双层凝胶珠，然后用蒸馏水清洗2～5次，直至洗去双层凝胶珠表面的氯化钙，形成双歧杆菌复合微胶囊凝胶珠，自然风干即得最终成品。

为了更好的实现本发明的目的，所述的步骤一中的怀山药粉为完全过100目尼龙筛网的怀山药粉。所述的步骤一中的水苏糖为完全过100目尼龙筛网的水苏糖。

本发明技术方案带来的有益效果

（1）本发明提出了一种新的制备双歧杆菌粉微胶囊的方法，去掉了壳聚糖的成膜反应，降低了生产成本。

（2）本发明提供的双歧杆菌用肠溶性材料对其进行包埋，隔绝外界空气，让其在胃酸中几乎不溶，在肠道中缓释，经肠道消化后提高了生物利用度，且存活率高于文献报导。

中药等组分的功效研究：

怀山药：枸杞及其它中药对双歧杆菌（Bifidobacteria）增殖和发酵影响的研究（四川大学.微生物。2004年。作者为张火云）。文中：以青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)为研究对象，以枸杞、山药等为主要材料，较系统地研究了枸杞及其它中药对双歧杆菌生长的影响，研究结果表明：山药对双歧杆菌的增殖有明显促进作用。

水苏糖：是天然存在的一种四糖，是一种可以显著促进双歧杆菌等有益菌增殖的功能性低聚糖。对人体胃肠道内的双歧杆菌、乳酸杆菌等有益菌群有着极明显的增殖作用，能迅速改善人体消化道内环境，调节微生态菌群平衡。它能促进形成有益菌在消化道内的优势菌地位，抑制产气产酸梭状芽孢杆菌等腐败菌的生产，另外产生大量生理活性物质，调节肠道pH值、灭杀致病菌，阻遏腐败产物生成，抑制内源致癌物的产生和吸收，并且分解衍生出多重免疫功能因子。

苦杏仁提取物：为蔷薇科植物山杏仁的提取物，含苦杏仁甙（amygdalin）约3%，脂肪油约50%，并含苦杏仁酶（emulsin）、苦杏仁甙酶（amygdalase）、樱叶酶（prunase）、醇腈酶（oxynitrilase），以及可溶性蛋白质。具有降气止咳平喘、润肠通便的功效。用于咳嗽气喘、胸满痰多、血虚津枯、热燥便秘。

砂仁提取物：是热带和亚热带姜科植物的的果实或种子。砂仁主要作用于人体的胃、肾和脾，能够行气调味，和胃醒脾。砂仁常与厚朴、枳实、陈皮等配合，治疗胸脘胀满、腹胀食少等病症。砂仁提取物中含挥发油，油中含乙酸龙脑酯、樟脑、樟烯、柠檬烯、β-蒎烯、苦橙油醇（nerolidol）及α-蒎烯、莰烯、桉油精、芳樟醇、α-胡椒烯、愈创木醇（guaiaol）等。另含黄酮类成分。

橘皮提取物：橘皮，又称为陈皮，为芸香科植物橘及其栽培变种的成熟果皮。含挥发油1.9%～3.5%．其中主要为柠檬烯（Limonene）。此外，尚含橙皮甙（Hesperidin）、新橙皮甙（Neohesperidin）、柑橘素（Tangeretin）；黄酮化合物、枸橼醛、β-谷甾醇（β-Sitosterol）、对羟福林（Synephrine）等。有理气调中，燥湿化痰功效，可用于治疗脾胃气滞，脘腹胀满，呕吐，或湿浊中阻所致胸闷、纳呆，但阴津亏损，内有实热者慎用。

栀子提取物

提取物的致泻作用：栀子提取物中含去乙酰车叶草甙酸甲酯，有泻下作用，小鼠的半数有效量为 0.53g/kg，服用6小时后开始腹泻。另外，羟异栀子甙亦有导泻作用，小鼠口服的半数有效量为 1.2g/kg，服后3小时开始作用。栀子甙的导泻作用半数有效量为 300mg/kg，服药后3小时起作用。栀子甙酸的导泻作用半数有效量 >800mg/kg。

具体实施方式

下面结合具体的实施方式对本发明作进一步的描述，但是不局限于以下的实施例。

实施例1：

一种双歧杆菌复合微胶囊的制备方法，步骤如下：

步骤一：复合菌悬液的制备

在30℃条件下，在100ml蒸馏水中加入3g双歧杆菌菌种、1g完全过100目尼龙筛网的怀山药粉、1g完全过100目尼龙筛网的水苏糖，搅匀，用24目合成纤维筛网过滤，滤液即是菌悬液，备用；

步骤二：壁材的溶解

在100ml蒸馏水中加入5g果胶、1g苦杏仁提取物、1g砂仁提取物的比例，用蒸馏水在30℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在30℃条件下放置6小时时间，超声除去气泡，备用；

步骤三：在100ml蒸馏水中加入3g海藻酸钠、1g橘皮提取物、1g栀子提取物的比例，用蒸馏水在30℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在30℃条件下放置6小时时间，超声除去气泡，备用；

步骤三：复合微胶囊的制备

将3%～5%重量百分比浓度的菌悬液与步骤二中的1.0%～1.5%重量百分比浓度的溶解后的液体等体积混合，充分搅拌均匀后，形成耐酸的保护层；

再与步骤三中1.5%～2.5%重量百分比的溶解后的液体混合均匀，形成双层包埋；

实施例2：与实施例1工艺过程相同，不同的部分如下：

步骤一：复合菌悬液的制备

在20℃条件下，在100ml蒸馏水中加入5g双歧杆菌菌种、0.5g完全过100目尼龙筛网的怀山药粉、0.5g完全过100目尼龙筛网的水苏糖，搅匀，用24目合成纤维筛网过滤，滤液即是菌悬液，备用；

步骤二：壁材的溶解

按照每100ml蒸馏水中加入12g果胶、0.5g苦杏仁提取物、0.5g砂仁提取物的比例，用蒸馏水在20℃条件下溶胀1小时后，搅拌溶解，在30℃条件下放置5小时时间，超声除去气泡，备用；

步骤三：按照每100ml蒸馏水中加入5g海藻酸钠、0.5g橘皮提取物、0.5g栀子提取物的比例，用蒸馏水在30℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在20-30℃条件下放置5小时时间，超声除去气泡，备用；

实施例3：与实施例1的工艺过程相同，不同如下：

步骤一：复合菌悬液的制备

在30℃条件下，在100ml蒸馏水中加入4g双歧杆菌菌种、0.7g完全过100目尼龙筛网的怀山药粉、0.7g完全过100目尼龙筛网的水苏糖，搅匀，用24目合成纤维筛网过滤，滤液即是菌悬液，备用；

步骤二：壁材的溶解

按照每100ml蒸馏水中加入8g果胶、0.7g苦杏仁提取物、0.7g砂仁提取物的比例，将以上三种加入到蒸馏水中，用蒸馏水在30℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在30℃条件下放置6小时时间，超声除去气泡，备用；

步骤三：按照每100ml蒸馏水中加入4g海藻酸钠、0.7g橘皮提取物、0.8g栀子提取物的比例，将以上三种加入到蒸馏水中，用蒸馏水在30℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在30℃条件下放置6小时时间，超声除去气泡，备用；

实施例4：与实施例1工艺过程相同，不同如下：

步骤一：复合菌悬液的制备

在20℃条件下，在100ml蒸馏水中加入4g双歧杆菌菌种、0.6g完全过100目尼龙筛网的怀山药粉、0.6g完全过100目尼龙筛网的水苏糖，搅匀，用24目合成纤维筛网过滤，滤液即是菌悬液，备用；

步骤二：壁材的溶解

按照每100ml蒸馏水中加入6g果胶、0.6g苦杏仁提取物、0.6g砂仁提取物的比例，用蒸馏水在25℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在25℃条件下放置5小时时间，超声除去气泡，备用；

步骤三：按照每100ml蒸馏水中加入4g海藻酸钠、0.6g橘皮提取物、0.6g栀子提取物的比例，用蒸馏水在30℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在30℃条件下放置5小时时间，超声除去气泡，备用。

实施例5：与实施例1工艺过程一样，不同如下：

步骤一：复合菌悬液的制备

在20℃条件下，在100ml蒸馏水中加入4g双歧杆菌菌种、0.8g完全过100目尼龙筛网的怀山药粉、0.8g完全过100目尼龙筛网的水苏糖，搅匀，用24目合成纤维筛网过滤，滤液即是菌悬液，备用；

步骤二：壁材的溶解

按照每100ml蒸馏水中加入8g果胶、0.8g苦杏仁提取物、0.8g砂仁提取物的比例，用蒸馏水在25℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在25℃条件下放置5小时时间，超声除去气泡，备用；

步骤三：按照每100ml蒸馏水中加入4g海藻酸钠、0.8g橘皮提取物、0.8g栀子提取物的比例，用蒸馏水在30℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在30℃条件下放置5小时时间，超声除去气泡，备用。

实施例6：与实施例1过程一样，不同如下：

步骤一：复合菌悬液的制备

在20℃条件下，在100ml蒸馏水中加入4g双歧杆菌菌种、0.9g完全过100目尼龙筛网的怀山药粉、0.9g完全过100目尼龙筛网的水苏糖，搅匀，用24目合成纤维筛网过滤，滤液即是菌悬液，备用；

步骤二：壁材的溶解

按照每100ml蒸馏水中加入10g果胶、0.9g苦杏仁提取物、0.9g砂仁提取物的比例，用蒸馏水在25℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在25℃条件下放置5小时时间，超声除去气泡，备用；

步骤三：按照每100ml蒸馏水中加入4g海藻酸钠、0.9g橘皮提取物、0.9g栀子提取物的比例，用蒸馏水在30℃条件下溶胀1.5小时后，搅拌溶解，在30℃条件下放置5小时时间，超声除去气泡，备用。

耐微酸性实验：

（1）时间：2012年04月20日--06月25日。

（2）原辅料：

双歧杆菌粉：武汉东方之子生物工程有限责任公司，含量：205亿/g 。

批号：DFZZ20120301；

海藻酸钠：青岛鸿杰海藻有限公司批号：H20120203；

果胶(食用级)：安徽宇宁生物科技有限公司批号：YN20120211；

氯化钙：潍坊龙腾化工有限公司含量：94% 批号：20120101；

表1：

通过耐微酸性实验表1，证明试验达到了预期效果，双歧杆菌菌粉在胃液中的成活率非常低，灭活非常快。公司制作的双歧杆菌复合微胶囊在胃液中的成活率比较高，几乎无灭活，而且性能比较稳定。

肠溶性指标试验数据如下：

表2：

耐胆盐实验：

在耐胆汁盐试验中，双歧杆菌复合微胶囊在高胆汁盐中3h，双歧杆菌菌数基本保持在10¹⁰~10¹¹cfu/g，而未微囊化双歧杆菌的菌数降至10²-10³cfu/g。

Claims

1.一种双歧杆菌复合微胶囊的制备方法，其特征在于：步骤如下：

步骤一：复合菌悬液的制备

按照每100ml蒸馏水中加入3-5g双歧杆菌菌种、0.5-1g怀山药粉、0.5-1g水苏糖的比例，在20-30℃条件下，将以上三种加入到蒸馏水中，搅匀，用24目合成纤维筛网过滤，滤液即是菌悬液，备用；

步骤二：壁材的溶解

步骤四：复合微胶囊的制备

然后用注射的方式将上述的混合液注入到的2.5%～4%重量百分比浓度的氯化钙溶液中进行固化30min，得到双层凝胶珠，然后用蒸馏水清洗2～5次，直至洗去双层凝胶珠表面的氯化钙，形成双歧杆菌复合微胶囊凝胶珠，自然风干即得最终成品。

2.根据权利要求1所述的一种双歧杆菌复合微胶囊的制备方法，其特征在于：所述的步骤一中的怀山药粉为完全过100目尼龙筛网的怀山药粉。

3.根据权利要求1所述的一种双歧杆菌复合微胶囊的制备方法，其特征在于：所述的步骤一中的水苏糖为完全过100目尼龙筛网的水苏糖。