CN102190622A

CN102190622A - 依达拉奉的水溶性衍生物及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN102190622A
Application number: CN2010101242279A
Authority: CN
Inventors: 李勤耕; 谢守全; 甘永军; 王涛; 陈大海; 高宏伟; 徐璐
Original assignee: 李勤耕
Current assignee: Zhongshan Wan Han Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2010-03-15
Filing date: 2010-03-15
Publication date: 2011-09-21
Anticipated expiration: 2030-03-15
Also published as: CN102190622B

Abstract

本发明公开了一系列可与酸成盐形成水溶性物质的依达拉奉氨基碳酸酯类衍生物及其制备方法，该类水溶性物质具有通式(I)，

Description

依达拉奉的水溶性衍生物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一系列依达拉奉的水溶性衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

依达拉奉(edaravone)是日本三菱株式会社研发的新一代中枢神经用药，主要用于脑梗死急性期产生的神经症状、日常生活动作障碍及功能障碍，还可用于蛛网膜下腔出血的治疗。其化学名为：3-甲基-1-苯基-2-吡唑啉-5-酮，结构式为：

依达拉奉是一种脑保护剂(自由基清除剂)。临床研究提示N-乙酰门冬氨酸(NAA)是特异性的存活神经细胞的标志，脑梗塞发病初期含量急剧减少。对脑梗塞急性期患者给予依达拉奉，可抑制梗塞周围局部脑血流量的减少，使发病后第28天脑中NAA含量较甘油对照组明显升高。临床前研究提示，大鼠在缺血/缺血再灌注后静脉给予依达拉奉，可阻止脑水肿和脑梗塞的进展，并缓解所伴随的神经症状，抑制迟发性神经元死亡。机理研究提示，依达拉奉可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。

目前上市的依达拉奉只能制成注射液，规格为20ml:30mg，使用时用生理盐水稀释给药。由于依达拉奉难溶于水，制备注射液时，需用碱性水溶液溶解；而依达拉奉在碱性条件下易被氧化，从而导致该产品在生产和贮存过程中的质量控制变得艰难；同时为了保证药品的稳定性，制备依达拉奉注射液时须加入抗氧剂以保证制剂稳定性，这可能给用药者造成不必要的副作用。许多药物制剂专家对此进行研究，力图将其制成冻干制剂。目前中国专利文献CN1440749A、CN1493283A和CN101288650A均报道了采用制备依达拉奉冷冻干燥制剂的方法，但是这些方法工艺条件苛刻，对依达拉奉的水溶性改善并不显著，且依达拉奉在溶液状态下易被氧化的问题仍然未得以有效解决。另外，由于目前依达拉奉注射液正在日本进行肌萎缩策索硬化症的II期临床，而且内皮功能障碍等慢性病的临床研究也可能进行，因此依达拉奉具有长期使用治疗上述疾病的潜力，显然长期注射给药会带来诸多不便。动物试验显示，大鼠灌胃30mg/kg，与静注1.5mg/kg疗效相当(Edaravone(3-Methyl-1-Phenyl-2-Pyrazolin-5-one)，A Novel Free Radical Scavenger，for Treatment of Cardiovascular Diseases，Recent Patents on CardiovascularDrug Discovery，2006，1，85-93)，说明依达拉奉口服生物利用度极低，因此有必要对依达拉奉进行改造，获得具有依达拉奉等效并能口服的化合物供临床选择。

发明内容：

本发明的目是克服上述制剂不足，立足于依达拉奉的结构，利用羰基烯醇互变的羟基，通过化学反应使其成为一系列含哌嗪类的衍生物，再利用哌嗪环的氮与酸成盐，制备出依达拉奉一系列水溶性并能口服的衍生物。

本发明涉及依达拉奉水溶性衍生物的结构通式为：

其中R为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苄基；HB表示能与含氮有机基团成盐的酸。

其中HB是指可作为药用的无机酸即盐酸、磷酸、硫酸或碳酸；或可作为药用的有机酸即乙酸、乳酸、甲磺酸、丁二酸、马来酸、枸橼酸或苹果酸。

本发明以依达拉奉(II)为原料使用如下方法获得上述衍生物(I)

方法A：

通过将依达拉奉(II)在第一有机溶剂中与光气或者三光气反应形成氯甲酰依达拉奉酯(III)，光气或者三光气的用量为依达拉奉摩尔数的1-20倍，优选用量为1-3倍量，反应中可加有机碱或无机碱作催化剂或附酸剂，反应温度为-70℃-回流温度，优选为-15-5℃；再将上步所得物在第一有机溶剂中用六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物取代卤原子，得化合物(IV)。其中六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物的用量为依达拉奉摩尔数的1-20倍，优选1-3倍量，反应温度为-30℃-80℃，优选为-15-5℃。然后将上步所得物在溶剂中与相应的酸H B成盐，最后得到衍生物(I)。反应过程如下：

方法B：

通过将六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物在第一有机溶剂中与光气或者三光气反应形成1-氯甲酰哌嗪类化合物(V)，光气或者三光气的用量为六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物摩尔数的1-20倍，优选用量为1-3倍量，反应中加有机碱或无机碱作催化剂或附酸剂，反应温度为-70℃-回流温度，优选温度为-15-5℃。再将上步所得物在第一有机溶剂中与依达拉奉(II)反应，得化合物(IV)，其中1-氯甲酰哌嗪类化合物的用量为依达拉奉摩尔数的1-20倍，优选1-3倍量，反应中加入有机碱或无机碱作催化剂或附酸剂，反应温度为-70℃-回流温度，优选温度20-40℃。

然后将上步所得物在溶剂中与相应的酸HB成盐，最后得到衍生物(I)。反应过程如下：

在上述两种合成方法中，所述有机碱为吡啶类或叔胺类的含氮有机化合物，吡啶类或叔胺类的含氮有机化合物选自吡啶、DMAP、4-PPY、三甲胺或三乙胺。无机碱为碳酸氢钠或碳酸钠；所述有机碱或无机碱的用量为依达拉奉摩尔数的1-30倍量，优选1-3倍量。

所述的第一有机溶剂为不含活泼氢的有机溶剂，如含卤素的有机溶剂二氯甲烷、氯仿或氯苯；或不含卤素的有机溶剂苯、甲苯、己烷或环己烷；或含其他杂原子的有机溶剂乙腈、丙酮、DMF、DMSO、THF或乙醚；所述第一有机溶剂的用量为依达拉奉重量的3-50倍量，较好的为5-20倍量。

所述在溶剂中与相应的酸HB成盐步骤中的溶剂指的是水或第二有机溶剂。用水做溶剂时，通过冷冻干燥得衍生物(I)，水的用量为化合物(IV)摩尔数的3-50倍，优选3-20倍量；第二有机溶剂指的是第一有机溶剂或醇类溶剂，如甲醇、乙醇、丙醇和异丙醇或酯类有机溶剂甲酸甲酯、乙酸乙酯，所得结晶通过过滤，干燥得衍生物(I)，干燥在减压或常压下进行，第二有机溶剂的用量为化合物(IV)重量的3-50倍，较好的为5-20倍。。

本发明所述的依达拉奉衍生物(I)可用于产生动物的脑保护作用。

本发明涉及的这类化合物编号、结构、水中溶解度、熔点、IR、¹³C-NMR、H-NMR数据如下：

将这类依达拉奉衍生物与等质量依达拉奉经尾静脉注射或口服进入局部脑缺血的大鼠体内，于24小时后进行大鼠神经功能行为学评分、测定SOD(超氧化物岐化酶)及MDA丙二醛(是SOD被氧化后的产物)的含量、计算脑梗死指数及脑指数，结果发现：给药组与假手术组相比，血清SOD活力有所降低，血清MDA含量有所升高，大鼠脑梗死体积有所增大；给药组与模型组相比，血清SOD活力明显升高(P＜0.01)，血清MDA含量明显降低(P＜0.01)，大鼠脑梗死体积明显减小(P＜0.01)，脑指数有明显降低(P＜0.01)，从动物行为学观察，动物行为有明显改善；给药组中依达拉奉组与依达拉奉衍生物组相比，血清SOD、MDA含量、脑梗死指数、脑指数以及动物行为学评分均无显著性差异(P＜0.05)。

由此可知，该类依达拉奉衍生物与依达拉奉相比，药效无明显差异，但前者具有良好的水溶性，可制成水溶性注射液，既避免了依达拉奉注射液制备时需碱性溶解易变质的缺陷，又避免了为防止依达拉奉注射液氧化必须加入抗氧剂从而对病人造成不必要的副作用；对病人更为有益的是，本发明所述及的化合物还可以通过灌胃给药，且与注射用药的脑保护作用无显著性差异。因此该类衍生物可与一种或多种药学上更易接受的载体一起组成注射或口服制剂，这种注射或口服制剂含有治疗有效量的上述通式(I)化合物。

本发明用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、胶囊等。

本发明的药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。

可见，本发明在不改变依达拉奉固有药理活性的前提下，通过化学反应形成哌嗪类衍生物，然后与酸成盐，从而改善其水溶性，提高药物生物利用度。

具体实施方式

下面的实施实例可使本专业技术人员更全面的理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1

1-哌嗪甲酰依达拉奉酯(化合物1)的制备

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入15ml干燥二氯甲烷、2.0g依达拉奉、0.93g无水吡啶，搅拌至完全溶解。将1.14g三光气溶于5ml干燥的二氯甲烷中，缓慢滴加，-10℃反应2-3小时。反应完毕过滤掉吡啶盐，滤液置于恒压滴液漏斗中备用。

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入5ml干燥二氯甲烷、5.1g cbz-哌嗪、搅拌至完全溶解。然后将上述滤液缓慢滴入其中，-5℃反应0.5小时。反应完毕用pH＝1酸水洗涤，直至有机相中无cbz-哌嗪、分液，然后将二氯甲烷减压抽干，得油状物。

将上述油状物溶于20ml四氢呋喃中，加入0.5g 5％钯-碳，通入氢气，45℃反应8h，过滤，滤液减压浓缩，得淡黄色油状物；硅胶柱层析(流动相：CH₂Cl₂∶CH₃OH＝20∶1)；挥去溶媒，得油状物，将其溶于20ml丙酮中，缓慢滴加乙醚的饱和HCl溶液，直至无固体析出，过滤得依达拉奉哌嗪盐酸盐1.5g，收率41.6％。

实施例2

4-甲基-1-哌嗪甲酰依达拉奉酯(化合物2)的制备

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入20ml干燥氯仿、2.0g依达拉奉、1.5g无水吡啶，搅拌至完全溶解。将1.5g三光气溶于5ml干燥的氯仿中，缓慢滴加，-15℃反应2-3小时。反应完毕过滤掉吡啶盐，滤液置于恒压滴液漏斗中备用。

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入10ml干燥氯仿、3.0g甲基哌嗪，冰浴搅拌；然后将上述滤液缓慢滴入其中，在0℃反应0.5小时。反应完毕用水洗涤，直至有机相中无甲基哌嗪，分液，挥氯仿，得油状物。

将上述油状物溶于20ml乙酸乙酯中，缓慢滴加乙醚的饱和HCl溶液，直至无固体析出为止，过滤得依达拉奉甲基哌嗪盐酸盐粗品2.5g，收率64.5％。可用异丙醇或者乙醇重结晶得进一步纯品。

实施例3

4-甲基-1-哌嗪甲酰依达拉奉酯(化合物2)的制备

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入20ml干燥二氯甲烷、2.0g甲基哌嗪、2.52g碳酸氢钠，搅拌。将1.97g三光气溶于10ml干燥的二氯甲烷中，缓慢滴加，-10℃反应1小时。过滤，将滤液减压蒸干得淡黄色固体。

在干燥的N₂流下，于100ml干燥的三颈烧瓶中加入30ml干燥二氯甲烷、3.5g依达拉奉、1.9g吡啶，冰浴搅拌。然后将10ml二氯甲烷溶解的上述固体缓慢滴入其中，20℃反应5小时。反应完毕用水洗涤，直至有机相中无吡啶，分液，挥去二氯甲烷，得油状物。

将上述油状物溶于30ml丙酮中，缓慢滴加乙醚的饱和HCl溶液，直至无固体析出，过滤得依达拉奉甲基哌嗪盐酸盐粗品3.0g，收率44％。可用异丙醇或者乙醇重结晶得进一步纯品。

实施例4

4-乙基-1-哌嗪甲酰依达拉奉酯(化合物3)的制备

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入15ml干燥环己烷、2.0g依达拉奉、3.0gDMAP，搅拌至完全溶解。将2.0g三光气溶于5ml干燥的环己烷中，缓慢滴加，-3℃反应2-3小时。反应完毕过滤掉DMAP盐，滤液置于恒压滴液漏斗中备用。

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入15ml干燥环己烷、3.0g乙基哌嗪，搅拌。然后将上述滤液缓慢滴入其中，3℃反应0.5小时。反应完毕用水洗涤，直至有机相中无乙基哌嗪，分液，然后将环己烷减压抽干，得油状物。

将上述油状物溶于20ml四氢呋喃中，缓慢滴加乙醚的饱和HCl溶液，直至无固体析出，过滤得依达拉奉乙基哌嗪盐酸盐粗品2.3g，收率57.5％。可用异丙醇或者乙醇重结晶得进一步纯品。

实施例5

4-丙基-1-哌嗪甲酰依达拉奉酯(化合物4)的制备

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入20ml干燥乙醚、2.0g丙基哌嗪、2.62g碳酸氢钠，搅拌。将3.0g三光气溶于10ml干燥的乙醚中，缓慢滴加，-5℃反应1小时。过滤、将滤液减压蒸干得淡黄色固体。

在干燥的N₂流下，于100ml干燥的三颈烧瓶中加入25ml干燥乙醚、1.5g依达拉奉、2.0gDMAP，搅拌至完全溶解；然后将10ml乙醚溶解的上述固体缓慢滴入其中，20℃反应5小时。反应完毕用水洗涤，直至有机相中无DMAP、分液，挥去乙醚，得油状物。

将上述油状物溶于20ml乙酸乙酯中，缓慢滴加乙醚的饱和HCl溶液，直至无固体析出，过滤得依达拉奉丙基哌嗪盐酸盐粗品1.5g，收率48％。可用异丙醇或者乙醇重结晶得进一步纯品。

实施例6

4-丁基-1-哌嗪甲酰依达拉奉酯(化合物6)的制备

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入20ml干燥环己烷、2.0g甲基哌嗪、2.8g碳酸氢钠，搅拌。将3.47g三光气溶于15ml干燥的环己烷中，缓慢滴加，-8℃反应1小时。过滤、将滤液减压蒸干得淡黄色固体。

在干燥的N₂流下，于100ml干燥的三颈烧瓶中加入25ml干燥环己烷、2.5g依达拉奉、2.3g三乙胺，搅拌至完全溶解。然后将10ml环己烷溶解的上述固体缓慢滴入其中，35℃反应5小时。反应完毕用水洗涤，直至有机相中无三乙胺、分液，挥去环己烷，得油状物。

将上述油状物溶于20ml乙醚中，缓慢滴加乙醚的饱和HCl溶液，直至无固体析出，过滤得依达拉奉丁基哌嗪盐酸盐粗品2.9g，收率54％。可用异丙醇或者乙醇重结晶得进一步纯品。

实施例7

4-苄基-1-哌嗪甲酰依达拉奉酯(化合物7)的制备

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入20ml干燥乙醚、2.0g依达拉奉、2.8g三乙胺，搅拌至完全溶解。将1.8g三光气溶于10ml干燥的乙醚中，缓慢滴加，-15℃反应2-3小时。反应完毕过滤掉固体盐，滤液置于恒压滴液漏斗中备用。

在干燥的N₂流下，于50ml干燥的三颈烧瓶中加入10ml干燥乙醚、5.0g苄基哌嗪，搅拌至完全溶解。然后将上述滤液缓慢滴入其中，-8℃反应0.5小时。反应完毕用水洗涤，直至有机相中无苄基哌嗪、分液，然后将乙醚减压抽干，得油状物。

将上述油状物溶于20ml乙酸乙酯中，缓慢滴加乙醚的饱和HCl溶液，直至无固体析出，过滤得依达拉奉苄基哌嗪盐酸盐粗品3.0g，收率63％。可用异丙醇或者乙醇重结晶得进一步纯品。

动物实验部分

1.实验动物及分组：

健康雄性SD大鼠170只，由重庆医科大学实验动物中心提供，体重200-230g，雌雄兼用。随机分为17组，即假手术组、模型组、依达拉奉阳性对照组，十四种给药组，每组10只。给药各组均于术后1h和12h按1.5mg/kg的剂量给药，假手术组及阴性对照组灌胃给予等容量溶媒。

2.动物模型制备及处理：

参照文献，采用线栓法制备MCAO模型。10％水合氯醛，按1mL/100g腹腔注射麻醉。颈部正中切口，分离右颈总动脉及颈内、颈外动脉。在距颈动脉分叉5mm处，双线结扎颈外动脉，颈内动脉穿线备用，结扎右颈总动脉的近心端。在靠近动脉分叉的颈总动脉壁上剪一小口，插人一直径为0.24mm的尼龙渔线(渔线头端用石蜡薄薄地包裹)，经颈内动脉进人大脑中动脉起始部，以阻断大脑中动脉的血流。插入线长约16mm时，有明显阻力感。结扎颈内动脉及尼龙线，防止插线脱落。假手术组除不插人尼龙线外其他手术步骤同手术组。

妥当固定栓线，逐层缝合伤口。手术完毕置于清洁保温箱中苏醒，脑缺学模型制备成功的标准：大鼠苏醒后右侧出现Horner综合症并左侧偏瘫，能够自由进饮进食。依达拉奉组、1组、2组、3组、4组、5组、6组、7组严格按要求制备脑缺血再灌注模型，并于手术后1h、12h尾静脉依次注射依达拉奉、化合物1号、化合物2号、化合物3号、化合物4号、化合物5号、化合物6号、化合物7号1.5mg/kg；8组、9组、10组、11组、12组、13组14组严格按要求制备脑缺血再灌注模型，并于手术苏醒后1h、12h依次灌胃化合物1号、化合物2号、化合物3号、化合物4号、化合物5号、化合物6号、化合物7号1.5mg/kg；模型组严格按要求制备脑缺血再灌注模型，并于手术后1h、12h尾静脉注射等量生理盐水；假手术组除不插人栓线外其他手术步骤同手术组，并于手术后1h、12h尾静脉注射等量生理盐水。

3.神经功能缺损评分

各组与给药24h后进行Zea longa神经功能缺损评分。0分：无神经功能损伤；1分轻度神经功能损伤(提尾时不能伸展左前肢)；2分：中度神经功能损伤(自主爬行时向左转圈)；3分：重度神经功能损伤(自主爬行时向左侧倾倒)；4分：无自主活动伴意识障碍。

4.脑梗塞指数及脑指数测定24小时行为测定评分后将动物断头取脑(去掉嗅球、小脑和低位脑干)，称重。将大脑置于-20℃低温冰箱中冻存30min，然后沿冠状切成厚度基本相同的5片，每片约厚1-2mm，5片脑组织用2％氯化三苯基四氮唑(2％TTC)染色，正常脑组织染色后呈红色，梗死部位呈白色，将其用小刀剔出称重，计算梗死组织重量占总脑重的百分比。并以湿重法计算大鼠大脑的含水量。

脑梗塞指数＝梗塞灶湿重(g)/脑湿重(g)×100％

脑指数＝脑湿重(g)/体重(g)×100％

5.SOD、MDA含量检测

严格按说明书要求采用邻苯三酚自氧化法测定SOD，TBA法测定MDA。结果以每毫克蛋白所含单位或摩尔浓度(U.mg^-1或nmol.ml^-1)表示。

6.光镜组织学检查

各实验组大鼠到预定时间动物处死，取脑，石蜡切片，HE染色，光镜观察组织细胞学变化。

7.统计学处理

采用SPSS11.5统计学软件进行分析，计量资料以均数±标准差

表示，组间比较采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

7.结果

给药组与假手术组相比，血清SOD活力有所降低，血清MDA含量有所升高；给药组与模型组相比，血清SOD活力明显升高(P＜0.01)，血清MDA含量明显降低(P＜0.01)，从动物行为学观察动物行为有明显改善。

给药组中依达拉奉组与依达拉奉衍生物组相比，血清SOD、MDA含量以及动物行为学评分均无显著性差异(P＜0.05)。

大鼠神经功能行为评分和SOD、MDA含量比较见表一

表一大鼠神经功能评分及SOD和MDA含量比较

组别	行为学评分	SOD uv/mg pro	MDA nmol/mg pro
				假手术组	0	30.76±8.14	3.20±0.89
模型组	2.8±0.92	15.53±5.32	5.29±2.04

依达拉奉组	1.40±1.07^**	26.80±7.57^**	3.74±0.90^*
				1组	1.6±0.78^**	27.23±7.64^**	3.63±0.90^*
2组	1.51±0.80^**	26.71±6.51^**	3.65±0.85^*
				3组	1.70±O.95^*	25.55±738^**	3.68±0.88^*
4组	1.58±0.75^**	26.52±7.45^**	3.69±0.91^*
				5组	1.62±0.83^**	27.15±6.83^**	3.70±0.87^*
6组	1.65±0.90^**	25.20±7.35^**	3.72±0.92^*
				7组	2.00±0.85^*	25.17±6.02^**	3.77±1.26^*
8组	1.9±0.97^*	25.32±6.38^**	3.71±1.34^*
				9组	1.73±0.80^**	26.32±7.35^**	3.75±0.85^*
10组	1.85±0.72^**	26.53±7.24^**	3.73±0.93^*
				11组	1.65±1.10^**	25.65±6.83^**	3.76±0.92^*
12组	1.75±0.92^**	25.78±7.10^**	3.69±0.87^*
				13组	1.83±0.87^**	26.31±6.95^**	3.65±0.90^*
14组	2.2±1.58^**	25.01±6.11^**	3.65±1.02^*

与模型组相比p^**＜0.01，p^*＜0.05，与依达拉奉组相比p##＜0.01，p#＜0.05

给药组与假手术组相比，大鼠脑梗死体积有所增大，脑组织含水量无明显差异；给药组与模型组相比，大鼠脑梗死体积有明显减小(P＜0.01)，脑指数有所降低。

给药组中依达拉奉组与依达拉奉衍生物组相比，大鼠脑梗死体积和脑组织含水量无显著性差异(P＜0.05)，即说明依达拉奉衍生物通过灌胃与相同量依达拉奉通过注射相比，能达到同样的生物利用度。见表二

表二大鼠脑梗塞指数及脑指数的影响

组别	脑梗塞指数(％)	脑指数(％)
			假手术组	0	0.53±0.02
模型组	26.75±5.32	0.67±0.11
			依达拉奉	14.44±3.27^**	0.58±0.06^*

1组	14.57±3.33^**	0.54±0.03^*
			2组	14.30±3.40^**	0.55±0.04^*
3组	14.36±3.54^**	0.60±0.05^*
			4组	14.50±3.20^**	0.55±0.06^*
5组	14.47±3.50^**	0.57±0.04^*
			6组	14.80±3.67^**	0.59±0.03^*
7组	15.22±4.83^*	0.60±0.06
			8组	15.86±3.42^*	0.55±0.04^*
9组	15.50±3.35^**	0.57±0.03^*
			10组	15.30±3.40^**	0.58±0.01^*
11组	15.45±3.37^**	0.56±0.04^*
			12组	15.63±3.15^**	0.58±0.02^*
13组	14.55±3.23^**	0.59±0.03^*
			14组	15.40±3.19^*	0.54±0.03^*

与模型组相比p^**＜0.01，p^*＜0.05，与依达拉奉组相比p##＜0.01，p#＜0.05组织病理学检查

病理检查结果MCAO后24h，模型组的大鼠患侧脑病理切片显示，梗塞侧脑组织染色明显较假手术组浅，并有严重损伤的坏死中心区，神经元肿胀，血管扩张，周围间隙扩大。对侧脑组织未见病理改变。依达拉奉和其衍生物剂量组的患侧苍白区缩小，光镜下显示梗塞侧脑细胞水肿程度均明显减轻，梗塞范围明显减小，且梗塞灶周围胶质细胞增生明显。提示依达拉奉衍生物能减轻脑水肿，并促进胶质细胞增生，有利于脑损伤的修复。

Claims

1.一系列含依达拉奉的衍生物，其特征在于该衍生物具有下列通式(I)：

其中R为H、甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基或苄基；HB表示能与含氮有机基团成盐的酸，指可作为药用的无机酸即盐酸、磷酸、硫酸或碳酸；或可作为药用的有机酸即乙酸、乳酸、甲磺酸、丁二酸、马来酸、枸橼酸或苹果酸。

2.权利要求1所述衍生物的合成方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)将依达拉奉(II)在第一有机溶剂中与光气或者三光气反应形成氯甲酰依达拉奉酯(III)，光气或者三光气的用量为依达拉奉摩尔数的1-20倍，第一有机溶剂用量为依达拉奉(II)重量的3-50倍，反应中加有机碱或无机碱作催化剂或附酸剂，反应温度为-70℃-回流温度；

(2)再将步骤(1)所得物在第一有机溶剂中用六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物取代卤原子，得化合物(IV)，其中六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物的用量为依达拉奉摩尔数的1-20倍，第一有机溶剂用量为依达拉奉(II)重量的3-50倍，反应温度为-30℃-80℃；

(3)然后将步骤(2)所得化合物(IV)在水或第二有机溶剂中与相应的酸HB成盐，最后得到衍生物(I)；用水做溶剂时，通过冷冻干燥得衍生物(I)，水的用量为化合物(IV)重量的3-50倍；用第二有机溶剂时，所得结晶通过过滤，干燥得衍生物(I)，干燥在减压或常压下进行，第二有机溶剂的用量为化合物(IV)重量的3-50倍。

3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于：

步骤(1)中，光气或者三光气的用量为依达拉奉摩尔数的1-3倍量，反应温度为-15-5℃；

步骤(2)中，六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物的用量为依达拉奉摩尔数的1-3倍量，反应温度为-15-5℃。

4.权利要求1所述衍生物的合成方法，其特征在于所述方法过程如下：

(1)用六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物在第一有机溶剂中与光气或者三光气反应形成1-氯甲酰哌嗪类化合物(V)，光气或者三光气的用量为六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物摩尔数的1-20倍，第一有机溶剂用量为六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物重量的3-50倍，反应中加有机碱或无机碱作催化剂或附酸剂，反应温度为-70℃-回流温度；

(2)再将步骤(1)所得的1-氯甲酰哌嗪类化合物(V)在第一有机溶剂中与依达拉奉(II)反应，得化合物(IV)，其中1-氯甲酰哌嗪类化合物(V)的用量为依达拉奉摩尔数的1-20倍，第一有机溶剂用量为依达拉奉(II)重量的3-50倍，反应中加入有机碱或无机碱作催化剂或附酸剂，反应温度为-70℃-回流温度；

5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于：

步骤(1)中，光气或者三光气的用量为六水哌嗪、哌嗪或哌嗪类衍生物摩尔数的1-3倍量，反应温度为-15-5℃；

步骤(2)中，1-氯甲酰哌嗪类化合物的用量为依达拉奉摩尔数的1-3倍量，反应温度为20-40℃。

6.根据权利要求2或4所述的合成方法，其特征在于：所述的有机碱为吡啶类或叔胺类的含氮有机化合物；所述的无机碱为碳酸氢钠或碳酸钠；所述有机碱或无机碱的用量为依达拉奉或者六水哌嗪、哌嗪、哌嗪类衍生物摩尔数的1-30倍量。

7.根据权利要求6项所述的合成方法，其特征在于：所述吡啶类或叔胺类的含氮有机化合物选自吡啶、DMAP、4-PPY、三甲胺或三乙胺；所述有机碱或无机碱的用量为依达拉奉或者六水哌嗪、哌嗪、哌嗪类衍生物摩尔数的1-3倍量。

8.根据权利要求2或4所述的合成方法，其特征在于：

(1)所述的第一有机溶剂为不含活泼氢的有机溶剂，包括含卤素的有机溶剂二氯甲烷、氯仿或氯苯；或不含卤素的有机溶剂苯、甲苯、己烷或环己烷；或含其他杂原子的有机溶剂乙腈、丙酮、DMF、DMSO、THF或乙醚；

(2)所述的第二有机溶剂为第一有机溶剂或含有醇羟基的有机溶剂甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇或酯类有机溶剂甲酸甲酯、乙酸乙酯。

9.根据权利要求2或4所述的合成方法，其特征在于所述的第一有机溶剂的用量为依达拉奉重量的5-20倍；所述用水做溶剂时，水的用量为化合物(IV)重量的5-20倍量；所述用第二有机溶剂做溶剂时，第二有机溶剂的用量为化合物(IV)重量的5-20倍。

10.权利要求1所述的依达拉奉的衍生物(I)在制备对动物及人产生脑保护作用的注射和口服药物方面的应用。