CN103193789A

CN103193789A - 一种光学活性的丁苯酞开环衍生物、制备方法及医药用途

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Publication number: CN103193789A
Application number: CN2013100800500A
Authority: CN
Inventors: 张奕华; 王晓丽; 黄张建; 王琳娜; 赖宜生; 季晖; 徐进宜; 彭司勋
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2013-03-14
Filing date: 2013-03-14
Publication date: 2013-07-10

Abstract

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，具体涉及通式I所示的一种光学活性的丁苯酞开环衍生物或其药学上可接受的盐及可药用的载体，它们的制备方法，含有这些化合物的药用组合物以及其医药用途，特别是在预防和治疗心脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍药物、抗血小板聚集药物、抗血栓药物、抗脑缺血药物、抗痴呆药物、抗动脉粥样硬化药物、抗糖尿病及其并发症药物中的应用。药理实验结果表明，该类化合物具有良好的抗血小板聚集活性、抗血栓活性、抗脑缺血活性和神经保护作用，临床上可用于制备预防或治疗与血小板聚集有关的疾病的药物。

Description

一种光学活性的丁苯酞开环衍生物、制备方法及医药用途

技术领域

本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，具体涉及一种光学活性的丁苯酞开环衍生物或其药学上可接受的盐及可药用的载体，它们的制备方法、含有这些化合物的药用组合物以及它们的医药用途，特别是在预防和治疗心脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍药物、抗血小板聚集药物、抗血栓药物、抗脑缺血药物、抗痴呆药物、抗动脉粥样硬化药物、抗糖尿病及其并发症药物中的应用。

背景技术

血小板在动脉血栓性疾病的发病过程中具有重要作用，阻断血小板在动脉粥样斑块上的沉着和随后的血栓形成，是抗血小板药物应用的主要目的。临床研究表明，抗血小板药物能够有效降低常见的心脑血管疾病(如心肌梗死、心绞痛、心律失常、冠心病、脑缺血、中风、脑梗死及外周血管性疾病)的发病率(Nat.Med.，2002，8，1227)。

丁苯酞(商品名为“恩必普”)是我国脑血管病治疗领域第一个拥有自主知识产权的一类新药，于2002年11月批准上市用于轻、中度缺血性脑卒中的治疗。临床研究结果表明，丁苯酞对急性缺血性脑卒中患者的中枢神经功能的损伤有改善作用，可促进患者功能恢复。动物药效学研究提示，丁苯酞可阻断缺血性脑卒中所致脑损伤的多个病理环节，具有较强的抗脑缺血和脑保护作用，尤其是能够明显提高缺血小鼠脑内三磷酸腺苷(ATP)和磷酸肌酸(CP)的水平，明显缩小大鼠局部脑缺血的梗塞面积，减轻脑水肿，改善脑能量代谢和缺血脑区的微循环和血流量，抑制神经细胞凋亡，并具有一定的抗脑血栓形成和抗血小板聚集作用(J.Neurol.Sci.，2007，260，106)。另有文献表明，丁苯酞通过影响花生四烯酸(AA)代谢，选择性抑制AA及其代谢产物介导的多种病理生理过程，可以解除微血管痉挛，抑制血小板聚，抑制血栓烷A₂的合成，清除自由基等，从而通过多种途径，多个环节阻断脑缺血引起的病理生理发展过程，保护神经元，修复神经功能(J.Cardiovasc.Pharmacol.，2004，43，876；ActaPharmacol.Sin.，1998，19，117)。

丁苯酞((S/R)-NBP)分子中含有一个手性碳原子，故具有两种对映异构体，即(S)-丁苯酞((S)-NBP)和(R)-丁苯酞((R)-NBP)。据文献报道，(S)-NBP和(R)-NBP在多种生物活性中存在差异。在体外抑制血小板功能的实验和体内抗血栓实验表明，(S/R)-、(S)-和(R)-NBP均可剂量依赖性地抑制二磷酸腺苷(ADP)，花生四烯酸(AA)和胶原蛋白(collagen)诱导的血小板聚集和实验性血栓的形成，其作用强度均以(S)-NBP为最显著，(R)-NBP较弱，(S/R)-NBP介于两者之间(Chin.J.New Drug.，2005，14，420)。此外，(S)-NBP在保护脑微循环、降低细胞凋亡、抑制炎症反应、改善线粒体功能以及神经保护作用等方面较(R)-NBP突出(JPharmacol Exp Ther.，2007，321，902.Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol，2009，379，565)。由此可见，以单一构型的NBP为母核进行结构改造，获得活性更好的化合物必将成为当前这一领域药物研发的热点。

研究表明，丁苯酞开环衍生物2-(α-羟正戊基)苯甲酸钾盐(PHPB)，是一种水溶性丁苯酞前药，无论口服或静脉注射，在体内经酶或化学作用可迅速、完全地转变成丁苯酞而发挥药效。前药PHPB静脉给药后，体内转化为丁苯酞的药代动力学特征，及主要代谢产物和排泄途径均与直接静脉给予丁苯酞的极为相似(Patent PCT/CN02/00320.2002)。且PHPB口服，体内转化为丁苯酞的生物利用度较直接口服丁苯酞提高近一倍，完全克服了丁苯酞所存在的水溶性差的缺点。另外，药理研究发现PHPB可以显著改善缺血后的局部脑血流，抑制血小板过度聚集和血栓形成，并可以通过多种机制避免缺血再灌注造成的线粒体功能损伤，特别是保护线粒体能量代谢以及减少线粒体凋亡通路的激活，是一个具有良好开发前景的新型抗脑缺血药物(JPharmacol Exp Ther.，2006，317，973)。

异山梨醇是一种利尿药，临床上主要用于脑积水和青光眼的治疗。此外，该化合物也具有一定的抑制血小板聚集和粘附作用，有利于心脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍的预防和治疗。近年来有文献报道，含有异山梨醇这种特殊结构的前药能够与哺乳动物血浆中的丁酰胆碱酯酶特异结合，而后者作为体内一种重要的酯酶能够水解外源性的前药或酯类化合物。因此，基于异山梨醇结构设计的前药能够利用丁酰胆碱酯酶的水解作用而更好的转化为原药而发挥作用(Chem.Biol.Interact.，2005，157-158，317)。

2-(α-羟基正戊基)苯甲酸作为丁苯酞的一种开环衍生物，它能在体内环合形成丁苯酞，从而发挥抗脑缺血和抗血栓作用(J.Pharmacol.Exp.Ther.，2006，317，973)。本发明依据前药拼合原理，以光学活性的丁苯酞开环衍生物2-(α-羟基正戊基)苯甲酸为先导化合物，通过不同的连接基团，将其与异山梨醇杂合，设计合成了一种光学活性的丁苯酞开环衍生物。

发明内容

本发明公开了一种光学活性的丁苯酞开环衍生物、其制备方法及医药用途。药理实验证明，该类化合物具有良好的抗血小板聚集活性、抗血栓活性、抗脑缺血活性和神经保护作用，因此，它们可用于预防和治疗与血小板聚集相关的疾病，这类疾病包括心肌梗死、心绞痛、心律失常、冠心病、脑缺血、中风、脑梗死或缺血性神经退行性疾病。

本发明的化合物如通式I所示：

其中：

R代表氢原子、C₁-C₆直链或支链烷基、NR¹R²；

R¹和R²可相同或不同，并各自独立地代表氢原子、C₁-C₄烷基或R¹和R²与其所连接的氮原子一起形成5至7元脂肪杂环或芳杂环，该环基可任意地由下述相同或不同的取代基单取代至五取代，所述取代基包括：C₁-C₆直链或支链烷基、C₁-C₆直链或支链烷氧基、C₁-C₆直链或支链羟基或卤素；

X代表氧原子或硫原子；

Y代表氧原子或硫原子；

式I中两个手性中心(分别用*1，*2表示)为S构型或R构型。

进一步地，通式I所示的化合物，其特征在于：

R代表氢原子、二甲胺基、二乙胺基、二丙胺基、二正丁胺基、吡咯基、哌啶基、吗啡啉基、咪唑基、4-羟基哌啶基、4-甲基哌啶基、N-甲基哌嗪基或N-羟乙基哌嗪基；

X代表氧原子；

Y代表氧原子；

式I中手性中心*1和*2均S构型，或手性中心*1和*2均为R构型。

具体来说，通式I所示的化合物优选自下列化合物：

2，5-二{(S)-(+)-2-[(1-乙酰氧基)正戊基]}苯甲酸异山梨醇酯(化合物编号：I₁，下同)：

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-二乙胺基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₂)：

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-哌啶基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₃)：

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-吗啡啉基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₄)：

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-(N-甲基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₅)：

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-(N-羟乙基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₆)：

2，5-二{(R)-(+)-2-[(1-乙酰氧基)正戊基]}苯甲酸异山梨醇酯(I₇)：

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-二乙胺基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₈)：

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-哌啶基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₉)：

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-吗啡啉基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₁₀)：

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-(N-甲基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₁₁)：

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-(N-羟乙基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₁₂)：

本发明优选化合物的对映体和非对映异构体以及其与可药用酸的加合盐构成了本发明的完整部分；在可药用酸中有盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、三氟乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、酒石酸、马来酸、柠檬酸、抗坏血酸、甲磺酸、樟脑酸、草酸等。

下面药理实验中化合物的代号等同于此处代号所对应的化合物。

本发明的另一目的在于提供本发明通式I化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

a)当R为H、C₁-C₆直链或支链烷基时，通式I所示的化合物的制备方法如下：

(S)-或(R)-丁苯酞经皂化、酸化反应制得内酯开环物II，化合物II与酰氯(RCH₂COCl)成酯得到酯类化合物(III)，III再与异山梨醇缩合酯化得到目标化合物(I)；合成路线如下：

其中，R的定义如前所述；

b)当R为NR¹R²时，通式I所示的化合物的制备方法如下：

化合物II与氯乙酰氯成酯得到酯类化合物(IV)，IV再与异山梨醇缩合酯化得到中间体V，V再与不同的胺反应得到目标化合物(I)；合成路线如下：

其中，R的定义如前所述；

由II与酰氯或氯乙酰氯制备III或IV的特征在于，溶剂选自乙腈、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或二氧六环中的一种或多种；碱选自碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、氢氧化钾、吡啶、4-二甲氨基吡啶、三乙胺或N，N-二异丙基甲胺；反应温度为-20℃至回流；

由III制备I，以及由IV制备V的特征在于，溶剂选自乙腈、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜或二氧六环中的一种或多种；缩合剂选自N，N′-二环己基碳二亚胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑或N-羟基琥珀酰亚胺；碱选自吡啶、4-二甲氨基吡啶、三乙胺或N，N-二异丙基甲胺；反应温度为-20℃至回流。

由II与酰氯或氯乙酰氯制备III或IV的特征在于，溶剂为二氯甲烷；碱为三乙胺；反应温度为-15℃。

由III制备I，以及由IV制备V的特征在于，溶剂为二氯甲烷；缩合剂为N，N′-二环己基碳二亚胺；碱为4-二甲氨基吡啶；反应温度为室温。

这些中间体或目标化合物均可按照常规分离技术加以纯化，并且根据需要将其转化为与可药用酸的加成盐。

本发明的进一步目的在于提供一种含有有效量的通式I化合物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐及可药用的载体的药物组合物。

本发明的再一目的是提供本发明通式I化合物在制备预防或治疗与血小板聚集有关的疾病的药物中的应用，尤其可用于制备预防和治疗心脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍药物、抗血小板聚集药物、抗血栓药物、抗痴呆药物、抗糖尿病及其并发症药物。

本发明中，在给予哺乳动物通式I化合物及其药学上可接受的盐，以及这些化合物的溶剂化物(这里统称为“治疗药物”)时，可以单独使用，或者最好是按照规范的制药方法将其与适于药用的载体或稀释剂配合后使用。给药方式可以经各种途径，包括口服、非胃肠道给药或局部给药。这里所指的非胃肠道给药包括但并不限于静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射和透皮给药。

下面是本发明的代表化合物的部分药理试验及结果：

1、体外抗血小板聚集活性研究

实验方法：雄性家兔10只，体重2.0～2.5kg。动物于25℃、相对湿度60～75％的条件下饲养1周后用于实验。取家兔2只，用利多卡因局部麻醉，手术分离颈总动脉取血，采取3.8％枸橼酸钠1∶9抗凝，以500r/min离心10分钟，制备富血小板血浆(PRP)，剩余部分再以3000r/min离心，制备贫血小板血浆(PPP)，按比浊法进行血小板聚集实验。测定管中加入PRP240μL和不同浓度受试药物30μL，温孵5分钟，分别以30μL二磷酸腺苷(ADP)(终浓度为10μmol/L)，30μL凝血酶(终浓度为0.5U/mL)和30μL花生四烯酸(AA)(终浓度为1mmol/L)为诱导剂，观察记录5分钟内最大聚集率。用生理盐水(NS)作对照，计算各受试化合物的抑制率(％)或IC₅₀值。

抑制率(％)＝[对照组5分钟内最大聚集率-待测样品组5分钟内最大聚集率]/[对照组5分钟内最大聚集率]×100％。

测试结果：表1中列出了本发明部分化合物对ADP、AA诱导家兔血小板聚集活性数据，阳性对照药为异山梨醇(IS)、(S)-NBP、(R)-NBP、阿司匹林(ASP)及噻氯匹定(Ticlid)。

表1本发明部分化合物对ADP、AA诱导的家兔血小板聚集的抑制活性

以上药理学数据显示，本发明涉及的光学活性的丁苯酞开环型异山梨醇衍生物能够不同程度地抑制血小板聚集，大部分化合物的体外抑制血小板聚集作用总体上均强于(S)-NBP和(R)-NBP。总体而言，I₁-I₆化合物的对血小板聚集的抑制活性明显高于I₇-I₁₂化合物的抑制活性，这与(S)-NBP的抑制活性高于(R)-NBP相一致。其中，I₁、I₂和I₄-I₆与阳性对照药(S)-NBP相比，具有更强的血小板聚集抑制作用。值得注意的是，化合物I₅的抑制活性最为突出，对于ADP诱导的抗血小板聚集，I₅的抑制活性(0.07mM)分别是IS(1.35mM)、(S)-NBP(0.70mM)和Ticlid(0.36mM)的19.3倍、10.0倍和5.1倍；同样，对于AA诱导的抗血小板聚集，I₅的抑制活性(0.05mM)分别是IS(1.68mM)、(S)-NBP(0.42mM)和ASP(0.14mM)的33.6倍、8.4倍和2.8倍。

从分子结构中可以看出，1分子的I₅由2分子的(S)-NBP和1分子的IS所组成，为了考察I₅单独给药与其组成片段、以及组成片段联合给药对ADP诱导的家兔血小板聚集的抑制活性之间的差异，我们进行了相关实验。

实验方法如前所述。

测试结果：见图1。如图1所示，I₅的两个组成片段(S)-NBP和IS在0.1mM浓度下均可不同程度的抑制血小板聚集，抑制率分别为10.58％和6.94％；(S)-NBP(0.2mM)和IS(0.1mM)联合给药的抑制率为28.4％，较二者单独给药有所提高。但它们的抑制作用均不及I₅(0.1mM)单独给药的效果(抑制率为50.1％)，且存在显著性差异，P＜0.001。以上结果提示，I₅的抗血小板聚集活性远远优于(S)-NBP和IS的效果，即I₅不是两者简单的叠加。

2、体内抗血栓活性研究

实验方法：SD大鼠60只，雌雄各半，体重250～300g。动物于25℃、相对湿度60～75％的条件下饲养1周后用于实验。动物随机分为5组，分别为阴性对照组，阿司匹林(80mg/kg)和(S)-NBP(80mg/kg)阳性对照组，I₅低、高剂量组(80mg/kg；340mg/kg，低剂量与阳性药(S)-NBP等质量，高剂量与阳性药(S)-NBP等摩尔量)，每组12只。连续灌胃给药7天，末次给药1小时后，腹腔注射3％水合氯醛将大鼠麻醉后，仰位固定，颈正中切口，分离右颈总动脉和左颈外静脉，在聚乙烯管的中段放入一根长6cm的丝线(放入管腔前丝线需先称重)，以肝素生理盐水(50U/mL)充满聚乙烯管。将聚乙烯管插入分离出的血管中，使动静脉形成回路。开放血流15分钟后取出丝线，用滤纸吸去残留的血液后立即称重，总重减去丝线重为血栓湿重。将丝线放入60℃烘箱2小时后称重，总重减去丝线重为血栓干重。

测试结果：见图2，阳性对照药为(S)-NBP阿司匹林(ASP)。图2结果表明，大鼠连续给药7天后，各给药组均能显著性减少血栓的湿重和干重，抑制血栓的形成。其中I₅的两个给药组的抑制作用均优于等摩尔的(S)-NBP，且I₅的高剂量给药组明显优于等摩尔的(S)-NBP。此外，I₅的高剂量给药组的抑制作用优于ASP给药组。以上结果表明，I₅可显著抑制血栓的形成，且明显高于等摩尔剂量的(S)-NBP，与ASP略好或相当。

3、体内抗脑缺血活性研究

实验方法：60只SD雄性大鼠，体重300±20g，于25℃、相对湿度60～75％的条件下饲养1周后用于实验。大鼠随机分为5组，分别为伪手术组(Sham)、模型组(Vehicle)、阳性药(S)-NBP对照组(80mg/kg)、受试化合物I₅低、高剂量组(80mg/kg；340mg/kg，低剂量与阳性药(S)-NBP等质量，高剂量与阳性药(S)-NBP等摩尔量)，每组12只动物。采用预防给药方式，连续灌胃给药5天，末次给药后1小时进行大脑中动脉阻断手术。

大鼠大脑中动脉阻断模型(MACo)的建立：大鼠腹腔注射水合氯醛麻醉，仰卧于手术台上，四肢用线绳固定。颈部正中切口，切开皮肤及皮下组织暴露二腹肌肌腹，分离右侧颈动脉(CCA)并结扎其近心端，向上分离右侧颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)；分离、结扎并剪断甲状腺上动脉和枕动脉。结扎并剪断ECA，用动脉夹夹闭ICA远心端，然后在ECA和ICA交叉靠近ECA处剪一小口。将一端涂有石蜡的尼龙线从剪开的小口处插入，经颈内、颈外动脉交叉处插入颈内动脉并继续深入大脑前动脉近端，以阻断该侧大脑中动脉的供血。脑缺血90分钟后，抽出尼龙线至颈外动脉切口处实现大脑中动脉再灌注。手术中室温控制在25-27℃。

3.1、神经行为功能评分：大鼠缺血再灌注24小时后进行神经行为功能评分。评分标准为：0分，无神经损伤症状；1分，不能完全伸展健侧前爪；2分，向健侧转圈；3分，向健侧倾倒；4分，不能自发行走、意识丧失。

3.2、脑组织梗死面积的测定(TTC染色)：大鼠缺血再灌注24小时后用戊巴比妥钠麻醉，快速断头取脑，去除嗅球、小脑和低位脑干，冠状切为5片，然后将脑片置于含有4％TTC及1mol/LK₂HPO₄的溶液中，避光，37℃温孵30分钟，其间每隔7-8分钟翻动一次。经TTC染色后，正常脑组织呈玫瑰红色，梗死组织呈白色。染色后拍照，并用计算机图像分析软件计算梗死面积。脑梗死面积百分比的计算公式为：梗死部分面积/全脑剖面面积×100％。

3.3、脑含水量的测定：缺血再灌注24小时后处死大鼠取出脑组织迅速称取重量，即为脑湿重。然后将脑组织置于105℃烘箱中24小时烘干并称取重量，即为脑干重。脑含水量的计算公式为：脑湿重-脑干重。

3.4、脑组织形态学检查：缺血再灌注24小时后处死大鼠取出脑组织用福尔马林固定，缺血半脑冠状切面，脱水，石蜡包埋，常规HE染色，在光镜下进行病理组织学检查。

测试结果：

3.1、神经功能评分测试结果：见图3，阳性对照药为(S)-NBP。结果如图3所示，与Vehicle组相比，各给药组均能够显著性地降低I/R大鼠的神经行为功能评分，即能够明显改善动物的神经行为功能，其中I₅的高剂量给药组的作用明显优于(S)-NBP组，I₅的低剂量给药组的作用略优于(S)-NBP组。

3.2、大鼠脑组织梗死面积测试结果：见图4，阳性对照药为(S)-NBP。结果如图4所示，与Vehicle组相比，各给药组均能显著减少大鼠脑组织梗死面积，其中I₅的等摩尔剂量给药组(340mg/kg)的抑制作用最强(脑组织梗死面积百分比11.91％)，明显优于等摩尔剂量的(S)-NBP组(19.14％)；等质量给药组(80mg/kg)的抑制作用(脑组织梗死面积百分比17.83％)优于(S)-NBP(19.14％)。

3.3、大鼠脑含水量的测试结果：见图5，阳性对照药为(S)-NBP。图5结果表明，与Vehicle组相比，等摩尔剂量的I₅还能够显著性降低脑缺血再灌注大鼠脑含水量(从86.40±6.99减少到80.02±4.29)，优于等摩尔剂量的(S)-NBP(从86.40±6.99减少到84.25±8.96)；等质量的(S)-5e(从86.40±6.99减少到83.82±4.29)与(S)-NBP(从86.40±6.99减少到84.25±8.96)相当。

3.4、大鼠脑组织形态学的测试结果：见图6，阳性对照药为(S)-NBP。图6结果表明，Sham组大脑皮质神经元基本正常，核居中，未见神经元明显变性、坏死及炎细胞浸润等病理学改变。Model组大脑皮质可见重度变性、坏死，神经元结构模糊，胞体肿胀，尼氏小体减少或消失，出现不同程度的核深染、核固缩、核溶解，神经元数目明显减少。给药组均能不同程度的减轻神经元损伤，神经元变性、坏死程度明显减轻，炎细胞浸润明显减少。与(S)-NBP组相比，等摩尔计量组的I₅改善效果更为显著。

附图说明

图1本发明代表化合物I₅及其组成片段对ADP诱导的家兔血小板聚集的影响

图2本发明代表化合物I₅对大鼠实验性血栓湿重和干重的影响

图3本发明代表化合物I₅在大鼠缺血再灌注(I/R)损伤后对神经行为功能的保护作用

图4本发明代表化合物I₅对大鼠脑组织梗死面积的影响

图5本发明代表化合物I₅对大鼠脑含水量的影响

图6本发明代表化合物I₅对大鼠脑组织形态学的影响

具体实施方式

为了进一步阐述本发明，以下给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本发明进行具体描述，不应当理解为对本发明的限制。

实施例1

2-[(S)-(-)-1-羟基正戊基]苯甲酸(II)的制备

将1.24g(6.5mmol)(S)-丁苯酞溶于含10mL甲醇中，加入10mL2M的NaOH水溶液，回流搅拌0.5小时，减压蒸除甲醇，加10mL蒸馏水稀释，冷却至-5℃，剧烈搅拌下用5％稀盐酸酸化至pH2-3，乙醚(15mL×3)萃取，合并有机层不经任何纯化直接进行下一步反应。

实施例2

2-[(S)-(-)-1-乙酰基正戊基]苯甲酸(III)的制备

将上述含有II的乙醚溶液用200mL二氯甲烷稀释，分别加入2.7mL(19.6mmol)三乙胺，0.5g DMAP，于-15℃下滴加1.4mL(19.6mmol)乙酰氯，滴毕于-15℃下搅拌5小时，加入10mL水，室温搅拌0.5小时，分出有机层，Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩得腊状固体，正己烷重结晶，得白色针状晶体1.06g，收率65％，mp65-66℃.

(c1.00CHCl₃).MS(ESI)：m/z249.1[M-H]^-.IR(cm^-1，KBr)：v_max1412，1691，1734，2958，3450.¹H NMR(300Hz，CDCl₃)：δ0.93(t，3H，CH₃，J＝8.5Hz)，1.37-1.42(m，4H，2×CH₂)，1.88-1.91(m，2H，CH₂)，2.13-2.33(m，3H，COCH₃)，6.61-6.72(m，1H，OCHCH₂)，7.37-7.40(m，1H，ArH)，7.56-7.62(m，2H，ArH)，8.05(d，1H，ArH，J＝8.1Hz)，10.98(brs，1H，COOH).¹³C NMR(75Hz，CDCl₃)：δ172.0，166.5，140.8，133.1，130.3，130.0，127.1，125.7，74.8，41.0，36.3，27.8，22.4，13.8.

实施例3

2-[(S)-(-)-1-乙酰氯基正戊基]苯甲酸(IV)的制备

将上述含有II的乙醚溶液用200mL二氯甲烷稀释，分别加入2.7mL(19.6mmol)三乙胺，0.5g DMAP，于-15℃下滴加1.7mL(19.6mmol)氯乙酰氯，滴毕于-15℃下搅拌5小时，加入10mL水，室温搅拌0.5小时，分出有机层，Na₂SO₄干燥，过滤，浓缩得腊状固体，正己烷重结晶，得白色针状晶体1.11g，收率60％，m.p.67-68℃。

(c1.00CHCl₃).MS(ESI)：m/z283[M-H]^-.IR(cm^-1，KBr)：v_max1412，1691，1734，2958，3450.¹H NMR(300Hz，CDCl₃)：δ0.93(t，3H，CH₃，J＝4.2Hz)，1.37-1.42(m，4H，2×CH₂)，1.88-1.91(m，2H，CH₂)，4.11(m，2H，COCH₂Cl)，6.78(m，1H，OCHCH₂)，7.36-7.42(m，1H，ArH)，7.56-7.62(m，2H，ArH)，8.08(d，1H，ArH，J＝8.1Hz)，10.89(brs，1H，COOH).¹³C NMR(300Hz，CDCl₃)：δ172.0，166.5，140.8，133.1，130.3，130.0，127.1，125.7，74.8，41.0，36.3，27.8，22.4，13.8.

实施例4

2，5-二{(S)-(+)-2-[(1-乙酰氯基)正戊基]}苯甲酸异山梨醇酯(V)的制备

将IV(2.84g，10.0mmol)溶于无水二氯甲烷(50mL)中，加入DCC(2.50g，11.0mmol)和催化量DMAP，室温搅拌0.5小时，再加入异山梨醇(isosorbide，0.73g，5.0mmol)，室温搅拌8小时，过滤，减压浓缩，经柱层析[石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝5∶1]得淡黄色油状物3.05g，收率90％。

(c0.06CHCl₃).MS(ESI)：m/z696.3[M+NH₄]⁺.IR(cm^-1，KBr)：v_max756，1275，1462，1723，2957.¹H NMR(300Hz，CDCl₃)：δ0.89(t，6H，2×CH₃，J＝6.6Hz)，1.00-1.46(m，8H，4×CH₂)，1.70-1.89(m，4H，2×CH₂)，3.91-4.40(m，8H，2×OCH₂，2×CH₂Cl，)，4.71(t，1H，OCH，J＝4.5Hz)，5.07(t，1H，OCH，J＝4.8Hz)，5.33-5.50(m，2H，2×COOCH)，6.59-6.67(m，2H，2×OCHCH₂)，7.26-7.94(m，8H，ArH).¹³C NMR(300MHz，CDCl₃)：δ170.34，166.54，162.02，161.94，146.04，144.91，134.15，134.07，133.97，133.89，131.33，131.23，127.85，127.59，126.41，126.38，86.13，86.01，81.20，81.05，74.85，74.83，72.89，72.87，40.97，36.43，36.29，29.68，28.09，27.94，22.42，22.35，13.94，13.92.HRMS(ESI)：m/zcalcd for C₃₄H₄₀Cl₂O₁₀，[M+H]⁺679.1999；found679.2097.

实施例5

2，5-二{(S)-(+)-2-[(1-乙酰氧基)正戊基]}苯甲酸异山梨醇酯(I₁)的制备

将2-[(S)-(-)-1-乙酰基正戊基]苯甲酸III(2.84g，10.0mmol)溶于无水二氯甲烷(50mL)中，加入DCC(2.50g，11.0mmol)和催化量DMAP，室温搅拌0.5小时，再加入异山梨醇(isosorbide，0.73g，5.0mmol)，室温搅拌8小时，过滤，减压浓缩，经柱层析[石油醚∶乙酸乙酯(v∶v)＝5∶1]得淡黄色油状物2.75g，收率90％。

(c0.06CHCl₃).ee＝99.7％.MS(ESI)：m/z628.4[M+NH₄]⁺.IR(cm^-1，KBr)：v_max763，1247，1461，1728，2958.¹H NMR(300Hz，CDCl₃)：δ0.89(t，6H，2×CH₃，J＝6.8Hz)，1.10-1.55(m，8H，4×CH₂)，1.70-1.91(m，4H，2×CH₂)，2.06(s，6H，2×CH₃)，3.91-4.16(m，4H，2×OCH₂)，4.72(t，1H，OCH，J＝4.4Hz)，5.07(t，1H，OCH，J＝4.4Hz)，5.39-5.50(m，2H，2×COOCH)，6.46-6.58(m，2H，2×OCHCH₂)，7.30-7.95(m，8H，ArH).¹³C NMR(75MHz，CDCl₃)：δ170.15，170.01，165.39，165.20，142.20，142.09，134.15，134.01，132.62，132.47，130.50，130.41，127.21，127.06，126.39，126.25.HRMS(ESI)：m/zcalcd for C₃₄H₄₂O₁₀，[M+H]⁺611.2778；found611.2796.

实施例6

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-二乙胺基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₂)的制备

将V(678mg，1.0mmol)和碳酸钾(552mg，4.0mmol)溶于丙酮(20mL)中，加入二乙胺(0.4ml，4.0mmol)，56-60℃回流反应8小时。过滤，浓缩，残留物经柱层析[二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝50∶1]得淡黄色油状物496mg，收率66％。

(c0.05CHCl₃).ee＝99.0％.MS(ESI)：m/z753.3[M+H]⁺.IR(cm^-1，KBr)：v_max763，1258，1461，1725，2958.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，6H，2×CH₃，J＝6.3Hz)，1.01-1.62(m，12H，4×NCH₃)，1.36-1.41(m，8H，4×CH₂)，1.81-1.88(m，4H，2×CH₂)，2.59-2.67(m，8H，4×NCH2)，3.19-3.37(m，4H，2×NCH₂COO)，3.99-4.16(m，4H，2×OCH₂)，4.73(t，1H，OCH，J＝4.5Hz)，5.04(t，1H，OCH，J＝5.0Hz)，5.39-5.50(m，2H，2×COOCH)，6.53-6.62(m，2H，2×OCHCH₂)，7.27-7.95(m，8H，ArH).¹³C NMR(300MHz，CDCl₃)：δ170.76，169.95，166.00，165.81，143.89，143.76，132.50，132.38，130.34，130.24，127.88，127.76，127.33，127.21，126.39，126.25，86.13，81.06，78.74，74.60，73.36，72.79，72.61，70.68，54.10，47.57，36.51，36.46，28.03，27.99，22.45，22.42，13.96，13.93，12.35.HRMS(ESI)：m/z calcd for C₄₂H₆₀N₂O₁₀[M+H]⁺753.4248；found753.4320.

实施例7

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-哌啶基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₃)的制备

参照实施例6的方法，将V(678mg，1.0mmol)与碳酸钾(552mg，4.0mmol)和哌啶烷(0.4ml，4.0mmol)反应，快速柱层析[二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝40∶1]得淡黄色油状物434mg，收率58％。(c0.06CHCl₃).ee＝99.9％.MS(ESI)：m/z749.4[M+H]⁺.IR(cm^-1，KBr)：v_max750，1260，1462，1723，2958.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，6H，2×CH₃，J＝6.6Hz)，1.35-1.37(m，8H，4×CH₂)，1.79-1.86(m，8H，4×NCH₂CH ₂)，1.95-1.97(m，4H，2×CH₂)，2.61(s，8H，4×NCH₂)，3.34-3.50(m，4H，2×NCH₂COO)，4.11-4.32(m，4H，2×OCH₂)，4.72(t，1H，OCH，J＝4.5Hz)，5.04(t，1H，OCH，J＝4.9Hz)，5.35-5.50(m，2H，2×COOCH)，6.51-6.63(m，2H，2×OCHCH₂)，7.27-7.95(m，8H，ArH).¹³C NMR(300MHz，CDCl₃)：δ170.12，170.12，165.83，165.83，143.77，143.63，132.54，132.43，130.34，130.27，127.22，127.20，126.39，126.30，126.23，126.15，86.13，81.06，76.61，75.57，74.61，73.36，72.83，70.68，56.80，53.76，36.44，29.67，27.98，23.80，22.47，13.94.HRMS(ESI)：m/z calcd for C₄₂H₅₆N₂O₁₀[M+H]⁺749.3935；found749.4020.

实施例8

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-吗啡啉基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₄)的制备

参照实施例6的方法，将V(678mg，1.0mmol)与碳酸钾(552mg，4.0mmol)和吗啡啉(0.35ml，4.0mmol)反应，快速柱层析[二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝40∶1]得淡黄色油状物523mg，收率67％。

(c0.05CHCl₃).ee＝99.8％.MS(ESI)：m/z781.1[M+H]⁺.IR(cm^-1，KBr)：v_max763，1258，1462，1723，2956.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，6H，2×CH₃，J＝6.7Hz)，1.26-1.37(m，8H，4×CH₂)，1.81-1.86(m，4H，2×CH₂)，2.55(t，8H，4×NCH ₂CH₂O，J＝4.5Hz)，3.15-3.30(m，4H，2×NCH₂COO)，3.71(t，8H，4×NCH₂CH ₂O，J＝4.4Hz)，3.99-4.15(m，4H，2×OCH₂)，4.72(t，1H，OCH，J＝4.5Hz)，5.04(t，1H，OCH，J＝5.0Hz)，5.39-5.50(m，2H，2×COOCH)，6.54-6.64(m，2H，2×OCHCH₂)，7.29-7.95(m，8H，ArH).¹³C NMR(300MHz，CDCl₃)：δ169.44，169.41，165.99，165.79，143.63，143.48，132.57，132.47，130.38，130.28，127.99，127.88，127.33，127.21，126.34，126.19，86.12，81.05，78.75，74.63，73.35，73.18，73.01，70.67，66.76，59.70，59.67，53.26，36.44，36.38，28.01，27.96，22.44，22.42，13.97，13.94.HRMS(ESI)：m/z calcd for C₄₂H₅₆N₂O₁₂[M+H]⁺781.3833；found781.3987.

实施例9

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-N-甲基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₅)的制备

参照实施例6的方法，将V(678mg，1.0mmol)与碳酸钾(552mg，4.0mmol)和N-甲基哌嗪(0.45ml，4.0mmol)反应，快速柱层析[二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝30∶1]得淡黄色油状物580mg，收率72％。(c0.05CHCl₃).ee＝99.4％.MS(ESI)：m/z807.4[M+H]⁺.IR(cm^-1，KBr)：v_max750，1260，1462，1723，2958.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，6H，2×CH₃，J＝6.3Hz)，1.26-1.35(m，8H，4×CH₂)，1.84-1.86(m，4H，2×CH₂)，2.53(s，6H，2×NCH₃)，2.79-2.82(m，16H，8×NCH₂)，3.19-3.37(m，4H，2×NCH₂COO)，3.99-4.08(m，4H，2×OCH₂)，4.73(t，1H，OCH，J＝4.5Hz)，5.05(t，1H，OCH，J＝5.0Hz)，5.39-5.49(m，2H，2×COOCH)，6.53-6.63(m，2H，2×OCHCH₂)，7.30-7.95(m，8H，ArH).¹³C NMR(300MHz，CDCl₃)：δ179.96，169.60，166.02，165.91，143.72，143.63，132.54，132.43，130.34，130.25，128.02，127.90，127.26，127.20，126.37，126.23，86.13，81.05，78.75，74.61，73.35，73.10，72.92，70.68，59.47，54.84，52.96，45.94，36.45，28.01，22.45，13.93.HRMS(ESI)：m/z calcd for C₄₄H₆₂N₄O₁₀[M+H]⁺807.4466；found807.4550.

实施例10

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-N-羟乙基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯(I₆)的制备

参照实施例6的方法，将V(678mg，1.0mmol)与碳酸钾(552mg，4.0mmol)和N-羟乙基哌嗪(521mg，4.0mmol)反应，快速柱层析[二氯甲烷∶甲醇(v∶v)＝40∶1]得淡黄色油状物580mg，收率67％。(c0.05CHCl₃).ee＝99.5％.MS(ESI)：m/z867.4[M+H]⁺.IR(cm^-1，KBr)：v_max763，1247，1460，1723，2958.¹H NMR(300MHz，CDCl₃)：δ0.89(t，6H，2×CH₃，J＝6.3Hz)，1.26-1.35(m，8H，4×CH₂)，1.83-1.85(m，4H，2×CH₂)，2.48-2.56(m，20H，8×NCH₂，2×NCH ₂CH₂OH)，3.16-3.31(m，4H，2×NCH₂COO)，3.48-3.65(m，4H，2×NCH₂CHH₂OH)，3.89-4.15(m，4H，2×OCH₂)，4.46(m，1H，OH)，4.72(m，1H，OH)，4.98(t，1H，OCH，J＝4.5Hz)，5.04(t，1H，OCH，J＝5.0Hz)，5.37-5.49(m，2H，2×COOCH)，6.54-6.61(m，2H，2×OCHCH₂)，7.30-7.95(m，8H，ArH).¹³C NMR(300MHz，CDCl₃)δ179.96，169.60，166.02，165.91，143.72，143.63，132.54，132.43，130.34，130.25，128.02，127.90，127.26，127.20，126.37，126.23，86.13，81.05，78.75，74.61，73.35，73.10，72.92，70.68，59.55，59.34，54.84，52.96，45.94，36.45，28.01，22.45，13.93.HRMS(ESI)：m/z calcd for C₄₆H₆₆N₄O₁₂[M+H]⁺867.4677；found867.5745.

Claims

1.通式I所示的一种光学活性的丁苯酞开环衍生物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐：

其中：

R代表氢原子、C₁-C₆直链或支链烷基、NR¹R²；

R¹和R²可相同或不同，并各自独立地代表氢原子、C₁-C₄烷基或R¹和R²与其所连接的氮原子一起形成5至7元脂肪杂环或芳杂环，该环基可任意地由下述相同或不同的取代基单取代至五取代，所述取代基包括：C₁-C₆直链或支链烷基、C₁-C₆直链或支链烷氧基、羟基或卤素；

X代表氧原子或硫原子；

Y代表氧原子或硫原子；

式I中两个手性中心*1，*2表示分别为S构型或R构型。

2.根据权利要求1所述的通式I化合物，其特征在于：

R代表氢原子、甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、二甲胺基、二乙胺基、二丙胺基、二正丁胺基、吡咯基、哌啶基、吗啡啉基、咪唑基、4-羟基哌啶基、4-甲基哌啶基、N-甲基哌嗪基或N-羟乙基哌嗪基；

X代表氧原子；

Y代表氧原子；

式I中手性中心*1和*2均为S构型，或手性中心*1和*2均为R构型。

3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物为：

2，5-二{(S)-(+)-2-[(1-乙酰氧基)正戊基]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-二乙胺基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-哌啶基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-吗啡啉基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-(N-甲基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(S)-(+)-2-[[1-(2-(N-羟乙基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(R)-(+)-2-[(1-乙酰氧基)正戊基]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-二乙胺基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-哌啶基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-吗啡啉基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-(N-甲基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯；

2，5-二{(R)-(+)-2-[[1-(2-(N-羟乙基哌嗪基)乙酰基氧)正戊基]]}苯甲酸异山梨醇酯。

4.权利要求1～3中任一项所述的化合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(S)-或(R)-丁苯酞经皂化、酸化反应制得内酯开环物II，化合物II与酰氯成酯得到酯类化合物(III)，III再与异山梨醇缩合酯化得到目标化合物(I)；合成路线如下：

其中，R的定义如前所述；

b)当R为NR¹R²时，通式I所示的化合物的制备方法如下：

其中，R的定义如前所述；

5.根据权利要求4所述的方法，由II与酰氯或氯乙酰氯制备III或IV的特征在于，溶剂为二氯甲烷；碱为三乙胺；反应温度为-15℃。

6.根据权利要求4所述的方法，由III制备I，以及由IV制备V的特征在于，溶剂为二氯甲烷；缩合剂为N，N′-二环己基碳二亚胺；碱为4-二甲氨基吡啶；反应温度为室温。

7.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的权利要求1所述的化合物或其旋光异构体、对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐及可药用的载体。

8.权利要求1～3中任意一项所述的化合物在制备预防或治疗与血小板聚集有关的疾病的药物中的用途。

9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述与血小板聚集有关的疾病的药物为预防和治疗心脑缺血性疾病及改善心脑循环障碍的药物、抗血小板聚集药物、抗血栓药物、抗脑缺血药物、抗痴呆药物、抗动脉粥样硬化药物、或抗糖尿病及其并发症药物。

10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于所述心脑缺血性疾病是心肌梗死、心绞痛、心律失常、冠心病、脑缺血、中风、脑梗死或缺血性神经退行性疾病。