CN102141551B - 液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及蜂蜜中多类药物残留的检测方法，尤其涉及一种液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法。该方法通过磷酸盐缓冲溶液（pH=8）直接稀释，HLB固相萃取净化，液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定，同位素内标稀释内标法和外标法定量。测定低限磺胺类药物1.0μg/kg，硝基咪唑类药物1.0μg/kg，喹诺酮类药物2.0μg/kg，大环内酯类药物3.0μg/kg，林可胺类药物2.0μg/kg和吡喹酮0.3μg/kg。该方法简便快捷，消耗资源小，检测成本低，所提及的前处理过程、涉及药物类别以及测定所用仪器可以与已有方法进行很好的互补，适用于蜂蜜中多类药物的同时测定要求，可以为维护食品安全和保障我国蜂蜜顺利出口提供有力的技术保障。
Description
技术领域
本发明涉及蜂蜜中多类药物残留的检测方法，尤其涉及一种液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法。
背景技术
上世纪90年代，随着全球经济一体化和食品贸易国际化，食品安全已成为一个全世界关注的焦点、世界性的挑战和全球重要的公共卫生问题，其中药物残留问题是影响动物性食品安全的最主要因素之一，它直接影响到人类健康和进出口贸易，对药物残留进行监控已成为当务之急，世界各国纷纷制定相应的法律法规来限制药物的滥用情况。
蜂蜜是我国重要的出口产品之一，也一直是各国对各种药物残留检测的重点产品。近几年来抗生素滥用的情况日益严重，在蜂蜜中的检出率也逐年增高，对我国的蜂蜜出口造成不利影响，蜂蜜的质量受到日本、欧盟以及美国等国家的特别关注。
目前国内外监控蜂蜜中主要残留药物有磺胺类、硝基咪唑类、大环内酯类、氯霉素类、硝基呋喃代谢物、四环素类和氟喹诺酮类等。由于各类药物物理化学性质差别较大，现有蜂蜜中药物残留分析方法一般按照化学结构相类似的同族药物开发，检测方法专属性强、灵敏度高以满足蜂蜜中药物残留限量不断降低的要求。国家标准、行业标准和大量文献已报道通过筛选法、光谱法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法、液相色谱法和液相色谱串联质谱法等测定技术针对蜂蜜中各类药物残留的情况分类进行测定。
随着人们的食品安全意识提高，一批蜂蜜经常需检测许多种类的药物残留，因此按照传统的分析方法，需要较长的检测周期，较多的人力和物力，检测成本高，不能满足目前药物种类不断增加，分析通量不断提高的需求。随着检测技术的快速发展，蜂蜜中的兽药多残留检测范围目前正逐步从单一类别发展为多种不同类别兽药的同时定性与定量分析。
关于蜂蜜中多类药物同时测定的方法有：中国发明专利申请(申请号：200810195887.9)公开了蜂产品中多类农兽药残留同时检测的方法，样品加入提取液三氯乙酸或高氯酸和提取液醋酸盐、磷酸盐或硼酸盐溶液，控制PH值4.5-9.0；离心，滤液再用固相萃取柱净化，淋洗并抽干固相萃取柱，用草酸-甲醇溶液洗柱，洗脱液用甲醇水溶液定容，液相色谱-串联质谱分析测试，所得的色谱峰与各已知药物的标准色谱峰对照，根据保留时间和质谱离子的丰度确定所检出药物的具体名称。该方法对样品进行一次前处理，即可同时提取磺胺类、喹诺酮类、大环内酯类、林可胺类、硝基咪唑类、β-内酰胺类、四环素类、氯霉素类、磺胺增效剂类、杀虫脒，三唑醇等11大类60多种兽药的药物残留，分析效率高，检测成本大降低。
文献《中国卫生检验杂志》2010，20，959通过乙酸铵水溶液调节pH，甲醇提取，超高液相色谱三重四级杆质谱法快速测定蜂蜜中12种大环内酯和林可酰胺类药物残留，定量限处于0.3-3.0μg/kg。
《Journal of Agricultural and Food Chemistry》，2009，57，1760通过EDTA缓冲溶液提取，OASIS HLB固相萃取柱净化，超高液相色谱-质谱/质谱法测定蜂蜜中大环内酯类、四环素类、喹诺酮类和磺胺类共计17种药物，该方法测定低限为4μg/kg。
为了保证我国蜂蜜产品的质量，建立针对蜂蜜中磺胺类、硝基咪唑类、喹诺酮类、大环内酯类、林可酰胺类和吡喹酮共计6大类54种药物(表1)残留同时检测的方法是非常重要的。
表1各类药物的基本信息
发明内容
为了解决蜂蜜制品药物残留同时检测的技术问题，本发明的目的是提供一种液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法，该方法具有简便快捷，检测成本低等特点。
为了实现上述的目的，本发明采用了以下的技术方案。
液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法，该方法包括以下的步骤：
一、提取
称取5g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞离心管中，加0.1mL同位素内标溶液，加20mL磷酸盐缓冲溶液稀释，混匀，待净化；
二、净化
将蜂蜜稀释溶液转移至HLB固相萃取小柱中，弃去流出液，加20mL水淋洗，抽干，6mL甲醇洗脱，控制流速1mL/min～2mL/min，收集洗脱液，在40℃以下水浴中减压浓缩至近干，用2.0mL甲醇水溶液定容，混匀，溶液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；
三、测定
①标准工作液和样品溶液在设定的液相色谱串联质谱条件下进样，以质量浓度X为横坐标，峰面积的比值Y为纵坐标，绘制5点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中药物的响应值应在仪器检测的线性范围内；
②在上述色谱条件下，判断样品中是否存在相应的被测物，需要满足如下条件：样品溶液中出现的质量色谱峰保留时间与混合基质标准工作液一致，允许偏差小于±2.5％，该色谱峰所对应的药物在设定的质谱定性离子的相对丰度与浓度相当的混合基质标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过设定的规定，则可确定含有该药物。
本方法通过磷酸盐缓冲溶液(pH＝8)直接稀释，HLB固相萃取净化，液相色谱串联质谱法(LC-MS/MS)测定，同位素内标稀释内标法和外标法定量。测定低限磺胺类药物1.0μg/kg，硝基咪唑类药物1.0μg/kg，喹诺酮类药物2.0μg/kg，大环内酯类药物3.0μg/kg，林可胺类药物2.0μg/kg和吡喹酮0.3μg/kg满足目前国内外对蜂蜜中各类药物残留的要求。回收率范围为32.6％～114％；相对标准偏差小于28.9％，可作为蜂蜜中54种药物测定的筛选方法。该方法简便快捷，检测成本低，所提及的前处理过程、涉及药物类别以及测定所用仪器可以与已有方法进行很好的互补，适用于蜂蜜中多类药物的同时测定要求，可以为维护食品安全和保障我国蜂蜜顺利出口提供有力的技术保障。
附图说明
图1为各类药物混合标准品的总离子流图(药物浓度：磺胺类药物1.0μg/kg，硝基咪唑类药物1.0μg/kg，喹诺酮类药物2.0μg/kg，大环内酯类药物3.0μg/kg，林可胺类药物2.0μg/kg，吡喹酮0.3μg/kg)。
图2～图10为空白蜂蜜溶液稀释各类药物混合标准品的选择性离子流图(磺胺类药物1.0μg/kg，硝基咪唑类药物1.0μg/kg，喹诺酮类药物2.0μg/kg，大环内酯类药物3.0μg/kg，林可胺类药物2.0μg/kg，吡喹酮0.3μg/kg)。
具体实施方式
液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法，该方法包括以下的步骤：
一、提取
蜂蜜样品用水稀释后，加入氯化钠和乙腈提取，结果表明乙腈对喹诺酮类药物、大环内酯类药物和林可酰胺类药物中的一些化合物提取效率很低，其中奥比沙星(35)、螺旋霉素(42)、红霉素(46)、林可霉素(51)、氯林可霉素(52)和吡利霉素(53)的提取效率更是小于5％。乙腈无法从水中将这些化合物有效的提取出来，因此本文对蜂蜜样品采用直接进行固相萃取净化的前处理操作。
具体操作：称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞离心管中，加0.1mL同位素内标溶液(磺胺类同位素内标8ng；硝基咪唑类同位素内标40ng；喹诺酮类同位素内标30ng)，加20mL磷酸盐缓冲溶液稀释，混匀，待净化。
二、净化
本发明尝试采用相同的固相萃取条件，比较C18，Oasis(HLB)，MCX三种类型的固相萃取柱净化效果和保留行为。
实验结果表明，MCX净化过程中甲醇作为洗脱剂喹诺酮类药物脱尾严重，C18固相萃取柱因为蜂蜜中含有大量的糖分而存在阻塞现象，因此蜂蜜样品直接用磷酸盐缓冲溶液(pH＝8)稀释，HLB固相萃取柱净化，水淋洗，甲醇洗脱。
具体操作：将蜂蜜稀释溶液转移至HLB固相萃取小柱中，弃去流出液，加20mL水淋洗，抽干，6mL甲醇洗脱，控制流速1mL/min～2mL/min，收集洗脱液，在40℃以下水浴中减压浓缩至近干，用2.0mL甲醇-水(3+7，V1+V2)定容，混匀，溶液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定。
三、测定
标准工作液和样品溶液在表2和表3设定的液相色谱串联质谱条件下进样，以质量浓度X(μg/kg)为横坐标，峰面积的比值Y为纵坐标，绘制5点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中药物的响应值应在仪器检测的线性范围内。在上述色谱条件下，判断样品中是否存在相应的被测物，需要满足如下条件：样品溶液中出现的质量色谱峰保留时间与混合基质标准工作液一致，允许偏差小于±2.5％，该色谱峰所对应的药物在表2中的质谱定性离子的相对丰度与浓度相当的混合基质标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表3的规定，则可确定含有该药物。
表2为各类药物的母离子、子离子和碰撞能量等质谱参数。在表2和表3设定的液相色谱串联质谱条件下，空白蜂蜜样品添加回收实验的回收率范围和精密度见表4，各类药物的质谱色谱峰见图1，图2～图10。
表2各类药物的质谱参数
表3液相色谱串联质谱的仪器条件参数
表4蜂蜜中多类药物添加回收率和精密度(n＝6)
Claims (1)
1.液相色谱串联质谱同位素稀释法同时测定蜂蜜中多类药物残留的方法，其特征在于该方法包括以下的步骤：
一、提取
称取5g试样，精确到0.01g，置于50mL具塞离心管中，加0.1mL同位素内标溶液，同位素内标溶液的加入为：磺胺类同位素内标8ng，硝基咪唑类同位素内标40ng，喹诺酮类同位素内标30ng；加20mL磷酸盐缓冲溶液稀释，混匀，待净化；
二、净化
将蜂蜜稀释溶液转移至HLB固相萃取小柱中，弃去流出液，加20mL水淋洗，抽干，6mL甲醇洗脱，控制流速1mL/min～2mL/min，收集洗脱液，在40℃以下水浴中减压浓缩至近干，用2.0mL甲醇水溶液定容，混匀，溶液过0.22μm滤膜，供液相色谱串联质谱仪测定；
三、测定
①标准工作液和样品溶液在设定的液相色谱串联质谱条件下进样，以质量浓度X为横坐标，峰面积的比值Y为纵坐标，绘制5点标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中药物的响应值应在仪器检测的线性范围内；
②在上述的液相色谱串联质谱条件下，判断样品中是否存在相应的被测物，需要满足如下条件：样品溶液中出现的质量色谱峰保留时间与混合基质标准工作液一致，允许偏差小于±2.5%，该色谱峰所对应的药物在设定的质谱定性离子的相对丰度与浓度相当的混合基质标准工作液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过设定的规定，则可确定含有该药物；
所述的步骤三设定的各类药物的母离子、子离子和碰撞能量质谱参数如下：
所述的步骤三设定的液相色谱串联质谱的仪器条件参数如下：
。
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|---|---|---|---|---|
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| CN103134882B (zh) * | 2013-02-16 | 2014-03-19 | 山东大学 | 岩白菜素在动物体内代谢产物的测定方法 |
| CN103454338B (zh) * | 2013-09-12 | 2015-09-09 | 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 液相色谱串联质谱/质谱法同时测定棉花中多种农药残留的方法 |
| CN105745534B (zh) * | 2013-10-28 | 2018-04-13 | 株式会社岛津制作所 | 使用色谱仪的多组分定量分析方法 |
| CN104849383B (zh) * | 2015-04-16 | 2016-08-24 | 衢州出入境检验检疫局综合技术服务中心 | 快速溶剂萃取-凝胶色谱净化-lc/ms/ms结合测定蜂花粉中硝基咪唑类药物的方法 |
| CN104880523B (zh) * | 2015-04-28 | 2017-05-31 | 衢州出入境检验检疫局综合技术服务中心 | 高效液相色谱串联质谱法测定蜂蜡中硝基呋喃类代谢物的方法 |
| CN104931610B (zh) * | 2015-05-28 | 2017-05-31 | 衢州出入境检验检疫局综合技术服务中心 | 高效液相色谱串联质谱法同时测定蜂蜡中16种磺胺类药物的方法 |
| CN105628806B (zh) * | 2015-12-22 | 2017-06-16 | 三明出入境检验检疫局综合技术服务中心 | 一种蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测方法 |
| CN105758955A (zh) * | 2016-02-26 | 2016-07-13 | 清华大学 | 一种测定水环境中抗生素的方法 |
| CN106596773A (zh) * | 2016-12-16 | 2017-04-26 | 深圳天祥质量技术服务有限公司 | 动物源食品中多种兽药残留的同时快速筛选测试方法 |
| CN106770758A (zh) * | 2016-12-17 | 2017-05-31 | 黑龙江省兽药饲料监察所 | 一种饲料中四环素类药物及其异构体的检测方法 |
| CN108982715A (zh) * | 2018-06-26 | 2018-12-11 | 辽宁禾丰牧业股份有限公司 | 一种饲料中抗生素类药物的检测方法 |
| CN109211649A (zh) * | 2018-08-11 | 2019-01-15 | 桂林理工大学 | 一种分离富集水环境中磺胺类抗生素的方法 |
| CN109342632A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-02-15 | 上海市环境科学研究院 | 微波萃取-固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测水产养殖底泥中15种抗生素的方法 |
| CN113466374A (zh) * | 2021-07-02 | 2021-10-01 | 上海冠生园蜂制品有限公司 | 一种蜂蜜中氯丙嗪残留量的测定方法 |
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Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101358953A (zh) * | 2008-09-18 | 2009-02-04 | 中华人民共和国江苏出入境检验检疫局 | 蜂产品中多类农兽药残留同时检测的方法 |
| CN101571526A (zh) * | 2009-06-11 | 2009-11-04 | 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 同时测定蜂王浆中多种硝基咪唑类药物残留量的检测方法 |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101358953A (zh) * | 2008-09-18 | 2009-02-04 | 中华人民共和国江苏出入境检验检疫局 | 蜂产品中多类农兽药残留同时检测的方法 |
| CN101571526A (zh) * | 2009-06-11 | 2009-11-04 | 浙江出入境检验检疫局检验检疫技术中心 | 同时测定蜂王浆中多种硝基咪唑类药物残留量的检测方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 左志辉等.固相萃取-液相色谱串联质谱法同时定量检测蜂蜜中28种抗生素类药物残留的研究.《药物分析杂志》.2009,第29卷(第07期),1196-1201. * |
| 徐锦忠等.液相色谱-电喷雾串联质谱测定蜂蜜中8种大环内酯类药物残留.《分析化学》.2007,第35卷(第02期),166-170. * |
| 李小运等.液相色谱-质谱联用技术测定蜂蜜中的11种磺胺类残留.《食品研究与开发》.2010,第31卷(第04期),105-107. * |
| 陈晓红等.蜂蜜中4种氟喹诺酮残留的高效液相色谱-质谱测定.《中国卫生检验杂志》.2007,第17卷(第09期),1572-1573,1585. * |
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