CN104880516A - 能同时检测酱香型白酒中6种人工合成甜味剂的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种能同时检测酱香型白酒中6种人工合成甜味剂的方法，它是将样品直接稀释，过0.45μm滤膜上机分析。采用C18柱分离，以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相，梯度洗脱，以保留时间和质荷比对分离出的组分进行定性，用峰面积进行定量。结果表明，6种甜味剂的质量浓度与其峰面积在一定范围内呈良好线性关系，10-200ng/ml范围内相关系数为0.9915-0.9943，20-500ng/ml范围内相关系数为0.9961-0.9983，检出限均为10μg/kg，相对标准偏差2.1%-7.9%。
Description
技术领域
本发明专利涉及一种能同时检测酱香型白酒中6种人工合成甜味剂的方法，属于人工合成甜味剂的检测领域。
背景技术
白酒是我国的传统消费品，历史悠久，源远流长，具有庞大的消费群体。贵州素有酒乡之称，白酒的发展在贵州经济中占有重要的位置。酿酒工业，特别是发展白酒工业，对促进贵州经济的发展具有举足轻重的地位和作用。
甜味剂是一类重要的食品添加剂，但近几年有研究发现糖精钠、甜蜜素等一些人工甜味剂具有潜在致癌、致畸、损害肾功能的副作用。随着食品毒理学研究的不断发展，对食品添加剂提出更加严格的卫生要求。国家强制性标准GB2760-2011《食品添加剂使用卫生标准》规定了白酒中严禁添加任何的甜味剂。当前，在酒类产品生产中，对甜味剂的使用也存在不少问题，如：1、在发酵酒中违法添加非自生发酵产物，如糖精钠、甜蜜素等甜味剂；2、各企业原材料进货检验把关不严，造成白酒中被动添加人工甜味剂的问题十分突出。
因此，人工甜味剂在生产中的合法使用，不仅关系到产品的品质，更关系到消费者的安全与健康。目前针对白酒中甜味剂检测方法较多，最普遍的是液相色谱-紫外检测法，另外还有离子色谱法、液相色谱-蒸发光散射检测法。上述几种方法主要是针对单一甜味剂或者对两种甜味剂进行测定，检测灵敏度也有待提高，而且由于甜蜜素与三氯蔗糖的紫外吸收较弱，不适宜使用紫外检测器，使得多种甜味剂同时检测受到限制。也有利用液相色谱-飞行时间质谱联用检测多种甜味剂的报道，但飞行时间质谱属于高分辨质谱，造价高昂，不宜在我国普遍推广。
发明内容
本发明要解决的技术问题是，提供一种效率高、省时、高效的能同时检测酱香型白酒中6种人工合成甜味剂的方法，可以克服现有技术的不足。
本发明的技术方案是：能同时检测酱香型白酒中6种人工合成甜味剂的方法包括以下步骤：
a、取标准品甜蜜素、糖精钠、安塞蜜、阿斯巴甜、三氯蔗糖和纽甜分别配制成1.00mg/ml的标准储备液，于-4℃冰箱中储存备用；
b、将步骤a中的6类标准储备液分别取于容量瓶，用空白稀释液配制成500ng/ml，200 ng/ml，100 ng/ml，50 ng/ml，20 ng/ml，10 ng/ml的标准溶液，过0.45μm滤膜，待上机；
c、在b步骤基础上，采用C18柱分离，以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相，梯度洗脱，以保留时间和质荷比对分离出的组分进行定性，用峰面积进行定量得到6种甜味剂的回归方程及相关系数；并将回归方程及相关系数输入计算机；
d、分别取酿酒原料、大曲和成品酒10.00g，纯水稀释定容至100ml，涡旋提取后，静置后取清液过0.45μm滤膜，待分析；
e、取d步骤中待分析检测样品，采用C18柱分离，以0. 1%甲酸水溶液-甲醇为流动相，梯度洗脱，以保留时间和质荷比对分离出的组分进行定性，用峰面积进行定量得出步骤d样品中的安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜及三氯蔗糖的数值。
上述的能检测酱香型型白酒中6种人工合成甜味剂的方法是，步骤c和步骤e中的监测分析分为三段进行，分别为0-2.30分钟、2.31-3.30分钟、3.31-4.5分钟。
与现有技术比较，本发明建立了酱香型白酒中安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜及三氯蔗糖6种人工合成甜味剂的高效液相串联质谱同时检测的方法。该方法快速、高效、准确，可同时测定6种甜味剂，检测限10μg/kg，能够在4.5min内完成样品的分析。白酒样品只需直接稀释，即可进样检测，前处理简单。该方法便于广大白酒企业对原材料把关和成品检验，以及监管部门抽查时使用。
具体实施方式
实施例， 1 实验部分
1.1 试剂与仪器
超高效液相色谱串联质谱仪(Waters公司 UPLC 高效液相色谱仪串联Quattro Premier XE质谱仪)；漩涡振荡器(IKA)；
甲酸，甲醇，乙腈均为色谱纯，乙酸铵（分析纯），超纯水；
空白稀释液：考虑到白酒中乙醇浓度较高，配置标准溶液时取空白样品50.00g于500ml容量瓶中，用纯水稀释至刻度作为标准稀释液，以降低样品的的基质效应。
标准品：甜蜜素(sodium cyclamate)，糖精钠(sodium saccharim)，购于SUPELCO；安塞蜜(potassium acesulfame)，阿斯巴甜(aspartame），三氯蔗糖(sucralose），购于Dr Ehrenstorfer GmbH；纽甜(neotame），购于USP。将上述标准品分别配制成1.00mg/ml（少量水溶解，甲醇定容）的标准储备液于-4℃冰箱中储存备用。
标准混合液：分别吸取标准储备液于容量瓶，用空白稀释液配制成500ng/ml，200 ng/ml，100 ng/ml，50 ng/ml，20 ng/ml，10 ng/ml的标准溶液，过0.45μm滤膜，待上机。
仪器参数条件：
液相条件：
色谱柱： BEH C18, 100×2.1mm, 1.7μm
进样量：10.00μL
流动相：A：0. 1%甲酸水溶液 B：甲醇
柱温：35±1oC
洗脱方式：梯度洗脱，见表1
表1 梯度洗脱
质谱条件：
扫描方式：多级反应监测（MRM）；ESI-；
微管（Capillary） (kV)：2.50
提取器（Extractor） (V)：3.00
射频透镜（RF Lens） (V)：0.0
源温度（Source Temperature） (°C)：110
溶剂温度（Desolvation Temperature） (°C) ：350
锥气流量（Cone Gas Flow） (L/Hr)：50
脱溶剂气流量（Desolvation Gas Flow） (L/Hr)：600
1.3试验方法
酿酒原料：
称取已碎好并混匀的样品10.00g，纯水稀释定容至100ml，涡旋提取后，静置后取清液过0.45μm滤膜，待分析。
酒成品：
称取10.00g样品，纯水稀释定容至100ml，涡旋混匀，过0.45μm滤膜，待分析。
检测的优化
2.1 色谱条件的优化
对常用的流动相甲醇-水和乙腈-水进行对比，实验结果表明使用甲醇-水作流动相时灵敏度略高。又将0.1%甲酸水溶液，10mM乙酸铵溶液分别与甲醇作流动相，发现流动相中含有10mM乙酸铵时，纽甜的响应较高，但糖精钠响应较低。当流动相中含有0.1%甲酸时，安赛蜜、糖精钠及甜蜜素的响应都较高，同时峰的峰形较好。因此本文采用0.1%甲酸水溶液-甲醇作流动相。
质谱条件的优化
本文采用ESI-的多级监测模式，因驻留时间（Dwell time）的频率会影响灵敏度，所以，在驻留时间（Dwell time）为0.5、0.3、0.2及0.1时分别进行监测。结果表明，不同Dwell time对色谱峰的峰形及灵敏度都有影响，因此，将监测分析分为三段进行，并得到特征离子（见表2）及优化后的6种甜味剂混合标准溶液的选择性离子监测色谱图。
表2母离子、子离子、Dwell time及碰撞能量
注：星号（*）为定量离子。
线性关系
配置相同浓度的糖精钠、安赛蜜、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜和三氯蔗糖标准溶液（10 ng/ml ，20 ng/ml，，50 ng/ml，100 ng/ml，200 ng/ml ，500ng/ml），按优化后的条件测定。以峰面积外标法定量，得到该6种甜味剂的回归方程及相关系数见表3。
表3 标准曲线的线性参数
2.4精密度：
取放置5天后浓度为20ng/ml的标准溶液重复进样10次，计算出各组分峰面积的相对标准偏差（RSD%）：糖精钠2.22%，安塞蜜2.15%，甜蜜素2.12%，阿斯巴甜7.90%，纽甜2.65%，三氯蔗糖3.74%。将回归方程及相关系数输入计算机；
2.5 样品分析
此次样品取至于仁怀市茅台镇某大型酒厂：高粱10个，大曲10个，成品酒10个。
将上述样品分别纯水稀释定容至100ml，涡旋提取后，静置后取清液过0.45μm滤膜，待分析；
取待分析检测样品，采用C18柱分离，以0. 1%甲酸水溶液-甲醇为流动相，梯度洗脱，以保留时间和质荷比对分离出的组分进行定性，用峰面积进行定量得出步骤d样品中的安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜及三氯蔗糖的数值；结果均未检出安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜及三氯蔗糖，符合国家标准对酱香型白酒不得使用人工甜味剂的要求。
Claims (2)
1.一种能同时检测酱香型白酒中6种人工合成甜味剂的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：
a、取标准品甜蜜素、糖精钠、安塞蜜、阿斯巴甜、三氯蔗糖和纽甜分别配制成1.00mg/ml的标准储备液，于-4℃冰箱中储存备用；
b、将步骤a中的6类标准储备液分别取于容量瓶，用空白稀释液配制成500ng/ml，200 ng/ml，100 ng/ml，50 ng/ml，20 ng/ml，10 ng/ml的标准溶液，过0.45μm滤膜，待上机；
c、在b步骤基础上，采用C18柱分离，以0.1%甲酸水溶液-甲醇为流动相，梯度洗脱，以保留时间和质荷比对分离出的组分进行定性，用峰面积进行定量得到6种甜味剂的回归方程及相关系数；并将回归方程及相关系数输入计算机；
d、分别取酿酒原料、大曲和成品酒10.00g，纯水稀释定容至100ml，涡旋提取后，静置后取清液过0.45μm滤膜，待分析；
e、取d步骤中待分析检测样品，采用C18柱分离，以0. 1%甲酸水溶液-甲醇为流动相，梯度洗脱，以保留时间和质荷比对分离出的组分进行定性，用峰面积进行定量得出步骤d样品中的安赛蜜、糖精钠、甜蜜素、阿斯巴甜、纽甜及三氯蔗糖的数值。
2.根据权利要求1所述的能同时检测酱香型白酒中6种人工合成甜味剂的方法，其特征在于：步骤c和步骤e中的监测分析分为三段进行，分别为0-2.30分钟、2.31-3.30分钟、3.30-4.5分钟。
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