CN105628806B - 一种蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测方法，包括：样品制备；样品提取；样品净化；将待测液采用超高效液相色谱‑串联质谱法进行分析检测，将超高效液相色谱‑串联质谱检测所获得分取比例及溴氰虫酰胺的峰面积代入下式进行计算，以获得待测液中溴氰虫酰胺的测定值；

Description

一种蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测方法

技术领域

本发明具体涉及一种蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测方法。

背景技术

蜂蜜由于其丰富的营养价值以及优良的保健作用受到越来越多人的青睐。我国是蜂蜜生产、销售和出口大国，随着蜂产品市场日益繁荣，蜂产品的质量安全问题逐渐突显出来。溴氰虫酰胺(cyantraniliprole)是杜邦公司开发的第二代新型邻甲酰胺基苯甲酰胺结构的杀虫剂，该杀虫剂已于2012年正式上市。该类杀虫剂的最大特点是，其只作用存在于昆虫体内的鱼尼丁(肌肉)受体(RyR)，几乎对所有重要的鳞翅目害虫均具有优良的防效。目前该类农药已在美国、加拿大、澳大利亚、菲律宾、印尼等国家登记使用。由于该类杀虫剂用药后持效期较长，基于安全考虑发达国家如美国、加拿大等已对其制定了限量标准。因此，一旦发达国家发起贸易壁垒，如果没有有效的应对措施，将会严重影响到蜂产品的进出口业务。我国目前尚未有溴氰虫酰胺的限量标准，且检测方法文献报道也较少，目前只见豇豆中溴氰虫酰胺的检测方法报道，未见峰蜜中溴氰虫酰胺检测技术报道，由于豇豆与蜂蜜基质成分差距较大，无法直接将豇豆中溴氰虫酰胺的检测方法用于峰蜜中溴氰虫酰胺的检测，因此急需开发简便、快速的蜂蜜中溴氰虫酰胺检测方法。

发明内容

本发明要解决的技术问题，在于提供一种蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测方法。

本发明是这样实现的：一种蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测方法，包括以下步骤：

(1)样品制备：取500g蜂蜜样品，用均质器混匀，作为试样，于-18℃密封保存，备用；

(2)样品提取：称取5.00g试样于具塞离心管中，加入5mL水，于液体混匀器上混匀1min使样品溶解，加入25mL提取剂，用均质器均质3min，漩涡混匀1min，超声提取5min，4000r/min离心5min，收集上层有机相，残渣再用25mL提取剂重复提取一次，合并有机相于鸡心瓶，于45℃水浴旋转蒸发至干，然后加2mL正己烷溶解，得到提取液；

(3)样品净化：在OasisHLB固相萃取柱上层加3g无水硫酸钠，用3mL丙酮和3mL正己烷活化，取提取液过柱，再用2mL正己烷洗脱鸡心瓶并过柱，控制流速在3mL/min内，弃去全部流出液；用5mL二氯甲烷淋洗净化OasisHLB固相萃取柱，收集全部洗脱液于5mL刻度比色管中，于50℃氮气吹干，用1mL混合液溶解，过膜，获得待测液；

(4)将待测液采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析检测，具体地，将待测液进行上机分析以获得待测液中被测物即溴氰虫酰胺的响应值，之后根据待测液中被测物的响应情况选取响应值相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中溴氰虫酰胺的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置一空白对照。

(5)将超高效液相色谱-串联质谱检测所获得分取比例及溴氰虫酰胺的峰面积代入下式(1)进行计算，以获得待测液中溴氰虫酰胺的测定值；

其中：

X—试样中溴氰虫酰胺残留含量，μg/kg；

A—待测液中溴氰虫酰胺的峰面积；

As—标准工作溶液中溴氰虫酰胺的峰面积；

c—标准工作溶液中溴氰虫酰胺浓度，μg/L；

V—待测液最终定容体积，mL；

m—试样的质量，g；

R—分取比例。

进一步地，所述超高效液相色谱条件为：

色谱柱：Thermo Syncronnic C18柱(50mm×2.1mm，1.7μm)；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；梯度洗脱程序如下：

进一步地，所述质谱条件为：

离子源：电喷雾ESI，正离子；扫描方式：多反应监测MRM；雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；监测离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气体能量、碰撞池出口电压如下：

进一步地，所述步骤(2)中，提取剂包括体积比丙酮：正己烷：二氯甲烷＝5：10：10的丙酮、正己烷和二氯甲烷。

进一步地，所述步骤(3)中，所述混合液包括体积比乙腈：5mmol/L乙酸铵：甲酸＝20：80：0.1的乙腈、5mmol/L乙酸铵和甲酸。

本发明的优点在于：填补了我国在蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测技术上的空白，且具有易于操作及检测准确性高的优点。

具体实施方式

一种蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测方法，包括以下步骤：

(1)样品制备：取500g蜂蜜样品，用均质器混匀，作为试样，于-18℃密封保存，备用；试样制备过程必须防止试样受到污染或发生残留物含量的变化，

(2)样品提取：称取5.00g试样于具塞离心管中，加入5mL水，于液体混匀器上混匀1min使样品溶解，加入25mL提取剂，用均质器(10000r/min)均质3min，漩涡混匀1min，超声提取5min，4000r/min离心5min，收集上层有机相，残渣再用25mL提取剂重复提取一次，合并有机相于鸡心瓶，于45℃水浴旋转蒸发至干，然后加2mL正己烷溶解，得到提取液；所述提取剂包括体积比5：10：10的丙酮、正己烷和二氯甲烷；

(3)样品净化：在OasisHLB固相萃取柱上层加3g无水硫酸钠，用3mL丙酮和3mL正己烷活化，取提取液过柱，再用2mL正己烷洗脱鸡心瓶并过柱，控制流速在3mL/min内，弃去全部流出液；用5mL二氯甲烷淋洗净化OasisHLB固相萃取柱，收集全部洗脱液于5mL刻度比色管中，于50℃氮气吹干，用1mL混合液溶解，过膜，获得待测液；所述混合液包括体积比乙腈：5mmol/L乙酸铵：甲酸＝20：80：0.1的乙腈、5mmol/L乙酸铵和甲酸；

(4)将待测液采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析检测，具体地，将待测液进行上机分析以获得待测液中被测物即溴氰虫酰胺的响应值，之后根据待测液中被测物的响应情况选取响应值相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中溴氰虫酰胺的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置一空白对照；

所述超高效液相色谱条件为：

色谱柱：Thermo Syncronnic C18柱(50mm×2.1mm，1.7μm)，或其它等效柱；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；梯度洗脱程序如下：

表1

所述质谱条件为：

离子源：电喷雾ESI，正离子；扫描方式：多反应监测MRM；雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；监测离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气体能量、碰撞池出口电压如下：

表2

(5)将超高效液相色谱-串联质谱检测所获得分取比例及溴氰虫酰胺的峰面积代入下式(1)进行计算，以获得待测液中溴氰虫酰胺的测定值；

其中：

X—试样中溴氰虫酰胺残留含量，μg/kg；

A—待测液中溴氰虫酰胺的峰面积；

As—标准工作溶液中溴氰虫酰胺的峰面积；

c—标准工作溶液中溴氰虫酰胺浓度，μg/L；

V—待测液最终定容体积，mL；

m—试样的质量，g；

R—分取比例。

实施例1：待测样品——蜂蜜

1.1样品制备：取500g代表性样品，用均质器混匀，装入洁净容器密封并做好标识，作为试样。样品制备过程必须防止试样受到污染或发生残留物含量的变化，样品于-18℃冰箱内保存。

1.2本底测试：往六个50mL具塞离心管中各称取5.00g(精确到0.01g)1.1中的所述试样，接着依次依照本发明中步骤(2)、步骤(3)及步骤(4)进行操作，并将最后计算所得的各实际测定值和平均值如表3所示，该平均值即为本底值。

表3蜂蜜中溴氰虫酰胺的本底值测定数据

1.3验证一：添加1μg/kg溴氰虫酰胺

往六个50mL具塞离心管中各称取5.00g(精确到0.01g)1.1中的所述试样(具体见表4中的称样量)，然后往每个离心管中添加50μg/L的溴氰虫酰胺标准溶液0.1mL，接着依次依照本发明中步骤(2)、步骤(3)及步骤(4)进行操作，并将最后计算所得的各实际测定值列于表4中。

表4蜂蜜样品中添加1μg/kg的溴氰虫酰胺的相关数据

1.4验证二：添加5μg/kg溴氰虫酰胺

往六个50mL具塞离心管中各称取5.00g(精确到0.01g)1.1中的所述试样(具体见表5中的称样量)，然后往每个离心管中添加100μg/L的溴氰虫酰胺标准溶液0.25mL，接着依次依照本发明中步骤(2)、步骤(3)及步骤(4)进行操作，并将最后计算所得的各实际测定值列于表3中。

表5蜂蜜样品中添加5μg/kg的溴氰虫酰胺的回收率数据

由上述实验结果可知，本发明应用于检测蜂蜜样品中溴氰虫酰胺含量时，测定低限为：1μg/kg，回收率为80-110％，在1.0～100μg/L范围内标准曲线线性关系良好，相关系数r大于0.999。

从各自的验证结果中的回收率及RSD的大小可判断出本发明的检测方法不仅可行，而且准确性高。

Claims (1)

1.一种蜂蜜中溴氰虫酰胺的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)样品制备：取500g蜂蜜样品，用均质器混匀，作为试样，于-18℃密封保存，备用；

(2)样品提取：称取5.00g试样于具塞离心管中，加入5mL水，于液体混匀器上混匀1min使样品溶解，加入25mL提取剂，用均质器均质3min，漩涡混匀1min，超声提取5min，4000r/min离心5min，收集上层有机相，残渣再用25mL提取剂重复提取一次，合并有机相于鸡心瓶，于45℃水浴旋转蒸发至干，然后加2mL正己烷溶解，得到提取液；

所述提取剂包括体积比丙酮：正己烷：二氯甲烷＝5：10：10的丙酮、正己烷和二氯甲烷；

(3)样品净化：在OasisHLB固相萃取柱上层加3g无水硫酸钠，用3mL丙酮和3mL正己烷活化，取提取液过柱，再用2mL正己烷洗脱鸡心瓶并过柱，控制流速在3mL/min内，弃去全部流出液；用5mL二氯甲烷淋洗净化OasisHLB固相萃取柱，收集全部洗脱液于5mL刻度比色管中，于50℃氮气吹干，用1mL混合液溶解，过膜，获得待测液；

所述混合液包括体积比乙腈：5mmol/L乙酸铵：甲酸＝20：80：0.1的乙腈、5mmol/L乙酸铵和甲酸；

(4)将待测液采用超高效液相色谱-串联质谱法进行分析检测，以获得待测液中被测物即溴氰虫酰胺的响应值，之后根据待测液中被测物的响应情况选取响应值相应的标准工作液进行色谱分析，标准工作液设有包含零点在内的五个浓度梯度，且标准工作液和待测液中溴氰虫酰胺的响应值均应在仪器线性响应范围内，并同时设置一空白对照；

所述超高效液相色谱条件为：

色谱柱：Thermo Syncronnic C18柱，50mm×2.1mm，1.7μm；流速：0.3mL/min；进样量：10μL；柱温：30℃；梯度洗脱程序如下：

所述质谱条件为：

离子源：电喷雾ESI，正离子；扫描方式：多反应监测MRM；雾化气、窗帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气；监测离子对、定量离子对、去簇电压、碰撞气体能量、碰撞池出口电压如下：

(5)将超高效液相色谱-串联质谱检测所获得分取比例及溴氰虫酰胺的峰面积代入下式(1)进行计算，以获得待测液中溴氰虫酰胺的测定值；

$X=\frac{A\×c\×V}{As\×m\×R}\mathrm{...}\left(1\right)$

其中：

X—试样中溴氰虫酰胺残留含量，μg/kg；

A—待测液中溴氰虫酰胺的峰面积；

As—标准工作溶液中溴氰虫酰胺的峰面积；

c—标准工作溶液中溴氰虫酰胺浓度，μg/L；

V—待测液最终定容体积，mL；

m—试样的质量，g；

R—分取比例。