CN113624880B - 蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,包括:向蜂蜜中加水稀释、搅拌均匀得到蜂蜜溶液;用乙腈对蜂蜜溶液进行提取、盐析后;用PRiME HLB固相萃取柱对蜂蜜溶液进行净化;用液相色谱‑四极杆/静电场轨道阱质谱检测,进而得到蜂蜜中的药物残留量。实施本发明,能够得到以下有益效果:本发明提供的蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,可以测定蜂蜜中131种兽药残留,这样可以提前筛选出不安全的蜂蜜,避免食用,提高了蜂蜜食用的安全性。
Description
技术领域
本发明涉及蜂蜜筛查领域,尤其涉及一种蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法。
背景技术
蜂蜜是蜜蜂从开花植物的花中采得的花蜜、分泌物或蜜露,与自身分泌物混合后,在蜂巢中酿制的天然甜物质。蜂蜜是一种药食同源的食品,蜂蜜的成份除了葡萄糖、果糖之外还含有各种维生素、矿物质、氨基酸及多种酶类等,新鲜成熟的蜂蜜为透明或半透明的粘稠状液体,味甜纯正,具有滋养、润燥、解毒、美白养颜、润肠通便之功效。现有蜂蜜经常会含有药物等杂质,使得蜂蜜的食用变得不太安全。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的上述不足,提供一种蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,以解决现有的蜂蜜的食用不安全的问题。
为了实现上述发明目的,本发明提供了一种蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,包括:
向蜂蜜中加水稀释、搅拌均匀得到蜂蜜溶液;
用乙腈对蜂蜜溶液进行至少进行一次提取处理、盐析处理后,得到盐析处理液;
用PRiME HLB固相萃取柱对盐析处理液进行净化,得到净化液;
用液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱对净化液进行检测,得到蜂蜜中的药物残留量。
实施本发明,能够得到以下有益效果:本发明提供的蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,可以提前筛选出不安全的蜂蜜,避免食用,提高了蜂蜜的食用的安全性。
具体实施方式
为了使本申请要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白,以下结合实施例,对本申请进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请,并不用于限定本申请。
本申请中,术语“和/或”,描述关联对象的关联关系,表示可以存在三种关系,例如,A和/或B,可以表示:单独存在A,同时存在A和B,单独存在B的情况。其中A,B可以是单数或者复数。字符“/”一般表示前后关联对象是一种“或”的关系。
本申请中,“至少一个”是指一个或者多个,“多个”是指两个或两个以上。“以下至少一项(个)”或其类似表达,是指的这些项中的任意组合,包括单项(个)或复数项(个)的任意组合。例如,“a,b,或c中的至少一项(个)”,或,“a,b,和c中的至少一项(个)”,均可以表示:a,b,c,a-b(即a和b),a-c,b-c,或a-b-c,其中a,b,c分别可以是单个,也可以是多个。
应理解,在本申请的各种实施例中,上述各过程的序号的大小并不意味着执行顺序的先后,部分或全部步骤可以并行执行或先后执行,各过程的执行顺序应以其功能和内在逻辑确定,而不应对本申请实施例的实施过程构成任何限定。
在本申请实施例中使用的术语是仅仅出于描述特定实施例的目的,而非旨在限制本申请。在本申请实施例和所附权利要求书中所使用的单数形式的“一种”、“”和“该”也旨在包括多数形式,除非上下文清楚地表示其他含义。
本申请实施例说明书中所提到的相关成分的重量不仅仅可以指代各组分的具体含量,也可以表示各组分间重量的比例关系,因此,只要是按照本申请实施例说明书相关组分的含量按比例放大或缩小均在本申请实施例说明书公开的范围之内。具体地,本申请实施例说明书中的质量可以是μg、mg、g、kg等化工领域公知的质量单位。
一方面,本发明实施例提供了一种蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法。本发明实施例包括如下步骤:
向蜂蜜中加水稀释、搅拌均匀得到蜂蜜溶液;
用乙腈对所述蜂蜜溶液进行至少进行一次提取处理、盐析处理后,得到盐析处理液;
用PRiME HLB固相萃取柱对盐析处理液进行净化,得到净化液;
用液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱对所述净化液进行检测,得到蜂蜜中的药物残留量。
在本实施例中,所述蜂蜜溶液配制方法包括如下步骤:称取2-10g所述蜂蜜溶液,用2-10mL超纯水溶解处理。
在本实施例中,所述提取处理包括如下步骤:向所述蜂蜜溶液中加入4-20mL乙腈,涡旋,超声,离心处理得到上清液,将上清液转到15mL离心管中,再加4mL乙腈再进行一次提取,合并两次上清液,得到提取液。
在本实施例中,提取处理包括如下步骤:向所述蜂蜜溶液中加入4mL所述乙腈,涡旋振荡1min,超声提取5min后,5000r/min离心5min得到上清液,将所述上清液转到15mL离心管中,再加4mL所述乙腈再进行一次提取,合并两次上清液,得到提取液。
在本实施例中,所述盐析处理包括如下步骤:向由提取处理获得的提取液中加入1g NaCl、4g无水硫酸钠,涡旋处理,混合震荡,5000r/min离心5min,得到盐析处理液。
在本实施例中,净化处理包括如下步骤:取盐析处理液,按照体积比4:1稀释,得到稀释液,取3mL所述稀释液过PRiME HLB固相萃取小柱,收集萃取液,
取2.5mL萃取液,氮吹至0.5mL,用水定容至1mL,混匀过0.22μm微孔滤膜后,待测。
实施例1
1.仪器参考条件
液相色谱参考条件
色谱柱:C18柱,2.1×150mm,2.6μm,或相当者。
流动相:A1:0.1%甲酸水;B1:0.1%甲酸甲醇-乙腈;A2:水;B2:乙腈,梯度洗脱。具体见表1。
表1流动相条件
其中,进样量:10μL,柱温:30℃。
2.质谱参考条件
(a)离子源:电喷雾离子源;
(b)扫描方式:正离子模式(ESI+)、负离子模式(ESI-)
(c)离子传输管温度:320℃;
(d)喷雾电压:3200V;
(e)雾化温度:350℃;
(f)采集模式:一级质谱全扫描模式+数据依赖二级子离子全扫描模式;
(g)一级质谱全扫描模式:扫描范围:m/z 100~1000;分辨率:70000FWHM;动态增益控制阈值:1×106;最大注入时间:200ms;
(h)数据依赖二级子离子全扫描模式:分辨率:17500质谱半峰宽;归一化碰撞能:20eV、40eV、60eV;动态增益控制阈值:2×105;最大注入时间:60ms;动态排除:3s。
3.高分辨质谱库建立
输入131种兽药的英文、CAS号及化学式,由高分辨质谱谱库构建软件计算得到每个化合物的理论质量数。采用数据依赖的二级质谱扫描(ddms2)加动态排除模式,当列表中的母离子出现且强度达到设定阈值,即可自动采集二级数据;在三个碰撞能量下对目标物进行碰撞,加和获得二级谱图,利用软件计算主要二级碎片精确分子量,与相应化合物的保留时间、精确质量数测定值、中英文名称、CAS号、分子式等信息相关联,完成谱库构建。谱库信息等见2。
表2 131种兽药液相色谱-高分辨质谱分析参数
4.定性分析
定性分析依据保留时间、母离子精确质量数和一个碎片离子精确质量数(或两个母离子精确质量数)。在相同条件下,样液中待测化合物保留时间与谱库(附录A中表A.1)中保留时间的相对偏差≤±2.5%(且不超过0.5min),所监测定性离子的信噪比S/N≥3,母离子精确质量数与理论质量数的相对偏差≤5ppm(1×10-6),一个二级碎片离子精确质量数的相对偏差≤10ppm,则可以初步判断试验中含有该种化合物。在空白样品中添加筛查浓度标准溶液,按照上述步骤测定,作为质控样品。样品中目标化合物检测浓度大于等于方法筛查限时判定为阳性结果。定性分析及判定依据如表3所示。
表3定性分析及判定依据
5.空白试验
除不加试样外,均按上述测定步骤进行。
6.筛查限
131种兽药的筛查见表4。
表4 131种化合物的分组、中英文名称、配制溶剂及筛查浓度
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7.特异性
样品基质或结构类似物的响应信号在可能干扰目标化合物定性或定量的情况下,应不高于目标化合物在方法筛查限浓度水平响应信号的30%。
8.假阴性率、假阳性率
假阴性率≤5%;假阳性率≤15%。
准确称取2g(精确到0.01g)试样,用2mL超纯水溶解后,加入4mL乙腈,涡旋振荡1min,超声提取5min后,5000r/min离心5min,上清液转到15mL离心管中,再加4mL乙腈重复提取一次,合并两次上清液。
加入1g NaCl、4g无水硫酸钠到上清液中,涡旋混合震荡,5000r/min离心5min。取4mL上清液,加入1mL水,混匀待净化。
取3mL提取液直接过PRiME HLB固相萃取小柱,收集流出液,混匀。
取2.5mL流出液,氮吹至0.5mL左右,用水定容至1mL,混匀过0.22μm微孔滤膜后,待测。
以上仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (6)
1.一种蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,其特征在于,包括如下步骤:
向蜂蜜中加水稀释、搅拌均匀得到蜂蜜溶液;
用乙腈对所述蜂蜜溶液进行至少一次提取处理及盐析处理后,得到盐析处理液;
用PRiME HLB固相萃取柱对所述盐析处理液进行净化,得到净化液;
用液相色谱-四极杆/静电场轨道阱质谱对所述净化液进行检测,得到蜂蜜中的药物残留量;
其中,液相色谱条件包括:
色谱柱为C18柱,柱温为30℃,流动相为A1:0.1%甲酸水;B1:0.1%甲酸甲醇-乙腈;A2:水;B2:乙腈,洗脱方式为梯度洗脱,所述梯度洗脱的程序如下:
所述蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法所筛查的残留药物包括如下编号1-131的化合物:
1、溴代克伦特罗,
2、克伦特罗,
3、氯丙那林,
4、非诺特罗,
5、苯氧丙酚胺,
6、马布特罗,
7、马贲特罗,
8、苯乙醇胺A,
9、莱克多巴胺,
10、沙丁胺醇,
11、特布他林,
12、妥布特罗,
13、溴布特罗,
14、福莫特罗,
15、尼卡巴嗪代谢物,
16、克拉珠利,
17、二硝托胺,
18、乙氧酰胺苯甲酯,
19、甲苄喹啉,
20、癸氧喹酯,
21、常山酮,
22、妥曲珠利亚砜,
23、托曲珠利砜,
24、莫能菌素,
25、金刚烷胺,
26、咪喹莫特,
27、美金刚,
28、奥司他韦,
29、金刚乙胺,
30、2-氨基氟苯达唑,
31、5-羟基甲苯咪唑,
32、阿苯达唑,
33、阿苯达唑砜,
34、阿苯达唑亚砜,
35、阿苯达唑-2-氨基砜,
36、氨基甲苯咪唑,
37、坎苯达唑,
38、芬苯达唑,
39、氟苯达唑,
40、甲苯咪唑,
41、奥芬达唑,
42、芬苯达唑砜,
43、奥苯达唑,
44、噻苯达唑,
45、5-羟基噻苯咪唑,
46、克林霉素,
47、红霉素,
48、交沙霉素,
49、林可霉素,
50、罗红霉素,
51、泰乐菌素,
52、苯硝咪唑,
53、异丙硝唑,
54、羟基异丙硝唑,
55、甲硝唑,
56、奥硝唑,
57、塞克硝唑,
58、替硝唑,
59、卡洛芬,
60、双氯芬酸,
61、氟芬那酸,
62、吲哚美辛,
63、茚酮苯丙酸,
64、酮基布洛芬,
65、甲芬那酸,
66、美洛昔康,
67、对乙酰氨基酚,
68、苯基丁氮酮,
69、吡罗昔康,
70、水杨酸,
71、舒林酸,
72、替诺昔康,
73、托芬那酸,
74、托麦汀,
75、西诺沙星,
76、环丙沙星,
77、达氟沙星,
78、双氟沙星,
79、恩诺沙星,
80、氟罗沙星,
81、氟甲喹,
82、洛美沙星,
83、马波沙星,
84、萘啶酸,
85、诺氟沙星,
86、氧氟沙星,
87、奥比沙星,
88、恶喹酸,
89、培氟沙星,
90、沙拉沙星,
91、司帕沙星,
92、阿扎哌醇,
93、卡拉洛尔,
94、地西泮,
95、氟哌啶醇,
96、安眠酮,
97、赛拉嗪,
98、氨苯砜,
99、N-乙酰胺苯砜,
100、甲睾酮,
101、α-玉米赤酶醇,
102、去氢睾酮,
103、醋酸甲羟孕酮,
104、睾酮,
105、群勃龙,
106、β-玉米赤酶醇,
107、磺胺苯酰,
108、磺胺醋酰,
109、磺胺氯哒嗪,
110、磺胺嘧啶,
111、磺胺间二甲氧嘧啶,
112、磺胺邻二甲氧嘧啶,
113、磺胺胍,
114、磺胺甲基嘧啶,115、磺胺对甲氧嘧啶,
116、磺胺二甲基嘧啶,
117、磺胺甲噻二唑,
118、磺胺甲恶唑,
119、磺胺甲氧哒嗪,
120、磺胺间甲氧嘧啶,
121、磺胺恶唑,
122、磺胺苯吡唑,
123、磺胺吡唑,
124、磺胺吡啶,
125、磺胺喹恶啉,
126、磺胺噻唑,
127、磺胺二甲异嘧啶,
128、磺胺二甲异噁唑,
129、甲氧苄氨嘧啶,
130、甲砜霉素,
131、氟苯尼考。
2.根据权利要求1所述蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,其特征在于,所述蜂蜜溶液配制方法包括如下步骤:称取2-10g所述蜂蜜溶液,用2-10mL超纯水溶解处理。
3.根据权利要求2所述蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,其特征在于,所述提取处理包括如下步骤:向所述蜂蜜溶液中加入4-20mL所述乙腈,涡旋,超声,离心处理得到上清液,将所述上清液转到15mL离心管中,再加4mL所述乙腈再进行一次所述提取,合并两次上清液,得到提取液。
4.根据权利要求3所述蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,其特征在于,所述提取处理包括如下步骤:向所述蜂蜜溶液中加入4mL所述乙腈,涡旋振荡1min,超声提取5min后,5000r/min离心5min得到上清液,将所述上清液转到15mL离心管中,再加4mL所述乙腈再进行一次所述提取,合并两次上清液,得到提取液。
5.根据权利要求2所述蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,其特征在于,所述盐析处理包括如下步骤:向由所述提取处理获得的提取液中加入1g NaCl、4g无水硫酸钠,涡旋处理,混合震荡,5000r/min离心5min,得到所述盐析处理液。
6.根据权利要求4所述蜂蜜中残留药物的高通量筛查方法,其特征在于,所述净化处理包括如下步骤:取所述盐析处理液,按照体积比4:1稀释,得到稀释液,取3mL所述稀释液过PRiME HLB固相萃取小柱,收集萃取液,
取2.5mL所述萃取液,氮吹至0.5mL,用水定容至1mL,混匀过0.22μm微孔滤膜后,待测。
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