CN102128921A - 用于区分风湿性和非风湿性病症的触发测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因的方法，其包括测定获自受试者的样品中是否存在指征至少一种风湿性病症的至少一种自身抗体或抗原，其中所述自身抗体或抗原的存在使得可以排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因。因此，它提供了触发诊断受试者肌肉骨骼疾病诱因中的接下来的步骤-进一步诊断风湿性病症或诊断非风湿性病症以验证最初的诊断的方法。也提供了用于排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因的试剂盒和该试剂盒的用途。

Description

用于区分风湿性和非风湿性病症的触发测定方法

技术领域

本发明提供用于排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因的方法，该方法包括检测获自患者的样品中是否存在指征至少一种风湿性病症的至少一种自身抗体或抗原，其中所述自身抗体或抗原的存在使得可以排除非风湿性病症为患者肌肉骨骼疾病的诱因。相应地，本发明提供在诊断受试者肌肉骨骼疾病诱因时触发接下来的步骤——进一步诊断风湿性病症或非风湿性病症以确证初次诊断的方法。本发明还提供用于排除患者肌肉骨骼疾病诱因为非风湿性病症的试剂盒以及该试剂盒的用途。

背景技术

每年很多患者因肌肉骨骼疾病寻求医疗护理，开始推动全面的临床病史和身体检查。据估计，全世界每年有数百万的门诊病人因肌肉骨骼疾病去医生处就诊。肌肉骨骼病症是身体残疾最常见的诱因之一。患有肌肉骨骼疼痛的人有时自诉他们全身疼痛。他们的肌肉可能会感觉像是被拉伤或过度疲劳。有时肌肉会颤搐或灼痛。每个人的症状有所不同，但是常见症状为疼痛、疲劳和睡眠障碍。

肌肉骨骼病症是侵袭大量人群的常见疾病。它们可能由风湿性病症引起。但是，它们也可能由非风湿性病症引起。它们导致各种类型的疼痛，例如颈部疼痛、肢体疼痛、腰疼、关节疼痛、慢性全身疼痛，并且是初级护理会诊的主要原因。肌肉骨骼疼痛可由骨骼、关节、肌肉、肌腱、韧带、滑囊或神经的损害引起。损伤是最常见的原因。如果没有发生损伤或者疼痛持续了很多天，那么通常可能是另外的原因，例如，骨关节炎或自身免疫疾病。

不断上升的肌肉骨骼疼痛患病率已被描述为流行病。疼痛是绝大大多数肌肉骨骼病症的主要症状，经常由损伤或炎症引发。除了疼痛，其它症状例如僵硬、触痛、虚弱和患病部位的肿胀或畸形也是肌肉骨骼病症的表现。

几乎所有的关节损伤和疾病引起僵硬、酸痛，通常称作“关节炎”疼痛。当关节移动时疼痛加剧，而且从轻微到剧烈不等。在一些情况下，还会有伴随疼痛的关节肿胀。关节炎症（关节炎）是关节疼痛的常见诱因。有许多类型的关节炎，包括类风湿性和其它类型的炎症性关节炎、骨关节炎、感染性关节炎，以及由痛风和假痛风引起的关节炎。关节疼痛的其它诱因包括自身免疫和血管炎病症（例如，系统性红斑狼疮、风湿性多肌痛和结节性多动脉炎）、无血管性骨坏死以及损伤（例如，侵袭关节内骨部分的脱臼、扭伤、骨折）。有时，源于关节附近的结构例如肌腱和滑囊的疼痛似乎源自关节。

有些肌肉骨骼病症通过压迫神经导致疼痛。这些病症包括“管综合症”（例如，腕管综合征、肘管综合症和跗管综合症）。该疼痛倾向于沿神经走向辐射，并可能灼痛。

滑囊疼痛可由滑囊炎或纤维肌痛引起。通常，滑囊疼痛会因涉及滑囊的运动而加剧。可能会有肿胀。

如上所述，肌肉骨骼疼痛的原因多种多样。肌肉组织会因日常活动的磨损而损坏。某部位的外伤（例如急跳运动、交通意外、摔落、骨折、扭伤、脱臼以及对肌肉的直接击打）也会导致肌肉骨骼疼痛。其它疼痛原因包括姿势不良扭伤、重复性动作、活动过度以及长期不活动。姿势的改变或人体力学差可引起脊柱排列问题和肌肉缩短，因此引起其它肌肉被错误使用并变得疼痛。然而，肌肉骨骼疼痛也可由自身免疫病症例如类风湿性关节炎、干燥综合征（SS）、系统性红斑狼疮（SLE）、系统性硬皮病、CREST综合征、未分化结缔组织病（UCTD）、多肌炎（PM）、皮肌炎（DM）或抗中性粒细胞胞浆自身抗体(ANCA)-相关血管炎引起，可称作自身免疫介导的肌肉骨骼病症。这些仅为可引起肌肉骨骼病症的自身免疫病症的一些实例且还有更多。

自身免疫性病症是由身体对自身组织产生的非适当免疫应答引起的疾病。有时免疫系统会停止将一个或更多个身体正常组成识别为“自己”，并会产生自身抗体——攻击自身细胞、组织、和/或器官的抗体。这会引起炎症和损害，并导致自身免疫病症。在自身免疫病症中，体液和细胞免疫两者均在疾病发展中发挥病理生理学作用。对组织和器官的损害显示由自身抗体和/或自身反应性T细胞的存在和浸润导致的。

自身免疫性疾病的诱因是未知的，但是在很多病例中存在发展自身免疫疾病的遗传倾向。在少数类型的自身免疫疾病（例如风湿热）中，细菌或病毒触发免疫应答，而抗体或T细胞会攻击正常细胞，因为它们的部分结构与感染性微生物的部分结构类似。

自身免疫性病症分为两种基本类型：那些损害很多器官的（系统性自身免疫性疾病）和那些仅有单一器官或组织被自身免疫过程直接损害的（局部性）。然而，这些区别变得模糊，因为局部性自身免疫性病症频繁地扩散到目标组织之外，间接地影响其它身体器官和系统。

在自身免疫介导的肌肉骨骼病症中，自身抗体和自身反应性T细胞的精确“靶点”是未知的或者最好也是不明确的。然而，已知的是自身免疫性病症例如RA、SLE或SS引起肌肉骨骼疾病。

在自身免疫介导的肌肉骨骼病症中，已记载了一系列广泛的抗体特异性。自身抗体的测定可提供重要信息以确定病症诊断。此外，这些抗体的测定具有预后价值或者可用于监测治疗反应或预测疾病的复发。临床最相关的测定法包括类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸抗体（抗CCP）、抗细胞核自身抗体（ANA）、抗双链DNA抗体、针对可提取核抗原的抗体（ENA）以及抗中性白细胞细胞质自身抗体（ANCA）。

然而，当医生使用可用的自身抗体检验时，他必须注意到他们的错误推论。在有根据的临床怀疑的背景下进行这些检验而不仅仅作为筛选检测是非常重要的。此外，医生必须注意到在特定肌肉骨骼病症中反复测定自身抗体仅在已证明了这些自身抗体用于疾病监测的相关性时有效。

因此，可应用检测指征引起类风湿性病症例如RA或SLE的症状的自身免疫性病症的自身抗体的特定测定法。这些测定法利用抗预定的自身抗原的自身抗体例如CCP、ANA或ANCA的测定（见，例如，WO 2007/039280或 Feng等 (2004), Clin. Chem. 50: 416-422）。因此，到目前为止应用的测定方法可用于特异诊断自身免疫病症的目的，其中医生已具有基于体检、成像检测和患者医疗史的直觉或怀疑。

因此，到目前为止应用的用于检验自身免疫介导的肌肉骨骼病症的测定法仅提供鉴别诊断并因此被内科医生或其他临床医生用于诊断患者的特定疾病。然而，到目前为止，还没有一种适合所有情况的测定法。

总而言之，由于它们相当复杂的病因学，诊断肌肉骨骼疾病的诱因是困难的。在确定肌肉骨骼疾病的特定诱因之前需要进行适当的体检、各种各样的检测、成像、神经检查、自身抗体检测等等。因为诊断是非常复杂的，且许多诱因会导致肌肉骨骼疾病，所以诊断需要一种分类，藉此在每一阶段会出现新的分叉，如图1所示。对于通常是患者第一个接触点的全科医生来说，几乎不可能做出特别可靠地诊断。事实上，对于全科医生来说，例如鉴别例如各种关节炎病症是十分困难的，因为就临床症状而言患者可能具有一定数量的二者的重叠。的确，SLE、RA及SS可引起相似的症状。而且，虽然不是由自身免疫性肌肉骨骼病症引起的，但是骨关节炎也是一种关节炎病症。这只是一个实例以说明肌肉骨骼疾病诊断的复杂性。

以上所述，诊断肌肉骨骼疾病诱因的最重要步骤是分类等级中的起始步骤，即测定肌肉骨骼疾病的诱因是非自身免疫性病症还是自身免疫介导的肌肉骨骼病症。

因此，在患者医疗史的最可能的早阶段区分例如，非风湿性病症和由自身免疫介导的肌肉骨骼病症引起的风湿性病症是非常重要的。否则患者可能会遭受甚至恶化病情的错误治疗。例如，患者可能被全科医生初始诊断为患有引起肌肉骨骼疾病的非自身免疫性肌肉骨骼病症，而实际上这些患者患有自身免疫介导的肌肉骨骼病症。同样地，被初始诊断为患有自身免疫介导的肌肉骨骼病症的患者可能实际上患有非自身免疫性肌肉骨骼病症。

因此，如上所述，需要一种可用的测定法，其使得全科医生能鉴别/区分非风湿性病症和风湿性病症作为肌肉骨骼疾病的诱因，反之亦然，即在最高分类等级鉴别风湿性病症和非风湿性病症作为肌肉骨骼疾病的诱因以将患者转移到正确的专科医生（即风湿病专家）并使患者接受最适当的治疗。这种测定法通过矫形外科医生或风湿病专家“触发”患者的最终诊断和治疗。

因此，本发明的技术问题与上述需求一致。

发明内容

本发明解决这一需求并因此分别提供作为该技术问题的解决途径的排除非风湿性病症作为肌肉骨骼疾病的诱因或排除风湿性病症作为肌肉骨骼疾病的诱因的方法、用途以及手段。这些实施方案在本文被表征和描述，显示于附图中，说明于实施例中并反映于权利要求书中。

本发明人已经认识到在最可能早的时间点，即当患者因肌肉骨骼疾病找医生咨询时，分别向医生，例如全科医生提供，使得可以排除非风湿性病症为肌肉骨骼疾病诱因的手段和方法或，反之亦然，使得可以排除风湿性病症为肌肉骨骼疾病诱因的方法，是极为重要的。

否则，将不可避免地发生受试者没有得到最适当的治疗，其可能恶化受试者的肌肉骨骼疾病。例如，如果患有由类风湿性关节炎引起的肌肉骨骼疾病的受试者因假阴性诊断而没有尽快采用适当的手段治疗，那么类风湿性关节炎可能会恶化并引起更多不可逆性的损伤以及健康经济问题。

迄今，为了测定关于风湿性病症是否可能为肌肉骨骼疾病的诱因，已应用了仅鉴别诊断测定法。这些测定方法从假设受试者患有此类风湿性病症开始，甚至在受试者医疗史的基础上假定受试者可能患有哪种风湿性病症。也就是说，迄今为止的诊断是以确认假定的风湿性病症为目的而做出的。因此，迄今为止应用的测定法包含可指征特定风湿性病症例如类风湿性关节炎的特定分析物或自身抗原的标记组。

然而，虽然鉴别诊断测定法是可获得的，但是医生还需要临床结果以提高或验证鉴别诊断。对于全科医生而言，在大多数病例中几乎不可能轻易区分出风湿性病症和非风湿性病症为肌肉骨骼疾病的诱因。然而，从健康经济的观点来看，尽可能早地做出这种区分是非常有益的，这样可使患有肌肉骨骼疾病的受试者委托合适的医生——无论是擅长于风湿性病症的风湿病学家还是矫形外科医生。

的确，由慢性系统性风湿性病症引起的功能相关性损害可通过早期开始的适当治疗降低或有时避免。然而，这需要可使治疗尽早进行的正确诊断。由于这一类病症的开始经常有非特征性的症状，早期诊断成为诊断上的挑战。

本发明人已经认识到，虽然有许多鉴别诊断测定法和诊断引起肌肉骨骼疾病的特定风湿性病症的方法，而且就他们所知，还没有可获得的测定法能允许医生立刻辨别风湿性病症和非风湿性病症为肌肉骨骼疾病的诱因，即本发明人提供，可以这么说，医生的办公室鉴别设备。事实上，由于风湿性病症例如自身免疫介导的肌肉骨骼疾病的开始经常有非特征性的症状，它们经常被过早地忽视而将非风湿性病症假定为肌肉骨骼疾病的诱因。

因此，尤其对于全科医生以及医学专家而言，需要在发现是否非风湿性病症，或者与此相反，是否风湿性病症可被排除为肌肉骨骼疾病的诱因中用作第一步（“第一援助”）的手段和方法。

因此，在第一方面，本发明涉及用于排除非风湿性病症为患者肌肉骨骼疾病诱因的方法，该方法包括测定获自受试者的样品中是否存在指征至少一种风湿性病症的至少一种自身抗体或抗原，其中所述自身抗体或抗原的存在使得可以排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因。

在替代的和/或另一方面，本发明涉及用于排除风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因的方法，该方法包括测定获自受试者的样品中是否缺失指征至少一种风湿性病症的至少一种自身抗体或抗原，其中所述自身抗体或抗原的缺失使得可以排除风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因。

因此，本发明的排除方法也可视为分别消除或辨别或区分非风湿性病症和风湿性病症作为肌肉骨骼疾病的诱因特别是在肌肉骨骼疾病的开始阶段（优选早发阶段）的方法。

此外，本发明方法用于触发诊断受试者肌肉骨骼疾病诱因中的进一步步骤——风湿性病症或非风湿性病症的进一步诊断以确证最初的诊断。

事实上，该方法可在肌肉骨骼疾病的开始阶段测定是否可将非风湿性病症排除为受试者肌肉骨骼疾病的诱因是优选的优点。

替代地和/或另外地，该方法可在肌肉骨骼疾病的开始阶段即早期测定关于是否可排除风湿性病症(或非风湿性病症)为受试者肌肉骨骼疾病的诱因。

当其用于本发明的方法、用途和试剂盒的语境中时，“排除”在其所有的语法形式中意指可分别消除非风湿性病症或风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因，或者可分别从非风湿性病症或风湿性病症中区分或辨别。当然，假阳性或假阴性结果不能被排除，因为众所周知这些结果是诊断方法的固有性质。然而，如本文所述，尽可能谨慎地确定决定阳性或阴性结果的阈值。因此，在怀疑医生结论的情况下，可重复本发明的诊断检测和/或由本领域已知的附加检测补充。

当用于本文时，“受试者”包括哺乳动物和非哺乳动物受试者。用于治疗目的的“哺乳动物”指任何分类为哺乳动物的动物，包括人类、家畜和耕畜、非人类灵长类动物以及其它任何具有乳房组织的动物。哺乳动物包括人类，啮齿类例如小鼠、大鼠或者兔，狗，猫，猩猩，马，猪等，优选人类。受试者也包括人类和兽医患者，优选人类患者。

“患者”是个体受试者，优选患有分别检测风湿性病症或非风湿性病症存在或缺失的肌肉骨骼疾病。检测风湿性病症或非风湿性病症的患者可具有一种或更多种本文所述此类病症的指示物，或在缺乏所述病症的任何指示物时筛选所述病症的存在或缺失。如本文所使用，“疑似患有所述病症的个体”或“疑似患有所述病症的受试者”可具有一种或更多种所述病症的指示物，或者因年龄、环境和/或营养因素，或遗传因素发展所述病症的风险增加，或者可为在所述病症的任何指示物缺乏时常规筛选所述病症的人群的一部分。

依照本发明，术语“样品”意指任何从受试者、细胞系、组织培养物、或其它包含自身抗体、多聚核苷酸或多肽或其部分的来源获得的生物学样品。生物学样品包括体液（例如血液、血清、血浆、尿液、唾液、滑膜液和脊髓液）和发现包含自身抗体的组织来源。用于从受试者获得组织活检和体液的手段为本领域熟知。通常，优选包含蛋白质，尤其是抗原、自身抗体和多聚核苷酸的生物学样品为来源。

其它优选样品为全血、血清、血浆或滑膜液，最优选血浆或血清。

自身抗体或抗原的“存在”（以其所有语法形式）意指指征至少一种风湿性病症的自身抗体或抗原是免疫学可检测的。因此，自身抗体结合至包含在如本文所述的检测区域中的自身抗原。同样地，抗原被包含在如本文所述的检测区域中的抗体结合。

本领域已知的任何免疫测定法可用于免疫学检测自身抗体与自身抗原的结合或抗原与抗体的结合。免疫测定法为本领域技术人员熟知。进行这些测定法的方法以及实际应用和操作总结于相关的教科书中。相关教科书的实例为Tijssen, P., In: Practice and theory of enzyme immunoassays, Burdon, R.H. 和 v. Knippenberg, P. H. (编辑), Elsevier, Amsterdam (1990), pp. 221-278, 和Colowick, S. P. 和Caplan, N.O. (eds.), Methods in Enzymology, Academic Press, 关于免疫学检测方法的许多卷，尤其是第70、73、74、84、92 和121卷。

免疫测定法，例如，包括沉淀法（特别是免疫沉淀法）、电化学发光法（电产生的化学发光法）、RIA（放射免疫测定法）、ELISA（酶联免疫吸附测定法）、三明治酶免疫检测法、电化学发光三明治免疫测定法（ECLIA）、解离-增强-镧系元素荧光免疫测定法（DELFIA）、闪烁亲近测定法（SPA）、比浊法、散射比浊法、乳胶增强比浊法或散射比浊法、固相免疫检测法以及质谱法例如SELDI-TOF、MALDI-TOF或毛细管电泳-质谱法(CE-MS)。

此外，合适的免疫测定法包括基于微板ELISA的方法、全自动或机器人免疫测定法（可以例如Elecsys?或Cobas?分析仪获得）以及乳胶凝集测定法（可以例如Roche-Hitachi?分析仪获得）。

通常，在本发明中，免疫测定法是一种自身抗体特异性结合自身抗原以提供自身抗体的检测和/或定量的测定法，或是一种抗原结合至抗体以提供所述抗原的检测和/或定量的测定法。

当用于本文时“免疫学可检测的”优选包括如本文所述由自身抗体结合至自身抗原或抗原结合至抗体产生的信号高于预设的检测区域特定阈值，即，由自身抗体结合至自身抗原或抗原结合至抗体产生的信号为阳性。

自身抗体的“缺失”（以其所有语法形式）意为指征至少一种风湿性病症的自身抗体或抗原是免疫学检测不到的。因此，该自身抗体未结合至如本文所述的包含于检验区域的自身抗原。同样地，“缺失”意为抗原没有被如本文所述的包含于检验区域的抗体结合。如上所述，可采用任何本领域已知的免疫测定法。

当用于本文时“是免疫学检测不到的”优选包括如本文所述由自身抗体结合至自身抗原或抗原结合至抗体产生的信号低于预设的检测区域特定阈值，即，由自身抗体结合至自身抗原或由抗原结合至抗体产生的信号为阴性。

因此，在本发明方法的优选方面，信号在它高于预设检测区域特定截止值时归为阳性，而在它低于预设检测区域特定截止值时归为阴性，其中阳性信号排除非风湿性病症为肌肉骨骼疾病的诱因。同样地，阴性信号排除风湿性病症为肌肉骨骼疾病的诱因。

“截止值”是测定信号何时是阳性或阴性的自身抗体或抗原的量和/或浓度的临界值（或极限值）。在现有情况中，截止值间接地反映自身抗体或抗原的量和/或浓度，因为在检测区域中存在包含于来自受试者的样品的自身抗体或抗原结合的一定量和/或浓度的自身抗原或抗体。

因此，“信号”反映自身抗体-自身抗原反应的结果，该反应包括自身抗体结合至检测区域中的自身抗原。因此，术语“信号”包括自身抗体-自身抗原反应的结果，该反应包括自身抗体结合至检测区域中的自身抗原。同样地，该术语包括抗原-抗体反应结果，该反应包括抗原结合至检测区域中的抗体。

如果超过截止值（或高于预设阈值），这表示存在指征风湿性病症的自身抗体或抗原，且因此将信号或自身抗体-自身抗原反应或抗原-抗体反应的结果归为阳性。

然而，如果低于截止值（或低于预设阈值），这表示缺失指征风湿性病症的自身抗体或抗原，且因此将信号或自身抗体-自身抗原反应或抗原-抗体反应的结果归为阴性。

可通过由如下文所述的自身抗体-特异受体的信号产生基团提供的信号来测定信号。该信号可为通过例如如下文所述的分光镜的、光化学的、生物化学的、免疫化学的、或化学的手段可检测的任何信号。也可通过由如下文所述的抗原-特异受体的信号产生基团提供的信号来测定信号。

通过使用预设检验区域特定阈值，使根据测定法要求优化截止值成为可能。因此，本领域技术人员可改变截止值以实现本发明方法和应用于这些方法的试剂盒的更高特异性或更高灵敏度。阈值或截止值可通过如已知来自病毒学检测的不同操作确定。优选实施方案为测量足够的风湿性病症患者的样品组（“患病集合”或“疾病组”）和非风湿性病症患者的样品组（“对照集合”或“对照组”或“对照样品”），并按临床情况的要求设定截止值。

优选地，单独确定优选存在于检测区域的每一个自身抗原或抗体的截止值。这意味着对于不同的检测区域确定不同的截止值。

因此，本发明方法的优选方面为对于每一个检测区域单独确定所述截止值。

例如，参考值可测定为中值或在未患有风湿性病症个体的群体中所测量水平的具体百分位数（例如，0.90或0.95）。在另外的个体或患者中例如在群体研究中评价这些水平，可帮助改进已知的水平或比例。类似地，定义和/或改进表示指征风湿性病症的自身抗体存在的参考水平也是可能的。

而且，可将本领域已知的具体自身抗体的水平用作“参考值”。本领域技术人员熟知对于生物标记例如指征风湿性病症的自身抗体而言参考值（或“正常值”）的概念。具体而言，术语参考值可涉及一个或更多个对照样品中水平的实际数值，或者可涉及衍生自一个或更多个对照样品实际水平的值。优选地，至少50名，更优选至少100名，更优选至少500名，最优选至少1000名受试者的样品。

在最简单的情况中，参考值与在对照样品中测量的水平或者与在大量对照样品中测量的水平的平均值相同。然而，也可从多于一个的对照样品计算参考值。例如，参考值可为表示对照状态（例如健康、具体病症、或具体疾病状态）的对照样品水平的算术平均值。优选地，参考值涉及存在于多个可比较的对照样品（代表相同或相似疾病状态的对照样品）中的数值范围，例如，标准差的一倍或更多倍的平均值。

类似地，参考值也可由其他统计参数或方法计算得出，例如作为在许多对照样品中发现的水平的确定百分点，例如90%、95%、97.5%或99%百分点。具体参考值的选择可根据所需灵敏度、特异性或统计学显著性（一般灵敏度越高，特异性越低，反之亦然）确定。可根据已知的并且由本领域技术人员认为适当的统计学方法进行计算。

术语“对照”或“对照样品”等为本领域技术人员熟知。优选地，“对照”涉及用以提供标准所进行的实验或检测，可根据它评价实验结果（例如受试者中的测量水平）。在当前语境中，标准优选涉及指征风湿性病症的相关自身抗体的水平。因此，“对照”优选是提供此类标准的样品。例如，对照样品可衍生自一名或更多名健康受试者、或一名或更多名代表非风湿性病症的受试者。

本发明的优选实施方案将优化的多变量截止值用于潜在自身抗体，依照本发明方法确定其存在或缺失从而将状态A与状态B区别开来，例如肌肉骨骼疾病的诱因是由风湿性病症或非风湿性病症引起的。诊断方法的准确性最好用其受试者工作特性（ROC）描述（尤其见Zweig, M. H.和Campbell, G., Clin. Chem. 39 (1993) 561-577)。ROC图是在观察到的整个数据范围上持续变化判定阈值得到的所有灵敏度/特异性对的曲线。

实验室检验的临床性能依赖于诊断准确性，或将受试者正确归入临床相关亚组的能力。诊断准确性可衡量该检测正确区分被研究受试者的两种不同病症的能力。此类病症为例如健康和疾病或良性对恶性疾病。

在各情况中，ROC曲线通过对判定阈值的完整范围以灵敏度对1-特异性作图描绘出两种分布的重叠。Y轴为灵敏度，或真阳性分数[定义为（真阳性检测结果数量）/（真阳性数量+假阴性检测结果数量）]。这也被称作疾病或病症存在下的阳性。它仅从被侵袭亚组计算得出。X轴为假阳性分数，或1-特异性[定义为（假阳性结果数量）/（真阴性数量+假阳性结果数量）]。这是特异性的指数并完全从未侵袭的亚组中计算得出。因为真和假阳性分数完全分开计算，通过使用两个不同亚组的检测结果，ROC曲线不依赖样品中疾病的患病率。ROC曲线的每个点表示对应具体判定阈值的灵敏度/1-特异性对。具有完美区分的检验（两种结果分布无重叠）具有通过左上角的ROC曲线，其中真阳性分数为1.0或100%（完美的灵敏度），且假阳性分数为0（完美的特异性）。没有区分（两组的结果分布相同）的检测的理论曲线是一条从左下角到右上角的45°对角线。大多数曲线落在这两种极限之间。（如果ROC曲线完全落在45°对角线以下，很容易通过将“阳性”的标准从“多于”逆转为“少于”进行矫正或反之亦然）。对于定性而言，曲线越接近左上角，检测的整体准确度越高。

定量实验室检测的诊断准确度的一个方便的目标是用一个数字表示性能。最常见的总体测量为ROC曲线下面积。按惯例，该面积通常>0.5（如果与此不符，可将决策规则逆转以使其相符）。数值范围介于1.0（两组检验数值完美分离）至0.5（两组检测数值之间没有明显的分布差异）之间。该面积并不仅仅依赖于曲线的特定部分例如最接近对角线的点或90%特异性处的灵敏度，还依赖于整个曲线。这是对ROC曲线与最完美曲线（面积=1.0）有多么接近的定量的、描述性表达。

如本文所用，术语“非风湿性病症”包括引起优选不为自身免疫病症引起的肌肉骨骼疾病的病症。优选地，所述自身免疫病症的特征为存在抗自身抗原的自身抗体。它也以抗原的存在为特征。

在本发明语境中，非风湿性病症优选为非自身免疫肌肉骨骼病症，即，其不由自身免疫病症引起。

在本发明语境中，优选的非风湿性病症选自骨关节炎、骨质疏松症、骨坏死、骨质减少、纤维肌痛、腰痛、（关节）痛风、假痛风、滑囊炎、创伤、骨折、腱炎。

骨关节炎是以关节软骨断裂和潜在丧失并伴有其它关节变化包括骨肥大（骨赘形成）为特征的慢性关节病。症状包括由活动加重或触发的逐渐增加的疼痛、睡醒时和不活动后持续<30分钟的肢体僵硬以及偶尔的关节肿胀。

骨质疏松是一种降低骨密度（每单位体积骨质量）并伴有骨结构退化的进行性代谢性骨病。骨骼衰弱导致骨折并伴有微小的或隐性的外伤，尤其在胸部和腰部脊柱、腕以及髋。常见急性或慢性背痛。

骨坏死是一种可能由特异病原学因素引起的或可能为特发性的骨的灶性梗塞。它可引起疼痛、活动受限、关节塌陷以及骨关节炎。

骨质减少是一种骨材料密度低于正常的病症。认为它是骨质疏松的前兆。然而，不是每个诊断为骨质减少的人都会发展为骨质疏松。

纤维肌痛是一种常见的诱因不明的非关节疾病，其特征是全身疼痛（有时剧烈）、肌肉、肌腱附着端周围和软组织邻近区域的泛发性触痛，以及肌肉僵硬，疲劳和睡眠差。在纤维肌痛中，可累及任何纤维肌性组织，尤其是枕部、颈部、肩部、胸部、腰部、及大腿部的那些。

滑囊炎是急性或慢性的滑膜囊炎症。其原因通常未知，但是如许多感染和晶体诱导疾病一样重复或急性外伤可导致。症状包括疼痛（尤其伴随运动或压力）、肿胀和触痛。

腱炎为肌腱的炎症，经常在退化（肌腱病）后形成；腱鞘炎是伴随腱鞘内层炎症的肌腱炎。症状通常包括运动疼痛和触诊触痛。

痛风是一种疼痛的并且可能致残的关节炎形式。起始症状通常包括单个关节中大多为足（尤其是大脚指）中疼痛肿胀的强烈发作。

假痛风是，如其名称所示，可引起类似于痛风的症状但响应于不同类型的晶体沉积的一类关节炎。假痛风，有时被称作焦磷酸钙沉积病，可引起局部疼痛和肿胀的严重发作，致使数天或数周失能。它也可引起更多类似骨关节炎或类风湿性关节炎的慢性关节炎。最常累及膝，但也会侵袭腕、肩、踝、肘或手。

腰痛是位于背部的疼痛。它可局限在腰椎或可辐射至膝以下的腿（坐骨神经痛）。

“肌肉骨骼疾病 (MSD)”是部分肌肉骨骼系统受外伤、受损和/或受伤藉此引起肌肉骨骼疾病的病症。MSD也被称作是骨骼疾病、肌肉疾病或肌肉骨骼系统疾病，这些术语在本文中可替换使用。

“肌肉骨骼系统”包括身体骨骼（骨架）、肌肉、软骨、肌腱、韧带、关节、包括软骨在内的结缔组织（支撑并将组织和器官连在一起的组织），所述软骨包括关节软骨（覆盖身体中所有动关节表面的平滑、发亮的白色组织）。

因此，肌肉骨骼病症也包括肌肉、软骨、肌腱、韧带、关节、包括软骨（包括关节软骨）在内的结缔组织的病症。

“肌肉骨骼疾病”的主要症状为部分肌肉骨骼系统的疼痛。通常患者自诉其全身疼痛。其它症状可为疲劳和/或睡眠紊乱。肌肉骨骼疾病可通过体检和医疗史诊断，也可通过成像或检测测定方法例如红细胞沉降率（ESR）诊断。

“疼痛”是肌肉骨骼疾病的主要症状。疼痛可轻微或剧烈，局部或全身（弥散）。虽然疼痛可如大多数损伤病例为急性和短暂的，但是疼痛可与慢性病一起持续。疼痛可为例如深处的、尖锐的或隐约的。疼痛的强度范围可从轻微到剧烈到极度痛苦并可例如表现为持久的或间歇的。个体之间的疼痛阈不同。已进行了许多尝试以创造可用于量化疼痛的疼痛量表，例如从0至10分的数字量表。在该量表中，0为一点都不疼，十为可想象的最厉害的疼痛。这些量表的目的是监测个体疼痛随时间的变化，例如使医疗者能看到病人对治疗的反应如何。

通常，MSD侵袭背、颈、肩以及上肢；它们较不经常侵袭下肢。MSD随时间进展并由工作本身或雇员的工作环境引起。它们也可由事故，例如骨折和脱臼引起。例如，MSD常集中在关节处并侵袭肌肉和骨。然而其它区域会被拉紧而且它们对外伤的反应可为损伤。通常，MSD侵袭背、颈、肩以及上肢；它们较不经常侵袭下肢。

上肢疾病（ULDs）侵袭手臂，从手指到肩及颈。它们常被称为重复性劳损，“RSI”，累积性创伤病症或职业过度使用综合征）。ULDs包括已识别的病症例如腕管综合征、腱鞘炎以及疼痛但无可鉴别的已识别病症的病症。还可使用其它术语例如重复性劳损、累积性创伤病症或职业过度使用综合征。上肢病症的症状为触痛、酸痛和疼痛、僵硬、虚弱、刺痛、麻木、绞痛或肿胀。

背疼包括可极度痛苦的腰疼。这一剧烈疼痛很难应对，但幸运的是由于是严重疾病所以它很少见。

“风湿性病症”是一种侵袭运动系统包括关节、肌肉、结缔组织、关节和骨骼周围软组织的病症。它引起例如在关节或肌肉中的炎症、肿胀、和/或疼痛。在本发明语境中，风湿性病症的优选特征为抗身体自身细胞和组织，尤其是抗身体肌肉骨骼系统的免疫应答。所述风湿性病症优选慢性的和/或以炎症为特征。

因此，风湿性病症优选为自身免疫肌肉骨骼病症，尤其是慢性、炎性自身肌肉骨骼病症。优选地，自身免疫肌肉骨骼病症为本文所述的肌肉骨骼病症，其中其由引起除其它症状外的肌肉骨骼疾病的自身免疫病症介导。自身免疫介导的肌肉骨骼病症可因此侵袭身体的肌肉骨骼系统。

自身免疫介导的肌肉骨骼病症的典型特征为循环自身抗体和/或自身反应性T细胞的存在和致病功能。

自身免疫肌肉骨骼病症优选一种或更多种如本文所述的类风湿性关节炎、结缔组织疾病和/或血管炎。当用于本文时，术语“关节炎”可与单数形式的“关节炎”替换使用。而且，当用于本文时，术语“血管炎”可与单数形式的“血管炎”替换使用。

术语“风湿性病症”也包括一组脊椎关节炎和感染性关节炎。因此，本发明设想这些方法也可用于检测脊椎关节炎和/或感染性关节炎是否为肌肉骨骼病的诱因。具体而言，在脊椎关节炎的情况中，检测获自受试者的样品中是否存在抗聚集蛋白聚糖G1结构域的自身抗体。当然，也可检测抗指征脊椎关节炎特别是银屑病关节炎、反应性关节炎、肠病性关节炎和/或未分化脊柱关节炎的自身抗原的任何其他自身抗体的存在。或者，可通过抗体方法或已知的任何核酸检测法检测指征脊椎关节炎的抗原。

例如，如本文其他地方所描述，也可检测关于受试者是否具有HLA-B27 MHC类型 (等位基因)，因为该等位基因很可能与白赫铁列夫症（Morbus Bechterew）发作相关。

在感染性关节炎的情况中也可使用本发明的方法。因此，指征感染性关节炎的抗体识别链球菌溶血素，衍生自乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒抗体、细小病毒B19、EB病毒、巨细胞病毒、风疹病毒和/或虫媒病毒的抗原。严格来说，在感染性关节炎的情况中，待测定的分析物为抗引起莱姆病关节炎、脓毒性关节炎和/或病毒性关节炎的感染性物质的抗体。这些病症由感染性物质例如乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒抗体、细小病毒B19、EB病毒、巨细胞病毒、风疹病毒或虫媒病毒引起。

因此，本发明设想在来自受试者的样品中测定识别抗原链球菌溶血素（一种衍生自乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、细小病毒B19、EB病毒、巨细胞病毒、风疹病毒和/或虫媒病毒的抗原）的抗体以排除或包括乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒抗体、细小病毒B19、EB病毒、巨细胞病毒、风疹病毒和/或虫媒病毒为肌肉骨骼病症的诱因。或者，可通过抗体方法或通过任何已知的核酸检测方法检测链球菌溶血素（一种衍生自乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、细小病毒B19、EB病毒、巨细胞病毒、风疹病毒和/或虫媒病毒的抗原）作为指征感染性关节炎的抗原。

因此，本发明方法进一步包括测定关于获自受试者的样品中是否存在指征至少一种脊椎关节炎病症和/或感染性关节炎病症的至少一种（自身）抗体或抗原。

在与术语“风湿性病症”一起使用时术语“至少”包括多于一种，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45种或全部的风湿性病症分别由于指征所述风湿性病症的至少一种自身抗体的存在或缺失被分别确定或未被确定。

因此，由于已知一种或相同的自身抗体可指征多于一种风湿性病症，所以测定其存在或缺失的自身抗体可指征多于一种风湿性病症。例如一种和相同的自身抗体可指征2、3、4、5、6、7、8、9 或10种或更多种风湿性病症，优选2、3、4或5种。

类风湿性关节炎优选包括类风湿性关节炎和/或幼年型类风湿性关节炎。

类风湿性关节炎表示以关节发炎为特征的病症，所述关节发炎的特点为肿胀、发热和疼痛。

类风湿性关节炎（RA）为可侵袭许多组织和器官但是主要累及关节的慢性、全身性炎性病症，藉此产生经常发展至关节软骨破坏和关节强直的炎性滑膜炎。其特征为由炎症和肿胀引起的严重关节痛。类风湿性关节炎也可在肺、心包、胸膜和巩膜产生弥漫性炎症，也产生结节性损伤，最常见皮肤下的皮下组织中。尽管类风湿性关节炎的诱因未知，但是自身免疫在其慢性和进展中发挥重要作用。

幼年型类风湿性关节炎（幼年特发性关节炎）为通常影响低于16岁儿童的一种类风湿性关节炎形式。关节炎、发热、皮疹、腺病、脾肿大和虹膜睫状体炎对于幼年型类风湿性关节炎是典型的。

脊椎关节炎优选包括银屑病关节炎、强直性脊柱炎 (白赫铁列夫症)、反应性关节炎、肠病性关节炎和/或未分化的脊柱关节炎。

脊椎关节炎（或脊椎关节病）为侵袭脊柱和关节、韧带和腱的炎性风湿性病症家族的统称。这些疾病可引起疲劳和背、颈、手、膝和踝的疼痛或僵直以及眼睛、皮肤、肺和心脏瓣膜的炎症。

具体而言，术语“脊椎关节炎”因此涵盖一组密切相关的炎性疾病包括脊柱（骶髂关节炎或脊椎炎）和周围关节的关节炎；以及韧带和腱结合至骨头的区域的炎症（起止点炎或起止点病）。这些疾病可引起脊柱、腿和手臂的疼痛，因为关节、韧带和腱发炎和/或使患者易椎骨骨折。也会出现皮疹、眼睛和肠道方面的问题。

属于脊椎关节炎的疾病可包括：1）强直性脊柱炎；2）反应性关节炎（以前称作Reiter’s综合征）；3）银屑病关节炎和银屑性脊椎炎，以及4）与炎性肠病、溃疡性结肠炎和克罗恩病即肠病性关节炎相关的关节炎或脊椎炎。还有另外的患者可发展成未分化脊椎关节炎。这表示他们具有上述疾病之一的症状或体征但是不一定发展成充分发展的疾病。属于未分化脊椎关节炎的病症的实例包括惠普尔病（Whipple disease）和白塞氏病（Beh?et disease）。

银屑病关节炎为发生在患有被称作银屑病的皮疹的患者中的一类关节炎。这一特殊的关节炎可侵袭身体中的任何关节，每个个体的症状不同。已知银屑病关节炎引起的持续炎症可导致关节损伤。

银屑病关节炎可侵袭身体中的任何关节，或者为单个关节或为身体两边的相同关节，例如一只或两只膝盖。被侵袭的手指和脚趾变厚，这种病症也称作指炎。

脊柱中的银屑病关节炎称作脊椎炎，引起背和颈的疼痛以及弯曲困难。它也可引起身体中腱和韧带连接至骨头的位点的触痛。这一被称作起止点病的病症可引起脚后跟、脚底或其他区域的疼痛、

强直性脊柱炎（AS来自希腊语ankylos,弯曲; spondylos, 椎骨）也称作别赫捷列夫氏病（Bechterew's disease）、Bechterew综合征和马-施二氏病（Marie Strümpell disease），是脊椎关节炎的一种形式，为慢性、炎性关节炎和自身免疫病。它主要侵袭脊柱的关节和骨盆的骶髂，引起脊柱的最终融合。对于许多患有AS的人，但更多发生于女性中，除了脊柱外该疾病还可侵袭全身的其他关节例如肩、髋、膝、足以及其他关节。对一些人而言，在出现任何脊柱疼痛或炎症之前会先侵袭到周围关节。

反应性关节炎为响应感染性物质例如细菌而通常在肠或生殖器区域发展的一种形式的关节炎。患有该疾病的人经历通常较大关节、特别是下肢以及脊柱和韧带的疼痛、肿胀和僵直。通常免疫系统重新调整对感染的反应所以该病症可能最终消失。

尽管许多感染包括病毒可引起反应性关节炎，但是该术语通常用于发生在肠（由病菌弯曲杆菌属、沙门氏菌属、志贺杆菌属和耶尔森菌属引起）或生殖器（由沙眼衣原体引起）感染之后的症状。

肠病性关节炎累及周围的关节，通常在下肢例如膝或踝。它通常仅累及少数的或数量有限的关节并紧随肠病之后。滑膜炎一般为自身限制性的并且为非变形的。

未分化脊椎关节病（或脊柱关节炎）为用于描述不满足AS或相关疾病的确诊标准的一些人群中的脊椎炎症状和体征。尽管许多医生不能识别该疾病，但是如果存在某些症状但不足以作出具体诊断时一些医生可做出“脊椎关节病”或“未分类的脊椎关节病”的初步诊断。一段时间之后，一些未分化脊椎关节病的患者可发展成界定清晰的脊椎炎形式例如强直性脊柱炎。

结缔组织病优选包括系统性红斑狼疮、系统性硬化症、多肌炎、皮肌炎、干燥综合征（sj?gren syndrome）、CREST-综合征和/或混合结缔组织病。

结缔组织病（也称作胶原病）为以身体的结缔组织作为病理学靶点的疾病。结缔组织为具有支撑、结合和保护器官的延伸的胞外基质的任意类型的生物组织。这些组织为身体形成框架或基质并由两种主要的结构蛋白分子胶原和弹性蛋白组成。每一种身体组织中存在不同类型的胶原蛋白。弹性蛋白具有伸展并回到其原始长度的能力-像弹簧或橡皮圈。弹性蛋白为韧带（骨头和骨头之间连接的组织）和皮肤的主要组分。在结缔组织病患者中，常见胶原蛋白和弹性蛋白被炎症损伤。许多结缔组织病以不正常的免疫系统活性为特征，具有对抗个体自身组织的免疫系统引起的组织炎症（自身免疫）。

系统性红斑狼疮（SLE）的特征为具有各种不同特征的结缔组织炎症，经常包括发热、虚弱、关节疼或类似类风湿性关节炎的关节炎、脸部、颈部和上肢的弥漫性红斑狼疮皮损、基底层退化和表皮萎缩以及自身免疫现象的其他迹象。通常，患者具有皮疹和关节炎以及疲劳和发热。

干燥综合征 (或sj?gren/sjogren syndrome)为侵袭身体不同部位但是最常侵袭泪腺和唾液腺的炎性疾病。患有这一病症的患者会察觉眼部刺激、砂砾感或灼痛。也常见口干和难以食用干燥食物以及面部和颈部周围的腺体肿胀。一些患者经历其他粘膜（例如鼻道、咽喉和阴道）和皮肤的干燥。“原发性”干燥综合征出现在不具有其他风湿病的患者中。“继发性”干燥综合征出现在具有其他风湿病最常为狼疮和类风湿性关节炎的人群中。

绝大多数的干燥综合征并发症由泪液和唾液减少引起。眼睛干燥的患者眼部周围感染的几率更高并且可损伤角膜。口干可引起龋齿、龈炎（牙龈发炎）和引起疼痛和灼热的口腔酵母感染（真菌性口炎）的增加。一些患者具有面部周围唾液腺肿痛发作。一些患者中，甚至在无类风湿性关节炎或狼疮的患者中会出现关节疼和僵硬伴随轻微的肿胀。手臂和腿上的皮疹与小血管发炎（血管炎）相关，少见肺、肝脏和肾脏发炎并且很难诊断。在一些患者中也记载了引起症状例如麻木、刺痛和虚弱的神经性并发症。

系统性硬化症（硬皮病）为诱因未知的罕见慢性病，其特征为弥漫性纤维化、退化性变化和皮肤、关节以及内脏器官（尤其是食管、下GI、肺、心脏和肾脏）的血管异常。常见症状包括雷诺综合征、多关节痛、吞咽困难、胃灼热和肿胀以及最终的皮肤紧绷和手指挛缩。肺、心脏和肾脏累及引起绝大多数的死亡。

系统性硬化症具有不同的严重程度和进展，从进展迅速并经常致命的内脏受累的全身皮肤变厚（具有弥漫性硬皮病的系统性硬化症）到单独的皮肤受累（通常为指和脸）和内脏疾病出现前的缓慢进展（通常几十年）。后一形式被称作局限皮肤型硬皮病或CREST综合征(皮肤钙沉着症、雷诺综合征、食管运动功能障碍、指硬皮病、毛细血管扩张)。此外，系统性硬化症可与其他自身免疫风湿性病症重叠-例如硬化性皮肌炎（无法与多肌炎区分的皮肤紧绷和肌肉无力）和混合结缔组织病。

包括深层和大面积损害的局限性硬皮病可妨碍关节的正常运动并影响日常活动。

多肌炎和皮肌炎为不常见的系统性风湿性病，其特征为肌肉（多肌炎）或皮肤和肌肉（皮肌炎）的炎性和退化性变化。最具体的皮肤体征为指关节的Gottron’s丘疹和眶周向阳性皮疹（periorbital heliotropic rash）。表现包括全身虚弱、一些触痛和之后主要是近端肢带肌肉的萎缩。

混合结缔组织病为不常见的、具体定义的、重叠综合征，其特征为SLE、系统性硬化病和多肌炎的临床特征，具有对核糖核蛋白抗原的非常高滴度的循环抗核抗体。手肿、雷诺综合征、多关节痛、炎性肌病、食管运动不足以及肺功能障碍是常见的。

血管炎优选包括风湿性多肌痛、巨细胞关节炎、Morbus Wegener和/或白塞氏综合征。

血管炎涵盖以血管发炎为特征的病症，通常具有缺血、坏死和闭塞变化。它可影响任何血管-动脉、小动脉、静脉、小静脉或毛细血管。当炎症使血管变窄并引起组织坏死时导致绝大多数的损伤。具体血管炎的临床表现不同并取决于受累血管的大小和受缺血影响的器官。

风湿性多肌痛(PMR)为与巨细胞（颞）动脉炎紧密相关的综合征。它通常侵袭55岁以上的成年人。它经常引起近端肌肉的严重疼痛和僵硬（无虚弱或萎缩）和非特异全身症状。风湿性多肌痛的特征为肩、髋带肌肉、背（上和下）以及颈部肌肉两侧近端的疼痛。清晨僵硬是典型的。肩症状可反映近端滑囊炎（例如，三角肌下、肩峰下）和较不经常的肱二头肌腱鞘炎或关节滑膜炎。清晨的不适更严重并偶而严重到妨碍患者起床和进行简单的活动。

巨细胞动脉炎(GCA)为一类血管炎或动脉炎，这一组疾病的典型特征为血管发炎。在GCA的情况中，最经常受累的血管为头皮和头部的动脉，尤其是颞部的动脉，正因为如此表示GCA的另一术语为“颞动脉炎”。

GCA可与另一疾病重叠，风湿性多肌痛。有时，5至15%的PMR患者被诊断具有GCA。从另一方面来看，约50%的GCA患者具有PMR症状。这两种病症的症状可同时或单独发生。

GCA最常见的症状为通常在颞区新出现的头痛，尽管GCA引起的头痛可出现在任何地方，包括颅骨的前，顶和后背。几乎同样常见的为更全身性的症状，例如罕见疲劳、食欲不振、体重降低、流感样感觉或发热。有时，GCA的唯一指征为复发性、长期的发热。较不常见的症状包括咀嚼时下颚疼或面部、舌头或咽喉痛。

韦格纳肉芽肿(Morbus Wegener)的特征为坏死性肉芽肿性炎症、小的和中等大小血管的血管炎以及通常具有半月体形成的局部坏死性肾小球肾炎。通常累及上和下呼吸道和肾，但可累及任何器官。症状随受累器官和系统而不同。患者可能表现出上和下呼吸道症状（例如，复发性流涕或鼻衄、咳嗽），然后为高血压和水肿或具有反映多器官受累的症状。其他症状包括关节痛以及指、脚趾或四肢的运动丧失。

白塞氏综合征为具有显著粘膜炎症的多系统、复发性、慢性血管炎性病症。常见表现包括复发性口腔溃疡、眼睛发炎、生殖器溃疡和皮肤受损。最严重的表现为失明、神经学或GI表现、静脉血栓以及动脉瘤。使用国际标准进行临床上的诊断。

就肌肉骨骼症状而言，一般相对轻微的、自身限制的以及非破坏性的关节痛或frank关节炎，特别是在膝和其它大关节中，发生在约50%患者中。可出现骶髂炎症。

感染性关节炎优选包括莱姆病关节炎、脓毒性关节炎和/或病毒性关节炎。

感染性关节炎（脓毒性关节炎）为通常由细菌但有时为病毒或真菌引起的关节的液和组织的感染。细菌或有时为病毒或真菌可通过血流传播或来自关节附近的感染组织，引起感染。关节和肌肉的疼痛、肿胀和发热加上疲劳一般在数小时或数天后出现。

主要为细菌的感染性生物体经常通过血流到达关节，但是如果在手术中或通过注射或损伤被污染可直接感染关节。不同的细菌可感染关节，但是最可能引起感染的细菌取决于个体的年龄。葡萄球菌和已知为革兰氏阴性杆菌的细菌最经常感染婴儿和幼儿，而淋球菌、葡萄球菌和链球菌最经常感染少年和成年人。有时螺旋菌例如引起莱姆病和梅毒的那些可感染关节。

病毒例如人免疫缺陷病毒（HIV）；细小病毒和引起风疹、腮腺炎和丙型或乙型肝炎的那些可感染任何年龄人群的关节。缓慢发展的慢性感染性关节炎最经常由结核分枝杆菌或真菌引起。

莱姆病为由蜱叮咬时进入身体的细菌，博氏疏螺旋体引起的感染。在其早期的局限性阶段，从三天至数周后，在蜱叮咬位置出现被称作游走性红斑的皮疹。该皮疹开始为小红斑并宽度逐渐增长至至少两英寸。

“抗体”指基本由一个免疫球蛋白基因或多个免疫球蛋白基因编码的多肽配体或其片段，其可特异结合并识别表位（例如，抗原）。被鉴定出的免疫球蛋白基因包括κ和λ轻链恒定区基因，α、γ、δ、ε、μ重链恒定区基因以及繁多的免疫球蛋白可变区基因。抗体以例如完整的免疫球蛋白或以大量经各种肽酶消化产生的良好表征的片段存在。这包括，例如Fab'和F(ab)'2片段。如本文所使用，术语“抗体”也包括通过完整抗体的修饰产生的抗体片段或通过重组DNA方法从头合成的那些。也包括多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或单链抗体。抗体的“Fc”部分指包含一个或更多个重链恒定区结构域CH1、CH2和CH3但是不包括重链可变区的免疫球蛋白重链部分。

本发明使用的“自身抗体”为对抗一个或更多个受试者自身蛋白（自体抗原或自身抗原）由受试者的免疫系统产生的抗体。优选的地，本发明实施方案中应用的自身抗体可指征本文描述的类风湿性关节炎、结缔组织病和/或血管炎。

当在本发明实施方案应用的自身抗体的语境下使用的术语“指征”包括本发明实施方案测定其存在或缺失的自身抗体通常存在于患有风湿性病症的受试者中。“通常存在”意指该自身抗体经常与风湿性病症相关。“经常相关”包括大于50%的可能性，优选大于60%，更优选大于70%，甚至更优选大于80%并特别优选大于90%或95%。

风湿性病症最优选类风湿性关节炎、结缔组织病和/或血管炎。

术语“指征”也包括本发明实施方案测定其存在或缺失的自身抗体对抗、结合、反应或识别自身抗原，即产生这些自身抗体的受试者的自体抗原。例如，通过与自身抗原结合、反应或将其识别可测定获自受试者的样品中自身抗体的存在。相似的，通过不结合、不反应或不识别自身抗原可测定获自受试者的样品中自身抗体的缺失。

术语“指征”也包括本发明实施方案测定其存在或缺失的抗原被对抗、反应或识别可能出现在风湿性病症受试者中的所述抗原的抗体结合。

因此，本发明另一可选择方面涉及排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因的方法，其包括通过与获自受试者的样品中指征至少一种风湿性病症的自身抗原或抗体结合或反应测定至少一种自身抗体或抗原的存在，

其中自身抗体与自身抗原的结合或抗原与抗体的反应使得可以排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因。

相似的，本发明另一可选择的和/或另外的方面涉及排除风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因的方法，其包括通过与获自受试者的样品中指征至少一种风湿性病症的自身抗原或抗体不结合或不反应测定至少一种自身抗体或抗原的缺失，

其中自身抗体与自身抗原的不结合或抗原与抗体的不反应使得可以排除风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因。

“抗原”为结合优选特异结合抗体的任何分子。它也包括可被MHC分子结合并被递呈至T-细胞受体的任何分子。在本发明中抗原优选为出现在风湿性病症患者中的抗原。

“自身抗原”用于表示测定受试者样品中其抗体的存在或缺失的抗原。“自身抗原”就本发明而言为能够与自身抗体相互作用并可引起免疫应答，藉此导致尤其是肌肉骨骼疾病的内源性组织成分。

自身抗原或抗原可为完全成熟形式的蛋白质，例如被称作靶抗原的蛋白质或可为前体、经加工的形式、未经加工的形式、同种型、变异体、其包括表位的片段或其等位基因变异体，只要该蛋白的经修饰的、经加工的或其变异体形式具有结合存在于受试者样品中的自身抗原的能力。其可分离自受试者，被重组或合成产生。

设想自身抗原包括其任何片段特别是免疫学可检测的片段。它们也意指包括免疫学可检测的蛋白质经蛋白水解的产物，以及经加工的形式、经转录后修饰的形式，例如标记的“前”，“原”或“前原”形式，或被去除以形成成熟蛋白的“前”，“原”或“前原”片段，以及自身抗原的等位基因变异体和剪接变异体。“自身抗原”指对于被自身抗体识别的宿主而言为内源性的分子例如蛋白质。自身抗原例如也可为蛋白质复合物、单链或双链的DNA或RNA、或糖蛋白。

如本文所使用，术语“肽”、“寡肽”和“多肽”可与本文中的蛋白质替换使用并指由肽键连接的连续氨基酸序列。如本文所使用，术语“蛋白质”指也可包括翻译后修饰的多肽，所述修饰包括蛋白质氨基酸的修饰并可包括添加化学基团或不以氨基酸为基础的生物分子。这些术语适用于一个或更多个氨基酸残基为对应的天然存在氨基酸的类似物或模拟物的氨基酸聚合物以及天然存在氨基酸聚合物。也可通过例如加入糖残基形成糖蛋白来修饰多肽。术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”包括糖蛋白以及非糖蛋白。如本文所使用，自身抗原的“变异体”（例如等位基因变异体或剪接变异体）指相对于参比多肽或蛋白一个或更多个氨基酸发生改变的氨基酸序列。在本发明中，自身抗原的变异体保留了参比自身抗原的抗原性或抗体结合性质。在本发明的优选方面，自身抗原的变异体可被能够结合参比自身抗原的相同自身抗体群结合。优选自身抗原的变异体与参比自身抗原在至少15个氨基酸的序列上具有至少60%一致性。更优选自身抗原的变异体与参比自身抗原在至少15个氨基酸的序列上至少70%一致。自身抗原变异体可与参比自身抗原在至少15个氨基酸的序列上例如至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致。本发明的自身抗原变异体可与参比自身抗原在至少20个氨基酸的序列上例如至少80%、至少90%、至少95%或至少99%一致。变异体可具有“保守”变化。其中被替换的氨基酸具有相似的结构或化学性质（例如，异亮氨酸取代亮氨酸）。变异体也可具有“非保守”变化（例如，色氨酸取代甘氨酸）。类似的小变异也可包括氨基酸缺失或插入或二者。可使用本领域熟知的计算机程序获得测定可替换、插入或缺失哪些氨基酸残基而不废除免疫学反应性的指导。

包含被自身抗体识别的表位的自身抗原片段的长度可至少为5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、75、100、150、200、250、300、350、400、450、500、750或1000个氨基酸。该片段也可为5、10、15、20、25、50、75、100、150、200或250和比自身抗原全长少一个氨基酸之间。通常，提前表征这些表位使得已知给定自身抗原的自身抗体识别该表位。表位作图的方法为本领域熟知。“表位”为抗原例如本文公开的自身抗原上被自身抗体识别的位点。

就本发明而言自身抗原优选至少为与风湿性病症相关的自身抗原。该风湿性病症最优选为类风湿性关节炎、结缔组织病和/或血管炎。

正常情况下自身抗体被免疫系统的自我调节过程清除，很可能通过在它们成熟前产生自身抗体的淋巴细胞的中和作用。然而，有时这一过程失效，与自身组分反应的抗体增殖。一般而言，自身抗体通过引起健康细胞的吞噬作用（摄取）或裂解（破裂）损害身体组织。自身抗体也干扰细胞的正常功能。而且，通过攻击受试者的自身细胞、组织和/或器官，自身抗体引起例如炎症和/或损伤。自身抗体产生的原因多样并且未完全了解。

对抗、结合、反应或识别意指本发明实施方案中应用的自身抗体特异结合本文描述的自身抗原。在这一语境中术语“特异地”意指自身抗体与其对应的自身抗原反应而基本不与另外的蛋白质反应。“对应的自身抗原”为被自身抗体结合的自身抗原。例如，对抗CCP（指征RA的典型自身抗原）的自身抗体优选基本不结合与CCP紧密相关的蛋白质。因此，术语“另外的蛋白”包括任何蛋白，其包括该自身抗体对抗的各个自身抗原紧密相关或同源的蛋白质。术语“基本不结合”意指本发明实施方案应用的自身抗体不结合另外的蛋白，即显示小于30%、优选20%、更优选10%、特别优选小于9、8、7、6、5、4、3、2、1%的交叉反应性。

可容易地特别是通过比较所述自身抗体与其对应的自身抗原的反应和所述抗体与另外的蛋白质的反应检测自身抗体是否如上文所定义地特异反应。

当用于本发明语境时，术语“至少一种自身抗体”包括测定多于一种自身抗体的存在或缺失。例如，可测定指征类风湿性关节炎、结缔组织病和/或血管炎的一组自身抗体的存在或缺失。

一组可包括至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、120、140、150、160、180、200、220、240、250、260、280、300、400、500、600、700、800、900或1000种自身抗体或抗原。

因此，可测定指征风湿性病症的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、120、140、150、160、180、200、220、240、250、260、280、300、400、500、600、700、800、900或1000种自身抗体或抗原的存在或缺失。

例如，当测定自身抗体的存在或缺失时，可测定指征风湿性病症的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、120、140、150、160、180、200、220、240、250、260、280、300、400、500、600、700、800、900或1000种自身抗原的存在或缺失。

如上所述，在本发明实施方案中测定其存在或缺失的自身抗体最优选指征类风湿性关节炎、结缔组织病和/或血管炎。

指征类风湿性关节炎的自身抗体优选识别CCP、ANA 和/或RF。

优选用于本发明的方法、用途和试剂盒中的包括环瓜氨酸肽 (CCP)在内的瓜氨酸肽 (CP)为RA患者的血清中发现的尤为重要的自身抗体的抗原。在过去数年中数个研究团队对它们进行了深入的研究(参加，例如, WO 98/08946; WO 98/22503; WO 99/28344; WO 99/35167, WO 01/46222和WO 03/050542)。最近Schellekens和其同事(Schellekens, G. A.等, Arthritis Rheum. 43 (2000) 155-163)报道了基于特异环瓜氨酸肽(CCP)的ELISA-检测与使用线性肽的相同测定法相比就RA的诊断准确度而言显示优越的性能特点。抗CCP的自身抗体，即最可能与在患者血清中循环的瓜氨酸多肽具有反应性并在体外测定法中结合CCP的抗体被命名为“抗-CCP”，也参见WO 2007/039280。

类风湿因子（RF）为抗自身为抗体的IgG的Fc部分的抗体。RF和IgG结合形成引起疾病进展的免疫复合物。不是所有患有类风湿性关节炎的人都具有可检测的类风湿因子。那些不具有的被称作“血清阴性”。类风湿因子也可为冷球蛋白（在血样冷却时沉淀的抗体）；其可为2（单克隆IgM到多克隆IgG）或3（多克隆IgM到多克隆IgG）型冷球蛋白。

指征结缔组织病的自身抗体优先识别抗核抗体（ANA）。

如术语“ANA（=抗核抗体）”所指明，ANA对抗各种核抗原并已在许多风湿性和非风湿性病的患者以及不具有可确定的临床综合征的患者的血清中检出。可获得检测ANA的免疫测定法的基于证据的使用指南(Solomon D.H., Arthritis和Rheumatism 47 (2002) 434-444)。

现在例如有可能包括单独的高度纯化的抗原用于不同特异性的各种抗核抗体并因此可特异地检测对应的ANA。例如，目前可特异检测对抗双链DNA，或被称作SSA、SSB、Sm/RNP，着丝粒等的抗原的抗体。其他ANA-抗原包括SSA60 (或Ro/SSA60)、SSA52 (或Ro/SSA52)、SSB (或La)、Jo-1、Scl70、Sm/RNP、双链DNA和着丝粒B肽(CENB-P)的抗原。

在结缔组织病的诊断中，自身抗原SSA60、SSA52、SSB、Jo-1、Scl70、Sm/RNP、双链DNA和着丝粒B肽的至少之一的阳性值可认为是ANA-阳性。

将数种上文所述的自身抗原详细地描述于下文：

SSA或Ro(SSA)抗原：

Ro(SSA)抗原的自身抗体为最经常使用的风湿性病自身免疫的血清学标记之一(Tan, E.M., Adv. Immunol. 44 (1989) 93-151; McCauliffe, D.P. 和Sontheimer, R.D., J. Inv. Dermatol. 100 (1993) 73S-79S)。它们存在于50-80%干燥综合征(SS)患者、30-40%系统性红斑狼疮患者(SLE)以及3-5%类风湿性关节炎(RA)患者的血清中(Harley, J.B. 等, Arthritis Rheum. 29 (1986) 196-206; Reichlin, M., J. Clin. Immunol. 6 (1986) 339- 348)。Ro(SSA)抗体靶向与已知为hY-RNAs的小RNA分子相关的蛋白质抗原。这些蛋白质-RNA复合物被称作Ro-核糖核蛋白(Ro-RNPs)，其包括RNP68、RNPA、RNPC。抗-Ro(SSA)阳性血清可包含两种不同类型的自身抗体；对抗60 kDa 的那些和对抗52 kDa多肽组分的那些（分别称作Ro60 和Ro52, 或SSA60和SA52）(Chan, E.K.L.和Buyon, J.P., Man. Biol. Markers Dis. (Kluwer Acad. Publ.) (1994) B4.1/1-18)。尽管绝大多数的Ro(SSA)阳性血清均与这两种组分反应，已报道抗-Ro60抗体仅出现在无抗-Ro52抗体的SLE血清中(Ben-Chetrit, E.等, Arthritis Rheum. 33 (1990) 349-355; Slobbe, R.L. et al., Clin. Exp. Immunol. 86 (1991) 99-105)，然而已报道抗-Ro52抗体在无抗-Ro60抗体下出现在特发性炎性肌病、皮肌炎和硬皮病中(Frank, M. B. 等, J. Autoimmun. 12 (1999) 137-142; Peene, I. et al., Ann. Rheum. Dis. 61 (2002) 1090-1094)。Ro52为三重基序(TRIM)蛋白质家族的一员。TRIM基序包括三个锌-结合结构域、RING指、1型B-盒和2型B-盒以及中心卷曲螺旋区（亮氨酸拉链）。认为TRIM蛋白可通过均聚作用辨别具体的细胞区室(Reymond, A.等, EMBO J. 20 (2001) 2140-2151)。

SSB或La(SSB)抗原

La (SSB)抗原的自身抗体可在最多87%的原发或继发SS患者的血清中检出。抗- La (SSB)自身抗体的存在通常与抗-Ro (SSA)自身抗体的存在同时发生，然而抗-Ro自身抗体在其他风湿病病症例如系统性红斑狼疮(SLE)和混合结缔组织病(MCTD)中更加普遍这一事实表明抗-La比抗Ro对原发和继发SS的特异性更强(St. Clair, E.W., Rheum. Dis. Clin. N. America 18 (1992) 359-376; Harley, J.B., J. Autoimmun. 2 (1989) 383-394)。La (SSB)抗原结合新生RNA聚合酶III转录物的寡(U) 3'端并促进转录终止和通过这一酶的再起始(Stefano, J.E., Cell 36 (1984) 145-154; Gottlieb, E. 和Steitz, J.A., EMBO J. 8 (1989) 841- 850)。也报道了其可作为可融化RNA-DNA杂交体的ATP-依赖型解螺旋酶发挥功能(Bachmann, M.等, Cell 60 (1990) 85-93)。

Jo1抗原：

多肌炎和皮肌炎中最常见的自身抗体为抗-Jo-1，其出现在15-20%的所有肌炎患者和约30%的成年PM患者中(Nishikai, M.和 Reichlin, M., Arthritis Rheum. 23 (1980) 881-888; Targoff, I.N., Rheum. Dis. Clin. North Am. 18 (1992) 455-482)。1983年Mathews和Bernstein(Mathews, M. B. 和Bernstein, R.M., Nature 304 (1983) 177-179)报道了Jo-1抗原为组氨酰-tRNA合成酶(HRS)，其为蛋白质合成中在组氨酸被转运至核糖体并随后被掺入多肽之前催化其偶联至特异的tRNA的酶。

RNP/Sm抗原：

对抗被称作RNP (包括RNPA、RNPB和RNP68)和Sm (包括SmB和SmD) 的snRNP（核内小分子核糖核蛋白）自身抗原的自身抗体最初在系统性红斑狼疮(SLE)患者的血清中检出(Tan, E.M. 和Kunkel, H. G., J. Immunol. 96 (1966) 464-471; Mattioli, M. 和Reichlin, M., J. Immunol. 107 (1971) 1281-1290)。之后在混合结缔组织病(MCTD)患者的血清中发现抗-RNP抗体(Sharp, G. C. 等, Am. J. Med. 52 (1972) 148-159)。

snRNPs为由数种与核内小RNA分子相关的多肽组成的一组核颗粒。丰度最高的snRNPs与前mRNA-剪接相关(Luehrmann, R.等, Biochim. Biophys. Acta 1087 (1990) 265-292)。优选用于本发明实施方案中的snRNP为U1-70，有时也称作U1 snRNP 70。

Scl70抗原

约20-28%硬皮病患者具有对抗被称作Scl-70的核蛋白的自身抗体(Douvas, A.S.等, J. Biol. Chem. 254 (1979) 10514- 10522)。1986年Shero等鉴定出Scl-70抗原为超螺旋DNA-松弛酶拓扑异构酶I(Shero, J. H. 等, Science 231 (1986) 737-740)。

双链DNA(dsDNA):

双链DNA的抗体罕见于健康个体中并认为是系统性红斑狼疮(SLE)的标志。经常通过基于绿蝇短膜虫（Crithidia luciliae）含DNA的细胞器的荧光检测法，通过放射免疫测定法(RIA)或 ELISA测定。已报导50到90%的未治疗SLE患者被检测为抗-dsDNA抗体阳性(Griesmacher, A. 和Peichl P., Clin. Chem. Lab. Med. 39 (2001) 189- 208)。SLE患者的临床改善通常与抗-dsDNA抗体的减少或完全消失相关。

着丝粒B-肽

抗-着丝粒抗体(ACA)存在于80-90%的患有系统性硬化症的局限皮肤型 (CREST) 变异型的患者中。它们对抗染色体的限制性区域(Barland, P.和Lipstein, E., Am. J. Med. 100 (1996) 16S- 23S)。已报导基于重组CENP-B肽的ELISA法在鉴定ACA中比免疫荧光测定法更灵敏(Parveen, S.等, J. Gasteroenterol. Hepatol. 10 (1995) 438-445)。

由于上文论述的大多数的单个自身抗体在某一程度上可指征具体亚群的自身免疫患者，所以优选将一个或更多个具体ANA的这些数值包括于评价算法中以指明这些样品很可能归类于不是RA的哪一个类风湿性病症亚组。

在根据本发明的另一优选的实施方案中，通过使用蛋白质芯片在单一的测定法中从相同的样品进行抗CCP-抗体的检测和ANA的检测。在这样的蛋白质芯片中，将用于抗-CPP测量的抗原以及用于ANA测量的各种抗原包被在单独区域中的固体支持体上，样品中的自身抗体与它们对应的自身抗原结合并且如US 6,815,217所述检测所有结合的自身抗体。

理想的诊断情形为这样一种情况，其中单一事件或过程引起各自的疾病，例如在感染性疾病中。在所有其他情况中，准确的诊断非常困难，尤其当不完全了解疾病的病因学时，例如RA的情况。因此，通常一起考虑各种临床症状和生物标记用于RA诊断。可单独测定标记或在本发明优选的实施方案中使用基于芯片或微珠的阵列技术同时测量。然后对每个标记使用单独的截止独立地解释生物标记的浓度或将它们组合起来用于解释。

在根据本发明的方法中，至少分别检测了生物标记抗-CCP和ANA的浓度并且将标记组合与类风湿性关节炎的存在或缺失相关联，其中在关联抗-CCP和ANA的测量值的优选方式中认为抗-CCP阳性并且ANA阴性的样品指征RA。满足抗-CCP阳性并且ANA阴性的检测要求的样品很可能来自RA患者。

对于RA而言，除了存在抗CCP、RF和/或ANA的自身抗体，也可测定生物标记例如CRP或IL-6的量。可通过本文描述的任何免疫测定法和/或通过任何基于核酸的技术例如PCR完成测定。

C-反应性蛋白（CRP）为具有21kDa亚基的同源五聚体Ca2⁺-结合急性期蛋白，其与宿主防御相关。CRP合成由IL-6诱导并间接由IL-1诱导，因为IL-1可触发肝窦状隙中Kupffer细胞的IL-6合成。90%健康人群的CRP正常血清浓度 < 3μg/ml (30 nM)并且99%的健康个体中< 10 μg/ml (100 nM)。例如可通过均相测定模式或ELISA测定CRP血浆浓度。C-反应性蛋白为潜在的全身炎症的标记。

白介素-6(IL-6)为具有多种生物学活性的21 kDa分泌型蛋白，其生物活性可分为与血细胞生成相关的那些和与固有免疫应答的激活相关的那些。IL-6为急性期反应物并刺激包括粘附分子在内的多种蛋白质的合成。其主要功能为介导肝脏蛋白的急性期产生并且其合成由细胞因子IL-1 和TNF-α诱导。正常情况下IL-6由巨噬细胞和T淋巴细胞产生。IL-6的正常血清浓度< 5 pg/ml。

另外的生物标记为IL17A、S100A12、骨桥蛋白、原-MMP-1、原-MMP-3、透明质酸、sCD14、血管发生标记以及骨、软骨或滑膜代谢的产物。

可指征脊椎关节炎的自身抗体识别聚集蛋白聚糖的G1结构域(参见Zhou等(2003), Rheumatology 42:1; doi:10.1093/rheumatology/keg230)。

此外，可通过例如任何核酸扩增技术例如PCR检测受试者样品中已知指征白赫铁列夫症的HLA-B 27。

人白细胞抗原B*27 (亚型B*2701-2724)为由染色体6上的主要组织相容性复合体(MHC)的B基因座编码的I型表面抗原并将微生物抗原递呈至T-细胞。HLA-B27与被称作“血清阴性脊椎关节病”的一组自身免疫疾病紧密相关。指征结缔组织病的自身抗体优选识别ds-DNA、SS-A、SS-B、Sm、组蛋白、Scl-70、Jo-1、着丝粒蛋白B、RNP、U1-70和/或胞衬蛋白。

抗ds-DNA、SS-A、SS-B、Sm、组蛋白、Scl-70、Jo-1、着丝粒蛋白B和RNP的抗体描述于上文。

胞衬蛋白 (或α-胞衬蛋白)也称作血影蛋白，α，非红细胞1 (non-erythrocytic 1) (α-胞衬蛋白) 或SPTAN1。它是与分化细胞中特化的膜-细胞骨架结构域的建立相关的主要皮质细胞骨架蛋白。

指征血管炎的自身抗体优选识别PR3和/或MPO。

蛋白水解酶3 (PR3)为韦格纳肉芽肿病患者中抗-嗜中性粒细胞胞质抗体(ANCA)的主要自身抗原。

髓过氧化物酶(MPO)为来自嗜中性粒细胞颗粒的酶。复杂的加工步骤序列（不包括重组生产）将80 kDa的原始转录产物转化成由两个64 kDa重链和两个13 kDa轻链组成的成熟的酶。MPO从独特的“绿血红素”辅因子获得其特征性的绿色。MPO的过氧化物酶活性生成次氯酸盐，其可杀死微生物并使嗜中性白细胞释放的用于降解它们周围物质的裂解酶的抑制剂失活。

MPO为许多血管炎、脉管系统的炎性自身免疫疾病的自身抗原，其可根据受累血管类型分类。

可通过检测人蛋白质微阵列例如ProtoArray?鉴定指征风湿性病症优选自身免疫-介导的肌肉骨骼病症的另外的自身抗原。具体而言，在人蛋白质微阵列上分析被诊断为自身免疫-介导的肌肉骨骼病症的受试者的血清以鉴定与自身免疫-介导的肌肉骨骼病症相关的自身抗原。更具体而言，分析被诊断为自身免疫-介导的肌肉骨骼病症的患者的血清并与来自健康受试者的血清比较。

被来自诊断为自身免疫-介导的肌肉骨骼病症的患者的血清的抗体结合的抗原为与自身免疫-介导的肌肉骨骼病症相关的自身抗原的候选物。

特别是仅在或更频繁地在来自被诊断为自身免疫-介导的肌肉骨骼病症的受试者的血清中被鉴定出并且-相对而言-不存在于或较少存在于健康受试者的血清中的自身抗原为应用于本发明实施方案中的首要候选自身抗原。

包含这些自身抗原的微阵列或其他测定模式能够检测受试者样品中结合这些自身抗原的自身抗体的存在，使得可以分别测定是否可以排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因或是否可以排除风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因。

下表提供了通常与风湿性病症优选自身免疫-介导的肌肉骨骼病症相关的自身抗原的概述。这些自身抗原可用于本发明的方法、用途和试剂盒中以在受试者样品中分别测定是否存在指征自身免疫-介导的肌肉骨骼病症的自身抗体。

与自身免疫-介导的肌肉骨骼病症相关的另外的自身抗原选自US 2008/0254482的表1。该表提供了来自RA、SLE和ANCA受试者的血清的抗体比来自健康个体的抗体更常结合的一系列自身抗原。因此，预计一种或更多种来自所述表格的自身抗原可用于本发明的方法和试剂盒中。

因此，本发明的优选方面设想使至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、120、140、150、160、180、200、220、240、250、260、280、300、400、500、600、700、800、900 或1000种自身抗原与获自受试者的样品接触从而测定所述样品中是否存在指征至少一种风湿性病症（优选本文描述的那些）的至少一种自身抗体，其中所述自身抗体的存在使得可以排除非风湿性病症为所述受试者肌肉骨骼病的诱因。通过自身抗体与获自受试者的样品中的自身抗原结合、反应或将其识别测定该存在。

例如，设想使本文描述的所有自身抗原和/或所有已知的与风湿性病症相关的自身抗原和/或可被和/或将被鉴定出（例如通过使用US 2008/0254482描述的方法）的那些与获自受试者的样品接触从而测定所述样品中是否存在指征至少一种风湿性病症（优选本文描述的那些）的至少一种自身抗体，其中所述自身抗体的存在使得可以排除非风湿性病症为所述受试者肌肉骨骼病的诱因。通过自身抗体与获自受试者的样品中的自身抗原结合、反应或将其识别测定该存在。

相似的，在另一优选的方面本发明设想使至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、120、140、150、160、180、200、220、240、250、260、280、300、400、500、600、700、800、900 或1000种自身抗原或抗体与获自受试者的样品接触从而测定所述样品中是否缺失指征至少一种风湿性病症（优选本文描述的那些）的至少一种自身抗体或抗原，其中所述自身抗体或抗原的缺失使得可以排除风湿性病症为所述受试者肌肉骨骼病的诱因。通过自身抗体与获自受试者的样品中存在的分析物的自身抗原或抗体不结合、不反应或不识别测定该缺失。

例如，设想使本文描述的所有自身抗原和/或所有已知的与风湿性病症相关的自身抗原和/或可被和/或将被鉴定出（例如通过使用US 2008/0254482描述的方法）的那些与获自受试者的样品接触从而测定所述样品中是否缺失指征至少一种风湿性病症（优选本文描述的那些）的至少一种自身抗体，其中所述自身抗体的缺失使得可以排除风湿性病症为所述受试者肌肉骨骼病的诱因。通过自身抗体与获自受试者的样品中存在的分析物的自身抗原或抗体不结合、不反应或不识别测定该缺失。

任选地，本发明也设想分析来自患有肌肉骨骼疾病的受试者的样品中包含的蛋白质和/或多聚核苷酸中一种或更多种本文提及的和/或本领域熟知的与肌肉骨骼疾病相关的生物标记的存在或缺失。例如，已知患有自身免疫病症例如桥本甲状腺炎的患者也会患有肌肉骨骼疾病。因此，任选检测自身免疫疾病的典型生物标记。

如本文在本发明的方法和试剂盒的语境中所使用“测定”指鉴定待测定物质特别是指征至少一种风湿性病症的至少一种自身抗体或自身抗原的存在或缺失或量。测定也包括使获自受试者的样品与包括支持体和至少一个检测区域的固相接触（即被接触），其中该检测区域包含自身抗原或抗体。

可通过本领域已知的和上文描述的免疫测定法测定指征至少一种风湿性病症的至少一种自身抗体或自身抗原。

优选地，测定包括

（i）提供包括支持体和一个或更多个检测区域的固相，每一检测区域包含自身抗原，

（ii）使获自受试者的样品与该固相和至少一种携带信号发生基团或可结合至信号发生基团的自身抗体-特异受体接触，以及

（iii）通过测定各检测区域的信号发生基团检测自身抗体的存在或/和量。

在测定指征风湿性病症的抗原的情况中测定可任选包括

（i）提供包括支持体和一个或更多个检测区域的固相，每一检测区域包含抗体（特异于可指征风湿性病症的抗原），

（ii）使获自受试者的样品与该固相和至少一种携带信号发生基团或可结合至信号发生基团的抗原-特异受体（优选抗体）接触，以及

（iii）通过测定各检测区域的信号发生基团测定抗原的存在或/和量。

优选的固相为具有多于一个检测区域的固相。这样的固相也称作阵列；参见，例如US 5,432,099或US 5,126,276。如本文所使用，术语“阵列”指支持体上一定形式的实体排列。尽管该形式通常为二维形式，但是所述形式也可为三维形式。在本发明的一个阵列中，实体为包含自身抗原的区域。

术语“一个或更多个检测区域”包括所述固相具有至少一个检测区域，例如具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18 、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、48、50、52、54、56、58、60、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、120、128、130、140、150、160、170、180、190、200、250、256、384、512、1024、2048、4096或更多个检测区域。

优选地，一个检测区域包含一种自身抗原。然而，尽管较不优选，一个检测区域可包含多于一种自身抗原，例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多种自身抗原。

自身抗原可通过特异结合系统结合至固相，例如生物素/亲和素、生物素/链霉亲和素、生物素/抗生物素、半抗原/抗半抗原、碳水化合物/凝集素以及抗体或抗体片段和抗这一抗体或抗该抗体片段的抗体。或者，可通过共价相互作用、非共价相互作用等结合。

在某些实施方案中，阵列可为微阵列或纳米阵列。“纳米阵列”为分离的实体相隔0.1 nm至10 μm例如1 nm至1 μm的阵列。

“微阵列”为阵列上实体的密度至少为100/cm²的阵列。微阵列上的分离的实体相隔例如多于1 μm。

如本文所使用“阵列”指测定抗本文所述的自身抗原的自身抗体的存在或缺失的蛋白质阵列、蛋白质微阵列或蛋白质纳米阵列。例如，它为用于测定自身抗体的存在或缺失的包括自身抗原（例如本文提供的那些）的定制蛋白质阵列。当用于本文时术语“蛋白质芯片”与蛋白质阵列或微阵列同义。

优选地，阵列包括无孔载体。该无孔载体可由任何无孔材料制成。优选地，该载体包括由塑料、玻璃、金属或金属氧化物组成的表面。具体优选的载体具有由聚苯乙烯组成的表面。设想将空间上分离的检测区域排列在载体上。这些检测区域上存在自身抗原。存在意指将自身抗原包被到检测区域上或固定化在检测区域上。通过例如两个部分例如亲和素/链霉亲和素或糖/凝集素的吸附性结合、共价偶联或通过高亲和结合的偶联完成固定化。

或者，所述阵列包括多孔载体。该载体优选包括由聚苯乙烯组成的表面，例如Luminex的xMAP技术中应用的微球；参见WO 97/14028。

如果空间上分离的检测区域仅荷载了一种自身抗原将尤其有利。因此可为每一种自身抗原建立特定条件，例如它的浓度、缓冲液、盐等。因此，可用最大量的自身抗原包被每一个检测区域。

而且，没发生关于与自身抗体的潜在结合的自身抗原的竞争。“检测”步骤可提供阳性/阴性结合结果或可给出样品中自身抗体水平的相对或绝对值。该结果可提供诊断、预后或用作进行进一步检测或评价的指标，其可引起或不引起诊断或预后。可在任何固体支持体例如珠、皿(dish)、板、孔、片(sheet)、膜、载玻片、芯片或阵列例如蛋白质阵列上进行检测。所述阵列为微阵列并可任选为本文描述的高密度微阵列。

一般通过所谓的“间接检测-模式”检测自身抗体，其中通过自身抗体-特异受体检测结合的自身抗体。

“自身抗体-特异受体”为与自身受体特异结合、反应或将其识别并携带信号发生基团或可结合至信号发生基团的部分。例如，该部分可为抗人自身抗体的抗体。信号发生基团可与自身抗体-特异受体共价或非共价结合。

“非共价地”包括(a)该部分嵌入自身抗体；和(b)基于相互之间以非共价方式特异相互作用（例如抗原-抗体结合）的两个结合伴侣的任何合适的结合反应。

例如，可针对自身抗体产生抗体或抗体片段并使用常规抗体技术偶联至信号发生基团(参见, 例如, Folli等, 1994, “Antibody-Indocyanin Conjugates for Immunophotodetection of Human Squamous Cell Carcinoma in Nude Mice,” Cancer Res. 54:2643-2649; Neri等, 1997, “Targeting By Affinity-Matured Recombinant Antibody Fragments of an Angiogenesis Associated Fibronectin Isoform,” Nature Biotechnology 15:1271-1275)。所述抗体或其功能片段可接着结合至该自身抗体。

由于自身抗体可存在于获自受试者优选人类受试者的样品中，该部分优选为特异结合任何Ig同种型例如IgG、A、M、D或E优选IgG的人抗体恒定区的抗体。恒定区包含恒定结构域(CH1)、铰链区和另外两个恒定(CH2和CH3)结构域。在IgG同种型中，IgG1、G2、G3和G4亚型为已知的。因此，也设想该抗体结合至这些亚型。自身抗体-特异受体的优选实例为结合自身抗体Fc部分的抗体或其片段。可认为这样的自身抗体-特异受体为所谓的自身抗体通用结合物并可通过免疫从非人类哺乳动物例如小鼠或大鼠获得。

测定（自身）抗体的可选择方法为所谓的双抗原三明治(DAGS)法，其中将该自身抗原用作“固相抗原”（结合至本文所述的固相）和“检测抗原”（在液相中，即它是另外添加的）。

或者，自身抗体-特异受体为被自身抗体结合的抗原。优选的，所述抗原为被该自身抗体结合并存在于本文其他地方所述的检测区域的相同自身抗原。更优选地，所述抗原为被标记的自身抗原。

如果自身抗体-特异受体为自身抗原，所谓的双抗原桥检测/方法概念可用于测定包含于受试者样品中的自身抗体的存在和/或量。在这样的方法中，除了固相外，将样品与另外的携带可检测标记的自身抗原温育。因此，在固相上自身抗原包含(结合)于检测区域并且所述自身抗原以可结合至自身抗体的形式存在并且携带信号发生基团或可结合至信号发生基团。

通过固定化复合物方法通过测定结合至固相的信号发生基团检测样品液体中的自身抗体。

检测操作优选包括将样品液体与纯化的被标记的自身抗原和包含于检测区域的纯化的自身抗原混合以获得由被标记的自身抗原、自身抗体和固相-结合自身抗原组成的被标记的固定化复合物。

不包含于检测区域内的被标记的自身抗原携带本文描述的信号发生基团。固相自身抗原例如可通过双功能间隔区（spacer）直接结合至固相。

桥检测形式的详细描述提供于EP-A-0 280 211。该专利申请以引用方式并于本文。

也可通过“回滴测定法”完成检测步骤。具体而言，当来自样品的（自身）抗体结合至其（自身）抗原后，加入对抗该（自身）抗原的标记抗体并会结合至未被来自样品的（自身）抗体覆盖的（自身）抗原分子，因此可在这一竞争性检测操作中测定游离的自身抗体，藉此使得可以测定所述自身抗体的量/浓度。

自身抗体-特异受体携带“信号发生基团”。或者，它可以结合至信号发生基团。信号发生基团指通过分光镜的、光化学的、生物化学的、免疫化学的或化学手段可检测的组合物。例如，可用的标记包括放射标记例如³²P、³⁵S或¹²⁵I;荧光染料（例如，Cy-3、Cy-5）；生色团、高电子密度试剂；生成可检测信号的酶（例如，如ELISA中经常所使用的）；或自旋标记。标记或可检测部分具有或生成可用于定量样品中结合的可检测部分的量的可测量信号，例如放射活性、发色或荧光信号。

可将可检测部分掺入或使其共价或通过离子、范德华力或氢键结合至信号发生基团，例如掺入放射活性的核苷酸，或可被链霉亲和素识别的生物素化的核苷酸。标记或可检测部分可为直接或间接可检测的。间接检测可涉及第二个直接或间接可检测部分结合至该可检测部分。例如，可检测部分可为结合伴侣配体，例如生物素，其为链霉亲和素的结合伴侣，或核苷酸序列，其为可特异杂交的互补序列的结合伴侣。结合伴侣自身可为直接可检测的，例如可用荧光分子标记抗体自身。结合伴侣也可为间接可检测的。

当自身抗体特异受体“可结合至信号发生基团”时，这意指它可结合至信号发生基团。例如，自身抗体-特异受体可携带可结合至信号发生基团的功能基团。功能基团可为结合至生物素的链霉亲和素/亲和素，抗原例如标签，例如结合至抗体的GST或组氨酸残基，结合凝集素的糖或已知的Dig/抗-Dig系统。结合功能基团的部分携带信号发生基团。

当测定指征风湿性病症的抗原的存在或缺失时应用的“抗原特异受体”可为识别该抗原并携带如本文所述的信号发生基团的抗体。

在另一方面，本发明提供用于排除非风湿性病症为肌肉骨骼疾病诱因的检测试剂盒，其包括

（a）至少一种可指征类风湿性关节炎的自身抗原；

（b）至少一种可指征结缔组织病的自身抗原；和/或

（c）至少一种可指征血管炎的自身抗原；

其中所述检测试剂盒包括无孔支持体和至少一个检测区域，所述检测区域各包含特异结合待检测自身抗体的自身抗原。

任选地，所述试剂盒也包括至少一种用于测定指征脊椎关节炎的抗原的抗体和/或至少一种用于测定指征如本文所述的感染性关节炎的特异抗体的抗原。

本发明试剂盒也可任选包括一种或更多种对可指征风湿性病症的抗原具有特异性的抗体。

该试剂盒也可任选包括用于检测可指征引起肌肉骨骼病例如桥本氏病（Hashimoto disease）的自身免疫病症的自身抗原和/或自身抗体的工具和方法。

该试剂盒优选进一步包括至少一个不包含自身抗原的对照区域。

试剂盒的自身抗原例如可固定化至固体支持体或表面。自身抗原可为例如固定化在阵列中。因此，试剂盒可为包括蛋白质阵列在内的阵列。蛋白质微阵列可使用珠技术，例如Luminex 技术(xMAP) (Luminex Corp., Austin, Tex.)。阵列可包括在阵列上固定化的一种或更多种阳性对照蛋白、一种或更多种阴性对照和/或一种或更多种标准化对照。

试剂盒可进一步包括检测自身抗体结合至自身抗原的报告试剂，例如结合至与可检测标记连接的自身抗体的抗体。试剂盒可进一步包括可用于各种免疫反应性测定法例如ELISA，或其他本领域技术人员已知的免疫测定技术的试剂。可使用试剂盒试剂的测定法可为竞争性测定法、三明治测定法，并且标记可选自用于放射免疫测定法、荧光或化学发光免疫测定法的熟知的标记。

试剂盒也可包括计算机可读形式的程序，用于分析使用该试剂盒进行的方法的结果以实践本发明方法。

本发明的试剂盒也可在任何数量的分离的容器、包(packets)、试管、管形瓶、微量滴定板等中包括一种或更多种组分，或这些组分可在这些容器中以各种组合形式组合。

本发明试剂盒也可包括用于进行本文所述的一种或更多种方法的使用说明和/或本文所述的一种或更多种组合物或试剂的描述。使用说明/描述可为印刷形式并包括于试剂盒插入物中。试剂盒也可包括对提供这些使用说明或描述的因特网位置的书面描述。

在另一方面，本发明提供本发明的（检测）试剂盒在排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因中的用途。该用途优选为诊断。

本发明也提供排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因的诊断方法。

上文描述的例如本发明方法的实施方案作出必要修改后同样适用于试剂盒和用途。

结合以引用方式并于本文的附图可最好地理解本发明的公开内容。而且，从以下通过举例说明提供的并且不具有限制性的实施例可获得对本发明及其许多优点的更好的理解。

附图说明

图例

这些图显示

图1：肌肉骨骼疾病诊断的算法（来自Harrison's Principles of Internal MedicineHarrison’s Chapter 320）。

ESR: 红细胞沉降率; CRP: C-反应性蛋白; DIP: 远侧指节间的; CMC: 腕掌的; PIP: 近端指节间的; MCP: 掌指的; MTP: 跖趾的; PMR: 风湿性多肌痛; SLE: 系统性红斑狼疮; JA: 幼年型关节炎。

具体实施方式

实施例

以下实施例举例说明本发明。这些实施例不应理解为限制本发明范围。包括这些实施例用于举例说明且本发明仅受限于权利要求。

实施例1： 免疫多参数芯片技术IMPACT-一般操作

用链霉亲和素层将表面积为约2.5 x 6 mm的黑色聚苯乙烯芯片完全包被。在这一链霉亲和素的表面我们使用喷点（ink-jet）技术点样成行的相同的试剂点（约每行每种试剂20个点）。每一点的直径约150μm并且包含能够与样品中的分析物（例如抗原或抗体）特异结合的生物素化的结合试剂。

用样品稀释缓冲液稀释每一份样品并且每个芯片点样40 μl稀释样品并温育。在自动化前-原型仪器上进行检测。

检测特异试剂

样品稀释缓冲液：50mM Tris、30mM MES、50mM NaCl、5mM EDTA、0.5% Casein、0.1%去污剂(Polydocanol)、0.2%防腐剂(Oxypyrion和甲基异噻唑盐酸盐(MIT))

洗涤缓冲液：10mM Tris、0.01% Polydocanol、0.001% Oxypyrion、0.001% MIT

检测操作

将稀释样品于37℃温育6 min。在这一温育中，包含于样品中的分析物结合至其特异结合试剂。然后吸取样品并用洗涤缓冲液洗涤芯片。之后将芯片与地高辛化(digoxigenylated)并特异结合至与位于点内的结合伴侣结合的样品中的分析物的缀合抗体的混合物37℃温育3min。又一次洗涤步骤后，将芯片与荧光标记的<Dig>抗体37℃温育3min。再一次洗涤并吸取过量的试剂后荧光标记被激发，用CCD 照相机监测光并将光强度转化为分析物浓度。

实施例2：多参数阵列的组成

在生产了多重阵列试剂盒后检测样品组以测定以下分析物：

多重-1: RF-IgM、CRP、SAA

多重-2: 5种不同的抗-CCP-自身抗体: 将5种不同的肽(环瓜氨酸肽) 包被至该表面

多重-3: 抗-着丝粒B肽、抗-SSA52、抗-Jo-1、抗-SSA60、抗-SSB、抗-Scl70、抗-RNP/Sm、抗-dsDNA

多重4: IL-6、透明质酸(HA)原-MMP-3、E-选择素

实施例3：研究人群

患者

按照统一的标准操作规程(SOP)使患者入组六个欧洲试验中心的前瞻性纵向研究。在Bristol (UK)采集骨关节炎（OA）患者的样品，在Chur (CH)采集自身免疫病和对照患者的样品，在五个中心采集RA患者的样品。在本试验中，仅使用入组时的样品。RA队列的纳入标准为存在最少四个ACR标准加2年随访后的回顾性确诊(Hochberg, M.C.等, Arthritis Rheum. 35 (1992) 498-502)。所有的RA、自身免疫和对照患者患有经各个中心验证的阳性诊断的已确定的疾病。本试验得到各参与中心的伦理委员会的伦理批准。

病例报告表

RA患者的标准病例报告表（CRF）登记年龄、性别、ACR标准、疾病持续时间、手和脚的x-射线照片、关节手术和并存病、有触痛和肿胀的关节数量、之前和目前的用药、健康评价调查问卷(HAQ)和SF36调查问卷。

自身免疫和对照疾病的标准病例报告表报告年龄、性别、第一次症状的开始、最终诊断、临床体征、CRP、用药和联合关联(joint association)。

诊断背景的组组成

模拟样品集合的组成以反映全科医生的诊断背景。全科医生很可能遇到的不同疾病组的表示是基于美国总人口中肌肉骨骼疾病的相对发病率数据(Lawrence等，1998)并且仅为谨慎地预选。该测定法的阳性结果可导致将各个患者转送到专科诊所。

表1：样品组(n = 848)的组成和根据发病率的GP环境的疾病组表示

实施例4：单一标记的单变量结果

各诊断单一标记的准确性由其接受者工作特性(ROC)描述(尤其参见 Zweig, M.H.和Campbell, G., Clin. Chem. 39 (1993) 561-577)。ROC图为在整个所观察到的数据范围连续变化判定阈值得到的所有敏感度/特异性对的曲线。测定每一个单一标记的ROC-面积和90%特异性时的敏感度。

表2：诊断为“疾病”（包括RA在内的自身免疫病）的模拟组对比“对照”的单变量结果（100次模拟循环的中值）

由于RA患者在“疾病组”中较高的发病率，CCP肽和类风湿因子显示最高的敏感度。由于这一转送检测的目标为检测所有的自身免疫疾病而不进行任何鉴别诊断，我们也评价了抗-CCP-max或ANA-max评分。这一max-评分被定义为在相似抗原例如抗-ccp-肽或全部的ANA自身抗原的组中具有最高值的抗原的浓度。

实施例5：多变量分析

将患者队列随机分成训练组和测试组（各约50%的患者）。在训练组生成分类算法并在独立的检测组验证该算法。训练组和测试组的样本数量见表3。

表3：将患者分配到训练组和测试组

用正则化判别分析 (RDA)生成分类算法，其为普通判别分析的泛化，即二次-线性判别分析 (McLachlan, G.J., Discriminant Analysis and Statistical Pattern Recognition, Wiley Series in probability and mathematical statistics, 1992)。使用用于协方差矩阵的常规最大似然(插入)估计的RDA选择。这些选择的特征在于双参数(

)，其值通过共同将未来错分类风险的基于样品的估计量最小化而根据具体情况定制(Friedman, J.H., Regularized Discriminant Analysis, Journal of the American Statistical Association, Vol. 84, 1989, 165-175). 标记组的构建是逐步进行的，从用于分类问题的最佳单一标记开始并在总分类误差不再显著变化时结束。为了获得集中分布，用自然对数函数转化每一个单一标记。在训练组上使用50-倍交叉验证以得到对总体误差（敏感度、特异性）的可靠估计。一旦确定了标记组即进行验证而不进行独立测试组内的任何进一步调整。

表4显示了患病患者（包括RA在内的自身免疫病）的模拟组对比对照集合的分类结果。选自训练组的最佳2标记组为抗-CCP-max 和ANA-max。加入第三个标记(IL-6或SAA)显示与最佳2-标记组可比的结果：伴随特异性略微降低的敏感度略微增加。加入另一标记后假阳性或假阴性分类患者的数量增加。

然后通过将该算法转换到独立的患者测试组中证明最佳标记组。如图4所示，2标记组的结果可在测试组中重现。这说明通过抗-CCP-max 和ANA-max组合产生的算法是非常可靠的。另一方面，在训练组中用3个标记产生的算法不能被转换到测试组而无敏感度（包括IL-6的标记组）或特异性（包括SAA的标记组）的损失。

本发明目的为提高所有自身免疫疾病的检测敏感度而不进行肌肉骨骼病症集合内的鉴别诊断。在训练和测试组中具有最低总误差的最佳标记组为抗-CCP-max 和ANA-max组。因此，显而易见最佳的自身免疫疾病的检测应包括尽可能多的用于自身免疫疾病或RA的检测的特异抗原，并在算法积分中使用最大信号或浓度。在我们的具体案例中使用了5种不同CCP-肽和8种不同的ANA以获得最佳结果。

表4. 诊断为“患病”（RA+自身免疫）的模拟组对比“对照”的分类结果

也可通过以下项目表征本发明：

1. 排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因的方法，其包括测定获自受试者的样品中是否存在指征至少一种风湿性病症的至少一种自身抗体或抗原，

其中所述自身抗体或抗原的存在使得可以排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因。

2.前一项的方法，其中所述测定包括

（i）提供包括支持体和一个或更多个检测区域的固相，每一检测区域包含自身抗原，

（ii）使获自受试者的样品与该固相和至少一种携带信号发生基团或可结合至信号发生基团的自身抗体-特异受体接触，以及

（iii）通过测定各检测区域上的信号发生基团检测自身抗体的存在或/和量。

3.之前任一项的方法，其中当高于预定的检测-区域-特定截止值时该信号被归类为阳性，当低于预定的检测-区域-特定截止值时该信号被归类为阴性，

其中阳性信号排除非风湿性病症为肌肉骨骼疾病的诱因。

4. 之前任一项的方法，其中所述截止值为各检测区域单独测定。

5.之前任一项的方法，其中所述非风湿性病症选自骨关节炎、骨质疏松、骨坏死、骨质减少、纤维肌痛、腰痛、（关节）痛风、假痛风、滑囊炎、创伤、骨折、腱炎。

6. 之前任一项的方法，其中所述风湿性病症包括类风湿性关节炎、结缔组织病和/或血管炎。

7. 之前任一项的方法，其中所述自身抗体可指征类风湿性关节炎、结缔组织病和/或血管炎。

8. 之前任一项的方法，其中所述类风湿性关节炎包括类风湿性关节炎和/或幼年型类风湿性关节炎。

9. 之前任一项的方法，其中所述指征类风湿性关节炎的自身抗体识别瓜氨酸肽、ANA 和/或RF。

10. 第9项的方法，其进一步包括测定IL-6和/或CRP的量。

11. 之前任一项的方法，其中所述结缔组织病包括系统性红斑狼疮、系统性硬化症、多肌炎、皮肌炎、干燥综合征、CREST-综合征和/或混合结缔组织病。

12. 之前任一项的方法，其中所述指征结缔组织病的自身抗体识别ds-DNA、SS-A、SS-B、Sm、组蛋白、Scl-70、Jo-1、着丝粒蛋白B、RNP 和/或胞衬蛋白。

13. 之前任一项的方法，其中所述血管炎包括风湿性多肌痛、巨细胞动脉炎、Morbus Wegener和/或白塞氏综合征。

14. 之前任一项的方法，其中所述指征血管炎的自身抗体识别PR3 和/或MPO。

15. 之前任一项的方法，其进一步包括测定获自受试者的样品中是否存在指征至少一种脊椎关节炎病症和/或感染性关节炎病症的至少一种抗原或（自身）抗体。

16. 用于排除非风湿性病症为肌肉骨骼疾病诱因的一种检测试剂盒，其包括

（a）至少一种指征类风湿性关节炎的自身抗原；

（b）至少一种指征结缔组织病的自身抗原；和/或

（c）至少一种指征血管炎的自身抗原；

其中所述检测试剂盒包括无孔支持体和至少一个检测区域，所述检测区域各包含特异结合待检测的自身抗体的自身抗原。

17. 前一项的检测试剂盒，其进一步包括至少一个不包含自身抗原的对照区域。

18. 之前任一项的检测试剂盒在排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因中的用途。

通过举例说明和实施例在一些细节方面充分描述了本发明用于清楚地理解，本领域技术人员显而易见通过在条件、制剂和其他参数的宽泛和等同的范围内修改或变化本发明可实施相同的内容而不影响本发明范围或其任何具体实施方案，并且这些修改或变化涵盖于附加权利要求的范围。

本领域技术人员会理解起始材料、试剂、纯化方法、材料、基底、仪器元件、分析方法、测定法、混合物以及组分的组合而不是具体举例说明的那些可应用于本发明的实施而不需借助过多的试验。任何这些材料和方法的所有领域已知的功能等同物均包括于本发明。所应用的术语和表达用做描述性术语而不具有限制性，并且使用这些术语和表达无意排除所显示和描述的特征的任何等同物或其部分，但是应认识到可在被主张的本发明范围中进行各种修改。因此，应理解，尽管通过优选实施方案具体公开了本发明，但是本领域技术人员可采取本文所公开概念的任选特征、修改和变化，并且认为这些修改和变化属于附加权利要求定义的本发明范围。

如本文所使用，“包含”与“包括”、“含有”或“特征为”同义，并且为包含在内的(inclusive)或可扩充的并且不排除另外的、未说明的元件或方法步骤。如本文所使用，“由......组成”排除了任何权利要求元件中未指明的元件、步骤或成分。如本文所使用，“基本由......组成”不排除不实质影响权利要求的基本和新颖特征的材料或步骤。在本文的每一种情况中 “包含”、“基本由......组成”或“由......组成”中的任一术语可由任一另外两个术语替换。

当本文公开一组材料、组合物、组分或化合物时，应理解单独公开了这些组和其所有亚组中的所有单个成员。当本文使用马库什(Markush)群组或其他分组时，该群组的所有单个成员以及该群组所有可能的组合和亚组合均单独包括于本公开。本文描述或例证的每一种制剂或组分的组合可用于实施本发明，除非另外指明。无论何时在说明书中给出范围时，例如温度范围、时间范围或组合物范围，所有中间范围或亚范围以及这些范围内包括的所有单个数值均包括于本公开中。在本公开的权利要求中，“和/或”意指另外的或替代的。而且，单数术语的使用也涵盖复数形式。

本文引用的所有文献均以它们的完整内容以引用方式并于本文，在不存在与说明书的公开内容不一致性的程度上。一些本文提供的参考文献以引用方式并于本文以提供与起始材料的来源、另外的起始材料、另外的试剂、另外的合成方法、另外的分析方法、另外的生物材料、另外的核酸、化学修饰的核酸、另外的细胞以及本发明另外的用途相关的细节。本文使用的所有标题仅为方便起见。说明书中提及的所有专利和出版物可表明本发明所属领域的那些技术人员的技术水平并以引用方式并于本文，在与具体和单独指明各单独的出版物、专利或专利申请以引用方式并于本文相同的程度上。本文引用的参考文献以它们的完整内容以引用方式并于本文以指明它们的出版或申请日期时本领域的状态并且如果需要的话这一信息可在本文中用以排除现有技术中的具体实施方案。例如，当主张了组合物时，应理解在申请人的发明之前本领域已知和可获得的化合物，包括本文引用的参考文献中提供了实现性公开的化合物，不包括于本文的组合物权利要求中。

Claims (15)

1.排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因的方法，其包括测定获自受试者的样品中是否存在指征至少一种风湿性病症的至少一种自身抗体或抗原，

其中所述自身抗体或抗原的存在使得可以排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病的诱因。

2.前一项权利要求的方法，其中所述测定包括

（i）提供包括支持体和一个或更多个检测区域的固相，每一检测区域包含自身抗原，

（ii）使获自受试者的样品与该固相和至少一种携带信号发生基团或可结合至信号发生基团的自身抗体-特异受体接触，以及

（iii）通过测定各检测区域上的信号发生基团检测自身抗体的存在或/和量。

3.之前任一项权利要求的方法，其中当高于预定的检测-区域-特定截止值时该信号被归类为阳性，当低于预定的检测-区域-特定截止值时该信号被归类为阴性，

其中阳性信号排除非风湿性病症为肌肉骨骼疾病的诱因。

4.之前任一项权利要求的方法，其中所述非风湿性病症选自骨关节炎、骨质疏松、骨坏死、骨质减少、纤维肌痛、腰痛、（关节）痛风、假痛风、滑囊炎、创伤、骨折、腱炎。

5.之前任一项权利要求的方法，其中所述风湿性病症包括类风湿性关节炎、结缔组织病和/或血管炎。

6.之前任一项权利要求的方法，其中所述自身抗体可指征类风湿性关节炎、结缔组织病和/或血管炎。

7.之前任一项权利要求的方法，其中所述类风湿性关节炎包括类风湿性关节炎和/或幼年型类风湿性关节炎。

8.之前任一项权利要求的方法，其中所述指征类风湿性关节炎的自身抗体识别瓜氨酸肽、ANA 和/或RF。

9.之前任一项权利要求的方法，其中所述结缔组织病包括系统性红斑狼疮、系统性硬化症、多肌炎、皮肌炎、干燥综合征、CREST-综合征和/或混合结缔组织病。

10.之前任一项权利要求的方法，其中所述指征结缔组织病的自身抗体识别ds-DNA、SS-A、SS-B、Sm、组蛋白、Scl-70、Jo-1、着丝粒蛋白B、RNP 和/或胞衬蛋白。

11.之前任一项权利要求的方法，其中所述血管炎包括风湿性多肌痛、巨细胞动脉炎、Morbus Wegener和/或白塞氏综合征。

12.之前任一项权利要求的方法，其中所述指征血管炎的自身抗体识别PR3 和/或MPO。

13.之前任一项权利要求的方法，其进一步包括测定获自受试者的样品中是否存在指征至少一种脊椎关节炎病症和/或感染性关节炎病症的至少一种抗原或（自身）抗体。

14.用于排除非风湿性病症为肌肉骨骼疾病诱因的检测试剂盒，其包括

（a）至少一种指征类风湿性关节炎的自身抗原；

（b）至少一种指征结缔组织病的自身抗原；和/或

（c）至少一种指征血管炎的自身抗原；

其中所述检测试剂盒包括无孔支持体和至少一个检测区域，所述检测区域各包含特异结合待检测的自身抗体的自身抗原。

15.之前任一项权利要求的检测试剂盒在排除非风湿性病症为受试者肌肉骨骼疾病诱因中的用途。

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