JP2003252801A

JP2003252801A - 下垂体特異的遺伝子の使用法

Info

Publication number: JP2003252801A
Application number: JP2002051022A
Authority: JP
Inventors: Keita Tatsumi; 圭太巽; Susumu Tanaka; 進田中; Nobuyuki Amino; 信行網野; Kousaku Ookubo; 公策大久保
Original assignee: Japan Science and Technology Corp
Current assignee: Japan Science and Technology Agency
Priority date: 2002-02-27
Filing date: 2002-02-27
Publication date: 2003-09-10
Also published as: WO2003072779A1

Abstract

(57)【要約】【課題】下垂体において特異的に発現する遺伝子及
びアミノ酸に関する。【解決手段】発明者らは、ヒト下垂体に活性に発現
する遺伝子を調べることにより、ヒト下垂体組織におい
て豊富に発現する遺伝子を特定し、配列番号１〜４の遺
伝子が、ヒト下垂体において特異的に発現することを見
出した。更に、このような発見に基づき、これら遺伝子
及びタンパク質を有効に利用する方法を見出した。本発
明は、配列番号１〜４のいずれかの塩基配列又はその部
分の、ヒト下垂体に関する検査又はヒト下垂体関連疾患
の治療のための使用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】この発明は、下垂体において
特異的に発現する遺伝子及びアミノ酸に関する。

【０００２】

【従来の技術】下垂体は主に下垂体ホルモンを作る内分
泌細胞から成っている。これらのホルモンは分泌顆粒に
蓄えられ、調節されたエキソサイトーシス（細胞外放
出）により放出される。この分泌顆粒はまたプロセッシ
ング酵素を含み、細胞膜に溶融しホルモンやその他の成
分を放出する（Arvan P & Castle D Biochemical Journ
al332 593-610(1998)）この下垂体の特徴的な機能は、下垂体特有の下垂体ホル
モンや転写因子などのタンパク質によって保たれてい
る。これらの遺伝子の異常は、分離した下垂体前葉ホル
モンの欠乏と、結合した下垂体ホルモンの欠乏の両方を
もたらす（Phillips III JA et al. Proceeding of the
National Academy of Sciences of the United States
of America 78 6372-6375(1981)；Tatsumi K et al. N
ature Genetics 1 56-58(1992)；Cushman LJ & Camper,
Mammalian Genome 12 485-494(2001)）。タンパク修飾
酵素にはGalNAc-4-スルホトランスフェラーゼのように
下垂体特異的に発現するものと（Okuda T et al. Journ
al of Biological Chemistry51 40605-40613(2000)）、
プロホルモンコンバターゼ（ＰＣ）１／３、ＰＣ２、カ
ルボキシペプチダーゼＥ（ＣＰＥ）及び神経内分泌タン
パク質７Ｂ２（Iguchi H et al. Neuroendocrinology 3
9 453-458(1984)）のようにすい臓や神経組織でも発現
するものがある（Gorr SU et al. Molecular and Cellu
lar Endocrinology 172 1-6(2001)）。ＣＰＥや７Ｂ２
の異常では、ＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン）の分泌
が制御されなくなる（Gorr SU et al. Molecular and C
ellular Endocrinology 172 1-6(2001)）。組織特有の
タンパク質の異常が、自己免疫疾患の有用なマーカーで
あることは既に立証されている。リンパ球性下垂体炎に
対する下垂体に特有の抗体は報告されているが、それに
対応する抗原は特定されていない（Crock PA, Metaboli
sm 83 609-618(1998)；Nishiki M et al. Clinical End
ocrinology (Oxford) 54 327-333(2001)）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】下垂体特有組織の主と
なる分子を明らかにして、下垂体疾患の機構を解明する
ために、下垂体特有の転写産物を単離することは重要で
ある。ヒト下垂体で特異的に発現した分子を特定する試
みにおいて、発明者らは遺伝子発現プロファイリング
（gene expression profiling）という方法を用いた（O
kubo K et al. Nature Genetics 2 173-179(1992)）。
この方法は、ｍＲＮＡ種のオリジナル組成を忠実に表す
3’-方向ｃＤＮＡライブラリーを構成し、そのｃＤＮＡ
クローンをランダムに配列させ、ＧＡＴＣ（ＭｂｏＩ
認識配列）に隣接するポリ（Ａ）の丁度上流に位置する
短ヌクレオチド配列から成る3’ＥＳＴを得る。これら
の3’ＥＳＴは、個々の遺伝子に特有であることから、
遺伝子のサイン（gene signature, GSs）と呼ばれる（O
kubo K et al. Nature Genetics 2 173-179(1992)）。
発現された遺伝子はそれらのＧＳ種により特定され、各
転写産物の相対的存在度は、ライブラリー中の対応する
ＧＳ種の頻度により見積もることができる。その結果生
じた遺伝子発現のプロファイルは、ヒト下垂体での遺伝
子の転写量を表す。６４のヒト組織での同様の遺伝子発
現のプロファイルにより、ボディマップデータベース
（Body Map database）と称する分子解剖データベース
を構成する（日本臨床52巻4号(4,1994)；Hishiki T et
al. Nucleic Acids Research 28 136-138(2000)；Kawam
oto S et al. Genome Research 10 1817-1827(200
0)）。ボディマップデータベースにおける種々の組織か
ら得られた遺伝子発現のプロファイルを比較することに
より、多くの組織に特有の遺伝子とその遺伝子の異状に
より生じる疾患が特定されてきた（Okubo K et al. Nat
ure Genetics 2 173-179(1992)；Kita H et al. DNA Re
search 3 1-7(1996)；Nishida K et al. Investigative
Ophthalmology & Visual Science 37 1800-1809(199
6)；Yokoyama M et al.DNA Research 3 311-320(199
6)；Maeda K et al. Gene 190 227-235(1997)；Nishida
K et al. American Journal of Human Genetics 61 12
68-1275(1997)；Shimizu-Matsumoto A et al. Blood 92
1432-1441(1998)）。このように、この方法は、機能的
クローニング、相同的クローニング、位置クローニング
などの他の方法の、新規な遺伝子を特定するための効果
的な代替法である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】発明者らは、ヒト下垂体
に活性に発現する遺伝子を調べることにより、ヒト下垂
体組織において豊富に発現する遺伝子を特定した。ヒト
下垂体のこの遺伝子の発現プロファイルをボディマップ
データベースと比較することにより、ヒト下垂体におい
て特異的に発現する遺伝子を見出し、これらがヒト下垂
体における疾患の検査や治療に利用できることを見出し
た。

【０００５】本発明において、下記の４種の遺伝子が、
ヒト下垂体において特異的に発現することを見出した。１．ＰＧＳＦ１ａ（ＧＳ９５４４のスプライス変種）：
配列番号１２．ＰＧＳＦ１ｂ（ＧＳ９５４４のスプライス変種）：
配列番号２３．ＰＧＳＦ２（ＧＳ９５８９と同じ）：配列番号
３４．Ｐｉ−ａ（ＧＳ９５７３、ＫＩＡＡ０５１２と同
じ）：配列番号４従って、本発明は、これらがコードするアミノ酸配列
（配列番号５〜８）が下垂体に由来するタンパク質であ
ることを明らかにしている。なお、pi-aの塩基配列及び
アミノ酸配列は既登録であり（AX127740、AX036667、AK
026832、AB037745）、PGSF1a（AB058892）、PGSF1b（AB
058893）及びPGSF2（AB058894）の塩基配列については
発明者らが14-APR-2001に登録した。また、本発明
は、配列番号１〜３のいずれかの塩基配列であり、配列
番号５〜７のいずれかのアミノ酸配列であるといえる。

【０００６】本発明においては、このような発見に基づ
き、これら遺伝子及びタンパク質を有効に利用する方法
を見出した。即ち、本発明は、配列番号１〜４のいずれ
かの塩基配列又はその部分の、ヒト下垂体若しくはヒト
関節に関する検査又はヒト下垂体関連疾患若しくはヒト
関節関連疾患の治療のための使用である。即ち、本発明
は、以下の発明を含む。１）配列番号１〜４のいずれかの蛋白コード領域をＰＣ
Ｒ増幅するためのプライマーから成る、ヒト下垂体関連
疾患又はヒト関節関連疾患の遺伝子異常の診断キット。
更に、配列番号１〜４のいずれかの蛋白コード領域をＰ
ＣＲ増幅するためのプライマーを用いた、ヒト下垂体関
連疾患又はヒト関節関連疾患の遺伝子異常の診断方法。２）配列番号１〜４のいずれかの塩基配列の部分配列を
プローブとする、ヒト下垂体関連疾患又はヒト関節関連
疾患の遺伝子発現の診断薬。更に、配列番号１〜４のい
ずれかの塩基配列の部分配列をプローブとして使用し
た、ヒト下垂体関連疾患又はヒト関節関連疾患の遺伝子
発現の診断方法。

【０００７】３）配列番号１〜４の塩基配列のいずれか
を含む発現ベクターから成る、配列番号５〜８のいずれ
かの配列のタンパク質の低発現が増悪因子となるヒト下
垂体関連疾患又はヒト関節関連疾患の治療薬。更に、配
列番号１〜４の塩基配列のいずれかを含む発現ベクター
を用いた、配列番号５〜８のいずれかの配列のタンパク
質の低発現が増悪因子となるヒト下垂体関連疾患又はヒ
ト関節関連疾患の治療方法。４）配列番号１〜４のいずれかの塩基配列に対するアン
チセンス核酸から成る、配列番号５〜８のいずれかのタ
ンパク質の過剰発現が増悪因子となるヒト下垂体関連疾
患又はヒト関節関連疾患の治療薬。更に、配列番号１〜
４のいずれかの塩基配列に対するアンチセンス核酸を用
いた、配列番号５〜８のいずれかのタンパク質の過剰発
現が増悪因子となるヒト下垂体関連疾患又はヒト関節関
連疾患の治療方法。

【０００８】また、本発明は、配列番号５〜８のいずれ
かの配列のタンパク質又は該タンパク質に対する抗体
の、ヒト下垂体若しくはヒト関節に関する検査又はヒト
下垂体関連疾患又はヒト関節関連疾患の治療のための使
用である。即ち、本発明は、以下の発明を含む。１）配列番号５〜８のいずれかの配列のタンパク質を抗
原として成るヒト下垂体関連の自己免疫疾患の診断薬。
更に、配列番号５〜８のいずれかの配列のタンパク質を
抗原として用いた、ヒト下垂体又はヒト関節関連の自己
免疫疾患の診断方法。前記抗原が標識されていてもよ
く、前記自己免疫疾患が、自己免疫性下垂体炎又は慢性
関節リウマチであってもよい。２）配列番号５〜８のいずれかの配列のタンパク質に対
する抗体から成るヒト下垂体機能の診断薬。更に、配列
番号５〜８のいずれかの配列のタンパク質に対する抗体
を用いた、ヒト下垂体又はヒト関節機能の診断方法。

【０００９】３）配列番号５〜８のいずれかの配列のタ
ンパク質から成る、配列番号５〜８のいずれかの配列タ
ンパク質の低発現が増悪因子となるヒト下垂体関連疾患
又はヒト関節関連疾患の治療薬。更に、配列番号５〜８
のいずれかの配列のタンパク質を用いた、配列番号５〜
８のいずれかの配列タンパク質の低発現が増悪因子とな
るヒト下垂体関連疾患又はヒト関節関連疾患の治療方
法。４）配列番号５〜８のいずれかの配列のタンパク質に対
する抗体から成る、配列番号５〜８のいずれかの配列の
タンパク質の過剰発現が増悪因子となるヒト下垂体関連
疾患の治療薬。更に、配列番号５〜８のいずれかの配列
のタンパク質に対する抗体を用いた、配列番号５〜８の
いずれかの配列のタンパク質の過剰発現が増悪因子とな
るヒト下垂体関連疾患の治療方法。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明で見出したヒト下垂体にお
いて特異的に発現することを見出した遺伝子は下記のよ
うに用いることができる。１．先天性下垂体ホルモン欠損症の遺伝子異常の診断方
法。本発明のタンパク質（配列番号５〜８）をコードす
るｃＤＮＡ配列（配列番号１〜４）を既知のヒトゲノム
配列と比較することにより、各遺伝子のエクソン構造を
決定することができる。それをもとに、蛋白コード領域
をＰＣＲ増幅するプライマーを作製し、患者の血液など
より抽出したＤＮＡをＰＣＲ増幅し、塩基配列を決定
し、正常配列との異同を調べる。即ち、配列番号１〜４
のいずれかの蛋白コード領域をＰＣＲ増幅するプライマ
ーは、このような診断に有用である。例えば、PGSF1a,
PGSF1bでは、以下の３組のプライマーでＰＣＲ増幅し、
塩基配列を決定できる。

【００１１】humPGSF1b.ex1-U 5'-TGGGCCACAACCTATGAGG
TAATC-3' （配列番号９） humPGSF1b.ex2+L 5'-TCAGACCACCCTCTCTCGTCC-3' （配
列番号１０） humPGSF1b.ex3-U 5'-GCCTCAGCCTCCCGAGTATC-3' （配列
番号１１） humPGSF1b.ex4+L 5'-CGTCAGAGACATGGGATTTGGAGT-3'
（配列番号１２） humPGSF1b.ex5-U 5'-CCAATTCTCTGCAACACCCTAATC-3'
（配列番号１３） humPGSF1b.ex5+L 5'-CTTTGATGCCTTTATTGATTCAACAC-3'
（配列番号１４）

【００１２】２．ｃＤＮＡの部分配列を用いた下垂体の
遺伝子発現診断。配列番号１〜４のｃＤＮＡの部分配列
を用いて、Northern法、ＰＣＲ法、ＤＮＡ tip等の定量
法や定性法を用いて遺伝子発現を調べることにより、下
垂体腫瘍を始めとする組織の遺伝子発現診断を行う。即
ち、配列番号１〜４のｃＤＮＡの部分配列を、このよう
な診断のための診断用プローブとして用いることができ
る。３．自己免疫性下垂体炎、慢性関節リウマチなどの自己
免疫疾患の診断。配列番号５〜８の配列のタンパク質か
ら成る抗原を用いて、これに対する自己抗体を測定し、
自己免疫性下垂体炎、慢性関節リウマチなどの自己免疫
疾患ならびに、下垂体などの組織破壊の診断に用いる。
一例として、実施例２に標識抗原（各々の新規タンパク
質）に患者の血清を反応させ、標識抗原/自己抗体複合
体を形成させたあと、この複合体を検出する方法（ラジ
オリガンドアッセイ）を示す。

【００１３】４．抗体を作製して、患者の血清、組織で
の蛋白を測定し、下垂体、内分泌、外分泌機能の診断を
行う。下垂体、内分泌、外分泌疾患の診断の為、配列番
号５〜８の配列のタンパク質に対する抗体を作製して、
イムノアッセイにより血清、組織での各々の新規タンパ
ク質の蛋白量を測定する。

【００１４】５．配列番号５〜８のいずれかの配列のタ
ンパク質又はこれらタンパク質をコードするＤＮＡ（配
列番号１〜４）を投与することにより、これらのタンパ
ク質の低発現が増悪因子となる疾患で、下垂体疾患を初
めとする内外分泌異常のある疾患、慢性関節リウマチ等
の疾患を治療する。例1）慢性関節リウマチ患者にPGSF1aタンパク質を関節
内注射し補充・治療する。例2）新規タンパク質(pi-a, PGSF1a, PGSF1b, PGSF2)
の低発現が増悪因子となる疾患で、新規タンパク質の経
静脈投与あるいは経口投与することにより補充・治療す
る。例3）新規タンパク質(pi-a, PGSF1a, PGSF1b, PGSF2)
の下垂体での低発現が増悪因子となる疾患で、これらタ
ンパク質をコードするＤＮＡ（配列番号１〜４）を含ん
だ発現ベクターを下垂体に投与することにより補充・治
療する。

【００１５】６．配列番号５〜８のいずれかの配列のタ
ンパク質が過剰発現するのが増悪因子となる疾患で、こ
れらタンパク質に対する抗体やアンチセンス核酸を投与
することにより、作用を中和して下垂体疾患を初めとす
る内外分泌異常のある疾患、慢性関節リウマチ等の疾患
を治療する。例１）慢性関節リウマチ患者に抗PGSF1a抗体を関節内注
射して蛋白量を抑制し、治療する。例２）新規タンパク質(pi-a, PGSF1a, PGSF1b, PGSF2)
の過剰発現が増悪因子となる疾患で、新規タンパク質に
対する抗体を経静脈投与することにより蛋白量を抑制し
治療する。例３）新規タンパク質(pi-a, PGSF1a, PGSF1b, PGSF2)
の下垂体での過剰発現が増悪因子となる疾患で、これら
タンパク質をコードするＤＮＡ（配列番号１〜４）に対
するアンチセンス核酸を下垂体に投与することにより発
現量を抑制し、治療する。

【００１６】７．配列番号５〜８のいずれかの配列のタ
ンパク質を作製して、その機能・構造の解析研究の為の
材料にする。新規タンパク質に対する抗体を作製して、
その機能・構造の解析研究をする。例１）新規タンパク質(pi-a, PGSF1a, PGSF1b, PGSF2)
を動物細胞、昆虫細胞、酵母、大腸菌など各種の細胞で
in vitroに合成、あるいは化学合成し、培養細胞や動物
に投与して過剰発現実験による機能解析をする研究に用
いる。例２）新規タンパク質に対する抗体を作製してタンパク
質の一次構造や立体構造を認識する抗体や、活性を中和
する中和抗体を得る。一次構造や立体構造を認識する抗
体は、蛋白構造の構造の解析研究に有用である。中和抗
体は培養細胞や動物に投与することにより蛋白活性を抑
制し、機能解析研究に有用である。例３）生体内あるいは活性の得られた発現系で発現させ
たタンパク質を、抗体を用いるか、活性を指標に精製
し、精製タンパク質を用いて糖鎖構造を解析したり、結
晶解析で立体構造を調べる。

【００１７】

【実施例】以下、実施例にて本発明を例証するが、本発
明を限定することを意図するものではない。以下、本実
施例の用いた試験方法を記す。3’-方向ｃＤＮＡライブラリーの構成と配列分析１６〜７０歳の２１人から採取したヒト下垂体のポリ
（Ａ）ＲＮＡサンプルをＣＬＯＮＴＥＣ（Palo Alto, C
A,USA）から購入した。これらから3’-方向ｃＤＮＡラ
イブラリーを構成し、既報（Okubo K et al. Nature Ge
netics 2 173-179(1992)）に従って大腸菌を形質転換し
た。その手順を簡単に記載すると、ＭｂｏＩで消化され
たｐＵＣ１９ベースのベクタープライマーを用いて上記
サンプルからｃＤＮＡを合成し、それを環状化し、大腸
菌に導入した。これをプレートに撒き、ランダムに選択
した形質転換体のｃＤＮＡインサートをＰＣＲで増幅
し、配列鋳型を作った。蛍光サイクルシークエンシング
キット（Perkin-Elmer, Norwalk, CT, USA）とABI PRIS
M373遺伝子分析器（Perkin-Elmer）を用いて、この増幅
産物（ｃＤＮＡ）の３’末端塩基配列を決定した。その
結果得られた３’末端塩基配列（以下「ＧＳｓ」とい
う。）をＢＬＡＳＴ法により互いに比べて、クラスター
化した（Altschul SF et al. Nature Genetics 6 119-1
29(1994)）。各クラスターから１つの代表的ＧＳを選択
し、既に生成したクラスターからの代表的配列と比較し
た。各独立クラスターに１つのＧＳナンバーを付与し
た。このＧＳクラスター群（ＧＳ種）の代表的配列を、
再びＢＬＡＳＴ法を用いてDDBJ/GenBank/EMBLデータベ
ースで検索した（Altschul SF etal. Nature Genetics
6 119-129(1994)）。

【００１８】電子計算機内（インシリコ）でのＲＮＡの
発現比較各ＧＳの頻度をボディマップデータベースのものと比較
した。ヒト下垂体中の各ＧＳ種の特異的発現を下式の
「下垂体ＴＳ比」で表す。

【００１９】ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング Uni-ZAP XRベクターを用いてＺａｐ−ｃＤＮＡ合成キッ
ト（STRATAGENE, La Jolla, CA, USA）により構成され
たヒト下垂体ｃＤＮＡのライブラリーを定法によりスク
リーンした。ＧＳ配列用にアルカルホスフェートで標識
されたプローブを、Alphosダイレクトシステム（Amersh
am Pharmacia, Arlington Height, IL,USA）により合成
した。ファージプラークを通常のアルカリ転写法により
ナイロン膜（Hybond N+, Amersham Pharmacia）に転写
した後、この膜を８０℃で２時間加熱した。次に、この
膜を各プローブにより５５℃で一晩ハイブリダイズし
た。ハイブリダイズした後、この膜を、55℃で一次洗浄
液（2M 尿素、0.1%SDS、50mM リン酸ナナトリウム溶液
pH7.0、150mM NaCl、1mM MgCl₂、0.2%遮断薬）で１０分
間２回洗浄し、続いて室温で二次洗浄液（50mM トリス
塩基、100mM NaCl、2mM MgCl₂）で５分間２回洗浄し
た。これをCDP-Star検出薬（Amersham Pharmacia）で陽
性検体を発光させ、増感膜を用いて室温で１時間診断用
フィルム（RX-U,Fuji Film, Tokyo, Japan）に曝して検
出した。この陽性クローンの二重鎖プラスミドＤＮＡを
回収し、ＤＮＡ配列をABI PRISM373 遺伝子分析器（Per
kin-Elmer）により決定した。

【００２０】5’-ｃＤＮＡ末端（5’-RACE）の迅速増幅 Marathon ｃＤＮＡ増幅キット（CLONTECH）を用い、GS9
544、GS9589及びGS9573の5’末端の配列を決定した。Re
verTraAce(TOYOBO, Osaka, Japan)を用いてランダムへ
キサマーによりヒト下垂体のポリ（Ａ）ＲＮＡ１μｇを
逆転写した。それを二重鎖ＤＮＡに合成し、アダプター
（5’-CTAATACGAC TCACTATAGG GCTCGAGCGG CCGCCCGGGC
AGGT-3’（配列番号１５）, 3’-H₂N-CCCGTCCA-PO₄-
5’）を結合した。アダプタープライマー１及びGS9544
に対する遺伝子特定プライマー（5’-CTCAGACCAC CCCTC
CTCCC ACGCA-3’（配列番号１６））、GS9589に対する
遺伝子特定プライマー（5’-TGTCTCTTC CAGTAGCAGC ACC
GGTAAA-3’（配列番号１７））、GS9573に対する遺伝子
特定プライマー（5’-AGACAGACCC TCCAAAGATT CA-3’
（配列番号１８））を用いてＰＣＲを行った。このＰＣ
Ｒの産物についてＡＰ１又は遺伝子特有のプライマーを
用いて配列を決定した。

【００２１】ノーザンハイブリダイゼーションヒト下垂体及び肝臓からのポリ（Ａ）ＲＮＡをホルムア
ルデヒド−アガロースゲルで分画し、通常のアルカリ転
写法によりHybond N+膜に転写した。この膜又はヒト心
臓、脳、肝臓、すい臓、骨格筋及び肺ｍＲＮＡを含むノ
ーザンLIGHT Human Multiple mRNA Blot I (Life Techn
ologies, Gaithersburg, MD, USA)を、ｃＤＮＡライブ
ラリーをスクリーニングして得た陽性クローンのｃＤＮ
Ａの蛋白コード領域部分をＥＣＬダイレクトシステム
（Amersham Pharmacia）でラベルしたｃＤＮＡプローブ
とハイブリダイズし、洗浄した。この膜を増感膜を用い
て室温で１時間又はそれ以上RX-U診断用フィルムに曝し
た。これらのｃＤＮＡプローブは表１に示すプライマー
を用いてＰＣＲにより得た。

【表１】

【００２２】以下、本実施例の試験結果を記す。ヒト下垂体の遺伝子発現プロファイル下垂体ホルモンの合成とその分泌を分子面から理解する
ために、発明者らは、上述のようにヒト下垂体の遺伝子
発現プロファイルを構築した。このプロファイルは、そ
の組織の特異性を保持する際のその遺伝子の相対的活性
を示す。ヒト下垂体の3’-方向ｃＤＮＡライブラリーか
ら、１０１５のＧＳが得られた（表２）。

【表２】表中、ａはGNAS1遺伝子による変種である（表３のGS100
7参照）。

【００２３】それらの配列を比較して５２７の独立のＧ
Ｓ種を選んだ。この５２７のＧＳ主の中から、DDBJ/Gen
Bank/EMBLデータベースに登録されている遺伝子から、
６５８のＧＳを代表する２６３のＧＳ種が導き出され
た。この２６３のＧＳ種は新規な遺伝子から導き出され
た３５７のＧＳを代表する。表３及び表４（表３の続
き）において、ヒト下垂体に頻繁に現れる遺伝子の頻度
を、ボディーマップデータベースのほかの６３の組織の
ものと比較した。それらの下垂体に対する特異性を、
「下垂体ＴＳ比」で示す。ヒト下垂体で活性な遺伝子の
特徴を決定するために、表２に示すように、これらＧＳ
種をその細胞の局在性と下垂体における頻度により、分
類した。

【００２４】

【表３】

【００２５】

【表４】表中、（）内のタンパク質と数はGNAS1遺伝子の変種
を表す。GNAS1遺伝子は３つのプロモーターを有し、そ
の一つは分泌顆粒タンパク質(NESP55)、他の２つはシグ
ナルトランスデューサー（Gs-alpha、XL-alpha-s）であ
る。

【００２６】ＰＲＬ遺伝子は最も活性に発現し、その次
はＧＨ遺伝子であった。表に挙げられた下垂体ホルモン
の遺伝子の全ては、下垂体で特異的に発現し、ヒト下垂
体で最も頻繁に発現した（23.4%, 表２）。３番目に多
い遺伝子はクロモグラニンＢ（chromogranin B, ＣＨ
ＧＢ）であった。ＣＨＧＢは、規制分泌経路に関連する
分泌顆粒タンパク質である。他の２つの分泌顆粒タンパ
ク質遺伝子（ＣＰＥと７Ｂ２）は、下垂体と神経組織で
主に発現した。これらの分泌顆粒タンパク質遺伝子は４
番目に多く発現するグループに属する（2.3-3.4%、表
２）。下垂体と神経組織の両方に特異的な遺伝子に関し
て、既に詳細の分かっている遺伝子の全ては、ｃＡＭＰ
依存性触媒的αサブユニット（ＰＲＫＡＣＡ）を例外と
して、下垂体ホルモン又は分泌顆粒タンパク質のいずれ
かである。従って、下垂体と神経組織で主に発現するそ
の他の詳細のよく分かっていない遺伝子、例えば、ＫＩ
ＡＡ０３４３やＫＩＡＡ０５１２は、制御された分泌経
路に関連している可能性がある。

【００２７】４番目に多い遺伝子はＧＮＡＳ１遺伝子で
ある。この遺伝子は、３つの異なるプロモータにより転
写された、３つのタンパク質、Ｇｓ−α、超大Ｇタンパ
ク質（ＸＬ−α−ｓ）及びＮＥＳＰ５５、を製造する
（Kozasa T et al. Proceedingof the National Academ
y of Sciences of the United States of America 8520
81-2085(1988)；Kehlenbach RH et al. Nature 372 804
-809(1994)；Ischia Ret al. Journal of Biological C
hemistry 272 11657-11662(1997)。ＸＬ−α−ｓ及びＮ
ＥＳＰ５５発現は神経内分泌組織に限定されるが、Ｇｓ
−αに対する活性は種々の組織で検知され、その活性と
不活性の転換は内分泌の異常、例えば、Albright遺伝的
骨形成異常(Albright hereditary osteodistrophy)（Pa
tten JL et al. New England Journal of Medicine 322
1412-1419(1990)；WeinsteinLS, et al. Genomics 13
1319-1321(1992)）やMcCune-Albright症候群（Schwindi
nger WF et al. Proceeding of the National Academy
of Sciences of the United States of America 89 515
2-5156(1992)）を引き起こす。Ｇｓ−αの活性と一致し
て、それらの発現は、全体として、ボディーマップデー
タベースにおいては下垂体と神経組織に限定されていな
かった（表３及び４）。その他の頻繁に現れる遺伝子の
ほとんどは、下垂体又は神経組織で特異的に発現せず、
従って、これらはハウスキーピング遺伝子と考えられ
る。リボソーム蛋白遺伝子（9.9%）と核蛋白遺伝子（4.
8%）は頻繁に発現している。２つの良く用いられる標準
であるβ−アクチンやグリセリンアルデヒド-3-ホスフ
ェートデヒドロゲナーゼはボディーマップデータベース
の組織の中では均一又は頻繁には発現しないので、これ
らの遺伝子のいくつかは組織内の発現レベルを比較する
際の良い内部標準になる。

【００２８】Huらは細菌ヒト下垂体の発現プロファイル
を発表した（Hu RM et al. Proceeding of the Nationa
l Academy of Sciences of the United States of Amer
ica97 9543-9548 (2000)）。このプロファイルはｃＤＮ
Ａｓからの７０００ 5’-ＥＳＴに基づくものであり、
その１／３は第１ＡＴＧを含む。彼らはそれを視床下部
と副腎の発現プロファイルと比較した。我々の観察と一
致したことに、ＧＨ（成長ホルモン）とＰＲＬ（プロラ
クチン）は分析した全ＥＳＴの１％以上で発現した。こ
の他の頻繁に現れる公知の表３及び４の遺伝子も彼らの
プロファイルで観察されたが、SEPP1、NACA、EIF4G2、T
NFRSF12、PBP、ANXA6、PRKACAの遺伝子や、Pumilio hom
olog 1、MLN51、KIAA0343、KIAA0512などの特性が決定
されていないいくつかの遺伝子は観察されなかった。下
垂体ホルモンのなかでTSHβやPOMCは我々のプロファイ
ルでは現れず、PRLは我々のプロファイルでは１０倍多
く、FSHは彼らのプロファイルでは現れなかった。これ
らのプロファイルの質を評価するために、特性が良く決
定されている下垂体ホルモンの比較をした。

【００２９】ＴＳＨ（甲状腺刺激ホルモン）βｃＤＮＡ
にはMbo I認識配列が欠けているために（Tatsumi K et
al. Gene 73 489-497 (1988)）、それはＧＳとしては現
れない。我々のプロファイルでＰＲＬが極めて高度に発
現することは、特定の内分泌条件によるものではない。
その理由は以下のとうりである。ここで用いるヒト下垂
体ポリ（Ａ）ＲＮＡは２１人のヒトに由来するものであ
るので、この中の１〜２の個人からの組織が、プロラク
チノーマや内分泌条件のいずれかの結果、ＰＲＬを高度
に発現するものであったとしても、この大量のＰＲＬは
１０倍以上に希釈されるので、我々のプロファイルで用
いたＰＲＬを超高度に発現している例外的な個人は全ｍ
ＲＮＡの１００％以上でＰＲＬを発現するという、実際
的にはありえない状況になる。POMCが無いことは下垂体
前葉においてACTH（副腎皮質刺激ホルモン）の量が少な
いことを反映している（Matsuyama H et al. Endocrino
logy 88 692-695(1971)；Moldow R & Yalow RS Proceed
ing of the National Academy of Sciences of the Uni
ted States of America 75 994-998(1978)；Ishikawa J
et al. Endocrinologia japonica 34 755-767(198
7)）。以前測定されたFSHβとLHβの発現レベルは我々
のプロファイルと同様の結果を示した（DalkinAC et a
l. Endocrinology 125 917-924(1989)）。

【００３０】我々の方法は他の遺伝子発現プロファイル
法に比べて2つの優れた点がある。第１は、単一の組織
又は複数の組織から得た遺伝子発現プロファイル法に比
べると、６３の異なるヒト組織のボディーマップデータ
ベースを現在利用することが可能であり、ボディーマッ
プデータベースにも用いる方法と同じ方法を用いて構成
された下垂体発現プロファイルを比較するので組織に特
有の転写物の候補を直ちに明らかにすることができる。
第2に、ほとんどのＧＳの長さは１Ｋｂ以下で３０ｂｐ
以上であるので、容易に更に分析するためのプローブを
用意することができる。実際、この方法は種々の他の組
織の組織特有の遺伝子を単離するのに有効であった（Ok
ubo K et al. Genomics 30 178-186(1995)；Kita H et
al. DNAResearch 3 1-7(1996)；Nishida K et al. Inve
stigative Ophthalmology & Visual Science 37 1800-1
809(1996))；Yokoyama M et al. DNA Research 3 311-3
20(1996)；Shimizu-Matsumoto A et al. Investigative
Ophthalmology & VisualScience 38 2576-2585(199
7))；Itoh K et al. Blood 92 1432-1441(1998)）。そ
こで我々は、他の方法や他の生物で得られる他の遺伝子
発現プロファイルの更なる分析が必要ではあるが、我々
の方法は信頼性のあるものであると結論した。

【００３１】ヒト下垂体特有遺伝子発現プロファイル下垂体で重要な役割を果たすかもしれない遺伝子を特定
するために、我々は下垂体で頻繁にかつ特異的に発現し
ているＧＳ種を選択した（表５）。１１のＧＳ種の中で
８は公知の遺伝子であった。この中の５つ（PRL, GH, L
Hβ, 糖蛋白アルファ, FSHβ）は下垂体前葉ホルモンで
あり、２つ（CHGB, PRKACA）は内分泌組織に特有であ
り、残りの１つ（KIAA0512）はその特性が決定されてい
ないものであった。

【表５】表中、psは下垂体特異的(pituitary-specific)、ppdは
下垂体に顕著に特異的(pituitary-predominant)を表
す。

【００３２】ヒト下垂体ｃＤＮＡライブラリーをＧＳ配
列でスクリーニングすることにより、GS9544, GS9589
及びGS9651のｃＤＮＡクローンが得られた。GS9651はヒ
トゲノムドラフト配列中のユニークな配列であったが
（International Human GenomeSequencing Consortium
2001, Venter et al 2001, Nature 409 860-921(200
1)）、ｃＤＮＡクローンのスクリーニングは不成功であ
った。ノーザンハイブリダイゼーションによれば、GS95
44とGS9589は下垂体特有であり、GS9573(KIAA0512)は下
垂体で最も際立つものであった。

【００３３】新規な下垂体特有転写物のキャラクタリゼ
ーション GS9544について、ヒト下垂体ｃＤＮＡライブラリーから
０．７ｋｂと０．９ｋｂの２つの分離した異変株が単離
された。それらは２つのタンパク質、即ち、１２８アミ
ノ酸から成る下垂体特異的遺伝子１ａ（PGSF1a）と９１
アミノ酸から成る下垂体特異的遺伝子１ｂ（PGSF1ｂ）
をコードしていると推定された（図１、図２）。ヒトゲ
ノムドラフト配列のＢＬＡＳＴサーチにより、これらPG
SF1が１９染色体に存在するものであることがわかった
（ACC#NT_011255）（International Human Genome Sequ
encing Consortium 2001, Nature 409 860-921(200
1))。ＥＳＴデータベースにおいて、ランゲルハンス島
ｃＤＮＡライブラリーからの単部分ヒトｃＤＮＡは、他
のスプライス変種を表していた（ACC#AW583046）（図
１）。この２つのPGSF1（PGSF1aとPGSF1ｂ）のためのｃ
ＤＮＡプローブは、多組織ノーザンハイブリダイゼーシ
ョンにおいて約１ｋｂの下垂体（Pituitary）転写物と
強くハイブリダイズし、約１．４ｋｂのすい臓（Pancre
as）転写物と弱くハイブリダイズした（図３）。これら
は恐らく下垂体に特異的に発現する内分泌特有の転写物
である。これらは、ヒト下垂体の遺伝子発現プロファイ
ルの中の最も多いもののひとつである分泌顆粒に関連し
たタンパク質である可能性がある。これらＰＧＳＦ１は
ダイズ（soybean）のnodulin 26B-カルボキシ末端ドメ
インと５１アミノ酸以内で３３％の相同性がある（Jaco
bs FA et al. Nucleic Acids Research 15 1271-1280(1
987)）(図４)。nodulinはダイズ根結節の細菌状膜に関
連するタンパク質であり、このカルボキシ末端ドメイン
はその結節の細胞質部分に存在する。このドメインの機
能は未だ特定されていないが（Panter S et al.Molecul
ar Plant-Microbe Interactions 13 325-333(2000)）、
このドメインがヒトとダイズの間で保持されているとい
う事実は、それが新規な機能を有するということを示
す。

【００３４】GS9589の全長ｃＤＮＡは２ｋｂの長さであ
り、２４２アミノ酸から成るPGSF2タンパク質をコード
すると推定される。BLASTサーチにより、このｃＤＮＡ
の5’- ０．８ｋｂが、１（IGDC1）を含む免疫グロブリ
ン（Ig）様ドメインのエクソン１−５と同一であって
（Frattini A et al. Gene 214 1-6(1998））、それが
最近特定されたラットインヒビン結合タンパク質の短い
スプライス産物であるInhBP-Sに対するヒトの相同蛋白
であることが明らかになった（Bernard DJ & Woodruff
TK, Molecular Endocrinology 15 654-667(2001)）(図
５，６)。このＩＧＤＣ１タンパク質はＮ−末端単一ペ
プチド、１２のＩｇ様ドメイン及びＣ−末端膜貫通ドメ
インから成る。ＰＧＳＦ２はＩＧＤＣ１のスプライス異
型であり、恐らく分泌される。ＰＧＳＦ２用の3’-プロ
ーブは、多組織ノーザンハイブリダイゼーションにより
約２ｋｂの下垂体（Pituitary）に特有の転写物とハイ
ブリダイズする(図７)。この3’-プローブは下垂体に特
有の転写物とハイブリダイズするが、5’-プローブはそ
れぞれＰＧＳＦ２及びＩＧＤＣ１をコードする２ｋｂバ
ンド及びそれより長いバンドとハイブリダイズする(図
７)。ＩｎｈＢＰの長いスプライス産物であるInhBP-Lは
ＩＧＤＣ１の相同蛋白でインヒビンＡ特有のレセプター
であると特定された（Bernard DJ & Woodruff TK, Mole
cular Endocrinology 15 654-667(2001)）。InhBP-SとI
nhBP-Ln ｍＲＮＡはラット下垂体及び精巣で特異的に検
出され（Bernard DJ & Woodruff TK, Molecular Endocr
inology 15654-667(2001)）、IGDC1 ｍＲＮＡはヒト精
巣及び前立腺で特異的に検出され（Frattini A et al.
Gene 214 1-6(1998））、PGSF2/InhBP-SとIGDC1/InhBP-
Lの双方ともヒト及びラットの分泌顆粒を有する組織で
特異的に発現される。ヒトゲノムドラフト配列に対する
BLASTサーチにより、PGSF2が染色体Xのｑ２５−２６．
２領域に位置することがわかった。Ｘに結合した劣性下
垂体機能不全矮小発育症の遺伝子はこの領域に存在する
（Lagerstrom-Fermer M et al. American Journal of H
uman Genetics 60 910-916(1997)）。もしPGSF2がこの
病気に関連しているのであれば、それは下垂体の発育と
機能に関係しているであろう。

【００３５】GS9573の全長ｃＤＮＡは、5’-非コード領
域に４４ｂｐの挿入部分を有している以外は、KIAA0512
をコードするｃＤＮＡに一致している。KIAA0512は６３
２アミノ酸から成るタンパク質をコードすると推定さ
れ、アルマジロ／β-カテニン様繰り返しモチーフを有
しており、下垂体タンパク質（ACC#AF211175）と３０７
アミノ酸以内で６１％の相同性を有する。多組織ノーザ
ンハイブリダイゼーションによれば、KIAA0512は、試験
した全ての組織において、３．２ｋｂと４．５ｋｂの転
写物として発現された。その発現レベルは異なるが、下
垂体（Pituitary）と心臓（Heart）において最も強く発
現した（図８）。この下垂体タンパク質（ACC#AF21117
5）は赤血球以外で発現するα−スペクトリンにインビ
ボで結合する。スペクトリンファミリーは膜又はゴルジ
体に連接して存在する構造タンパク質であるので、KIAA
0512タンパク質はスペクトリン又は他のスペクトリン結
合タンパク質(例えば、アンキリン、アクチン又はバン
ド４．１)と複合体を形成している可能性があり、小包
の輸送に関わる可能性がある。

【００３６】以上の結果、ヒト下垂体の発現プロファイ
ル及びその他の組織の発現プロファイルとの比較から、
ヒト下垂体に特有に発現する遺伝子を単離することがで
きた。GSの数を増やせば、少量の下垂体特異的遺伝子を
特定することもできる。今回の実験で、ヒト下垂体に特
異的に発現する２つのGSから、３つの特異的転写物を得
た。最近開発されたオリゴヌクレオチドに基づくＰＣＲ
を介した多組織定量的発現分析法（Heid CA et al. Gen
ome Research 6 986-994(1996)；Kato K, Nucleic Acid
s Research 25 4694-4696(1997)；Hall LL et al. Biot
echniques 24 652-658(1998)；Kawamoto S et al. Geno
me Research 9 1305-1312(1999)）を用いることによ
り、将来はより容易に下垂体に特異的な遺伝子を選択す
ることができるであろう。これらの遺伝子は、先天的下
垂体異常やリンパ球性下垂体炎の自己抗原のような下垂
体の病気に有効な治療手段をもたらすであろう。

【００３７】実施例２本実施例では、ラジオリガンドアッセイ（RLA）によ
り、慢性関節リウマチ患者血清中に存在する下垂体特異
的蛋白PGSF1aに対する自己抗体価を検討した。慢性関節
リウマチ患者における自己抗体の同定にはこれまで変性
IgGに対する抗体を検出するリウマチ因子が主に用いら
れてきたが、リウマチ因子は慢性関節リウマチの早期で
は陽性率が低く、非特異的な疾患でも陽性になるという
問題があった。最近になって、ｃＤＮＡがあれば立体
構造を保持したまま抗原として用いることができ、立体
構造認識抗体をも検出できる RLA が開発された。本実
施例で用いた患者検体を表６に示す。

【表６】疾患名症例数男性/女年齢（平均値 ± SD）慢性関節リウマチ 41 リウマチ因子（RF）陽性 37 1/36 53.9 ± 13.4 RF 陰性 4 0/4 48.8± 2.5 変形性関節症 10 1/9 69.0± 13.7 自己免疫性下垂体疾患と関連疾患 34 14/18 50.5± 16.7 SLE 14 2/12 37.8± 12.6 PSS 6 0/6 55.2± 15.0 MCTD 8 0/8 45.4± 10.1 健常人 36 18/18 49.9± 13.8

【００３８】本実施例では下記の方法を用いた。ラジオリガンドアッセイ 1. 転写翻訳システム（TNT coupled in vitro transcri
ption / translation system, Promega）に PGSF1a 発
現用プラスミドと 35S-methionine を加えて 30℃ 90
分反応させた。 2. 反応後、35S-GH の分画をカラムを使って分離した。 3. Reaction buffer（NaCl 150mmol/L, Tris 50mmol/L,
pH 7.4, Tween-20 1ml/L, bovine serum albumin 4g/
L, and NaN3 1g/L）で 35S-PGSF1a を 2万cpm / 20μl
に希釈した。 4. 血清 4μl を Reaction buffer（上記と同様）26μl
で希釈し 35S-GH 20μlと混ぜて 4 ℃ で一晩反応。96
-well filter plate （Millipore）をBlockingbuffer
（NaCl 150mmol/L, Tris 50mmol/L, pH 7.4, Tween-20
1ml/L, bovine serum albumin 30g/L, and NaN3 1g/L）
にて室温で 3 時間半及び 4 ℃で一晩ブロッキングし
た。 5. Protein G Sepharose (Amersham) を 4 ℃で一時間
Blocking buffer（上記と同様）にてブロッキングし
た。 6. 4 の「血清 / 35S-PGSF1a」混合物をブロッキングが
終わった 96-well filter plate に移し、5 の Protein
G Sepharose を 10 μl 混ぜて室温で 45 分反応させ
た。

【００３９】7. 96-well filtration system (Millipor
e)を用いて Wash buffer（NaCl 150mmol/L, Tris 50mmo
l/L, pH 7.4, Tween-20 10 ml/L）で 6 の反応物を 10
回洗浄した。 8. 液体シンチレーターを加え、β counter (Micro Bet
a, Amersham)で 35S-PGSF1a / 抗体 / Protein G 複合
体を測定した。 9. 得られたカウントをもとに次の指標で精度を検討し
た。 anti-PGSF1a Ab index (unit)＝ the count of unknown
sample (cpm)／ the count of NPS (cpm) 組換えPGSF1aは以下のようにして作製した。即ち、大腸
菌での組換えタンパク質発現システム（pET expression
system, Novagen）でHis tag付き PGSF1a を発現さ
せ、TALON Metal Affinity Resins (CLONTECH)のアフィ
ニティカラムで精製した。抑制試験は以下のようにして
行った。陽性検体の希釈時に 1μg の recombinant PGS
F1a または ovalbumin (negative control) を加えて反
応させた。

【００４０】結果を以下に示す。Assay 内変動誤差は、
3.1 % (n = 6)、Assay 間変動誤差は、3.3 % (n = 4)で
あった。血清中の抗 PGSF1a 抗体陽性の頻度を表７に示
す。

【表７】疾患名症例数陽性数（陽性率）慢性関節リウマチ 41 RF 陽性 37 31 (83.8%) RF 陰性 4 3 (75.0%) 変形性関節症 10 2 (20.0%) 自己免疫性下垂体疾患と関連疾患 34 3 (8.8%) SLE 14 1 ( 7.1%) PSS 6 0 MCTD 8 1 (12.5%) 健常人 36 0

【００４１】これらの陽性検体の特異性を調べるため、
大腸菌で発現させたrecombinant human PGSF1a による
競合試験を行った。陽性検体は recombinant human PGS
F1aにより抑制され（図９）、ovalbuminでは抑制されず
（図１０）、PGSF1a特異的であった。今回の試験では、
慢性関節リウマチ患者血清中に抗 PGSF1a 抗体が約 8
割の頻度で認められた。健常人 36 例中には認めず、類
縁疾患の変形性関節症では20.0%、自己免疫疾患では0-1
2.5%と陽性率は有意に低く、特に、RF 陰性例の慢性関
節リウマチ患者でも高頻度で陽性であったので、RFの測
定と同等かそれ以上に慢性関節リウマチ患者の補助的診
断に有効であると考えられる。

【００４２】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Japan Science and Technology Corporation <120> 下垂体特異的遺伝子の使用法 <130> PS02-1103 <160> 26 <210> 1 <211> 696 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 acctgcatct gccaacaaga ctggaagcag gtgaggcaca cagaggggga ggcccgcagc 60 tgcgtgggag gaggggtggt ctgagggacg tgggatgccg ggaatgaggc tggtttgcag 120 gttggcgcat ggacattttc ccagaaaggg acagagacgg cgaagtttga cggtctggaa 180 agcagagacc agcagggctg actgcttggg agcaccaaat atccggacag cgcctctcgg 240 gaggtccgag aagagaaccg cgatctgttt cagcaccggg gctcaggaca gttcccagcg 300 ggctccgttt cgtctccaga accctggaca gctcctccag cttggaatgc actccctcca 360 cctccaccca gagctcccca caactgaccc tgccttcttc tgcaagctcc atttcatcaa 420 gggaaacgat ccttattgcc tcaccatttc ccacgtgaag tctgtattga cattctcata 480 gacctgggat attgtgtctg cagcacatag tccaattatt ttcatgttat ctactgacag 540 gtctatttgt ctccctgtta cactgtgagc tccgtgaggg cagaaacaat gttagtattt 600 tcactgctgt gtccccagcg cctggtccgg ggcccggcac acagcaggca tataataagc 660 atgtgttgaa tcaataaagg catcaaagaa taaacc 696 <210> 2 <211> 865 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 2 acctgcatct gccaacaaga ctggaagcag gtgaggcaca cagaggggga ggcccgcagc 60 tgcgtgggag gaggggtggt ctgagggacg tgggatgccg ggaatgaggc tggtttgcag 120 gttggcgcat ggacattttc ccagaaaggg acagagacgg cgaagtttga cggtctggaa 180 agcagagacc agcagggctg actgcttggg agcaccaaat atccggacag cgcctctcgg 240 gaggtccgag aagagaaccg cgatctgttt cagcaccggg gctcaggaca gttcccagcg 300 ggctccgttt cgtctccaga accctggaca gctcctccag cctcccaaag tgctaggatt 360 acaggcgtga gtcactgcgc ctggcccaag tccggaattt tcaacaggac atgggtgtta 420 ctgtgcccat gtgacatttg gggaacccaa ggccctgaga aaggcagaaa aataacccac 480 gcagggactc tcagcccaca agtgaagctc ttggaatgca ctccctccac ctccacccag 540 agctccccac aactgaccct gccttcttct gcaagctcca tttcatcaag ggaaacgatc 600 cttattgcct caccatttcc cacgtgaagt ctgtattgac attctcatag acctgggata 660 ttgtgtctgc agcacatagt ccaattattt tcatgttatc tactgacagg tctatttgtc 720 tccctgttac actgtgagct ccgtgagggc agaaacaatg ttagtatttt cactgctgtg 780 tccccagcgc ctggtccggg gcccggcaca cagcaggcat ataataagca tgtgttgaat 840 caataaaggc atcaaagaat aaacc 865 <210> 3 <211> 1814 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 gggcagtttg ctgcatctgg aggagctcac tggagaatct ccaacatcgg agcgggcctt 60 caactaccat cccaccacct gctgaggaga aaaattcttc aagactcaga gcacacagcc 120 agcaccagag gccccatgac cctggacaga ccaggggagg gggccaccat gctgaagaca 180 ttcactgttt tgctcttttg cattcggatg agtctgggta tgacatcgat agtgatggac 240 cctcaaccgg agttgtggat agagtccaac tacccccagg ccccttggga gaacatcacg 300 ctttggtgcc gaagcccctc tcggatatca agcaagttcc tgctgctgaa ggataagaca 360 cagatgacct ggatccgccc ttcccacaag accttccaag tttcattcct tataggtgcc 420 cttactgagt ccaatgcagg tctttaccgg tgctgctact ggaaggagac aggctggtca 480 aagcccagta aagttctaga gttggaggca ccaggccaac tgcccaagcc catcttctgg 540 attcaggctg agacccccgc tcttcctggg tgtaatgtta acatcctctg ccatggctgg 600 ctgcaggatt tggtattcat gctgtttaaa gagggatatg cagagcctgt ggattaccaa 660 gtcccaactg ggacaatggc catattctcc attgacaacc tgacacctga ggatgaaggg 720 gtttacatct gccgcactca tatccagatg ctccccaccc tgtggtcaga gcccagcaac 780 cccctgaagc tggttgtagc aggtgggtgt ggctatggct gctggcatct ggcaattgtt 840 gtcccaggta tcatggctgg ctgagctagg gtttctgatt ttactttcct cagccagttt 900 ctaggccctg caaggcccca tgagctacag tcgtttgaag ttttactgag atataaatta 960 gaatggcatg tgctgcaagg cagatgtatg ggagccaatc atttggctag taaaggagcc 1020 cagccaactg gccagcagct tcagctcatc acagctttgt tgttctcaac ttgttgaata 1080 tcatgcattc attcattaat tcaaccagta tttattgagc acctaatatg tgccaggcac 1140 tgccactgca atcttataaa tggagtttta aatttgcaaa tgtattttat ttgtaattgt 1200 tatttttatg tgtggaaaac agaatggatt gctagtgttg gtgagtaaaa acaaaaaaaa 1260 aacaaatgac aaagaatgtg atagctcata ttttagaaat ggctttataa atcaccttgg 1320 tcccctatca gtaaagctag taaggcagca ccaatctcta aatataaaaa aaattccccc 1380 aaaatgtaaa atgccaaaca tctcccagcc cgaactcccc caccccatgg cctggaggtt 1440 cctaaatgga attggccaca tttgctttag tctctctatc cagctaaata ggcttgggga 1500 aagctgtggt gctacagaaa gtaccctaga cttagaagca gtaatactgg tttctagttc 1560 tatttctgac actgcctccc tgtgtggtct tgagcaagtc acttcacttt tctgtgcttt 1620 ggcttcctct actctaaaaa tgggataaca gtatctatct gatctactgt gtaatgcttc 1680 tctctgtgcc tcagcttcct gatctgcaaa attggtttaa taataatgcc tacctcacag 1740 ggttgttgtg aggatttgcc taaatatata tgtacagtgc ctggcatata agttctcaat 1800 aaatggtaga tatt 1814

【００４３】 <210> 4 <211> 3397 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 4 agcggaggtg agctgcagag gcgcgcgtgg tccctgcccc acccgcgcgg agccagagag 60 gaggcggttg tcaagggcga cgtggaagca gcagccgcag cacctgagcc gctactgccg 120 ctcactcagg acaacgctat ggctgagcct gggcacagcc accatctctc cgccagagtc 180 aggggaagaa ctgagaggcg cataccccgg ctgtggcggc tgctgctctg ggctgggacc 240 gccttccagg tgacccaggg aacgggaccg gagcttcatg cctgcaaaga gtctgagtac 300 cactatgagt acacggcgtg tgacagcacg ggttccaggt ggagggtcgc cgtgccgcat 360 accccgggcc tgtgcaccag cctgcctgac cccgtcaagg gcaccgagtg ctccttctcc 420 tgcaacgccg gggagtttct ggatatgaag gaccagtcat gtaagccatg cgctgagggc 480 cgctactccc tcggcacagg cattcggttt gatgagtggg atgagctgcc ccatggcttt 540 gccagcctct cagccaacat ggagctggat gacagtgctg ctgagtccac cgggaactgt 600 acttcgtcca agtgggttcc ccggggcgac tacatcgcct ccaacacgga cgaatgcaca 660 gccacactga tgtacgccgt caacctgaag caatctggca ccgttaactt cgaatactac 720 tatccagact ccagcatcat ctttgagttt ttcgttcaga atgaccagtg ccagcccaat 780 gcagatgact ccaggtggat gaagaccaca gagaaaggat gggaattcca cagtgtggag 840 ctaaatcgag gcaataatgt cctctattgg agaaccacag ccttctcagt atggaccaaa 900 gtacccaagc ctgtgctggt gagaaacatt gccataacag gggtggccta cacttcagaa 960 tgcttcccct gcaaacctgg cacgtatgca gacaagcagg gctcctcttt ctgcaaactt 1020 tgcccagcca actcttattc aaataaagga gaaacttctt gccaccagtg tgaccctgac 1080 aaatactcag agaaaggatc ttcttcctgt aacgtgcgcc cagcttgcac agacaaagat 1140 tatttctaca cacacacggc ctgcgatgcc aacggagaga cacaactcat gtacaaatgg 1200 gccaagccga aaatctgtag cgaggacctt gagggggcag tgaagctgcc tgcctctggt 1260 gtgaagaccc actgcccacc ctgcaaccca ggcttcttca aaaccaacaa cagcacctac 1320 cagccctgcc catatggttc ctactccaat ggctcagact gtacccgctg ccctgcaggg 1380 actgaacctg ctgtgggatt tgaatacaaa tggtggaaca cgctgcccac aaacatggaa 1440 acgaccgttc tcagtgggat caacttcgag tacaagggca tgacaggctg ggaggtggct 1500 ggtgatcaca tttacacagc tgctggagcc tcagacaatg acttcatgat tctcactctg 1560 gttgtgccag gatttagacc tccgcagtcg gtgatggcag acacagagaa taaagaggtg 1620 gccagaatca catttgtctt tgagaccctc tgttctgtga actgtgagct ctacttcatg 1680 gtgggtgtga attctaggac caacactcct gtggagacgt ggaaaggttc caaaggcaaa 1740 cagtcctata cctacatcat tgaggagaac actaccacga gcttcacctg ggccttccag 1800 aggaccactt ttcatgaggc aagcaggaag tacaccaatg acgttgccaa gatctactcc 1860 atcaatgtca ccaatgttat gaatggcgtg gcctcctact gccgtccctg tgccctagaa 1920 gcctctgatg tgggctcctc ctgcacctct tgtcctgctg gttactatat tgaccgagat 1980 tcaggaacct gccactcctg cccccctaac acaattctga aagcccacca gccttatggt 2040 gtccaggcct gtgtgccctg tggtccaggg accaagaaca acaagatcca ctctctgtgc 2100 tacaatgatt gcaccttctc acgcaacact ccaaccagga ctttcaacta caacttctcc 2160 gctttggcaa acaccgtcac tcttgctgga gggccaagct tcacttccaa agggttgaaa 2220 tacttccatc actttaccct cagtctctgt ggaaaccagg gtaggaaaat gtctgtgtgc 2280 accgacaatg tcactgacct ccggattcct gagggtgagt cagggttctc caaatctatc 2340 acagcctacg tctgccaggc agtcatcatc cccccagagg tgacaggcta caaggccggg 2400 gtttcctcac agcctgtcag ccttgctgat cgacttattg gggtgacaac agatatgact 2460 ctggatggaa tcacctcccc agctgaactt ttccacctgg agtccttggg aataccggac 2520 gtgatcttct tttataggtc caatgatgtg acccagtcct gcagttctgg gagatcaacc 2580 accatccgcg tcaggtgcag tccacagaaa actgtccctg gaagtttgct gctgccagga 2640 acgtgctcag atgggacctg tgatggctgc aacttccact tcctgtggga gagcgcggct 2700 gcttgcccgc tctgctcagt ggctgactac catgctatcg tcagcagctg tgtggctggg 2760 atccagaaga ctacttacgt gtggcgagaa cccaagctat gctctggtgg catttctctg 2820 cctgagcaga gagtcaccat ctgcaaaacc atagatttct ggctgaaagt gggcatctct 2880 gcaggcacct gtactgccat cctgctcacc gtcttgacct gctacttttg gaaaaagaat 2940 caaaaactag agtacaagta ctccaagctg gtgatgaatg ctactctcaa ggactgtgac 3000 ctgccagcag ctgacagctg cgccatcatg gaaggcgagg atgtagagga cgacctcatc 3060 tttaccagca agaagtcact ctttgggaag atcaaatcat ttacctccaa gaggactcct 3120 gatggatttg actcagtgcc gctgaagaca tcctcaggag gcccagacat ggacctgtga 3180 gaggcactgc ctgcctcacc tgcctcctca ccttgcatag cacctttgca agcctgcggc 3240 gatttgggtg ccagcatcct gcaacaccca ctgctggaaa tctcttcatt gtggccttat 3300 cagatgtttg aatttcagat ctttttttat agagtaccca aaccctcctt tctgcttgcc 3360 tcaaacctgc caaatatacc cacactttgt ttgtaaa 3397

【００４４】 <210> 5 <211> 128 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 5 Met Pro Gly Met Arg Leu Val Cys Arg Leu Ala His Gly His Phe Pro 1 5 10 15 Arg Lys Gly Gln Arg Arg Arg Ser Leu Thr Val Trp Lys Ala Glu Thr 20 25 30 Ser Arg Ala Asp Cys Leu Gly Ala Pro Asn Ile Arg Thr Ala Pro Leu 35 40 45 Gly Arg Ser Glu Lys Arg Thr Ala Ile Cys Phe Ser Thr Gly Ala Gln 50 55 60 Asp Ser Ser Gln Arg Ala Pro Phe Arg Leu Gln Asn Pro Gly Gln Leu 65 70 75 80 Leu Gln Leu Gly Met His Ser Leu His Leu His Pro Glu Leu Pro Thr 85 90 95 Thr Asp Pro Ala Phe Phe Cys Lys Leu His Phe Ile Lys Gly Asn Asp 100 105 110 Pro Tyr Cys Leu Thr Ile Ser His Val Lys Ser Val Leu Thr Phe Ser 115 120 125

【００４５】 <210> 6 <211> 91 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6 Met Pro Gly Met Arg Leu Val Cys Arg Leu Ala His Gly His Phe Pro 5 10 15 Arg Lys Gly Gln Arg Arg Arg Ser Leu Thr Val Trp Lys Ala Glu Thr 20 25 30 Ser Arg Ala Asp Cys Leu Gly Ala Pro Asn Ile Arg Thr Ala Pro Leu 35 40 45 Gly Arg Ser Glu Lys Arg Thr Ala Ile Cys Phe Ser Thr Gly Ala Gln 50 55 60 Asp Ser Ser Gln Arg Ala Pro Phe Arg Leu Gln Asn Pro Gly Gln Leu 65 70 75 80 Leu Gln Pro Pro Lys Val Leu Gly Leu Gln Ala 85 90 <210> 7 <211> 242 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Thr Leu Asp Arg Pro Gly Glu Gly Ala Thr Met Leu Lys Thr Phe 5 10 15 Thr Val Leu Leu Phe Cys Ile Arg Met Ser Leu Gly Met Thr Ser Ile 20 25 30 Val Met Asp Pro Gln Pro Glu Leu Trp Ile Glu Ser Asn Tyr Pro Gln 35 40 45 Ala Pro Trp Glu Asn Ile Thr Leu Trp Cys Arg Ser Pro Ser Arg Ile 50 55 60 Ser Ser Lys Phe Leu Leu Leu Lys Asp Lys Thr Gln Met Thr Trp Ile 65 70 75 80 Arg Pro Ser His Lys Thr Phe Gln Val Ser Phe Leu Ile Gly Ala Leu 85 90 95 Thr Glu Ser Asn Ala Gly Leu Tyr Arg Cys Cys Tyr Trp Lys Glu Thr 100 105 110 Gly Trp Ser Lys Pro Ser Lys Val Leu Glu Leu Glu Ala Pro Gly Gln 115 120 125 Leu Pro Lys Pro Ile Phe Trp Ile Gln Ala Glu Thr Pro Ala Leu Pro 130 135 140 Gly Cys Asn Val Asn Ile Leu Cys His Gly Trp Leu Gln Asp Leu Val 145 150 155 160 Phe Met Leu Phe Lys Glu Gly Tyr Ala Glu Pro Val Asp Tyr Gln Val 165 170 175 Pro Thr Gly Thr Met Ala Ile Phe Ser Ile Asp Asn Leu Thr Pro Glu 180 185 190 Asp Glu Gly Val Tyr Ile Cys Arg Thr His Ile Gln Met Leu Pro Thr 195 200 205 Leu Trp Ser Glu Pro Ser Asn Pro Leu Lys Leu Val Val Ala Gly Gly 210 215 220 Cys Gly Tyr Gly Cys Trp His Leu Ala Ile Val Val Pro Gly Ile Met 225 230 235 240 Ala Gly

【００４６】 <210> 8 <211> 1013 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Met Ala Glu Pro Gly His Ser His His Leu Ser Ala Arg Val Arg Gly 5 10 15 Arg Thr Glu Arg Arg Ile Pro Arg Leu Trp Arg Leu Leu Leu Trp Ala 20 25 30 Gly Thr Ala Phe Gln Val Thr Gln Gly Thr Gly Pro Glu Leu His Ala 35 40 45 Cys Lys Glu Ser Glu Tyr His Tyr Glu Tyr Thr Ala Cys Asp Ser Thr 50 55 60 Gly Ser Arg Trp Arg Val Ala Val Pro His Thr Pro Gly Leu Cys Thr 65 70 75 80 Ser Leu Pro Asp Pro Val Lys Gly Thr Glu Cys Ser Phe Ser Cys Asn 85 90 95 Ala Gly Glu Phe Leu Asp Met Lys Asp Gln Ser Cys Lys Pro Cys Ala 100 105 110 Glu Gly Arg Tyr Ser Leu Gly Thr Gly Ile Arg Phe Asp Glu Trp Asp 115 120 125 Glu Leu Pro His Gly Phe Ala Ser Leu Ser Ala Asn Met Glu Leu Asp 130 135 140 Asp Ser Ala Ala Glu Ser Thr Gly Asn Cys Thr Ser Ser Lys Trp Val 145 150 155 160 Pro Arg Gly Asp Tyr Ile Ala Ser Asn Thr Asp Glu Cys Thr Ala Thr 165 170 175 Leu Met Tyr Ala Val Asn Leu Lys Gln Ser Gly Thr Val Asn Phe Glu 180 185 190 Tyr Tyr Tyr Pro Asp Ser Ser Ile Ile Phe Glu Phe Phe Val Gln Asn 195 200 205 Asp Gln Cys Gln Pro Asn Ala Asp Asp Ser Arg Trp Met Lys Thr Thr 210 215 220 Glu Lys Gly Trp Glu Phe His Ser Val Glu Leu Asn Arg Gly Asn Asn 225 230 235 240 Val Leu Tyr Trp Arg Thr Thr Ala Phe Ser Val Trp Thr Lys Val Pro 245 250 255 Lys Pro Val Leu Val Arg Asn Ile Ala Ile Thr Gly Val Ala Tyr Thr 260 265 270 Ser Glu Cys Phe Pro Cys Lys Pro Gly Thr Tyr Ala Asp Lys Gln Gly 275 280 285 Ser Ser Phe Cys Lys Leu Cys Pro Ala Asn Ser Tyr Ser Asn Lys Gly 290 295 300 Glu Thr Ser Cys His Gln Cys Asp Pro Asp Lys Tyr Ser Glu Lys Gly 305 310 315 320 Ser Ser Ser Cys Asn Val Arg Pro Ala Cys Thr Asp Lys Asp Tyr Phe 325 330 335 Tyr Thr His Thr Ala Cys Asp Ala Asn Gly Glu Thr Gln Leu Met Tyr 340 345 350 Lys Trp Ala Lys Pro Lys Ile Cys Ser Glu Asp Leu Glu Gly Ala Val 355 360 365 Lys Leu Pro Ala Ser Gly Val Lys Thr His Cys Pro Pro Cys Asn Pro 370 375 380 Gly Phe Phe Lys Thr Asn Asn Ser Thr Tyr Gln Pro Cys Pro Tyr Gly 385 390 395 400 Ser Tyr Ser Asn Gly Ser Asp Cys Thr Arg Cys Pro Ala Gly Thr Glu 405 410 415 Pro Ala Val Gly Phe Glu Tyr Lys Trp Trp Asn Thr Leu Pro Thr Asn 420 425 430 Met Glu Thr Thr Val Leu Ser Gly Ile Asn Phe Glu Tyr Lys Gly Met 435 440 445 Thr Gly Trp Glu Val Ala Gly Asp His Ile Tyr Thr Ala Ala Gly Ala 450 455 460 Ser Asp Asn Asp Phe Met Ile Leu Thr Leu Val Val Pro Gly Phe Arg 465 470 475 480 Pro Pro Gln Ser Val Met Ala Asp Thr Glu Asn Lys Glu Val Ala Arg 485 490 495 Ile Thr Phe Val Phe Glu Thr Leu Cys Ser Val Asn Cys Glu Leu Tyr 500 505 510 Phe Met Val Gly Val Asn Ser Arg Thr Asn Thr Pro Val Glu Thr Trp 515 520 525 Lys Gly Ser Lys Gly Lys Gln Ser Tyr Thr Tyr Ile Ile Glu Glu Asn 530 535 540 Thr Thr Thr Ser Phe Thr Trp Ala Phe Gln Arg Thr Thr Phe His Glu 545 550 555 560 Ala Ser Arg Lys Tyr Thr Asn Asp Val Ala Lys Ile Tyr Ser Ile Asn 565 570 575 Val Thr Asn Val Met Asn Gly Val Ala Ser Tyr Cys Arg Pro Cys Ala 580 585 590 Leu Glu Ala Ser Asp Val Gly Ser Ser Cys Thr Ser Cys Pro Ala Gly 595 600 605 Tyr Tyr Ile Asp Arg Asp Ser Gly Thr Cys His Ser Cys Pro Pro Asn 610 615 620 Thr Ile Leu Lys Ala His Gln Pro Tyr Gly Val Gln Ala Cys Val Pro 625 630 635 640 Cys Gly Pro Gly Thr Lys Asn Asn Lys Ile His Ser Leu Cys Tyr Asn 645 650 655 Asp Cys Thr Phe Ser Arg Asn Thr Pro Thr Arg Thr Phe Asn Tyr Asn 660 665 670 Phe Ser Ala Leu Ala Asn Thr Val Thr Leu Ala Gly Gly Pro Ser Phe 675 680 685 Thr Ser Lys Gly Leu Lys Tyr Phe His His Phe Thr Leu Ser Leu Cys 690 695 700 Gly Asn Gln Gly Arg Lys Met Ser Val Cys Thr Asp Asn Val Thr Asp 705 710 715 720 Leu Arg Ile Pro Glu Gly Glu Ser Gly Phe Ser Lys Ser Ile Thr Ala 725 730 735 Tyr Val Cys Gln Ala Val Ile Ile Pro Pro Glu Val Thr Gly Tyr Lys 740 745 750 Ala Gly Val Ser Ser Gln Pro Val Ser Leu Ala Asp Arg Leu Ile Gly 755 760 765 Val Thr Thr Asp Met Thr Leu Asp Gly Ile Thr Ser Pro Ala Glu Leu 770 775 780 Phe His Leu Glu Ser Leu Gly Ile Pro Asp Val Ile Phe Phe Tyr Arg 785 790 795 800 Ser Asn Asp Val Thr Gln Ser Cys Ser Ser Gly Arg Ser Thr Thr Ile 805 810 815 Arg Val Arg Cys Ser Pro Gln Lys Thr Val Pro Gly Ser Leu Leu Leu 820 825 830 Pro Gly Thr Cys Ser Asp Gly Thr Cys Asp Gly Cys Asn Phe His Phe 835 840 845 Leu Trp Glu Ser Ala Ala Ala Cys Pro Leu Cys Ser Val Ala Asp Tyr 850 855 860 His Ala Ile Val Ser Ser Cys Val Ala Gly Ile Gln Lys Thr Thr Tyr 865 870 875 880 Val Trp Arg Glu Pro Lys Leu Cys Ser Gly Gly Ile Ser Leu Pro Glu 885 890 895 Gln Arg Val Thr Ile Cys Lys Thr Ile Asp Phe Trp Leu Lys Val Gly 900 905 910 Ile Ser Ala Gly Thr Cys Thr Ala Ile Leu Leu Thr Val Leu Thr Cys 915 920 925 Tyr Phe Trp Lys Lys Asn Gln Lys Leu Glu Tyr Lys Tyr Ser Lys Leu 930 935 940 Val Met Asn Ala Thr Leu Lys Asp Cys Asp Leu Pro Ala Ala Asp Ser 945 950 955 960 Cys Ala Ile Met Glu Gly Glu Asp Val Glu Asp Asp Leu Ile Phe Thr 965 970 975 Ser Lys Lys Ser Leu Phe Gly Lys Ile Lys Ser Phe Thr Ser Lys Arg 980 985 990 Thr Pro Asp Gly Phe Asp Ser Val Pro Leu Lys Thr Ser Ser Gly Gly 995 1000 1005 Pro Asp Met Asp Leu 1010

【００４７】 <210> 9 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 9 tgggccacaa cctatgaggt aatc 24 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 10 tcagaccacc ctctctcgtc c 21 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 11 gcctcagcct cccgagtatc 20 <210> 12 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 12 cgtcagagac atgggatttg gagt 24 <210> 13 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 13 ccaattctct gcaacaccct aatc 24 <210> 14 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 14 ctttgatgcc tttattgatt caacac 26 <210> 15 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 15 ctaatacgac tcactatagg gctcgagcgg ccgcccgggc aggt 44 <210> 16 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 16 ctcagaccac ccctcctccc acgca 25 <210> 17 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 17 tgtctcttc cagtagcagc accggtaaa 28 <210> 18 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 18 agacagaccc tccaaagatt ca 22 <210> 19 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 19 gacaggacgg cgaagtttga 20 <210> 20 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 20 tccttattgc ctcaccattt cc 22 <210> 21 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 21 aggacttata tgccaggcac 20 <210> 22 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 22 tgttattttt atgtgtggaa 20 <210> 23 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 23 cgctctagaa ctagtggatc 20 <210> 24 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 24 tttgtgtctt atccttcagc agcag 25 <210> 25 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 25 tgctgagttc aggttagagg cc 22 <210> 26 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 26 gttactgctt ttccacttgc tc 22

【図面の簡単な説明】

【図１】PGSF1の構造を示す図である。上はPGSF1ゲノム
を表し、下はPGSF1のｃＤＮＡ構造を表す。ｃＤＮＡ構
造中の背の高い四角と背の低い四角はそれぞれ蛋白コー
ド領域と非コード領域を表す。黒塗り四角はダイズnodu
linファミリーに保存された領域を示す（図４参照）。A
W583046は、エクソン２でのスプライスが異なり、下垂
体ORFにフレームシフトをもたらす５３ｂｐ挿入部分を
有している。

【図２】PGSF1のアミノ酸配列アラインメントを示す図
である。

【図３】PGSF1とβアクチンの多組織ノーザンハイブリ
ダイゼーションを示す図である。

【図４】PGSF1とダイズnodulinファミリーのアミノ酸配
列アラインメントを示す図である。PGSF1に一致するア
ミノ酸を黒で示す。NO2B_SOYBNはダイズnodulin２６Ｂ
を表し、NO23_SOYBNはダイズnodulin２３を表し、NO44_
SOYBNはダイズnodulin４４を表す。

【図５】PGSF2とIGDC1の構造を示す図である。背の高い
四角と背の低い四角はそれぞれ蛋白コード領域と非コー
ド領域を表す。影付きのものは異なるヌクレオチド配列
を示す。シグナルペプチド、Ｉｇ様領域、膜貫通領域(T
Ms)、及びノーザンハイブリダイゼーションで用いたプ
ローブを示す。

【図６】PGSF2I、GDC1及びInhBP-sのアミノ酸配列アラ
インメントを示す図である。一致するアミノ酸を黒で示
す。

【図７】PGSF2の3’-プローブ及び5’-プローブを用い
た多組織ノーザンハイブリダイゼーションを示す図であ
る。

【図８】KIAA0512の多組織ノーザンハイブリダイゼーシ
ョンを示す図である。

【図９】陽性検体における組換えヒトPGSF1a による抑
制効果を示す図である。

【図１０】陽性及び陰性検体における組換えヒトPGSF1a
による抑制効果を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 5/10 Ａ６１Ｐ 19/02 19/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｎ 15/09 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＣ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＡＧ０１Ｎ 33/53 Ａ６１Ｋ 37/02 (72)発明者大久保公策大阪府箕面市瀬川２−11−26 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 CA04 HA14 HA17 4B063 QA19 QQ03 QQ43 QR08 QR55 QR62 QS25 QS34 4C084 AA02 AA13 BA01 BA08 BA20 BA21 BA22 BA23 CA18 CA28 DC50 NA14 ZA962 ZC012 4C085 AA13 BB11 CC28 4C086 AA01 AA02 EA16 NA14 ZA96 ZC01

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号１〜４のいずれかの塩基配列又
はその部分の、ヒト下垂体若しくはヒト関節に関する検
査又はヒト下垂体関連疾患若しくはヒト関節関連疾患の
治療のための使用。
【請求項２】配列番号１〜４のいずれかの塩基配列又
はその部分をＰＣＲ増幅するためのプライマーから成
る、ヒト下垂体関連疾患又はヒト関節関連疾患の遺伝子
異常の診断キット。
【請求項３】配列番号１〜４のいずれかの塩基配列の
部分配列をプローブとする、ヒト下垂体関連疾患又はヒ
ト関節関連疾患の遺伝子発現の診断薬。
【請求項４】配列番号１〜４の塩基配列のいずれかを
含む発現ベクターから成る、配列番号５〜８のいずれか
の配列のタンパク質の低発現が増悪因子となるヒト下垂
体関連疾患又はヒト関節関連疾患の治療薬。
【請求項５】配列番号１〜４のいずれかの塩基配列に
対するアンチセンス核酸から成る、配列番号５〜８のい
ずれかのタンパク質の過剰発現が増悪因子となるヒト下
垂体関連疾患又はヒト関節関連疾患の治療薬。
【請求項６】配列番号５〜８のいずれかの配列のタン
パク質又は該タンパク質に対する抗体の、ヒト下垂体若
しくはヒト関節に関する検査又はヒト下垂体関連疾患若
しくはヒト関節関連疾患の治療のための使用。
【請求項７】配列番号５〜８のいずれかの配列のタン
パク質を抗原として成るヒト下垂体又はヒト関節関連の
自己免疫疾患の診断薬。
【請求項８】前記抗原が標識されている請求項７に記
載の診断薬。
【請求項９】前記自己免疫疾患が、自己免疫性下垂体
炎又は慢性関節リウマチである請求項７又は８に記載の
診断薬。
【請求項１０】配列番号５〜８のいずれかの配列のタ
ンパク質に対する抗体から成るヒト下垂体又はヒト関節
機能の診断薬。
【請求項１１】配列番号５〜８のいずれかの配列のタ
ンパク質から成る、配列番号５〜８のいずれかの配列タ
ンパク質の低発現が増悪因子となるヒト下垂体関連疾患
又はヒト関節関連疾患の治療薬。
【請求項１２】配列番号５〜８のいずれかの配列のタ
ンパク質に対する抗体から成る、配列番号５〜８のいず
れかの配列のタンパク質の過剰発現が増悪因子となるヒ
ト下垂体関連疾患又はヒト関節関連疾患の治療薬。