CN102028707A

CN102028707A - 麝香酮的检测方法

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Publication number: CN102028707A
Application number: CN2009103079423A
Authority: CN
Inventors: 夏厚林; 王建; 曾南; 彭成; 石战英; 董重; 张廷模; 吴纯洁; 万德光; 董晓萍; 李祖伦; 孟宪丽
Original assignee: Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
Current assignee: Chengdu University of Traditional Chinese Medicine
Priority date: 2009-09-29
Filing date: 2009-09-29
Publication date: 2011-04-27
Anticipated expiration: 2029-09-29
Also published as: CN102028707B

Abstract

本发明属于药物检测领域，涉及一种麝香酮的检测方法，本发明所解决的技术问题为提供一种操作简便、专属性强、稳定且重复性好麝香酮的检测方法。本发明检测方法采用高效液相色谱法测定，检测条件及方法如下：色谱条件为以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(90-95∶5-10)或乙腈-水(90-95∶5-10)；检测波长为283nm。制备对照品溶液：精密称取麝香酮对照品适量，以乙腈或甲醇溶解麝香酮；以麝香或含麝香的制剂为检测对象制备供试品溶液。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，测定，即可。本发明检测方法无需柱前衍生化，样品制备简单，设备条件要求不高，专属性强，稳定且重复性好，且便于操作。

Description

麝香酮的检测方法

技术领域

本发明属于药物检测领域，涉及一种麝香酮的检测方法。

背景技术

麝香属名贵香料与名贵中药，其芳香气味主要来源于其中所含的麝香酮。药理研究表明，麝香酮是天然麝香中的重要生理活性成分，该成分的检测是评价麝香药材质量的重要指标之一。

现有麝香酮检测法主要有气相色谱法、薄层色谱法、柱前衍生化高效液相色谱法、高效液相色谱法-质谱联用技术测定及比色法等。

应用气相色谱法检测麝香酮为中国药典2005年版采用方法，其分析的准确性毋庸质疑，但因在分析中使用高压、可燃性气体等，安全性要求较高。

应用薄层色谱法检测麝香酮时，因该法应用手工制备薄层板，较开放的展开方式及显色方法，定性检测尚可，定量检测重现性较差。

应用柱前衍生高效液相色谱法检测麝香酮，即在进样分析前将样品及对照品与2，4-二硝基苯肼反应生成苯腙，利用苯腙的吸收峰进行检测，该法操作繁琐。

应用高效液相色谱法-质谱联用技术检测麝香酮，该法是一种较好的检测方法，但仪器昂贵，不易普及。

应用比色法检测麝香酮，因该法必须先将样品分离纯化再显色测定，其操作更加繁琐。

本领域急需一种操作简便、专属性强、稳定重复性好的方法用于检测麝香酮。

发明内容

本发明所解决的技术问题为提供一种新的麝香酮的检测方法，该方法无需柱前衍生化。

本发明检测方法采用高效液相色谱法测定，具体地，检测条件及方法如下：

1、色谱条件与系统适用性试验：

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(90-95∶5-10)或乙腈-水(90-95∶5-10)为流动相；检测波长为280-286nm。理论板数按麝香酮峰计算应不低于16000。

其中，根据检测波长确定麝香酮在283nm有最大紫外吸收峰，但考虑到因仪器需校正等因素的偏差，故可设定麝香酮的检测波长为280-286nm，使用时可根据各仪器的实际情况确定该仪器最适合的检测波长。

2、测试溶液制备：

(1)对照品溶液的制备：精密称取麝香酮对照品适量，以乙腈或甲醇溶解麝香酮即可；

具体地，可制成乙腈或甲醇每1ml含麝香酮2mg。

(2)供试品溶液的制备：

以麝香为检测对象时，供试品溶液的制备方法如下：取麝香粉末约0.2g，精密称定，以乙醚超声提取或索氏提取后，取提取液，溶剂挥至近干，加乙腈溶解，定容，摇匀，滤过，即得。

其中，超声提取的制备方法为：取麝香粉末约0.2g，精密称定，置离心管中，密塞，乙醚超声提取3次，每次加乙醚溶剂3ml，超声15min，离心，合并上清液，溶剂挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，并定容至2ml，摇匀，滤过，即得。

其中，索氏提取的制备方法为：取麝香粉末约0.2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，提取8小时，取提取液置水浴挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，并定容至2ml，摇匀，滤过，即得。如乙醇、甲醇、乙腈等溶剂也可以作为麝香供试品的提取溶液。

以含天然麝香或人工麝香的制剂为检测对象时，供试品溶液的制备方法为：取含天然麝香或人工麝香的制剂适量，加乙醚或石油醚进行超声或索氏提取，直至麝香酮提取完全，提取液置水浴挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，定容摇匀，滤过，即得。

3、测定法：

分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即可。

应用本发明检测方法检测麝香、含麝香或人工麝香的制剂时，无需柱前衍生化，样品制备简单，设备条件要求不高，专属性强，稳定且重复性好，且便于操作。

附图说明

图1色谱柱选择diamonsil(钻石)C₁₈ 5μm 200*4.6mm。

图2色谱柱选择diamonsil(钻石)C₁₈ 5μm 250*4.6mm。

图3色谱柱选择Agilent Tc-C₁₈ 5μm 250*4.6mm。

图4流动相选择供试品甲醇-水(90∶10)。

图5流动相选择麝香酮对照品甲醇-水(90∶10)。

图6流动相选择供试品乙腈-水(90∶10)。

图7流动相选择麝香酮对照品乙腈-水(90∶10)。

图8流动相比例考察供试品甲醇-水(90∶10)。

图9流动相比例考察供试品甲醇-水(90∶10)。

图10流速考察0.5ml/min。

图11流速考察0.8ml/min。

图12流速考察1.0ml/min。

图13柱温的影响15℃。

图14柱温的影响25℃。

图15柱温的影响35℃。

图16麝香酮紫外光谱图。

图17空白样品色谱图。

图18麝香酮对照品色谱图。

图19供试品色谱图。

图20线性关系图。

具体实施方式

以下通过检测条件的筛选试验说明本发明检测方法的有益效果。

1、仪器、材料和试剂

仪器Agilent1200高效液相色谱仪；(UV-8500)紫外-可见分光光度计(中国上海天美公司)；BP211D型电子分析天平(Max：210g，d＝0.1mg；北京赛多利仪器系统有限公司)；KQ-600DE超声波清洗器(40KHZ昆山市超声仪器有限公司)。

材料麝香：为林麝(Moschus berezovskii Flerov.)成熟雄体香囊中的干燥分泌物，购自四川养麝研究所，批号为：080403；麝香酮对照品(供含量测定用)：批号为110719-200409，中国药品生物制品检定所提供。

试剂甲醇(色谱纯，Fisher)，水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。

2、方法与结果

2.1色谱条件

注：考察色谱条件时，所用对照品溶液及供试品溶液为按照2.2和2.3确定的方法进行制备。

2.1.1不同色谱柱比较：

考察了diamonsil(钻石)C₁₈ 5μm 250*4.6mm和Agilent Tc-C₁₈ 5μm250*4.6mm，分离度相当。试验结果见图1-3。

2.1.2流动相的选择

分别考察了甲醇-水及乙腈-水系统。两系统分离度相当。试验结果见图4-图7。因甲醇-水系统价格较低，故试验以其为主。

2.1.3流动相比例的考察

分别考察了甲醇-水(90∶10)和甲醇-水(95∶5)，试验结果见图8-图9。由图8-图9可见甲醇-水(90∶10)对麝香酮峰分离度较好。

2.1.4流速考察

考察了0.5ml/min、0.8ml/min和1.0ml/min，测定结果相当，但0.5ml/min、0.8ml/min麝香酮峰较宽，因此采用1.0ml/min作为测定流速。试验结果见图10-图12。

2.1.5柱温的影响

考察了柱温15℃、25℃及35℃。柱温为15℃时柱压较高，麝香酮峰较宽，理论塔板数降低，柱温为25℃及35℃所测麝香酮含量相当，暂定25℃作为测定温度。试验结果见图13-15。

2.1.6测定波长的选择

通过紫外分光光度计对麝香酮对照品的乙腈溶液，在190-400nm波长范围内进行扫描，结果发现麝香酮在283nm处有最大紫外吸收峰，试验结果见图16。因此，选择283nm作为含量测定的检测波长。

综上，色谱条件为：色谱柱为Agilent C₁₈柱(250mm×4.6mm，5μm)；甲醇-水(90∶10)为流动相；检测波长为283nm；流速1.0ml/min；柱温：25℃；进样量10μl。理论塔板数按麝香酮峰计不少于16000。

2.2对照品溶液的制备

精密称取麝香酮对照品适量，加乙腈制成每1ml含麝香酮2.041mg，即得。

2.3供试品溶液的制备

2.3.1提取方法考察

超声提取：取麝香粉末约0.2g，精密称定，置离心管中，密塞，超声提取3次，每次加乙醚溶剂3ml，超声15min，离心，合并上清液，溶剂挥至近干，加乙腈溶解，并定容至2ml，摇匀，滤过，即得。

索氏提取：取麝香粉末约0.2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，提取8小时，取提取液置水浴挥至近干，加乙腈溶解，并定容至2ml，摇匀，滤过，即得。

两供试液依2.1确定的色谱条件测定，试验结果见表1。结果表明，两提取方法提取率相当。

2.3.2提取溶剂的考察

取麝香粉末约0.2g，精密称定，分别以乙醇、乙醚为提取溶剂，超声提取，制备供试品溶液，依2.1确定的色谱条件测定，试验结果见表1。结果表明，乙醚提取率较高。

2.3.3超声提取次数的考察

取麝香粉末约0.2g，精密称定，以乙醚为提取溶剂，考察超声提取次数，制备供试品溶液，依2.1确定的色谱条件测定，试验结果见表1。结果表明，提取2次已基本提取完全。

表1供试品溶液制备考察

综上，供试品溶液制备方法为：取麝香粉末约0.2g，精密称定，置离心管中，密塞，超声提取3次，每次加乙醚溶剂3ml，超声15min，离心，合并上清液，溶剂挥至近干，加乙腈溶解，并定容至2ml，摇匀，滤过，即得。

2.4空白样品溶液的制备

于离心管中加乙醚溶剂3ml，按照供试品溶液制备方法制得空白样品溶液。

2.5专属性试验

分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、空白样品溶液各10μl，采用2.1确定的色谱条件注入高效液相色谱仪，HPLC图谱见图17-图19。结果表明空白样品溶液对麝香酮的含量测定无干扰。

2.6线性范围

精密吸取麝香酮对照品溶液2.0μl、4.0μl、6.0μl、8.0μl、10.0μl、12.0μl，依选定色谱条件，测定各自峰面积值，以对照品进样量(mg)为横坐标，峰面积值为纵坐标，求得线性方程为y＝6954.7x-0.1348，R＝0.9995结果表明在0.004082mg-0.024490mg范围内与峰面积呈良好的线性关系。试验结果见图20及表2。

表2线性范围试验结果

2.7精密度试验

2.7.1日内精密度

精密吸取同一供试品溶液(按2.3确定的方法制备)10μl，重复进样6次，结果表明，日内精密度RSD为1.00％。试验结果见表3。

表3日内精密度试验结果

2.7.2日间精密度

精密吸取同一供试品溶液(按2.3确定的方法制备)10μl，按选定色谱条件于0d、1d、2d、3d、4d进行测定，结果表明，日间精密度RSD为2.02％。试验结果见表4。

表4精密度试验结果

2.8稳定性试验

2.8.1对照品溶液稳定性试验

精密吸取麝香酮对照品溶液10μl，按选定色谱条件于0d、1d、2d、3d、4d测定麝香酮峰面积值，RSD为2.13％表明对照品溶液在4d内稳定。试验结果见表5。

表5对照品溶液稳定性试验结果

2.8.2供试品溶液的稳定性试验

精密吸取同一供试品溶液(按2.3确定的方法制备)10μl，按选定色谱条件于0h、2h、4h、6h、8h、12h测定供试品中麝香酮峰面积值，RSD为1.79％，表明供试品溶液在12h内稳定。试验结果见表6。

表6供试品溶液稳定性试验结果

2.9加样回收率试验

取已知含量的天然麝香粉末0.1g，精密称定，平行6份，精密加入麝香酮对照品适量，按2.3制备供试品溶液，依据已确定的色谱条件测定，计算回收率，试验结果见表7。

表7加样回收率试验结果

2.10样品测定

取天然麝香3份，按照2.3制备供试品溶液，进样10μl，依据已确定的色谱条件测定，按峰面积值用外标一点法计算样品中麝香酮含量。试验结果见表8.

表8样品测定结果

2.11检测限

按信噪比S/N＝3计算检测限为20ng。

现有较常用的检测方法为柱前衍生高效液相色谱法检测麝香酮，麝香酮直接紫外测定，其摩尔吸光系数较低，要影响其检测，故需要在柱前衍生化处理才能进行检测。应用本发明检测方法时无需进行柱前衍生化，依然能够得到稳定且重复性好的检测结果，而且样品制备简单，设备条件要求不高，操作简便。

Claims

1.麝香酮的检测方法，它是采用高效液相色谱法测定，分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液注入液相色谱仪，测定，即可；其特征在于：

色谱条件是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水或乙腈-水为流动相；检测波长为280-286nm；流动相中甲醇与水的体积比为90-95∶5-10，乙腈与水的体积比为90-95∶5-10；

制备对照品溶液：精密称取麝香酮对照品适量，以乙腈或甲醇溶解麝香酮，即得。

2.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于：所述检测波长为283nm。

3.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于：色谱条件中柱温为15-35℃。

4.根据权利要求3所述的麝香酮的检测方法，其特征在于：色谱条件中柱温为25℃。

5.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于：色谱条件中流速为0.5-1.0ml/min。

6.根据权利要求5所述的麝香酮的检测方法，其特征在于：色谱条件中流速为1.0ml/min。

7.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于：流动相中甲醇或乙腈与水的体积比为90∶10。

8.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于：制备对照品溶液使乙腈或甲醇每1ml含麝香酮2mg。

9.根据权利要求1所述的麝香酮的检测方法，其特征在于：以麝香为检测对象时，供试品溶液的制备方法如下：取麝香粉末约0.2g，精密称定，以乙醚超声提取或索氏提取后，取提取液，溶剂挥至近干，加乙腈溶解，定容，摇匀，滤过，即得；

以含天然麝香或人工麝香的制剂为检测对象时，供试品溶液的制备方法如下：取含天然麝香或人工麝香的制剂适量，加乙醚或石油醚进行超声或索氏提取，直至麝香酮提取完全，提取液置水浴挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，定容摇匀，滤过，即得。

10.根据权利要求9所述的麝香酮的检测方法，其特征在于：

以麝香为检测对象时，超声提取制备供试品溶液的方法如下：

取麝香粉末约0.2g，置离心管中，密塞，乙醚超声提取3次，每次加乙醚溶剂3ml，超声15min，离心，合并上清液，溶剂挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，并定容至2ml，摇匀，滤过，即得；

以麝香为检测对象时，索氏提取制备供试品溶液的方法如下：

取麝香粉末约0.2g，精密称定，置索氏提取器中，加乙醚适量，提取8小时，取提取液置水浴挥至近干，加乙腈或甲醇溶解，并定容至2ml，摇匀，滤过，即得。