CN101957349A - 用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法，目前还没有成熟的鉴别杨树树胶与蜂胶的方法。本发明包括蜂胶实物标样和杨树树胶实物标样制备工序，蜂胶实物标样制备工序将碎蜂胶浸泡到浓度为95％的食用乙醇，将精制蜂胶液置于80-95℃水浴中真空干燥，将碎精制蜂胶与赋形剂混合过80目筛得蜂胶实物标样；杨树树胶实物标样制备工序，将杨树-水混合液加热至90℃以上压榨得杨树液，对杨树液熬制后浸泡到浓度为95％的食用乙醇，将精制杨树树胶液置于80-95℃水浴中真空干燥，将碎精制杨树树胶与赋形剂混合过80目筛得杨树树胶实物标样。本发明制备科学合理，可操作性强，能够用于有效判别由杨树芽制成的假蜂胶。

Description

用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法

技术领域

本发明涉及一种实物标样的制备方法，尤其是涉及一种用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法，当利用蜂胶液相指纹图谱进行蜂胶真伪鉴别时作为实物标样，主要用于鉴别杨树树胶与蜂胶，通过比较检测样品与实物标样的液相指纹图谱各特征色谱峰的一致性而对蜂胶的真伪进行鉴别。

背景技术

目前蜂胶制假掺假现象愈演愈烈，由于现有的蜂胶标准滞后，由杨树芽制成的假蜂胶很难用通过人体的感官进行鉴别，而且这类假蜂胶的各项质量指标完全符合现行的国家标准，也就是说采用现行的国家标准难以判别蜂胶产品的真伪优劣，尤其难以判别由杨树芽制成的假蜂胶，现行的国家标准已跟不上市场的发展需要，如由潘建国、贺丽苹、郑尧隆等发表在中国蜂业2008年第3卷第59期第34-35页上的蜂胶有效成分测定及质量控制的现代分析技术应用就属于现行的国家标准。由于在蜂胶真伪鉴别方面目前还没有相关的标准来为执法提供科学依据，导致政府监管在面对蜂胶掺假时却无能为力。

2005年以来，常见有蜂胶HPLC指纹图谱研究的报道，人们试图通过液相色谱法、液相色谱串联质谱法、气相色谱质谱法、紫外光谱法等来找出蜂胶的特征指纹图谱，进一步控制蜂胶质量，防止掺假现象的发生。如由周萍、章征天、胡福良等发表在蜜蜂杂志2005年第10卷第5-6页上的蜂胶HPLC指纹图谱真伪鉴别初探以及由朱恩圆、窦玉玲、魏东芝发表在中国中药杂志2005年第18卷第30期第1423-1425页上的蜂胶HPLC指纹图谱及质量控制都属于通过液相色谱法来找出蜂胶特征指纹图谱的方法；由曹炜、符军放、索志荣等发表在食品与发酵工业2007年第7卷第33期第162-166页上的蜂胶与杨树芽提取物成分的比较研究属于通过液相色谱串联质谱法来找出蜂胶特征指纹图谱的方法；由余兰平、盛文胜发表在蜜蜂杂志2006年第6卷第3-5页上的气相色谱-质谱法分析蜂胶和杨树胶的化学成分属于通过气相色谱质谱法来找出蜂胶特征指纹图谱的方法；由符军放、吴素芳、曹炜等发表在中国蜂业2006年第5卷第57期第9-10页上的蜂胶醇提取物紫外光谱相似性探讨属于通过紫外光谱法来找出蜂胶特征指纹图谱的方法。

现有研究成果中，由曹炜、符军放、索志荣等发表在食品与发酵工业2007年第7卷第33期第162-166页上的蜂胶与杨树芽提取物成分的比较研究认为蜂胶与杨树芽孢指纹特征峰几乎完全相同；由盛文胜、杜青桃、李树岚等发表在中国蜂业2008年第3卷第59期第7-8页上的蜂胶与杨树胶中八种黄酮与肉桂酸含量的测定中记载了杨树胶中肉桂酸的含量为0.18％，该含量界于原料与蜂胶膏中间蜂胶之间，该文章中建议采用肉桂酸、柯因和高良姜素3个组分作为蜂胶与杨树胶真假鉴定的一个方法；而有的国外客户在进口中国的蜂胶时，要求部分黄酮之间的含量比例。虽然公开日为2006年01月11日，公开号为CN1719247的中国专利中，公开了一种利用液相指纹图谱鉴别蜂胶真假的方法，但该方法中没有记载能够提高鉴别效果的蜂胶实物标样和杨树树胶实物标样的制备方法，所以今还未有成熟的鉴别杨树树胶与蜂胶的方法，国内科研机构正在积极的投入到这个急需的项目中，期望有所突破，以规范蜂胶市场。

我们从蜂胶的功效成份黄酮类化合物着手，认为蜂胶是蜜蜂采集树芽中的树脂，并混入自身的分泌液而用以防菌防腐，因此，必然与用树皮熬制的树胶在活性成份上存有差异[2]，同时认为只有充分建立来自全国各地不同来源的蜂胶指纹图谱库，才有可能找到蜂胶与杨树树胶具有普遍性的不同点，经过多年实践，我们建立了来自全国各地56个蜂胶指纹图谱，对商品杨树树胶、蜂胶进行了指纹图谱的检测，并对真伪进行判定实践。我们的公开号为CN1719247的专利公开了一种利用液相指纹图谱鉴别蜂胶真假的方法。

综上所述，目前还没有成熟的鉴别杨树树胶与蜂胶的方法，而且也没有一种专门针对于公开日为2006年01月11日，公开号为CN1719247的中国专利而设计的蜂胶实物标样和杨树树胶实物标样的制备方法，从而给该专利的广泛普及带来一定的障碍，同时也阻碍了鉴别杨树树胶与蜂胶方法的更好发展。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的上述不足，而提供一种制备科学合理，可操作性强，产品的纯度稳定、均匀、不结块、不易吸湿，能够用于有效判别由杨树芽制成的假蜂胶的用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法。

本发明解决上述问题所采用的技术方案是：该用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法的特点在于：包括蜂胶实物标样制备工序和杨树树胶实物标样制备工序，所述蜂胶实物标样制备工序中，先取1000g蜂胶做为原料蜂胶，该原料蜂胶是由蜜蜂采自植物芽孢的树脂而成的，将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，再将碎蜂胶浸泡到体积浓度为95％的食用乙醇中制得蜂胶乙醇液，食用乙醇与碎蜂胶的重量比为4∶1，并对蜂胶乙醇液搅拌48-72h；经过搅拌后的蜂胶乙醇液先进行离心，然后采用目数为800-1000目的滤器进行过滤而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液置于-30--40℃下48小时，最后采用0.45微米的滤膜对蜂胶滤液进行过滤而制得精制蜂胶液；将精制蜂胶液置于80-95℃的水浴中进行真空度为-0.096MPa以下的真空干燥，当精制蜂胶液的温度不大于60℃以及冷凝器中冷凝而成的乙醇小于1滴/分钟时出料而制得精制蜂胶；然后取精制蜂胶400g置于15℃以下进行粗粉碎而制得碎精制蜂胶，将碎精制蜂胶与400g赋形剂混合10min而制得蜂胶混合物，再对蜂胶混合物进行细粉碎而制得碎蜂胶混合物，然后将碎蜂胶混合物过80目筛而得到蜂胶筛上物和蜂胶一次筛下物，再将蜂胶筛上物进行细粉碎后过80目筛而得到蜂胶二次筛下物，最后将蜂胶一次筛下物和蜂胶二次筛下物置于混合锅中搅拌混合2-3小时而制得蜂胶实物标样；

所述杨树树胶实物标样制备工序中，先取杨树芽孢和/或杨树叶和/或杨树皮2000g做为杨树原料，将杨树原料压碎后与水混合而得到杨树-水混合液，杨树原料与水的重量比为1∶(1-5)；先将杨树-水混合液加热至90℃以上后进行压榨而得到一次杨树液和一次压榨渣，然后将一次压榨渣与水混合后加热至90℃以上再进行压榨而得到二次杨树液和二次压榨渣，一次压榨渣与水的重量比为1∶(1-5)，再将二次压榨渣与水混合后加热至90℃以上进行压榨而得到三次杨树液和三次压榨渣，二次压榨渣与水的重量比为1∶(1-5)，最后将一次杨树液、二次杨树液和三次杨树液混合并进行熬制除去水分而得到粗杨树树胶；将1000g粗杨树树胶在0-5℃下进行粗粉碎后浸泡到体积浓度为95％的食用乙醇中制得杨树乙醇液，食用乙醇与粗杨树树胶的重量比为4∶1，并对杨树乙醇液搅拌48-72h；经过搅拌后的杨树乙醇液先进行离心，然后采用目数为800-1000目的滤器进行过滤而制得杨树滤液，再将杨树滤液置于一30--40℃下48小时，最后采用0.45微米的滤膜对杨树滤液进行过滤而制得精制杨树树胶液；将精制杨树树胶液置于80-95℃的水浴中进行真空度为-0.096MPa以下的真空干燥，当精制杨树树胶液的温度不大于60℃以及冷凝器中冷凝而成的乙醇小于1滴/分钟时出料而制得精制杨树树胶；然后取精制杨树树胶400g置于15℃以下进行粗粉碎而制得碎精制杨树树胶，将碎精制杨树树胶与400g赋形剂混合10min而制得杨树树胶混合物，再对杨树树胶混合物进行细粉碎而制得碎杨树树胶混合物，然后将碎杨树树胶混合物过80目筛而得到树胶筛上物和树胶一次筛下物，再将树胶筛上物进行细粉碎后过80目筛而得到树胶二次筛下物，最后将树胶一次筛下物和树胶二次筛下物置于混合锅中搅拌混合2-3小时而制得杨树树胶实物标样。

本发明所述蜂胶实物标样制备工序中，所述蜂胶滤液采用硅藻土过滤机进行过滤，硅藻土与蜂胶滤液的重量比为1∶100，蜂胶滤液经过硅藻土过滤机的过滤而制得精制蜂胶液。

本发明所述杨树树胶实物标样制备工序中，所述杨树滤液采用硅藻土过滤机进行过滤，硅藻土与杨树滤液的重量比为1∶100，杨树滤液经过硅藻土过滤机的过滤而制得精制杨树树胶液。

本发明所述蜂胶实物标样制备工序中，所述赋形剂为麦芽糊精和/或倍他环状糊精和/或无定形二氧化硅和/或角豆粉和/或轻质碳酸钙和/或硅酸铝和/或预胶化淀粉和/或硬脂酸镁。

本发明所述杨树树胶实物标样制备工序中，所述赋形剂为麦芽糊精和/或倍他环状糊精和/或无定形二氧化硅和/或角豆粉和/或轻质碳酸钙和/或硅酸铝和/或预胶化淀粉和/或硬脂酸镁。

本发明所述蜂胶实物标样制备工序中，所述经过搅拌后的蜂胶乙醇液采用三足式离心机进行离心过滤，所述滤器为帆布袋。

本发明所述杨树树胶实物标样制备工序中，所述经过搅拌后的杨树乙醇液采用三足式离心机进行离心过滤，所述滤器为帆布袋。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：本发明制备而成的蜂胶实物标样和杨树树胶实物标样可以作为用HPLC方法进行蜂胶真伪鉴别的实物标样，方便在日常工作中用于建立分析方法和检测质量控制。本发明的制备科学合理，可操作性强，所获得的实物标样采用原料提纯，产品纯度稳定、均匀、不易吸湿、不结块，且运用方便，可在常温条件下长期保存。

本发明从蜂胶的功效成份黄酮类化合物着手，认为蜂胶是蜜蜂采集树芽中的树脂，并混入自身的分泌液而用以防菌防腐，因此，必然与用树皮熬制的树胶在活性成份上存有差异，同时认为只有充分建立来自各地不同来源的蜂胶指纹图谱库，才有可能找到蜂胶与杨树树胶具有普遍性的不同点，只要建立了来自各地的蜂胶指纹图谱，就能够对杨树树胶和蜂胶进行指纹图谱的检测，并对真伪蜂胶进行判定。

本发明制备而成的蜂胶实物标样和杨树树胶实物标样可以按照公开日为2006年01月11日，公开号为CN1719247，专利名称为一种利用液相指纹图谱鉴别蜂胶真假的方法的中国专利进行实施，能够根据指纹图谱特征而有效的鉴别出由杨树芽制成的假蜂胶，有利于公开号为CN1719247的中国专利的广泛普及，方便有效的鉴别出杨树树胶与蜂胶，给政府监管的执法提供科学依据，有效打击蜂胶制假掺假现象，以规范蜂胶市场。

附图说明

图1是本发明实施例中蜂胶实物标样制备工序的流程图；

图2是本发明实施例中杨树树胶实物标样制备工序的流程图；

图3是中国蜂胶实物标样的HPLC指纹图谱；

图4是巴西蜂胶实物标样的HPLC指纹图谱；

图5是杨树树胶实物标样的HPLC指纹图谱。

具体实施方式

下面结合附图并通过实施例对本发明作进一步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。

实施例：

参见图1至图5，本实施例中用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法包括蜂胶实物标样制备工序和杨树树胶实物标样制备工序，通过蜂胶实物标样制备工序而制得蜂胶实物标样，通过杨树树胶实物标样制备工序而制得杨树树胶实物标样。

本实施例的蜂胶实物标样制备工序中，取1000g蜂胶做为原料蜂胶，感官确认原料蜂胶的真实性，将原料蜂胶冷藏，该原料蜂胶是由蜜蜂采自植物芽孢的树脂并混以蜜蜂自身分泌物而成的，可以是涂于蜂箱缝隙处的不规则散状或者块状的固体蜂胶。先将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，并用磁铁除去碎蜂胶中的杂质，对原料蜂胶进行粉碎为现有技术，再将碎蜂胶浸泡到体积浓度为95％的食用乙醇中制得蜂胶乙醇液，并采用不锈钢容器做为浸泡器皿，浸泡所用的食用乙醇与碎蜂胶的重量比为4∶1，并对浸泡过程中的蜂胶乙醇液搅拌60h，本发明对浸泡过程中的蜂胶乙醇液的搅拌时间可以在48-72h。

经过搅拌后的蜂胶乙醇液采用三足式离心机离心过滤而制得蜂胶滤液，所用的滤器为帆布袋，滤器的目数为900目，本发明中滤器的目数可以在800-1000目，所用的三足式离心机为现有技术。然后将蜂胶滤液在-35℃下放置48小时，本发明中可以将蜂胶滤液置于-30--40℃下48小时，再将蜂胶滤液用硅藻土过滤机进行过滤，使用0.45微米的滤膜来过滤蜂胶滤液，硅藻土过滤机中的硅藻土与蜂胶滤液的重量比为1∶100，蜂胶滤液经过硅藻土过滤机的过滤而制得精制蜂胶液。然后将精制蜂胶液置于80-95℃的水浴中进行真空度为-0.096MPa以下的真空干燥，当精制蜂胶液的温度不大于60℃以及冷凝器中冷凝而成的乙醇小于1滴/分钟时出料而制得精制蜂胶。

接下来取精制蜂胶400g置于15℃以下进行粗粉碎而制得碎精制蜂胶，本发明中所用的粗粉碎为现有技术，将碎精制蜂胶与400g赋形剂混合10min而制得蜂胶混合物，本实施例中采用麦芽糊精(DE＝9-12)做为赋形剂，本发明中也可以采用麦芽糊精和/或倍他环状糊精和/或无定形二氧化硅和/或角豆粉和/或轻质碳酸钙和/或硅酸铝和/或预胶化淀粉和/或硬脂酸镁做为赋形剂。然后对蜂胶混合物在锤式粉碎机中进行细粉碎而制得碎蜂胶混合物，本发明中采用锤式粉碎机进行细粉碎为现有技术，将碎蜂胶混合物过80目筛而得到蜂胶筛上物和蜂胶一次筛下物，再将蜂胶筛上物在锤式粉碎机中进行细粉碎后过80目筛而得到蜂胶二次筛下物，最后将蜂胶一次筛下物和蜂胶二次筛下物置于混合锅中搅拌混合2.5小时而制得蜂胶实物标样，本发明中蜂胶一次筛下物和蜂胶二次筛下物可以置于混合锅中搅拌混合2-3小时。

通过随机抽取10份蜂胶实物标样的样品进行检测，按GB/T 24283-2009检测总黄酮，计算精密度符合GB/T 15000.3-2008标准样品工作导则、标准样品定值的一般原则和统计方法对于均匀性的要求后，采用铝箔袋内衬塑料袋进行包装，每个包装袋中装有蜂胶实物标样约0.5g-1g，其中含60mg-120mg的有效物质。然后按GB/T 15000.3-2008对包装好的产品进行稳定性试验，确认其确定期限为二年。蜂胶实物标样按公开号为CN1719247的中国专利进行实施检测，可以取得真实蜂胶的HPLC特征指纹图谱，按GB/T 24283-2009测定蜂胶含量和总黄酮，作为实物标样的质量指标。

制备而成的蜂胶实物标样通过公开日为2006年01月11日，公开号为CN1719247，专利名称为一种利用液相指纹图谱鉴别蜂胶真假的方法的中国专利来得到HPLC指纹图谱，将不同地方的蜂胶实物标样的HPLC指纹图谱制作成蜂胶指纹图谱库，如图3是中国蜂胶实物标样的HPLC指纹图谱，图4是巴西蜂胶实物标样的HPLC指纹图谱，然后将需要鉴别的蜂胶的HPLC指纹图谱与蜂胶指纹图谱库中HPLC指纹图谱进行比较，从而给判定蜂胶真伪提供科学的依据。

本实施例的杨树树胶实物标样制备工序中，取杨树芽孢2000g做为杨树原料，通过感官确认杨树芽孢的真实性，该杨树芽孢是通过人工从杨柳科属植物杨树上采取的，本发明中也可以采用杨树芽孢和/或杨树叶和/或杨树皮做为杨树原料。先将杨树原料压碎后与水混合而得到杨树-水混合液，杨树原料与水的重量比为1∶3，本发明中杨树原料与水的重量比可以为1∶(1-5)；然后将杨树-水混合液加热至90℃以上后进行压榨而得到一次杨树液和一次压榨渣，再将一次压榨渣与水混合后加热至90℃以上再进行压榨而得到二次杨树液和二次压榨渣，一次压榨渣与水的重量比为1∶3，本发明中一次压榨渣与水的重量比可以为1∶(1-5)，最后将二次压榨渣与水混合后加热至90℃以上进行压榨而得到三次杨树液和三次压榨渣，二次压榨渣与水的重量比为1∶3，本发明中二次压榨渣与水的重量比可以为1∶(1-5)；然后将一次杨树液、二次杨树液和三次杨树液混合并进行熬制除去水分而得到粗杨树树胶。

接下来将1000g粗杨树树胶在0-5℃下进行粗粉碎后浸泡到体积浓度为95％的食用乙醇中制得杨树乙醇液，食用乙醇与粗杨树树胶的重量比为4∶1，并对杨树乙醇液搅拌60h，本发明中对杨树乙醇液进行搅拌的时间可以为48-72h。经过搅拌后的杨树乙醇液采用三足式离心机离心过滤而制得杨树滤液，所用的滤器为帆布袋，滤器的目数为900目，本发明中滤器的目数可以在800-1000目，所用的三足式离心机为现有技术。

然后将杨树滤液在-35℃下放置48小时，本发明中可以将杨树滤液置于-30--40℃下48小时，再将杨树滤液用硅藻土过滤机进行过滤，使用0.45微米的滤膜来过滤杨树滤液，硅藻土过滤机中的硅藻土与杨树滤液的重量比为1∶100，杨树滤液经过硅藻土过滤机的过滤而制得精制杨树树胶液。然后将精制杨树树胶液置于80-95℃的水浴中进行真空度为-0.096MPa以下的真空干燥，当精制杨树树胶液的温度不大于60℃以及冷凝器中冷凝而成的乙醇小于1滴/分钟时出料而制得精制杨树树胶。

取精制杨树树胶400g置于15℃以下进行粗粉碎而制得碎精制杨树树胶，本发明中所用的粗粉碎为现有技术，将碎精制杨树树胶与400g赋形剂混合10min而制得杨树树胶混合物，本实施例中采用麦芽糊精(DE＝9-12)做为赋形剂，本发明中也可以采用麦芽糊精和/或倍他环状糊精和/或无定形二氧化硅和/或角豆粉和/或轻质碳酸钙和/或硅酸铝和/或预胶化淀粉和/或硬脂酸镁做为赋形剂。然后将杨树树胶混合物在锤式粉碎机中进行细粉碎而制得碎杨树树胶混合物，本发明中采用锤式粉碎机进行细粉碎为现有技术，将碎杨树树胶混合物过80目筛而得到树胶筛上物和树胶一次筛下物，再将树胶筛上物进行细粉碎后过80目筛而得到树胶二次筛下物，最后将树胶一次筛下物和树胶二次筛下物置于混合锅中搅拌混合2.5小时而制得杨树树胶实物标样，本发明中树胶一次筛下物和树胶二次筛下物可以置于混合锅中搅拌混合2-3小时。

通过随机抽取10份杨树树胶实物标样的样品进行检测，按GB/T 24283-2009检测总黄酮，计算精密度符合GB/T 15000.3-2008标准样品工作导则、标准样品定值的一般原则和统计方法对于均匀性的要求后，采用铝箔袋内衬塑料袋进行包装，每个包装袋中装有杨树树胶实物标样约0.5g-1g，其中含60mg-120mg的有效物质。然后按GB/T 15000.3-2008对包装好的产品进行稳定性试验，确认其有效期限为二年。杨树树胶实物标样按公开号为CN1719247的中国专利进行实施检测，取得杨树树胶的HPLC特征指纹图谱，按GB/T24283-2009测定蜂胶实物标样含量的方法测定杨树树胶含量和总黄酮含量，作为杨树树胶实物标样的质量指标。

制备而成的杨树树胶实物标样通过公开日为2006年01月11日，公开号为CN1719247，专利名称为一种利用液相指纹图谱鉴别蜂胶真假的方法的中国专利来得到HPLC指纹图谱，如图5是杨树树胶实物标样的HPLC指纹图谱，然后将需要鉴别的蜂胶的HPLC指纹图谱与杨树树胶实物标样的HPLC指纹图谱进行比较，从而给判定蜂胶真伪提供科学的依据。

需要说明的是，本发明中所说的公开日为2006年01月11日，公开号为CN1719247，专利名称为一种利用液相指纹图谱鉴别蜂胶真假的方法的中国专利为现有技术，故此处不再对该专利中所涉及到的方法进行详述；同时，本发明中所用的各组分可以根据重量比进行放大或者缩小，且各组分的用量允许存在一定的偏差，这对本领域技术人员来说为公知常识。

虽然本发明已以实施例公开如上，但其并非用以限定本发明的保护范围，任何熟悉该项技术的技术人员，在不脱离本发明的构思和范围内所作的更动与润饰，均应属于本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法，其特征在于：包括蜂胶实物标样制备工序和杨树树胶实物标样制备工序，所述蜂胶实物标样制备工序中，先取1000g蜂胶做为原料蜂胶，该原料蜂胶是由蜜蜂采自植物芽孢的树脂而成的，将原料蜂胶置于15℃以下进行粉碎制得碎蜂胶，再将碎蜂胶浸泡到体积浓度为95％的食用乙醇中制得蜂胶乙醇液，食用乙醇与碎蜂胶的重量比为4∶1，并对蜂胶乙醇液搅拌48-72h；经过搅拌后的蜂胶乙醇液先进行离心，然后采用目数为800-1000目的滤器进行过滤而制得蜂胶滤液，再将蜂胶滤液置于-30--40℃下48小时，最后采用0.45微米的滤膜对蜂胶滤液进行过滤而制得精制蜂胶液；将精制蜂胶液置于80-95℃的水浴中进行真空度为-0.096MPa以下的真空干燥，当精制蜂胶液的温度不大于60℃以及冷凝器中冷凝而成的乙醇小于1滴/分钟时出料而制得精制蜂胶；然后取精制蜂胶400g置于15℃以下进行粗粉碎而制得碎精制蜂胶，将碎精制蜂胶与400g赋形剂混合10min而制得蜂胶混合物，再对蜂胶混合物进行细粉碎而制得碎蜂胶混合物，然后将碎蜂胶混合物过80目筛而得到蜂胶筛上物和蜂胶一次筛下物，再将蜂胶筛上物进行细粉碎后过80目筛而得到蜂胶二次筛下物，最后将蜂胶一次筛下物和蜂胶二次筛下物置于混合锅中搅拌混合2-3小时而制得蜂胶实物标样；

所述杨树树胶实物标样制备工序中，先取杨树芽孢和/或杨树叶和/或杨树皮2000g做为杨树原料，将杨树原料压碎后与水混合而得到杨树-水混合液，杨树原料与水的重量比为1∶(1-5)；先将杨树-水混合液加热至90℃以上后进行压榨而得到一次杨树液和一次压榨渣，然后将一次压榨渣与水混合后加热至90℃以上再进行压榨而得到二次杨树液和二次压榨渣，一次压榨渣与水的重量比为1∶(1-5)，再将二次压榨渣与水混合后加热至90℃以上进行压榨而得到三次杨树液和三次压榨渣，二次压榨渣与水的重量比为1∶(1-5)，最后将一次杨树液、二次杨树液和三次杨树液混合并进行熬制除去水分而得到粗杨树树胶；将1000g粗杨树树胶在0-5℃下进行粗粉碎后浸泡到体积浓度为95％的食用乙醇中制得杨树乙醇液，食用乙醇与粗杨树树胶的重量比为4∶1，并对杨树乙醇液搅拌48-72h；经过搅拌后的杨树乙醇液先进行离心，然后采用目数为800-1000目的滤器进行过滤而制得杨树滤液，再将杨树滤液置于-30--40℃下48小时，最后采用0.45微米的滤膜对杨树滤液进行过滤而制得精制杨树树胶液；将精制杨树树胶液置于80-95℃的水浴中进行真空度为-0.096MPa以下的真空干燥，当精制杨树树胶液的温度不大于60℃以及冷凝器中冷凝而成的乙醇小于1滴/分钟时出料而制得精制杨树树胶；然后取精制杨树树胶400g置于15℃以下进行粗粉碎而制得碎精制杨树树胶，将碎精制杨树树胶与400g赋形剂混合10min而制得杨树树胶混合物，再对杨树树胶混合物进行细粉碎而制得碎杨树树胶混合物，然后将碎杨树树胶混合物过80目筛而得到树胶筛上物和树胶一次筛下物，再将树胶筛上物进行细粉碎后过80目筛而得到树胶二次筛下物，最后将树胶一次筛下物和树胶二次筛下物置于混合锅中搅拌混合2-3小时而制得杨树树胶实物标样。

2.根据权利要求1所述的用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法，其特征在于：所述蜂胶实物标样制备工序中，所述蜂胶滤液采用硅藻土过滤机进行过滤，硅藻土与蜂胶滤液的重量比为1∶100，蜂胶滤液经过硅藻土过滤机的过滤而制得精制蜂胶液。

3.根据权利要求1所述的用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法，其特征在于：所述杨树树胶实物标样制备工序中，所述杨树滤液采用硅藻土过滤机进行过滤，硅藻土与杨树滤液的重量比为1∶100，杨树滤液经过硅藻土过滤机的过滤而制得精制杨树树胶液。

4.根据权利要求1或2或3所述的用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法，其特征在于：所述蜂胶实物标样制备工序中，所述赋形剂为麦芽糊精和/或倍他环状糊精和/或无定形二氧化硅和/或角豆粉和/或轻质碳酸钙和/或硅酸铝和/或预胶化淀粉和/或硬脂酸镁。

5.根据权利要求1或2或3所述的用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法，其特征在于：所述杨树树胶实物标样制备工序中，所述赋形剂为麦芽糊精和/或倍他环状糊精和/或无定形二氧化硅和/或角豆粉和/或轻质碳酸钙和/或硅酸铝和/或预胶化淀粉和/或硬脂酸镁。

6.根据权利要求1或2或3所述的用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法，其特征在于：所述蜂胶实物标样制备工序中，所述经过搅拌后的蜂胶乙醇液采用三足式离心机进行离心过滤，所述滤器为帆布袋。

7.根据权利要求1或2或3所述的用于蜂胶液相指纹图谱真伪鉴别的实物标样的制备方法，其特征在于：所述杨树树胶实物标样制备工序中，所述经过搅拌后的杨树乙醇液采用三足式离心机进行离心过滤，所述滤器为帆布袋。

Images