CN111077253A - 一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法 - Google Patents

一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：准备实验仪器；步骤二：准备待试材料；步骤三：选择色谱条件；步骤四：制备所需溶液。本发明提供的一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法可精确测量蜂胶提取物中总黄酮含量，同时采取多种方式进行误差检测，最大程度上提高试验严谨性，使得出的数据更加具有说服力。

Description

一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法
技术领域
本发明涉及蜂胶提取物中总黄酮含量领域，具体来说，涉及一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法。
背景技术
蜂胶是蜜蜂从植物的树芽、树皮等部位采集的树脂，再混以蜜蜂的舌腺、蜡腺等腺体分泌物，经蜜蜂加工转化而成的一种胶状物质，在国外，蜂胶被誉为“紫色黄金”。经科学研究证明，蜂胶所含有的丰富而独特的生物活性物质，使其具有抗菌、消炎、止痒、抗氧化、增强免疫、等多种功能，现已成为各国科学研究的热点，并成为被应用到各种化妆品中，倍受推崇。
将蜂胶提取液直接使用或加入化妆品中，可营养滋润皮肤，并有很强的杀菌、消炎止痒、防冻防裂、抗感染等功能，外用的效果非常明显，其中蜂胶提取物中总黄酮的含量直接影响化妆品的品质，但现有技术无法对蜂胶提取物中总黄酮含量进行精准测量。
针对相关技术中的问题，目前尚未提出有效的解决方案。
发明内容
本发明的目的在于提供一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：准备实验仪器；
步骤二：准备待试材料；
步骤三：选择色谱条件；
步骤四：制备所需溶液。
进一步的，所述步骤一中需准备以下仪器：高效液相色谱仪、精密天平、 50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL容量瓶、注射器、洗瓶。
进一步的，所述步骤二中需准备蜂胶提取物。
进一步的，所述步骤三中需将仪器调整至适合条件方可进行实验，具体条件如下：
色谱柱：C18柱(250×4.6mm,5μm)；
流动相：水：甲醇(25：75)；
流速：1mL/min；
检测波长：276nm；
柱温：30℃；
进样量：15μL。
进一步的，所述步骤四中制备所需溶液还包括以下步骤：
a：制备对照品溶液；
b：制备供试品溶液；
c：制备阴性样品溶液；
d：专属性试验；
e：线性关系考察；
f：精密量试验；
g：稳定性试验；
h：重复性试验；
i：耐用性试验；
j：加样回收率试验；
k：样品含量测定。
进一步的，所述制备对照品溶液具体包括：精密称取蜂胶提取物中总黄酮对照品50mg置于50ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并定容，摇匀，即得1mg/ml 的对照品储备液。精密量取该对照品储备液2.5ml，置于25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
所述制备供试品溶液具体包括：精密称取蜂胶提取物中总黄酮对照品1mg 置于50ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并定容，摇匀，即得1mg/ml的供试品储备液。精密量取该对照品储备液1ml，按供试品溶液制备方法制备，即得；
所述制备阴性样品溶液具体包括：制备不含总黄酮的蜂胶提取物的阴性样品溶液，精密量取该溶液1ml，按供试品溶液制备方法制备，即得；
所述专属性试验具体包括：取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按照上述色谱条件进样，记录色谱图，观察色谱图记录总黄酮锋于那个时间点左右出锋，且锋形较好，且辅料无干扰；
所述线性关系考察具体包括：精密量取对照品储备液3、4、5、6、7、8ml 置于50ml量瓶中，加流动相并稀释至刻度，摇匀，作为供试液。按上述色谱条件精密量取上述供试液10μl进样，记录色谱图，以锋面积(Y)对浓度(X，μg/ml)做线性回归，得出相应的回归方程，并通过观察色谱图找出总黄酮在什么范围内与其锋面积呈良好的线性关系；
所述精密度试验具体包括：精密量取对照品溶液适量，按上述色谱条件重复进样6次，记录锋面积并计算RSD，当RSD数值小于2％时，表示仪器精密度良好；
所述稳定性试验具体包括：精密量取供试品溶液适量，分别于制备后 0,2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24h进样测定，如若蜂胶提取物中总黄酮锋面积在24h内基本不变，且RSD数值小于2％时，表明仪器的稳定性良好；
所述重复性试验具体包括：精密量取蜂胶提取物溶液适量，按上述b步骤中的方法平行制备6份供试品溶液，进样测定，计算得出蜂胶提取物中总黄酮含量与RSD数值，当RSD数值小于2％时表明方法重复性较好；
所述耐用性试验具体包括：为考察测定条件变化对测定结果的影响，拟定在下列色谱条件微调下进行试验：
(1)改变流速±0.2ml/min：0.8,1.0,1.2ml/min；
(2)改变流动相对比±5％：甲醇：水＝77:23；甲醇：水＝75:25；甲醇：水＝73:27；
(3)改变色谱柱：EclipseXDB-C18；ZORBAXSB-C18；Eclipse Plus-C18；
各条件下取上述供试液10μl注入色谱仪，记录色谱图，计算含量RSD 数值，如若所有的RSD数值均小于2％，则表示次方法耐用性良好；
所述加样回收率试样具体包括：精密量取蜂胶提取物溶液0.5ml共6份，分别精密加入对照品约120mg，按上述b步骤方法制备供试品溶液；按权要4 中的色谱条件进样分析，计算回收率与RSD数值，如若RSD数值小于2％时，表明本方法精准度良好；
所述样品含量测定具体包括：取3批样品，按b步骤下的方法配制供试品溶液，按权要4中的色谱条件，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以锋面积计算含量。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明提供的一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法可精确测量蜂胶提取物中总黄酮含量，同时采取多种方式进行误差检测，最大程度上提高试验严谨性，使得出的数据更加具有说服力。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明实施例的一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：准备实验仪器；步骤二：准备待试材料；步骤三：选择色谱条件；步骤四：制备所需溶液。
通过本发明的上述方案，所述步骤一中需准备以下仪器：高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL容量瓶、注射器、洗瓶。
通过本发明的上述方案，所述步骤二中需准备蜂胶提取物。
通过本发明的上述方案，所述步骤三中需将仪器调整至适合条件方可进行实验，具体条件如下：
色谱柱：C18柱(250×4.6mm,5μm)；
流动相：水：甲醇(25：75)；
流速：1mL/min；
检测波长：276nm；
柱温：30℃；
进样量：15μL。
通过本发明的上述方案，所述步骤四中制备所需溶液还包括以下步骤：
a：制备对照品溶液；
b：制备供试品溶液；
c：制备阴性样品溶液；
d：专属性试验；
e：线性关系考察；
f：精密量试验；
g：稳定性试验；
h：重复性试验；
i：耐用性试验；
j：加样回收率试验；
k：样品含量测定。
通过本发明的上述方案，所述制备对照品溶液具体包括：精密称取蜂胶提取物中总黄酮对照品50mg置于50ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并定容，摇匀，即得1mg/ml的对照品储备液。精密量取该对照品储备液2.5ml，置于25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
所述制备供试品溶液具体包括：精密称取蜂胶提取物中总黄酮对照品1mg 置于50ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并定容，摇匀，即得1mg/ml的供试品储备液。精密量取该对照品储备液1ml，按供试品溶液制备方法制备，即得；
所述制备阴性样品溶液具体包括：制备不含总黄酮的蜂胶提取物的阴性样品溶液，精密量取该溶液1ml，按供试品溶液制备方法制备，即得；
所述专属性试验具体包括：取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按照上述色谱条件进样，记录色谱图，观察色谱图记录总黄酮锋于那个时间点左右出锋，且锋形较好，且辅料无干扰；
所述线性关系考察具体包括：精密量取对照品储备液3、4、5、6、7、8ml 置于50ml量瓶中，加流动相并稀释至刻度，摇匀，作为供试液。按上述色谱条件精密量取上述供试液10μl进样，记录色谱图，以锋面积(Y)对浓度(X，μg/ml)做线性回归，得出相应的回归方程，并通过观察色谱图找出总黄酮在什么范围内与其锋面积呈良好的线性关系；
所述精密度试验具体包括：精密量取对照品溶液适量，按上述色谱条件重复进样6次，记录锋面积并计算RSD，当RSD数值小于2％时，表示仪器精密度良好；
所述稳定性试验具体包括：精密量取供试品溶液适量，分别于制备后0,2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24h进样测定，如若蜂胶提取物中总黄酮锋面积在24h内基本不变，且RSD数值小于2％时，表明仪器的稳定性良好；
所述重复性试验具体包括：精密量取蜂胶提取物溶液适量，按上述b步骤中的方法平行制备6份供试品溶液，进样测定，计算得出蜂胶提取物中总黄酮含量与RSD数值，当RSD数值小于2％时表明方法重复性较好；
所述耐用性试验具体包括：为考察测定条件变化对测定结果的影响，拟定在下列色谱条件微调下进行试验：
(1)改变流速±0.2ml/min：0.8,1.0,1.2ml/min；
(2)改变流动相对比±5％：甲醇：水＝77:23；甲醇：水＝75:25；甲醇：水＝73:27；
(3)改变色谱柱：EclipseXDB-C18；ZORBAXSB-C18；Eclipse Plus-C18；
各条件下取上述供试液10μl注入色谱仪，记录色谱图，计算含量RSD 数值，如若所有的RSD数值均小于2％，则表示次方法耐用性良好；
所述加样回收率试样具体包括：精密量取蜂胶提取物溶液0.5ml共6份，分别精密加入对照品约120mg，按上述b步骤方法制备供试品溶液；按权要4 中的色谱条件进样分析，计算回收率与RSD数值，如若RSD数值小于2％时，表明本方法精准度良好；
所述样品含量测定具体包括：取3批样品，按b步骤下的方法配制供试品溶液，按权要4中的色谱条件，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以锋面积计算含量。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限定本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：准备实验仪器；
步骤二：准备待试材料；
步骤三：选择色谱条件；
步骤四：制备所需溶液。
2.根据权利要求1所述的一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，其特征在于，所述步骤一中需准备以下仪器：高效液相色谱仪、精密天平、50mL烧杯、玻璃棒、称量纸、10mL容量瓶、50mL容量瓶、注射器、洗瓶。
3.根据权利要求1所述的一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，其特征在于，所述步骤二中需准备蜂胶提取物。
4.根据权利要求1所述的一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，其特征在于，所述步骤三中需将仪器调整至适合条件方可进行实验，具体条件如下：
色谱柱：C18柱(250×4.6mm,5μm)；
流动相：水：甲醇(25：75)；
流速：1mL/min；
检测波长：276nm；
柱温：30℃；
进样量：15μL。
5.根据权利要求1所述的一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，其特征在于，所述步骤四中制备所需溶液还包括以下步骤：
a：制备对照品溶液；
b：制备供试品溶液；
c：制备阴性样品溶液；
d：专属性试验；
e：线性关系考察；
f：精密量试验；
g：稳定性试验；
h：重复性试验；
i：耐用性试验；
j：加样回收率试验；
k：样品含量测定。
6.根据权利要求5所述的一种蜂胶提取物中总黄酮含量的测定方法，其特征在于，所述制备对照品溶液具体包括：精密称取蜂胶提取物中总黄酮对照品50mg置于50ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并定容，摇匀，即得1mg/ml的对照品储备液。精密量取该对照品储备液2.5ml，置于25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；
所述制备供试品溶液具体包括：精密称取蜂胶提取物中总黄酮对照品1mg置于50ml量瓶中，用甲醇溶液溶解并定容，摇匀，即得1mg/ml的供试品储备液。精密量取该对照品储备液1ml，按供试品溶液制备方法制备，即得；
所述制备阴性样品溶液具体包括：制备不含总黄酮的蜂胶提取物的阴性样品溶液，精密量取该溶液1ml，按供试品溶液制备方法制备，即得；
所述专属性试验具体包括：取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，按照上述色谱条件进样，记录色谱图，观察色谱图记录总黄酮锋于那个时间点左右出锋，且锋形较好，且辅料无干扰；
所述线性关系考察具体包括：精密量取对照品储备液3、4、5、6、7、8ml置于50ml量瓶中，加流动相并稀释至刻度，摇匀，作为供试液。按上述色谱条件精密量取上述供试液10μl进样，记录色谱图，以锋面积(Y)对浓度(X，μg/ml)做线性回归，得出相应的回归方程，并通过观察色谱图找出总黄酮在什么范围内与其锋面积呈良好的线性关系；
所述精密度试验具体包括：精密量取对照品溶液适量，按上述色谱条件重复进样6次，记录锋面积并计算RSD，当RSD数值小于2％时，表示仪器精密度良好；
所述稳定性试验具体包括：精密量取供试品溶液适量，分别于制备后0,2,4,6,8,10,12,14,16,18,20,22,24h进样测定，如若蜂胶提取物中总黄酮锋面积在24h内基本不变，且RSD数值小于2％时，表明仪器的稳定性良好；
所述重复性试验具体包括：精密量取蜂胶提取物溶液适量，按上述b步骤中的方法平行制备6份供试品溶液，进样测定，计算得出蜂胶提取物中总黄酮含量与RSD数值，当RSD数值小于2％时表明方法重复性较好；
所述耐用性试验具体包括：为考察测定条件变化对测定结果的影响，拟定在下列色谱条件微调下进行试验：
(1)改变流速±0.2ml/min：0.8,1.0,1.2ml/min；
(2)改变流动相对比±5％：甲醇：水＝77:23；甲醇：水＝75:25；甲醇：水＝73:27；
(3)改变色谱柱：EclipseXDB-C18；ZORBAXSB-C18；Eclipse Plus-C18；
各条件下取上述供试液10μl注入色谱仪，记录色谱图，计算含量RSD数值，如若所有的RSD数值均小于2％，则表示次方法耐用性良好；
所述加样回收率试样具体包括：精密量取蜂胶提取物溶液0.5ml共6份，分别精密加入对照品约120mg，按上述b步骤方法制备供试品溶液；按权要4中的色谱条件进样分析，计算回收率与RSD数值，如若RSD数值小于2％时，表明本方法精准度良好；
所述样品含量测定具体包括：取3批样品，按b步骤下的方法配制供试品溶液，按权要4中的色谱条件，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以锋面积计算含量。
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