CN114384184B - 一种一测多评测定川芎中有效成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种一测多评测定川芎中洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的方法，以洋川芎内酯I为内标，包括色谱条件与系统适应性实验、对照品溶液制备、供试品溶液制备、相对校正因子的确定和供试品中成分的测定的步骤。本发明一测多评法克同时测定川芎中洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯5种有效成分的含量，便于对川芎进行质量控制和评价，经济、高效、简单，具有推广应用价值。
Description
技术领域
本发明属于中药质量检测领域，具体涉及一种一测多评测定川芎中有效成分的方法。
背景技术
中药中有药理活性的化学成分众多，因而中药具有多成分共同作用的特点，这就使得仅仅通过测定其中单一有效成分的含量，难以全面反映中药产品的质量。因此，中药的多指标含量测定进行中药质量检测控制，已成为众多专家学者的共识。
传统的多指标同步质量控制需要多种中药对照品，分离难度大，货源紧缺、价格高昂。王智民等人于2006年率先提出了一种新的多成分定量方法——“一测多评”法(quantitative analysis of multi-components by single-marker，QAMS)，利用中药各成分间对应的函数关系，通过建立内参与对应的待测成分含量的关系，可最终实现仅使用内参这一种标准品，测得多种待测成分含量的效果。
川芎Ligusticum chuanxiong Hort.为伞形科Umbelliferae藁本属LigusticumL.植物，以根茎入药，其种植和使用历史悠久，是著名的川产道地药材。川芎始载于《神农本草经》，具有活血行气，祛风止痛的功效，常用于血瘀气滞所致的胸痹心痛，胸胁刺痛，跌扑肿痛，月经不调，经闭痛经，癥瘕腹痛，头痛，风湿痹痛等。研究发现，川芎化学成分复杂，主要含有内酯类、生物碱类、酚酸类等成分。研究发现，洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯对川芎的活血、镇痛作用起关键贡献的有效成分，因此通过测定该5个有效成分的含量对川芎的品质评控有重要意义。
目前，以一测多评法对川芎中的有效成分含量进行测定的方法有诸多报道，例如，专利CN105004815B公开了一种以一种川芎中不存在的物质：补骨脂素作为内标，通过校正因子计算川芎中藁本内酯含量的方法，但仅涉及一种有效成分含量的确定；胡杨等人公开了以阿魏酸为内标，一测多评测定川芎中阿魏酸松柏酯、洋川芎内酯A、洋川芎内酯I和藁本内酯含量方法([1]胡杨,丁晓倩,严辉,吴垠志,彭国平,黄胜良.川芎质量标准的研究[J].中成药,2021,43(03):692-699.)，但并未涉及洋川芎内酯H的含量测定。
对于一测多评法而言，其测定的准确性、重复性会受到内参选择、对照品纯度、不同色谱柱、不同柱温、检测波长、色谱峰定位等多种因素的影响，因此对于不同有效成分的测定而言，测定方法会存在诸多不同。目前，通过一测多评法对川芎中洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的含量同时进行检测的方法还未见报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种一测多评法测定川芎中有效成分的方法。
本发明提供了一种测定川芎中有效成分的方法，所述有效成分为：洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯；
以洋川芎内酯I为内参，分别计算各有效成分的相对校正因子，采用液相色谱进行测定，根据液相色谱测试结果和相对校正因子计算各有效成分含量；具体步骤如下：
(1)色谱条件与系统适应性试验：
色谱柱：C18色谱柱；
流动相A：水；流动相B：甲醇；
洗脱梯度如下：
0～10min：42～55％流动相B；
10～30min：55～70％流动相B；
30～40min：70～80％流动相B；
40～45min：80％流动相B；
(2)对照品溶液的制备：
分别精密称定各有效成分的对照品，加甲醇制成对照品溶液；
(3)供试品溶液的制备：
精密称取川芎样品粉末，加甲醇溶解制得供试品溶液；
(4)相对校正因子的确定：
将步骤(2)制备的对照品溶液注入高相液相色谱仪，记录得到的各有效成分色谱峰面积，按照如下公式计算相对校正因子fs/i：
fs/i＝(As/Cs)/(Ai/Ci)
其中，Ai为非内参有效成分的峰面积，Ci为对照品溶液中非内参有效成分的浓度或重量；As为内参的峰面积，Cs为对照品溶液中内参的浓度或重量；
(5)供试品中成分的测定：
将步骤(3)制备的供试品溶液注入高相液相色谱仪，记录得到的各有效成分色谱峰面积，按照如下公式计算供试品溶液中各有效成分的浓度：
C内参＝A内参Cs/As；
C＝fs/i·A·C内参/A内参；
其中，A内参是供试品溶液测得的内参的峰面积，C内参是供试品溶液中内参的浓度或重量，Ai为步骤(4)对照品溶液测得的内参的峰面积，Ci为步骤(4)对照品溶液中内参的浓度或重量；A为供试品溶液测得的非内参有效成分的峰面积，C为供试品溶液中非内参有效成分的浓度或重量。
进一步地，步骤(1)所述色谱柱为C18色谱柱，柱温25～35℃，检测波长为270～290nm，流速为0.8～1.2mL/min。
进一步地，步骤(2)所述对照品溶液中，每毫升对照品溶液含洋川芎内酯I 0.0200～0.0300mg、洋川芎内酯H 0.0600～0.0700mg、洋川芎内酯A 0.3000～0.4000mg、阿魏酸松柏酯0.0500～0.1500mg、藁本内酯0.5000～0.6000mg。
更进一步地，步骤(2)所述对照品溶液中，每毫升对照品溶液含洋川芎内酯I0.0270mg、洋川芎内酯H 0.0670mg、洋川芎内酯A 0.3930mg、阿魏酸松柏酯0.1000mg、藁本内酯0.5140mg。
进一步地，步骤(3)所述加甲醇溶解的方法为：川芎样品粉末加甲醇，超声处理20～40min后，再加甲醇补足超声处理过程中损失的重量，过滤。
更进一步地，所述过滤为先用滤纸过滤，滤液经0.22μm微孔滤膜过滤。
进一步地，步骤(4)所述对照品溶液注入高效液相色谱仪的进样量为1～20μL，优选为10μL。
进一步地，步骤(5)所述供试品溶液注入高效液相色谱仪的进样量为10μL，优选为10μL。
更进一步地，步骤(4)计算得到的相对校正因子如下：
洋川芎内酯H的相对校正因子f洋川芎内酯I/洋川芎内酯H为3.506～3.722；
洋川芎内酯A的相对校正因子f洋川芎内酯I/洋川芎内酯A为16.489～16.621；
阿魏酸松柏酯的相对校正因子f洋川芎内酯I/阿魏酸松柏酯为7.189～7.714；
藁本内酯的相对校正因子f洋川芎内酯I/藁本内酯为6.364～6.523。。
本发明方法选择恰当的洋川芎内酯I为内标，明确了在本发明特定的色谱条件下，洋川芎内酯I与洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯对应的线性关系，确定了相对校正因子，实现了对川芎中洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯5种有效成分的含量测定，便于对川芎进行质量控制和评价，经济、高效、简单，具有推广应用价值。
本发明所述“非内参有效成分”指：洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯或藁本内酯。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为洋川芎内酯I的标准曲线。
图2为养川芎内酯H的标准曲线。
图3为养川芎内酯A的标准曲线。
图4为阿魏酸松柏酯的标准曲线。
图5为藁本内酯的标准曲线。
具体实施方式
除另有说明外，本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
Thermo Ulitimate 3000高效液相色谱仪(美国)，BT125D十万分之一分析天平(德国赛多利斯科学仪器有限公司)，SQP万分之一分析天平(德国赛多利斯科学仪器有限公司)，KQ-300超声波清洗机(昆山市超声设备有限公司)，WondaSil C18-WR(250×4.6mm，5μm)色谱柱(岛津技迩商贸有限公司)，Hypersil GOLD(250×4.6mm，5μm)色谱柱(赛默飞世尔科技(中国)有限公司)，Agilengt TC-C18(150×4.6mm，5μm)色谱柱(美国安捷伦公司)。
分析纯甲醇(成都科龙化工试剂厂)，色谱纯甲醇(美国Fisher公司)，蒸馏水。洋川芎内酯I(批号CHB180617，纯度≥98％)，洋川芎内酯H(批号CHB180616，纯度≥98％)，洋川芎内酯A(批号CHB180615，纯度≥98％)，阿魏酸松柏酯(批号CHB180207，纯度≥98％)，藁本内酯(批号CHB181130，纯度≥98％)购于成都克洛玛生物科技有限公司。
本发明对不同产地的24中川芎样品中5中有效成分的含量进行了测定，24种川芎样品的产地、海拔和经纬度信息如下：
实施例1、本发明一测多评方法
1、色谱条件
色谱柱：WondaSil C18-WR(250×4.6mm，5μm)，流动相为水(A)-甲醇(B)，洗脱梯度为0～10min：42～55％B；10～30min：55～70％B；30～40min：70～80％B；40～45min：80％B，流速为1.0mL/min，柱温30℃，检测波长为280nm，进样量为10μL，检测时间45min。高效液相色谱仪：Thermo Ulitimate 3000高效液相色谱仪(美国)。
2、对照品溶液的制备
分别取洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升各含洋川芎内酯I 0.0270mg、洋川芎内酯H0.0670mg、洋川芎内酯A 0.3930mg、阿魏酸松柏酯0.1000mg、藁本内酯0.5140mg的混合对照品溶液，即得。
3、供试品溶液的制备
取不同产地川芎样品粉末(过四号筛)约1g，精密称定，置于50mL锥形瓶，精密加入50mL甲醇，称重，置超声波清洗机中300W，40kHz超声处理30min，取出放冷，再次称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，用0.22μm微孔滤膜滤过即可。
4、相对校正因子测定
分别精密吸取步骤2的对照品溶液10μL进样分析，测定各成分的峰面积。以洋川芎内酯I为内参物，按公式fs/i＝fs/fi＝(As/Cs)/(Ai/Ci),分别计算洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的相对校正因子，Ai为非内参有效成分(洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯或藁本内酯)的峰面积，Ci为对照品溶液中非内参有效成分的浓度或重量；As为内参(洋川芎内酯I)的峰面积，Cs为对照品溶液中内参的浓度或重量。
5、以外标一点法计算洋川芎内酯I的含量，按一测多评法计算各样品中洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的含量；
计算公式如下：C内参＝A内参Cs/As；
C＝fs/i·A·C内参/A内参；
其中，A内参是供试品溶液测得的内参的峰面积，C内参是供试品溶液中内参的浓度或重量，Ai为步骤(4)对照品溶液测得的内参的峰面积，Ci为步骤(4)对照品溶液中内参的浓度或重量；A为供试品溶液测得的非内参有效成分的峰面积，C为供试品溶液中非内参有效成分的浓度或重量。各有效成分与与供试品川芎粉末的重量的百分比值，即为川芎中该有效成分的百分含量。
以上述方法对24种不同川芎样品的测定结果如表1.24批川芎样品中，洋川芎内酯I的含量为0.121～0.518，洋川芎内酯H的含量为0.010～0.037，洋川芎内酯A的含量为0.689～2.756，阿魏酸松柏酯的含量为0.250～0.939，藁本内酯的含量为1.238～2.503；5种成分的总含量范围为2.768～6.129，陕西省样品含量最低。
表1、不同产地川芎活性成分含量测定结果(n＝2)
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1、方法学验证
1、线性范围的考察
精密吸取实施例步骤(2)制备的对照品溶液各1、5、10、15、20μL，注入高效液相色谱仪，按照实施例步骤(1)的色谱条件进行测定并记录各色谱峰峰面积。设置对照品质量浓度为为横坐标(X)，色谱峰峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程和线性范围，结果见表2，图1～5。结果表明洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯分别在27.0～540.0ng，67.0～1340.0ng，393.0～7860.0ng，100.0～2000.0ng，514.0～10280.0ng内线性关系良好。
表2、5种活性成分的线性关系和范围
2、精密度试验
精密吸取实施例步骤(2)制备的对照品溶液10μL，按照实施例步骤(1)的方法进样，连续进样6次，记录45min洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的峰面积，计算RSD，结果见表3。由表可知，5种化合物的RSD值分别为0.13％、0.15％、0.17％、0.10％和0.06％，表明仪器和方法的精密度良好。
表3、精密度试验结果
3、稳定性试验
取同一川芎样品溶液，吸取10μL分别于0、2、4、6、8、12、16、24h进样分析，记录45min色谱图中洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的峰面积，计算RSD，结果见表4，5种化合物的RSD值分别为0.56％、1.64％、0.36％、2.74％和0.25％，表明供试品溶液在24h内稳定。
表4、稳定性试验结果
4、重复性试验
取同一川芎样品6份，精密称定，按照实施例步骤(2)供试品溶液制备方法制样，精密吸取10μL进样分析，记录45min色谱图洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的峰面积，计算其RSD结果见表5。由表可知，5种化合物的RSD值结果分别为0.37％、0.61％、0.09％、2.36％和0.12％，表明该方法重复性良好。
表5、重复性试验结果
5、加样回收试验
取同一川芎样品1.0g，平行6份，精密称定，分别加入一定量的混合对照品溶液，按实施例步骤(2)制备供试品溶液，即得加样回收试验溶液，过0.22μm微孔滤膜，按实施例步骤(1)的色谱条件进样分析，计算回收率，结果见表6。结果表明，洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的平均加样回收率分别为100.4％、99.48％、101.7％、101.2％、和100.3％，表明该方法的加样回收率良好。
表6、5种成分回收试验结果(n＝6)
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实验例2、相对校正因子及耐用性考察
1、相对校正因子测定
分别精密吸取实施例步骤(2)对照品溶液1、5、10、15、20μL进样分析，其余测试条件同实施例1，测定各成分的峰面积。以洋川芎内酯I为内参物，按公式fs/i＝fs/fi＝(As/Cs)/(Ai/Ci),分别计算洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的相对校正因子，见表7。不同的进样体积对相对校正因子的测试计算结果有一定程度的影响，但进样量在5～20μL范围内，得到的相对校正因子的误差较小。
表7、相对校正因子测定结果
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2、不同仪器、柱型对相对校正因子的影响
为考察不同仪器和柱型对相对校正因子的影响，对WondaSil C18-WR(250×4.6mm，5μm)，Agilent TC-C18(150×4.6mm，5μm)，Hypersil GOLD(250×4.6mm，5μm)3种不同型号的色谱柱及对相对校正因子的影响进行了考察，其余测试条件同实施例1，结果见表8。不同仪器和柱型对5种成分的相对校正因子RSD值分别为0.92％、0.28％、1.35％和0.36％，表明试验选择的3种仪器和3种色谱柱对5种成分的相对校正因子无明显影响。
表8、不同型号色谱柱和仪器的相对校正因子
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*表8中以赛默飞仪器，WondaSil C18-WR色谱柱测试的结果与表7中的10μL进样量测试数据略有差异，是由于进行不同条件测试的时间存在间隔，所以结果存在合理范围的误差差异。
3、不同柱温、流速、波长对相对校正因子的影响
为探讨不同柱温、不同流速、不同进样量以及不同波长对相对校正因子的影响，在相同的色谱条件下，对不同柱温25、30、35℃，不同波长270、280、290nm和不同流速0.8、1.0、1.2mL/min进行了考察，结果见表9。结果表明，不同影响因素对相对校正因子的RSD值分别为0.59％、0.30％、1.12％和0.63％，表明检测波长、流速、柱温的微调对5种成分的相对校正因子无明显影响。
表9、不同柱温、检测波长和流速对相对校正因子的影响
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*表9中对温度30℃，波长280nm的测试是同次完成，因此结果一致。流速的测定与前两个指标的筛选测定间隔了一段时间，因此结果存在合理范围的误差差异。
4、不同因素对相对校正因子的综合影响
结合以上，各因素对洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯的相对校正因子RSD值分别为2.05％、0.28％、2.05％和0.51％，均小于5％，结果表明各因素对5种成分的相对校正因子影响较小。
5、待测成分的色谱峰定位
通过考察不同仪器和色谱柱对各成分保留时间的影响，对保留时间差值和相对保留时间进行比较，结果表明，采用各成分之间的保留时间差值对待测成分进行定位，其RSD值分别为29.88％、22.21％、17.75％和23.39％。而采用相对保留时间进行定位，RSD值分别为3.80％、3.44％、3.34％和4.52％，故选择各待测成分的相对保留时间对色谱峰进行定位。
6、不同测定方法测定结果的比较
取不同批次川芎样品适量，精密称定。按实施例步骤(3)的方法制备供试品溶液，以外标一点法计算洋川芎内酯I的含量，另分别采用(a)标准曲线法、(b)外标法和(c)本发明实施例1的一测多评法计算其他4种成分的含量，结果见表10。由表可知，三种方法测定得出的4种川芎主要成分的含量无显著性差异，其RSD分别为0.28％、0.33％、0.61％和0.36％，说明建立的一测多评方法测定结果准确，可以用于川芎多成分的分析。
表10、不同含量测定方法结果比较(n＝2)
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综上，本发明提供了一种以洋川芎内酯I为内标，一测多评同时测定川芎中洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯5种有效成分的含量的方法，便于对川芎进行质量控制和评价，经济、高效、简单，具有推广应用价值。
Claims (5)
1.一种测定川芎中有效成分的方法，其特征在于，所述有效成分为：洋川芎内酯I、洋川芎内酯H、洋川芎内酯A、阿魏酸松柏酯和藁本内酯；
以洋川芎内酯I为内参，分别计算各有效成分的相对校正因子，采用液相色谱进行测定，根据液相色谱测试结果和相对校正因子计算各有效成分含量；具体步骤如下：
(1)色谱条件与系统适应性试验：
色谱柱：C18色谱柱；柱温25～35℃，检测波长为270～290nm，流速为0.8～1.2mL/min；
流动相A：水；流动相B：甲醇；
洗脱梯度如下：
0～10min：42～55％流动相B；
10～30min：55～70％流动相B；
30～40min：70～80％流动相B；
40～45min：80％流动相B；
(2)对照品溶液的制备：
分别精密称定各有效成分的对照品，加甲醇制成对照品溶液；所述对照品溶液中，每毫升对照品溶液含洋川芎内酯I 0.0200～0.0300mg、洋川芎内酯H 0.0600～0.0700mg、洋川芎内酯A 0.3000～0.4000mg、阿魏酸松柏酯0.0500～0.1500mg、藁本内酯0.5000～0.6000mg；
(3)供试品溶液的制备：
精密称取川芎样品粉末，加甲醇溶解制得供试品溶液；所述加甲醇溶解的方法为：川芎样品粉末加甲醇，超声处理20～40min后，再加甲醇补足超声处理过程中损失的重量，过滤；所述过滤为先用滤纸过滤，滤液经0.22μm微孔滤膜过滤；
(4)相对校正因子的确定：
将步骤(2)制备的对照品溶液注入高相液相色谱仪，记录得到的各有效成分色谱峰面积，按照如下公式计算相对校正因子fs/i：
fs/i＝(As/Cs)/(Ai/Ci)
其中，Ai为非内参有效成分的峰面积，Ci为对照品溶液中非内参有效成分的浓度或重量；As为内参的峰面积，Cs为对照品溶液中内参的浓度或重量；
(5)供试品中成分的测定：
将步骤(3)制备的供试品溶液注入高相液相色谱仪，记录得到的各有效成分色谱峰面积，按照如下公式计算供试品溶液中各有效成分的浓度：
C内参＝A内参Cs/As；
C＝fs/i·A·C内参/A内参；
其中，A内参是供试品溶液测得的内参的峰面积，C内参是供试品溶液中内参的浓度或重量，As为步骤(4)对照品溶液测得的内参的峰面积，Cs为步骤(4)对照品溶液中内参的浓度或重量；A为供试品溶液测得的非内参有效成分的峰面积，C为供试品溶液中非内参有效成分的浓度或重量。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述对照品溶液中，每毫升对照品溶液含洋川芎内酯I 0.0270mg、洋川芎内酯H 0.0670mg、洋川芎内酯A 0.3930mg、阿魏酸松柏酯0.1000mg、藁本内酯0.5140mg。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述对照品溶液注入高效液相色谱仪的进样量为5～20μL。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(5)所述供试品溶液注入高效液相色谱仪的进样量为5～20μL。
5.如权利要求1～4任一项所述的方法，其特征在于，步骤(4)计算得到的相对校正因子如下：
洋川芎内酯H的相对校正因子f洋川芎内酯I/洋川芎内酯H为3.506～3.722；
洋川芎内酯A的相对校正因子f洋川芎内酯I/洋川芎内酯A为16.489～16.621；
阿魏酸松柏酯的相对校正因子f洋川芎内酯I/阿魏酸松柏酯为7.189～7.714；
藁本内酯的相对校正因子f洋川芎内酯I/藁本内酯为6.364～6.523。
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Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114469934B (zh) * | 2022-02-11 | 2023-08-25 | 津药达仁堂集团股份有限公司第六中药厂 | 一种组合物及其药物制剂 |
| CN117054535A (zh) * | 2023-06-30 | 2023-11-14 | 广东一方制药有限公司 | 川芎水提药渣的特征图谱的构建方法及检测方法 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108709788A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-10-26 | 河南科高中标检测技术有限公司 | 采用一测多评法测定姜药材提取物中姜辣素含量的方法 |
| CN109307721A (zh) * | 2018-10-26 | 2019-02-05 | 陕西步长制药有限公司 | 一种hplc-qqq/ms法测定龙生蛭胶囊中有效成分的含量检测方法 |
| CN109709244A (zh) * | 2019-02-22 | 2019-05-03 | 天津红日药业股份有限公司 | 一种血必净注射液苯酞内酯类成分含量测定方法 |
| CN110907555A (zh) * | 2019-12-10 | 2020-03-24 | 成都中医药大学 | 一种川芎乙酸乙酯部位的指纹图谱检测方法 |
| CN111505145A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-08-07 | 河南省食品药品检验所 | 采用一测多评法测定当归丸(浓缩丸)成份的方法 |
-
2022
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Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108709788A (zh) * | 2018-04-23 | 2018-10-26 | 河南科高中标检测技术有限公司 | 采用一测多评法测定姜药材提取物中姜辣素含量的方法 |
| CN109307721A (zh) * | 2018-10-26 | 2019-02-05 | 陕西步长制药有限公司 | 一种hplc-qqq/ms法测定龙生蛭胶囊中有效成分的含量检测方法 |
| CN109709244A (zh) * | 2019-02-22 | 2019-05-03 | 天津红日药业股份有限公司 | 一种血必净注射液苯酞内酯类成分含量测定方法 |
| CN110907555A (zh) * | 2019-12-10 | 2020-03-24 | 成都中医药大学 | 一种川芎乙酸乙酯部位的指纹图谱检测方法 |
| CN111505145A (zh) * | 2020-04-27 | 2020-08-07 | 河南省食品药品检验所 | 采用一测多评法测定当归丸(浓缩丸)成份的方法 |
Non-Patent Citations (10)
| Title |
|---|
| HPLC同时测定川芎、当归SFE-CO_2萃取物中7种成分含量及阿魏酸松柏酯稳定性考察;马云桐;徐世军;廖海浪;何芳;钟芙蓉;文雯;吴督督;;中国实验方剂学杂志;49(3);725-731 * |
| multi-component analysis in sun-dried and sulfur-fumigated angelicae sinensis radix by single marker quantitation and chemometric discrimination;lou yajing等;pharmacognosy magazine;第10卷(第37期);189-197 * |
| Simultaneous determination of six active components by a single standard to determine multicomponents combined with fingerprint analysis for the quality control of Rhizoma Chuanxiong;Yufei He等;Journal of Separation Science;1090-1099 * |
| Yufei He.Simultaneous determination of six active components by a single standard to determine multicomponents combined with fingerprint analysis for the quality control of Rhizoma Chuanxiong.Journal of Separation Science.2015,第38卷1090-1099. * |
| 一测多评法同时测定妇科调经片中7个成分的含量;张文静等;药物分析杂质;第40卷(第02期);329-336 * |
| 一测多评法在中药多组分质量控制中的应用现状与思考;秦昆明;杨冰;胡静;金俊杰;史大华;蔡宝昌;;中草药(03);24-29 * |
| 不同溶剂对川芎药材中有效成分提取效果的影响;杨学东;伍勋;胡立翠;郭鹤男;;中国中药杂志(13);1942-1945 * |
| 川芎中洋川芎内酯A和Z-蒿本内酯的HPLC法测定;吴平丽;刘雯;张继全;沈平孃;卓超;;中国医药工业杂志(04);290-292 * |
| 川芎及黄藤药材质量研究;张慧;中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士）工程科技I辑;B016-170 * |
| 川芎的化学成分研究与多指标成分;潘明凤;中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士）医药卫生科技I辑;E057-16 * |
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| GR01 | Patent grant | ||
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