CN101948437B

CN101948437B - 一种盐酸苯达莫司汀的精制方法

Info

Publication number: CN101948437B
Application number: CN 201010212018
Authority: CN
Inventors: 宗在伟; 陈磊; 杜有国; 杨建楠
Original assignee: Jiangsu Aosaikang Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2010-06-28
Filing date: 2010-06-28
Publication date: 2012-08-29
Anticipated expiration: 2030-06-28
Also published as: CN101948437A

Abstract

本发明提供了一种盐酸苯达莫司汀的精制方法，包含以下步骤：将1重量份的盐酸苯达莫司汀粗品完全溶于3～10重量份浓度为0.01～2mol/L的盐酸溶液中，溶解过程中温度为30～100℃；趁热过滤，冷却析晶，过滤、干燥得盐酸苯达莫司汀白色晶体。本发明的方法可有效的去除盐酸苯达莫司汀粗品中的杂质，产品纯度99.5％以上，单一杂质不大于0.1％，精制收率不低于90％，另外本发明的精制方法工艺过程简便，成本低，工艺易于工业化生产；采用该原料制成的制剂杂质少，疗效好，不良反应低，为肿瘤患者带来最大益处。

Description

一种盐酸苯达莫司汀的精制方法

技术领域

本发明涉及的是一种盐酸苯达莫司汀的精制方法，属于医药生产技术领域。

背景技术

盐酸苯达莫司汀化学名为[1-甲基-2-(4′-丁酸基)-5-N，N′-二-(2′-氯乙基)]-1H-苯并咪唑盐酸盐，结构式为：

盐酸苯达莫司汀最早于19世纪60年代初期由Ozegowski和其同事在德国耶拿的微生物试验协会研制。合成的目的是使一种烷基化氮芥(一种非功能烷化剂)连接一个嘌呤和氨基酸。新合成的化合物与苯丁酸氮芥相比主要的优点是它的水溶性。Anger et al.公开了苯达莫司汀对浆细胞瘤病人成功应用的最初临床结果。苯达莫司汀从1971年到1992年以Cytostasan的商品名由耶拿制药公司生产。从1993年后，这种细胞生长抑制剂被ribosepharm GmbH公司以Ribomustine的商品名上市销售。

本品用于何杰金病、非何杰金淋巴瘤、多发性骨髓瘤、CLL和乳腺癌。其剂量血癌为50～60mg/m2/d，3～5天或每3～4周为100～120mg/m2；实体瘤每4周为120～150mg/m2，每日1次，30～60min静脉滴注。盐酸苯达莫司汀作为单用或联合化疗，对何杰金病和非何杰金淋巴瘤的治疗反应率分别为61％～97％和41％～48％。对多发性骨髓瘤病人，苯达莫司汀/泼尼松治疗的完全反应率较高(32％)，美法仑/泼尼松疗法反应更持久。在环磷酰胺、长春新碱、泼尼松治疗方案中，苯达莫司汀取代环磷酰胺，对发展中低度毒性非何杰金淋巴瘤有相似的反应率。在环磷酰胺、甲氨蝶呤、氟尿嘧啶治疗方案中，苯达莫司汀取代环磷酰胺，使转移性乳腺癌病人的缓解期从6.2个月延长至15.2个月。

盐酸苯达莫司汀是双功能基烷化剂，体外对人卵巢癌和乳腺癌有细胞毒性，体外与环磷酰胺、美法仑(melphalan)、卡莫司汀(carmustine)和顺铂有部分交叉耐受。对乳腺癌细胞系MCF7抑制细胞生长的IC50为138μmol/L，对顺铂抗药性卵巢癌细胞系A27802CP2的IC50为157μmol/L，对多柔比星抗药性乳腺癌细胞系MCF7AD的IC50为187μmol/L。在等毒性浓度(IC50s)下，苯达莫司汀比美法仑、环磷酰胺或卡莫司汀引起更多的DNA双螺旋断裂，比卡莫司汀或环磷酰胺作用更持久。体外引起浓度依赖性的B2慢性淋巴细胞白血病(B2CLL)细胞凋亡，与氟达拉滨(fludarabine)合用，在48h内凋亡率高1.4倍。在I期临床试验中，苯达莫司汀60～80mg/m2每周1次，至8周，对顽固性实体瘤病人引起持久性的全淋巴细胞减少，主要为B细胞毒性。4周后，外周血B细胞、自然杀伤细胞和T细胞分别下降90％，70％和60％以上。

最早报道盐酸苯达莫司汀合成的文献是Journal fur praktische Chemie.4.Reihe.Band 20，166-177(1963)和Journal fur praktischeChemie.4.Reihe.Band 20，178-186(1963)。有关盐酸苯达莫司汀的合成还可参考德国专利DE 159877(1983)。

德国专利DE34727公开了一种苯达莫司汀衍生物的制备方法，与苯达莫司汀结构不同的是1位上的取代基。

现有的文献公开的盐酸苯达莫司汀的合成路线基本一致，都以2，4-二硝基氯苯为起始原料经过取代、还原、酰化、环合、硝基还原、取代、氯代、水解、成盐反应得到目标产物盐酸苯达莫司汀。合成路线如下：

盐酸苯达莫司汀精制可用的精制溶剂可选用纯化水和一定浓度的醇水溶液或者四氢呋喃水溶液；德国专利DE159877以纯化水做溶剂，虽然可以达到最终目的，但需要反复精制，收率非常低。专利WO2009120386公开了一种精制溶剂为乙醇/水(V/V＝97/3)，但在实验中我们发现用醇溶液精制时，因为加热会产生一种新杂质(酯化产物)，因为苯达莫司汀有一羧基和醇在高温下发生酯化反应，如果控制不好，酯化产物必然会影响成品质量，并且此杂质将很难去除。中国专利CN101691359最后精制方法为先将粗品与四氢呋喃混合加热(70℃)，然后再缓慢补加水至固体溶解；四氢呋喃沸点低(66℃)，按此专利方法加热至回流时，再滴加水时，易暴沸，该方法操作繁琐；由于盐酸苯达莫司汀在溶液中产生降解，导致精制收率低；四氢呋喃属二类溶剂，有肝毒性和蓄积性，对操作人员和环境均会造成不同程度的影响。

盐酸苯达莫司汀结构中存在两个氮芥键，在水中极易发生一级水解和二级水解，水解历程如下：

所以盐酸苯达莫司汀在水中进行热溶精制，会造成不同程度的破坏，精制所得产物纯度较差，尤其是需将单一杂质控制在0.1％以下是很难达到的，难以满足注射剂原料的质量要求，同样达不到欧盟质量研究技术指导原则ICH的相关技术要求，精制收率也相当低，成本高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中存在的不足之处，提供一种产品杂质少，稳定性好的盐酸苯达莫司汀的精制方法。

本发明的盐酸苯达莫司汀的精制方法，包含以下步骤：将1重量份的盐酸苯达莫司汀粗品完全溶于3～10重量份浓度为0.01～2mol/L的盐酸溶液中，溶解过程中温度为30～100℃；趁热过滤，冷却析晶，过滤、干燥得盐酸苯达莫司汀白色晶体。

优选地，

将盐酸苯达莫司汀粗品完全溶于盐酸溶液后，加入活性炭脱色。

所用的活性炭为0.01～0.1重量份。

精制过程中，色泽较好，活性炭可少加或不加，若色泽较深，加入一定量的活性炭可以起到去除颜色的作用。

本发明的方法具有如下技术效果：

1)本发明的方法中，盐酸苯达莫司汀粗品在一定浓度的盐酸溶液中的稳定性要好于在水、30％乙醇、93％四氢呋喃溶液等溶剂中的稳定性；

2)采用本发明的方法对盐酸苯达莫司汀粗品进行精制，可有效的去除杂质，产品纯度99.5％以上，单一杂质不大于0.1％，精制收率不低于90％，产品质量可以满足注射剂原料的要求，同样达到了欧盟质量研究技术指导原则ICH的相关技术要求，为注射用盐酸苯达莫司汀研究提供了质量合格的原材料；

3)本发明的精制方法工艺过程简便，成本低，工艺易于工业化生产；采用该原料制成的制剂杂质少，疗效好，不良反应低，为肿瘤患者带来最大益处。

具体实施方式

下面通过实施例来对本发明作进一步的详细说明。

实施例1盐酸苯达莫司汀粗品的制备

盐酸苯达莫司汀粗品可参照文献Journal fur praktischeChemie.4.Reihe.Band 20.1963(178-186)制得，也可参照以下方法制备：

(1)N-甲基-(2，4-二硝基)苯胺(中间体1)的制备

将2，4-二硝基氯苯438g，甲胺盐酸盐141g，三水合乙酸钠573g和N，N-二甲基甲酰胺1050ml加入到3L三口瓶中，加热回流，搅拌反应3h，TLC检测无原料后停止反应。反应液稍冷后快速倒入3000ml冰水中，静置析晶。过滤，滤饼以适量水洗除去DMF，滤饼于80℃鼓风干燥。得到黄色固体397.3g(中间体1)，收率：93.3％，mp：178.6～179℃。

(2)2-甲氨基-4-硝基苯胺(中间体2)的制备

将200g中间体1和3680ml甲醇加入到5L三口瓶中，搅拌下加入650g九水合硫化钠，升温至50℃，加入227.2g碳酸氢钠与1000ml 纯化水配好的溶液，升温至回流4h，TLC检测无原料后停止反应。将残留物倒入2000ml冰水中，析晶，过滤，水洗，得到的固体于80℃鼓风干燥，得到紫红色固体125g(中间体2)，收率：73.5％，mp：176～178℃。

(3)[(2-甲氨基-5硝基)苯基]单酰胺丁酸(中间体3)的制备

将120g中间体2，81g戊二酸酐和840ml甲苯加入到2L三口瓶中，升温至回流，反应40min，TLC检测原料反应完全后。冷却至室温，过滤，滤饼用适量乙酸乙酯洗涤，得滤饼于80℃鼓风干燥得到黄色粉末状固体148.3g(中间体3)，收率：73.5％

(4)5-硝基-1-甲基-2-苯并咪唑丁酸(中间体4)的制备

将140g中间体3和2200ml的3N·HCl溶液加入到3L三口瓶中，升温至回流，反应4h，原料反应完全后，加入活性炭14g，搅拌15min，趁热过滤，滤液冷却后，用浓氨水调节pH到4～5，析出棕黄色固体，过滤，滤饼用适量水洗，得到的固体于80℃鼓风干燥。得到棕黄色固体116g(中间体4)，收率：88.5％，mp：209～210℃

元素分析(C₁₂H₁₃N₃O₄(263.3))理论：C 54.74；H 4.97；N 15.96；

实测：C 54.71；H 4.91；N 15.89；

(5)5-硝基-1-甲基-2-苯并咪唑丁酸乙酯(中间体5)的制备

将70g中间体4，360ml无水乙醇，加入到1L三口瓶中，搅拌下缓慢滴加入26ml浓硫酸，滴毕后加入64.8g无水硫酸镁，加热回流3～4小时，反应完全后，趁热倒入水中，使固体全溶，用饱和碳酸氢钠溶液调pH至中性，加入乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液浓缩得到固体，固体于50℃鼓风干燥。得到灰白色固体70.5g(中间体5)，收率：91％，mp：108～109.4℃

元素分析(C₁₄H₁₇N₃O₄(291.3))理论：C 57.72；H 5.88；N 14.43；

实测：C 54.65；H 5.86；N 14.49；

(6)5-氨基-1-甲基-2-苯并咪唑丁酸乙酯(中间体6)的制备

将35g中间体5，280ml乙酸乙酯/280ml甲醇的混合溶剂，鲜制的雷尼镍催化剂加入到反应瓶中，搅拌，室温下缓慢滴加85％水合肼38.5ml，滴完后室温反应3h，原料反应完全后过滤，滤液浓缩至尽干，过滤，滤饼用少许乙醇洗涤，于50℃鼓风干燥。得淡黄色固体26.2g(中间体6)，收率：83％；mp：131～132℃

元素分析(C₁₄H₁₉N₃O₄，261.3)理论：C 64.35；H 7.33；N 16.08；

实测：C 64.27；H 7.28；N 16.12；

(7)4-[5-[双-(2-羟乙基)氨基]-1-甲基-2-苯并咪唑]丁酸乙酯(中间体7)的制备

将纯化水97ml，乙酸97ml和中间体6(26.1g，0.1mol)加入反应瓶中，搅拌，冷却至0～5℃，滴加入环氧乙烷25ml，滴加完毕后0～5℃保温反应1h，室温反应过夜。反应完全后将反应液减压浓缩至无馏出物，加纯化水100ml，用碳酸氢钠调节pH至6～7，55℃减压浓缩至干得红棕色油状物，油状物用乙酸乙酯/纯化水溶解，分离出水相，得到的有机层减压浓缩至干，得红棕色油状物24.2g。

(8)盐酸苯达莫司汀粗品的制备

将中间体7(17.5g，0.05mol)，二氯甲烷350ml，加入1L反应瓶中，机械搅拌，冷却至0～5℃，滴加氯化亚砜30ml，滴完后0～5℃保温反应1h，再于室温下反应3h。减压浓缩至干，向该粘稠液中加入浓盐酸350ml，加热回流反应3h，加入活性炭17.5g，搅拌10min，趁热过滤，滤液浓缩至干，将残余物加入纯化水50ml中，搅拌析出固体。过滤，固体于50℃真空干燥5h。得到5g终产品(即盐酸苯达莫司汀粗品)，收率：25.3％；HPLC检测纯度93.8％，最大单杂3.25％.

HPLC纯度检测条方法

取本品，置25ml容量瓶中，先加少量流动相振摇使溶解，再加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取该溶液1ml置100ml容量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下色谱条件(用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05％十二烷基硫酸钠水溶液(用10％磷酸调pH值至4.0)-乙腈(55∶45)为流动相；检测波长为233nm)。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10％～25％。再精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。

实施例2

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品5g(纯度93.2％，最大单杂4.16％)置于反应瓶中，加入1mol/L盐酸溶液20g，加热至80℃，搅拌溶解，趁热过滤，滤液冷却至10℃析晶12h，过滤，45℃干燥6h得白色固体4.6g，收率92％。纯度99.84％，最大单杂0.05％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

实施例3

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品9g(纯度94.7％，最大单杂4.49％)置于反应瓶中，加入0.09mol/L盐酸溶液60g，加热至50℃，搅拌溶解，加入活性炭0.5g脱色5分钟，趁热过滤，滤液冷却至0℃析晶5h，过滤，30℃干燥10h得白色固体8.5g，收率94.4％。纯度99.87％，最大单杂0.08％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

实施例4

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品5g(纯度93.2％，最大单杂4.16％)置于反应瓶中，加入0.01mol/L盐酸溶液15g，加热至100℃，搅拌溶解，趁热过滤，冷却至4℃析晶24h，过滤，75℃干燥4h得白色固体4.51g，收率90％。纯度99.82％，最大单杂0.09％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

实施例5

将将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品10g(纯度97.4％，最大单杂1.12％)置于反应瓶中，加入0.5mol/L盐酸溶液100g，30℃保温，搅拌溶解，加入活性炭1g脱色5分钟，趁热过滤，滤液冷却至0℃析晶18h，过滤，80℃干燥4h得白色固体9.1g，收率91％。纯度99.83％，最大单杂0.04％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

实施例6

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品10g(纯度97.8％，最大单杂1.22％)置于反应瓶中，加入1.4mol/L盐酸溶液60g，60℃保温，搅拌溶解，加入活性炭0.8g脱色5分钟，趁热过滤，滤液冷却至18℃析晶0.5h，过滤，50℃干燥6h得白色固体9.2g，收率92％。纯度99.84％，最大单杂0.07％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

实施例7

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品25g(纯度98.3％，最大单杂1.09％)置于反应瓶中，加入2mol/L盐酸溶液125g，70℃保温，搅拌溶解，加入活性炭0.25g脱色5分钟，趁热过滤，滤液冷却至30℃析晶15h，过滤，60℃干燥6h得白色固体23.1g，收率92.4％。纯度99.91％，最大单杂0.05％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

实施例8

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品25g(纯度98.5％，最大单杂1.17％)置于反应瓶中，加入0.3mol/L盐酸溶液120g，90℃保温，搅拌溶解，加入活性炭0.75g脱色5分钟，趁热过滤，滤液冷却至22℃析晶8h，过滤，55℃干燥6h得白色固体23.6g，收率94.4％。纯度99.96％，最大单杂0.03％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

实施例9

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品7g(纯度99.1％，最大单杂0.82％)置于反应瓶中，加入0.06mol/L盐酸溶液45g，80℃保温，搅拌溶解，加入活性炭0.4g脱色5分钟，趁热过滤，滤液冷却至6℃析晶20h，过滤，55℃干燥6h得白色固体6.3g，收率90％。纯度99.86％，最大单杂0.04％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

实施例10

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品80g(纯度98.23％，最大单杂0.95％)置于反应瓶中，加入1mol/L盐酸溶液400g，85℃保温，搅拌溶解，加入活性炭4g脱色5分钟，趁热过滤，滤液冷却至0℃析晶10h，过滤，60℃干燥6h得白色固体73.7g，收率92.1％。纯度99.93％，最大单杂0.02％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

对照例1

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品3.6g(纯度94.5％，最大单杂4.96％)，置于反应瓶中，加入水15ml，加热至70～80℃，溶解后加入活性炭0.2g，过滤，滤液冷却至10℃析晶12h，过滤，45℃干燥6h得白色固体2.7g，收率75％。纯度96.45％，最大单杂2.7％。

将2.1g粗品依照上法用水再精制两遍，得1.1g，收率：52.4％，纯度：99.04％，最大单杂：0.60％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

对照例2

将按实施例1制备的盐酸苯达莫司汀粗品3g(纯度94.5％，最大单杂4.96％)，置于反应瓶中，加入四氢呋喃19ml，升温至回流，小心缓慢加入水约1.5ml至固体基本溶解，冷却，于5℃搅拌析出白色固体，抽滤，50℃干燥得白色固体2.3g，收率76.7％。纯度：99.21％，最大单杂：0.45％，HPLC纯度检测条件同实施例1。

实施例11盐酸苯达莫司汀稳定性试验

分别称取盐酸苯达莫司汀9份，每份各25mg，置于25ml容量瓶中，分别用纯化水、30％乙醇、93％四氢呋喃(四氢呋喃与水混合溶剂，体积比约为13.2∶1)、0.005mol/L盐酸、0.01mol/L盐酸、0.1mol/L 盐酸、1mol/L盐酸、2mol/L盐酸、2.5mol/L盐酸进行溶解，室温(24℃)条件下放置，分别对0.5h、2h、4h取样，HPLC法进行检测，纯度检测方法如下：

取本品，置25ml容量瓶中，先加少量流动相振摇使溶解，再加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取该溶液1ml置100ml容量瓶中，加混合溶剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照含量测定项下色谱条件(用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；0.05％十二烷基硫酸钠水溶液(用10％磷酸调pH值至4.0)-乙腈(55∶45)为流动相；检测波长为233nm)。取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10％～25％。再精密量取供试品溶液及对照溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的4倍。有关物质检测结果见表1

表1盐酸苯达莫司汀在各种溶剂中的稳定性

实验结果显示：盐酸苯达莫司汀在0.01～2mol/L盐酸溶液中纯度变化较小，稳定性好；而盐酸苯达莫司汀在水、30％乙醇、93％四氢呋喃溶液等溶剂中，存在较大的降解，杂质变化明显。

Claims

1.一种盐酸苯达莫司汀的精制方法，其特征在于，包含以下步骤：将1重量份的盐酸苯达莫司汀粗品完全溶于3～10重量份浓度为0.01～2mol/L的盐酸溶液中，溶解过程中温度为30～100℃；趁热过滤，冷却析晶，过滤、干燥得盐酸苯达莫司汀白色晶体。

2.根据权利要求1所述的盐酸苯达莫司汀的精制方法，其特征在于，在盐酸苯达莫司汀粗品完全溶于盐酸溶液后，加入活性炭进行脱色。

3.根据权利要求2所述的盐酸苯达莫司汀的精制方法，其特征在于，所用的活性炭为0.01～0.1重量份。