CN101917981B - 肽脱甲酰化酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及某些{2-(烷基)-3-[2-(5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺衍生物，包含它们的组合物，该化合物在抑制细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性中的用途，以及该化合物在治疗细菌感染中的用途。特别地，本发明涉及式(I)化合物及其药学上可接受的盐，其中R1、R2和R3如文中所定义。本发明化合物是细菌的肽脱甲酰化酶抑制剂，并可用于治疗细菌感染。

Description

肽脱甲酰化酶抑制剂
发明领域
本发明涉及某些{2-(烷基)-3-[2-(5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺化合物，包含它们的组合物，该化合物在抑制细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性中的用途，以及在治疗细菌感染中的用途。
发明背景
细菌蛋白合成从N-甲酰基-甲硫氨酰-tRNA(f-Met-tRNAi)开始，因此，所有新近合成的多肽含有N-甲酰基-甲硫氨酸末端(f-Met-pp)(方案I)。肽脱甲酰化酶(PDF)是含金属酶，其除去多肽的N-甲酰基，当在延长过程中所述多肽从核糖体中生成[Adams，J.M.(1968)J.Mol.Biol.33，571-589；Livingston，D.M.and Leder，P.(1969)Biochemistry 8，435-443；Ball，L.A.and Kaesberg，P.(1973)J.Mol.Biol.79，531-537]。取决于它们的第二氨基酸的性质，多肽进一步由甲硫氨酸氨肽酶(MAP)处理，得到成熟蛋白。脱甲酰化作用在蛋白质成熟中起了必不可少的作用，因为细菌生长的必需酶MAP不能水解N-端肽。
方案I.在蛋白合成中PDF的作用
Figure BPA00001182153900011
迄今为止，PDF普遍存在于细菌中，其在所有已测序的细菌基因组中存在至少一个pdf基因。
PDF在真核胞质蛋白合成中不起作用，在该合成中不涉及N-甲酰化作用，但是在寄生虫、植物和动物包括人中已识别出含有叶绿体/线粒体定位信号的核编码的PDF蛋白。PDF在植物和寄生虫细胞器中是必需的，因为它们的基因组编码大量的蛋白，所述蛋白需要脱甲酰化作用产生活性，但有证据表明在动物中并不是这种情况。事实上，人的线粒体PDF的特征鉴定已表明其具有比其细菌的对应部分小得多的活性。而且，在体外对人的PDF酶有活性的PDF抑制剂在正常的人细胞系的生长中没有作用[Nguyen，K.T.，Hu，X.，Colton，C.，Chakrabarti，R.，Zhu，M.X.and Pei，D.(2003)Biochemistry42，9952-9958]。
因此，PDF抑制剂代表一类对广谱病原体具有新的作用模式的有希望的新的抗细菌剂。
现有技术中已经描述了PDF抑制剂。已经提交了有关下式的肼-3-氧代丙基羟基甲酰胺衍生物的专利申请，参见WO 03/101442和WO2006/055663。
Figure BPA00001182153900021
因此，现有技术中已经公开了制备抑制PDF活性的化合物以及大量的该化合物。然而，对可用于治疗细菌感染的PDF抑制剂仍存在继续的需求。
发明概述
本发明涉及某些{2-(烷基)-3-[2-(5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺衍生物，包含它们的组合物，该化合物在抑制细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)活性中的用途，以及在治疗细菌感染中的用途。特别地，本发明涉及式(I)化合物及其药学上可接受的盐：
Figure BPA00001182153900022
其中R1、R2和R3如下所定义。本发明化合物为细菌的肽脱甲酰化酶抑制剂，并且可用于治疗细菌感染。
附图说明
图1提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1的FT-IR谱图。x-轴以cm-1为单位，并且y-轴为吸光度。
图2提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2的FT-IR谱图。x-轴以cm-1为单位，并且y-轴为吸光度。
图3提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1的FT-拉曼光谱。x-轴以cm-1为单位，并且y-轴为强度。
图4提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2的FT-拉曼光谱。x-轴以cm-1为单位，并且y-轴为强度。
图5提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型3的FT-拉曼光谱。x-轴以cm-1为单位，并且y-轴为强度。
图6提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1的X-射线粉末衍射图。x-轴以°2θ为单位，并且y-轴为强度。
图7提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2的X-射线粉末衍射图。x-轴以°2θ为单位，并且y-轴为强度。
图8提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型3的X-射线粉末衍射图。x-轴以°2θ为单位，并且y-轴为强度。
图9提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1的差示扫描量热法(DSC)热分析图。x-轴为温度(℃)，并且y-轴为热流(瓦特/克)。在132℃处的热事件相当于多晶型1至多晶型3的放热的固态形式的转化。
图10提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2的差示扫描量热法(DSC)热分析图。x-轴为温度(℃)，并且y-轴为热流(瓦特/克)。
图11提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型3的差示扫描量热法(DSC)热分析图。x-轴为温度(℃)，并且y-轴为热流(瓦特/克)。
图12提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1的痕量热重量分析(TGA)。x-轴为温度(℃)，并且y-轴为重量改变的百分比。
图13提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2的痕量热重量分析(TGA)。x-轴为温度(℃)，并且y-轴为重量改变的百分比。
图14提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型3的痕量热重量分析(TGA)。x-轴为温度(℃)，并且y-轴为重量改变的百分比。
发明的详细说明
在描述本发明的过程中，化学元素根据元素周期表识别。在此使用的缩写和符号是化学和生物学领域中的熟练技术人员通常所使用的这些缩写和符号。具体地说，在实施例和整个说明书中可使用下列缩写：
g(克)；                                mg(毫克)；
kg(千克)；                             μg(微克)；
L(升)；                                mL(毫升)；
μL(微升)；                            psi(磅/平方英寸)；
M(摩尔浓度)；                          mM(毫摩尔浓度)；
μM(微摩尔浓度)；                      nM(纳摩尔浓度)；
pM(皮摩尔浓度)；                       nm(纳米)；
mm(毫米)；                             wt(重量)；
N(当量浓度)；                          CFU(菌落形成单位)；
I.V.(静脉内)；                         Hz(赫兹)；
MHz(兆赫)；                            mol(摩尔)；
mmol(毫摩尔)；                         RT(室温)；
min(分钟)；                            h(小时)；
b.p.(沸点)；                           TLC(薄层色谱法)；
Tr(保留时间)；                            RP(反相)；
MeOH(甲醇)；                              i-PrOH(异丙醇)；
TEA(三乙胺)；                             TFA(三氟乙酸)；
TFAA(三氟乙酸酐)；                        THF(四氢呋喃)；
DMSO(二甲亚砜)；                          EtOAc(乙酸乙酯)；
DME(1，2-二甲氧基乙烷)；                  DCM(二氯甲烷)；
DCE(二氯乙烷)；                           DMF(N，N-二甲基甲酰胺)；
DMPU(N，N′-二甲基亚丙基脲)；             CDI(1，1-羰基二咪唑)；
IBCF(氯甲酸异丁酯)；                      AcOH(乙酸)；
HOAt(1-羟基-7-氮杂苯并三唑)；
THP(四氢呋喃)；                           NMM(N-甲基吗啉)；
Pd/C(负载在碳上的钯)；                    MTBE(叔丁基甲基醚)；
HOBT(1-羟基苯并三唑)；                    mCPBA(间-氯过苯甲酸)；
EDC(1-[3-二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳二亚胺盐酸盐)；
BOC(叔丁氧基羰基)；                       FMOC(9-芴基甲氧基羰基)；
DCC(二环己基碳二亚胺)；                   CBZ(苄氧基羰基)；
Ac(乙酰基)；                              atm(大气压)；
TMSE(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)；            TMS(三甲基甲硅烷基)；
TIPS(三异丙基甲硅烷基)；                  TBS(叔丁基二甲基甲硅烷基)；
DMAP(4-二甲基氨基吡啶)；                  BSA(牛血清白蛋白)
NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)；
HPLC(高压液相色谱)；
LC/MS(液相色谱/质谱)；
BOP(双(2-氧代-3-噁唑烷基)膦酰氯)；
TBAF(四正丁基氟化铵)；
HBTU(O-苯并三唑-1-基-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸盐)；
HEPES(4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸)；
DPPA(二苯基磷酰基叠氮化物)；              LAH(氢化锂铝)；
fHNO3(发烟HNO3)；                         NaOMe(甲氧基钠)；
EDTA(乙二胺四乙酸)
TMEDA(N，N，N′，N′-四甲基-1，2-乙二胺)
NBS(N-溴代琥珀酰亚胺)                DIPEA(二异丙基乙胺)；
dppf(1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁)；和
NIS(N-碘代琥珀酰亚胺)。
所有引用醚的地方都是指乙醚，盐水是指饱和NaCl水溶液。
术语和定义
″烷基″是指具有指定成员碳原子数目的单价的饱和烃链。例如，C1-C7烷基是指具有1-7个成员碳原子的烷基。烷基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代。烷基可以是直链的或支链的。代表性的支链烷基具有一个、两个或三个支链。烷基包括甲基、乙基、丙基(正丙基和异丙基)、丁基(正丁基、异丁基和叔丁基)、戊基(正戊基、异戊基和新戊基)和己基。
″烯基″是指具有指定成员碳原子数目并且在链中具有一个或多个碳-碳双键的不饱和烃链。例如，C2-C6烯基是指具有2-6个成员碳原子的烯基。在某些实施方案中，烯基在链中具有一个碳-碳双键。在其它实施方案中，烯基在链中具有不止一个碳-碳双键。烯基可以任选被如在此所定义的一个或多个取代基取代。烯基可以是直链的或支链的。代表性的支链烯基具有一个、两个或三个支链。烯基包括乙烯基、丙烯基、丁烯基、戊烯基和己烯基。
″烷氧基″是指通过氧桥连接的烷基部分(即，-O-C1-C6烷基，其中C1-C6如文中所定义)。这种基团的实例包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基。
″炔基″是指具有指定成员碳原子数目并且在链中具有一个或多个碳-碳三键的不饱和烃链。例如，C2-C6炔基是指具有2-6个成员原子的炔基。在某些实施方案中，炔基在链中具有一个碳-碳三键。在其它实施方案中，炔基在链中具有不止一个碳-碳三键。为了清楚，在链中具有一个或多个碳-碳三键以及在链中具有一个或多个碳-碳双键的不饱和的烃链也称为炔基。炔基可以任选被如在此所定义的一个或多个取代基取代。代表性的支链炔基具有一个、两个或三个支链。炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、戊炔基和己炔基。
″芳基″是指芳香族烃环体系。芳基是单环体系或双环体系。单环芳环是指苯基。双环芳环是指萘基以及其中苯基与具有5、6或7个成员碳原子的环烷基或环烯基环稠合的环。芳基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代。
″环烷基″是指具有指定成员碳原子数目的饱和烃环。环烷基是单环体系。例如，C3-C6环烷基是指具有3-6个成员原子的环烷基。环烷基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代。环烷基包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
″环烯基″是指具有指定成员碳原子数目并且在环中具有碳-碳双键的不饱和烃环。例如，C3-C6环烯基是指具有3-6个成员碳原子的环烯基。在某些实施方案中，环烯基在环内具有一个碳-碳双键。在其它实施方案中，环烯基在环中具有不止一个碳-碳双键。环烯基环不是芳香性的。环烯基是单环体系。环烯基可以任选被如在此所定义的一个或多个取代基取代。环烯基包括环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基、环己烯基和环己二烯基。
″对映异构体过量″或″ee″是一种对映异构体相对于另一种对映异构体的过量，以百分比表示。因此，由于两种对映异构体在外消旋混合物中以等量存在，因此，外消旋混合物的对映异构体过量为0(0％ee)。然而，如果将一种对映异构体富集使得它占产物的95％，那么所述的对映异构体过量将为90％ee(富集对映异构体的数量，95％，减去另一种对映异构体的数量，5％)。
″对映异构体富集的″是指对映异构体过量大于0的产物。例如，对映异构体富集的是指对映异构体过量大于50％ee，大于75％ee或大于90％ee的产物。
″对映异构体纯的″是指对映异构体过量为99％ee或更大的产物。
″卤代″是指选自氟、氯、溴和碘的卤素基团。
″卤代烷基″是指烷基，其中烷基中的连接于成员原子上的至少一个氢原子用卤素代替。卤素取代基的数目包括但不限于1、2、3、4、5或6个取代基。卤代烷基包括单氟甲基、二氟乙基和三氟甲基。
″杂芳基″是指在环中含有1-5个，合适地含有1-4个，更合适地含有1或2个杂原子作为成员原子的芳环。含有不止一个杂原子的杂芳基可以含有不同的杂原子。杂芳基可以任选被如在此所定义的一个或多个取代基取代。杂芳基是单环体系或是稠合的双环体系。单环杂芳基环具有5-6个成员原子。双环杂芳基环具有8-10个成员原子。双环杂芳基环包括那些环，其中主要的杂芳基和次要的单环环烷基、环烯基、杂环烃基、芳基或杂芳基环连接形成稠合的双环体系。杂芳基包括吡咯基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、四嗪基、四唑基、吲哚基、异吲哚基、中氮茚基、吲唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、蝶啶基、噌啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噻吩基、呋喃并吡啶基、萘啶基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶基和3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶基。
″杂原子″是指氮、硫或氧原子。
″杂环烃基″是指在环中含有1-4个杂原子作为成员原子的饱和或不饱和环。杂环烃基环不是芳香性的。含有不止一个杂原子的杂环烃基可以含有不同的杂原子。杂环烃基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代。杂环烃基是单环体系或稠合、螺环或桥连双环体系。单环杂环烃基环具有4-7个成员原子。双环杂环烃基环具有7-11个成员原子。在某些实施方案中，杂环烃基是饱和的。在其它实施方案中，杂环烃基是不饱和的但不是芳香性的。杂环烃基包括吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、吡喃基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、噁唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1-吡唑烷基、氮杂
Figure BPA00001182153900081
基、1，3-二噁烷基、1，4-二噁烷基、1，3-氧硫杂环戊烷基(oxathiolanyl)、1，3-二噻烷基(dithianyl)、氮杂环丁烷基、异噁唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、氮杂二环[3.2.1]辛基、氮杂二环[3.3.1]壬基、氮杂二环[4.3.0]壬基、2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚基、八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪基、八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪基、氧杂二环[2.2.1]庚基、六氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153900082
基、2，3，4，7-四氢-1H-氮杂基、四氢-5H-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯基、四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-(3H)-基、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢吡嗪并[1，2-a]氮杂
Figure BPA00001182153900084
-(1H)-基、六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-(1H)-基、六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸基、八氢-1(2H)-喹喔啉基；八氢-1H-环戊二烯并[b]吡嗪基、六氢呋喃并[3，4-b]吡嗪-(2H)-基、八氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、4，7-二氮杂螺[2.5]辛基和5-氮杂螺[2.4]庚基。
“成员原子”是指构成链或环的一个或多个原子。如果在链和环中存在多于一个成员原子，那么在该链或环中每个成员原子与相邻的成员原子共价结合。在链或环上构成取代基的原子不是链或环中的成员原子。
“任选取代的”表示基团，例如烷基、烯基、炔基、芳基、环烷基、环烯基、杂环烃基或杂芳基，可以是未取代的或被一个或多个如在此所定义的取代基取代。
“药学上可接受的”是指那些化合物、物质、组合物和剂型，其在合理医学判断的范围内，适合与人和动物组织接触使用，而没有过度的毒性、刺激性或其它问题或并发症，具有相称的合理受益/风险比。
涉及基团的“取代的”表示其中连接于成员原子的一个或多个氢原子被所限定的取代基代替。应当理解，术语“取代的”包括隐含的规定，即这种取代遵照取代原子和取代基的允许化合价，并且该取代生成一种稳定化合物(即不会例如通过水解、重排、环化或消除反应而自发地进行转化的化合物，并且该化合物足够稳定可从反应混合物中分离出来)。当说明一个基团可含有一个或多个取代基时，该基团中的一个或多个(若合适)成员原子可被取代。此外，其中单个成员原子可以被多于一个取代基取代，只要这种取代符合该原子允许的化合价。对于每个取代的或任选取代的基团，合适的取代基在此所定义。
“烷硫基(sulfanyl)”是指通过硫桥连接的烷基部分(即，-S-C1-C6烷基，其中C1-C6如文中所定义)。烷硫基的实例包括甲硫基和乙硫基。
化合物
本发明涉及根据式I的化合物：
Figure BPA00001182153900091
其中
R1选自：C2-C7烷基和-(CH2)n-C3-C6环烷基；
R2选自：C1-C3烷基；环丙基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3烷硫基；5-元杂芳基；5-元杂环烃基；卤素；羟基甲基；和-NRaRb；
R3选自：-NR4R5；卤素；苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；和杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R4选自：H；C1-C6烷基，其任选被一个或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R5选自：H；C1-C6烷基，其任选被一个或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；
或者R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成任选被一至三个R6基团所取代的杂环烃基；
每个R6独立地选自：C1-C6烷基，其任选被一至三个R7基团所取代；羟基；C1-C3烷氧基；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；-C(O)ORc；杂环烃基；C3-C6环烷基，其任选被一个-NRaRb或吡咯烷基所取代；氧代基；氰基；-NRaRb；苯基；杂芳基；和卤素；
每个R7独立地选自：羟基；C1-C3烷氧基；卤素；苯基；氰基；-NRaRb；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；C3-C6环烷基，其任选被一个羟基、杂环烃基或-NRaRb基团所取代；杂环烃基；和杂芳基，其任选被一个甲基、NRaRb或羟基所取代；
每个Ra各自独立地选自：H以及任选被一个羟基、甲氧基或二甲基胺所取代的C1-C3烷基；
每个Rb独立地选自：H和C1-C3烷基；
每个Rc独立地选自：任选被一个甲氧基所取代的C1-C3烷基；苯基；杂环烃基；以及杂芳基；和
n为0-2的整数。
式I的化合物可以含有一个或多个不对称中心(也称为手性中心)，因此，其可以以单独的对映异构体、非对映异构体或其它立体异构形式或其混合物的形式存在。手性中心如手性碳原子还可以存在于取代基如烷基中。当手性中心的立体化学存在于式I或在此所示的任何化学结构中时，虽然没有特定指出，但是所述的结构应该包括任何立体异构体以及其所有的混合物。因此，含有一个或多个手性中心的式I化合物可以以外消旋混合物、非对映异构体的混合物、对映异构体富集的混合物、非对映异构体富集的混合物或对映异构体和非对映异构体纯的各个立体异构体的形式使用。
含有一个或多个不对称中心的式I化合物的各个立体异构体可以通过本领域熟练技术人员已知的方法拆分。例如，这种拆分可以如下方式进行：(1)通过形成非对映异构体盐、复合物或其它衍生物；(2)通过与立体异构体专一性试剂选择性反应，例如通过酶氧化或还原反应；或(3)通过在手性环境下的气-液色谱或液相色谱，例如，在手性载体如二氧化硅上与结合的手性配体或在手性溶剂存在下。本领域熟练技术人员将会理解，当所需的立体异构体转化为非对映异构体的盐、复合物或衍生物时，需要另外的步骤以释放所需的形式。或者，特定的立体异构体可以通过使用旋光的试剂、底物、催化剂或溶剂通过不对称合成来合成，或通过不对称转化将一种对映异构体转化为另一种对映异构体。
式I化合物还可以含有双键或其它几何不对称中心。当式I或在此所示的任何化学结构中存在的几何不对称的立体化学中心没有指出时，所述的结构应该包括反式(E)几何异构体，顺式(Z)几何异构体以及其所有的混合物。同样，所有互变异构体也将包括在式I内，不管这些互变异构体以平衡形式存在还是以主要一种形式存在。
在某些实施方案中，式I化合物可以含有酸性官能团。在其他一些实施方案中，式I化合物可以含有碱性官能团。因此，本领域熟练技术人员将会理解，式I化合物的盐是可以制备的。实际上，在本发明的某些实施方案中，式I化合物的盐可以优选于各自的游离碱或游离酸，因为这些盐给予分子更大的稳定性或溶解度，由此有助于配制成剂型。因此，本发明还涉及式I化合物的药学上可接受的盐。对于合适的盐的综述参见Berge等人，J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19。
酸加成盐(Acid salts)：合适的加成盐是由形成无毒盐的酸形成的，并且该加成盐的实例为盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、乙酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、富马酸盐、丙二酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、甲酸盐、葡糖酸盐、琥珀酸盐、丙酮酸盐(piruvate)、草酸盐、草酰乙酸盐、三氟乙酸盐、蔗糖盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、甲磺酸基(methanesulphonic)、乙磺酸基(ethanesulphonic)、对甲苯磺酸基(p-toluenesulphonic)和羟乙基磺酸盐。
碱加成盐(Base salts)：药学上可接受的碱加成盐包括铵盐、碱金属盐如那些钠盐和钾盐，碱土金属盐如那些钙盐和镁盐，以及与有机碱形成的盐，包括伯、仲和叔胺如异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺和N-甲基-D-葡萄糖胺的盐。
在此所使用的术语“药学上可接受的盐”是指保留主题化合物所需生物学活性并且显示出极低不希望毒理学作用的盐。这些药学上可接受的盐可以在化合物的最后分离和提纯期间在原位制备，或通过使提纯后的以其游离酸或游离碱形式存在的化合物单独地与合适的碱或酸分别反应进行制备。
如在此所使用的，术语“本发明化合物”表示式I化合物及其盐，包括药学上可接受的盐。术语“一种本发明的化合物”也在此使用，并指式I化合物及其盐，包括药学上可接受的盐。
本发明化合物可以固态或液态形式存在。在固态中，本发明化合物可以以结晶或非结晶的形式或以它们的混合物的形式存在。对于结晶形式的本发明化合物，本领域技术人员将会理解，可以形成药学上可接受的溶剂合物，其中在结晶期间溶剂分子结合到晶格中。溶剂合物可以包括非水溶剂如乙醇、异丙醇、DMSO、乙酸、乙醇胺和乙酸乙酯，或者它们可以包括水作为结合到晶格中的溶剂。其中水是结合到晶格中的溶剂的溶剂合物被典型地称为″水合物″。水合物包括化学计量的水合物和含有可变量水的组合物。本发明包括所有这些溶剂合物。
本领域熟练技术人员将会进一步理解到，本发明以晶体形式存在的某些化合物，包括其各种溶剂合物，可以表现出多晶型现象(即出现不同晶体结构的性能)。这些不同的晶体形式典型地被称为″多晶型物″。本发明包括所有这些多晶型物。多晶型物具有相同的化学组成，但是在晶体固态的堆积、几何排列以及其它所述性能方面有所不同。因此，多晶型物可以具有不同的物理性质如形状、密度、硬度、可变形性、稳定性和溶解性能。多晶型物典型地表现出不同的熔点、IR光谱和X-射线粉末衍射图，其可以被用来进行鉴定。本领域熟练技术人员将会理解，不同的多晶型物例如可以通过改变或调节在制备化合物中所使用的反应条件或试剂进行制备，或者通过使用不同的分离或纯化方法制备。例如，改变温度、压力或溶剂可以产生多晶型物。此外，在某些条件下，一种多晶型物可以自发地转变成另一种多晶型物。
在本发明的一个实施方案中，R1为-(CH2)n-C3-C6环烷基。合适地，R1为-(CH2)n-C3-C6环烷基，其中n为1。合适地，R1为-CH2-环戊基。
在本发明的另一实施方案中，R2为C1-C3烷基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3烷硫基；或卤素。合适地，R2为甲基；乙基；甲硫基；乙硫基；氟代甲基；二氟甲基；1-氟甲基；氯；环丙基；或甲氧基。合适地，R2为甲基；乙基；甲硫基；或氯。
在本发明的另一实施方案中，R3为-NR4R5；C1-C6烷氧基；或杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代。合适地，R3为-NR4R5，其中R4为C1-C6烷基，其任选被一个或两个R7基团所取代；或R4为C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；并且R5为H、C1-C6烷基或C1-C6烷氧基。
在本发明的另一实施方案中，R4为环丙基；环丁基；环戊基；四氢-2H-吡喃基；2-氧代-六氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153900131
基；2-氧代-2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153900132
基；5-氟-吡啶基；或C1-C6烷基，其任选被选自下列之一的R7基团所取代：羟基、甲氧基、氰基、-C(O)NRaRb、-C(O)Rc、吗啉基、吡啶基、1，3-噻唑基、2-氨基-1，3-噻唑基、噻吩基、呋喃基、苯基和1-羟基-1H-咪唑基；并且R5为H；C1-C3烷基；环丙基；或任选被一个R6基团所取代的哌嗪基。
在另一实施方案中，R4为甲基；任选被一个选自下列的取代基所取代的乙基：羟基、甲氧基和-NRaRb；丙基；异丙基；环丙基；环丁基；和环戊基。
在本发明的另一实施方案中，R5选自：H；C1-C6烷基；C1-C6烷氧基；和C3-C6环烷基。合适地，R5为H；甲基；或甲氧基。合适地，R5为H；C1-C3烷基；环丙基；或任选被一个R6基团所取代的哌嗪基。
在本发明的另一实施方案中，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成任选被一至三个R6基团所取代的杂环烃基。合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成氮杂环丁烷基；吡咯烷基；哌嗪基；吗啉基；2，5-二氢-1H-吡咯基；六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-(1H)-基；异噁唑烷基；六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基；或2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚基，其中每个基团可任选被一至三个R6基团所取代。
在本发明的另一实施方案中，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成1-哌啶基；4-硫代吗啉基；1-吡唑烷基；四氢-5H-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯基；四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-(3H)-基；六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基；六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基；六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-(1H)-基；六氢呋喃并[3，4-b]吡嗪-(2H)-基；八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪基；八氢吡嗪并[1，2-a]氮杂-(1H)-基；八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪基；八氢-1H-环戊二烯并[b]吡嗪基；八氢-1(2H)-喹喔啉基；八氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基；3-氮杂二环[3.1.0]己基；2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚基；4，7-二氮杂螺[2.5]辛基；5-氮杂螺[2.4]庚基；或10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸基。
合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成任选被一个或两个各自独立地选自下列的R6基团所取代的氮杂环丁烷基：甲基；乙基；氟；甲氧基；羟基；羟基甲基；环丙基；二甲基氨基；乙基甲基氨基；-CH2-二甲基氨基；吗啉基；吡咯烷基；-CH2-吡咯烷基；和吡啶基。
合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成任选被一至三个各自独立地选自下列的R6基团所取代的吡咯烷基：甲基；甲氧基；-CH2-甲氧基；羟基；羟基甲基；羟基乙基；二甲基氨基；乙基甲基氨基；-CH2-二甲基氨基；-CH2-吡咯烷基；-CH2-吗啉基；吡啶基；2-(二甲基氨基)-1，1-二甲基乙基；氟代甲基；-CH2-2-羟基乙基甲氨基；-CH2-2-甲氧基乙氨基；氰基；-C(O)N(CH3)2；1-(二甲基氨基)环丙基；-CH2-乙基甲氨基；-CH2-二乙基氨基；-C(O)N(CH2CH3)2；-CH2-哌啶基；-CH2-异丙基甲氨基；-CH2-丙基甲氨基；-NHCOOCH3；-CH2-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基；和(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-4-基。
合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成任选被一至三个各自独立地选自下列的R6基团所取代的哌嗪基：甲基；乙基；异丙基；羟基甲基；羟基乙基；-CH2-O-CH3；和-COOCH3。
合适地，R3为-NR4R5，其中R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪基。
在本发明的另一实施方案中，R6为C1-C3烷基，其任选被一至三个R7基团所取代；羟基；C1-C3烷氧基；-C(O)NRaRb；或-NRaRb。合适地，R6为甲基；乙基；异丙基；甲氧基；羟基；二乙基氨基；或N，N-二甲基乙酰氨基(acetamido)。
在另一实施方案中，R6为杂芳基。合适地，R6为6-元杂芳基。合适地，R6为吡啶基。
在本发明的另一实施方案中，R7为C1-C3烷氧基；羟基；或-NRaRb。合适地，R7为甲氧基。
在另一实施方案中，R7为杂环烃基。合适地，R7为6-元杂环烃基。合适地，R7为吗啉基。
在另一实施方案中，R7为杂芳基。合适地，R7为吡啶基；1，3-噻唑基；噻吩基；呋喃基；咪唑基；1H-苯并咪唑基；3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基；或3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基。
在本发明的另一实施方案中，Ra和Rb都为甲基。
在本发明的另一实施方案中，Rc为杂环烃基。合适地，Rc为吡咯烷基。
本发明的另一实施方案是式(I)化合物，其中：
R1选自：C2-C7烷基和-(CH2)n-C3-C6环烷基；
R2选自：C1-C3烷基；环丙基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3烷硫基；5-元杂芳基；5-元杂环烃基；卤素；羟基甲基；和-NRaRb；
R3选自：-NR4R5；卤素；苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；和杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R4选自：H；C1-C6烷基，其任选被一个或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R5选自：H；C1-C6烷基，其任选被一个或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；
或者R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成任选被一至三个R6基团所取代的杂环烃基；
每个R6独立地选自：C1-C6烷基，其任选被一至三个R7基团所取代；羟基；C1-C3烷氧基；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；杂环烃基；C3-C6环烷基；氧代基；氰基；-NRaRb；苯基；杂芳基；和卤素；
每个R7独立地选自：羟基；C1-C3烷氧基；卤素；苯基；氰基；-NRaRb；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；C3-C6环烷基，其任选被一个羟基、杂环烃基或-NRaRb所取代；杂环烃基；和杂芳基；
每个Ra独立地选自：H和C1-C3烷基；
每个Rb独立地选自：H和C1-C3烷基；
每个Rc独立地选自：C1-C3烷基；苯基；杂环烃基；和杂芳基；和
n为0-2的整数。
本发明的另一实施方案为式(I)化合物，其中：
R1为-CH2-环戊基；
R2选自：甲基；乙基；甲硫基；乙硫基；氟代甲基；二氟甲基；1-氟甲基；氯；环丙基；或甲氧基；
R3为-NR4R5；
R4选自：H；C1-C3烷基；环丙基；和任选被一个R6基团所取代的哌嗪基；
R5选自：H；C1-C6烷基，其任选被一个或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；
或者R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成任选被一至三个R6基团所取代的杂环烃基；
每个R6独立地选自：C1-C6烷基，其任选被一至三个R7基团所取代；羟基；C1-C3烷氧基；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；C(O)ORc；杂环烃基；C3-C6环烷基，其任选被一个-NRaRb或吡咯烷基所取代；氧代基；氰基；-NRaRb；苯基；杂芳基；和卤素；
每个R7独立地选自：羟基；C1-C3烷氧基；卤素；苯基；氰基；-NRaRb；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；C3-C6环烷基，其任选被一个羟基、杂环烃基或-NRaRb所取代；杂环烃基；和杂芳基，其任选被一个甲基、-NRaRb或羟基所取代；
每个Ra各自独立地选自：H和任选被一个羟基、甲氧基或二甲基胺所取代的C1-C3烷基；
每个Rb独立地选自：H和C1-C3烷基；和
每个Rc独立地选自：任选被一个甲氧基所取代的C1-C3烷基；苯基；杂环烃基；和杂芳基。
本发明化合物的具体实例包括下列化合物：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(甲氧基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1，3-噻唑烷-3-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-(甲氧基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3R)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[乙基(甲基)氨基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(环丁基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(环戊基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(3R)-3-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(3S)-3-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(2-异噁唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(3S)-3-羟基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(3R)-3-羟基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(环丙基氨基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(甲氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-6-(乙氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
1-(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺；
N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{[2-(二甲基氨基)乙基](甲基)氨基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(乙氨基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(甲氨基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3S)-3-羟基-1-吡咯烷基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(二甲基氨基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-(甲硫基)-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-{[2-(甲氧基)乙基]氨基}-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
1-[6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3R)-3-羟基-1-吡咯烷基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-氯-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-羟基乙基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-(甲氧基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
1-{6-氯-2-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺；
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；和
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；或其盐。
本发明的一个实施方案是化合物[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其盐。
本发明另一实施方案是化合物[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其盐。
本发明另一实施方案是化合物[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其盐。
本发明的另一实施方案是化合物[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其盐。
本发明的另一实施方案是化合物((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺或其盐。
化合物制备
根据式I的化合物使用常规的有机合成制备。合适的合成路线描述在下面的一般反应方案中。
本领域熟练技术人员将会理解，如果在此所述的取代基不与在此所述的合成方法相匹配，那么该取代基可以用合适的、对反应条件稳定的保护基保护。在反应工序中，所述的保护基可以在合适的时刻除去，以便得到所需中间体或目标化合物。合适的保护基以及使用这些合适的保护基保护和脱保护不同取代基的方法是本领域熟练技术人员公知的；其实例可以在T.Greene和P.Wuts，Protecting Groups in Chemical Synthesis(3rd ed.)，John Wiley &Sons，NY(1999)中找到。在有些情况下，可以特定地选择取代基以便在所使用的反应条件下是活性的。在这些情况下，所述的反应条件将所选的取代基转化成另一种取代基，该另一种取代基作为中间体化合物是有用的或者在目标化合物中是一种所需的取代基。
方案1
Figure BPA00001182153900221
如方案1中所示，(11)可通过下面方法制备：在碱如正丁基锂的存在下，使合适的酰氯(2)与手性试剂如(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷酮(Evans′手性噁唑烷酮)反应得到手性中间体(3)。在螯合剂如四氯化钛存在下，在溶剂如四氢呋喃中，用碱如二异丙基乙胺处理化合物(3)，随后加入亲电子试剂如苄氧基甲基氯，得到化合物(4)。化合物(4)向相应的羟基酸(7)的转化可通过下列一系列的反应完成：使用例如H2O2和氢氧化锂氧化裂解手性噁唑烷酮分别得到中间体(5)，随后通过氢解得到中间体(7)。按照另一种两步的方法也可将化合物(3)转化为中间体(7)。对于该转化，可在螯合剂如四氯化钛存在下，在溶剂如四氢呋喃中，将(3)用碱如二异丙基乙胺处理，随后加入三噁烷或合适的另外的甲醛等价物(alternative formaldehyde equivalent)，得到化合物(6)，然后使用例如H2O2和氢氧化锂氧化裂解手性噁唑烷酮分别得到酸(7)。
在偶合剂如EDC和DMAP存在下使用苄氧基胺偶合酸(7)得到酰胺(8)。使用Mitsunobu条件可将其环化为氮杂环丁烷-2-酮(9)。在合适的溶剂中使用例如氢氧化锂水解氮杂环丁烷-2-酮(9)得到相应的酸(10)。化合物(10)向产物(11)的转化可使用合适的甲酰化试剂如甲酸/乙酸酐或甲酸甲酯，在纯的反应试剂中或在合适的溶剂如二氯甲烷中来完成。
方案2
Figure BPA00001182153900222
如方案2中所示，THP-保护的中间体(15)可通过下面方法制备：在合适的溶剂如乙醇中使用催化剂如10％Pd/C氢化氮杂环丁烷-2-酮(9)得到(12)。在酸催化剂如对甲苯磺酸吡啶鎓盐下，在合适的溶剂如二氯甲烷中，用二氢吡喃处理(12)得到THP-保护的氮杂环丁烷-2-酮(13)。使用例如氢氧化锂在合适的溶剂中水解氮杂环丁烷-2-酮(13)得到相应的酸(14)。化合物(14)向产物(15)的转化可使用合适的甲酰化试剂如甲酸/乙酸酐或甲酸甲酯，在纯的反应试剂中或在合适的溶剂如二氯甲烷中来完成。化合物(14)向产物(15)的转化也可在合适的溶剂如丙酮中使用5-甲基-2-硫代-[1，3，4]噻二唑-3-甲醛(Yazawa，Hisatoyo；Goto，Shunsuke；Tetrahedron Lett.26；31；1985；3703-3706)作为甲酰化试剂来完成。
中间体(15)也可根据文献方法[Bracken，Bushell，Dean，Francavilla，Jain，Lee，Seepersaud，Shu，Sundram，Yuan；PCT Int.Appl.(2006)，WO 2006127576A2]制备。
方案3
如方案3中所示，使用条件如EDC-HOAt-NMM将手性酸(11或15)与嘧啶基肼(16，R2＝烷基、卤素、H)偶合得到酰肼(17或18)。最后进行脱保护基反应(当P为Bn时，使用催化剂如10％Pd/C，在合适的溶剂如乙醇中，进行氢解；当P为THP时，在室温或40℃下使用80％乙酸-水处理)，得到其中R2＝烷基、卤素、H的最终所需的化合物(1)。
本领域一般技术人员根据文献方法可制备通式结构(16)的肼。下面的肼(16)的具体结构的实例以及用于生成它们的合成方法只是用于解释说明并不构成对本发明范围的限制。
其中R2为烷基且R3为氨基(R4R5N)的肼(24)可由合适的前体按照方案4中所述的方法制备。
方案4
Figure BPA00001182153900241
如方案4中所示，R2为氢或烷基的肼(24)可根据下面方法制备：使市售可得的氟代丙二酸酯(19)与合适的脒(20)在碱性条件下进行缩合，得到嘧啶酮(21)。脒(20)是市售可得的或可由本领域一般技术人员根据文献方法制备得到。使用POCl3处理嘧啶酮(21)得到二氯嘧啶(22)。在室温下在合适的溶剂如甲醇或DMSO中使用所需的胺R4R5NH处理二氯嘧啶(22)，随后在合适的溶剂如DMSO中，通常使用加热进一步用肼一水合物处理，然后得到其中R2为氢或烷基的所需的产物(24)。
式(30)的肼[(16)，其中R2＝氯]可按照方案5或6所示的方法制备。
方案5
Figure BPA00001182153900242
在碱性条件下使市售可得的氟代丙二酸酯(19)与脲缩合得到嘧啶酮(25)。将嘧啶酮(25)用POCl3处理得到三氯嘧啶(26)。在室温下在合适的溶剂如THF中用Boc-保护的肼和二异丙基乙胺处理三氯嘧啶(26)，得到中间体(27)。在二异丙基乙胺和DMAP存在下，在合适的溶剂如二氯甲烷中，进一步用焦碳酸二叔丁酯(di-t-butyl dicarbonate)处理，然后得到所需的三-Boc-保护的产物(28)。在合适的溶剂如DMF中使用胺R4R5NH处理(28)，得到嘧啶(29)，并在酸性条件下对(29)进行脱保护基，随后进行碱性条件的后处理，得到所需的肼(30)。
或者，式(30)的肼可按照方案6中所示的制备。
方案6
在室温下，在合适的溶剂如DMSO中，用所需的胺R4R5NH处理三氯嘧啶(26)，随后进一步用肼一水合物处理并加热，得到所需的产物(30)以及区域异构(regioisomeric)产物(32)。这两个区域异构体通常可通过色谱法如HPLC分离。
其中R2为甲硫基或甲氧基的最终化合物(1)可按照方案7中所示的制备。
方案7
Figure BPA00001182153900252
在碱性条件下，将市售可得的氟代丙二酸酯(19)与O-甲基异脲半硫酸盐或S-甲基异硫脲半硫酸盐进行缩合，得到嘧啶酮(33)，其中R2分别为甲氧基或甲硫基。用POCl3处理嘧啶酮(33)得到二氯嘧啶(34)。在合适的溶剂如甲醇中用肼一水合物处理二氯嘧啶(34)，得到嘧啶基肼(35)，然后使用条件如EDC-HOAt-NMM将其与酸(11)或(15)偶合，得到中间体(36)。将R4R5NH加入到中间体(36)中，得到O-Bn-保护的或O-THP-保护的产物(37)。当P为Bn时，最终的脱保护基的反应通过在合适的溶剂如乙醇中，使用催化剂如10％Pd/C进行氢解；或者当P为THP时，在室温下或40℃下用80％乙酸-水处理，得到其中R2分别为甲氧基或甲硫基的最终的所需化合物(1)。
胺R4R5NH可购自商业上可获得的来源，由本领域的一般技术人员根据文献方法制备，或按照文中实施例中所述的方法制备。
使用方法
本发明的化合物是细菌的肽脱甲酰化酶(PDF)的抑制剂，并因此能够抑制细菌生长。这些化合物能用于治疗其中所述的潜在病状(至少在某种程度上)可归因于(即原因为)多种原核生物的感染性疾病。实例包括但不限于源自下列的革兰氏阳性和革兰氏阴性需氧和厌氧细菌：链球菌属(Streptococcus)例如肺炎链球菌(S.pneumoniae)和酿脓链球菌(S.pyogenes)，葡萄球菌属(Staphylococcus)例如金黄色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)和腐生葡萄球菌(S.saprophyticus)，莫拉菌属(Moraxella)例如粘膜炎莫拉氏菌(M.catarrhalis)，嗜血杆菌属(Haemophilus)例如流感嗜血菌(H.influenzae)，奈瑟氏菌属(Neisseria)，枝原体属(Mycoplasma)例如肺炎枝原体(M.pneumoniae)，军团菌属(Legionella)例如嗜肺军团菌(L.pneumophila)，衣原体属(Chlamydia)例如肺炎衣原体(C.pneumoniae)，拟杆菌属(Bacteroides)，梭菌属(Clostridium)，梭杆菌属(Fusobacterium)，丙酸杆菌属(Propionibacterium和消化链球菌属(Peptostreptococcus)。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由链球菌属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由肺炎链球菌或酿脓链球菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由葡萄球菌属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌或腐生葡萄球菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由莫拉菌属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由粘膜炎莫拉氏菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由嗜血杆菌属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由流感嗜血菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由奈瑟氏菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由枝原体属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由肺炎枝原体所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由军团菌属所引起的感染细菌，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由嗜肺军团菌所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由衣原体属所引起的细菌感染，更合适地，本发明的化合物可用于治疗由肺炎衣原体所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由拟杆菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由梭菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由梭杆菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由丙酸杆菌属所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗由消化链球菌属所引起的细菌感染。
本发明的化合物也可用于治疗由对β-内酰胺、喹诺酮、大环内酯类、酮内酯类、糖肽和噁唑烷酮类抗生素耐药的细菌所引起的细菌感染。抗细菌感染的药物包括但不限于对青霉素、大环内酯或左氧氟沙星耐药的肺炎链球菌；对甲氧西林或大环内酯耐药、以及对万古霉素中度耐药的金黄色葡萄球菌；对甲氧西林耐药的表皮葡萄球菌；和对噁唑烷酮耐药的金黄色葡萄球菌。
本发明的化合物可用于治疗哺乳动物特别是人中的细菌感染。这种感染包括但不限于耳朵感染、鼻窦炎、上呼吸道和下呼吸道感染、生殖器感染、皮肤和软组织感染和细菌性心内膜炎。本发明的化合物也可用于预防哺乳动物特别是人中的细菌感染，如可能由医疗和牙科程序所引起的细菌感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗耳朵感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗鼻窦炎。
合适地，本发明的化合物可用于治疗上呼吸道和下呼吸道感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗生殖器感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗皮肤和软组织感染。
合适地，本发明的化合物可用于治疗细菌性心内膜炎。
本发明的治疗方法，特别是治疗感染性疾病包括细菌感染的方法包括给药于需要该治疗的患者有效量的式I化合物或其药学上可接受的盐。
本发明的一个实施方案提供了在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐给药于需要该治疗的人。
本发明的另一实施方案提供了在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括将[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐给药于需要该治疗的人。
本发明的另一实施方案提供了在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐给药于需要该治疗的人。
本发明的另一实施方案提供了在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括将[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐给药于需要该治疗的人。
本发明的另一实施方案提供了在人中治疗细菌感染的方法，所述方法包括将((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐给药于需要该治疗的人。
如文中所用的“感染性疾病”指的是其特征在于存在有微生物感染如细菌感染的任何疾病。
在此所使用的″治疗″与疾病有关，是指：(1)改善或预防疾病或疾病的一个或多个生物学表现，(2)干涉(a)生物学级联(biological cascade)的一个或多个点，其引起疾病或是造成疾病的原因或(b)疾病的一个或多个生物学表现，(3)减轻与疾病有关的一个或多个症状或影响，或(4)减缓疾病的进展或疾病的一个或多个生物学表现。
如上所述的疾病的″治疗″包括该疾病的预防。本领域熟练技术人员将会理解，″预防″不是绝对的术语。在医学中，″预防″被理解为是指预防性给予药物以显著削弱疾病或其生物学表现的可能或严重程度，或延迟这种疾病或其生物学表现的发病。
在此所使用的关于本发明化合物的″有效量″是指在正确的医学判断范围内，足以治疗患者的疾病但同时足够低以避免严重副作用(合理的益处/风险比)的化合物数量。化合物的有效量将随所选择的具体化合物(例如考虑该化合物的药效、效力和半衰期)；所选择的给药途径；所治疗的疾病；所治疗疾病的严重程度；所治疗患者的年龄、大小、体重和身体状态；所治疗患者的病史；治疗的持续时间；联合治疗的性质；所需的治疗效果等因素而变化，但通常可由本领域熟练技术人员确定。
在此所使用的″患者″是指人或其它动物。
本发明的化合物可以通过任何合适的给药途径给予，包括全身性给药和局部给药。全身性给药包括口服给药、肠胃外给药、经皮给药、直肠给药和吸入给药。肠胃外给药是指除肠道给药、经皮给药或吸入给药以外的给药途径，并且典型地通过注射或输液给药。肠胃外给药包括静脉内、肌内和皮下注射或输液。吸入给药是指通过口腔或通过鼻通道吸入给药于患者的肺。局部给药包括施用于皮肤和眼内、阴道内和鼻内给药。
本发明的化合物可以给药一次，或根据给药方案，在规定的时间内以可变的时间间隔多次给药。例如，每日可以给药一次、二次、三次或四次。可以一直给予剂量，直到实现所需的疗效为止，或者无期限地给药以维持所需的疗效。本发明化合物的合适的给药方案取决于该化合物的药物动力学性质，例如吸收、分布和半衰期，其可以由本领域熟练技术人员确定。此外，对于本发明的化合物，合适的给药方案，包括这些给药方案的持续时间，将取决于所治疗的疾病、所治疗疾病的严重程度、所治疗患者的年龄和身体状态、所治疗患者的病史、同步疗法(concurrent therapy)的性质、所需的疗效等因素，这些都在本领域熟练技术人员知识和技术的范围内。本领域熟练技术人员可以进一步理解，考虑个体患者对给药方案的反应后，合适的给药方案可能需要调整，或者随时间由于个体患者需要的改变而调整。
典型的日剂量可以随所选择的具体给药途径而改变。对于口服给药来说，典型的日剂量为对于大约70kg体重的人，每天给药50mg-3g范围内的，合适地，100mg-2g范围内的本发明的化合物。
此外，可以前药的形式给予本发明的化合物。在此所使用的本发明化合物的″前药″是该化合物的功能衍生物，当将它给予患者时，其在体内最终释放出本发明的化合物。以前药的形式给予本发明的化合物可以使本领域熟练技术人员去做下列一个或多个：(a)改变化合物在体内的开始；(b)改变化合物在体内的作用持续时间；(c)改变化合物在体内的运输或分布；(d)改变化合物在体内的溶解度；以及(e)克服化合物的副作用或化合物所遇到的其它难点。用于制备前药的典型的功能衍生物包括修饰在体内化学或酶裂解的化合物。这些修饰，其包括磷酸酯、酰胺、酯、硫代酯、碳酸酯和氨基甲酸酯的制备，是本领域熟练技术人员公知的。
本发明还提供了在医学治疗特别是在细菌感染中使用的本发明的化合物。因此，另一方面，本发明涉及式I的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗细菌感染的药物中的用途。
如上所述，根据式I的化合物是PDF抑制剂，并可用于治疗细菌感染。根据式I的化合物的生物活性可使用合适的试验如那些测定PDF的酶活性的抑制作用的试验以及那些评价本发明化合物抑制体外或在感染的动物模型中的细菌生长的能力的试验来确定。
相比WO 03/101442中的实施例，本发明的某些实施例具有更高的体外抗菌活性(MIC和/或MIC90)和/或更好的体内效力。这些实施例包括但不限于下列这些化合物：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；和
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。
PDF IC50试验
PDF的酶活性是使用甲酸脱氢酶(FDH)-偶联测定法[Lazennec andMeinnel(1997)Anal.Biochem.244，180-182]测量的。一旦甲酸(formate)通过PDF从蛋氨酸中释放出来，其被FDH氧化，从而将一分子的NAD还原为NADH，并导致在340nm处的吸光度增加。通过将PDF加入到含有所有的其他反应组分的微量滴定板中以引发反应，并于25℃连续监测20分钟。金黄色葡萄球菌PDF(SaPDF)测定的最终反应组合物为50mM磷酸钾，pH 7.6，5单位/mL FDH，7mM NAD，5％DMSO，1nM SaPDF和2.9mM甲酰基-Met-Ala-Ser，在50μL的总体积中。在DMSO中完成抑制剂的系列稀释。反应试剂和测定方式与流感嗜血菌PDF相同，除了在最终反应组合物中甲酰基-Met-Ala-Ser是6mM以外。在肺炎链球菌PDF测定中，反应条件相似，但是含有30pM酶，2mM NAD和4mM甲酰基-Met-Ala-Ser。变化的甲酰基-Met-Ala-Ser浓度反映了使用不同的PDF同工酶的底物的KM值。通过拟合成下面的公式来确定IC50：％抑制＝100/1+(IC50/[I])s，其中s是坡度因子，I是抑制剂浓度，并且IC50是引起50％抑制的化合物浓度。
结果
实施例1-281的化合物抑制金黄色葡萄球菌、流感嗜血菌和肺炎链球菌的PDF活性为IC50s≤100nM。
抗菌活性试验：
使用临床实验室标准委员会(CCLS，以前称为NCCLS)推荐的方法(NCCLS文件M7-A6，″Methods for Dilution Susceptibility Tests for Bacteriathat Grow Aerobically-Approved Standard Sixth Edition″，2003)，通过肉汤微稀释测定全细胞抗菌活性。在从64到0.06μg/mL范围内的连续二倍稀释液中测试化合物。在试验中评价了12个菌株的组。该组含有下列实验室菌株：金黄色葡萄球菌Oxford，金黄色葡萄球菌WCUH29、粪肠球菌I、粪肠球菌7、流感嗜血菌Q1、流感嗜血菌NEMCl、粘膜炎莫拉氏菌1502、肺炎链球菌1629、肺炎链球菌N1387、肺炎链球菌Ery2、大肠杆菌7623(AcrABEFD+)和大肠杆菌120(AcrAB-)。测定最小抑制浓度(MIC)作为抑制可见生长的化合物的最低浓度。使用镜式读数器辅助确定MIC终点。
结果
实施例1-281中的每个化合物对至少一个上述所列出的生物具有最小抑制浓度(MIC)≤4μg/mL。除了粪肠球菌I和粪肠球菌7以外，对于上述所列出的所有生物的至少一种菌株，至少一个实施例具有MIC≤4μg/mL；而对于粪肠球菌I和粪肠球菌7，大多数实施例具有MIC≥16μg/mL。
具体实施例的抗菌活性数据(MIC以μg/mL为单位)在表2中给出。
表2
  实施例24*μg/mL   实施例63*μg/mL   实施例109μg/mL   实施例172μg/mL   实施例275μg/mL
  生物
  金黄色葡萄球菌Oxford   2   1   2   1，2   2，4
  金黄色葡萄球菌WCUH29   0.375   0.5   0.5   0.5   0.5，1
  粪肠球菌I   48   16   64，＞64   16   32，64
  粪肠球菌7   32   64   ＞64   8，64   16，64
  流感嗜血菌Q1   0.5   0.25   0.5   1，2   0.5，1
  流感嗜血菌NEMC1   1   0.5   1   1，2   1
  粘膜炎莫拉氏菌1502   0.375   0.125   0.25   ≤0.06，0.125   0.25
  肺炎链球菌1629   0.75   0.5   0.5   0.5   1
  肺炎链球菌N1387   0.5   0.25   0.25   0.125   0.5
  肺炎链球菌ERY2   0.375   0.25   0.25   0.125-0.25   0.5
  大肠杆菌7623AcrABEFD+   16   4   8   4，16   4，16
  大肠杆菌120AcrAB-   0.1875   0.25   ≤0.06，0.125   0.125-0.5   ≤0.06，0.5
  对12个菌株的组进行测试的总次数   6   13   2   2   2
*MIC数据以所获得的所有结果的中值表示。
感染的动物模型
所有的操作根据GSK动物管理和使用委员会(Institutional Animal Careand Use Committee)批准的试验设计进行，并且符合或超出了美国实验动物管理与评估协会(American Association for the Accreditation of Laboratory AnimalCare)(AAALAC)、美国卫生及公共服务部(United States Department of Healthand Human Services)和所有的地方和联邦的动物福利法的标准。
具有流感嗜血菌或肺炎链球菌的大鼠呼吸道感染(RTI)模型
在该模型中，通过将在100μL琼脂中的2-3x106细菌CFU/大鼠直接支气管内滴注到肺部[G.Smith(1991)Lab Animals vol 25，46-49]来将麻醉的大鼠(雄性Sprague Dawley[Cr1：CD(SD]100g)(Charles River)感染。从感染后1小时开始，通过每天两次共4天经口灌胃(oral gavage)不同量的化合物(范围为37.5至300mg/kg的2-倍稀释液)来给药于动物(每组n＝6)。按照相同的方案以稀释液给药于对照动物。在感染后96小时使大鼠安乐死，并无菌移出肺，并将肺在1mL的无菌盐水中使用stomacher仪器匀浆。在无菌盐水中制备10倍连续稀释液以计算存活的细菌数。已经显示该大鼠肺感染模型能够预测人中的由肺炎链球菌所引起的社会获得性肺炎(CAP)的效力[Hoover J.L.，C.Mininger，R.Page，R.Straub，S.Rittenhouse，and D.Payne.(2007).AbstractA-17.Proceedings of the 47th ICAAC，Chicago，Illinois]。
皮肤和软组织感染(SSTI)的鼠腹股沟金黄色葡萄球菌脓肿模型
在该模型中，通过皮下方式在腹股沟区域使麻醉的小鼠(雄性CD1，20g)(Charles River)感染半固态琼脂中的金黄色葡萄球菌(1x106CFU/小鼠)(Jarvest，R.L.，Berge，J.M.，Berry，V.，Boyd，H.F.，Brown，M.J.，Elder，J.S.，Forrest，A.K.，Fosberry，A.P.，Gentry，D.R.，Hibbs，M.J.，Jaworski，D.D.，O’Hanlon，P.J.，Pope，A.J.，Rittenhouse，S.Sheppard，R.J.，Slater-Radosti，C.andWorby，A.(2002)J.Med Chem.，45，1959-1962)。从感染后1小时开始，通过每天两次经口灌胃(oral gavage)不同量的化合物(范围为37.5至300mg/kg的2-倍稀释液)来给药于动物(每组n＝6)。按照相同的方案以稀释液给药于对照动物。在感染后96小时使小鼠安乐死，无菌移出脓肿并匀浆。在无菌盐水中制备10倍连续稀释液以计算存活的细菌数。
结果
已经证明了文中所述的一些实施例化合物在一个或多个上述感染的动物模型中经口给药的效果，相对于未处理的对照动物，实施例化合物将从肺或脓肿中回收的细菌数减少≥3log10CFU/mL。
组合物
在给药于患者之前，通常将本发明的化合物，但不是必须，配制成药物组合物。因此，在另一方面中，本发明涉及包含本发明化合物及一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
本发明的药物组合物可以以成批形式制备和包装，其中可以提取安全和有效量的本发明化合物，然后以粉剂或糖浆的形式给予患者。或者，本发明的药物组合物可以以单位剂型的形式制备和包装，其中每个物理上分开的单元含有安全和有效量的本发明化合物。当以单位剂型制备时，本发明的药物组合物典型地可以含有，例如，25mg-1.5g，合适地，100mg-500mg的本发明化合物。
本发明的药物组合物典型地含有一种本发明化合物。然而，在某些实施方案中，本发明的药物组合物可含有不止一种本发明化合物。例如，在某些实施方案中，本发明的药物组合物可含有两种本发明的化合物。此外，本发明的药物组合物可以任选进一步包含一种或多种其它的药学活性化合物。
在此所使用的″药学上可接受的赋形剂″是指药学上可接受的物质、组合物或载体(vehicle)，例如它们用于产生药物组合物的形状或一致性。当混入时，每种赋形剂必须与药物组合物中的其它组分相容，这样将避免当给药于患者时显著降低本发明化合物效力以及导致不是药学上可接受的药物组合物的相互作用。此外，每种赋形剂当然必须具有足够高的纯度，以使得它是药学上可接受的。
典型地，将本发明化合物和药学上可接受的一种或多种赋形剂配制成一种剂型，该剂型适合通过所需的给药途径给药于所述患者。例如，剂型包括适合于(1)口服给药例如片剂、胶囊、小胶囊、丸剂、锭剂、粉剂、糖浆、酏剂、悬浮液、溶液、乳剂、囊剂和扁囊剂；(2)肠胃外给药例如无菌溶液、悬浮液和重构(reconstitution)的粉剂；(3)经皮给药例如经皮贴片；(4)直肠给药例如栓剂；(5)吸入给药例如干粉、气雾剂、悬浮液和溶液；以及(6)局部给药例如乳剂、膏剂、洗液、溶液、糊剂、喷雾剂、泡沫和凝胶剂的那些剂型。
合适的药学上可接受的赋形剂将随所选择的具体剂型而改变。此外，可以选择合适的药学上可接受的赋形剂，以便它们在组合物中可起特定的作用。例如，可以选择某些药学上可接受的赋形剂，这些赋型剂能够促进生成均匀的剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，这些赋型剂能够促进生成稳定的剂型。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，一旦给予患者，它们能够促进本发明的一个或多个化合物从一种器官或身体的一部分携带或输送到另一器官或身体的另一部分。可以选择某些药学上可接受的赋形剂，它们能够增强患者的顺应性。
合适的药学上可接受的赋形剂包括下列类型的赋形剂：稀释剂、填料、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、成粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、调味剂、味道掩蔽剂、着色剂、抗结块剂、hemectants、螯合剂、增塑剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。本领域熟练技术人员将会理解，某些药学上可接受的赋形剂可以起不止一种作用，并且根据制剂中赋形剂量的多少以及制剂中存在的其它组分，可以起可供选择的作用。
本领域熟练技术人员能够选择合适的药学上可接受的赋形剂以合适的量用于本发明中。此外，本领域熟练技术人员可以从许多描述药学上可接受的赋形剂的地方获得资源并可用于选择合适的药学上可接受的赋形剂。实例包括Remington′s Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Company)，The  Handbook of Pharmaceutical Additives(Gower Publishing Limited)和The  Handbook of Pharmaceutical Excipients(the American PharmaceuticalAssociation and the Pharmaceutical Press)。
本发明的药物组合物使用本领域熟练技术人员已知的工艺和方法进行制备。在本领域中使用的一些通用方法描述在Remington′s Pharmaceutical  Sciences(Mack Publishing Company)中。
一方面，本发明涉及固体口服剂型如片剂或胶囊，其包含安全和有效量的本发明化合物和稀释剂或填料。合适的稀释剂和填料包括乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、山梨糖醇、淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶凝化的淀粉)、纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)、硫酸钙和磷酸氢钙。所述的口服固体剂型可以进一步包含粘合剂。合适的粘合剂包括淀粉(例如玉米淀粉、马铃薯淀粉和预胶凝淀粉)、明胶、阿拉伯胶、海藻酸钠、海藻酸、西黄蓍胶、瓜尔胶、聚维酮和纤维素及其衍生物(例如微晶纤维素)。所述的口服固体剂型可以进一步包含崩解剂。合适的崩解剂包括交聚维酮、淀粉羟基乙酸钠、交联甲羧纤维素、海藻酸和羧甲基纤维素钠。所述的口服固体剂型可以进一步包含润滑剂。合适的润滑剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙和滑石粉。
如果合适的话，可以对口服给药的剂量单位制剂进行微胶囊化。例如，通过将粒状物质包衣或包埋在聚合物、蜡等中，可以延长或维持该组合物的释放。
本发明化合物还可以与作为靶向药物载体的可溶性聚合物偶联。这些聚合物可以包括聚维酮、吡喃共聚物、聚羟丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羟乙基天冬酰胺苯酚或被棕榈酰残基取代的聚氧化乙烯多聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可以与在获得控制释放药物中使用的一类可生物降解的聚合物偶合，例如，聚乳酸、聚己内酯(polepsilon caprolactone)、多羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。
在另一方面中，本发明涉及液体口服剂型。口服液体如溶液、糖浆和酏剂可以以剂量单位形式制得，这样给定的数量中含有预定量的本发明化合物。糖浆可以通过将本发明化合物溶解在适当调味的水溶液中制得，而酏剂通过使用无毒性醇赋形剂制得。悬浮液可以通过将本发明化合物分散在无毒性赋形剂中进行配制。还可以加入增溶剂和乳化剂如乙氧基化异硬脂醇和聚氧乙烯山梨糖醇醚、防腐剂、调味添加剂如薄荷油或天然甜味料或糖精或其他人工甜味料等。
另一方面，本发明涉及肠胃外给药。适合于肠胃外给药的药物组合物包括含水和无水无菌注射液，其可以含有抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂和溶质，其使得所述制剂与所指定的接受者的血液等渗；并且含水和无水无菌悬浮液可以包括助悬剂和增稠剂。所述的组合物可以在单位-剂量或多剂量容器，例如密封的安瓿和药瓶中存在，并且可以在冻干(冷冻干燥)条件下存储，其仅需要在使用前立即加入无菌液体载体，例如注射用水。临时注射溶液和悬浮液可以由无菌粉剂、粒剂和片剂制备。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其含有[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。合适地，可将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐配制为用于口服给药，合适地，配制为液体或片剂形式，或者配制为用于肠胃外给药。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其含有[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。合适地，可将[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐配制为用于口服给药，合适地，配制为液体或片剂形式，或者配制为用于肠胃外给药。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其含有[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。合适地，可将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐配制为用于口服给药，合适地，配制为液体或片剂形式，或者配制为用于肠胃外给药。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其含有[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。合适地，可将[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐配制为用于口服给药，合适地，配制为液体或片剂形式，或者配制为用于肠胃外给药。
另一方面，本发明涉及药物组合物，其含有((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂。合适地，可将((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺或其药学上可接受的盐配制为用于口服给药，合适地，配制为液体或片剂形式，或者配制为用于肠胃外给药。
多晶型
已发现3个具有特征的并可再制的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的固态多晶型。这三种多晶型为多晶型1、多晶型2和多晶型3。
多晶型1是可由[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺在醚、乙酸酯、酮、长链醇和其他溶剂系统(例如硝基甲烷、乙腈、2-丁酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙醚、庚烷、碳酸二甲酯、叔丁基乙基醚、1-甲氧基-2-丙醇、2-甲氧基乙基醚、氯仿、氯代苯、四氢呋喃、甲苯、环己烷和环己酮)中的淤浆制备得到的晶型。
分析发现了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺在乙酸乙酯中的溶剂合物形式。乙酸乙酯溶剂合物的去溶剂化作用可通过真空过滤完成，并得到多晶型1。
多晶型2是可由[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺在水中的淤浆制备得到的晶型。
多晶型3是可由[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺在纯净的小分子醇系统如甲醇、1-丙醇和1-丁醇中的淤浆制备得到的晶型。虽然确切的水含量的阀值没有确定，但这些醇必须几乎不含或完全不含有水含量以避免生成多晶型2。将多晶型1加热至高于132℃(但不高于～185℃，其将导致化合物分解)会引起由多晶型1向多晶型3的放热的固体形式的转化。
本发明提供了基本上为纯的形式的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1、多晶型2或多晶型3。本发明还提供了[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的混合物，其包括多晶型1、多晶型2和多晶型3中的两种或更多种。在一个实施方案中，该混合物可包括多晶型1和多晶型2。该混合物可包括1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、75、80、85、90、95、97或大于约99％的多晶型1或多晶型2。在另一实施方案中，该混合物可包括多晶型2和多晶型3。该混合物可包括1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、75、80、85、90、95、97或大于约99％的多晶型2或多晶型3。在另一实施方案中，该混合物可包括多晶型1和多晶型3。在另一实施方案中，该混合物可包括1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、75、80、85、90、95、97或大于约99％的多晶型1或多晶型3。
在本发明的一个实施方案中，组合物可含有1、2、3、4、5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、75、80、85、90、95、97或大于约99％的单个多晶型，其可为多晶型1、多晶型2或多晶型3。
本发明的另一实施方案为基本上纯的晶体形式的多晶型1、多晶型2或多晶型3。
众所周知，化合物的晶体状态可通过不同的结晶学参数描述：晶胞大小、空间群和相对于其晶胞的原点位置的化合物中原子的原子位置。这些参数是通过晶体x-射线分析实验确定的。有可能化合物形成不止一种类型的晶体。这些不同的晶型被称为多晶型。
多晶型1、多晶型2和多晶型3可通过固态形式的X-射线粉末衍射(XRPD)区分，正如文中的图6至8中分别示出了多晶型1至3。FT-IR、FT-拉曼、差示扫描量热法(DSC)和热重量分析(TGA)数据也可用于帮助区分文中所示和所述的固态多晶型。
多晶型的粉末X-射线衍射图的特征峰位置以角位置(2θ)记录，并具有通常约0.1+/-°2-θ的容许偏差。由于校正、设置的差异和其它仪器之间的变化以及不同操作者之间的操作，整个图形峰或大多数图形峰也可移位约0.1+/-°。
使用文中所述的方法，在Bruker AXS PXRD General Area DetectorDiffraction system上获得文中所述的XRPD数据。特征的XRPD角和d-间距记录在下表1中。
因此，多晶型1的特征在于可能存在任何一个、任何两个、任何三个、任何四个或任何五个或更多个2-θ角峰。
因此，多晶型2的特征在于可能存在任何一个、任何两个、任何三个、任何四个或任何五个或更多个2-θ角峰。
因此，多晶型3的特征在于可能存在任何一个、任何两个、任何三个、任何四个或任何五个或更多个2-θ角峰。
任何一个、任何两个、任何三个、任何四个或任何五个或更多个的类似特征也可归因于下表1所示的d-间距/埃。
表1
使用文中所述的方法，使用Thermo Magna MidIR系统记录固体形式的多晶型的FT-IR谱图。由于所用的特定的光谱仪和分析者的样品制备技术，可以预料到所观察的峰会有少许的偏差。下面记录的每个峰归属中显示了一些误差范围。在峰归属中的误差范围为大约+/-1cm-1。
在1035+/-1cm-1、1059+/-1cm-1、1114+/-1cm-1、1155+/-1cm-1、1173+/-1cm-1、1347+/-1cm-1、1416+/-1cm-1、1443+/-1cm-1、1603+/-1cm-1和1656+/-1cm-1处观察到多晶型1的IR峰。合适地，多晶型1显示出这些特征峰中的任何一个、任何两个、任何三个、任何四个或任何五个或更多个峰。
在1036+/-1cm-1、1114+/-1cm-1、1152+/-1cm-1、1172+/-1cm-1、1310+/-1cm-1、1414+/-1cm-1、1441+/-1cm-1、1570+/-1cm-1、1601+/-1cm-1和1662+/-1cm-1处观察到多晶型2的IR峰。合适地，多晶型2显示出这些特征峰中的任何一个、任何两个、任何三个、任何四个或任何五个或更多个峰。
图1和2分别图解了多晶型1和多晶型2的IR数据。
使用文中所述的方法，使用Thermo FT-Raman System 960光谱仪记录固体多晶型的FT-拉曼光谱。由于所用的特定的光谱仪和分析者的样品制备技术，可以预料到所观察的峰会有少许的偏差。下面记录的每个峰归属中显示了一些误差范围。在峰归属中的误差范围为大约+/-1cm-1。
在506+/-1cm-1、760+/-1cm-1、796+/-1cm-1、884+/-1cm-1、1180+/-1cm-1、1305+/-1cm-1、1449+/-1cm-1、1606+/-1cm-1、1674+/-1cm-1和2935+/-1cm-1处观察到多晶型1的拉曼峰。合适地，多晶型1显示出这些特征峰中的任何一个、任何两个、任何三个、任何四个或任何五个或更多个峰。
在273+/-1cm-1、483+/-1cm-1、507+/-1cm-1、764+/-1cm-1、847+/-1cm-1、1179+/-1cm-1、1228+/-1cm-1、1446+/-1cm-1、1673+/-1cm-1和2932+/-1cm-1处观察到多晶型2的拉曼峰。合适地，多晶型2显示出这些特征峰中的任何一个、任何两个、任何三个、任何四个或任何五个或更多个峰。
在273+/-1cm-1、506+/-1cm-1、766+/-1cm-1、797+/-1cm-1、1176+/-1cm-1、1228+/-1cm-1、1302+/-1cm-1、1446+/-1cm-1、1672+/-1cm-1和2934+/-1cm-1处观察到多晶型3的拉曼峰。合适地，多晶型3显示出这些特征峰中的任何一个、任何两个、任何三个、任何四个或任何五个或更多个峰。
图3-5分别图解了多晶型1至多晶型3的拉曼数据。
使用文中所述的方法，使用TA Instruments Thermal Analysis System，Model DSC Q100获得多晶型的DSC热分析图。图9-11分别图解了多晶型1至多晶型3的数据。
通过DSC测定，在大约187℃、185℃和190℃多晶型1、2和3分别开始熔化。对于多晶型1(图9)，在132℃处的热事件相当于多晶型1至多晶型3的放热的固态形式的转化。
使用文中所述的方法，使用TA Instruments Thermal Analysis System，Model TGA Q500获得多晶型的痕量TGA图。图12-14分别图解了多晶型1至多晶型3的数据。
本发明的一个实施方案为多晶型1，其具有基本上如图6所示的X-射线粉末衍射图、图1的FT-IR谱图、图3的FT-拉曼光谱、图9的DSC热分析图以及图12的痕量TGA图。
本发明的另一实施方案为多晶型1，其特征在于X-射线衍射图包括以2θ角表示的峰，其中所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°、6.1+/-0.1°、6.9+/-0.1°、8.1+/-0.1°、9.5+/-0.1°、11.2+/-0.1°、12.9+/-0.1°、13.8+/-0.1°、15.6+/-0.1°和18.3+/-0.1°处的峰。合适地，多晶型1的特征在于X-射线衍射图包括在8.1+/-0.1°、9.5+/-0.1°、11.2+/-0.1°、12.9+/-0.1°、13.8+/-0.1°和15.6+/-0.1°处的峰。
本发明的另一实施方案为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1，其中所述多晶型的特征在于X-射线衍射图包括下列以2θ角表示的峰，其中：
a.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°处的峰；或
b.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°和6.1+/-0.1°处的峰；或
c.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°、6.1+/-0.1°和6.9+/-0.1°处的峰；或
d.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°、6.1+/-0.1°、6.9+/-0.1°和8.1+/-0.1°处的峰；或
e.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°、6.1+/-0.1°、6.9+/-0.1°、8.1+/-0.1°和9.5+/-0.1°处的峰；或
f.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°、6.1+/-0.1°、6.9+/-0.1°、8.1+/-0.1°、9.5+/-0.1°和11.2+/-0.1°处的峰；或
g.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°、6.1+/-0.1°、6.9+/-0.1°、8.1+/-0.1°、9.5+/-0.1°、11.2+/-0.1°和12.9+/-0.1°处的峰；或
h.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°、6.1+/-0.1°、6.9+/-0.1°、8.1+/-0.1°、9.5+/-0.1°、11.2+/-0.1°、12.9+/-0.1°和13.8+/-0.1°处的峰；或
i.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°、6.1+/-0.1°、6.9+/-0.1°、8.1+/-0.1°、9.5+/-0.1°、11.2+/-0.1°、12.9+/-0.1°、13.8+/-0.1°和15.6+/-0.1°处的峰；或
j.所述X-射线衍射图包括在4.1+/-0.1°、6.1+/-0.1°、6.9+/-0.1°、8.1+/-0.1°、9.5+/-0.1°、11.2+/-0.1°、12.9+/-0.1°、13.8+/-0.1°、15.6+/-0.1°和18.3+/-0.1°处的峰。
本发明的另一实施方案为药物组合物，其含有多晶型1以及药学上可接受的赋形剂。
本发明的另一实施方案为多晶型2，其具有基本上如图7所示的X-射线粉末衍射图、图2的FT-IR谱图、图4的FT-拉曼光谱、图10的DSC热分析图以及图13的痕量TGA图。
本发明的另一实施方案为多晶型2，其特征在于X-射线衍射图包括以2θ角表示的峰，其中所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°、13.2+/-0.1°、15.6+/-0.1°、18.3+/-0.1°、19.0+/-0.1°、20.6+/-0.1°、21.4+/-0.1°和26.7+/-0.1°处的峰。合适地，多晶型2的特征在于X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°、13.2+/-0.1°、15.6+/-0.1°、18.3+/-0.1°和19.0+/-0.1°处的峰。
本发明的另一实施方案为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2，其中所述多晶型的特征在于X-射线衍射图包括以2θ角表示的峰，其中：
a.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°处的峰；或
b.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°和9.5+/-0.1°处的峰；或
c.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°和12.3+/-0.1°处的峰；或
d.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°和13.2+/-0.1°处的峰；或
e.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°、13.2+/-0.1°和15.6+/-0.1°处的峰；或
f.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°、13.2+/-0.1°、15.6+/-0.1°和18.3+/-0.1°处的峰；或
g.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°、13.2+/-0.1°、15.6+/-0.1°、18.3+/-0.1°和19.0+/-0.1°处的峰；或
h.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°、13.2+/-0.1°、15.6+/-0.1°、18.3+/-0.1°、19.0+/-0.1°和20.6+/-0.1°处的峰；或
i.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°、13.2+/-0.1°、15.6+/-0.1°、18.3+/-0.1°、19.0+/-0.1°、20.6+/-0.1°和21.4+/-0.1°处的峰；或
j.所述X-射线衍射图包括在7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°、13.2+/-0.1°、15.6+/-0.1°、18.3+/-0.1°、19.0+/-0.1°、20.6+/-0.1°、21.4+/-0.1°和26.7+/-0.1°处的峰。
本发明的另一实施方案为药物组合物，其含有多晶型2以及药学上可接受的赋形剂。
本发明的另一实施方案为多晶型3，其具有基本上如图8所示的X-射线粉末衍射图、图5的FT-拉曼光谱、图11的DSC热分析图以及图14的痕量TGA图。
本发明的另一实施方案为多晶型3，其特征在于X-射线衍射图包括以2θ角表示的峰，其中X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°、9.1+/-0.1°、12.0+/-0.1°、12.8+/-0.1°、13.4+/-0.1°、16.0+/-0.1°、23.3+/-0.1°和27.6+/-0.1°处的峰。合适地，多晶型3的特征在于X-射线衍射图包括在7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°、9.1+/-0.1°、12.8+/-0.1°、13.4+/-0.1°和16.0+/-0.1°处的峰。
本发明的另一实施方案为[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型3，其中所述多晶型的特征在于X-射线衍射图包括以2θ角表示的峰，其中：
a.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°处的峰；或
b.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°和7.5+/-0.1°处的峰；或
c.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°和8.2+/-0.1°处的峰；或
d.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°和9.1+/-0.1°处的峰；或
e.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°、9.1+/-0.1°和12.0+/-0.1°处的峰；或
f.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°、9.1+/-0.1°、12.0+/-0.1°和12.8+/-0.1°处的峰；或
g.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°、9.1+/-0.1°、12.0+/-0.1°、12.8+/-0.1°和13.4+/-0.1°处的峰；或
h.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°、9.1+/-0.1°、12.0+/-0.1°、12.8+/-0.1°、13.4+/-0.1°和16.0+/-0.1°处的峰；或
i.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°、9.1+/-0.1°、12.0+/-0.1°、12.8+/-0.1°、13.4+/-0.1°、16.0+/-0.1°和23.3+/-0.1°处的峰；或
j.所述X-射线衍射图包括在6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°、9.1+/-0.1°、12.0+/-0.1°、12.8+/-0.1°、13.4+/-0.1°、16.0+/-0.1°、23.3+/-0.1°和27.6+/-0.1°处的峰。
本发明的另一实施方案为药物组合物，其含有晶型3以及药学上可接受的赋形剂。
实施例
下面的实施例对本发明进行解释。这些实施例不是用于限制本发明的范围，而是指导本领域熟练技术人员制备和使用本发明的化合物、组合物和方法。虽然描述了本发明的具体实施方案，但是本领域熟练技术人员将会理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以进行各种改变和改进。
如文中这些方法、方案和实施例中所用的符号以及常规术语都是与同期的科学文献例如the Journal of the American Chemical Society或the Journal ofBiological Chemistry中所用的相一致。标准的单字母或三字母缩写通常用于命名氨基酸残基，除非另外指出，假定其为L-构型。除非另外指出，所有的起始物料可由工业的供应厂商获得并不需进一步纯化即可使用。
所有有关的醚指的是乙醚；盐水指的是饱和的NaCl水溶液。除非另外指出，所有的温度以℃(摄氏度数)表示。除非另外指出，所有的反应都是在惰性气氛下于室温条件下进行，并且除非另外指出，所有溶剂为能得到的最高纯度。
在Varian VXR-300、Varian Unity-300、Varian Unity-400仪器、BruckerAVANCE-400、General Electric QE-300或Bruker AM 400谱仪上记录1HNMR(后文中也称为″NMR″)谱。化学位移以百万分之几(ppm，δ单位)表示。偶合常数是以赫兹(Hz)为单位。分裂模式描述了表观的多重性，并以如下表示：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、quint(五重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)。
质谱使用电喷雾电离，运行于开放入口的LC-MS系统。LC条件：10％至80％的CH3CN(0.018％TFA)3.0分钟，其中1.25分钟的保持，0.5分钟的再平衡；通过质谱、214nm处的紫外和散射光监测器(ELS)检测。柱：2.1X50mm Zorbax SB-C8。
对于制备型(prep)HPLC，将在1000μL MeOH、DMSO或DMF中的约100mg终产物以35mL/min的速度，注射到SunFire Prep C18 OBD 5um 30x75mm柱中，在10分钟内梯度从5％CH3CN的水溶液至95％CH3CN的水溶液，随后为90％CH3CN的水溶液保持1.9分钟。在Merck硅胶60(230-400目)上，或使用正相的Teledyne Isco Combiflash Companion，可弃去的Redi-Sep快速柱进行快速色谱法纯化。
中间体A
(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸
Figure BPA00001182153900461
部分A：
(4S)-苄基-3-(3-环戊基丙酰基)噁唑烷-2-酮
在-78℃下，向(S)-(-)-4-苄基-2-噁唑烷(25g，141mmol)的THF(350mL)溶液中滴加n-BuLi(56.4mL，2.5M的己烷溶液，141mmol)。在相同温度下搅拌60分钟后，将反应混合物用3-环戊基丙酰氯(21.6mL，141mmol)处理0.25小时。将反应混合物温热至室温，并搅拌过夜。将该反应用饱和的NH4Cl水溶液(320mL)终止。将水层用EtOAc(3x200mL)萃取。将合并的有机层干燥(MgSO4)并蒸发，得到(4S)-苄基-3-(3-环戊基丙酰基)噁唑烷-2-酮，为白色固体(42.4g，100％)。LCMS：(M+H)+：302.3。
部分B：
(4S)-3-((2R)-3-环戊基-2-{[(苯基甲基)氧基]甲基}丙酰基)-4-(苯基甲基)-1，3-噁唑烷-2-酮
在0℃下，在氮气下，向(4S)-苄基-3-(3-环戊基丙酰基)噁唑烷-2-酮(42.4g，141mmol)的二氯甲烷(500mL)溶液中以缓慢平稳的流量加入氯化钛(IV)(1M的DCM溶液，155mL，155mmol)。5分钟后，滴加二异丙基乙胺(27mL，155mmol)。于0℃搅拌1小时后，以缓慢平稳的流量将苄氧基甲基氯(TCI-America)(39mL，280mmol)加入到生成的烯醇钛(titanium enolate)中，并将混合物于0℃下保持3.5小时。然后将反应混合物用水(400mL)终止。将水层用二氯甲烷(150mLx2)萃取。将有机萃取物用饱和的NaHCO3洗涤，干燥(MgSO4)，并蒸发。将残余物用乙醚(2x)洗涤，并然后用己烷/乙醚研磨，得到2批量的(4S)-3-((2R)-3-环戊基-2-{[(苯基甲基)氧基]甲基}丙酰基)-4-(苯基甲基)-1，3-噁唑烷-2-酮，为淡黄色固体(42.7g，72％)。LCMS：(M+H)+：422.2。
部分C：
(4S)-3-[(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酰基]-4-(苯基甲基)-1，3-噁唑烷-2-酮
将(4S)-3-((2R)-3-环戊基-2-{[(苯基甲基)氧基]甲基}丙酰基)-4-(苯基甲基)-1，3-噁唑烷-2-酮(42.7g，0.1mol)在乙醇(800mL)和DMF(180mL)中的溶液使用10％Pd/C(4g)和氢气球催化氢化。24小时后通过LCMS测得该反应50％完成。将该反应用氮气吹扫，并通入新鲜的氢气球。再60小时后，将该反应再次用氮气吹扫，过滤，并除去滤液溶剂，得到(4S)-3-[(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酰基]-4-(苯基甲基)-1，3-噁唑烷-2-酮(33.1g，100％)。LCMS：(M+H)+：332.3。
部分D：
(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酸
将(4S)-3-[(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酰基]-4-(苯基甲基)-1，3-噁唑烷-2-酮(33.1g，0.1mol)在THF(330mL)和水(55mL)的混合物中搅拌，并冷却至0℃。加入30％过氧化氢(96mL，1mol)，随后加入氢氧化锂一水合物(8.4g，0.2mol)。将该反应温热至室温，并然后搅拌过夜。通过旋转蒸发除去THF。将含水残余物用二氯甲烷(3x100mL)洗涤，用6N HCl酸化，并用乙酸乙酯(4x100mL)萃取。将有机萃取物干燥(MgSO4)，并蒸发，得到(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酸，为澄清的无色油状物(18.5g，＞100％)。LCMS：(M+H)+：未检测。1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.3(br s，1H)，3.79(d，J＝5.83Hz，2H)，2.64-2.71(m，1H)，1.45-1.87(m，9H)，1.05-.14(m，2H)。
部分E：
(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)-N-[(苯基甲基)氧基]丙酰胺
在0℃下，向(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)丙酸(18.3g，106mmol)、O-苄基羟基胺盐酸盐(18.62g，117mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(28.5g，233mmol)在二氯甲烷(110mL)中的混合物中加入1-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐(22.3g，117mmol)。将混合物于0℃保持3小时。此后，加入500mL的1N冷的HCl水溶液，并将混合物再搅拌30分钟。将生成的白色固体沉淀通过过滤收集。将该沉淀用1N HCl、用水和用冷的DCM洗涤。在真空干燥器中干燥过夜，得到(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)-N-[(苯基甲基)氧基]丙酰胺(19.1g，65％)。LCMS：(M+H)+：278.1。
部分F：
(3R)-3-(环戊基甲基)-1-[(苯基甲基)氧基]-2-氮杂环丁酮
在0℃下，向(2R)-3-环戊基-2-(羟基甲基)-N-[(苯基甲基)氧基]丙酰胺(22.5g，81mmol)和三苯基膦(22.5g，97mmol)在THF(800mL)中的混合物中滴加偶氮二甲酸二异丙酯(18.9mL，97mmol)。将反应混合物于0℃保持45分钟，并然后蒸发。通过硅胶色谱法，使用己烷/EtOAc(95∶5)洗脱系统进行纯化，得到(3R)-3-(环戊基甲基)-1-[(苯基甲基)氧基]-2-氮杂环丁酮(16.9g，81％)。LCMS：(M+H)+：260.1。
部分G：
(2R)-3-环戊基-2-({[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸
将(3R)-3-(环戊基甲基)-1-[(苯基甲基)氧基]-2-氮杂环丁酮(20g，77.1mmol)和LiOH·H2O(32.4g，0.77mol)在THF/水(500mL/170mL)中的混合物在室温下搅拌36小时。向该反应混合物中加入6M HCl(130mL)，并然后加入1N NaOH直至获得中性的pH。分离各层，并将水层用EtOAc萃取一次。将合并的有机物干燥(MgSO4)，并浓缩，得到(2R)-3-环戊基-2-({[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(22.85g，＞100％)，为透明无色油状物。LCMS：(M+H)+：277.9。
部分H：
(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸
在氮气氛下，将甲酸(192mL，5mol)溶于CH2Cl2(450mL)中，并冷却至0℃。然后加入乙酸酐(73mL，0.77mol)，并将反应混合物搅拌45分钟。此后，加入(2R)-3-环戊基-2-({[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(22.85g粗物质，推测(assumed)77.1mmol)的CH2Cl2(450mL)溶液，并将生成的混合物在0℃下搅拌1.5小时。然后除去挥发物，将粗的残余物溶于EtOAc(500mL)中，并将混合物用盐水(4X100mL)洗涤。将有机物干燥(MgSO4)，并浓缩，得到(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(23.5g，100％)，为粘稠的浆状物。LCMS：(M+H)+：306.1。
(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸，二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物可按照下面的方法制备：
向(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(25.9h，85mmol)的乙醚(85mL)溶液中加入二异丙基乙胺(19.7mL，113mmol)，并将混合物在室温下搅拌大约3小时。然后将反应混合物用另外的乙醚(85mL)和水(400mL)稀释。分离各层，并将有机层用水/盐水混合物(250mL水中加入30mL盐水，以及200mL水中加入30mL盐水)萃取两次以上。然后将合并的水层用40％异丙醇的氯仿溶液(3x300mL)萃取。将合并的异丙醇/氯仿层干燥(Na2SO4)，过滤并蒸发，得到2(R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸，二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物(30.29g)，为透明的米黄色油状物。LCMS：(M+H)+：306.2。
中间体B
(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸
Figure BPA00001182153900501
部分A：
(3R)-3-(环戊基甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-2-氮杂环丁酮
将(3R)-3-(环戊基甲基)-1-[(苯基甲基)氧基]-2-氮杂环丁酮(100g，386mmol)溶于乙醇(1.2L)中，并将该溶液除气。加入Pd/C(10％，干燥的，8g)，并将悬浮液用氢气吹扫，并在氢气氛(气球)下搅拌直至通过LC-MS表明反应完成(大约6小时)。然后将悬浮液用氮气鼓泡，通过Celite硅藻土过滤，并蒸发至干。将生成的固体再溶于CH2Cl2(1L)中，并加入二氢吡喃(70mL，767mmol)，随后加入对甲苯磺酸吡啶鎓盐(pyridinium p-甲苯sulfonate)(PPTS，5％，4.85g)。将反应混合物在室温下搅拌3天，然后浓缩，并在硅胶上，使用10-20％乙酸乙酯的己烷溶液进行色谱纯化，得到(3R)-3-(环戊基甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-2-氮杂环丁酮，为无色液体(100％)。
部分B：
(2R)-3-环戊基-2-{[(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸
将(3R)-3-(环戊基甲基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)-2-氮杂环丁酮(68g，268mmol)溶于THF(1L)中，并置于装有内部热电偶、回流冷凝器和机械搅拌器的3-颈3L圆底烧瓶中。制备氢氧化锂一水合物(56.3g，1.34mol)的400mL H2O溶液，并通过加料漏斗滴加，同时剧烈搅拌。将反应混合物在室温下搅拌36小时，随后用H2O(350mL)稀释，并用己烷(300mL)洗涤。将有机层用H2O(100mL)萃取，并将合并的水层冷却至0℃，并用90分钟的时间小心地滴加2M柠檬酸(～525mL)进行酸化，同时保持内部温度低于10℃。将酸化的物质用乙酸乙酯(3x250mL)萃取，并将合并的有机层用水(2x)洗涤，经MgSO4干燥，过滤，并蒸发。加入苯(500mL)并蒸发，并将残余物真空干燥，得到(2R)-3-环戊基-2-{[(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(70.9g，98％)，为无色液体。
部分C：
(2R)3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸
在室温下，向(2R)-3-环戊基-2-{[(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(97.05g，358mmol)的丙酮(1.1L)溶液中加入5-甲基-2-硫代-[1，3，4]噻二唑-3-甲醛(57.3g，358mmol)(Tetrahedron Lett.1985，26，3703-3706)。当认为该反应完成时，真空除去丙酮。将残余物悬浮于己烷(320mL)和甲基-叔丁基醚(180mL)的混合物中，然后超声处理。10分钟后，滤除白色固体(可能为5-甲基-3H-[1，3，4]噻二唑-2-硫酮)，并将滤液真空蒸发，得到(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸，为淡黄色树胶状物质(124g，＞100％)。NMR表明产物中含有少量的MTBE和5-甲基-3H-[1，3，4]噻二唑-2-硫酮。
(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸也可根据文献的方法[Bracken，Bushell，Dean，Francavilla，Jain，Lee，Seepersaud，Shu，Sundram，Yuan；PCT Int.Appl.(2006)，WO 2006127576 A2]制备。
(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸，二异丙基乙胺盐可按照下面的方法制备：
将(2R)-3-环戊基-2-{[(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(39.45g，145mmol)在甲酸甲酯(300mL)和二异丙基乙胺(27.9mL，160mmol)中的溶液置于封闭管中，并于50℃加热4天。冷却至室温后，真空除去甲酸甲酯，并将剩余的残余物溶于乙醚中。将该乙醚溶液用水萃取，并分离各层。然后将水层用40％异丙醇的氯仿溶液反萃取(2X)。然后将合并的异丙醇/氯仿层真空浓缩，得到(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸，二异丙基乙胺盐(28g，含有残余量的氯仿和异丙醇)。
中间体C
4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶
Figure BPA00001182153900511
部分A：
5-氟-4，6-二羟基-2-甲基嘧啶
将200mL的25％wt甲氧基钠的甲醇溶液(0.84mol)用另外的200mL甲醇稀释。将乙脒-HCl(40g，0.42mol)加入到该甲氧基钠溶液中(形成白色沉淀)，随后加入氟代丙二酸二甲酯(70g，0.46mol)。将内容物在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩至干。将生成的残余物再溶于热的水(300mL)中。将水溶液冷却至室温后，慢慢加入浓HCl直至在pH约为5下形成结晶(细的白色棱晶(prisms))。滴加浓HCl直至pH为3，并然后将内容物过滤。将分离的晶体用1M HCl洗涤，并在真空下干燥，得到5-氟-4，6-二羟基-2-甲基嘧啶(65.5g，＞100％)。LCMS：(M+H)+：145。
部分B：
4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶
在120℃下，将5-氟-4，6-二羟基-2-甲基嘧啶(推测60g，0.42mol)用300mL的POCl3处理3小时。然后将反应混合物冷却至室温，并真空浓缩直至溶剂去除的速率慢慢达到小于1滴/秒的下降率(drop rate)。产物稍具有挥发性，并且过度的真空浓缩将减少产率。将粗的残余物倒入到粉碎的冰上，并将生成的浆料搅拌1小时，期间将溶液变为室温。滤出生成的黄色固体，用水洗涤，并进行短暂的空气干燥直至成为散粒(free flowing)。收集该固体，并置于覆盖有P2O5的水提取器中直至干燥，得到纯的4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(59g，79％)。LCMS：(M+H)+：181/183。
中间体D
4，6-二氯-2-乙基-5-氟嘧啶
部分A：
2-乙基-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮
在室温下，将丙酰胺盐酸盐(30.0g，276.3mmol)和氟代丙二酸二甲酯(41.4g，276.3mmol)的无水甲醇(400mL)溶液分批用固体NaOMe(45g，829mmol)处理。加入后，将白色悬浮液加热至85℃，并搅拌2小时。然后将溶剂蒸发至干。在剧烈搅拌下向该残余物中加入70mL的6N HCl溶液。将悬浮液搅拌10分钟直至残余物完全中和。将该白色沉淀通过过滤收集，并真空干燥，得到2-乙基-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮，为白色固体。LCMS：(M+H)+：159.0；(M+Na)+：181.1。在一些情况下，该产物可含有共同沉淀出来的NaCl，其使得产率超过理论值。在此情况下，将该含有NaCl的产物用于下一步骤中。
部分B：
4，6-二氯-2-乙基-5-氟嘧啶
将2-乙基-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(20g，126.6mmol)在POCl3(58mL，633mmol)中于125℃(油浴)加热2小时。将另外的68mL新制的POCl3加入到该热的溶液中。将生成的溶液再加热2小时，直至所有的原料耗尽。真空蒸馏(62℃-68℃)过量的POCl3，得到淡褐色的残余物。冷却至室温后，将残余物用50mL的CH2Cl2稀释，然后倒入到冰水(200mL)中。向该混合物中加入200mL的CH2Cl2，随后将混合物搅拌10分钟。分离两层后，将水层进一步用100mL的CH2Cl2萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，然后通过浅薄的硅胶填料(pad)过滤，然后将其用150mL的1％MeOH的CH2Cl2溶液洗涤。蒸发溶剂，得到4，6-二氯-2-乙基-5-氟嘧啶(21g，85％)，为淡黄色液体。LCMS：(M+H)+：未检测。
中间体E
[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
Figure BPA00001182153900531
部分A：
5-氟-6-羟基-2-甲硫基-4(1H)-嘧啶酮
在0℃(冰浴)下，向2-甲基-2-异硫脲硫酸盐(thiopseudourea sulfate)(41.7g，0.15mol)和氟代丙二酸二甲酯(45g，0.30mol)在MeOH(600mL)中的搅拌溶液中分批加入NaOMe(48.6g，0.90mol)。加入完成后，去除冰浴，并将反应混合物在室温下搅拌过夜。LCMS显示形成了所需的嘧啶酮产物。在真空下将反应混合物浓缩至接近干燥，用水(50mL)稀释，并用6N HCl(～150mL)酸化至～pH 2以沉淀产物。过滤后，将该固体用1N HCl(2x10mL)洗涤，并真空干燥，得到5-氟-6-羟基-2-甲硫基-4(1H)-嘧啶酮(35.7g，68％)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：177.3。
部分B：
4，6-二氯-5-氟-2-(甲硫基)嘧啶
将5-氟-6-羟基-2-(甲硫基)-4(1H)-嘧啶酮(35.7g，0.20mol)在POCl3(150mL)中的混合物于115℃加热3小时。冷却至室温后，将反应混合物慢慢倒入到冰水混合物(1500mL)中，并搅拌20分钟。将产物萃取到乙酸乙酯(3x800mL)中，并将合并的有机萃取物用水(2x1000mL)、盐水(1000mL)洗涤，并干燥(Na2SO4)。蒸发溶剂，得到4，6-二氯-5-氟-2-(甲硫基)嘧啶，为淡黄色固体(37.8g，89％)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分C：
4-氯-5-氟-6-肼基-2-(甲硫基)嘧啶
将4，6-二氯-5-氟-2-(甲硫基)嘧啶(16.8g，78.85mmol)和三乙胺(16.49mL，118.3mmol)溶于DMSO(200mL)中并搅拌。将混合物用冰水浴冷却至～5℃。向该溶液中缓慢地加入肼一水合物(4.59mL，94.62mmol)。加入完成后，将反应混合物温热至室温，并继续搅拌1小时。将反应混合物用水(500mL)稀释，并将水溶液用CH2Cl2(3x300mL)萃取。将合并的有机溶液用水(3x250mL)和盐水(250mL)洗涤，然后干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，得到4-氯-5-氟-6-肼基-2-(甲硫基)嘧啶，为红色泡沫状固体(9.70g，59％)。LCMS：(M+H)+：208.9。
部分D：
[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将4-氯-5-氟-6-肼基-2-(甲硫基)嘧啶(9.70g，46.5mmol)、(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(19.9g，46.5mmol)、HOAt(6.96g，51.2mmol)、EDCI(9.82g，51.2mmol)和N-甲基吗啉(25.6mL，232.5mmol)在DMF(300mL)中的混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用乙酸乙酯/己烷(3∶2，1L)稀释，并用水(3x500mL)洗涤，并将有机物干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。将残余物通过Gilson RP-HPLC(35-95％乙腈/水，8分钟梯度时间)纯化，得到[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为红色玻璃状物(12.89g，56.0％)。LCMS：(M+H)+：490.4。
中间体F
2，4，6-三氯-5-氟嘧啶
Figure BPA00001182153900551
部分A：
5-氟-6-羟基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮
将机械搅拌的脲(60.06g，1mol)和氟代丙二酸二甲酯(150.11g，1mol)的甲醇(1L)溶液用25wt％NaOMe的甲醇溶液(～4.6M，435mL，2mol)处理。将混合物回流3小时，并然后冷却至室温。将混合物过滤，将湿的滤饼溶于温暖的水(～1.2L)中，并将生成的水溶液用浓HCl水溶液(～160mL)酸化至pH＝2，同时搅拌超过1小时。将混合物冷却至室温，并将产物过滤，并用水彻底洗涤，然后真空干燥，得到5-氟-6-羟基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮(80g，55％)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：147.0。
部分B：
2，4，6-三氯-5-氟嘧啶
用30分钟的时间，在搅拌下将精细粉末状的5-氟-6-羟基-2，4(1H，3H)-嘧啶二酮(74g，0.507mol)分批加入到POCl3(232mL，2.5mol)中(放热)。加入完成后，将混合物保持在60℃下，同时通过注射器滴加N，N，-二甲基苯胺(65mL)。加入后，将混合物加热至100-110℃(内部温度)，直至判断该反应完成，通常为4-8小时。将混合物冷却，并通过在80-90℃下小心地真空蒸馏将大部分剩余的POCl3除去(在POCl3馏出物中可检测出一些产物)。将剩余的残余物倒入冰(～1L)中，并搅拌30分钟，然后用乙醚(1x400mL，2x150mL)萃取。将合并的萃取物用水和盐水洗涤，然后干燥(MgSO4)。过滤并常压蒸馏乙醚，得到粗产物，将其减压下蒸馏，得到产物(28.8g，28％)，为低熔点的白色结晶固体(b.p.80-85℃，12mm)。LCMS：(M+H)+：未检测。
中间体G
2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
Figure BPA00001182153900561
部分A：
2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯
在室温下，将2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(20.92g，104.1mmol)溶于THF(300mL)中并搅拌。向该搅拌溶液中加入肼基甲酸叔丁基酯(carbazate)(13.74g，104.1mmol)，随后加入二异丙基乙胺(19.0mL，109.3mmol)。反应混合物变为淡黄色，并且几分钟后，形成沉淀。1.5小时后通过TLC(10％EtOAc/Hex)监测反应完成。将反应混合物真空浓缩以除去大部分的THF，并将残余物溶于CH2Cl2(～400mL)中。将该溶液用～400mL饱和的NH4Cl水溶液洗涤。将有机物干燥并浓缩，得到淡黄色固体(31.37g)。LCMS：(M+H+2Na-Boc)+：241。
部分B：
2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)肼甲酸1，1-二甲基乙基酯(31.37g，推测104.1mmol)悬浮于CH2Cl2(400mL)中。将焦碳酸二叔丁酯(44.75g，205.0mmol)加入到该溶液中，随后加入二异丙基乙胺(36.3mL，208.2mmol)。当每个物料几乎都溶解时，缓慢地加入DMAP(1.27g，10.4mmol)。反应混合物变为淡红色，～5分钟后，观察到缓慢产生气泡。45分钟后，通过LCMS表明反应完成，并且混合物变成淡橙色。将反应混合物用～300mL饱和的NH4Cl洗涤，并弃去有机物。使用～1800mL Florsil在CH2Cl2中制备浆料，将其倒入到大的多孔漏斗上。然后将全部有机溶液倒出通过Florsil填料(pad)，用2L的CH2Cl2洗涤。在Florsil上留下红色的带，并且TLC表明产物已经从填料上洗脱完毕。将滤液浓缩成泡沫状无色油状物，将其在冰箱中结晶过夜(37.87g，73％，从2，4，6-三氯-5-氟嘧啶开始)。LCMS：(M+3H+2Na-3Boc)+：241。
中间体H
4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶
Figure BPA00001182153900571
部分A：
5-氟-2-(氟甲基)-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮
将2-氟-乙脒盐酸盐(11.2g，100mmol)和氟代丙二酸二甲酯(15g，100mmol)在无水甲醇(300mL)中用固体NaOMe(16.2g，300mmol)处理，并在搅拌下加热至50℃。当LCMS显示形成了所需的产物后，将溶剂蒸发至干，并将残余物用浓HCl(20mL)中和。通过过滤收集白色沉淀物，得到5-氟-2-(氟甲基)-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(100％产率)。LCMS：(M+H)+：163.1。
部分B：
4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶
将5-氟-2-(氟甲基)-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(6g，37mmol)悬浮于POCl3(20mL，222mmol)中，并于120℃搅拌2小时。蒸发过量的POCl3后，将残余物倒在冰上，并将生成的混合物用CH2Cl2萃取。将CH2Cl2溶液通过硅胶填料，并将生成的滤液浓缩，得到纯的4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶(6g，81％)，为无色液体。LCMS：(M+H)+：未检测。
中间体I
4，6-二氯-2-(二氟甲基)-5-氟嘧啶
Figure BPA00001182153900572
部分A
2，2-二氟乙脒.HCl
在0℃下，向搅拌的氯化铵(5.1g，95mmol)在甲苯(150mL)中的悬浮液中加入三甲基铝(46mL，2M，92mmol)，搅拌直至停止冒泡。加入二氟乙酸甲酯(2.38mL，27mmol)，并将生成的混合物于80℃搅拌过夜。冷却至0℃时，缓慢地加入甲醇，并将生成的溶液在低温下搅拌90分钟，形成固体。将其通过Celite硅藻土过滤，并将滤液蒸发，得到2，2-二氟乙脒.HCl(1.7g，485％)，为淡黄色固体。
部分B
2-(二氟甲基)-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮
将金属钠(0.91g，40mmol)溶于MeOH(100mL)中以形成甲氧基钠。加入2，2-二氟乙脒·HCl(1.73g，13mmol)，随后加入氟代丙二酸二甲酯(2.0g，13mmol)。将生成的溶液于80℃搅拌3小时，然后冷却至室温。加入HCl水溶液(6mL，6M，36mmol)，并将生成的混合物真空浓缩。将剩余的固体用冷水洗涤，并过滤得到2-(二氟甲基)-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(1.43g，61％)。
部分C
4，6-二氯-2-(二氟甲基)-5-氟嘧啶
将2-(二氟甲基)-5-氟-6-羟基-4(1H)-嘧啶酮(1.43g，8.0mmol)和POCl3(6mL)的混合物于110℃加热2.5小时。冷却至室温后，将反应混合物倒在冰上，并搅拌30分钟。将产物萃取到DCM中，并将合并的有机物用饱和的碳酸氢钠水溶液洗涤一次。将合并的有机物经硫酸钠干燥并真空浓缩。得到4，6-二氯-2-(二氟甲基)-5-氟嘧啶(460mg，27％)，为黄色油状物。
一般方法A
实施例1
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900581
部分A：
5-氟-4-肼基-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)嘧啶
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(100mg，0.55mmol)溶于2mL的DMSO中，并在室温下搅拌。加入吡咯烷(50μL，0.61mmol)，随后加入DIPEA(210μL，1.21mmol)。将生成的反应混合物搅拌2小时，并然后加入肼(1.0mL)，并将内容物于80℃加热1小时。然后将反应混合物冷却至室温，并通过RP-HPLC纯化，得到5-氟-4-肼基-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)嘧啶(69mg，59％)。
部分B：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)[(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将5-氟-4-肼基-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)嘧啶(69mg，0.33mmol)、(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(110mg，0.36mmol)和HOAt(49mg，0.36mmol)溶于2mL的DMF中。加入NMM(0.18mL，1.65mmol)，随后加入EDC(69mg，0.36mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)[(苯基甲基)氧基]甲酰胺(90mg，55％)。
部分C：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
将((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)[(苯基甲基)氧基]甲酰胺(90mg，0.18mmol)溶于3mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(18mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。将生成的滤液真空浓缩，得到纯的((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺(42mg，57％)。LCMS：(M+H)+：407.6。
一般方法B
实施例2
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
6-氮杂环丁烷基-2-乙基-5-氟-4-肼基嘧啶
将4，6-二氯-2-乙基-5-氟嘧啶(195mg，1.0mmol)溶于3mL的MeOH中，并在室温下搅拌。加入氮杂环丁烷(74μL，1.1mmol)，随后加入DIPEA(383μL，2.2mmol)。将生成的反应混合物在室温下搅拌，直至通过LCMS监测氮杂环丁烷取代了一个氯。然后，真空除去MeOH，并将剩余的残余物溶于2mLDMSO和1mL肼的混合物中。将生成的溶液于40℃加热1小时，直至通过LCMS认为该反应完成。将粗的反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到4-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-6-肼基嘧啶(136mg，64％)。LCMS：(M+H)+：212.1。
部分B：
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将4-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-6-肼基嘧啶(88mg，0.42mmol)、(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(140mg，0.46mmol)和HOAt(56mg，0.42mmol)溶于中3mL的DMF中。然后，加入NMM(71μL，0.65mmol)，随后加入EDC(75mg，0.40mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(160mg，76％)。LCMS：(M+H)+：499.4。
部分C：
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(160mg，0.32mmol)溶于10mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入5％Pd/C(40mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下搅拌，直至通过LCMS认为该反应完成。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。将生成的滤液真空浓缩，得到[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(100mg，76％)。LCMS：(M+H)+：409.2。
一般方法C
实施例3
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900611
部分A：
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
向加压管中加入[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.100g，0.204mmol)、氮杂环丁烷盐酸盐(19.1mg，0.204mmol)、DIPEA(71.2μL，0.408mmol)和DMSO(2mL)。将该管密封，并加热至65-70℃，同时搅拌3天。然后将反应混合物冷却至室温，并通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(68mg，65％)。LCMS：(M+H)+：511.2。
部分B：
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(68mg，0.13mmol)溶于AcOH/H2O(20mL，4∶1)混合物中，并在RT下搅拌，直至LCMS表明脱保护基完成(过夜)。将反应混合物在真空下浓缩至干，并通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(25mg，44％)。LCMS：(M+H)+：427.2。
一般方法D
实施例4
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900621
部分A：
2-氯-5-氟-4-肼基-6-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶
向2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(402mg，2.0mmol)的DMSO(3mL)溶液中加入DIPEA(0.52mL，3.0mmol)，随后加入N-甲基哌嗪(0.24mL，2.2mmol)。将该溶液在室温下搅拌。30min后，加入无水肼(1.29mL，99mmol)，并将生成的混合物于80℃加热30分钟。冷却至室温后，真空除去过量的肼，并将残余的溶液通过RP-HPLC纯化，得到推测为2-氯-5-氟-4-肼基-6-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶(第一次的洗脱液，44mg)以及推测为6-氯-5-氟-2-肼基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶(第二次的洗脱液，30mg)。LCMS：(M+H)+：261.1。
部分B：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将2-氯-5-氟-4-肼基-6-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶(31mg，0.12mmol)、(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(36mg，0.12mmol)、HOAt(20mg，0.144mmol)、EDC(28mg，0.144mmol)和NMM(26uL，0.144mmol)在DMF(2mL)中的混合物搅拌直至反应完成(2h)。然后将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(30mg，46％)。LCMS：(M+H)+：542.3；(M+Na)+：564.3。
部分C：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(30mg)在4∶1 AcOH∶水(4mL)中的溶液在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，并将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(12mg，47％)。LCMS：(M+H)+：458.3。
一般方法E
实施例5
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900631
部分A：
2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
在0℃下，向剧烈搅拌的异丙胺(83μL，1.21mmol)的DMF(6mL)溶液中加入DIPEA(0.24mL，1.33mmol)，随后立即加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(600mg，1.21mmol)。当通过LCMS确定该反应完成时，将反应混合物用乙醚(～40mL)稀释，并用水(3x40mL)洗涤。将合并的三个水层用乙醚反萃取一次，并然后将合并的有机物干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。将该粗产物通过快速色谱法(Combiflash，5-60％乙酸乙酯/己烷，1％三乙胺)纯化，得到2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(597mg，95％)。LCMS：(M+H)+：520.2。
部分B：
2-氯-5-氟-6-肼基-N-(1-甲基乙基)-4-嘧啶胺
将2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(597mg，1.15mmol)的MeOH(5mL)溶液和4.0M HCl的二噁烷溶液(5mL)在室温下搅拌过夜。滤除沉淀后，真空除去溶剂，得到粗的2-氯-5-氟-6-肼基-N-(1-甲基乙基)-4-嘧啶胺，推测为三-HCl盐。LCMS：(M+H)+：219.9。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(268mg，0.88mmol)、2-氯-5-氟-6-肼基-N-(1-甲基乙基)-4-嘧啶胺(推测253mg的游离碱，0.97mmol)、EDC(186mg，0.97mmol)、HOAt(132mg，0.97mmol)和NMM(0.64mL，5.82mmol)在DMF中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物通过反相HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(74mg，17％)。LCMS：(M+H)+：507.1。
部分D：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(74mg，0.15mmol)溶于5mL的MeOH中。加入Pd(OH)2(30mg)，并将内容物在氢气球下搅拌大约90分钟。然后将内容物过滤以除去催化剂，并将滤液真空浓缩。将生成的粗产物通过反相HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(32mg，51％)。LCMS：(M+H)+：417.0。
一般方法F
实施例6
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
部分A：
4-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(181mg，1.0mmol)溶于4mL的DMSO中，并在室温下搅拌。加入3-吡咯啉(71mg，1.05mmol)，随后加入DIPEA(244μL，1.4mmol)。将生成的反应混合物搅拌，直至第一个氯被取代，然后将肼(350μL)和MeOH(～2mL)加入到该反应混合物中。然后将内容物于70℃加热～2小时，直至第二个氯被取代。然后将反应混合物冷却至室温，并通过RP-HPLC纯化，得到4-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶(142mg，68％)。
部分B：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将4-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶(142mg，0.68mmol)、(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(242mg，0.81mmol)和HOAt(110mg，0.81mmol)溶于4mL的DMF中。加入NMM(370μL，3.4mmol)，随后加入EDC(155mg，0.81mmol)。当原料耗尽时，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(140mg，55％)。
部分C：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
将((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(140mg)的4∶1AcOH∶水(2mL)溶液在室温下搅拌，直至完成了脱保护基。真空除去溶剂，并将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺(68mg，58％)。LCMS：(M+H)+：407.3。
一般方法G
实施例7
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900661
部分A：
(1S，4S)-2-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷
将2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(2.01g，10mmol)溶于30mL的DMSO中，并在室温下搅拌。加入市售可得的(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐(2.74g，10mmol)，随后加入DIPEA(5.51mL，32mmol)。将生成的反应混合物搅拌2.5h，并然后加入肼(3.0mL)，并将内容物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到推测为(1S，4S)-2-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷(第一次的洗脱液)以及推测为4-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-2(1H)-嘧啶酮腙(第二次的洗脱液)。
部分B：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(1S，4S)-2-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷(170mg，0.62mmol)、(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(190mg，0.62mmol)和HOAt(93mg，0.68mmol)溶于4mL的DMF中。加入NMM(0.27mL，2.5mmol)，随后加入EDC(131mg，0.36mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(90mg，55％)。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(90mg，0.18mmol)溶于3mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(18mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。将生成的滤液真空浓缩，得到纯的[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(42mg，57％)。LCMS：(M+H)+：429.4。
实施例7也可根据下面的方法制备：
根据一般方法D，使用市售可得的(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐代替部分A中的N-甲基哌嗪，并使用3当量的部分A中的DIPEA，制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。
一般方法H
实施例8
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-(二氟甲基)-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
部分A：
2-(二氟甲基)-5-氟-4-肼基-6-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶
将4，6-二氯-2-(二氟甲基)-5-氟嘧啶(200mg，0.92mmol)溶于DMSO(5mL)中，并在室温下搅拌。加入N-甲基哌嗪(110μL，0.96mmol)，随后加入DIPEA(500μL，2.9mmol)。将生成的混合物在室温下搅拌1小时，直至通过LCMS确定N-甲基哌嗪取代了一个氯。加入肼(1mL，31mmol)，并将该反应在室温下搅拌过夜。将粗的反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到2-(二氟甲基)-5-氟-4-肼基-6-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶(142mg，56％)。LCMS：(M+H)+：277.0。
部分B：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-(二氟甲基)-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
将2-(二氟甲基)-5-氟-4-肼基-6-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶(142mg，0.51mmol)加入到(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(156mg，0.51mmol)的DMF(5mL)溶液中。向该混合物中加入HOAt(83mg，6.1mmol)、EDC(117mg，6.1mmol)和NMM(0.28mL，2.6mmo1)。将该反应搅拌过夜，并通过RP-HPLC分离生成的苄基保护的中间体。然后将该物质溶于除气的MeOH(5mL)中，并加入10％Pd/C(占中间体的20％w/w)。将生成的悬浮液在氢气球下搅拌3小时，随后过滤除去催化剂。真空浓缩，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-(二氟甲基)-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺(78mg，32％)。LCMS：(M+H)+：474.1。
实施例9
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900681
部分A：
4-氮杂环丁基-6-肼基-5-氟-2-甲基嘧啶
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(6g，33mmol)溶于50mL的iPrOH中，并在室温下搅拌。加入氮杂环丁烷-HCl(3.25g，35mmol)，随后加入14.4mL的DIPEA。将生成的反应混合物搅拌3h，并然后加入肼一水合物(4.0mL，82.5mmol)，并将内容物于80℃加热过夜。然后将反应混合物冷却至室温，并形成沉淀。将该沉淀过滤，用iPrOH洗涤，并干燥。将剩余的滤液倒入到250mL的水中，并用EtOAc(5x100mL)萃取。将合并的有机部分用水(2x100mL)和盐水(2x100mL)洗涤。将有机物经硫酸钠干燥，过滤，并真空浓缩。将该粗产物通过硅胶快速色谱法纯化，使用97.5/2.5/0.25DCM/MeOH/NH4OH作为洗脱剂。4-氮杂环丁基-6-肼基-5-氟-2-甲基嘧啶(沉淀+色谱分离的产物)全部合并的产量为3.6g(55％)。LCMS：(M+H)+：198。
部分B：
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将4-氮杂环丁基-6-肼基-5-氟-2-甲基嘧啶(2.3g，11.6mmol)、(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(3.54g，11.6mmol)和HOAt(1.9g，13.9mmol)溶于25mL的DMF中。加入DIPEA(6mL，34.8mmol)，随后加入EDC(2.75g，13.9mmol)。在室温下搅拌过夜后，将内容物倒入到400mL的水中(形成沉淀)，并用乙酸乙酯(4x200mL)萃取。将合并的有机级分用水(2x200mL)和盐水(3x200mL)洗涤，并然后经硫酸钠干燥，过滤并浓缩至干。将粗物质通过硅胶快速色谱法纯化，使用3％MeOH/DCM作为洗脱剂，得到[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(2.5g，44％)。LCMS：(M+H)+：485。
部分C：
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(3.9g，8.0mmol)溶于50mL的MeOH中，并用氩气除气。加入10％Pd/C(400mg)，并将内容物在氢气球下放置4.5小时。然后将内容物用氩气除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。将生成的滤液真空浓缩，得到纯的[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(3.1g，98％)。LCMS：(M+H)+：395。
实施例10
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900701
根据一般方法A，使用市售可得的吗啉代替部分A中的吡咯烷制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：425.4。
实施例11
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(甲氧基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900702
根据一般方法A，使用市售可得的N，O-二甲基羟基胺盐酸盐代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(甲氧基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：399.2。
实施例12
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1，3-噻唑烷-3-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900703
根据一般方法A，使用市售可得的噻唑烷代替部分A中的吡咯烷制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1，3-噻唑烷-3-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：427.4。
实施例13
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-(甲氧基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900711
根据一般方法A，使用市售可得的3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-(甲氧基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：425.2。
实施例14
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3R)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900712
根据一般方法A，使用市售可得的(R)-3-羟基吡咯烷盐酸盐代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3R)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：439.2。
实施例15
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900721
根据一般方法A，使用市售可得的(S)-3-羟基吡咯烷盐酸盐代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：439.2。
实施例16
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900722
根据一般方法A，使用市售可得的异丙胺代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：397.4。
实施例17
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用市售可得的N-(2-甲氧基乙基)甲胺代替部分A中的吡咯烷制备{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：427.2。
实施例18
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[乙基(甲基)氨基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900731
根据一般方法A，使用市售可得的N-乙基甲胺代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[乙基(甲基)氨基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：397.4。
实施例19
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900732
根据一般方法A，使用市售可得的(S)-(+)-2-(羟基甲基)吡咯烷代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：440.2。
实施例20
[(2R)-3-{2-[6-(环丁基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900733
根据一般方法A，使用市售可得的环丁基胺代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-3-{2-[6-(环丁基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：409.4。
实施例21
[(2R)-3-{2-[6-(环戊基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用市售可得的环戊胺代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-3-{2-[6-(环戊基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：423.1。
实施例22
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(3R)-3-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900742
根据一般方法A，使用3(R)-吡咯烷甲醇(J.of Med.Chem.1987，30，1711-1715)代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(3R)-3-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：439.2。
实施例23
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(3S)-3-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用3(S)-吡咯烷甲醇(J.of Med.Chem.1987，30，1711-1715)代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(3S)-3-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：439.2。
实施例24
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900751
部分A：
N-(苯基甲基)-D-丝氨酸
根据WO2005058245的方法，将D-丝氨酸甲酯盐酸盐(98.84g，635.3mmol)在MeOH(280mL)中的混合物冷却至10℃。向该混合物中缓慢地加入三乙胺(88.5mL，635.0mmol)。将混合物温热至室温，并将生成的溶液冷却至10℃。向该溶液中加入苯甲醛(64mL，630.2mmol)，并将该溶液搅拌30分钟。用30min的时间，向该溶液中分批加入硼氢化钠(24.03g，635.2mmol)，并将混合物再搅拌30分钟。在单独的烧瓶中，将MeOH(114mL)加入水(170mL)中，并向该溶液中加入NaOH(77.25g，1931mmol)的水(155mL)溶液。将该溶液冷却至15℃，并用15分钟的时间将还原胺化的混合物缓慢地加入到NaOH-水-MeOH溶液中。将该溶液搅拌，并用30min的时间温热至室温，并加入水(170mL)，随后加入足量的6N的HCl水溶液以调节pH至9.5。将该溶液用EtOAc(2x60mL)洗涤，并加入足量的6N的HCl水溶液以调节pH至6.5。将混合物冷却至0℃并保持过夜。将生成的固体通过真空过滤收集，并用水(2x200mL)随后用庚烷(2x200mL)洗涤。将白色固体在高真空下于40℃干燥3天，得到N-(苯基甲基)-D-丝氨酸(79.51g，64％)。LCMS：(M+H)+：196.1。
部分B：
(3R)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸
根据WO2005058245的方法，将N-(苯基甲基)-D-丝氨酸(79.51g，407.3mmol)在THF(485mL)中的溶液冷却至0℃，并加入预先冷却至0℃的K2CO3(168.87g，1222mmol)的水(485mL)溶液。向该充分搅拌的混合物中缓慢地加入氯乙酰氯(45.4mL，570.0mmol)，同时保持内部温度低于5℃。将混合物于0℃剧烈搅拌30min，并然后缓慢地加入另一批的氯乙酰氯(4.54mL，57.0mmol)。将混合物于0℃再搅拌30分钟。向该混合物中加入足量的预先冷却至0℃的NaOH水溶液(50％w/w)以调节pH＞13.5，同时保持内部温度在5℃至10℃之间。将混合物于0℃搅拌2h，并然后温热至20℃。将混合物用庚烷(165mL)随后用第二批新制的庚烷(240mL)洗涤。将水相冷却至0℃，并用浓HCl水溶液调节至pH＜2，同时保持内部温度低于10℃。将混合物置于0℃的冰箱中过夜，并将该固体通过真空过滤收集。将该固体用水(2x300mL)洗涤，并于42℃真空干燥过夜。分离生成的(3R)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸(72.20g，75％)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：236.1。
部分C：
(3R)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺
将(3R)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸(69.67g，296.2mmol)和1-羟基苯并三唑(48.01g，355.4mmol)在DCM(990mL)中的混合物冷却至0℃。向该混合物中加入4-甲基吗啉(163mL，1483mmol)、苄基胺(35.6mL，325.9mmol)和EDC(62.46g，325.8mmol)。将该黄色溶液在室温下搅拌过夜，并然后用水(500mL)、6N的HCl水溶液(300mL)和水(200mL)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的(3R)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺(97.05g，＞100％粗产物的产率)，为黄色泡沫状物。LCMS：(M+H)+：325.2。
部分D：
1-苯基-N-{[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺
通过加料漏斗向0℃的(3R)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺(推测96.07g，296.2mmol)的PhMe(750mL)溶液中加入Red-Al(65％w/w的PhMe，645mL)。在加入大约50mL的Re-Al后，将生成的混合物温热至室温，并然后用30分钟的时间加入剩余的Red-Al。然后将混合物于50℃加热，并搅拌过夜。将该溶液冷却至0℃，并将该反应通过缓慢地滴加1N的NaOH水溶液(50mL)来终止。然后加入另一批的1N的NaOH水溶液(500mL)，随后加入Et2O(200mL)。分离各相，并将有机相用新制的1N的NaOH水溶液(400mL)洗涤。将合并的水相用新制的4∶1PhMe-Et2O(250mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到黄色油状的1-苯基-N-{[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺，其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：297.1。
部分E：
氧代((苯基甲基){[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)乙酸乙酯
将1-苯基-N-{[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺(推测87.79g，296.2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(67.1mL，385.2mmol)的THF(1000mL)溶液冷却至0℃。向该溶液中通过加料漏斗滴加氯代(氧代)乙酸乙酯(36.3mL，326.2mmol)。将生成的混合物搅拌并温热至室温1小时。然后将溶剂真空除去至大约20％体积，并将残余物在EtOAc(600mL)、水(100mL)和饱和的NaHCO3水溶液(500mL)之间分配。将水相用新制的EtOAc(200mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。然后将残余物与EtOH(100mL)共沸，得到黄色油状的氧代((苯基甲基){[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)乙酸乙酯，其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：397.2。
部分F：
(9aS)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-6，7-二酮
向氧代((苯基甲基){[(3S)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)乙酸乙酯(推测117.43g，296.2mmol)的EtOH(1000mL)溶液中加入10％Pd/C(23g)。将生成的混合物在气球压力下氢化5天，并然后用EtOH洗涤液通过玻璃纤维滤器过滤。然后将该溶液真空浓缩，并由EtOH-EtOAc结晶，得到大约15g的白色固体。然后将Pd/C滤饼用MeOH(600mL)浆化，并将混合物用MeOH洗涤液通过玻璃纤维滤器过滤。然后将该溶液真空浓缩，并由EtOH-EtOAc结晶，得到白色固体，将其与开始的一批固体合并。然后将合并的母液真空浓缩，并由EtOH-EtOAc结晶，得到白色固体，将其与前两批的固体合并，得到(9aS)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-6，7-二酮(39.97g，52％产率，4步)。LCMS：(M+H)+：261.1。
部分G：
(9aS)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪
用40分钟的时间，向0℃下的两批合并的(9aS)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-6，7-二酮(合并的总量为42.29g，162.5mmol)在Et2O(406mL)中的混合物中通过滴液漏斗加入1M LiAlH4的Et2O溶液(406mL，406mmol)。然后将混合物温热至35℃，并搅拌6天。然后将混合物冷却至0℃，并缓慢地加入EtOAc(100mL)，随后加入水(20mL)、15％NaOH水溶液(20mL)和水(60mL)。将混合物剧烈搅拌1h，并然后用EtOAc(500mL)稀释。将混合物过滤，并将滤饼用1N NaOH水溶液(500mL)稀释，并用Et2O(2x200mL)萃取。将合并的有机相(滤液和Et2O萃取液)经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，与MeOH(100mL)共沸，并在高真空下干燥过夜。将生成的无色油状物与通过相同方法由(9aS)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-6，7-二酮(0.3047g，1.1mmol)制备的第二批产物合并，得到粗的(9aS)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪(合并的总量为38.59g，＞100％粗产物的产率)。LCMS：(M+H)+：233.1。
部分H：
(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪二盐酸盐
向(9aS)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪(推测38.02g，163.6mmol)的MeOH(330mL)溶液中加入6N HCl水溶液(55mL，330mmol)和10％Pd/C(3.80g)。将混合物氢化过夜，并然后通过玻璃纤维滤器过滤。将滤饼用MeOH洗涤，并将合并的溶液真空浓缩，并与MeOH(4x150mL)共沸，得到(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪二盐酸盐(34.78g，99％，2步的产率)，为红色油状物，其在高真空下固化。LCMS：(M+H)+：142.9。
部分I：
(9aS)-8-(6-氯-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪
向(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪二盐酸盐(23.28g，108.2mmol)在DCM(360mL)中的混合物中加入4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(19.59g，108.2mmol)和N，N-二异丙基乙胺(68mL，390.4mmol)。将混合物搅拌2h，并将生成的溶液用DCM(100mL)稀释，并用饱和的NaHCO3水溶液(200mL)洗涤。将水相用新制的一批DCM(100mL)萃取，并将该有机相用饱和的NaHCO3水溶液(50mL)洗涤。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(9aS)-8-(6-氯-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪，为淡黄色油状物，其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：287.1。
部分J：
(9aS)-8-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪
向(9aS)-8-(6-氯-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪(推测31.03g，108.2mmol)的二噁烷(430mL)溶液中加入肼一水合物(31mL)。将混合物加热并于80℃搅拌过夜，并然后于85℃搅拌7h。将混合物冷却至室温，并真空浓缩。将残余物溶于DCM(500mL)中，并用饱和的NaHCO3水溶液(200mL)洗涤。将水相用新制的DCM(100mL)萃取，并将该有机相用饱和的NaHCO3水溶液(100mL)洗涤。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，并在高真空下干燥过夜，得到(9aS)-8-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪(27.98g，92％产率，2步)，为淡黄色固体。LCMS：(M+H)+：283.3。
部分K：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸，N，N-二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物(33.64g，68.0mmol)的DMF(230mL)溶液中加入(9aS)-8-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪(20.16g，71.4mmol)、N-甲基吗啉(30mL，273mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(11.10g，81.6mmol)和EDC(15.64g，81.6mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(500mL)稀释。将混合物用水(2x200mL)洗涤，并将合并的水相用新制的Et2O(100mL)萃取。然后将该Et2O相用水(50mL)洗涤。将该萃取-洗涤步骤重复6次，并然后将全部合并的有机相用DCM(250mL)稀释。然后将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(42.32g，＞100％粗产物的产率)，为淡黄色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：570.3。
部分L：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(推测38.74g，68.0mmol)的甲醇(225mL)溶液中加入10％Pd/C(5.81g)。将混合物在气球压力下氢化4h，并然后用MeOH洗涤液通过玻璃纤维滤器过滤。将生成的溶液真空浓缩至大约10％体积，用EtOAc(400mL)稀释，并真空浓缩至大约30％体积。将生成的固体通过真空过滤收集，并用EtOAc洗涤。将母液和EtOAc洗涤液真空浓缩至大约10％体积，并将生成的固体通过真空过滤收集，并用EtOAc洗涤。将两批固体合并，并于50℃在高真空下干燥16h，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(25.48g，78％产率，2步)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：480.1。
另一种方法
向粗的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(推测39.73g，69.74mmol)的MeOH(350mL)溶液中加入10％Pd/C(50％水，7.9g)。将悬浮液在气球压力下氢化3h，并然后用MeOH洗涤液通过两个玻璃纤维滤器过滤。将生成的溶液真空浓缩至大约70mL的体积，并然后用EtOAc(500mL)稀释。将该溶液真空浓缩以除去大约100mL的溶剂。将生成的固体通过真空过滤收集，并用EtOAc随后用己烷充分洗涤。将母液真空浓缩，并然后用EtOAc(200mL)稀释。将混合物真空浓缩至大约50％体积，并将生成的固体通过真空过滤收集，并用EtOAc随后用己烷充分洗涤。将两批固体合并，并置于高真空下过夜。然后向该物质中加入大约466mg的通过类似顺序制备的物质，并将合并的物料在高真空下于50℃加热过夜，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(28.27g，83％产率，2步)。LC/MS：(M+H)+：480.3。将生成的固体分析表征，并发现为多晶型1。
实施例25
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900811
部分A：
2-乙基-5-氟-4-肼基-6-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶
向冰冷却的1，4-二噁烷(10mL)和MeOH(2mL)的溶液中顺序加入4，6-二氯-2-乙基-5-氟嘧啶(1.0g，5.13mmol)、N-甲基哌嗪(626uL，5.64mmol)和DIPEA(1.97mL，12.4mmol)。然后将该溶液在室温下搅拌2h。该反应完成后，加入无水肼(1.29mL，99mmol)。将生成的悬浮液在油浴中于90℃加热2h，直至中间体耗尽。蒸发溶剂，得到淡黄色固体。将该固体溶于CH2Cl2(100mL)中，并用1N HCl洗涤。将水相用DCM(50mL)反萃取。将合并的有机层经无水Na2SO4干燥。蒸发溶剂，得到淡黄色残余物，为所需的产物(890mg，69％)。
部分B：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)[(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(12.4g，40.6mmol)的DMF(120mL)溶液加入到2-乙基-5-氟-4-肼基-6-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶(9.6g，37.8mmol)、HOAt(5.66g，41.58mmol)和EDC(7.97g，41.58mmol)的混合物中。将生成的溶液用NMM(9.1mL，83.2mmol)处理，并在室温下搅拌3h。该反应完成后，加入200mL的水，并将该溶液用200mL的乙醚萃取三次。将合并的有机层用水(200mL)和盐水(100mL)洗涤，并然后经无水Na2SO4干燥。蒸发溶剂，得到淡黄色玻璃状固体，为纯的产物(17.1g，84％)。
部分C：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
将悬浮于MeOH(400mL)中的((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)[(苯基甲基)氧基]甲酰胺(17.1g，31.61mmol)和10％Pd/C(4g)的混合物在H2气球下搅拌。2小时后，加入另外2g新制的10％Pd/C。将生成的悬浮液在氢气氛下再搅拌1.5小时，直至起始物料耗尽。通过Celite硅藻土过滤来除去Pd/C，用MeOH和CH2Cl2洗涤。将滤液真空浓缩。当进行蒸发时，产物从剩余的溶液中结晶出来。继续蒸发直至只剩下～50mL的液体。然后将结晶通过过滤收集，得到白色固体的产物(10.0g)。将滤液进一步蒸发，得到第二批结晶(1.5g)，为纯的产物。按照相同的方法，收集第三批产物。合并的((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺的产率为86％(12.2g)。LCMS：(M+H)+：452.1。
实施例26
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(2-异噁唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900821
根据一般方法B，使用市售可得的异噁唑烷代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(2-异噁唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：425.2。
实施例27
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900831
根据一般方法B，使用市售可得的(3R)-(+)-3-(二甲基氨基)吡咯烷代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例28
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900832
根据一般方法B，使用市售可得的(3S)-(-)-3-(二甲基氨基)吡咯烷代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例29
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(3S)-3-羟基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900833
根据一般方法B，使用市售可得的(S)-3-羟基吡咯烷代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(3S)-3-羟基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：439.2。
实施例30
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(3R)-3-羟基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900841
根据一般方法B，使用市售可得的(R)-3-羟基吡咯烷代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(3R)-3-羟基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：439.0。
实施例31
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(环丙基氨基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900842
根据一般方法B，使用市售可得的环丙基胺代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(环丙基氨基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：409.2。
实施例32
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法B，使用市售可得的N-乙基哌嗪代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.5。
实施例33
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900851
根据一般方法B，使用市售可得的1-(2-羟基乙基)哌嗪代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：482.2。
实施例34
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(甲氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900852
根据一般方法B，使用市售可得的甲胺代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(甲氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：383.4。
实施例35
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-6-(乙氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900853
根据一般方法B，使用市售可得的乙胺代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-6-(乙氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：397.4。
实施例36
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900861
根据一般方法B，使用市售可得的1-异丙基哌嗪代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：480。
实施例37
1-(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺
Figure BPA00001182153900862
根据一般方法B，使用市售可得的N，N-二甲基-L-脯氨酰胺代替部分A中的氮杂环丁烷制备1-(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺。LCMS：(M+H)+：494.2。
实施例38
N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{[2-(二甲基氨基)乙基](甲基)氨基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺
根据一般方法B，使用市售可得的N，N，N’-三甲基乙二胺代替部分A中的氮杂环丁烷制备N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{[2-(二甲基氨基)乙基](甲基)氨基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：454.2。
实施例39
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900871
部分A：
(R)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐
将市售可得的(3R)-3-甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.0g，5.0mmol)、氰基硼氢化钠(1.57g，25mmol)和甲醛(37％的H2O溶液，2.25mL，30mmol)在MeOH(50mL)中溶解并搅拌。滴加乙酸(1.75mL，30mmol)，并将生成的反应混合物在室温下搅拌2h。随后将溶剂蒸发，并将残余物溶于NaHCO3水溶液中，并用乙醚萃取三次。在从合并的乙醚层中除去溶剂后，将粗产物(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯溶于乙醇中，并用2mL浓HCl处理。将形成的沉淀过滤并然后用乙醇和水中重结晶，得到(R)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐(1.27g)。
部分B：
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法B，在部分A中使用(R)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐代替氮杂环丁烷，并使用3.5当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例40
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900881
部分A：
(S)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐
如实施例39中所述，可按照类似于(R)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐的方法可制备(S)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐。
部分B：
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法B，在部分A中使用(S)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐代替氮杂环丁烷，并使用3.5当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例41
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900882
部分A：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
在封闭管中，将{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[4-氯-5-氟-2-(甲硫基)-6-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基}(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(11.60g，23.67mmol)、N-甲基哌嗪(2.89mL，26.00mmol，1.1eq)和N，N-二异丙基乙胺(4.95mL，28.40mmol，1.2eq)溶于无水DMSO(100mL)中，并将混合物在搅拌下于68℃加热3天。将反应混合物冷却至RT，用水(300mL)稀释，并用乙酸乙酯/己烷(2∶1，2x300mL)萃取。将合并的有机溶液用水(3x200mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，并浓缩，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为红色的泡沫状固体(12.5g，95.4％)。
部分B：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
将((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(2.5g，22.58mmol)溶于乙酸/水(4∶1，1L)中，并在RT下搅拌3天。将反应混合物浓缩至干，并与甲苯(20mL)随后与甲醇(50mL)/三乙胺(20mL)共同蒸发。将残余物溶于甲醇(120mL)和三乙胺(20mL)中，并通过Gilson HPLC(10-95％乙腈/水，8分钟梯度时间)纯化，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺，为淡红色泡沫状固体(6.90g，65.1％)。LCMS：(M+H)+：470.2。
实施例42
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(乙氨基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900891
根据一般方法C，使用市售可得的乙胺代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(乙氨基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：415.2。
实施例43
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(甲氨基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900901
根据一般方法C，使用市售可得的甲胺代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(甲氨基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：401.1。
实施例44
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3S)-3-羟基-1-吡咯烷基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900902
根据一般方法C，使用市售可得的(S)-3-羟基吡咯烷代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3S)-3-羟基-1-吡咯烷基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：457.4。
实施例45
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(二甲基氨基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900903
根据一般方法C，使用市售可得的二甲胺代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(二甲基氨基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：415.5。
实施例46
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-(甲硫基)-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900911
根据一般方法C，使用市售可得的N-丙基胺代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-(甲硫基)-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：429.3。
实施例47
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-{[2-(甲氧基)乙基]氨基}-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法C，使用市售可得的甲氧基乙胺代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-{[2-(甲氧基)乙基]氨基}-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：445.2。
实施例48
1-[6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺
Figure BPA00001182153900913
根据一般方法C，使用市售可得的N，N-二甲基-L-脯氨酰胺代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备1-[6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺。LCMS：(M+H)+：512.3。
实施例49
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3R)-3-羟基-1-吡咯烷基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900921
根据一般方法C，使用市售可得的(R)-3-羟基吡咯烷代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3R)-3-羟基-1-吡咯烷基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：457.2。
实施例50
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900922
根据一般方法C，使用市售可得的(3R)-(+)-3-(二甲基氨基)吡咯烷代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：484.4。
实施例51
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法C，使用市售可得的N-乙基哌嗪代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：484.2。
实施例52
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用市售可得的吗啉代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：445.2。
实施例53
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-氯-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用市售可得的氮杂环丁烷盐酸盐代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-氯-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：415.2。
实施例54
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900933
根据一般方法D，使用市售可得的N-乙基哌嗪代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：472.2。
实施例55
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-羟基乙基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900941
根据一般方法D，使用市售可得的N-2-羟基乙基-N-甲胺代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-羟基乙基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：433.6。
实施例56
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-(甲氧基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900942
根据一般方法D，使用市售可得的3-甲氧基氮杂环丁烷盐酸盐代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-(甲氧基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：445.7。
实施例57
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用市售可得的N-甲基-2-(甲氧基)乙胺代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：447.5。
实施例58
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900951
根据一般方法D，使用市售可得的(8aS)-八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：484.4。
实施例59
1-{6-氯-2-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺
Figure BPA00001182153900952
根据一般方法D，使用市售可得的N，N-二甲基-L-脯氨酰胺代替部分A中的N-甲基哌嗪制备1-{6-氯-2-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺。LCMS：(M+H)+：500.1。
实施例60
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900961
根据一般方法D，使用丙基胺代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：417.1。
实施例61
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用(S)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例40)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：472.2。
实施例62
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900963
根据一般方法D，使用(R)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例39)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：472.2。
实施例63
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153900971
部分A：
N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}-D-丙氨酰-N-甲基甘氨酸甲酯
向N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}-D-丙氨酸(133.53g，598.2mmol)在DCM(1100mL)中的混合物中加入粉末状的肌氨酸甲酯盐酸盐(83.49g，598.2mmol)、1-羟基苯并三唑(80.81g，598.1mmol)和4-甲基吗啉(242mL，2201mmol)。将混合物搅拌10min，并然后加入EDC(114.68g，598.2mmol)。将混合物搅拌过夜，并然后用水(500mL)、1N HCl水溶液(2x300mL)和盐水(300mL)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}-D-丙氨酰-N-甲基甘氨酸甲酯(162.35g，88％产率)，为黄色油状物。LCMS：(M+H)+：309.0。
部分B：
(3R)-1，3-二甲基-2，5-哌嗪二酮
向合并的三批N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}-D-丙氨酰-N-甲基甘氨酸甲酯(合并的总量为489.09g，1586mmol)在DCM(210mL)中的浆料中加入MeOH(1000mL)和10％Pd/C(50g)。将混合物于50psi下氢化过夜，并然后加入另一批10％Pd/C(5g)。将混合物于50psi下再氢化6h，并然后过滤，并用MeOH和DCM洗涤。将生成的澄清液体蒸发，得到透明的油状物，随后将其静置固化，得到(3R)-1，3-二甲基-2，5-哌嗪二酮(214.0g，95％产率)，为淡黄色固体。LCMS：(M+H)+：143.0。
部分C：
(3R)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐
用1小时的时间，向0℃的(3R)-1，3-二甲基-2，5-哌嗪二酮(93.74g，659.4mmol)在THF(660mL)中的悬浮液中分批加入LiAlH4(75.1g，1979mmol)。然后将混合物于65℃加热，并搅拌2.5小时。然后将混合物冷却至0℃，并缓慢地加入Na2SO4·10H2O(75g)，随后缓慢地加入1N NaOH水溶液(1000mL)。将混合物用CHCl3(6x1000mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥并过滤。向生成的溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(367mL)，并将混合物搅拌过夜。然后将混合物用MeOH(2000mL)稀释，并真空浓缩。将残余物与MeOH(2x1000mL)共沸，并在高真空下放置过夜，得到(3R)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(102.22g，83％产率)，为褐色树胶状物。LCMS：(M+H)+：115.1。
部分D：
2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
向(3R)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(102.22g，546.3mmol)中加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(271.71g，546.3mmol)的DMF(900mL)溶液。将混合物冷却至0℃，并加入N，N-二异丙基乙胺(295mL，1694mmol)。将该溶液搅拌，并温热至室温过夜。然后将该溶液用Et2O(1000mL)稀释，并用水(1000mL)洗涤。将水相用新制的Et2O(1000mL)萃取，并将合并的有机相用水(2x500mL)洗涤。然后将有机相用DCM(1000mL)稀释，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过硅胶填料过滤(30％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)。然后将该溶液真空浓缩，并将残余物与MeOH共沸。将残余物用MeOH(1000mL)稀释，并通过加入水来结晶。将生成的固体通过真空过滤收集，并用10％MeOH的水溶液洗涤。将生成的黄色固体在高真空下于50℃干燥，得到2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(257.34g，82％产率)，为淡黄色固体。LCMS：(M+H)+：575.2。
部分E：
2-氯-4-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基嘧啶三盐酸盐
向2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(215.28g，374.3mmol)的DCM(1870mL)溶液中加入2N HCl的Et2O溶液(1870mL，3740mmol)。将该溶液机械搅拌64h，并将生成的悬浮液沉降。然后将大部分溶剂轻轻倒出，并将剩余的固体用DCM(1000mL)研磨，并通过真空过滤收集。将该固体用DCM洗涤，并在高真空下干燥，得到2-氯-4-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基嘧啶，推测为三盐酸盐(138.22g，96％产率)，为淡黄色粉末。LCMS：(M+H)+：275.1。
部分F：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向0℃的2-氯-4-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基嘧啶，推测为三盐酸盐(126.70g，329.9mmol)和(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸，N，N-二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物(155.42g，314.1mmol)在DMF(630mL)中的混合物中加入4-甲基吗啉(240mL，2183mmol)，随后加入1-羟基-7-氮杂苯并三唑(51.31g，377.0mmol)和EDC(72.27g，377.0mmol)。将混合物搅拌过夜，用Et2O(1000mL)稀释，并用水(1000mL)洗涤。将水相用新制的Et2O(1000mL)萃取，并将合并的有机相用水(3x300mL)洗涤。将合并的水相用新制的Et2O(300mL)萃取，并将该Et2O相用水(200mL)洗涤。将全部合并的有机相用DCM(1000mL)稀释，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(193.65g，＞100％粗产物的产率)，为暗红色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：562.3。
部分G：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向粗的[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(推测176.57g，314.1mmol)的MeOH(800mL)溶液中加入20％Pd(OH)2/C(14.13g)。将混合物在气球压力下氢化，同时每30分钟进行监测，直至判断该反应完成(7h)。然后用MeOH洗涤液通过玻璃纤维滤器过滤。将生成的深色滤液真空浓缩，并通过制备型反相色谱法(Luna C18(2)柱；10微米；101.6mmx250mm；250nm UV检测；480mL/min；40mg/mL样品浓度；4g注射物质；流动相A：300mmol甲酸铵水溶液，pH 4.0；流动相B：MeCN；方法：28％B，9min；90％B，9min；28％B，5min)纯化。合并产物溶液级分，并用NH4OH水溶液调节至pH 6.8，并然后在室温下与Darco(基于粗产物装入50％重量)搅拌30分钟。然后将该溶液通过Celite硅藻土过滤。将滤液浓缩至3.5L的体积，并用NH4OH将pH调节至5.6-8.5，得到橙色沉淀。将水相用EtOAc萃取3次，并然后将合并的有机物用水和盐水洗涤。将有机物干燥(Na2SO4)，过滤，并真空浓缩至1L的体积，得到黄褐色沉淀。加入等体积的庚烷(1L)，并将混合物于0℃冷却1小时。然后通过过滤分离出产物，用庚烷洗涤，并在减压下于50℃干燥20h，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(85.5g，57％产率，2步)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：472.2。
实施例64
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901001
部分A：
(3S)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐
按照类似于制备(3R)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例63)的方法，使用CBZ-L-丙氨酸代替CBZ-D-丙氨酸可制备(3S)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐。
部分B：
根据一般方法D，使用(S)-1，3-二甲基哌嗪代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：472.2。
实施例65
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901011
根据一般方法E，使用(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪二盐酸盐(其可按照实施例24，部分A-H中所述的制备)代替部分A中的异丙胺，在部分B中使用2N HCl的乙醚溶液，在部分C中进行萃取(乙醚/水)后处理，而不是HPLC纯化，并在部分D中通过用EtOAc/乙醚重结晶而不是HPLC来纯化最终产物，制备得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：501.0。
实施例66
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-氮杂环丁烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901012
部分A：
(2S)-2-氮杂环丁烷基甲醇TFA盐
将市售可得的(S)-1-(叔丁氧基羰基)-2-氮杂环丁烷甲醇(100mg，5.3mmol)在二氯甲烷(2mL)中溶解并搅拌。滴加三氟乙酸(1mL)，并将生成的反应混合物在室温下搅拌，直至完全除去叔丁氧基羰基。然后将溶剂蒸发，并将粗的(2S)-2-氮杂环丁烷基甲醇的TFA盐直接用于下一步骤中。
部分B：
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-氮杂环丁烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法A，在部分A中使用(2S)-2-氮杂环丁烷基甲醇TFA盐代替吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-氮杂环丁烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：425.4。
实施例67
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(二甲基氨基)-5-氟-2-(氟甲基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901021
根据一般方法A，在部分A中使用二甲胺代替吡咯烷，并使用4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶代替4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(二甲基氨基)-5-氟-2-(氟甲基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：401.2。
实施例68
[(2R)-3-{2-[6-(环丁基氨基)-5-氟-2-(氟甲基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901022
根据一般方法A，在部分A中使用市售可得的环丁基胺代替吡咯烷，并使用4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶代替4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶制备[(2R)-3-{2-[6-(环丁基氨基)-5-氟-2-(氟甲基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：427.2。
实施例69
N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{[2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901023
部分A：
[2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基甲酸苯甲基酯
将吡咯烷(248uL，3mmol)、N-CBZ-甘氨酸(628mg，3mmol)和HOAt(408mg，3mmol)溶于10mL的二氯甲烷中。加入NMM(0.66mL，6mmol)，随后加入EDC(575mg，3mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物用二氯甲烷稀释，用水、饱和的NaHCO3水溶液和饱和的NH4Cl水溶液洗涤，然后干燥(Na2SO4)并蒸发，得到[2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基甲酸苯甲基酯，为米色固体(782mg，100％)。LCMS：(M+H)+：263.1。
部分B：
2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙胺盐酸盐
将[2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基甲酸苯甲基酯(782mg，3mmol)溶于30mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(117mg)，随后加入0.5mL 6N HCl，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和Me0H洗涤。将生成的滤液真空浓缩，得到2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙胺盐酸盐(491mg，100％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分C：
N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{[2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺
根据一般方法A，在部分A中使用2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙胺盐酸盐代替吡咯烷，并使用2.3当量的DIPEA制备N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{[2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例70
N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(2-乙基-5-氟-6-{[(1R)-1-甲基-2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901031
部分A：
[(1R)-1-甲基-2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基甲酸苯甲基酯
将吡咯烷(1668uL，2mmol)、N-CBZ-D-丙氨酸(446mg，2mmol)和HOAt(272mg，2mmol)溶于6mL的二氯甲烷中。加入NMM(0.44mL，4mmol)，随后加入EDC(382mg，2mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物用EtOAc稀释，用水、饱和的NaHCO3水溶液和饱和的NH4Cl水溶液洗涤，然后干燥(Na2SO4)并蒸发，得到[(1R)-1-甲基-2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基甲酸苯甲基酯，为白色固体(496mg，90％)。LCMS：(M+H)+：277.2。
部分B：
(2R)-1-氧代-1-(1-吡咯烷基)-2-丙胺
将[(1R)-1-甲基-2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基甲酸苯甲基酯(496mg，1.8mmol)溶于20mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(125mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置过夜。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。将生成的滤液真空浓缩，得到(2R)-1-氧代-1-(1-吡咯烷基)-2-丙胺(235mg，91％)。LCMS：(M+H)+：143.1。
部分C：
N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(2-乙基-5-氟-6-{[(1R)-1-甲基-2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用(2R)-1-氧代-1-(1-吡咯烷基)-2-丙胺代替部分A中的吡咯烷制备N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(2-乙基-5-氟-6-{[(1R)-1-甲基-2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：494.2。
实施例71
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(氟甲基)-6-[(3S)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901051
根据一般方法A，在部分A中使用市售可得的(S)-3-甲氧基1吡咯烷代替吡咯烷，并使用4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶代替4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(氟甲基)-6-[(3S)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：457.2。
实施例72
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901052
根据一般方法A，使用丙基胺代替部分A中的吡咯烷制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：494.2.
实施例73
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-(氟甲基)-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901053
根据一般方法A，在部分A中使用市售可得的丙基胺代替吡咯烷，并使用4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶代替4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-(氟甲基)-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：415.2。
实施例74
N2-(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-D-丙氨酰胺
Figure BPA00001182153901061
部分A：
N1，N1-二甲基-D-丙氨酰胺
按照类似于实施例69的方法，使用N-CBZ-D-丙氨酸代替N-CBZ-甘氨酸，使用二甲基胺盐酸盐代替吡咯烷，并使用3当量的NMM制备N1，N1-二甲基-D-丙氨酰胺盐酸盐。
部分B：
N2-(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-D-丙氨酰胺
根据一般方法A，使用N1，N1-二甲基-D-丙氨酰胺盐酸盐代替部分A中的吡咯烷制备N2-(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-D-丙氨酰胺。LCMS：(M+H)+：454.2。
实施例75
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
部分A：
[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
按照类似于制备中间体E的方法，在部分A中使用O-甲基异脲硫酸盐代替2-甲基-2-异硫脲硫酸盐，并在部分D中使用(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸代替(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸制备[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺。LCMS：(M+H)+：480.1。
部分B：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)[(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.150g，0.31mmol)、市售可得的1-乙基哌嗪(0.080mL，0.63mmol)和二异丙基乙胺(0.054mL，0.31mmol)在DMSO(2mL)中于65℃搅拌过夜。然后将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)[(苯基甲基)氧基]甲酰胺，为红色固体(0.145g，83％)。LCMS：(M+H)+＝558.3。
部分C：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
将((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)[(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.145g，0.26mmol)和Pd(C)(0.030g)在MeOH(10mL)中的溶液按照一般方法A，部分C在标准的氢化条件下进行氢化，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺，为红色固体(0.119g，98％)。LCMS：(M+H)+＝468.4。
实施例76
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901081
根据一般方法H，使用市售可得的(3R)-N，N-二甲基-3-氨基吡咯烷代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：488.1。
实施例77
N2-(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-D-丙氨酰胺
Figure BPA00001182153901082
根据一般方法B，使用N1，N1-二甲基-D-丙氨酰胺(实施例74)代替部分A中的氮杂环丁烷制备N2-(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-D-丙氨酰胺。LCMS：(M+H)+：468.1。
实施例78
N-[(2R)-3-{2-[6-(丁基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901083
根据一般方法A，使用市售可得的丁基胺代替部分A中的吡咯烷制备N-[(2R)-3-{2-[6-(丁基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：411.1。
实施例79
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-(甲氧基)-6-{[(1S)-1-(1-吡咯烷基羰基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901091
部分A：
[(1S)-1-(1-吡咯烷基羰基)丙基]胺
将[(1S)-1-(1-吡咯烷基羰基)丙基]氨基甲酸苯甲基酯(J.Med.Chem.，1991，34，3149-58)溶于甲醇(20mL)(559mg，1.9mmol)中。加入Pd(OH)2(140mg)，并将生成的悬浮液在氢气球下搅拌直至完成脱保护基。过滤催化剂并蒸发溶剂，得到[(1S)-1-(1-吡咯烷基羰基)丙基]胺(291mg，97％)。
部分B：
[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
按照类似于制备中间体E的方法，使用O-甲基异脲硫酸盐代替部分A中的2-甲基-2-异硫脲硫酸盐，并使用(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸代替部分D中的(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸可制备[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺。LCMS：(M+H)+：480.1。
部分C：
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-(甲氧基)-6-{[(1S)-1-(1-吡咯烷基羰基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
将[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(70mg，0.15mmol)溶于DMSO(2mL)中，并加入[(1S)-1-(1-吡咯烷基羰基)丙基]胺(46mg，0.29mmol)，随后加入DIPEA(26μL，0.15mmol)。将生成的混合物于80℃搅拌6天。将该反应直接通过RP-HPLC纯化，得到苄基保护的中间体，随后将其溶于除气的MeOH(7mL)中。向该溶液中加入10％Pd/C(6.3mg)，并将合并的混合物在氢气球下搅拌2小时。过滤催化剂，并蒸发溶剂，得到粗的残余物，将其通过RP-HPLC纯化，得到{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-(甲氧基)-6-{[(1S)-1-(1-吡咯烷基羰基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺(15mg，20％)。
实施例80
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901101
根据实施例79，使用(2R)-1，2-二甲基哌嗪(实施例39)代替部分C中的[(1S)-1-(1-吡咯烷基羰基)丙基]胺合成得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：468.3。
实施例81
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(3S)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法H，使用市售可得的(3S)-N，N-二甲基-3-氨基吡咯烷代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(3S)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：488.3。
实施例82
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(环丙基氨基)-2-(二氟甲基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901111
根据一般方法H，使用环丙基胺代替部分A中的N-甲基哌嗪制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(环丙基氨基)-2-(二氟甲基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：431.3。
实施例83
(2S)-2-[(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N，N-二甲基丁酰胺
Figure BPA00001182153901112
部分A：
(2S)-2-氨基-N，N-二甲基丁酰胺盐酸盐
按照类似于制备2-氧代-2-(1-吡咯烷基)乙胺盐酸盐(实施例69)的方法，在部分A中使用N-CBZ-L-2-氨基丁酸代替N-CBZ-甘氨酸，使用二甲基胺盐酸盐代替吡咯烷，并使用3当量的NMM制备(2S)-2-氨基-N，N-二甲基丁酰胺盐酸盐。(M+H)+：130.9。
部分B：
(2S)-2-[(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N，N-二甲基丁酰胺
根据一般方法A，使用(2S)-2-氨基-N，N-二甲基丁酰胺盐酸盐代替部分A中的吡咯烷制备(2S)-2-[(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)氨基]-N，N-二甲基丁酰胺。LCMS：(M+H)+：468.1。
实施例84
(2S)-2-[(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)氨基]-N，N-二甲基丁酰胺
Figure BPA00001182153901121
根据一般方法B，使用(2S)-2-氨基-N，N-二甲基丁酰胺盐酸盐(实施例83)代替部分A中的氮杂环丁烷制备(2S)-2-[(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)氨基]-N，N-二甲基丁酰胺。LCMS：(M+H)+：482.1。
实施例85
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{[(3S)-1-甲基-2-氧代-六氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153901122
-3-基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901123
根据一般方法A，使用(3S)-3-氨基-1-甲基-六氢-2H-氮杂-2-酮(实施例193)代替部分A中的吡咯烷制备{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{[(3S)-1-甲基-2-氧代-六氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153901125
-3-基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：480.3。
实施例86
(2S)-2-{[6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]氨基}-N，N-二甲基丁酰胺
Figure BPA00001182153901126
部分A：
[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
根据中间体E，使用O-甲基异脲硫酸盐代替部分A中的2-甲基-2-异硫脲硫酸盐，并使用(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸代替部分D中的(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸可制备得到[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺。LCMS：(M+H)+：480.1。
部分B：
(2S)-2-{[6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酰基]肼基}-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]氨基}-N，N-二甲基丁酰胺
将[(2R)-3-{2-[6-氯-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.133g，0.28mmol)、(2S)-2-氨基-N，N-二甲基丁酰胺盐酸盐(实施例83)(0.075g，0.45mmol)和二异丙基乙胺(0.1mL，0.62mmol)在DMSO(2mL)中于65℃搅拌过夜。然后加入另外的二异丙基乙胺(0.2mL)，并将该反应于80℃搅拌7天。通过RP-HPLC纯化，得到(2S)-2-{[6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酰基]肼基}-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]氨基}-N，N-二甲基丁酰胺(0.036g，23％)。LCMS：(M+H)+＝574.3。
部分C：
(2S)-2-{[6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]氨基}-N，N-二甲基丁酰胺
将(2S)-2-{[6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酰基]肼基}-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]氨基}-N，N-二甲基丁酰胺(0.036g，0.063mmol)和Pd(C)(0.008g)在MeOH(10mL)中的溶液按照一般方法A，部分C在标准的氢化条件下进行氢化，得到(2S)-2-{[6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-(甲氧基)-4-嘧啶基]氨基}-N，N-二甲基丁酰胺，为橙色固体(0.019g，63％)。LCMS：(M+H)+＝484.4。
实施例87
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(四氢-5H-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯-5-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
部分A：
(顺式)-3，4-二羟基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
将2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸苯甲基酯(市售可得)(5.07g，25mmol)溶于丙酮(25mL)和水(10mL)的混合物中。加入NMO(5.9g，50mmol)随后加入催化量的OsO4。将该反应搅拌19小时，并然后通过加入Na2S2O3水溶液来终止。进行标准的后处理，随后通过硅胶色谱法(3∶1己烷∶乙酸乙酯至纯的乙酸乙酯至9∶1DCM∶MeOH)纯化，得到(顺式)-3，4-二羟基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(0.872g，15％)，为透明油状物。LCMS：(M+H)+：237.9.
部分B：
(顺式)-四氢-3aH-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯
向(3R，4S)-3，4-二羟基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(0.872g，3.7mmol)和二甲氧基甲烷(10mL)的DCM(4mL)溶液中加入5滴三氟甲磺酸，并将生成的溶液搅拌直至通过LCMS判断该反应完成。用饱和的碳酸氢钠水溶液来终止该反应，随后进行标准的后处理，并通过RP-HPLC纯化，得到中间体(顺式)-四氢-5H-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯-5-甲酸苯甲基酯。将其立即溶于除气的MeOH(5mL)中，加入10％Pd/C(25mg)，并将该反应在氢气球下搅拌直至通过LCMS判断该反应完成。过滤并真空浓缩，得到(顺式)-四氢-3aH-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯(88mg，21％)。LCMS：(M+H)+：116.1。
部分C：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(四氢-5H-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯-5-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用(顺式)-四氢-3aH-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯代替部分A中的吡咯烷制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(四氢-5H-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯-5-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：453.3。
实施例88
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(二甲基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901151
根据一般方法D，使用市售可得的二甲胺代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(二甲基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：403。
实施例89
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(反式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901152
部分A：
(反式)-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷
将市售可得的(反式)-3-氨基-4-甲基-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(1g，5mmol)和甲醛(0.69mL，25mmol，37％的水溶液)的THF(20mL)溶液在室温下搅拌1小时。加入NaBH(OAc)3(7.4g，35mmol)，并将该反应搅拌过夜。加入1M NaOH(20mL)，并将各层分离。将水相用乙醚萃取，并将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗的残余物。将该物质溶于4M HCl的二噁烷溶液(24mL)中，并搅拌3小时。蒸发溶剂，得到定量产量的(反式)-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分B：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(反式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用反式-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(反式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+：466.4。
实施例90
(反式)-1-{6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}-N，N，4-三甲基-3-吡咯烷甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901161
部分A：
(反式)-N，N，4-三甲基-3-吡咯烷甲酰胺
将市售可得的(反式)-3-[(二甲基氨基)羰基]-4-甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(1.06g，3.4mmol)、DMAP(0.63g，5.2mmol)和EDC(1.0g，5.2mmol)的DCM(18mL)溶液搅拌5分钟，并加入二甲胺(1.9mL，3.8mmol，2M的THF溶液)。将该反应搅拌直至通过LCMS判断该反应完成，并用1M HCl终止。经过标准的后处理，得到所需的酰胺中间体。将该物质立即溶于除气的MeOH(20mL)中，并加入10％Pd/C(120mg)。将反应混合物在氢气球下搅拌直至通过LCMS观察脱保护基反应完成。过滤除去催化剂，得到(反式)-N，N，4-三甲基-3-吡咯烷甲酰胺。LCMS：(M+H)+：157.2。
部分B：
(反式)-1-{6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}-N，N，4-三甲基-3-吡咯烷甲酰胺
根据一般方法A，使用(反式)-N，N，4-三甲基-3-吡咯烷甲酰胺代替部分A中的吡咯烷，制备(反式)-1-{6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}-N，N，4-三甲基-3-吡咯烷甲酰胺，为非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+：494.4。
实施例91
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(反式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901171
根据一般方法H，使用反式-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷(实施例89)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(3S，4R)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为1∶1非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+：502.4。
实施例92
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(反式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901172
根据一般方法B，使用(反式)-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷(实施例89)代替部分A中的氮杂环丁烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(反式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为1∶1非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+：480.3。
实施例93
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901181
根据一般方法H，使用(2R)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例39)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：488.7。
实施例94
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{[(3S)-1-甲基-2-氧代-2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153901182
-3-基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901183
部分A：
(2S)-2-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-4-戊烯酸
向MeOH(60mL)和水(70mL)的混合物中加入L-2-氨基-4-戊酸(2.02g，17.5mmol)、K2CO3(12.12g，88mmol)和焦碳酸二叔丁酯(4.02g，18.4mmol)。将该混合物搅拌12小时，随后冷却至0℃，并用1M HCl酸化至pH为2。除去MeOH，得到水溶液，将其用DCM萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥并浓缩，得到(2S)-2-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-4-戊烯酸(3.47g，92％)。LCMS：(M+Na)+：238.1.
部分B：
{(1S)-1-[(2-丙烯-1-基氨基)羰基]-3-丁烯-1-基}氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯
向搅拌下的(2S)-2-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-4-戊烯酸(2.82g，13mmol)、DMAP(1.9g，16mmol)和EDC(3.1g，16mmol)的溶液中加入N-甲基烯丙基胺(1.38mL，14mmol)。将该反应搅拌72小时，随后通过加入1MHCl(15mL)来终止。将生成的两相混合物分离，并将水相用DCM萃取一次。将合并的有机物经硫酸钠干燥并浓缩，得到{(1S)-1-[(2-丙烯-1-基氨基)羰基]-3-丁烯-1-基}氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.94g，28％)。LCMS：(M-tBut)+：238.1。
部分C：
[(3S)-1-甲基-2-氧代-2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153901191
-3-基]氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯
将{(1S)-1-[(2-丙烯-1-基氨基)羰基]-3-丁烯-1-基}氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.94g，3.9mmol)溶于DCM(350mL)中，并加入1，3-双(2，4，6-三甲基苯基)-2-咪唑烷亚基)二氯(苯基亚甲基)(三环己基膦)合钌(0.3g，3.5mmol)。将生成的溶液于40℃加热，并搅拌12小时。将溶剂在减压下蒸发并将粗产物通过RP-HPLC纯化，得到[(3S)-1-甲基-2-氧代-2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153901192
-3-基]氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.6g，63％)。LCMS：(M+H)+：242.3。
部分D：
(3S)-3-氨基-1-甲基-1，3，4，7-四氢-2H-氮杂
Figure BPA00001182153901193
-2-酮.HCl
向[(3S)-1-甲基-2-氧代-2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153901194
-3-基]氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.6g，2.5mmol)的DCM(4mL)溶液中加入HCl(6.2mL，25mmol，4M的二噁烷溶液)，并将生成的混合物搅拌12小时。减压下除去溶剂，得到(3S)-3-氨基-1-甲基-1，3，4，7-四氢-2H-氮杂
Figure BPA00001182153901195
-2-酮.HCl(500mg，定量的)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分E：
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{[(3S)-1-甲基-2-氧代-2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153901196
-3-基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
按照类似于实施例105的方法，使用(3S)-3-氨基-1-甲基-1，3，4，7-四氢-2H-氮杂
Figure BPA00001182153901197
-2-酮.HCl代替N-甲基-1-(4-嘧啶基)甲胺，并使用二异丙基乙胺代替三乙胺制备{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{[(3S)-1-甲基-2-氧代-2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153901198
-3-基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：478.5。
实施例95
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901201
根据一般方法H，使用(2S)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例40)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：488.6。
实施例96
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901202
根据一般方法H，使用(3S)-1，3-二甲基哌嗪(实施例64)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：488.5。
实施例97
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901203
部分A：
(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯
将市售可得的(3S)-3-甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(3.05g，15.23mmol)、甲醛(37％的水溶液)(2.13mL)、三乙酰氧基硼氢化钠(5.52g，26.04mmol)和DCM(250mL)搅拌过夜。将溶剂除去，并将1N NaOH加入到残余物中。将混合物用二氯甲烷萃取，并将有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯，为透明油状物(3.15g.97％)。LCMS：(M+H)+＝215.3。
部分B：
(2S)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐
将(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(3.15g，14.7mmol)在1N HCl(40mL)中搅拌过夜。然后加入4M HCl的1，4-二噁烷溶液(25mL)，并将该反应搅拌过夜。真空除去挥发物，得到(2S)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐，为白色固体(2.88g)。LCMS：(M+H)+＝115.1。
部分C：
4-氯-6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶
在室温下，向4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(0.181g，1.0mmol)和(2S)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐(0.189g，1.0mmol)的THF(10mL)溶液中加入三乙胺(0.42mL，3.0mmol)。加入MeOH(1mL)以改善溶解性。将反应混合物搅拌过夜，并然后真空除去溶剂。将乙醚、THF和水加入到生成的残余物中。分离有机物，干燥(Na2SO4)并蒸发，得到4-氯-6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶，为黄色固体(0.254g，98％)。LCMS：(M+H)+＝259.3。
部分D：
4-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶
向4-氯-6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶(0.254g，0.98mmol)的DMSO(3mL)溶液中加入肼一水合物(2mL)。将该反应在室温下搅拌3天。将挥发物真空除去，并将残余物通过RP-HPLC纯化，得到4-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶，为黄色固体(0.161g，64％)。LCMS：(M+H)+＝255.6。
部分E：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.184g，0.60mmol)、4-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶(0.161g，0.63mmol)、NMM(0.21mL，1.89mmol)、HOAt(0.086g，0.63mmol)和EDC(0.121g，0.63mmol)溶于DMF(4mL)中，并将该反应搅拌过夜。通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.219g，64％)。LCMS：(M+H)+＝542.7。
部分F：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.219g，0.40mmol)和Pd(C)(0.042g)在MeOH(10mL)中的混合物按照一般方法A，部分C在标准的氢化条件下进行氢化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为白色固体(0.172g，94％)。LCMS：(M+H)+＝452.3。
实施例98
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901221
部分A：
(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯
将市售可得的(3R)-3-甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.78g，13.88mmol)、甲醛(37％的水溶液)(1.94mL)、三乙酰氧基硼氢化钠(5.03g，23.73mmol)和DCM(200mL)搅拌过夜。将溶剂除去，并将1N NaOH加入到残余物中。将混合物用二氯甲烷萃取，并将有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯，为透明油状物(2.70g，91％)。LCMS：(M+H)+＝215.4。
部分B：
(2R)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐
将(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.70g，12.6mmol)在1N HCl(25mL)中搅拌过夜。然后加入4M HCl的1，4-二噁烷(25mL)溶液，并将该反应搅拌过夜。将挥发物真空除去，得到(2R)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐，为白色固体(2.53g)。LCMS：(M+H)+＝115.1。
部分C：
4-氯-6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶
向4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(0.181g，1.0mmol)和(2R)-1，2-二甲基哌嗪二盐酸盐(0.189g，1.0mmol)的THF(10mL)溶液中加入三乙胺(0.42mL，3.0mmol)。加入MeOH(1mL)以改善溶解性。将反应混合物搅拌过夜。真空除去溶剂，并将THF和乙醚加入到生成的残余物中，将其用水洗涤。将有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到4-氯-6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶，为黄色的油状物(0.242g，94％)。LCMS：(M+H)+＝259.3。
部分D：
4-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶
向4-氯-6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶(0.242g，0.94mmol)的DMSO(3mL)溶液中加入肼一水合物(2mL)。将该反应在室温下搅拌3天。真空除去挥发物，并通过RP-HPLC纯化，得到4-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶，为黄色固体(0.079g，33％)。LCMS：(M+H)+＝255.3。
部分E：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.079g，0.30mmol)、4-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶(0.079g，0.31mmol)、NMM(0.10mL，0.90mmol)、HOAt(0.042g，0.31mmol)和EDC(0.059g，0.31mmol)溶于DMF(4mL)中，并按照类似于一般方法A，部分B的方法进行处理，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.082g，49％)。LCMS：(M+H)+＝542.7。
部分F：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.082g，0.15mmol)和Pd(C)(0.016g)在MeOH(10mL)中的溶液按照一般方法A，部分C在标准的氢化条件下进行氢化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为白色固体(0.067g，99％)。LCMS：(M+H)+＝452.4。
实施例99
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-5(3H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
部分A：
[(顺式)-1-(苯基甲基)-3，4-吡咯烷二基]二甲醇
将(顺式)-1-(苯基甲基)-3，4-吡咯烷二甲酸二甲酯(Chem.Pharm.Bull.198533；896-898)(2.44g，8.8mmol)溶于THF(100mL)中，并冷却至0℃。分批加入LiAlH4(1g，26mmol)，并将该反应于60℃加热过夜。在冷却至0℃时，加入含水乙醚，随后加入水(1mL)、15w/w NaOH(水溶液)(1mL)和水(3mL)。将生成的混合物搅拌15分钟，并通过Celite硅藻土过滤，得到粗的[(顺式)-1-(苯基甲基)-3，4-吡咯烷二基]二甲醇(2,.5g)，将其直接用于下一反应中。LCMS：(M+H)+：222.3。
部分B：
(顺式)-3，4-吡咯烷二基二甲醇
向粗的[(顺式)-1-(苯基甲基)-3，4-吡咯烷二基]二甲醇(2.5g)的MeOH(50mL)溶液中加入浓HCl(0.2mL)，随后加入Pearlmans催化剂(700mg)。将生成的悬浮液于50psi下在Parr振荡器上氢化48小时，随后加入另外700mg的催化剂。于50psi下再进行氢化72小时，使得反应完成。通过过滤除去催化剂，并减压蒸发溶剂，得到(顺式)-3，4-吡咯烷二基二甲醇(970mg，7.4mmol)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分C：
(顺式)-3，4-双(羟基甲基)-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
将(顺式)-3，4-吡咯烷二基二甲醇(970mg，7.4mmol)溶于MeOH(20mL)和水(7mL)的混合物中，并冷却至0℃。加入Na2CO3(1.96g，19mmol)，随后加入氯甲酸苄基酯(1.15mL，8.1mmol)，并将生成的溶液搅拌4小时，将温度保持在0℃下。将该反应减压浓缩以除去大部分的甲醇，并将剩余的水溶液用EtOAc萃取两次。将合并的有机物用盐水洗涤，并经硫酸钠干燥，随后真空浓缩。经过RP-HPLC纯化，得到(顺式)-3，4-双(羟基甲基)-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(450mg，22％，1.7mmol)。LCMS：(M+H)+：266.1。
部分D：
四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-5(3H)-甲酸苯甲基酯
向DCM(3mL)和吡啶(3mL)的混合物中加入(顺式)-3，4-双(羟基甲基)-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(250mg，0.94mmol)，随后加入甲苯磺酰氯(540mg，2.8mmol)，并将生成的溶液回流4小时。将溶剂蒸发并将残余物与己烷共沸一次，随后通过RP-HPLC纯化，得到四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-5(3H)-甲酸苯甲基酯(170mg，73％)。LCMS：(M+H)+：248.4。
部分E：
六氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯
向除气的MeOH(5mL)溶液中加入四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-5(3H)-甲酸苯甲基酯(170mg，0.68mmol)，随后加入Pd/C(40mg)。在氢气球下搅拌3小时，随后过滤催化剂并蒸发溶剂，得到六氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯(70mg，91％)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分F：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-5(3H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用六氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯代替部分A中的吡咯烷制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-5(3H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：451.3。
实施例100
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R，4S)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(D1)
Figure BPA00001182153901261
根据一般方法B，使用反式-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷(实施例89)代替部分A中的氮杂环丁烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R，4S)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。将部分B的产物进行手性色谱法处理，得到单一的对映异构体，将其根据部分C进行脱保护基反应。该化合物的绝对的立体化学是未知的，并且在上述结构中的吡咯烷环上任意指定。LCMS：(M+H)+：480.6。
实施例101
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S，4R)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(D2)
Figure BPA00001182153901271
根据一般方法B，使用反式-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷(实施例89)代替部分A中的氮杂环丁烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S，4R)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。将部分B的产物进行手性色谱法处理，得到单一的对映异构体，将其根据部分C进行脱保护基反应。该化合物的绝对的立体化学是未知的，并且在上述结构中的吡咯烷环上任意指定。LCMS：(M+H)+：480.4。
实施例102
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(反式)-3-(羟基甲基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901272
部分A：
消旋-(反式)-4-甲基-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷甲酸甲酯
在0℃下，向N-(甲氧基甲基)-N-(三甲基甲硅烷基甲基)苄基胺(1.8mL，7mmol)和巴豆酸甲酯(0.62mL，5.8mmol)的DCM(25mL)溶液中滴加三氟乙酸(0.045mL，0.58mmol)的DCM(1mL)溶液。将该反应温热至室温，并搅拌3h。加入饱和的碳酸氢钠溶液，并分离各相。将水相用DCM萃取两次，并将合并的有机物经硫酸钠干燥，并真空浓缩，得到粗的消旋-(反式)-4-甲基-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷甲酸甲酯(1.58g)，其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：234.3。
部分B：
消旋-[(反式)-4-甲基-3-吡咯烷基]甲醇
根据实施例99，部分A和B，在部分A中使用消旋-(反式)-4-甲基-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷甲酸甲酯代替(顺式)-1-(苯基甲基)-3，4-吡咯烷二甲酸二甲酯合成[(反式)-4-甲基-3-吡咯烷基]甲醇。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(反式)-3-(羟基甲基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用消旋-(反式)[(3R，4R)-4-甲基-3-吡咯烷基]甲醇代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(反式)-3-(羟基甲基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。产物为非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+：453.3。
实施例103
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901281
部分A：
6-氯-5-氟-2-甲基-N-(2-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(0.2g，1.111mmol)溶于THF(1mL)中。向该溶液中加入三乙胺(0.17mL，1.22mmol)，随后加入溶于THF(1mL)中的市售可得的(2-吡啶基甲基)胺(0.11mL，1.067mmol)。将该反应搅拌4小时。将反应混合物用水稀释，并用乙醚萃取。将有机物干燥(MgSO4)并浓缩，得到6-氯-5-氟-2-甲基-N-(2-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺，为黄色的蜡状物(0.2517g，90％)。LCMS：(M+H)+＝253.3。
部分B：
5-氟-2-甲基-6-[(2-吡啶基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙
将6-氯-5-氟-2-甲基-N-(2-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺(0.2517g，0.999mmol)溶于2mL的DMSO和1mL的肼一水合物中。将生成的反应混合物搅拌过夜。然后将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到5-氟-2-甲基-6-[(2-吡啶基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙，为米色固体(0.0954g，39％)。LCMS：(M+H)+＝249.3。
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将5-氟-2-甲基-6-[(2-吡啶基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙(0.0954g，0.3846mmol)和(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.141g，0.4622mmol)溶于DMF(3mL)中。加入NMM(0.13mL，1.1824mmol)，随后加入HOAt(0.063g，0.4632mmol)和EDC(0.088g，0.459mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺，为白色固体(0.0999g，48％)。LCMS：(M+H)+＝536.3。
部分D：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.0999g，0.1867mmol)溶于10mL的MeOH中，除气，并放置在氮气下。然后加入10％Pd(C)(0.025g)，并将内容物除气，并在氢气球下搅拌2.75小时。然后将内容物除气，并通过Acrodisc(CR PTFE 0.45μm)过滤。将生成的滤液浓缩，并通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为米色固体(0.0231g，28％)。LCMS：(M+H)+＝446.5。
实施例104
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901301
根据一般方法B，在部分A中使用市售可得的(8aS)-八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪代替氮杂环丁烷，并使用DMSO代替MeOH制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。
实施例105
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901302
部分A：
5-氟-6-肼基-N，2-二甲基-N-(4-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(0.18g，0.99mmol)溶于DMSO(1mL)中。向该溶液中加入三乙胺(0.15mL，1.08mmol)，随后加入市售可得的N-甲基-1-(4-吡啶基)甲胺(0.122g，1.0mmol)。将该反应搅拌3小时。然后加入肼一水合物，并将生成的反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物于60℃加热90分钟。冷却后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到5-氟-6-肼基-N，2-二甲基-N-(4-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺(0.130g，49％)。LCMS：(M+H)+＝263.0。
部分B：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将5-氟-6-肼基-N，2-二甲基-N-(4-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺(0.130g，0.496mmol)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸，二异丙基胺盐(0.238g，0.56mmol)溶于DMF(5mL)中。加入NMM(0.272mL，2.4739mmol)，随后加入HOAt(0.081g，0.5955mmol)和EDC(0.114g，0.5946mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为米色固体(0.0979g，36％)。LCMS：(M+2H)+＝545.6。
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.0979g，0.1802mmol)溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将该反应搅拌过夜。蒸发挥发物，并将生成的物质通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为米色固体(0.0273g，33％)。LCMS：(M+H)+＝460.7。
实施例106
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901311
根据一般方法H，使用市售可得的(8aS)-八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-(二氟甲基)-5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例107
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901321
部分A：
5-氟-4-肼基-2-甲基-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]嘧啶
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(180mg，1mmol)溶于1mL的DMSO中，并在室温下搅拌。加入(1，3-噻唑-2-基甲基)胺(124mg，1.1mmol)，随后加入三乙胺(150μL，1.1mmol)。将生成的反应混合物搅拌3h，然后加入肼(1.0mL)，并将内容物于60℃加热1.5小时。然后将反应混合物冷却至室温，并通过RP-HPLC纯化，得到5-氟-4-肼基-2-甲基-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]嘧啶(97mg，38％)。LCMS：(M+H)+：255.2。
部分B：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将5-氟-4-肼基-2-甲基-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]嘧啶(80mg，0.33mmol)、(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(Hunigs碱盐，140mg，0.33mmol)和HOAt(45mg，0.33mmol)溶于3mL的DMF中。加入NMM(0.1mL，0.9mmol)，随后加入EDC(65mg，0.33mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(72mg，45％)。LCMS：(M+H)+：536.2。
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(67mg，0.13mmol)在4∶1的AcOH∶水(5mL)中在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，并将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(30mg，51％)。LCMS：(M+H)+：452.1。
实施例108
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901331
部分A：
4-氯-6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶
向4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(0.309g，1.71mmol)和三乙胺(0.83mL，5.98mmol)的THF(6.0mL)溶液中加入(3S)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例64)(0.320g，1.71mmol)。加入MeOH(3mL)以改善溶解性，并将该反应在室温下搅拌4天。真空除去溶剂，并将乙醚、THF和水加入到生成的残余物中。将有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到4-氯-6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶，为橙色固体(0.277g，63％)。LCMS：(M+H)+＝259.3。
部分B：
4-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶
将4-氯-6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶(0.277g，1.07mmol)、肼一水合物(0.5mL)和DMSO(2.0mL)在室温下搅拌过夜。然后将该反应加热至50℃，并搅拌7小时。通过RP-HPLC纯化，得到4-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶，为橙色固体(0.118g，43％)。LCMS：(M+H)+＝255.3。
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.139g，0.45mmol)、4-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶(0.118g，0.46mmol)、NMM(0.15mL，1.38mmol)、HOAt(0.063g，0.46mmol)和EDC(0.088g，0.46mmol)溶于DMF(2mL)中。将该反应搅拌过夜。通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺，为白色固体(0.118g，47％)。LCMS：(M+H)+＝542.7。
部分D：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.118g，0.22mmol)和Pd(C)(0.018g)在MeOH(10mL)中的溶液按照一般方法A，部分C进行处理，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为白色固体(0.089g，91％)。LCMS：(M+H)+＝452.4。
实施例109
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901341
部分A：
4-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶
向(3R)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例63)(5.88g，31.4mmol)的二氯甲烷(126mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(18.11mL，104mmol)和4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(5.69g，31.4mmol)。将该溶液于35℃加热，并搅拌3天。将该溶液冷却至室温，用DCM(100mL)稀释，并用饱和的NaHCO3水溶液(100mL)洗涤。将水相用新制的DCM(50mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的4-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶(9.60g，＞100％产率)，为褐色油状物，其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：258.9。
部分B：
4-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶
向4-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基嘧啶(9.6g，推测31.4mmol)的1，4-二噁烷(126mL)溶液中加入肼一水合物(8.5mL，175mmol)。将混合物于85℃加热，并搅拌24h。将混合物冷却至室温，并然后真空浓缩。将残余物在DCM(200mL)和饱和的NaHCO3水溶液(100mL)之间分配。将水相用新制的DCM(50mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的4-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶(8.04g，＞100％粗产物的产率)，为深橙色油状物。LCMS：(M+H)+：254.9。
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向4-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-6-肼基-2-甲基嘧啶(8.04g，推测31.4mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(125mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物(15.48g，31.3mmol)、N-甲基吗啉(17.21mL，156mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(5.11g，37.6mmol)和EDC(7.20g，37.6mmol)。将该溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(150mL)稀释，并用水(2x 100mL)洗涤。将合并的水相用新制的Et2O(150mL)萃取，并将该有机相用水(75mL)洗涤。将全部合并的水相用另一批新制的Et2O(150mL)萃取，并将该有机相用水(75mL)洗涤。将合并的有机相用DCM(100mL)稀释，并经无水Na2SO4干燥。将混合物过滤并真空浓缩，得到粗的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(15.60g，28.8mmol，92％产率)，为淡褐色泡沫状物。LCMS：(M+H)+：541.7。
部分D：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(15.60g，28.8mmol)的甲醇(115mL)溶液中加入Pd/C(50％水，3.1g)。将混合物在气球压力下氢化2h，并然后通过玻璃纤维滤器过滤。然后将该溶液真空浓缩，并与EtOAc(100mL)共沸。将生成的固体用70％EtOAc的己烷溶液研磨，并通过真空过滤收集。将上清液真空浓缩，并由EtOAc-己烷结晶，并将该固体与第一批的物质合并。将合并的固体在高真空下干燥过夜，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(8.15g，18.05mmol，62.7％产率)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：451.8。
实施例110
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3S，4R)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901361
根据一般方法C，使用(反式)-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷(实施例89)代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3S，4R)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺，为1∶1的非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+498.5。
实施例111
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901371
根据一般方法C，使用市售可得的(8aS)-八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+496.2。
实施例112
N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
根据一般方法G，使用市售可得的(+/-)-1，4-二氮杂二环[4.4.0]癸烷代替部分A中的(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐，并使用1当量的DIPEA制备N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺，为非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+：498.3。
实施例113
[(2R)-3-(2-{6-[顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901381
部分A：
6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苯甲基酯
向0℃下的2，5-二氢-1H-吡咯-1-甲酸苯甲基酯(10.30g，50.68mmol)的DCM(250mL)溶液中加入m-CPBA(湿的；约75％；17.49g)。将该溶液搅拌，并温热至室温过夜。将该溶液用DCM稀释，并用2x10％NaHCO3水溶液-1N的NaOH水溶液(1∶1)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，并通过硅胶色谱法(40％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苯甲基酯(7.90g，71％产率)，为淡黄色油状物。
部分B：
顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
向6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苯甲基酯(1.0029g，4.574mmol)的MeOH(4.6mL)溶液中加入二甲胺(2.0M的THF溶液，4.6mL，9.2mmol)。将该溶液于140℃在微波辐射下加热1h，并然后冷却至室温。将该溶液真空浓缩，与THF(40mL)共沸，并然后溶于THF(40mL)中。向该溶液中加入DMAP(56mg，0.458mmol)、N，N-二异丙基乙胺(1.6mL，8.96mmol)和MsCl(0.390mL，5.039mmol)。将混合物搅拌2h，并然后加入二甲胺(2.0M的THF溶液，4.6mL，9.2mmol)。将混合物搅拌2天，并然后用DCM(100mL)稀释，并用1N的NaOH水溶液(20mL)洗涤。将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。向残余物的MeOH(5mL)溶液中加入二甲胺(2.0M的THF溶液，4.6mL，9.2mmol)，并将该溶液于140℃在微波辐射下加热30分钟。将该溶液真空浓缩，并直接通过Gilson RPLC纯化，得到消旋的顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(911.4mg，68％产率)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：292.2。
部分C：
N，N，N′，N′-四甲基-顺式-3，4-吡咯烷二胺
向顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(911.4mg，3.128mmol)的MeOH(30mL)溶液中加入10％Pd/C(50％水，270mg)。将混合物在气球压力下氢化1h，并然后过滤，并将生成的溶液真空浓缩，得到粗的消旋的N，N，N′，N′-四甲基-顺式-3，4-吡咯烷二胺(516.0mg，＞100％粗产物的产率)，为亮黄色油状物。LCMS：(M+H)+：158.1。
部分D：
1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，N′，N′-四甲基-顺式-3，4-吡咯烷二胺
向2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(330mg，1.638mmol)的DCM(5mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.342mL，1.963mmol)和N，N，N′，N′-四甲基-顺式-3，4-吡咯烷二胺(257.4mg，1.637mmol)。将该溶液在室温下搅拌4h，并然后真空浓缩。向残余物的MeOH(3mL)溶液中加入肼水合物(0.5mL)。将该溶液搅拌，并于70℃加热3h，并然后冷却至室温。将该溶液直接通过Gilson RPLC(7％MeCN的水溶液至30％MeCN的水溶液，8分钟梯度)纯化，首先得到消旋的1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，N′，N′-四甲基-顺式-3，4-吡咯烷二胺(118.3mg)，为橙色固体，随后得到消旋的4-[顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-6-氯-5-氟-2(1H)-嘧啶酮腙(194.6mg，60％，两步合并的产率)，为橙色油状物。
部分E：
[(2R)-3-(2-{6-[顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
向消旋的1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，N′，N′-四甲基-顺式-3，4-吡咯烷二胺(116.3mg，0.366mmol)的DMF(3mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸，N，N-二异丙基乙胺盐(121.2mg，0.283mmol)、N-甲基吗啉(0.160ml，1.455mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(46mg，0.337mmol)和EDC(65mg，0.339mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{6-[顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(133.4mg，78％产率)，为黄色油状物。LCMS：(M+H)+：599.4。
部分F：
[(2R)-3-(2-{6-[顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{6-[顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(133.4mg，0.223mmol)的4∶1HOAc-H2O(5mL)溶液于30℃搅拌18h。将该溶液真空浓缩，并用DCM(100mL)稀释。将该溶液用饱和的NaHCO3水溶液(50mL)洗涤，并将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过Gilson RPLC纯化，并然后由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-3-(2-{6-[顺式-3，4-双(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为淡黄色固体。LCMS：(M+H)+：515.2。
实施例114
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(顺式)-3-羟基-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901401
部分A：
(反式)-3-羟基-4-甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
在-10℃下，向搅拌下的CuI(10.2g，54mmol)在乙醚(120mL)中的悬浮液中滴加MeLi(73mL，109mmol，1.5M的乙醚溶液)，同时确保温度保持低于-5℃。将生成的溶液于-10℃搅拌20分钟，并加入6-氧杂-3-氮杂二环[3.1.0]己烷-3-甲酸苯甲基酯(实施例113)(5g，23mmol)的乙醚(50mL)溶液，同时保持温度低于-2℃。将该反应于-10℃搅拌1小时，随后将其用水终止，并用DCM分配。进行标准的后处理，得到(反式)-3-羟基-4-甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯，将其纯化(enantiopure)并进行手性色谱法处理，得到两个光学纯的未确定绝对立体化学的化合物。(E1的产量＝1.55g，E2的产量＝1.58g)。
部分B：
(顺式)-3-甲基-4-{[(4-硝基苯基)羰基]氧基}-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
向光学纯的(反式)-3-羟基-4-甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(E1)(1g，4.25mmol)的THF(21mL)溶液中加入4-硝基苯甲酸(1.42g，8.5mmol)、三苯基膦(2.23g，8.5mmol)和DIAD(1.7mL，8.5mmol)。将生成的溶液搅拌过夜。减压除去溶剂，得到粗产物，将其通过RP-HPLC纯化，得到(顺式)-3-甲基-4-{[(4-硝基苯基)羰基]氧基}-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(1.30g，79％)。LCMS：(M+H)+：385.0(单一的未知对映异构体)。
部分C：
(顺式)-4-甲基-3-吡咯烷醇
在0℃下，将1M NaOH(水溶液)(13mL)滴加到(顺式)-3-甲基-4-{[(4-硝基苯基)羰基]氧基}-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(1.30g，3.4mmol)的THF(13mL)溶液中，并将该反应搅拌过夜，停止冰浴。减压除去大约一半的反应体积，并加入氯仿。分离各相，并将有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗的醇。将该物质立即溶于除气的MeOH中，并加入Pd/C(100mg)。将该反应在氢气球下搅拌3.5小时，过滤除去催化剂，并减压蒸发除去溶剂，得到(顺式)-4-甲基-3-吡咯烷醇(390mg，定量产率)。LCMS：(M+H)+：102.2(单一的未知对映异构体)。
部分D：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(3S，4S)-3-羟基-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用(顺式)-4-甲基-3-吡咯烷醇代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(顺式)-3-羟基-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为单一的非对映异构体(吡咯烷环附近的立体化学是任意指定的)。LCMS：(M+H)+：439.2。
实施例115
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901421
(3S)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇盐酸盐
向(3S)-4，4-二甲基-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷醇(J.Med.Chem.1992，35，4205-4213)(0.7738g，3.769mmol)的MeOH(38mL)溶液中加入1N的HCl水溶液(3.8mL，3.8mmol)和10％Pd/C(50％水，230mg)。将混合物在气球压力下氢化18h，并然后通过0.2μm过滤嘴注射器过滤。将生成的溶液真空浓缩，并与MeOH(2x50mL)共沸，得到(3S)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇盐酸盐(0.5267g，93％产率)，为淡橙色固体。LCMS：(M+H)+：116.1。
部分B：
(3S)-1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇
向2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(0.3362g，1.669mmol)的DCM(6mL)溶液中加入(3S)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇盐酸盐(0.2530g，1.691mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.640mL，3.674mmol)。将该溶液搅拌2h，并然后真空浓缩。向残余物的DMSO(4mL)溶液中加入肼水合物(0.6mL)，并将该溶液搅拌过夜。然后将该溶液直接通过Gilson RPLC纯化，首先得到(3S)-1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇(0.1464g，32％产率)，为橙色固体，LCMS：(M+H)+：276.0，随后得到4-氯-5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-2(1H)-嘧啶酮腙(0.2149g，47％产率)，为淡粉红色固体。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
向(3S)-1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇(0.131g，0.475mmol)的DMF(3mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(0.1181g，0.395mmol)、N-甲基吗啉(0.220ml，2.001mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(64mg，0.470mmol)和EDC(91mg，0.475mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.1294g，59％产率)，为橙色油状物。LCMS：(M+H)+：557.3。
部分D：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.1294g，0.232mmol)的4∶1HOAc-水(5mL)溶液于30℃加热，并搅拌过夜。将该溶液冷却至室温，真空浓缩，并直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(69.1mg，63％产率)，为黄色固体。LCMS；(M+H)+：473.2。
实施例116
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901431
部分A：
(3S)-1-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇
向(3S)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇盐酸盐(实施例115)(0.1370g，0.916mmol)的MeOH(3mL)溶液中加入4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(0.1646g，0.909mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.350mL，2.009mmol)。将该溶液于120℃在微波辐射下加热30min，并然后真空浓缩。向残余物的DMSO(3mL)溶液中加入肼水合物(0.5mL)，并将该溶液于50℃加热，并搅拌24h。然后将该溶液直接通过Gilson RPLC纯化，得到(3S)-1-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇(0.1560g，67％产率)，为淡黄色泡沫状物。LCMS：(M+H)+：256.2。
部分B：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向(3S)-1-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇(0.125g，0.490mmol)的DMF(3mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.1246g，0.408mmol)、N-甲基吗啉(0.225ml，2.046mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(67mg，0.492mmol)和EDC(94mg，0.490mmol)。将混合物搅拌过夜，并然后直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.1606g，73％产率)，为紫色油状物。LCMS：(M+H)+：543.3。
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.1606g，0.296mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入10％Pd/C(50％水，48mg)。将混合物在气球压力下氢化1h，并然后过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(4S)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.1205g，90％产率)，为淡粉红色固体。LCMS：(M+H)+：453.3。
实施例117
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(氟甲基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法A，在部分A中，使用(3R)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例63)代替吡咯烷，并使用4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶代替4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(氟甲基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：470.2。
实施例118
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901451
部分A：
(3R)-N，N-二甲基-3-哌啶胺
a)在0℃下，将市售可得的(R)-3-氨基哌啶-1-甲酸叔丁基酯盐酸盐(5.0g，21.1mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(11.2g，52.8mmol)和甲醛(37％的H2O溶液，0.5mL，63.4mmol)在CH2Cl2中溶解并搅拌。将反应混合物温热至室温，并搅拌3h。随后，将反应混合物用另外的CH2Cl2(200mL)稀释，并用1N NaOH(100mL)洗涤。将有机层分离，干燥(Na2SO4)，并蒸发，得到(3R)-3-(二甲基氨基)-1-哌啶甲酸1，1-二甲基乙基酯(5.0g)。
b)将(3R)-3-(二甲基氨基)-1-哌啶甲酸1，1-二甲基乙基酯(5.0g的粗产物，推测21.12mmol)在CH2Cl2(10mL)和4M HCl的二噁烷溶液(21mL，4eqv.)的混合物中溶解并搅拌，形成白色沉淀。在反应大约完成70％时，该反应似乎停止，并因此将另外21mL的4M HCl的二噁烷溶液加入到该反应混合物中。在室温下4h后，蒸发溶剂，得到白色固体的(3R)-N，N-二甲基-3-哌啶胺二盐酸盐(3.5g，89％，两步)。
部分B：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，在部分A中使用(3R)-N，N-二甲基-3-哌啶胺二盐酸盐代替N-甲基哌嗪，并使用2当量的DIPEA制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.3。
实施例119
N-[(2R)-3-[2-(6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
部分A：
4-[(甲氨基)甲基]-1，3-噻唑-2-胺
将4-(氯甲基)-1，3-噻唑-2-胺(490mg，2.65mmol)在40％甲胺水溶液(25ml)中搅拌过夜。将反应混合物蒸发。将残余物用95∶5二氯甲烷/甲醇(25ml)稀释，经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到4-[(甲氨基)甲基]-1，3-噻唑-2-胺，其不需纯化而使用。LCMS：(M+H)+：144.0。
部分B；
N-[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]-6-氯-5-氟-2-甲基-4-嘧啶胺
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(480mg，2.65mmol)溶于20mL的THF中，并在室温下搅拌。加入4-[(甲氨基)甲基]-1，3-噻唑-2-胺(2.65mmol，理论量)，随后加入三乙胺(400μL，2.92mmol)。将生成的反应混合物搅拌过夜并蒸发。将残余物在水中搅拌，并将沉淀的固体通过过滤收集，并真空干燥，得到N-[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]-6-氯-5-氟-2-甲基-4-嘧啶胺(450mg，59％)，其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：288.1。
部分C：
6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基}-5-氟-4-肼基-2-甲基嘧啶
将N-[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]-6-氯-5-氟-2-甲基-4-嘧啶胺(450mg，1.56mmol)溶于5mL的DMSO中，并加入5ml的肼一水合物。将混合物搅拌过夜，并通过RP-HPLC纯化，得到6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基}-5-氟-4-肼基-2-甲基嘧啶(125mg，28％)。LCMS：(M+H)+：284.1。
部分D：
[(2R)-3-[2-(6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基}-5-氟-4-肼基-2-甲基嘧啶(125mg，0.44mmol)、(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(130mg，0.44mmol)和HOAt(65mg，0.48mmol)溶于4mL的DMF中。加入NMM(0.15mL，1.32mmol)，随后加入EDC(96mg，0.48mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-[2-(6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(114mg，46％)。LCMS：(M+H)+：565.3。
部分E：
[(2R)-3-[2-(6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
在室温下，将[(2R)-3-[2-(6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(114mg，0.2mmol)在4∶1AcOH∶水(5mL)中搅拌过夜。真空除去溶剂，并将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-[2-(6-{[(2-00氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基]氨基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(18mg，18％)。LCMS：(M+H)+：481.2。
实施例120
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(顺式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901481
部分A：
(反式)-4-甲基-3-吡咯烷醇
将(反式)-3-羟基-4-甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(E1，实施例114，部分A)(100mg，0.43mmol)和10％Pd/C(20mg)悬浮于甲醇(7mL)中，并在氢气球下搅拌19h。过滤催化剂，并蒸发溶剂，得到(反式)-4-甲基-3-吡咯烷醇(单一的未知对映异构体)。
部分B：
(反式)-3-{[(4-氯苯基)磺酰基]氧基}-4-甲基-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯
向(反式)-4-甲基-3-吡咯烷醇(单一的未知对映异构体)(707mg，7mmol)在MeOH(10mL)、DCM(10mL)和饱和的碳酸钾水溶液(20mL)的混合物中的溶液中加入焦碳酸二叔丁基酯(1.84g，8.42mmol)，并将生成的溶液搅拌过夜。加入水随后加入氯仿，并分离各相。将有机层用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空蒸发，得到粗的Boc-保护的醇(1.37g)。将其立即溶于吡啶(10mL)中，并加入对甲苯磺酰氯(2.1g，11mmol)。将该反应搅拌过夜，冷却至0℃，并加入1M HCl。低温下搅拌10分钟后，加入氯仿并分离各相。将水相用氯仿萃取两次，并将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到(反式)-3-{[(4-氯苯基)磺酰基]氧基}-4-甲基-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯。LCMS：(M+Na)+：378.1(单一的未知对映异构体)。
部分C：
(顺式)-3-氨基-4-甲基-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯
向搅拌下的(反式)-3-{[(4-氯苯基)磺酰基]氧基}-4-甲基-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.3g，6.5mmol)的DMF(23mL)溶液中加入NaN3(4.2g，65mmol)。将生成的溶液于60℃搅拌直至LCMS显示反应完成。冷却至室温后，将该反应过滤以除去不溶的沉淀，并真空除去溶剂。将残余物溶于EtOAc中，用水洗涤，经硫酸钠干燥，并真空浓缩，得到1.26g粗的中间体。将该粗的叠氮化合物立即溶于除气的MeOH(20mL)中，并加入10％Pd/C(126mg)。将生成的悬浮液在氢气球下搅拌过夜，随后过滤除去催化剂，并将溶剂在减压下蒸发，得到(顺式)-3-氨基-4-甲基-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.02g，70％)。LCMS：(M-tBut)+：145.1(单一的未知对映异构体)。
部分D：
(顺式)-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷.HCl
将(顺式)-3-氨基-4-甲基-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.0g，5.0mmol)溶于THF(25mL)中，并加入甲醛(4.1mL，50mmol，37％的水溶液)。将生成的混合物搅拌40分钟，并加入三乙酰氧基硼氢化钠(14.8g，50.0mmol)。将该反应搅拌72小时，并然后通过加入1M NaOH(水溶液)来终止。加入乙醚，并分离各相。将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并蒸发，得到中间体二甲基化的胺(1.65g)。将其溶于HCl(10mL，40mmol，4M的二噁烷溶液)中，并搅拌过夜。蒸发溶剂和过量的酸，得到(顺式)-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷.HCl(1.42g)。(单一的未知对映异构体)。
部分E：
根据一般方法B，使用(顺式)-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷.HCl代替部分A中的氮杂环丁烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R，4R)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为单一的未知对映异构体。LCMS：(M+H)+：480.3。
实施例121
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法C，使用(2S)-1，2-二甲基哌嗪(实施例40)代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+484.4。
实施例122
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(顺式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901501
根据一般方法D，使用光学纯的(顺式)-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷(实施例120)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(顺式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为单一的未知非对映异构体。LCMS：(M+H)+：486.1/483.3。
实施例123
N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901502
部分A：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(非对映异构体1)
根据一般方法G的部分A和部分B，在部分A中使用市售可得的(+/-)-1，4-二氮杂二环[4.4.0]癸烷代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(非对映异构体的混合物)。通过手性色谱法(Chiralpak AD-H 21.2x250mm)分离[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(非对映异构体1)。LCMS：(M+H)+：588.3。
部分B：
N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
根据一般方法G的部分C，使用[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(非对映异构体1)代替部分C中的[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺制备N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)。LCMS：(M+H)+：498.3。
实施例124
N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
部分A：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(非对映异构体2)
根据一般方法G的部分A和部分B，使用市售可得的(+/-)-1，4-二氮杂二环[4.4.0]癸烷代替部分A中的(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(非对映异构体的混合物)。通过手性色谱法(Chiralpak AD-H 21.2x250mm)分离[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(非对映异构体2)。LCMS：(M+H)+：588.3。
部分B：
N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
根据一般方法G的部分C，使用[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(非对映异构体2)代替部分C中的[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺制备N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)。LCMS：(M+H)+：498.3。
实施例125
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901521
根据一般方法C，使用(2R)-1，2-二甲基哌嗪(实施例39)代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+484.5。
实施例126
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(氟甲基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901531
根据一般方法A，在部分A中使用(3S)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例40)代替吡咯烷，并使用4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶代替4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(氟甲基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：470.2。
实施例127
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环丙基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用市售可得的环丙基胺代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环丙基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：415.2。
实施例128
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901533
部分A：
1-乙酰基环丙烷甲酸乙酯
向搅拌下的3-氧代丁酸乙酯(10mL，78.45mmol)和1，2-二溴乙烷(6.5mL，78.45mmol)在150mL的DMF中的溶液中加入碳酸钾(22.7g，164.74mmol)。将生成的反应混合物在室温下搅拌2天。将该溶液用300mL的水稀释。将产物萃取到乙醚(2x200mL)中，并将合并的有机萃取物用水(1x1000mL)洗涤，并干燥(MgSO4)。过滤并常压蒸馏乙醚，得到粗产物，将其在减压下(10mBar)蒸馏，得到1-乙酰基环丙烷甲酸乙酯(6.4273g，52％)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分B：
5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮
将1-乙酰基环丙烷甲酸乙酯(6.4273g，41.153mmol)溶于46mL的EtOH中。将溴(2.32mL，45.2683mmol)缓慢地加入到该溶液中。将生成的反应混合物搅拌2h，然后真空浓缩。将粗的残余物溶于46mL的EtOH中，并将混合物用冰水浴冷却至0℃。向该溶液中缓慢地加入苄基胺(11.2mL，102.8825mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌过夜，然后真空浓缩至干。将残余物溶于CH2Cl2(200mL)和1N的HCl溶液(100mL)中。分离各相，并将水相用CH2Cl2(100mL)萃取，将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。通过硅胶色谱法，使用己烷/EtOAc(60∶40)的洗脱系统纯化，得到5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮(2.4283g，27％)，为橙色固体。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分C：
5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇
将5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮(997.4mg，4.63mmol)溶于46mL的THF中，并在搅拌下分批加入LiAlH4(997mg)。将混合物于65℃加热5小时，然后冷却至0℃。将该反应用Na2SO4·H2O终止，并在室温下搅拌过夜。将内容物通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用EtOAc洗涤。将Celite硅藻土滤饼悬浮于EtOAc(200mL)中，并煮沸5分钟。将悬浮液过滤，并然后将合并的有机滤液真空浓缩，得到5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇(983mg，＞100％)。LCMS：(M+H)+：204.1
部分D：
5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇盐酸盐
将5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇(推测941.9mg，4.63mmol)溶于4.6mL的1N HCl水溶液在40mL MeOH中的溶液中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(280mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置过夜。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用MeOH洗涤。将生成的滤液真空浓缩，并与MeOH(3x40mL)共沸，得到纯的5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇盐酸盐(685mg，99％)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分E：
5-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(110mg，0.636mmol)溶于3mL的MeOH中，然后加入5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇盐酸盐(685mg，0.668mmol)，随后加入DIPEA(243μL，1.4mmol)。将生成的反应混合物于120℃微波加热30min，将挥发物真空浓缩，并将残余物溶于DMSO(4mL)和MeOH(1mL)的混合物中。然后加入肼一水合物(600μL)，并将内容物于60℃加热过夜。然后将反应混合物冷却至室温，并通过RP-HPLC纯化，得到5-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇(82mg，51％)。LCMS：(M+H)+：254。
部分F：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将5-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇(82mg，0.324mmol)、(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(115mg，0.27mmol)和HOAt(44mg，0.324mmol)溶于2mL的DMF中。加入NMM(0.089mL，0.81mmol)，随后加入EDC(62mg，0.324mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(7S)-7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(91mg，63％)。LCMS：(M+H)+：535.3。
部分G：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(7S)-7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(91mg，0.202mmol)溶于AcOH/H2O的混合物(10mL，4∶1)中，在RT下搅拌直至LCMS表明脱保护基反应完成(过夜)。将反应混合物在真空下浓缩至干，并通过RP-HPLC纯化，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺(25mg，27％)。LCMS：(M+H)+：451.2。
实施例129
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901561
部分A：
(3R)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇盐酸盐
向(3R)-4，4-二甲基-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷醇(J.Med.Chem.1992，35，4205-4213)(1.8634g，9.076mmol)的MeOH(45mL)溶液中加入1N的HCl水溶液(9.1mL，9.1mmol)和10％Pd/C(50％水，375mg)。将混合物在气球压力下氢化2天，并然后过滤。将该溶液真空浓缩，并与MeOH(4x20mL)共沸，得到(3R)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇盐酸盐(1.2654g，93％产率)，为琥珀色固体。LCMS：(M+H)+：116.1。
部分B：
(4R)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
向(3R)-4，4-二甲基-3-吡咯烷醇盐酸盐(0.9920g，6.630mmol)在1∶1DCM-1N NaOH水溶液(33mL)中的混合物中加入氯甲酸苄基酯(0.994mL，6.963mmol)。将混合物剧烈搅拌过夜，并然后用DCM(100mL)稀释。分离各相，并将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。然后将残余物通过硅胶色谱法(40％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到(4R)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(1.4654g，89％产率)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：250.1。
部分C：
3，3-二甲基-4-氧代-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
向(4R)-4-羟基-3，3-二甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(1.4088g，5.651mmol)的MeCN(50mL)溶液中加入N-甲基吗啉-N-氧化物(0.861g，7.350mmol)和过钌酸四正丙基铵(0.099g，0.282mmol)。将该溶液搅拌90min，真空浓缩，并直接通过硅胶色谱法(20％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到3，3-二甲基-4-氧代-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(1.1321g，79％)，为无色油状物。LCMS：(M+Na)+：270.4。
部分D：
(4Z)-3，3-二甲基-4-[(甲氧基)亚氨基]-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
向3，3-二甲基-4-氧代-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(0.9135g，3.694mmol)的MeOH(37mL)溶液中加入乙酸钠(0.606g，7.387mmol)和O-甲基羟基胺盐酸盐(0.620g，7.397mmol)。将该溶液搅拌3h，并然后真空浓缩。将残余物在DCM(100mL)、水(5mL)和饱和的NaHCO3水溶液(30mL)之间分配。将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(4Z)-3，3-二甲基-4-[(甲氧基)亚氨基]-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(0.9124g，89％产率)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：277.0。
部分E：
4-氨基-3，3-二甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
向(4Z)-3，3-二甲基-4-[(甲氧基)亚氨基]-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(0.7126g，2.579mmol)的THF(26mL)溶液中加入甲硼烷-THF络合物(1.0M的THF溶液，5.2mL，5.2mmol)。将该溶液于50℃加热，并搅拌2h。然后将该溶液冷却至室温，并通过加入6N的NaOH水溶液(2mL)来终止。将混合物用盐水稀释，并用Et2O(3x100mL)萃取。将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。向残余物的MeOH(20mL)溶液中加入50％的NH2OH水溶液(5mL)，并将该溶液于60℃加热，并搅拌过夜。然后将该溶液冷却至室温，并真空浓缩。将残余物在DCM(200mL)和1N的NaOH水溶液(50mL)之间分配，并将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到消旋的4-氨基-3，3-二甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(0.5899g，92％产率)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：249.1。
部分F：
4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
将消旋的4-氨基-3，3-二甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(0.5899g，2.376mmol)在甲酸(5mL)和福尔马林(5mL)中的溶液于100℃加热，并搅拌2h。然后将该溶液冷却至室温，并用6N的NaOH水溶液调节至pH为14。然后将混合物用Et2O(2x100mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。观察到存在两相，并收集MeOH能溶解的部分，并真空浓缩，得到粗的消旋的4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(0.6862g，＞100％粗产物的产率)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：277.2。
部分G：
N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷
向消旋的4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(推测0.6565g，2.376mmol)的MeOH溶液中加入10％Pd/C(50％水，195mg)。将混合物在气球压力下氢化1h，并然后过滤。将该溶液真空浓缩，得到消旋的N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷(0.3479g，定量产率)，为几乎无色的油状物。LCMS：(M+H)+：143.1。
部分H：
1-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷
向N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷(0.0918g，0.645mmol)的MeOH(3mL)溶液中加入4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(0.1088g，0.601mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.130mL，0.746mmol)。将该溶液于120℃在微波辐射下加热，并搅拌30分钟。然后将该溶液冷却至室温，并真空浓缩。向残余物的4∶1DMSO-MeOH(5mL)溶液中加入肼水合物(0.5mL)。将该溶液于65℃加热，并搅拌过夜。然后将该溶液冷却至室温，并用DCM(50mL)稀释。将混合物用饱和的NaHCO3水溶液(20mL)洗涤，并将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过Gilson RPLC纯化，得到消旋的1-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷(0.0617g，36％)，为淡黄色固体。LCMS：(M+H)+：283.2。
部分I：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向消旋的1-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷(0.0617g，0.219mmol)的DMF(3mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.0637g，0.209mmol)、N-甲基吗啉(0.120mL，1.091mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(34mg，0.250mmol)和EDC(48mg，0.250mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.0775g，65％产率，非对映异构体的混合物)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：570.3。
部分J：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.0775g，0.136mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入10％Pd/C(50％水，23mg)。将混合物在气球压力下氢化1h，并然后过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.0566g，87％产率，非对映异构体的混合物)，为灰白色固体。LCMS：(M+H)+：480.1。
实施例130
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901601
部分A：
5-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇
向2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(611mg，3.036mmol)的DCM(5mL)溶液中加入DIPEA(1.163mL，6.679mmol)，随后加入5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇盐酸盐(实施例128)(477mg，3.188mmol)。将该溶液在室温下搅拌。1小时后，将挥发物真空浓缩，并将残余物溶于DMSO(4mL)和MeOH(1mL)的混合物中。加入肼一水合物(3.055mL)，并将内容物在RT下搅拌过夜。真空除去过量的肼，并将残余的溶液通过RP-HPLC纯化，得到推测为5-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇(第一洗脱液，167mg)，以及推测为6-氯-5-氟-2-肼基-4-(4-甲基-1-哌嗪基)嘧啶(第二洗脱液，312mg)。LCMS：(M+H)+：274.0。
部分B：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将5-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-醇(167mg 0.610mmol)、(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(217mg，0.508mmol)和HOAt(83mg，0.610mmol)溶于5mL的DMF中。加入NMM(0.167mL，1.525mmol)，随后加入EDC(117mg，0.6101mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(7S)-7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(223mg，79％)。LCMS：(M+H)+：555.3。
部分C：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(7S)-7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(223mg，0.401mmol)溶于中AcOH/H2O混合物(20mL，4∶1)中，并在RT下搅拌直至LCMS表明脱保护基反应完成(过夜)。将反应混合物真空浓缩至干，并通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(7-羟基-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(14mg，7％)。LCMS：(M+H)+：471.1。
实施例131
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901611
根据一般方法C，使用(3S)-1，3-二甲基哌嗪(实施例64)代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+484.4。
实施例132
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901612
根据一般方法C，使用(3R)-N，N-二甲基-3-哌啶胺(实施例118)代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-哌啶基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+498.5。
实施例133
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901621
部分A：
1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷
向消旋的N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷(0.1629g，1.145mmol，根据实施例129制备)的DCM(4mL)溶液中加入2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(0.2219g，1.102mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.230mL，1.320mmol)。将该溶液在室温下搅拌3h，并然后真空浓缩。向残余物的4∶1DMSO-MeOH(5mL)溶液中加入肼水合物(0.5mL)，并将该溶液搅拌过夜。将该溶液用DCM(50mL)稀释，并用饱和的NaHCO3水溶液(20mL)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过Gilson RPLC纯化，首先得到消旋的1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷(0.0546g，16％产率)，为黄色/橙色油状物，LCMS：(M+H)+：303.1，随后得到消旋的4-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2(1H)-嘧啶酮腙(0.0859g，26％产率)，为黄色/橙色油状物。
部分B：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
向消旋的1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷(0.0546g，0.180mmol)的DMF(3mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸，N，N-二异丙基乙胺盐(71.1mg，0.166mmol)、N-甲基吗啉(0.100mL，0.910mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(27mg，0.198mmol)和EDC(38mg，0.198mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.0681g，70％产率，非对映异构体的混合物)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：584.4。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.0681g，0.117mmol)的4∶1HOAc-水(5mL)溶液搅拌56h，并然后真空浓缩。将残余物的DCM(100mL)溶液用饱和的NaHCO3水溶液(30mL)洗涤，并将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过GilsonRPLC纯化，并由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.0300g，51％产率，非对映异构体的混合物)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例134
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-(甲硫基)-6-(八氢-2(1H)-异喹啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901631
根据一般方法C，使用市售可得的十氢异喹啉代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-(甲硫基)-6-(八氢-2(1H)-异喹啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+510.5。
实施例135
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901641
部分A：
5-(2-乙基-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺
向消旋的N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺二盐酸盐(0.163g，0.765mmol，根据实施例136的方法制备)的MeOH(3mL)溶液中加入4，6-二氯-2-乙基-5-氟嘧啶(0.1358g，0.696mmol)。将该溶液于120℃在微波辐射下加热30min，并然后真空浓缩。向残余物的3∶1DMSO-MeOH(4mL)溶液中加入肼水合物(0.5mL)。将该溶液于50℃加热，并搅拌3天。然后将该溶液冷却至室温，并用DCM(100mL)稀释。将混合物用饱和的NaHCO3水溶液(20mL)洗涤，并将水相用新制的DCM(50mL)反萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过Gilson RPLC纯化，得到消旋的5-(2-乙基-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(0.0818g，40％产率)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：295.2。
部分B：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向消旋的5-(2-乙基-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(0.0818g，0.278mmol)的DMF(3mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.0778g，0.255mmol)、N-甲基吗啉(0.140mL，1.273mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(42mg，0.309mmol)和EDC(59mg，0.308mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.1058g，71％产率，非对映异构体的混合物)，为黄色油状物。LCMS：(M+H)+：582.3。
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.1058g，0.182mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入10％Pd/C(50％水，32mg)。将混合物在气球压力下氢化1h，并然后过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物与EtOAc共沸，并由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.0795g，89％产率，非对映异构体的混合物)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：492.3。
实施例136
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901651
部分A：
1-乙酰基环丙烷甲酸乙酯
向3-氧代丁酸乙酯(10.0g，76.84mmol)的DMF(150mL)溶液中加入碳酸钾(22.30g，161.3mmol)和1，2-二溴乙烷(6.62mL，76.82mmol)。将混合物搅拌2天，并然后过滤。将该溶液用水(300mL)稀释，并用Et2O(2x200mL)萃取。将合并的有机相用干净的水(100mL)洗涤，经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物在约10mbar下进行真空蒸馏，并收集在100℃沸腾的馏分，得到1-乙酰基环丙烷甲酸乙酯(7.6482g，64％)，为无色油状物。
部分B：
5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮
通过注射器向1-乙酰基环丙烷甲酸乙酯(7.6482g，48.97mmol)的EtOH(54mL)溶液中缓慢地加入溴(2.76mL，53.87mmol)。将该橙色溶液搅拌2h，并然后真空浓缩。通过注射器向0℃下的残余物的EtOH溶液(54mL)中缓慢地加入苄基胺(13.4mL，122.7mmol)，并将混合物搅拌，并温热至室温过夜。将混合物真空浓缩，并在DCM(200mL)和1N的HCl水溶液(100mL)之间分配。将水相用新制的DCM(100mL)萃取，并将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(40％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮(2.7842g，26％)，为黄色固体。LCMS：(M+H)+：216.1。
部分C：
(7Z)-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮7-(O-甲基肟)
向5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮(2.7802g，12.92mmol)的MeOH(65mL)溶液中加入乙酸钠(2.12g，25.8mmol)和O-甲基羟基胺盐酸盐(2.16g，25.9mmol)。将混合物搅拌过夜，并然后用DCM(100mL)稀释。将混合物用饱和的NaHCO3水溶液洗涤，并将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的(7Z)-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮7-(O-甲基肟)(3.4094g，＞100％粗产物的产率)，为黄色油状物。LCMS：(M+H)+：245.1。
部分D：
5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺.
向(7Z)-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮7-(O-甲基肟)(推测3.1553g，12.92mmol)的THF(130mL)溶液中加入氢化铝锂(1.58g，41.63mmol)。将混合物于65℃加热，并搅拌3h。然后将混合物冷却至0℃，并加入Na2SO4·10H2O。将混合物搅拌过夜，并然后加入1N NaOH水溶液(6mL)。将混合物剧烈搅拌30min，并然后用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到消旋的粗的5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(2.5355g，97％，2步)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：203.1。
部分E：
N，N-二甲基-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺
将消旋的5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(2.5355g，12.53mmol)在甲酸(20mL)和福尔马林(20mL)中的溶液于100℃加热，并搅拌3h。然后将该溶液冷却至0℃，并用6N的NaOH水溶液调节至pH为14。将生成的悬浮液用Et2O(2x200mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥。将混合物过滤，并将该溶液真空浓缩。然后将MeOH可溶解的部分通过Gilson RPLC纯化，得到消旋的N，N-二甲基-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(1.7643g，61％)，为橙色的油状物。LCMS：(M+H)+：231.1。
部分F：
N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺二盐酸盐
向消旋的N，N-二甲基-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(0.8015g，3.479mmol)的MeOH(18mL)溶液中加入1N的HCl水溶液(6.96mL，6.96mmol)和10％Pd/C(50％水，160mg)。将混合物在气球压力下氢化过夜，并然后过滤。将该溶液真空浓缩，得到粗的消旋的N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺二盐酸盐(0.8060g，＞100％粗产物的产率)。LCMS：(M+H)+：141.1。
部分G：
5-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺
向消旋的N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺二盐酸盐(0.4585g，2.151mmol)在DCM(8mL)中的混合物中加入2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(0.3234g，1.606mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.25mL，7.18mmol)。将该溶液搅拌3小时，并然后真空浓缩。向残余物的3∶1DMSO-MeOH溶液中加入肼水合物(1mL)，并将该溶液搅拌3天，并然后用DCM(100mL)稀释。将混合物用饱和的NaHCO3水溶液(20mL)洗涤，并将水相用新制的DCM(50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，并过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物通过Gilson RPLC纯化，首先得到消旋的5-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(0.0968g，20％产率)，为橙色油状物，LCMS：(M+H)+：301.1，随后得到消旋的4-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-2(1H)-嘧啶酮腙(0.1990g，41％)，为橙色泡沫状物。
部分H：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
向消旋的5-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(0.0968g，0.322mmol)的DMF(3mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸，N，N-二异丙基乙胺盐(122.1mg，0.285mmol)、N-甲基吗啉(0.160mL，1.455mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(47mg，0.345mmol)和EDC(66mg，0.344mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.0961g，58％，非对映异构体的混合物)，为淡紫色油状物。LCMS：(M+H)+：582.3。
部分I：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.0961g，0.165mmol)的4∶1HOAc-水(5mL)溶液搅拌3天。将该溶液真空浓缩，并用DCM(100mL)稀释。将该溶液用饱和的NaHCO3水溶液(25mL)洗涤，并将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过Gilson RPLC纯化，并将所需的级分真空浓缩，并首先与MeOH共沸并然后与EtOAc共沸。将残余物由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.0469g，57％，非对映异构体的混合物)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：498.1。
实施例137
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901681
部分A：
2，6-二氯-5-氟-N-甲基-N-(4-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺
将市售可得的N-甲基-1-(4-吡啶基)甲胺(0.305g，2.5mmol)溶于THF(5mL)中。向该溶液中加入三乙胺(0.38mL，2.73mmol)，随后加入溶于THF(5mL)中的2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(0.5g，2.5mmol)。将该反应搅拌2.5小时。将反应混合物用水稀释，然后用乙醚萃取。将有机物干燥(MgSO4)，并浓缩。将生成的物质通过使用5％MeOH在95％DCM中的溶剂的混合物作为流动相经硅胶过滤来纯化，得到2，6-二氯-5-氟-N-甲基-N-(4-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺，为褐色油状固体(0.3516g，49％)。LCMS：(M+H)+＝287.0。
部分B：
2-氯-5-氟-6-肼基-N-甲基-N-(4-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺
将2，6-二氯-5-氟-N-甲基-N-(4-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺(0.3516g，1.23mmol)溶于5mL的DMSO和肼一水合物(0.36mL，7.4229mmol)中。将反应器加压密封并于50℃加热2.5小时。然后将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到2-氯-5-氟-6-肼基-N-甲基-N-(4-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺，为暗红色固体(0.0803g，23％)。LCMS：(M+H)+＝283.0。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将2-氯-5-氟-6-肼基-N-甲基-N-(4-吡啶基甲基)-4-嘧啶胺(0.0803g，0.2847mmol)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸，二异丙基胺盐(0.146g，0.3406mmol)溶于DMF(4mL)中。加入NMM(0.16mL，1.4552mmol)，随后加入HOAt(0.046g，0.3382mmol)和EDC(0.065g，0.339mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为米色固体(0.0958g，60％)。LCMS：(M+H)+＝564.3。
部分D：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.0958g，0.1701mmol)溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将该反应混合物搅拌过夜。蒸发挥发物，并将生成的物质通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(4-吡啶基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为米色固体(0.0249g，31％)。LCMS：(M+H)+＝480.1。
实施例138
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(反式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901701
根据一般方法D，使用(反式)-N，N，4-三甲基-3-氨基吡咯烷(实施例89)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(反式)-3-(二甲基氨基)-4-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.6。
实施例139
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S，3R)-3-羟基-2-甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901702
根据一般方法A，使用(2S，3R)-2-甲基-3-吡咯烷醇(Tetrahedron，1998，54，12547-12560)代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S，3R)-3-羟基-2-甲基-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：439.2。
实施例140
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3-羟基-3-甲基-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901711
部分A：
3-甲基-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷醇
在0℃下，向市售可得的1-(苯基甲基)-3-吡咯烷酮(1.0g，5.71mmol)的THF(30mL)和乙醚(30mL)溶液中加入MeMgBr(1.4M在甲苯：THF(3∶1)中的溶液)(6.1mL，8.65mmol)。将该反应于0℃搅拌1.5小时，然后用水终止并萃取。真空除去有机溶剂，并再次用乙醚萃取，干燥有机物(Na2SO4)，并真空除去溶剂。通过RP-HPLC纯化，得到黄色油状物的消旋的3-甲基-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷醇(0.501g，46％)。LCMS：(M+H)+＝192.3。
部分B：
3-甲基-3-吡咯烷醇
将3-甲基-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷醇(0.501g，2.62mmol)和Pd(C)在MeOH(30mL)中的溶液在标准氢化条件下按照一般方法A，部分C中所述处理3天，得到3-甲基-3-吡咯烷醇，为橙色油状物(0.239g，90％)。LCMS：(M+H)+＝102.1。
部分C：
1-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-3-甲基-3-吡咯烷醇
向2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(0.476g，2.36mmol)和三乙胺(0.36mL，2.60mmol)的THF溶液中加入3-甲基-3-吡咯烷醇(0.239g，2.36mmol)在THF和MeOH(2mL)中的溶液。将该反应在室温下搅拌2.5小时，并然后真空除去溶剂。将水加入到残余物中，并将混合物用乙酸乙酯萃取。将有机物干燥(Na2SO4)并蒸发，得到1-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-3-甲基-3-吡咯烷醇，为橙色固体(0.486g，77％)。LCMS：(M+H)+＝266.1。
部分D：
1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-3-甲基-3-吡咯烷醇
将1-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-3-甲基-3-吡咯烷醇(0.486g，1.83mmol)和肼一水合物(0.53mL，10.96mmol)在DMSO(5mL)中于50℃加热直至认为该反应完成。通过RP-HPLC纯化，得到1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-3-甲基-3-吡咯烷醇，为褐色固体(0.104g，21％)。LCMS：(M+H)+＝262.1。
部分E：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3-羟基-3-甲基-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.122g，0.4mmol)、消旋的1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-3-甲基-3-吡咯烷醇(0.104g，0.4mmol)、NMM(0.13mL，1.2mmol)、HOAt(0.054g，0.4mmol)、EDC(0.077g，0.4mmol)和DMF(2mL)混合。当该反应完成时，将混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3-羟基-3-甲基-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺，为非对映异构体的混合物(0.035g，16％)。LCMS：(M+H)+＝549.5。
部分F：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3-羟基-3-甲基-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3-羟基-3-甲基-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.035g，0.064mmol)和Pd(C)(0.005g)在MeOH(10mL)中的溶液在标准氢化条件下按照一般方法A，部分C中所述的进行处理。通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3-羟基-3-甲基-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为白色固体(非对映异构体的混合物)(0.010g，34％)。LCMS：(M+H)+＝459.4。
实施例141
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3S)-3-(羟基甲基)-4-吗啉基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901731
根据一般方法C，使用市售可得的(3S)-3-吗啉基甲醇代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3S)-3-(羟基甲基)-4-吗啉基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+487.5。
实施例142
N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢吡嗪并[1，2-a]氮杂
Figure BPA00001182153901732
-2(1H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901733
根据一般方法G，使用市售可得的十氢-吡嗪并[1，2-A]氮杂代替部分A中的(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐，并使用1当量的DIPEA制备N-[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(八氢吡嗪并[1，2-a]氮杂
Figure BPA00001182153901735
-2(1H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：602.4。
实施例143
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(4-吗啉基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用市售可得的4-(2-氨基乙基)吗啉代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(4-吗啉基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：488.3。
实施例144
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2R)-2-(羟基甲基)-4-甲基-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901741
根据一般方法A，使用[(2R)-4-甲基-2-哌嗪基]甲醇(Tetrahedron：Asymmetry，1993，4，2389-2398)代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2R)-2-(羟基甲基)-4-甲基-1-哌嗪基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：468.3。
实施例145
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3R，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
部分A：
(3R，5S)-3，5-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯
在0℃下，向顺式-2，6-二甲基哌嗪(1.142g，10mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中滴加焦碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯(2.161g，9.9mmol)的二氯甲烷(6mL)溶液。将反应混合物温热至室温并搅拌过夜，随后用二氯甲烷稀释，并用饱和的Na2CO3水溶液洗涤。将水层用二氯甲烷反萃取一次。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到(3R，5S)-3，5-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.04g，95％)。LCMS：(M+H)+：215.1。
部分B：
(3R，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯
在0℃下，向(3R，5S)-3，5-二甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.04g，9.5mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入甲醛(1.075mL，37％的水溶液，14.3mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.628g，12.4mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌2h，随后用二氯甲烷稀释，并用1N NaOH溶液洗涤。然后将有机物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到(3R，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.06g，95％)。LCMS：(M+H)+：229.2。
部分C：
(2R，6S)-1，2，6-三甲基哌嗪，TFA盐
将(3R，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(253mg，1.1mmol)在二氯甲烷(3mL)中溶解并搅拌。滴加三氟乙酸(1.2mL)，并将生成的反应混合物在室温下搅拌2.5小时。然后将溶剂蒸发，并将粗的(2R，6S)-1，2，6-三甲基哌嗪的TFA盐用于下一步骤。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分D：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3R，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法G，使用(2R，6S)-1，2，6-三甲基哌嗪TFA盐代替部分A中的(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3R，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.3。
实施例146
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R，3R)-3-(二甲基氨基)-2-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901751
根据一般方法A，使用(2R，3R)-N，N，2-三甲基-3-氨基吡咯烷(Tetrahedron，1998，54，12547-12560)代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R，3R)-3-(二甲基氨基)-2-甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.4。
实施例147
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2，2，4-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用1，3，3-三甲基-哌嗪(市售可得的)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2，2，4-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.3。
实施例148
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3，3，4-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用1，2，2-三甲基-哌嗪(市售可得的)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3，3，4-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.3。
实施例149
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3R，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。
根据一般方法A，使用(2R，6S)-1，2，6-三甲基哌嗪TFA盐(实施例145)代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3R，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.4。
实施例150
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
部分A：
(7Z)-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮7-(O-甲基肟)
将5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮(实施例128)(2.8619g，13.29mmol)、乙酸钠(2.23g，26.59mmol)和O-甲基羟基胺盐酸盐(2.22g，26.59)溶于65mL的MeOH中。将混合物在室温下搅拌过夜，并然后用300mL的DCM稀释。将混合物用饱和的NaHCO3水溶液(200mL)洗涤，并将有机物经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(7Z)-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮7-(O-甲基肟)(3.0864g，95％)。LCMS：(M+H)+：245.1。
部分B：
7-氨基-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4-酮
根据实施例130，部分C，使用(7Z)-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮7-(O-甲基肟)代替5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4，7-二酮制备7-氨基-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4-酮。LCMS：(M+H)+：203.1。
部分C：
N，N-二甲基-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺
将7-氨基-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-4-酮(2.535g，12.28mmol)溶于AcOH(20mL)和HCHO水溶液(20mL)的混合物中，将内容物于100℃加热3小时，并然后冷却至0℃。将该溶液用6N NaOH水溶液调节pH至14，并然后用Et2O(2x200mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，并通过RP-HPLC纯化，得到N，N-二甲基-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(2.6062g，92.5％)。通过手性LC分离对映异构体的混合物。E1(1.4g)LCMS：(M+H)+：231。E2(1.5g)LCMS：(M+H)+：231。
部分E：
N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺
将N，N-二甲基-5-(苯基甲基)-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(E1)(1.4g，0.18mmol)溶于12mL的1N HCl水溶液在30mL MeOH中的混合物中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(280mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置过夜。然后将内容物除气，并通过0.2μm过滤嘴注射器过滤。将生成的滤液真空浓缩，并将残余物用1N NaOH水溶液调节至pH为14。将水相用CH2Cl2(2x100mL)萃取，将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到纯的N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(718mg，84％)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分F：
2-氯-5-氟-4，6-双(苯硫基)嘧啶
在-30℃下，向2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(10.0635g，49.96mmol)的DCM(250mL)溶液中加入苯硫酚(10.26mL，99.93mmol)。在剧烈搅拌下，向该溶液中通过加料漏斗滴加DIEA(21.8mL，124.9mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1h，然后将挥发物真空浓缩，并将残余物溶于MeOH(100mL)和水(200mL)中。将生成的淡黄色固体沉淀通过过滤收集。将沉淀用水(2x100mL)洗涤，将生成的固体真空干燥，得到2-氯-5-氟-4，6-双(苯硫基)嘧啶(17.4080g，99％)。LCMS：(M+H)+：349.0。
部分G：
2-氯-5-氟-4，6-双(苯基磺酰基)嘧啶
将2-氯-5-氟-4，6-双(苯硫基)嘧啶(3.0185g，8.652mmol)溶于ACN(43mL)和水(86mL)的混合物中。向该溶液中加入高碘酸钠(11.10g，51.916mmol)，随后加入氯化钌(III)(36mg，0.173mmol)。将混合物剧烈搅拌3.5小时。将反应混合物用CH2Cl2(2x100mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到纯的2-氯-5-氟-4，6-双(苯基磺酰基)嘧啶(2.51g，70％)。LCMS：(M+H)+：413.0。
部分H：
5-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺
将N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(464mg，3.31mmol)和DIEA(580μL，3.31mmol)溶于DCM(43mL)中，并冷却至0℃。在剧烈搅拌下滴加2-氯-5-氟-4，6-双(苯基磺酰基)嘧啶(1.2427g，3.01mmol)的30mL DCM溶液。将混合物搅拌30分钟，并然后真空浓缩。将残余物溶于MeOH(30mL)中，加入肼一水合物(1.4mL)，并将内容物在RT下搅拌过夜，并然后真空浓缩。将粗的残余物溶于CH2Cl2(100mL)中，并将混合物用NaHCO3(1X50mL)洗涤。将水相用CH2Cl2(1x100mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到5-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺(465.5mg，53％)。LCMS：(M+H)+：301.2。
部分I：
[(2R)-3-(2-{5-氯-3-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-氟苯基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
根据一般方法E，部分C，使用5-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-5-氮杂螺[2.4]庚-7-胺代替(5-氯-2-氟-3-肼基苯基)(1-甲基乙基)胺制备[(2R)-3-(2-{5-氯-3-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-氟苯基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺。LCMS：(M+H)+：588.3。
部分J：
[(2R)-3-(2-{5-氯-3-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-氟苯基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{5-氯-3-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-氟苯基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(300mg，0.51mmol)溶于5mL的MeOH中。加入5％铑/铝催化剂(240mg)，并将内容物在氢气球下搅拌过夜。然后将内容物过滤以除去催化剂，并将滤液真空浓缩。将生成的粗产物通过反相HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{5-氯-3-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-2-氟苯基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)(142mg，56％)。LCMS：(M+H)+：498.3。
实施例151
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901801
根据实施例150，使用E2对映异构体代替部分E中的E1对映异构体制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[7-(二甲基氨基)-5-氮杂螺[2.4]庚-5-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)。LCMS：(M+H)+：498.3。
实施例152
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
部分A：
2-甲基-N-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]丙氨酸甲酯
将N-(2-氰基乙基)-2-甲基丙氨酸(J.Am.Chem.Soc.1950，72，2599)(22.58g)在1.25M HCl的甲醇溶液(460mL)中的溶液于75℃加热，并搅拌过夜。然后将该溶液真空浓缩，并用CHCl3(200mL)稀释。将混合物过滤，并将该溶液用饱和的NaHCO3水溶液洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到2-甲基-N-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]丙氨酸甲酯(11.71g，40％产率)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：204.1。
部分B：
2-甲基-N-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-N-(苯基羰基)丙氨酸甲酯
向2-甲基-N-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]丙氨酸甲酯(11.71g，57.62mmol)在1∶1DCM-水(300mL)中的混合物中加入NaHCO3(9.68g，115.2mmol)，随后加入苯甲酰氯(7.02mL，60.48mmol)。将混合物剧烈搅拌过夜，并然后分离各相。将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(35％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到2-甲基-N-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-N-(苯基羰基)丙氨酸甲酯(3.6787g，21％产率)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：308.1。
部分C：
5，5-二甲基-4-氧代-1-(苯基羰基)-3-吡咯烷甲酸甲酯
向2-甲基-N-[3-(甲氧基)-3-氧代丙基]-N-(苯基羰基)丙氨酸甲酯(3.5589g，11.58mmol)的甲苯(115mL)溶液中加入MeOH(0.94mL，23.21mmol)和NaOMe(1.25g，23.14mmol)。将混合物于60℃加热，并搅拌2h。加入另外一批MeOH(10mL)，并将混合物于60℃再搅拌2h。然后将混合物真空浓缩，并将残余物在DCM(200mL)和1N的HCl水溶液(100mL)之间分配。将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的5，5-二甲基-4-氧代-1-(苯基羰基)-3-吡咯烷甲酸甲酯(2.746g，86％产率)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：276.1。
部分D：
2，2-二甲基-1-(苯基羰基)-3-吡咯烷酮
将5，5-二甲基-4-氧代-1-(苯基羰基)-3-吡咯烷甲酸甲酯(2.5781g，9.364mmol)的10∶1HOAc-水(50mL)溶液于100℃加热，并搅拌42h。将该溶液冷却至室温，并真空浓缩。将残余物溶于DCM(200mL)中，并用饱和的NaHCO3水溶液洗涤。将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的2，2-二甲基-1-(苯基羰基)-3-吡咯烷酮，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：218.1。
部分E：
(3E)-2，2-二甲基-1-(苯基羰基)-3-吡咯烷酮O-甲基肟
向2，2-二甲基-1-(苯基羰基)-3-吡咯烷酮(2.0602g，9.482mmol)的MeOH(50mL)溶液中加入乙酸钠(0.956g，11.38mmol)和甲氧胺盐酸盐(0.950g，11.37mmol)。将混合物搅拌过夜，并然后真空浓缩。将残余物溶于DCM(200mL)中，并用饱和的NaHCO3水溶液(50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(3E)-2，2-二甲基-1-(苯基羰基)-3-吡咯烷酮O-甲基肟(1.9567g，84％产率)，为淡黄色油状物，将其在高真空下固化。LCMS：(M+H)+：247.2。
部分F：
2，2-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷
向(3E)-2，2-二甲基-1-(苯基羰基)-3-吡咯烷酮O-甲基肟(1.9492g，7.914mmol)的THF(80mL)溶液中加入氢化铝锂(0.900g，23.72mmol)，并将混合物于65℃加热，并搅拌5小时。将混合物冷却至0℃，并加入Na2SO4·10H2O(2g)。将混合物搅拌30min，然后加入1N的NaOH水溶液(100mL)。将混合物用Et2O(3x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的消旋的2，2-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷(1.8247g，＞100％粗产物的产率)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：205.2。
部分G：
N，N，2，2-四甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷
将消旋的2，2-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷(推测1.6169g，7.914mmol)的甲酸(15mL)和福尔马林(15mL)溶液于100℃加热，并搅拌3h。然后将该溶液冷却至0℃，并用6N的NaOH水溶液调节至pH为14。将混合物用Et2O(3x100mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过Gilson RPLC纯化，得到消旋的N，N，2，2-四甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷(0.5637g，31％产率，2步)，为橙色油状物。LCMS：(M+H)+：233.3。
部分H：
N，N，2，2-四甲基-3-氨基吡咯烷
向消旋的N，N，2，2-四甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷(0.5637g，2.426mmol)的MeOH(24mL)溶液中加入1N的HCl水溶液(4.9ml)和10％Pd/C(50％水，113mg)。将混合物氢化过夜，并然后通过0.2μM膜过滤。将生成的溶液真空浓缩。将残余物用1N的NaOH水溶液(20mL)稀释，并用DCM(2x100mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的消旋的N，N，2，2-四甲基-3-氨基吡咯烷(0.2930g，85％产率)，为淡黄色的油状物。LCMS：(M+H)+：143.1。
部分I：
2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
向消旋的N，N，2，2-四甲基-3-氨基吡咯烷(0.1466g，1.031mmol)的DMF(6mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.220mL，1.263mmol)和2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.513g，1.031mmol)，并将该溶液搅拌过夜。将该溶液在Et2O(100mL)和水(20mL)之间分配，并将有机相用干净的水(20mL)洗涤。将合并的水相用新制的Et2O(50mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到消旋的2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.4647g，75％产率)，为白色泡沫状物。LCMS：(M+H)+：603.3。
部分J：
1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，2，2-四甲基-3-氨基吡咯烷五盐酸盐
向消旋的2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.4618g，0.766mmol)的MeOH(5mL)溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(5mL)。将该溶液搅拌3天，并然后真空浓缩，得到消旋的1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，2，2-四甲基-3-氨基吡咯烷五盐酸盐(0.3673g，99％产率)，为橙色油状物，将其在真空下结晶。LCMS：(M+H)+：303.1。
部分K：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向消旋的1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，2，2-四甲基-3-氨基吡咯烷五盐酸盐(0.3649g，0.752mmol)的DMF(5mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.2140g，0.701mmol)、N-甲基吗啉(0.770mL，7.00mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(114mg，0.838mmol)和EDC(161mg，0.840mmol)。将溶液搅拌过夜，并直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.1755g，42％产率，非对映异构体的混合物)，为褐色油状物。LCMS：(M+H)+：590.4。
部分L：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.1737g，0.294mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入5％Rh/C(175mg)。将混合物于50psi氢化过夜，并然后通过0.2μM膜过滤，并真空浓缩。向残余物的MeOH(4mL)溶液中加入20％Pd(OH)2/C(50％水，5mg)。将混合物在气球压力下氢化50分钟。然后将混合物通过0.2μM膜过滤，并将该溶液真空浓缩。将残余物通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.0670g，46％产率，非对映异构体的混合物)，为白色固体，随后由EtOAc-己烷结晶。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例153
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-(3-吡啶基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901851
根据一般方法A，使用市售可得的3-(3-吡咯烷基)吡啶代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-(3-吡啶基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。(非对映异构体的混合物)LCMS：(M+H)+486.3。
实施例154
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[2-(羟基甲基)-4-吗啉基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901852
根据一般方法C，使用市售可得的2-吗啉基甲醇代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[2-(羟基甲基)-4-吗啉基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。(非对映异构体的混合物)LCMS：(M+H)+487.5。
实施例155
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-(反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(D1，单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901853
部分A：
(反式)-2，5-二甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物)
在0℃下，向(2R，5S)-2，5-二甲基哌嗪(市售可得的)(3.495g，30mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入三乙胺(3.76mL，27mmol)，随后滴加氯甲酸苄基酯(4.0mL，27mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌过夜。然后将溶剂蒸发至干。将残余物溶于1N HCl水溶液中，并用EtOAc洗涤。将有机层用1N HCl溶液萃取两次，并将合并的水层用6N NaOH碱化至～pH 11。将生成的碱性水溶液用EtOAc萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到反式-2，5-二甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物)(1.35g，18％)。LCMS：(M+H)+：249.1。
部分B：
反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体1)
在0℃下，向反式-2，5-二甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物)(1.35g，5.43mmol)的二氯甲烷(40mL)溶液中加入甲醛(0.817mL，37％的水溶液，10.87mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.726g，8.14mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌2h，随后用二氯甲烷稀释，并用1N NaOH溶液洗涤。将有机物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物)(1.42g，100％)。反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体1)(480mg)和反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体2)(400mg)通过手性色谱法分离。LCMS：(M+H)+：263.3。
部分C：
反式-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐(对映异构体1)
将反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体1)(480mg，1.83mmol)溶于30mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(96mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。将1N HCl(3.8mL)加入到得到的滤液中，将其真空浓缩，得到反式-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐(对映异构体1)(370mg，100％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分D：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-(反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(D1，单一的未知非对映异构体)
根据一般方法G，使用反式-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐(对映异构体1)代替部分A中的(1S，4D)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-(反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.1。
实施例156
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{(3R)-3-[(二甲基氨基)甲基]-4-吗啉基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
部分A：
(3S)-N，N-二甲基-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺
向(3S)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸(1.5g，6.4mmol)(J.Chem.Soc.，Perkin Trans.1，1985，2577-2580)的THF(50mL)溶液中加入二甲胺(3.8mL，7.6mmol，2M的THF溶液)、EDC(1.46g，7.7mmol)、HOAt(1.06g，7.7mmol)和NMM(3.5mL，30mmol)。将反应混合物搅拌过夜，并蒸发THF，用EtOAc代替。加入1M HCl，并分离各相。将水层用EtOAc萃取两次，并将合并的有机物经硫酸钠干燥。真空浓缩，得到(3S)-N，N-二甲基-5-氧代-4-(苯基甲基)-3吗啉甲酰胺，将其通过RP-HPLC纯化。LCMS：(M+H)+：263.1。
部分B：
二甲基{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}胺
将(3S)-N，N-二甲基-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺(390mg，1.5mmol)溶于THF(20mL)中，并将该溶液冷却至0℃。加入LiAlH4(225mg，5.9mmol)，并将生成的混合物回流过夜。冷却至0℃时，加入水(1.4mL)，随后加入15％(w/w)NaOH(水溶液)(1.4mL)，并最后加入另一批水(4.2mL)。搅拌30分钟，随后过滤并真空浓缩，得到粗的混合物，将其通过RP-HPLC纯化，得到二甲基{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}胺(510mg，41％)。LCMS：(M+H)+：235.2。
部分C：
二甲基[(3R)-3-吗啉基甲基]胺.HCl
向二甲基{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}胺(510mg)在除气的MeOH和4滴浓HCl中的溶液中加入10％(Pd/C)(100mg)。将生成的混合物于50psi在Parr振荡器上氢化3小时，随后过滤并真空浓缩，得到二甲基[(3R)-3-吗啉基甲基]胺的盐酸盐。LCMS：(M+H)+：145.2。
部分D：
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{(3R)-3-[(二甲基氨基)甲基]-4-吗啉基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
根据一般方法E，使用二甲基[(3R)-3-吗啉基甲基]胺盐酸盐代替部分A中的异丙胺制备{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{(3R)-3-[(二甲基氨基)甲基]-4-吗啉基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：502.2。
实施例157
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901881
部分A：
2-(2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
在氮气下于0℃，向搅拌下的市售可得的[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]胺(0.158g，1.00mmol)的DMF(10mL)溶液中加入二异丙基乙胺(0.19mL，1.1mmol)，随后立即加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.497g，1.00mmol)。使该反应达到室温，并搅拌过夜。然后加入乙醚，并将混合物用水洗涤。将水层用乙醚反萃取，并将合并的有机物干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。将生成的残余物通过硅胶色谱法(5-60％乙酸乙酯的己烷溶液，1％三乙胺)纯化，得到2-(2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯，为透明油状物(0.578g，94％)。LCMS：(M+H)+＝619.4。
部分B：
2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4(1H)-嘧啶酮腙
向2-(2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.578g，0.94mmol)在MeOH(8mL)中的悬浮液中加入4M HCl的1，4-二噁烷溶液(8mL)，并将生成的混合物在室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，并将粗的残余物用K2CO3水溶液处理，进行萃取后处理，得到2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4(1H)-嘧啶酮腙，为褐色油状物(0.249g)。LCMS：(M+H)+＝319.2。
部分C：
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.238g，0.78mmol)、2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4(1H)-嘧啶酮腙(0.249g)、NMM(0.26mL，2.35mmol)、HOAt(0.106g，0.78mmol)、EDC(0.150g，0.78mmol)和DMF(4mL)混合在一起，并将该溶液搅拌过夜。通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺，为褐色油状物(0.169g)。LCMS：(M+H)+＝606.3。
部分D：
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.169g，0.28mmol)和Pd(OH)2(0.017g)按照一般方法E，部分D中所述的方法进行处理，得到[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-甲基-2-(4-吗啉基)丙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为白色固体(0.070g，49％)。LCMS：(M+H)+＝516.3。
实施例158
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-(反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(D2，单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901901
部分A：
反式-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐(对映异构体2)
将反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体2)(实施例155，部分B)(400mg，1.52mmol)溶于30mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(80mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。将1N HCl(3.2mL)加入到得到的滤液中，将其真空浓缩，得到反式-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐(对映异构体2)(370mg，100％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分B：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-(反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(D2，单一的未知非对映异构体)
根据一般方法G，在部分A中使用反式-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐(对映异构体2)代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-(反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.1。
实施例159
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(D1，单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901911
部分A：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向消旋的1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，4，4-四甲基-3-氨基吡咯烷(7.37g，24.34mmol，根据实施例133的方法制备)的DMF(77mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(7.08g，23.18mmol)、N-甲基吗啉(12.75mL，116.0mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(3.79g，27.85mmol)和EDC(5.33g，27.80mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(100mL)稀释，并用水(3x100mL)洗涤。将合并的水相用新制的Et2O(100mL)萃取，并将该有机相用干净的水(50mL)洗涤。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物用EtOAc(200mL)稀释，并将生成的溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(12.52g，92％产率，非对映异构体的混合物)。LCMS：(M+H)+：590.2。
将该非对映异构体的混合物通过手性制备型超临界流体色谱法(Chiralcel OJ-H 21.2x250mm，15％MeOH(0.5％异丙胺)85％CO2，70mL/min，35℃，280nM检测，每个循环注入16mg)纯化并分离，得到纯的两个对映异构体。
部分B：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(D1，单一的未知非对映异构体)
向第一次洗脱出来的[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺的对映异构体(3.90g，6.61mmol)的MeOH(66mL)溶液中加入20％Pd(OH)2/C(50％水，390mg)。将混合物在气球压力下氢化30分钟，并然后通过0.2μM膜过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物通过Gilson RPLC纯化。将所需的级分合并，真空浓缩，并与MeOH共沸。将残余物由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(1.6820g，51％产率，单一的对映异构体，相对构型未知)，为淡粉红色固体。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例160
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(D2，单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901921
向第二次洗脱出来的[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺的对映异构体(3.1g，5.25mmol，按照实施例159)的MeOH(50mL)溶液中加入20％Pd(OH)2/C(50％水，310mg)。将混合物在气球压力下氢化30分钟，并然后过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物通过Gilson RPLC纯化。将所需的级分合并，真空浓缩，并与MeOH共沸，随后与EtOAc共沸。将残余物由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-3，3-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(1.0294g，39％产率，单一的对映异构体，相对构型未知)，为淡粉红色固体。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例161
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[1-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153901931
部分A：
N，N-二甲基-3-(苯基甲基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺
将消旋的3-(苯基甲基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺(Tetrahedron Lett.2003，44，2485)(0.5930g，3.150mmol)的甲酸(6mL)和福尔马林(6mL)溶液于100℃加热，并搅拌2h。然后将该溶液冷却至室温，并用6N的NaOH水溶液调节至pH为14。将混合物用Et2O(2x100mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过硅胶色谱法(4％MeOH的DCM溶液，1％Et3N)纯化，得到消旋的N，N-二甲基-3-(苯基甲基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺(0.5806g，85％)，为黄色油状物。LCMS：(M+H)+：217.2。
部分B：
N，N-二甲基-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺二盐酸盐
向消旋的N，N-二甲基-3-(苯基甲基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺(0.5800g，2.681mmol)的MeOH(13mL)溶液中加入1N的HCl水溶液(5.4mL，5.4mmol)和10％Pd/C(50％水，120mg)。将混合物在气球压力下氢化过夜，并然后过滤。将该溶液真空浓缩，并与MeOH(4x50mL)共沸，得到粗的消旋的N，N-二甲基-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺二盐酸盐(0.5453g，＞100％粗产物的产率)，为淡黄色泡沫状物。LCMS：(M+H)+：127.2。
部分C：
2-{2-氯-6-[1-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
向消旋的N，N-二甲基-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺二盐酸盐(推测0.5339g，2.681mmol)的DMF(13mL)溶液中加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(1.33g，2.674mmol)和N，N-二异丙基乙胺(1.87mL，10.74mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(100mL)稀释。将混合物用水(2x50mL)洗涤，并将合并的水相用新制的Et2O(50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)纯化，得到消旋的2-{2-氯-6-[1-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(1.3261g，84％)，为白色泡沫状物。LCMS：(M+H)+：587.3。
部分D：
3-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺
向消旋的2-{2-氯-6-[1-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(1.3231g，2.254mmol)的MeOH(13mL)溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(13mL)。将该溶液搅拌3天，并然后真空浓缩。将残余物在10％K2CO3水溶液和DCM之间分配，并将水相用新制的DCM萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到消旋的3-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺(0.3415g，53％)，为褐色固体。LCMS：(M+H)+：287.1。
部分E：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[1-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向消旋的3-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-3-氮杂二环[3.1.0]己-1-胺(0.3374g，1.177mmol)的DMF(10mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.3257g，1.067mmol)、N-甲基吗啉(0.590mL，5.366mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.174g，1.278mmol)和EDC(0.245g，1.278mmol)。将混合物搅拌过夜，并然后用Et2O(100mL)稀释。将混合物用水(2x50mL)洗涤，并将合并的水相用新制的Et2O(50mL)萃取。将该有机相用干净的水(50mL)洗涤，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物用DCM(200mL)稀释，并经无水Na2SO4干燥。将混合物过滤，并真空浓缩，得到粗的[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[1-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.6428g，＞100％粗产物的产率，非对映异构体的混合物)，为橙色油状物。LCMS：(M+H)+：574.2。
部分F：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[1-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[1-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(推测0.6123g，1.067mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入20％Pd(OH)2/C(50％水，61mg)。将混合物氢化6.5h，并然后过滤。将滤液真空浓缩，并通过GilsonRPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[1-(二甲基氨基)-3-氮杂二环[3.1.0]己-3-基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.2537g，49％产率，2步，非对映异构体的混合物)，为淡粉红色固体。LCMS：(M+H)+：484.2。
实施例162
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901951
根据一般方法A，使用反式-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐(对映异构体2)(实施例158)代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(反式-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(单一的未知非对映异构体)。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例163
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环戊基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901961
根据一般方法E，在部分A中使用环戊胺代替异丙胺制备[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环戊基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：443.2/445.4。
实施例164
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(4-吗啉基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺.
Figure BPA00001182153901962
部分A：
4-[1-(二苯基甲基)-3-甲基-3-氮杂环丁烷基]吗啉
根据报导的方法(J.Med.Chem.，1993，36，801-810)制备甲磺酸1-(二苯基甲基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-基酯。将该化合物(1.50g，4.53mmol)和吗啉(3.90g，45.3mmol)在异丙醇(20ml)中的混合物于70℃加热过夜。冷却至室温后，将混合物真空浓缩至干。加入水(100mL)，并将混合物用二氯甲烷(2x100mL)萃取。将合并的有机溶液用盐水(60mL)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。将残余物通过RP-HPLC纯化，得到4-[1-(二苯基甲基)-3-甲基-3-氮杂环丁烷基]吗啉(1.05g，71.9％)。LCMS：(M+H)+323.3。
部分B：
4-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吗啉二盐酸盐
将4-[1-(二苯基甲基)-3-甲基-3-氮杂环丁烷基]吗啉(1.05g，3.26mmol)、10％Pd(OH)2(0.12g)在乙醇(30ml)和1N HCl(7ml)中的混合物于60psi用H2处理过夜。过滤除去催化剂，并将溶剂真空蒸发。将残余物用苯(3x5ml)洗涤，并在高真空下干燥，得到4-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吗啉二盐酸盐(0.52g，74.9％)。LCMS：(M+H)+156.9。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(4-吗啉基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用4-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吗啉二盐酸盐代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(4-吗啉基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+514.4。
实施例165
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-(4-吡啶基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901971
按照类似于实施例182的方法，在部分A中使用4-(3-吡咯烷基)吡啶代替1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-(4-吡啶基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+486.2。
实施例166
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(D1，单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901972
部分A：
2，2-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷
根据实施例152中所述的方法制备消旋的2，2-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷。通过制备型LC(Chiralpak AD 20μ100x250mm柱，75∶25∶0.1MeCN-MeOH-iPrNH2，400mL/min，254nm检测)分离对映异构体，得到2，2-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷的(+)-和(-)-对映异构体。
部分B：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺.
根据实施例152的方法，使用2，2-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷的(+)-对映异构体制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为单一的非对映异构体，其相对构型未知。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例167
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(D2，单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153901981
根据实施例152的方法，使用实施例166的方法制备的2，2-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷的(-)-对映异构体来制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为单一的非对映异构体，其相对构型未知。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例168
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153901991
部分A：
2-[2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
在室温下，向2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.497g，1.0mmol)的DMF(5mL)溶液中加入二异丙基乙胺(0.19mL，1.10mmol)，随后立即加入市售可得的环丁基胺(0.085mL，1.0mmol)。将该反应搅拌4天，然后加入乙醚，并将混合物用水洗涤，并将水层反萃取。将合并的有机物干燥(Na2SO4)，真空浓缩，并与MeOH共沸一次，得到2-[2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯，为白色固体。
部分B：
2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4(1H)-嘧啶酮腙
向2-[2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.495g，0.96mmol)的MeOH(10mL)溶液中加入4M HCl的1，4-二噁烷溶液(10mL)。将该反应在室温下搅拌过夜，然后将溶剂蒸发，并将残余物用标准的K2CO3水溶液后处理方法处理，得到2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4(1H)-嘧啶酮腙，为赤褐色油状物(0.225g)。LCMS：(M+H)+＝232.0。
部分C：
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向搅拌下的(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.282g，0.92mmol)、2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4(1H)-嘧啶酮腙(0.225g)、HOAt(0.132g，0.97mmol)和NMM(0.53mL，4.85mmol)的DMF(5mL)溶液中加入EDC(0.186g，0.97mmol)，并将该反应搅拌过夜。将混合物用乙醚稀释，用水洗涤，并将水层用乙醚反萃取。将有机物干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。将生成的残余物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺，为褐色油状物(0.055g)。LCMS：(M+H)+＝519.2。
部分D：
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
在室温下，将[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.055g，0.106mmol)溶于MeOH(5mL)中。加入Pd(OH)2(0.006g)，并将内容物在氢气球下搅拌4小时。将内容物过滤以除去催化剂，并将滤液真空浓缩。将上述步骤再重复3次。使用两次Pd(OH)2(0.010g)，并且第三次使用Pd(OH)2(0.015g)，并将该反应搅拌5.5小时。将内容物过滤以除去催化剂，并将滤液真空浓缩。将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(环丁基氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为黄褐色固体(0.005g，11％)。LCMS：(M+H)+＝428.9。
实施例169
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902001
部分A：
(3S)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸
向0℃下的N-苄基丝氨酸(19.15g，105.7mmol)在2N NaOH水溶液(100mL)中的溶液中滴加氯乙酰氯(10.2mL，126.4mmol)，并将该溶液搅拌45分钟。向该混合物中滴加30％的NaOH水溶液(40mL)，并将该反应搅拌1h，并然后搅拌，并温热至室温保持72h。将该反应调节至pH 1，并用三批EtOAc萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物用EtOAc/己烷洗涤，得到(3S)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸(4.61g，19％产率).
部分B：
(3S)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺
向(3S)-5-氧代-4-(苯基甲基)-3-吗啉甲酸(4.611g，19.60mmol)的DCM(65mL)溶液中加入苄基胺(2.6mL，23.80mmol)、N-甲基吗啉(11mL，100.0mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(3.20g，23.51mmol)和EDC(4.51g，23.53mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后用DCM(100mL)稀释。将该溶液用6N的HCl水溶液(2x100mL)洗涤，并将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的(3S)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺(6.454g，＞100％粗产物的产率)，为淡黄色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：325.2。
部分C：
1-苯基-N-{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺
向(3S)-5-氧代-N，4-双(苯基甲基)-3-吗啉甲酰胺(6.3109g，19.45mmol)的1，2-二甲氧基乙烷(100mL)溶液中加入LiAlH4(2.6g，68.51mmol)。将混合物于100℃加热，并搅拌6h，并然后冷却至60℃，并搅拌过夜。将混合物冷却至0℃，并通过缓慢地加入1N的NaOH水溶液(100mL)来终止。将混合物用Et2O(2x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(1％至5％MeOH的DCM溶液)纯化，得到1-苯基-N-{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺(3.8342g，66％)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：297.1。
部分D：
((苯基甲基){[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)氧代乙酸甲酯
向1-苯基-N-{[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}甲胺(3.3777g，11.40mmol)的THF(114mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(3mL，17.22mmol)。通过注射器向该混合物中滴加氯代(氧代)乙酸甲酯(1.15mL，12.50mmol)，并将混合物搅拌3h。真空除去溶剂，并将残余物溶于EtOAc(200mL)中，并用饱和的NaHCO3水溶液，随后用水洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的((苯基甲基){[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)氧代乙酸甲酯(4.6881g，＞100％粗产物的产率)，为黄色油状物。LCMS：(M+H)+：383.1。
部分E：
(9aR)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-6，7-二酮
向粗的((苯基甲基){[(3R)-4-(苯基甲基)-3-吗啉基]甲基}氨基)氧代乙酸甲酯(推测4.3583g，11.40mmol)的MeOH(114mL)溶液中加入10％Pd/C(50％水，870mg)。将混合物在气球压力下氢化16h，并然后通过0.2μm膜过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物用20％EtOAc-己烷研磨。将生成的固体通过真空过滤收集，并用己烷洗涤，得到(9aR)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-6，7-二酮(2.5610g，86％，2步)，为淡黄色固体。LCMS：(M+H)+：261.1。
部分F：
(9aR)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪
向0℃下的(9aR)-8-(苯基甲基)六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-6，7-二酮(2.5610g，9.84mmol)的THF(100mL)溶液中分批加入LiAlH4(1.12g，29.51mmol)。将混合物于70℃加热，并搅拌1周。然后将混合物冷却至0℃，并通过加入Na2SO4·10H2O(2g)，随后加入1N的NaOH水溶液(100mL)终止。将混合物用Et2O(2x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物溶于DCM(200mL)中，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)纯化，得到(9aR)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪(1.8147g，79％)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：233.1。
部分G：
(9aR)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪二盐酸盐
向(9aR)-8-(苯基甲基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪(1.8055g，7.77mmol)的MeOH(80mL)溶液中加入1N的HCl水溶液(15.5mL，15.5mmol)和10％Pd/C(50％水，360mg)。将混合物在气球压力下氢化过夜，并然后通过0.2μmPTFE膜过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物与MeOH(3x50mL)共沸，得到粗的(9aR)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪二盐酸盐(1.7185g，＞100％粗产物的产率)，为橙色固体。LCMS：(M+H)+：142.9。
部分H：
2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
向粗的(9aR)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪二盐酸盐(1.7185g，7.99mmol)的DMF(40mL)溶液中加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(3.97g，7.98mmol)和N，N-二异丙基乙胺(4.60mL，26.41mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(200mL)稀释。将混合物用水(2x 100mL)洗涤，并将合并的水相用新制的Et2O(100mL)萃取。将合并的有机相用干净的水(50mL)洗涤，并然后经无水Na2SO4干燥。将混合物过滤，真空浓缩，并将残余物溶于DCM(200mL)中，并经无水Na2SO4干燥。将混合物过滤，并将该溶液真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)纯化，得到2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(4.34g，90％)，为白色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：603.3。
部分I：
(9aR)-8-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪
向2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(4.34g，7.20mmol)的MeOH(18mL)溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(18mL，72mmol)。将该溶液搅拌3天，并然后真空浓缩。将残余物溶于水(50mL)中，并将该溶液用20％的K2CO3水溶液调节至pH为10。将混合物用DCM(2x100mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(9aR)-8-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪(1.41g，65％)，为橙色固体。LCMS：(M+H)+：303.1。
部分J：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向(9aR)-8-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪(1.41g，4.66mmol)的DMF(45mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(1.36g，4.45mmol)、N-甲基吗啉(2.45mL，22.3mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.730g，5.364mmol)和EDC(1.02g，5.32mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(200mL)稀释。将混合物用水(2x 100mL)洗涤，并将合并的水相用新制的Et2O(100mL)萃取。将该Et2O层用干净的水(50mL)洗涤，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物溶于DCM(200mL)中，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物与MeOH(50mL)共沸，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(2.4027g，91％粗产物的产率)，为红色/橙色油状物。LCMS：(M+H)+：590.2。
部分K：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(2.3947g，4.058mmol)的MeOH(40mL)溶液中加入20％Pd(OH)2/C(50％水，240mg)。将混合物在气球压力下氢化2.5h，并然后通过0.2μm膜过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物通过Gilson RPLC(10％MeCN的水溶液至65％MeCN的水溶液；8分钟梯度)纯化。将所需的级分合并，并将MeCN真空除去。将生成的混合物用EtOAc(2x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。然后将残余物由EtOAc-己烷结晶，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(1.2759g，63％)，为淡粉红色固体。LCMS：(M+H)+：500.1。
实施例170
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3S)-4-甲基-3-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902051
(2S)-1-甲基-2-(1-甲基乙基)哌嗪二盐酸盐
a)在室温下，将市售可得的(S)-N4-苄基-2-异丙基哌嗪(2.0g，9.2mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(2.9g，13.8mmol)和甲醛(37％的H2O溶液，1.12mL，13.8mmol)在CH2Cl2(40mL)中溶解并搅拌1h。随后，将反应混合物用另外的CH2Cl2稀释，并用1N NaOH(2x)和盐水(1x)洗涤。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，得到(2S)-1-甲基-2-(1-甲基乙基)-4-(苯基甲基)哌嗪(2.14g)，为无色油状物。
b)将(2S)-1-甲基-2-(1-甲基乙基)-4-(苯基甲基)哌嗪(2.14g的粗产物，推测9.2mmol)溶于20mL的MeOH中。加入5％Pd/C(500mg)，并将内容物彻底地除气，并置于氢气球下。将生成的反应混合物搅拌过夜，并然后将内容物除气，并过滤。将4N HCl的二噁烷溶液(4.6mL)加入到滤液中，并将滤液真空浓缩，得到(2S)-1-甲基-2-(1-甲基乙基)哌嗪二盐酸盐。
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3S)-4-甲基-3-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，在部分A中使用(2S)-1-甲基-2-(1-甲基乙基)哌嗪二盐酸盐代替N-甲基哌嗪，并使用2当量的DIPEA制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3S)-4-甲基-3-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例171
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-4-甲基-2-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902061
(3S)-1-甲基-3-(1-甲基乙基)哌嗪二盐酸盐
a)在室温下，将市售可得的(S)-N-1-Boc-2-异丙基哌嗪(2.0g，8.76mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(2.76g，13mmol)和甲醛(37％的H2O溶液，1.06mL，13mmol)在CH2Cl2(40mL)中溶解并搅拌过夜。随后，将反应混合物用另外的CH2Cl2稀释，并用1N NaOH和盐水洗涤。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，并真空浓缩，得到(2S)-4-甲基-2-(1-甲基乙基)-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.18g)，为无色油状物。
b)将(2S)-4-甲基-2-(1-甲基乙基)-1-哌嗪甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.18g的粗产物，推测8.76mmol)溶于MeOH(5mL)、CH2Cl2(5mL)和4N HCl的二噁烷(8mL)溶液的混合物中。在室温下搅拌过夜后，加入另外的8mL的4NHCl的二噁烷溶液和8mL的MeOH，使形成的白色沉淀溶解并促使该反应完成。真空蒸发溶剂，得到(3S)-1-甲基-3-(1-甲基乙基)哌嗪二盐酸盐(1.97g)，为白色固体。
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-4-甲基-2-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，在部分A中使用((3S)-1-甲基-3-(1-甲基乙基)哌嗪二盐酸盐代替N-甲基哌嗪，并使用2当量的DIPEA制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-4-甲基-2-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例172
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902071
部分A：
1-氨基环丙烷甲酸甲酯
将1-氨基环丙烷甲酸(13.1g，129.57mmol)溶于MeOH(200mL)中，并将生成的混合物于0℃冷却30分钟。然后加入亚硫酰氯(11.84mL，161.97mmol)，并将混合物于80℃加热4h。将混合物冷却至室温过夜。将挥发物真空浓缩，并将残余物溶于Et2O(200mL)中，并剧烈搅拌30分钟。通过过滤收集生成的白色固体沉淀，得到1-氨基环丙烷甲酸甲酯(15.83g，80％)。LCMS：(M+H)+：116.1。
部分B：
1-({[(苯基甲基)氧基]羰基}氨基)环丙烷甲酸甲酯
将1-氨基环丙烷甲酸甲酯(15.83g，104.43mmol)溶于CH2Cl2(150mL)和水(150mL)的混合物中。向该混合物中加入NaHCO3(35.09g，417.72mmol)，随后加入氯甲酸苄基酯(15.43mL，109.64mmol)。将混合物剧烈搅拌2小时，分离两层后，将水层用100mL的CH2Cl2萃取。将合并的有机层经MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到1-({[(苯基甲基)氧基]羰基}氨基)环丙烷甲酸甲酯(12.0g，46％)。LCMS：(M+H)+：206.1。
部分C：
1-(甲基{[(苯基甲基)氧基]羰基}氨基)环丙烷甲酸甲酯
将氢化钠(995mg，41.466mmol)溶于DMF(50mL)中，并于0℃冷却30分钟。然后用10分钟的时间，缓慢地加入1-({[(苯基甲基)氧基]羰基}氨基)环丙烷甲酸甲酯(6.46g，25.916mmol)在DMF(25mL)中的混合物。将生成的混合物搅拌45min，并然后加入碘甲烷(4.84mL，77.74mmol)，并将该反应温热至室温过夜。然后将混合物小心地用水(10mL)稀释，并将水层用Et2O(5x50mL)萃取。将有机萃取物用水(5x 50mL)洗涤，然后经Na2SO4干燥，并真空浓缩。将粗的残余物通过Combiflash纯化，使用0％-50EtOAc/Hex梯度洗脱，得到1-(甲基{[(苯基甲基)氧基]羰基}氨基)环丙烷甲酸甲酯(16.9g，＞100％)。LCMS：(M+H)+：264.1。
部分D：
1-(甲氨基)环丙烷甲酸甲酯
将1-(甲基{[(苯基甲基)氧基]羰基}氨基)环丙烷甲酸甲酯(推测6.8g，25.91mmol，100％理论收率)溶于30mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(2.04g)，并将内容物彻底地除气，并置于氢气球下过夜。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的1-(甲氨基)环丙烷甲酸甲酯(1.53g，45％，经两步)。LCMS：(M+H)+：130.1。
部分E：
1-[甲基(N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}甘氨酰)氨基]环丙烷甲酸甲酯
向1-(甲氨基)环丙烷甲酸甲酯(1.53g，11.85mmol)和HOBt(1.920g，14.21mmol)的CH2Cl2(30mL)溶液中加入4-甲基吗啉(5.2mL，47.40mmol)、N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}甘氨酸(2.48g，11.85mmol)和EDCI(2.73g，14.21mmol)。搅拌过夜后，将该溶液用6N的HCl水溶液(100mL)和水(100mL)洗涤。将水层用CH2Cl2(1x100mL)萃取，并将合并的有机层用水(100mL)和盐水(100mL)洗涤，然后经无水MgSO4干燥，并真空浓缩，得到纯的1-[甲基(N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}甘氨酰)氨基]环丙烷甲酸甲酯(3.66g，97％)。LCMS：(M+H)+：321.1。
部分F：
4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷-5，8-二酮
将1-[甲基(N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}甘氨酰)氨基]环丙烷甲酸甲酯(3.66g，11.42mmol)溶于50mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(2.04g)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩。将残余物溶于MeOH(100mL)中，并在搅拌下于60℃加热4h。真空除去溶剂，得到纯的4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷-5，8-二酮(1.76g，99％)。LCMS：(M+H)+：155.1。
部分G：
4-甲基-7-(苯基甲基)-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷-5，8-二酮
将氢化钠(302mg，12.62mmol)溶于DMF(10mL)中，并于0℃冷却30分钟。然后用10分钟的时间，缓慢地加入4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷-5，8-二酮(1.769g，11.47mmol)在DMF(5mL)中的混合物。将该混合物搅拌45min，并然后加入苄基溴(4.08mL，34.41mmol)，并将该反应再搅拌45分钟。将混合物小心地用水(10mL)稀释，并真空浓缩。将生成的粗产物通过反相HPLC纯化，得到4-甲基-7-(苯基甲基)-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷-5，8-二酮(1.535g，54％)。LCMS：(M+H)+：245.1。
部分H；
4-甲基-7-(苯基甲基)-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷
将4-甲基-7-(苯基甲基)-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷-5，8-二酮(1.535g，6.284mmol)溶于THF(100mL)中，并将混合物冷却至0℃。用10分钟的时间分批加入甲硼烷-THF络合物(25.13mL，25.13mmol)。将混合物于60℃加热4h，并然后通过LCMS检测。如果剩余的原料大于15％，缓慢地加入另一批甲硼烷-THF络合物(12.56mL，12.56mmol)，并将该反应再搅拌45分钟。当通过LCMS确定该反应完成时，将反应混合物冷却至室温。加入1N HCl(25mL)，并将混合物于80℃加热1小时。然后将反应混合物冷却至室温，并加入6N的NaOH水溶液以调节pH至14。将混合物用CH2Cl2(3x50mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将生成的粗产物通过反相HPLC纯化，得到4-甲基-7-(苯基甲基)-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷(1.43g，94％)。LCMS：(M+H)+：217.2。
部分I：
4-甲基-4-氮杂-7-氮鎓杂螺[2.5]辛烷二盐酸盐
将4-甲基-7-(苯基甲基)-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷(1.43g，6.624mmol)溶于10mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入Pd(OH)2(140mg)，并将内容物在50psi下氢化4h。然后将内容物过滤以除去催化剂，将1N HCl(14.57mL，14.57mmol)加入到滤液中，并将滤液真空浓缩，得到纯的4-甲基-4-氮杂-7-氮鎓杂螺[2.5]辛烷二盐酸盐(0.8g，60％)。LCMS：(M+H)+：127.2。
部分J：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用4-甲基-4-氮杂-7-氮鎓杂螺[2.5]辛烷二盐酸盐代替异丙胺，并使用3.5当量的DIEA制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：484.2。
实施例173
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902101
部分A：
(2S，3R)-1，2，3-三甲基哌嗪盐酸盐
将(2R，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(实施例175)(770mg，2.94mmol)溶于40mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(125mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。加入6.2mL 1N HCl后，将生成的滤液真空浓缩，得到(2S，3R)-1，2，3-三甲基哌嗪的二盐酸盐。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分B：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法G，在部分A中使用(2S，3R)-1，2，3-三甲基哌嗪二盐酸盐代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.1。
实施例174
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902111
根据一般方法D，使用(8aR)-八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪(J.Med.Chem.1993，36，2311-20)(以二-HCl盐使用)代替部分A中的N-甲基哌嗪，并在部分A中使用3当量的DIPEA制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：484.2。
实施例175
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902112
部分A：
顺式-2，3-二甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物)
向100mL三-颈圆底烧瓶中装入顺式-2，3-二甲基哌嗪(Helvetica ChimicaActa，1994，77，1057-64)(1.781g，15.6mmol)。将烧瓶在冰浴中冷却，并缓慢地加入甲磺酸(2.02mL，31.2mmol)的1.4mL水溶液，同时保持温度低于40℃。将该溶液冷却至20℃，并加入2mL乙醇。用60％乙酸钾水溶液将pH调节至4，并然后同时滴加氯甲酸苄基酯(2.08mL，14.8mmol在1mL的THF中)和乙酸钾溶液来调节比例以保持反应溶液的pH为4，同时冷却使温度保持在25℃下。将混合物再搅拌1小时后，除去有机溶剂，并将剩余的水溶液用乙酸乙酯洗涤。将乙酸乙酯洗涤液用1M HCl萃取两次以回收所需的产物。将所述酸的萃取液与最初的水溶液合并，并通过加入6N NaOH将pH调节至11，同时冷却使温度保持在40℃下。将水溶液用乙酸乙酯萃取，并将合并的萃取物经硫酸镁干燥，并真空浓缩，得到顺式-2，3-二甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物)，为黄色的油状物(1.77g，46％)。LCMS：(M+H)+：249.1。
部分B：
(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯和(2R，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯
在0℃下，向顺式-2，5-二甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物)(1.77g，7.1mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入甲醛(0.803mL，37％的水溶液，10.7mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1.964g，9.2mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌2h，随后用二氯甲烷稀释，并用1N NaOH溶液洗涤。将有机物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到顺式-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物)(1.72g，92％)。通过手性色谱法分离(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(950mg)和(2R，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(770mg)。绝对构型使用Ab Initio振动圆二色光谱确定。LCMS：(M+H)+：263.3。
部分C：
(2R，3S)-1，2，3-三甲基哌嗪二盐酸盐
将(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(950mg，3.62mmol)溶于60mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(160mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。加入7.6mL 1N HCl后，将生成的滤液真空浓缩，得到(2R，3S)-1，2，3-三甲基哌嗪二盐酸盐(740mg)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分D：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法G，在部分A中使用(2R，3S)-1，2，3-三甲基哌嗪二盐酸盐代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.1。
实施例176
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
1-[1-(二苯基甲基)-3-甲基-3-氮杂环丁烷基]吡咯烷
将甲磺酸1-(二苯基甲基)-3-甲基氮杂环丁烷-3-基酯(1.55g，4.68mmol)(J.Med.Chem.1993，36，801-810)和吡咯烷(3.86ml，46.68mmol)在异丙醇(15ml)中的混合物于70℃加热过夜。冷却至室温后，将混合物真空浓缩至干。加入水(100ml)，并将混合物用二氯甲烷(2x100mL)萃取。将合并的有机溶液用盐水(60ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。将残余物通过RP-HPLC纯化，得到1-[1-(二苯基甲基)-3-甲基-3-氮杂环丁烷基]吡咯烷(0.94g，65％)。LCMS：(M+H)+：307.2。
部分R：
1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐
将1-[1-(二苯基甲基)-3-甲基-3-氮杂环丁烷基]吡咯烷(0.94g，3.07mmol)和20％Pd(OH)2(0.11g)在乙醇(30ml)和1N HCl(7ml)中的混合物于60psi下用H2处理过夜。过滤除去催化剂，并将滤液真空蒸发。将残余物用苯(3x5ml)洗涤，并在高真空下干燥，得到1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐(0.76g，推测86％纯)。LCMS：(M+H)+：141.0。
部分C：
2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
在0℃下，向搅拌下的1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐(0.128g，86％纯，0.52mmol)的DMF(8mL)溶液中加入DIPEA(0.34mL，1.94mmol)，随后立即加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.24，0.49mmol)。将该反应温热至室温，并搅拌过夜。将混合物通过RP-HPLC纯化，得到2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.225g，77％)。LCMS：(M+H)+：601.2。
部分D：
2-氯-5-氟-4-肼基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]嘧啶
将2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.225g，0.37mmol)在MeOH(6mL)和4.0M HCl的二噁烷溶液(4mL)中的溶液在室温下搅拌3天。然后将溶剂真空除去，得到粗的2-氯-5-氟-6-肼基-N-(1-甲基乙基)-4-嘧啶胺，推测为三-HCl盐。LCMS：(M+H)+：301.0。
部分E：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(112mg，0.374mmol)、2-氯-5-氟-4-肼基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]嘧啶(推测112mg的游离碱，0.374mmol)、EDC(86mg，0.449mmol)、HOAt(56mg，0.411mmol)和NMM(0.25mL，2.24mmol)在DMF(5ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(145mg，66％)。LCMS：(M+H)+：582.5。
部分F：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(145mg)的4∶1AcOH∶水(20mL)溶液在室温下搅拌过夜。LCMS表明脱保护基的反应完成了～45％。加入另一批混合溶剂(4∶1AcOH∶水，20mL)，并继续搅拌过夜。然后将溶剂真空除去，并将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(45mg，36％)。LCMS：(M+H)+：498.2。
实施例177
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902151
根据一般方法A，使用(8aR)-八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪(J.Med.Chem.1993，36，2311-20)(以二-HCl盐使用)代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：464.2。
实施例178
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902152
根据一般方法B，使用(8aR)-八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪(J.Med.Chem.1993，36，2311-20)(以二-HCl盐使用)代替部分A中的吡咯烷，使用4当量的DIPEA，并使用1∶1MeOH∶DMSO混合溶剂体系代替纯的MeOH或纯的DMSO制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(8aR)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。
实施例179
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902161
部分A：
2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-嘧啶基]-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将市售可得的四氢-2H-吡喃-4-胺(0.122g，1.21mmol)的DMF(6mL)溶液冷却至0℃。然后加入二异丙基乙胺(0.24mL，1.33mmol)和2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.600g，1.21mmol)。使生成的溶液达到室温，并搅拌过夜。将混合物用乙醚萃取，并用水洗涤，并将生成的水层用乙醚萃取一次。将合并的乙醚层干燥(Na2SO4)，并真空浓缩。将生成的物质通过硅胶色谱法(5-60％乙酸乙酯的己烷溶液，1％三乙胺)纯化，得到2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-嘧啶基]-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯，为白色固体(0.602g，89％)。LCMS：(M+H-2Boc)+＝362.1。
部分B：
2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4(1H)-嘧啶酮腙
向2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-嘧啶基]-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.602g，1.071mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入4MHCl的1，4-二噁烷溶液(20mL)。在室温下搅拌2天后，将溶剂蒸发，并加入饱和的NaHCO3。将水层萃取，并将有机物干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4(1H)-嘧啶酮腙，为红色固体(0.199g)。LCMS：(M+H)+＝261.8。
部分C：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(0.220g，0.72mmol)、2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4(1H)-嘧啶酮腙(0.199g)、NMM(0.42mL，3.80mmol)、HOAt(0.103g，0.76mmol)、EDC(0.146g，0.76mmol)溶于DMF(5mL)中。将该反应搅拌过夜。加入乙醚，用水洗涤，用乙醚反萃取水层，干燥(Na2SO4)并真空浓缩，得到[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺，为深褐色固体(0.321g)。LCMS：(M+H)+＝549.2。
部分D：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(0.321g，0.58mmol)、Pd(OH)2(0.064g)和MeOH(10mL)混合，并按照一般方法E，部分D中所述的处理4小时。该反应没有完成，并因此将内容物过滤以除去催化剂，并将滤液真空浓缩。将生成的残余物再溶于MeOH(10mL)中，加入Pd(OH)2(0.080g)，并将内容物在氢化条件下按照一般方法E，部分D再次搅拌2.5小时。然后将内容物过滤以除去催化剂，并将滤液真空浓缩。将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-2H-吡喃-4-基氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为灰白色固体(0.024g，9％)。LCMS：(M+H)+＝459.5。
实施例180
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902181
根据一般方法A，使用(2R，3S)-1，2，3-三甲基哌嗪二盐酸盐(实施例175)代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例181
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2R，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902182
根据一般方法A，使用(2S，3R)-1，2，3-三甲基哌嗪二盐酸盐(实施例173)代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2R，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例182
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902183
部分A：
5-氟-4-肼基-2-甲基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]嘧啶
向4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(90mg，0.50mmol)、1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐(实施例176)(131mg，推测86％纯，0.53mmol)在5mL的DMSO中的混合物中加入DIPEA(0.345mL，1.98mmol)。将生成的反应混合物于室温下搅拌过夜，并然后加入肼一水合物(0.5mL)，并将内容物于80℃加热4h。然后将反应混合物冷却至室温，并通过RP-HPLC纯化，得到5-氟-4-肼基-2-甲基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]嘧啶(100mg，71％)。LCMS：(M+H)+：281.0。
部分B：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(107mg，0.357mmol)、5-氟-4-肼基-2-甲基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]嘧啶(100mg，0.357mmol)、EDC(82mg，0.428mmol)、HOAt(53mg，0.393mmol)和NMM(0.20mL，1.79mmol)在DMF(5ml)中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(118mg，58％)。LCMS：(M+H)+：562.2。
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(118mg)的4∶1AcOH∶水(20mL)溶液在室温下搅拌3天。真空除去溶剂，并将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-甲基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(65mg，64％)。LCMS：(M+H)+：478.1。
实施例183
{(2R)-2-[(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)羰基]己基}羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用(R)-1，3-二甲基哌嗪二盐酸盐(实施例39)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂，并在部分C中使用(2R)-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}己酸(实施例201)代替(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸制备{(2R)-2-[(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)羰基]己基}羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：446.1/448.2。
实施例184
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4，4，5-三甲基-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153902202
部分A：
(消旋)-顺式-1，1，2-三甲基-5-(苯基甲基)八氢吡咯并[3，4-c]吡咯
将4，4，5-三甲基-2-(苯基甲基)四氢吡咯并[3，4-c]吡咯-1，3(2H，3aH)-二酮(5.39g，20mmol)(Bull.Chem.Soc.Jpn.，1987，60，4079-4089)溶于THF(50mL)中，并冷却至0℃。分批加入LiAlH4(2.25g，59mmol)，并将生成的混合物回流过夜。冷却至0℃后，将该反应通过加入水(2.25mL)，随后加入15％(w/w)NaOH(水溶液)(2.25mL)，并加入另一批的水(6.75mL)来终止。将终止的反应搅拌，并然后通过Celite硅藻土过滤，，随后在减压下浓缩。通过RP-HPLC纯化，得到(消旋)-顺式-1，1，2-三甲基-5-(苯基甲基)八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(1.44g，30％)。LCMS：(M+H)+：245.2。
部分B：
(消旋)-顺式-1，1，2-三甲基-八氢吡咯并[3，4-c]吡咯
向除气的(消旋)-顺式-1，1，2-三甲基-5-(苯基甲基)八氢吡咯并[3，4-c]吡咯(1.44g，6mmol)的MeOH(30mL)溶液中加入1M HCl(12.3mL，12mmol)，随后加入10％Pd/C(220mg)。将生成的混合物在氢气球下搅拌过夜。过滤催化剂，并真空蒸发溶剂，得到定量产率的(消旋)-顺式-1，1，2-三甲基-八氢吡咯并[3，4-c]吡咯，为盐酸盐。LCMS：(M+H)+：155.1。
部分C：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4，4，5-三甲基-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用消旋-(顺式)-1，1，2-三甲基-八氢吡咯并[3，4-c]吡咯代替异丙胺制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4，4，5-三甲基-六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-2(1H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。产物为非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+：512.3/514.2。
实施例185
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[3-(二甲基氨基)-3-甲基-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902211
根据一般方法C，使用N，N，3-三甲基-3-氨基氮杂环丁烷(J.Med.Chem.1993，36，801-810)代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[3-(二甲基氨基)-3-甲基-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+484.1。
实施例186
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-4-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902221
部分A：
(顺式)-4-(苯基甲基)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-8-烯-3，5-二酮
在封闭管中，将呋喃(6mL，83mmol)加入到N-苄基马来酰亚胺(3g，16mmol)的乙醚(30mL)溶液中，并将该反应于90℃加热过夜。蒸发溶剂，得到残余物，将其用冷的MeOH研磨，得到(顺式)-4-(苯基甲基)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-8-烯-3，5-二酮(2.72g，67％)，为灰白色固体。LCMS：(M+Na)+：278.1。
部分B：
(顺式)-4-(苯基甲基)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-3，5-二酮
向除气的(顺式)-4-(苯基甲基)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-8-烯-3，5-二酮(2.72g，10.1mmol)在1，2-DME(50mL)中的溶液中加入10％Pd/C(540mg，20％w/w)。将生成的悬浮液在氢气球下搅拌1小时。通过过滤除去催化剂，并真空浓缩滤液，得到定量产率的(顺式)-4-(苯基甲基)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-3，5-二酮。LCMS：(M+H)+：258.1。
部分C：
(顺式)-4-(苯基甲基)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸烷
在0℃下，向(顺式)-4-(苯基甲基)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-3，5-二酮(2.39g，9.2mmol)的THF(93mL)溶液中加入LiAlH4，并将生成的溶液加热至65℃。将该反应在此温度下搅拌72小时，随后冷却至0℃，并用1MNaOH终止。然后将终止的反应用乙醚萃取，将合并的有机物经硫酸钠干燥，并真空除去溶剂。将残余物溶于DCM中，经硫酸钠干燥，浓缩并通过梯度硅胶色谱法(0-100％EtOAc的己烷溶液，1％Et3N)纯化，得到(顺式)-4-(苯基甲基)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸烷，为黄色的油状物(1.72g，67％)。LCMS：(M+H)+：230.1。
部分D：
(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸烷
向除气的(顺式)-4-(苯基甲基)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸烷(1.72g，7.5mmol)的MeOH(40mL)溶液中加入1M HCl(7.5mL)，随后加入10％Pd/C(344mg，20％w/w)。在氢气球下搅拌72小时，随后过滤，并真空浓缩，得到(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸烷的盐酸盐(1.26g，96％)，为黄色泡沫状物。LCMS：(M+H)+：140.1。
部分E：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-4-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸烷代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-4-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：477.3。
实施例187
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-4-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸烷(实施例186)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(顺式)-10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸-4-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：497.1/499.2。
实施例188
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902241
部分A：
(2R)-1-(N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}甘氨酰)-2-哌啶甲酸甲酯
向(2R)-2-哌啶甲酸甲酯盐酸盐(1.0g，5.56mmol)和HOBt(0.90g，6.67mmol)的CH2Cl2(20mL)溶液中加入4-甲基吗啉(2.44mL，22.24mmol)、N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}甘氨酸(1.16g，5.56mmol)和EDCI(1.28g，6.67mmol)。搅拌过夜后，将该溶液用6N的HCl水溶液(100mL)和水(100mL)洗涤。将水层用CH2Cl2(3x 50mL)萃取。将合并的有机层用水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，并然后经无水MgSO4干燥，并真空浓缩，得到(2R)-1-(N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}甘氨酰)-2-哌啶甲酸甲酯(2.029g，99％)。LCMS：(M+H)+：335.1。
部分B：
(9aR)-四氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-1，4(3H，6H)-二酮
将(2R)-1-(N-{[(苯基甲基)氧基]羰基}甘氨酰)-2-哌啶甲酸甲酯(2.029g，6.068mmol)溶于MeOH(30mL)中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(610mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置3h。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤来除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的(9aR)-四氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-1，4(3H，6H)-二酮(779mg，76％)。LCMS：(M+H)+：169.1。
部分C：
(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸苯甲基酯
将(9aR)-四氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-1，4(3H，6H)-二酮(779mg，4.63mmol)溶于46mL的THF中，并冷却至0℃。然后分批加入LiAlH4(352mg，9.57mmol)。将混合物于85℃加热2小时，然后冷却至0℃。将该反应用硫酸钠十水合物(704mg，9.27mmol)终止，并在0℃下搅拌30分钟。向该溶液中加入1N的NaOH水溶液(5mL)，并在0℃下将反应混合物搅拌30分钟。然后加入Et2O(20mL)，随后加入氯甲酸苄基酯(0.783mL，5.563mmol)。将反应混合物在0℃下剧烈搅拌2h，分离各相，并将水相用Et2O(3x50mL)萃取。将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸苯甲基酯(688mg，55％)。LCMS：(M+H)+：275.1。
部分D：
(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪
将(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-甲酸苯甲基酯(688mg，2.50mmol)溶于MeOH(15mL)中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(206mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪(364mg，99％)。LCMS：(M+H)+：141.1。
部分E：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
按照类似于实施例210，部分E和F的方法，在部分E中使用(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪代替1-{1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙基}吡咯烷盐酸盐制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：478.4。
实施例189
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[1-(二甲基氨基)环丙基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902251
部分A：
N，N-二甲基-1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙胺
根据实施例210，部分A至部分D，在部分B中使用市售可得的二甲基胺代替吡咯烷制备N，N-二甲基-1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙胺。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分B：
根据一般方法E，在部分A中使用N，N-二甲基-1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙胺代替异丙胺制备[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[1-(二甲基氨基)环丙基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：512.3。
实施例190
N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(4-吡啶基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902261
部分A：
6-氯-5-氟-N，2-二甲基-N-[2-(4-吡啶基)乙基]-4-嘧啶胺
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(280mg，1.54mmol)溶于5mL的THF中，并在室温下搅拌。加入甲基[2-(4-吡啶基)乙基]胺(210mg，1.54mmol)，随后加入三乙胺(240μL，1.69mmol)。将生成的反应混合物搅拌过夜。将该反应用EtOAc稀释，用盐水洗涤，干燥(硫酸钠)，并蒸发，得到6-氯-5-氟-N，2-二甲基-N-[2-(4-吡啶基)乙基]-4-嘧啶胺(350mg，81％)，其不需进一步纯化而使用。LCMS：(M+H)+：281.1。
部分B：
5-氟-6-肼基-N，2-二甲基-N-[2-(4-吡啶基)乙基]-4-嘧啶胺
将6-氯-5-氟-N，2-二甲基-N-[2-(4-吡啶基)乙基]-4-嘧啶胺(350mg，1.25mmol)溶于4mL的DMSO中，并加入4ml的肼一水合物。将混合物搅拌过夜，并通过RP-HPLC纯化，得到5-氟-6-肼基-N，2-二甲基-N-[2-(4-吡啶基)乙基]-4-嘧啶胺(220mg，63％)。LCMS：(M+H)+：277.2。
部分C：
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(4-吡啶基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}[(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(230mg，0.76mmol)、5-氟-6-肼基-N，2-二甲基-N-[2-(4-吡啶基)乙基]-4-嘧啶胺(210mg，0.76mmol)、EDC(180mg，0.91mmol)、HOAt(120mg，0.91mmol)和NMM(0.25mL，2.28mmol)在5ml DMF中的混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物通过反相HPLC纯化，得到{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(4-吡啶基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}[(苯基甲基)氧基]甲酰胺(290mg，67％)。LCMS：(M+H)+：564.3。
部分D：
N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(4-吡啶基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺
将{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(4-吡啶基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}[(苯基甲基)氧基]甲酰胺(290mg，0.51mmol)溶于10mL的MeOH中。加入10％Pd/碳(60mg)，并将内容物在氢气球下搅拌大约5小时。然后将内容物过滤以除去催化剂，并将滤液真空浓缩，得到{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(4-吡啶基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺(230mg，96％)。LCMS：(M+H)+：474.3。
实施例191
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.988g，1.992mmol)溶于THF(10mL)中。向该溶液中加入三乙胺(0.61mL，4.3765mmol)，随后加入市售可得的2-氨基甲基噻唑盐酸盐(0.30g，1.992mmol)，将其悬浮于THF(12mL)中。将该反应搅拌2天，期间将另外的10mLTHF和2-氨基甲基噻唑盐酸盐(0.061g，0.4049mmol)加入到反应混合物中。再过3天后，将反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯萃取。将有机物干燥(Na2SO4)并浓缩。生成的粗物质通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，得到2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯，为黄色的油状物(0.5826，51％)。LCMS：(M+H-3Boc)+＝375.0。
部分B：
2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙二盐酸盐
在室温下，将2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.5826，1.015mmol)溶于MeOH(10mL)和HCl(4M的1，4-二噁烷溶液)(10mL)中，并搅拌过夜。真空除去溶剂，得到2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙，推测为二盐酸盐，为米色固体(0.3507，100％)。LCMS：(M+H)+＝274.8。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙二盐酸盐(0.3052g，0.882mmol)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(0.457g，1.059mmol)溶于DMF(8mL)中。加入NMM(0.58mL，5.2753mmol)，随后加入HOAt(0.144g，1.059mmol)和EDC(0.203g，1.059mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为米色固体(0.3031g，62％)。LCMS：(M+H)+＝556.2。
部分D：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.3031g，0.5461mmol)溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将该反应混合物搅拌过夜。蒸发挥发物，并将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为白色固体(0.1484g，58％)。LCMS：(M+H)+＝472.0。
实施例192
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902291
部分A：
N-甲基-1-(1，3-噻唑-2-基)甲胺
将市售可得的2-噻唑甲醛(3.61g，31.91mmol)溶于异丙醇(90mL)中，将分子筛(sieves)(3.65g)加入到反应容器中。然后将甲胺盐酸盐(17.28g，256mmol)、乙酸钠(7.85g，96mmol)和氰基硼氢化钠(3.07g，48.9mmol)加入到反应混合物中。将混合物置于氩气下，并搅拌3天。过滤出分子筛，并用异丙醇洗涤。将滤液蒸发，并将生成的残余物溶于乙酸乙酯中。将有机物用饱和的NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将合并的水层用1L的10％MeOH在氯仿中的溶剂混合物萃取，并将合并的有机物干燥(Na2SO4)，并蒸发。将粗产物通过硅胶色谱法(0-5％MeOH的二氯甲烷溶液)纯化，生成N-甲基-1-(1，3-噻唑-2-基)甲胺，为黄色的油状物(0.930g，23％)。LCMS：(M+H)+＝129.0。
部分B：
2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(1.16g，2.339mmol)溶于THF(5mL)中。向该溶液中加入三乙胺(0.39mL，2.8mmol)，随后加入N-甲基-1-(1，3-噻唑-2-基)甲胺(0.30g，2.3437mmol)的THF(2mL)溶液。将该反应搅拌过夜。然后将反应混合物用水稀释，并将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物干燥(Na2SO4)并浓缩，以生成2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯，为白色固体(1.51g)。LCMS：(M+H-Boc)+＝489.1。
部分C：
2-氯-5-氟-6-肼基-N-甲基-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺二盐酸盐
在室温下，将2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(1.51g，2.57mmol)溶于MeOH(25mL)和HCl(4M的1，4-二噁烷溶液)(25mL)中。将反应混合物搅拌4天，并然后蒸发，得到2-氯-5-氟-6-肼基-N-甲基-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺，推测为二盐酸盐，为米色固体(0.9034g，98％)。LCMS：(M+H-2HCl)+＝289.0。
部分D：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将2-氯-5-氟-6-肼基-N-甲基-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺(推测为二盐酸盐)(0.9034g，2.509mmol)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(1.299g，3.01mmol)溶于DMF(13mL)中。加入NMM(1.655mL，15.05mmol)，随后加入HOAt(0.4095g，3.01mmol)和EDC(0.577g，3.01mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为红色粘稠状物。LCMS：(M+H)+＝570.2。
部分E：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将反应混合物搅拌2天。蒸发挥发物，并将生成的残余物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为米色固体(0.3469g)。LCMS：(M+H)+＝486.1。
实施例193
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[(3S)-1-甲基-2-氧代-六氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153902311
-3-基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902312
部分A：
[(3S)-1-甲基-2-氧代-六氢-1H-氮杂-3-基]氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯
向除气的[(3S)-1-甲基-2-氧代-2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153902314
-3-基]氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(实施例94)(680mg，2.8mmol)的MeOH(20mL)溶液中加入10％Pd/C(100mg)，并将生成的悬浮液在氢气球下搅拌过夜。过滤催化剂，并减压浓缩滤液，得到[(3S)-1-甲基-2-氧代-六氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153902315
-3-基]氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(470mg，88％)。LCMS：(M-tBut)+：186.2。
部分B：
(3S)-3-氨基-1-甲基-六氢-2H-氮杂
Figure BPA00001182153902316
-2-酮
向[(3S)-1-甲基-2-氧代-六氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153902317
-3-基]氨基甲酸1，1-二甲基乙基酯(470mg，1.9mmol)的二噁烷(5mL)溶液中加入HCl(4.8mL，19mmol，4M的二噁烷溶液)，并将该反应搅拌过夜。蒸发溶剂，得到定量产率的(3S)-3-氨基-1-甲基-六氢-2H-氮杂
Figure BPA00001182153902318
-2-酮。LCMS：(M+H)+：143.1。
部分C：
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[(3S)-1-甲基-2-氧代-六氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153902319
-3-基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用(3S)-3-氨基-1-甲基-六氢-2H-氮杂
Figure BPA00001182153902321
-2-酮代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂制备[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[(3S)-1-甲基-2-氧代-六氢-1H-氮杂
Figure BPA00001182153902322
-3-基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：500.1/502.2。
实施例194
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{(2R)-2-[(甲氧基)甲基]-1-吡咯烷基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用市售可得的(S)-(+)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂制备[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{(2R)-2-[(甲氧基)甲基]-1-吡咯烷基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：473.2/475.2。
实施例195
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(D1，单一的未知非对映异构体)
Figure BPA00001182153902324
部分A：
3-甲基-3-[(苯基甲基)氨基]丁酸甲酯
向苄基胺(10.0mL，91.6mmol)在95％MeOH-水(180mL)中的溶液中加入3-甲基-2-丁烯酸甲酯(12.3mL，100.8mmol)。将该溶液于55℃加热，并搅拌2周。然后将该溶液冷却至室温，真空浓缩，并将残余物通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)纯化，得到3-甲基-3-[(苯基甲基)氨基]丁酸甲酯(5.5893g，28％)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：222.1。
部分B：
3-甲基-3-[[(甲氧基)(氧代)乙酰基](苯基甲基)氨基]丁酸甲酯
向3-甲基-3-[(苯基甲基)氨基]丁酸甲酯(5.5853g，25.24mmol)的THF(125mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(6.6mL，37.89mmol)。将该溶液冷却至0℃，并滴加氯代(氧代)乙酸甲酯(2.55mL，27.73mmol)。然后将混合物搅拌，并温热至室温过夜。将混合物用EtOAc(200mL)稀释，并用1N的HCl水溶液(100mL)，随后用饱和的NaHCO3水溶液(100mL)洗涤。将有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物由EtOAc-己烷结晶，得到白色固体，将其通过真空过滤收集，并用己烷洗涤，得到3-甲基-3-[[(甲氧基)(氧代)乙酰基](苯基甲基)氨基]丁酸甲酯(7.0709g，91％)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：308.1。
部分C：
2，2-二甲基-4，5-二氧代-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷甲酸甲酯
向3-甲基-3-[[(甲氧基)(氧代)乙酰基](苯基甲基)氨基]丁酸甲酯(6.9702g，22.68mmol)在甲苯(110mL)中的混合物中加入25％w/w NaOMe的MeOH(14mL)溶液。将混合物于80℃加热，并搅拌2h。然后将该溶液冷却至室温，并真空浓缩至约1/2体积。将残余物在DCM(200mL)和1N的HCl水溶液(200mL)之间分配。将水相用新制的DCM(100mL)萃取，并将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。将生成的白色固体用己烷研磨，并通过真空过滤收集，得到2，2-二甲基-4，5-二氧代-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷甲酸甲酯(5.5965g，88％)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：276.1。
部分D：
5，5-二甲基-1-(苯基甲基)-2，3-吡咯烷二酮
将2，2-二甲基-4，5-二氧代-1-(苯基甲基)-3-吡咯烷甲酸甲酯(5.6429g，20.50mmol)的10∶1HOAc-水(100mL)溶液于100℃加热，并搅拌2天。将该溶液冷却至室温，并真空浓缩。将残余物在DCM(200mL)和饱和的NaHCO3水溶液(100mL)之间分配。将水相用新制的DCM(50mL)萃取，并将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的5，5-二甲基-1-(苯基甲基)-2，3-吡咯烷二酮(3.9096g，88％粗产物的产率)，为淡橙色固体。LCMS：(M+H)+：218.1。
部分E：
(3E)-5，5-二甲基-1-(苯基甲基)-2，3-吡咯烷二酮3-(O-甲基肟)
向5，5-二甲基-1-(苯基甲基)-2，3-吡咯烷二酮(3.9036g，17.97mmol)的MeOH(90mL)溶液中加入乙酸钠(1.81g，21.54mmol)和甲氧胺盐酸盐(1.80g，21.55mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后将溶剂真空除去。将残余物在DCM(200mL)、饱和的NaHCO3水溶液和水之间分配。将水相用新制的DCM(50mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的(3E)-5，5-二甲基-1-(苯基甲基)-2，3-吡咯烷二酮3-(O-甲基肟)(4.5282g，＞100％粗产物的产率)，为黄色/橙色油状物。LCMS：(M+H)+：247.1。
部分F：
5，5-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷
向0℃的(3E)-5，5-二甲基-1-(苯基甲基)-2，3-吡咯烷二酮3-(O-甲基肟)(4.2872g，17.41mmol)的THF(90mL)溶液中分批加入LiAlH4(2.64g，69.57mmol)。将混合物于70℃加热，并搅拌6.5小时。然后将混合物冷却至室温，并通过加入Na2SO4·10H2O(3g)，随后加入1N的NaOH水溶液(100mL)来终止。将混合物用Et2O(2x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物用DCM(200mL)稀释，并将混合物经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的消旋的5，5-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷(3.2293g，86％)，为淡黄色油状物。LCMS：(M+H)+：205.2。
部分G：
N，N，5，5-四甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷
将消旋的5，5-二甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷(3.2293g，15.81mmol)的甲酸(20mL)和福尔马林(20mL)溶液于100℃加热，并搅拌1小时。然后将该溶液冷却至0℃，并用6N的NaOH水溶液调节pH至14。将混合物用Et2O(2x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物用DCM(200mL)稀释，并将该溶液经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)纯化，得到消旋的N，N，5，5-四甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷(2.8158g，77％)，为橙色油状物。LCMS：(M+H)+：232.9。通过制备型手性超临界流体色谱法(Chiralpak AD-H 20x250mm；6％MeOH(0.1％Et2NH)，94％CO2；50mL/min；230nm检测；50mg注射量/循环)将该物质分成两个基本的对映异构体。
部分H：
N，N，5，5-四甲基-3-氨基吡咯烷二盐酸盐
向第一次洗脱出来的N，N，5，5-四甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷的对映异构体(1.0607g，4.569mmol)的MeOH(40mL)溶液中加入1N的HCl水溶液(9.1mL，9.1mmol)和10％Pd/C(50％水，265mg)。将混合物氢化过夜，并然后通过0.2μm PTFE膜过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物与MeOH(5x50mL)共沸，得到粗的N，N，5，5-四甲基-3-氨基吡咯烷二盐酸盐(1.0206g，＞100％粗产物的产率)，为白色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：143.1。
部分I：
2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
向N，N，5，5-四甲基-3-氨基吡咯烷二盐酸盐(推测0.9831g，4.569mmol)的DMF(23mL)溶液中加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(2.27g，4.564mmol)和N，N-二异丙基乙胺(2.63mL，15.10mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(100mL)稀释。将混合物用水(2x50mL)洗涤，并将合并的水相用新制的Et2O(50mL)萃取。将该有机相用干净的水(20mL)洗涤，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)纯化，得到2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(2.2034g，80％)，为淡黄色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：603.3。
部分J：
1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，5，5-四甲基-3-氨基吡咯烷
向2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(2.2004g，3.648mmol)的MeOH(22mL)溶液中加入4N HCl的二噁烷溶液(22mL)。将该溶液搅拌3天，并然后真空浓缩。将残余物与MeOH(50mL)共沸，并然后在DCM(100mL)和饱和的NaHCO3水溶液(100mL)之间分配。将水相用新制的DCM(2x50mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，5，5-四甲基-3-氨基吡咯烷(1.0552g，96％)，为橙色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：303.1。
部分K：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向1-(2-氯-5-氟-6-肼基-4-嘧啶基)-N，N，5，5-四甲基-3-氨基吡咯烷(1.0502g，3.469mmol)的DMF(16mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(1.0075g，3.299mmol)、N-甲基吗啉(1.8mL，16.37mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.540g，3.968mmol)和EDC(0.760g，3.964mmol)。将溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(100mL)稀释。将混合物用水(3x50mL)洗涤，并将合并的水相用新制的Et2O(50mL)萃取。将该有机相用干净的水(25mL)洗涤，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩。将残余物溶于DCM(150mL)中，经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到粗的[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(1.6539g，85％粗产物的产率)，为暗红色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：590.2。
部分L：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(1.6493g，2.795mmol)的MeOH(28mL)溶液中加入20％Pd(OH)2/C(50％水，165mg)。将混合物氢化3.5h，并然后过滤。将该溶液真空浓缩，并将残余物通过GilsonRPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.7580g，54％，单一的未知非对映异构体)，为粉红色固体，随后由EtOAc-己烷结晶。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例196
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(D2，单一的未知非对映异构体)
根据实施例195的方法，使用第二次洗脱出来的N，N，5，5-四甲基-1-(苯基甲基)-3-氨基吡咯烷的对映异构体制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[4-(二甲基氨基)-2，2-二甲基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例197
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{3-[2-(二甲基氨基)-1，1-二甲基乙基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153902372
部分A：
{1-甲基-1-[1-(苯基甲基)-3-吡咯烷基]乙基}胺
根据文献方法(J.Org.Chem.2000，65，1016-1021)可制备{1-甲基-1-[1-(苯基甲基)-3-吡咯烷基]乙基}胺。LCMS：(M+H)+：219.1。
部分B：
N，N-二甲基-2-[1-(苯基甲基)-3-吡咯烷基]-2-丙胺
将{1-甲基-1-[1-(苯基甲基)-3-吡咯烷基]乙基}胺(1.0726mg，4.912mmol)溶于甲醛(30mL)和甲酸(30mL)的混合物中，并然后于100℃加热2小时。冷却至0℃后，加入6N的NaOH水溶液以调节pH至14。然后将水层用Et2O(3x50mL)萃取，并将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到N，N-二甲基-2-[1-(苯基甲基)-3-吡咯烷基]-2-丙胺(1.85g，99％)。LCMS：(M+H)+：247.2。
部分C：
N，N-二甲基-2-(3-吡咯烷基)-2-丙胺盐酸盐
将N，N-二甲基-2-[1-(苯基甲基)-3-吡咯烷基]-2-丙胺(2.089g，8.47mmol)溶于MeOH(50mL)和1N HCl(18.65mL，18.65mmol)的混合物中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(625mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过玻璃纤维过滤器过滤除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的N，N-二甲基-2-(3-吡咯烷基)-2-丙胺盐酸盐(1.245g，76％)。LCMS：(M+H)+：157.2。
部分D：
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{3-[2-(二甲基氨基)-1，1-二甲基乙基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用N，N-二甲基-2-(3-吡咯烷基)-2-丙胺盐酸盐代替异丙胺制备[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{3-[2-(二甲基氨基)-1，1-二甲基乙基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+：514.2。
实施例198
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902391
部分A：
2，3-二甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯
向100mL的三-颈圆底烧瓶中装入反式-2，3-二甲基哌嗪和顺式-2，3-二甲基哌嗪的混合物(Yakugaku Zasshi，1958，78，229-232)(3.571g，31.1mmol)。将烧瓶在冰浴中冷却，并缓慢地加入甲磺酸(3.95mL，60.9mmol)的2.7mL水溶液，同时保持温度低于40℃。将该溶液冷却至20℃，并加入4mL的乙醇。使用60％乙酸钾水溶液将pH调节至4，并然后同时滴加氯甲酸苄基酯(3.86mL，27.4mol在2mL的THF)和乙酸钾溶液来调节比例以保持反应溶液的pH为4，同时冷却使温度保持在25℃下。将混合物再搅拌l小时后，除去有机溶剂，并将剩余的水溶液用乙酸乙酯洗涤。将乙酸乙酯洗涤液用1MHCl萃取两次以回收所需的产物。将所述酸的萃取液与最初的水溶液合并，并通过加入6N NaOH将pH调节至11，同时冷却使温度保持在40℃以下。将水溶液用乙酸乙酯萃取，并将乙酸乙酯的萃取液经硫酸镁干燥。过滤并除去溶剂，得到2，3-二甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯的所有的四个立体异构体，为深褐色油状物(3.11g，41％)。LCMS：(M+H)+：249.1。
部分B：
(2R，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯和(2S，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯
在0℃下，向2，3-二甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(四个立体异构体的混合物)(3.105g，12.5mmol)的二氯甲烷(90mL)溶液中加入甲醛(1.409mL，37％的水溶液，18.75mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(3.445g，16.26mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌2h，随后用二氯甲烷稀释，并用1N NaOH溶液洗涤。将有机物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(所有四个立体异构体的混合物)(3.04g，93％)。通过制备型和手性色谱法的组合分离出(2R，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(365mg)和(2S，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(420mg)。使用Ab Initio振动圆二色光谱确定绝对构型。LCMS：(M+H)+：263.3。
部分C：
(2R，3R)-1，2，3-三甲基哌嗪盐酸盐
将(2R，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(328mg，1.25mmol)溶于20mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(81mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。加入2.75mL 1N HCl后，将生成的滤液真空浓缩，得到(2R，3R)-1，2，3-三甲基哌嗪的盐酸盐(251mg，100％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分D：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用(2R，3R)-1，2，3-三甲基哌嗪盐酸盐代替异丙胺，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.1。
实施例199
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(3-乙基-3-羟基-1-氮杂环丁烷基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902401
部分A：
3-乙基-3-氮杂环丁醇盐酸盐
将1-(二苯基甲基)-3-乙基-3-氮杂环丁醇(0.200g，0.75mmol)(J.Med.Chem.1993，36，801-810)和20％Pd(OH)2(200mg)在乙醇(30ml)和1N HCl(5ml)中的混合物于55psi下用H2处理过夜。进行标准的后处理后，得到3-乙基-3-氮杂环丁醇盐酸盐。LCMS：(M+H)+102.2。
部分B：
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(3-乙基-3-羟基-1-氮杂环丁烷基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法D，使用3-乙基-3-氮杂环丁醇盐酸盐代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(3-乙基-3-羟基-1-氮杂环丁烷基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+459.1。
实施例200
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-5(3H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902411
根据一般方法E，在部分A中使用六氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯(实施例99)代替异丙胺制备([(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-5(3H)-基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：471.1/473.1。
实施例201
{(2R)-2-[(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基]-4-嘧啶基}肼基)羰基]己基}羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902412
部分A：
(2R)-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)己酸
按照类似于制备中间体A的方法，在部分A中使用己酰氯代替3-环戊基丙酰氯制备(2R)-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)己酸。LCMS：(M+H)+：280.2。
部分B；
{(2R)-2-[(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基]-4-嘧啶基}肼基)羰基]己基}羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪(J.Med.Chem.1993，36，2311-2320)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂，在部分C中使用(2R)-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)己酸代替(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸制备{(2R)-2-[(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aR)-八氢-2H-吡啶并[1，2-a]吡嗪-2-基]-4-嘧啶基}肼基)羰基]己基}羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：472.2/474.1。
实施例202
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2S，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902421
部分A：
(2S，3S)-1，2，3-三甲基哌嗪盐酸盐
将(2S，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(323mg，1.23mmol)(实施例198)溶于20mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(81mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。加入2.70mL 1N HCl后，将生成的滤液真空浓缩，得到(2S，3S)-1，2，3-三甲基哌嗪的盐酸盐(246mg，100％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分B：
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2S，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用(2S，3S)-1，2，3-三甲基哌嗪盐酸盐代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2S，3S)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例203
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2R，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902431
根据一般方法A，使用(2R，3R)-1，2，3-三甲基哌嗪盐酸盐(实施例198)代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2R，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例204
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
2-{2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(1.413g，2.85mmol)溶于THF(5mL)中。向该溶液中加入三乙胺(0.48mL，3.4438mmol)，随后加入市售可得的溶于THF(1mL)中的(3-噻吩基甲基)胺(0.322g，2.85mmol)。搅拌后，将反应混合物用水稀释，并将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物干燥(Na2SO4)并浓缩，以生成2-{2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯，为白色固体(1.6214g，99％)。LCMS：(M+H-3Boc)+＝374.1。
2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙二盐酸盐
将2-{2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(1.6214g，2.83mmol)溶于MeOH(28mL)和HCl(4M的1，4-二噁烷溶液)(28mL)中。将反应混合物搅拌过夜，并然后蒸发，得到2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙，推测为二盐酸盐，为暗红色固体(1.0828g)。LCMS：(M+H-2HCl)+＝273.9。
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙二盐酸盐(1.0828g)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸二异丙胺盐(1.63g，3.8mmol)溶于DMF(9mL)中。加入NMM(2.1mL，19.1mmol)，随后加入HOAt(0.512g，3.76mmol)和EDC(0.722g，3.77mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为赤褐色固体(0.7045g)。LCMS：(M+H-THP)+＝471.1。
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.7045g，1.272mmol)溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将反应混合物搅拌过夜。蒸发挥发物，并将生成的残余物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3-噻吩基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为米色固体(0.2284g，38％)。LCMS：(M+H)+＝471.0。
实施例205
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902451
部分A：
N-甲基-1-(1，3-噻唑-2-基)甲胺
将市售可得的2-噻唑甲醛(3.61g，31.91mmol)溶于异丙醇(90mL)中，将分子筛(3.65g)加入到反应容器中。然后将甲胺盐酸盐(17.28g，256mmol)、乙酸钠(7.85g，96mmol)和氰基硼氢化钠(3.07g，48.9mmol)加入到反应混合物中。将混合物置于氩气下，并搅拌3天。过滤出分子筛，并用异丙醇洗涤。将滤液蒸发，并将生成的残余物溶于乙酸乙酯中。将有机物用饱和的NaHCO3水溶液和盐水洗涤。将合并的水层用1L的10％MeOH在氯仿中的溶剂混合物萃取，并将合并的有机物干燥(Na2SO4)，并蒸发。将粗产物通过硅胶色谱法(0-5％MeOH的二氯甲烷溶液)纯化，生成N-甲基-1-(1，3-噻唑-2-基)甲胺，为黄色的油状物(0.930g，23％)。LCMS：(M+H)+＝129.0。
部分B：
6-氯-5-氟-N-甲基-2-(甲硫基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺
将4，6-二氯-5-氟-2-(甲硫基)嘧啶(参见中间体E)(0.3313g，1.563mmol)、N-甲基-1-(1，3-噻唑-2-基)甲胺(0.200g，1.5625mmol)和三乙胺(0.26mL，1.8654mmol)溶于THF(5mL)中，并搅拌过夜。然后将反应混合物用水稀释，并将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物干燥(Na2SO4)并浓缩，以生成6-氯-5-氟-N-甲基-2-(甲硫基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺，为黄色的油状物(0.4928g)。LCMS：(M+H)+＝305.0。
部分C：
5-氟-6-肼基-N-甲基-2-(甲硫基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺
将6-氯-5-氟-N-甲基-2-(甲硫基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺(0.4928g，1.621mmol)溶于5mL的DMSO和肼一水合物(0.63mL，12.96mmol)中。
将反应器加压密封，并于80℃加热2小时。将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到5-氟-6-肼基-N-甲基-2-(甲硫基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺，为米色固体(0.2112g，43％)。LCMS：(M+H)+＝301.0。
部分D：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将5-氟-6-肼基-N-甲基-2-(甲硫基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺(0.2112g，0.704mmol)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(0.365g，0.846mmol)溶于DMF(5mL)中。加入NMM(0.31mL，2.8195mmol)，随后加入HOAt(0.115g，0.846mmol)和EDC(0.162g，0.845mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为米色-橙色固体(0.2601g，63％)。LCMS：(M+H)+＝582.2。
部分E：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
将((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.2601g，0.448mmol)溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将该反应混合物搅拌3天。蒸发挥发物，并将生成的残余物通过RP-HPLC纯化，得到((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[甲基(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺，为米色固体(0.1396g，63％)。LCMS：(M+H)+＝498.1。
实施例206
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(甲硫基)-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902471
部分A：
6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺
将4，6-二氯-5-氟-2-(甲硫基)嘧啶(参见中间体E)(0.422g，1.991mmol)、市售可得的(1，3-噻唑-2-基甲基)胺盐酸盐(0.300g，1.992mmol)和三乙胺(0.61mL，4.3765mmol)溶于THF(3mL)中，并搅拌4天。将反应混合物用水稀释，并将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物干燥(MgSO4)并浓缩，以生成6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺，为黄色-橙色固体(0.6773g)。LCMS：(M+H)+＝291.0。
部分B：
5-氟-2-(甲硫基)-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙
将6-氯-5-氟-2-(甲硫基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺(0.6773g，2.336mmol)溶于DMSO(7mL)和肼一水合物(0.91mL，18.72mmol)中。将反应器加压密封，并于80℃加热2小时。将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到5-氟-2-(甲硫基)-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙，为橙色固体(0.1958g，29％)。LCMS：(M+H)+＝287.1。
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(甲硫基)-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将5-氟-2-(甲硫基)-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙(0.1958g，0.685mmol)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(0.355g，0.823mmol)溶于DMF(5mL)中。加入NMM(0.30mL，2.7286mmol)，随后加入HOAt(0.112g，0.824mmol)和EDC(0.157g，0.819mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(甲硫基)-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为橙色固体(0.2197g，57％)。LCMS：(M+H)+＝568.2。
部分D：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(甲硫基)-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(甲硫基)-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.2197g，0.387mmol)溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将该反应混合物搅拌3天。蒸发挥发物，并将生成的残余物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(甲硫基)-6-[(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为米色固体(0.0878g，47％)。LCMS：(M+H)+＝484.2。
实施例207
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-呋喃基甲基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902481
部分A：
2-{2-氯-5-氟-6-[(2-呋喃基甲基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(6.22g，12.54mmol)溶于THF(15mL)中。向该溶液中加入三乙胺(2.1mL，15.0667mmol)，随后加入市售可得的溶于THF(3mL)中的(2-呋喃基甲基)甲胺(1.394g，12.32mmol)。将该反应搅拌过夜。然后将反应混合物用水稀释，并将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物干燥(Na2SO4)并浓缩，以生成2-{2-氯-5-氟-6-[(2-呋喃基甲基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯，为米色固体(7.1439g)。LCMS：(M+H)+＝572.3。
部分B：
2-氯-5-氟-N-(2-呋喃基甲基)-6-肼基-N-甲基-4-嘧啶胺
将2-{2-氯-5-氟-6-[(2-呋喃基甲基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(7.1439g，12.51mmol)溶于MeOH(65mL)和HCl(4M的1，4-二噁烷溶液)(65mL)中。将反应混合物搅拌5小时，蒸发，并通过RP-HPLC纯化，得到2-氯-5-氟-N-(2-呋喃基甲基)-6-肼基-N-甲基-4-嘧啶胺，为橙色固体(0.8561g)。LCMS：(M+H)+＝272.1。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-呋喃基甲基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将2-氯-5-氟-N-(2-呋喃基甲基)-6-肼基-N-甲基-4-嘧啶胺(0.400g)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(0.764g，1.770mmol)溶于DMF中。加入NMM(0.65mL，5.912mmol)，随后加入HOAt(0.241g，1.772mmol)和EDC(0.3396g，1.771mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-呋喃基甲基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为橙色固体(0.6318g)。LCMS：(M+H)+＝553.2。
部分D：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-呋喃基甲基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-呋喃基甲基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.6318g，1.145mmol)溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将该反应混合物搅拌过夜。蒸发挥发物，并将生成的残余物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-呋喃基甲基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为米色固体(0.3182g，59％)。LCMS：(M+H)+＝469.2。
实施例208
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
(2S)-2-甲基-4-{2-[(苯基甲基)氧基]乙基}-1-哌嗪甲酸苯甲基酯
将(2S)-2-甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(市售可得的)(1g，4.3mmol)和苄氧基乙醛(0.9mL，6.4mmol)的DCM(50mL)溶液搅拌30分钟，并然后加入NaBH(OAc)3(1.36g，6.4mmol)。将该反应搅拌过夜，随后用1M NaOH终止。分离各相，并将水层用DCM萃取。将合并的有机物用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并浓缩成粗的残余物，将其通过硅胶色谱法(5-95％EtOAc的己烷溶液)纯化，得到(2S)-2-甲基-4-{2-[(苯基甲基)氧基]乙基}-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(0.93g，58％)。LCMS：(M+H)+：369.1。
部分B：
2-[(3S)-3-甲基-1-哌嗪基]乙醇
向除气的(2S)-2-甲基-4-{2-[(苯基甲基)氧基]乙基}-1-哌嗪甲酸苯甲基酯(0.93g，2.5mmo1)的MeOH(30mL)溶液中加入Pd/C(200mg)。将生成的悬浮液在氢气球下搅拌过夜，但是LCMS显示只失去了CBZ-基团。过滤除去催化剂，并减压除去溶剂。将剩余的残余物溶于MeOH中，并加入另外200mg的Pd/C以及5滴浓HCl。将该混合物于50psi下在Parr振荡器上氢化96小时，随后过滤除去催化剂。减压浓缩滤液，得到定量产率的2-[(3S)-3-甲基-1-哌嗪基]乙醇盐酸盐。LCMS：(M+H)+：145.1。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用2-[(3S)-3-甲基-1-哌嗪基]乙醇盐酸盐代替异丙胺制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：502.2。
实施例209
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R)-4-(2-羟基乙基)-2-甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用2-[(R)-3-甲基-1-哌嗪基]乙醇盐酸盐(根据实施例208，部分A和B，使用(2R)-2-甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯代替(2S)-2-甲基-1-哌嗪甲酸苯甲基酯制备)代替异丙胺制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R)-4-(2-羟基乙基)-2-甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：502.1
实施例210
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{(2S)-2-[1-(1-吡咯烷基)环丙基]-1-吡咯烷基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902512
部分A：
1-(苯基甲基)-L-脯氨酸盐酸盐
将1-(苯基甲基)-L-脯氨酸乙酯(13.20g，56.57mmol)溶于THF(40mL)、EtOH(40mL)和H2O(16mL)的混合物中。向该溶液中加入固体氢氧化钠(6.789g，169.73mmol)，并将混合物在室温下搅拌过夜。将该溶液用1N的HCl水溶液调节pH至2，并然后用CH2Cl2(3x50mL)萃取。将合并的有机层经Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，生成的粗产物为1-(苯基甲基)-L-脯氨酸盐酸盐(0.8g)。将水层真空浓缩，将残余物悬浮于MeOH中，并将生成的固体沉淀物通过过滤收集，与由有机萃取物得到的产物合并，得到1-(苯基甲基)-L-脯氨酸盐酸盐(13.30g，97％)。LCMS：(M+H)+：206.1
部分B：
(2S)-1-(苯基甲基)-2-(1-吡咯烷基羰基)吡咯烷
将1-(苯基甲基)-L-脯氨酸盐酸盐(2.0g，8.247mmol)和HOBt(1.34g，9.928mmol)溶于CH2Cl2(50mL)中，并加入4-甲基吗啉(3.63mL，33.09mmol)、吡咯烷(0.760mL，9.101mmol)和EDCI(1.906g，9.928mmol)。将该溶液搅拌过夜，并然后用水(50mL)洗涤。将水层用CH2Cl2(3x50mL)萃取，并将合并的有机层经无水MgSO4干燥，并真空浓缩。将该粗产物通过快速色谱法(Combiflash，0-100％乙酸乙酯/己烷，1％三乙胺)纯化，得到(2S)-1-(苯基甲基)-2-(1-吡咯烷基羰基)吡咯烷(1.619g，76％)。LCMS：(M+H)+：259.2。
部分C：
(2S)-1-(苯基甲基)-2-[1-(1-吡咯烷基)环丙基]吡咯烷
向搅拌下的冷却至-78℃的THF(50mL)溶液中加入溴化乙基镁(11.6mL，34.8mmol)，随后加入异丙醇钛(IV)(2.042mL，6.96mmol)，并然后加入(2S)-1-(苯基甲基)-2-(1-吡咯烷基羰基)吡咯烷(1.619g，6.96mmol)。将混合物温热至室温，并搅拌2h，并然后通过LCMS检测。剩余大于40％的原料，所以将混合物搅拌过夜，并然后再次通过LCMS检测。剩余大于20％的原料，因此加入另一批溴化乙基镁(5.8mL，17.4mmol)，并将混合物搅拌2h，再次通过LCMS检测。剩余大于5％的原料，并加入另一批溴化乙基镁(2.32mL，6.96mmol)，并将混合物搅拌2h。当通过LCMS确定该反应完成时，将反应混合物用饱和的NH4Cl水溶液(150mL)和水(50mL)稀释，并滤除生成的白色固体沉淀。将滤液的pH用6N的NaOH水溶液调节至＞12。将水溶液用Et2O(3x100mL)萃取，并将合并的有机层经MgSO4干燥，并真空浓缩。将该粗产物通过快速色谱法(Combiflash，0-100％乙酸乙酯/己烷，1％三乙胺)纯化，得到(2S)-1-(苯基甲基)-2-[1-(1-吡咯烷基)环丙基]吡咯烷(1.0837g，57％)。LCMS：(M+H)+：271.2。
部分D：
1-{1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙基}吡咯烷盐酸盐
将(2S)-1-(苯基甲基)-2-[1-(1-吡咯烷基)环丙基]吡咯烷(1.083g，4.00mmol)溶于MeOH(30mL)和1N HCl(8.8mL)的混合物中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(325mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过玻璃纤维过滤器过滤除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的1-{1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙基}吡咯烷盐酸盐(0.978g，＞99％)。LCMS：(M+H)+：181.2。
部分E：
5-氟-4-肼基-2-甲基-6-{(2S)-2-[1-(1-吡咯烷基)环丙基]-1-吡咯烷基}嘧啶
将4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(428mg，2.368mmol)溶于3mL的MeOH中，并然后加入1-{1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙基}吡咯烷盐酸盐(489mg，2.256mmol)，随后加入DIPEA(1.572mL，9.024mmol)。将生成的反应混合物于120℃下微波加热30min，将挥发物真空浓缩，并将残余物溶于DMSO(4mL)和MeOH(1mL)的混合物中。加入肼一水合物(2.44mL)，并将内容物于60℃加热过夜。然后将反应混合物冷却至室温，并通过RP-HPLC纯化，得到5-氟-4-肼基-2-甲基-6-{(2S)-2-[1-(1-吡咯烷基)环丙基]-l-吡咯烷基}嘧啶(69mg，10％)。LCMS：(M+H)+：321.2。
部分F：
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{(2S)-2-[1-(1-吡咯烷基)环丙基]-1-吡咯烷基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
根据一般方法A，部分B和C，使用5-氟-4-肼基-2-甲基-6-{(2S)-2-[1-(1-吡咯烷基)环丙基]-1-吡咯烷基}嘧啶代替部分B中的5-氟-4-肼基-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)嘧啶制备{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{(2S)-2-[1-(1-吡咯烷基)环丙基]-1-吡咯烷基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：518.4。
实施例211
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-3-乙基-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902531
部分A：
1-(二苯基甲基)-3-乙基-N，N-二甲基-3-氨基氮杂环丁烷
将甲磺酸1-(二苯基甲基)-3-乙基氮杂环丁烷-3-基酯(1.00g，2.89mmol)(Ellsworth，Edmund Lee；Hoyer，Denton Wade；Hutchings，Kim Marie；Kendall，Jackie Diane；Murphy，Sean Timothy；Starr，Jeremy Tyson；Tran，TuanPhong.WO 2005049605)、二甲胺(2M的THF溶液，14.45ml，28.9mmol)和TEA(0.80ml，5.78mmol)在异丙醇中的混合物于70℃加热过夜。进行标准的后处理，随后通过RP-HPLC纯化，得到1-(二苯基甲基)-3-乙基-N，N-二甲基-3-氨基氮杂环丁烷(0.215g，25.3％)。LCMS：(M+H)+295.2。
部分B：
3-乙基-N，N-二甲基-3-氨基氮杂环丁烷二盐酸盐
将1-(二苯基甲基)-3-乙基-N，N-二甲基-3-氨基氮杂环丁烷(0.215g，0.73mmol)在1N HCl(5ml)和乙醇(30ml)中于60psi下在Pd(OH)2-碳(100mg)存在下用H2处理。进行标准的后处理，得到3-乙基-N，N-二甲基-3-氨基氮杂环丁烷二盐酸盐(0.165g，112.2％)。LCMS：(M+H)+129.1。
部分C：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-3-乙基-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据实施例176，在部分C中使用3-乙基-N，N-二甲基-3-氨基氮杂环丁烷二盐酸盐代替1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[3-(二甲基氨基)-3-乙基-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+486.2。
实施例212
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[3-(二甲基氨基)-3-乙基-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺.
Figure BPA00001182153902551
根据一般方法C，使用3-乙基-N，N-二甲基-3-氨基氮杂环丁烷盐酸盐(实施例211)代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[3-(二甲基氨基)-3-乙基-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+498.3。
实施例213
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(3-环丙基-3-羟基-1-氮杂环丁烷基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺.
Figure BPA00001182153902552
根据一般方法D，使用3-环丙基-3-氮杂环丁醇盐酸盐(Ellsworth，EdmundLee；Hutchings，Kim Marie；Murphy，Sean Timothy；Powell，Sharon Anne；Sciotti，Richard John；Tran，Tuan Phong.WO 2005026146)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(3-环丙基-3-羟基-1-氮杂环丁烷基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+471.0。
实施例214
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R，5R)-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902553
部分A：
(2R，5R)-1，2，5-三甲基-4-(苯基甲基)哌嗪
在0℃下，向(2R，5R)-2，5-二甲基-1-(苯基甲基)哌嗪(根据J.Med.Chem.2006，49，716-726，使用N-Boc-D-丙氨酸代替N-Boc-L-丙氨酸制备)(667mg，3.26mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入甲醛(0.367mL，37％的水溶液，4.89mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(900mg，4.24mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌2h，随后用二氯甲烷稀释并用lN NaOH溶液洗涤。将有机物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到(2R，5R)-1，2，5-三甲基-4-(苯基甲基)哌嗪(680mg，96％)。LCMS：(M+H)+：219.1。
部分B：
(2R，5R)-1，2，3-三甲基哌嗪盐酸盐
将(2R，5R)-1，2，5-三甲基-4-(苯基甲基)哌嗪(680mg，3.11mmol)溶于50mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(170mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。加入6.5mL 1N HCl后，将生成的滤液真空浓缩，得到(2R，5R)-1，2，5-三甲基哌嗪的盐酸盐(251mg，100％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分C：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R，5R)-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法G，在部分A中使用(2R，5R)-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R，5R)-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.1。
实施例215
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2R，5R)-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用(2R，5R)-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐(实施例214)代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2R，5R)-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.4。
实施例216
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(氟甲基)-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，在部分A中使用(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪二盐酸盐(实施例22)代替吡咯烷，使用4，6-二氯-5-氟-2-(氟甲基)嘧啶代替4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶，并使用3当量的DIPEA制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-(氟甲基)-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：498.3。
实施例217
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(3-环丙基-3-羟基-1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法C，使用3-环丙基-3-氮杂环丁醇盐酸盐(Ellsworth，EdmundLee；Hutchings，Kim Marie；Murphy，Sean Timothy；Powell，Sharon Anne；Sciotti，Richard John；Tran，Tuan Phong.WO 2005026146)代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(3-环丙基-3-羟基-1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+483.1。
实施例218
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[3-乙基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
部分A：
1-(3-乙基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐
根据制备3-乙基-N，N-二甲基-3-氨基氮杂环丁烷二盐酸盐(实施例211)中所述的方法，在部分A中使用吡咯烷代替二甲胺制备1-(3-乙基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐。LCMS：(M+H)+155.1。
部分B：
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[3-乙基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法C，使用1-(3-乙基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[3-乙基-3-(1-吡咯烷基)-1-氮杂环丁烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+524.3。
实施例219
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(环丙基甲基)氨基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902582
按照类似于实施例176的方法，使用1-环丙基甲胺代替部分C中的1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(环丙基甲基)氨基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+429.1。
实施例220
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902591
部分A：
2-(3-噻吩基)乙酰胺
在氮气下，将市售可得的3-噻吩乙酸(2.0g，14.07mmol)溶于DCM(45mL)中。然后加入草酰氯(1.35mL，15.48mmol)，并将该反应搅拌过夜。然后在搅拌下滴加氢氧化铵(30％的NH3溶液)(8.22mL)。将反应混合物蒸发，得到2-(3-噻吩基)乙酰胺，为米色固体(3.2082g)。LCMS：(M+H)+＝142.1。
部分B：
[2-(3-噻吩基)乙基]胺
在氩气下，在0℃下在冰浴中将氢化铝锂置于THF(10mL)中。然后加入2-(3-噻吩基)乙酰胺(0.9828g，6.97mmol)在THF(30mL)中的悬浮液。将反应混合物于65℃加热过夜，然后冷却至环境温度，并置于冰浴中。将该反应用水(10mL)、3N NaOH(10mL)和另外的水(10mL)终止。将混合物经Celite硅藻土过滤，并将滤液用饱和的NaCl溶液洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到[2-(3-噻吩基)乙基]胺，为黄色的油状物(0.470g，53％)。LCMS：(M+H)+＝128.1。
部分C：
2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(1.84g，3.71mmol)溶于THF(5mL)中。向该溶液中加入三乙胺(0.62mL，4.4482mmol)，随后加入半悬浮于THF(15mL)中的[2-(3-噻吩基)乙基]胺(0.470g，3.70mmol)。将该反应搅拌过夜，然后用水和饱和的NaCl稀释。将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物干燥(MgSO4)并浓缩，以生成2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯，为橙色油状物(2.389g)。LCMS：(M+H)+＝588.3。
部分D：
2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4(1H)-嘧啶酮腙
在室温下，将2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(2.389g，4.07mmol)溶于MeOH(25mL)和HCl(4M的1，4-二噁烷溶液)(25mL)中。将反应混合物搅拌3天，蒸发，并通过RP-HPLC纯化，得到2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4(1H)-嘧啶酮腙，为褐色粘稠状固体(0.1401g)。LCMS：(M+H)+＝288.0。
部分E：
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将褐色粘稠状固体的2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4(1H)-嘧啶酮腙(0.1401g)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(0.253g，0.586mmol)溶于DMF(7mL)中。加入NMM(0.27mL，2.90mmol)，随后加入HOAt(0.080g，0.588mmol)和EDC(0.112g，0.584mmol)。搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为橙色固体(0.1677g)。LCMS：(M+H)+＝569.3。
部分F：
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.1677，0.295mmol)溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将该反应混合物搅拌过夜。蒸发挥发物，并将生成的残余物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-噻吩基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为米色固体(0.0715g，50％)。LCMS：(M+H)+＝485.1。
实施例221
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902611
部分A：
(4aR，8aS)-八氢-2，3-喹喔啉二酮
向顺式-1，2-二氨基环己烷(4.8g，42mmol)的二甲氧基乙烯(dimethoxyethylene)(100mL)溶液中缓慢地加入草酸二乙酯(28.5mL，210mmol)。将反应混合物在室温下搅拌0.5h，并于100℃搅拌2h。将悬浮液冷却至室温后，将生成的白色固体沉淀过滤收集。将该沉淀用乙醚洗涤并干燥，得到(4aR，8aS)-八氢-2，3-喹喔啉二酮(4.6g，66％)。LCMS：(M+H)+：169.1。
部分B：
(4aR，8aS)-十氢喹喔啉
将(4aR，8aS)-八氢-2，3-喹喔啉二酮(4.67g，27.8mmol)分批加入到1MLAH(111mL，111mmol)的乙醚(30mL)溶液中。将该反应加热回流，并在回流下搅拌4h。冷却至室温后，将该反应通过依次加入H2O(4.2mL)、15％NaOH(4.2mL)和H2O(12.6mL)终止。将混合物搅拌0.5h，并将该固体滤除，并用过量的EtOAc洗涤。在减压下浓缩合并的滤液，得到(4aR，8aS)-十氢喹喔啉，为白色固体(3.6g，92％)。LCMS：(M+H)+：141.1。
部分C：
八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物，顺式)
向(4aR，8aS)-十氢喹喔啉(1.4g，10mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中加入三乙胺(1.7mL，12mmol)，随后滴加氯甲酸苄基酯(1.71g，10mmol)。将反应混合物在室温下搅拌2h，随后用二氯甲烷稀释，并用1N NaOH，随后用饱和的NH4Cl水溶液洗涤。将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并浓缩，得到粗产物，将其通过Combiflash纯化，得到八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物，顺式)(2.32g，85％)。LCMS：(M+H)+：275.1.
部分D：
(4aS，8aR)-4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯，(4aR，8aS)-4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯
在0℃下，向八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物)(2.32g，8.5mmol)的二氯甲烷(80mL)溶液中加入甲醛(0.76mL，37％的水溶液，10.2mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(2.7g，12.75mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌1h，随后用二氯甲烷稀释，并用1N NaOH溶液洗涤。将有机物用盐水洗涤，干燥(Na2SO4)并蒸发，得到2.3g的4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯(对映异构体的混合物，顺式)(2.3g)，将其通过手性LC分离，得到(4aS，8aR)-4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯和(4aR，8aS)-4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯。使用Ab Initio振动圆二色光谱确定绝对构型。LCMS：(M+H)+：289.2。
部分E：
(4aR，8aS)-1-甲基-十氢喹喔啉，盐酸盐
将(4aS，8aR)-4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯(2.7g，9.4mmol)溶于140mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(400mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约2小时，然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。加入19.6mL 1N HCl后，将生成的滤液真空浓缩，得到(4aR，8aS)-1-甲基-十氢喹喔啉的盐酸盐(2.1g，100％)。LCMS：(M+H)+：155.1。
部分F：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法G，在部分A中使用(4aR，8aS)-1-甲基-十氢喹喔啉盐酸盐代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：512.3。
实施例222
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902631
根据一般方法A，使用(4aR，8aS)-1-甲基-十氢喹喔啉(制备参见实施例221)代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：492.3。
实施例223
N-[(2R)-3-[2-(6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基}-2-氯-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902632
部分A：
4-[(甲氨基)甲基]-1，3-噻唑-2-胺
将4-(氯甲基)-1，3-噻唑-2-胺(490mg，2.65mmol)在40％甲胺水溶液(25ml)中搅拌过夜。将反应混合物蒸发。然后将残余物通过反相HPLC纯化，得到4-[(甲氨基)甲基]-1，3-噻唑-2-胺(55mg，15％)。LCMS：(M+H)+：144.0。
部分B：
2-{6-[[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将4-[(甲氨基)甲基]-1，3-噻唑-2-胺(55mg，0.38mmol)溶于THF(3mL)中。加入三乙胺(0.06mL，0.42mmol)，随后立即加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(180mg，0.38mmol)。将反应混合物搅拌过夜，用EtOAc稀释，干燥(硫酸钠)并蒸发，得到2-{6-[[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，l-二甲基乙基)酯(230mg，100％)。LCMS：(M+H)+：604.2。
部分C：
6-[[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基]-2-氯-5-氟-4(1H)-嘧啶酮腙三盐酸盐
将2-{6-[[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(220mg，0.36mmol)溶于10mL的甲醇中，并搅拌。向该溶液中缓慢地加入5mL的4M HCl的二噁烷溶液。将混合物搅拌3天，并蒸发，得到6-[[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基]-2-氯-5-氟-4(1H)-嘧啶酮腙三盐酸盐(150mg，83％)。LCMS：(M+H)+：303.9。
部分D：
[(2R)-3-(2-{6-[[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将6-[[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基]-2-氯-5-氟-4(1H)-嘧啶酮腙三盐酸盐(150mg，0.29mmol)、(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(120mg，0.4mmol)和HOAt(59mg，0.43mmol)溶于10mL的DMF中。加入NMM(0.2mL，1.8mmol)，随后加入EDC(85mg，0.43mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{6-[[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(110mg，52％)。LCMS：(M+H)+：585.2。
部分E：
N-[(2R)-3-[2-(6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基}-2-氯-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{6-[[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基]-2-氯-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(110mg，0.19mmol)在4∶1AcOH∶水(5mL)中在室温下搅拌2天。真空除去溶剂，并将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到N-[(2R)-3-[2-(6-{[(2-氨基-1，3-噻唑-4-基)甲基](甲基)氨基}-2-氯-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺(20mg，21％)。LCMS：(M+H)+：501.1。
实施例224
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(1-吡咯烷基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902651
根据一般方法E，在部分A中使用市售可得的1-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]吡咯烷代替异丙胺制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(1-吡咯烷基甲基)-l-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：512.3
实施例225
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(苯基氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用苯胺代替部分A中的吡咯烷制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(苯基氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：451.2。
实施例226
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902661
部分A：
(4aS，8aR)-1-甲基-十氢喹喔啉盐酸盐
将(4aR，8aS)-4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉甲酸苯甲基酯(实施例221)(2.58g，9.0mmol)溶于120mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(380mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约2小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。加入19.0mL 1N HCl后，将生成的滤液真空浓缩，得到(4aS，8aR)-1-甲基-十氢喹喔啉的盐酸盐(2.0g，100％)。LCMS：(M+H)+：155.1。
部分B：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法G，在部分A中使用(4aS，8aR)-1-甲基-十氢喹喔啉盐酸盐代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：512.3。
实施例227
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902662
根据一般方法A，使用(4aS，8aR)-1-甲基-十氢喹喔啉盐酸盐(实施例226)代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-八氢-1(2H)-喹喔啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：492.3。
实施例228
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902671
根据一般方法E，在部分A中使用(2R，3S)-1，2，3-三甲基哌嗪二盐酸盐(实施例175)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂，在部分C中使用(2R)-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)己酸(实施例201)代替(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S，3R)-2，3，4-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：460.2./462.1。
实施例229
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R)-2-(4-吗啉基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902672
根据一般方法E，在部分A中使用(S)-2-(吗啉-4-基甲基)-吡咯烷(Bull.Chem.Soc.1990，63，721-727)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R)-2-(4-吗啉基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：528.2/530.2。
实施例230
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{3-乙基-3-[乙基(甲基)氨基]-1-氮杂环丁烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902681
部分A：
N，3-二乙基-N-甲基-3-氨基氮杂环丁烷二盐酸盐
根据制备3-乙基-N，N-二甲基-3-氨基氮杂环丁烷二盐酸盐(实施例211)的所述的方法，在部分A中使用N-甲基乙胺代替二甲胺制备N，3-二乙基-N-甲基-3-氨基氮杂环丁烷二盐酸盐。LCMS：(M+H)+144.1。
部分B：
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{3-乙基-3-[乙基(甲基)氨基]-1-氮杂环丁烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
按照类似于实施例176的方法，在部分C中使用N，3-二乙基-N-甲基-3-氨基氮杂环丁烷二盐酸盐代替1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐制备[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{3-乙基-3-[乙基(甲基)氨基]-1-氮杂环丁烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+500.3。
实施例231
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902682
根据一般方法C，使用(9aS)-八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪二盐酸盐(实施例22)代替部分A中的氮杂环丁烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+512.2。
实施例232
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[(二甲基氨基)甲基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
N，N-二甲基-1-(苯基羰基)-L-脯氨酰胺
将N，N-二甲基-L-脯氨酰胺(2.50g，17.58mmol)溶于CH2Cl2(50mL)和水(50mL)的混合物中，然后加入固体碳酸氢钠(2.95g，35.16mmol)，随后加入苯甲酰氯(2.1mL，18.45mmol)。搅拌过夜后，分离各相，并将水相用CH2Cl2(3x50mL)萃取。将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到N，N-二甲基-1-(苯基羰基)-L-脯氨酰胺(4.502g，＞99％)。LCMS：(M+H)+：247.2。
部分B：
N，N-二甲基-1-[(2S)-1-(苯基甲基)-2-吡咯烷基]甲胺
将N，N-二甲基-1-(苯基羰基)-L-脯氨酰胺(4.50g，18.269mmol)溶于100mL的THF中，冷却至0℃，并然后分批加入LiAlH4(1.386mg，36.54mmol)。将混合物于80℃加热2h，然后冷却至RT。将该反应通过依次用H2O(1.5mL)、15％的NaOH水溶液(1.5mL)和H2O(4.5mL)终止，并在室温下搅拌过夜。将内容物过滤，并将滤液真空浓缩，得到N，N-二甲基-1-[(2S)-1-(苯基甲基)-2-吡咯烷基]甲胺(3.7305g，94％)。LCMS：(M+H)+：219.1。
部分C：
N，N-二甲基-1-[(2S)-2-吡咯烷基]甲胺盐酸盐
将N，N-二甲基-1-[(2S)-1-(苯基甲基)-2-吡咯烷基]甲胺(3.730g，17.08mmol)溶于MeOH(100mL)和1N HCl(35mL，34.16mmol)的混合物中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(1.119g)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过玻璃纤维过滤器过滤来除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的N，N-二甲基-1-[(2S)-2-吡咯烷基]甲胺盐酸盐(3.3701g，＞99％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分D：
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[(二甲基氨基)甲基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用N，N-二甲基-1-[(2S)-2-吡咯烷基]甲胺盐酸盐代替异丙胺制备[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[(二甲基氨基)甲基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.0。
实施例233
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902701
部分A：
2-(3-溴-2-氧代丙基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮
在氮气氛下，将市售可得的邻苯二甲酰亚氨基丙酮(2.0g，9.8522mmol)溶于二甘醇(13mL)中，并在冰浴中冷却至0℃。滴加溴(0.51mL，9.9242mmol)。将该反应遮蔽光线，使其达到环境温度，并搅拌过夜。LCMS：(M+H)+＝282.0。
部分B：
2-(1，3-噻唑-4-基甲基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮
将乙醚(7.5mL)加入到2-(3-溴-2-氧代丙基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮的上述溶液中，并在冰/NaCl盐浴中冷却至0℃。然后加入硫代甲酰胺(EuropeanJournal of Medicinal Chemistry，2004，39，867-872.)(1.20g)的EtOH(8mL)溶液，并将该反应搅拌过夜。将溶剂蒸发，并将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到白色固体的2-(1，3-噻唑-4-基甲基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮。LCMS：(M+H)+＝245.1。
部分C：
(1，3-噻唑-4-基甲基)胺
将溶于EtOH(15mL)和肼一水合物(0.145mL，2.98mmol)中的2-(1，3-噻唑-4-基甲基)-1H-异吲哚-1，3(2H)-二酮(0.6556g，2.69mmol)置于密封的圆底烧瓶中，并于70℃加热2.5小时，然后在环境温度下搅拌过夜。用EtOH稀释后，将该固体滤除，用EtOH洗涤，并将滤液蒸发，得到(1，3-噻唑-4-基甲基)胺，为米色固体(0.1491g，49％)。LCMS：(M+H)+＝115.1。
部分D：
2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
向(1，3-噻唑-4-基甲基)胺(0.1491g，1.308mmol)的THF(10mL)悬浮液中加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.649g，1.308mmol)和三乙胺(0.22mL，1.5784mmol)在THF(2mL)中的溶液。加入另外的THF(3mL)，并将该反应搅拌过夜。然后将反应混合物用水稀释，并将水层用乙酸乙酯萃取。将有机物干燥(Na2SO4)并浓缩。将生成的粗物质通过硅胶色谱法(0-100％乙酸乙酯的己烷溶液)纯化，生成2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯，为黄色的油状物(0.51g，68％)。LCMS：(M-2Boc)＝375.0。
部分E：
2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙
将2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.51g，0.8868mmol)溶于MeOH(5mL)和HCl(4M的1，4-二噁烷溶液)(5mL)中。将反应混合物搅拌过夜，然后蒸发，并通过RP-HPLC纯化，得到2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙，为橙色油状物(0.105g)。LCMS：(M+H)+＝275.0。
部分F：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4(1H)-嘧啶酮腙(0.105g)和(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}丙酸(0.182g，0.422mmol)溶于DMF(5mL)中。加入NMM(0.21mL，1.91mmol)，随后加入HOAt(0.063g，0.463mmol)和EDC(0.088g，0.459mmol)。搅拌2天后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为褐红色固体(0.1133g)。LCMS：(M+H)+＝556.0。
部分G：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.1133g，0.204mmol)溶于乙酸(8mL)和水(2mL)中。将该反应混合物搅拌过夜。蒸发挥发物，并将生成的残余物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1，3-噻唑-4-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.0497g，52％)。LCMS：(M+H)+＝472.1。
实施例234
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R)-2-(氟甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902721
根据一般方法E，在部分A中使用(2R)-氟甲基吡咯烷(Bioorg.Med.Chem.Lett.2007，17，1443-1446)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0MHCl的乙醚溶液作为溶剂制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2R)-2-(氟甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：461.1/463.0。
实施例235
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{(2S)-2-[(二甲基氨基)甲基]-1-吡咯烷基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902731
根据一般方法A，使用N，N-二甲基-1-[(2S)-2-吡咯烷基]甲胺盐酸盐代替部分A中的吡咯烷制备{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{(2S)-2-[(二甲基氨基)甲基]-1-吡咯烷基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：466.2。
实施例236
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3R)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据实施例241的方法，使用(2R)-2-氨基-1-丙醇制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3R)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。
实施例237
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S，5S)-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902733
部分A：
(2S，5S)-1，2，5-三甲基-4-(苯基甲基)哌嗪
在0℃下，向(2S，5S)-2，5-二甲基-1-(苯基甲基)哌嗪(J.Med.Chem.2006，49，716-726)(770mg，3..77mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入甲醛(0.396mL，37％的水溶液，5.28mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(959mg，4.52mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌2h，随后用二氯甲烷稀释，并用1N NaOH溶液洗涤。将有机物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到(2S，5S)-1，2，5-三甲基-4-(苯基甲基)哌嗪(782mg，95％)。LCMS：(M+H)+：219.1。
部分B：
(2S，55)-1，2，3-三甲基哌嗪盐酸盐
将(2S，5S)-1，2，5-三甲基-4-(苯基甲基)哌嗪(782mg，3.58mmol)溶于50mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(200mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。加入7.5mL 1N HCl后，将生成的滤液真空浓缩，得到(2S，5S)-1，2，5-三甲基哌嗪的盐酸盐(715mg，100％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分C：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S，5S)-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法G，在部分A中使用(2S，5S)-1，2，5-三甲基哌嗪盐酸盐代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S，5S)-2，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.1。
实施例238
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902741
部分A：
5-氟-6-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]-2-甲基-4(1H)-嘧啶酮腙
将2-氨基-5-氟嘧啶(110mg，1mmol)的THF(5mL)溶液冷却至0℃，并加入NaH(60％在油中的悬浮液)(72mg，1.8mmol)。将反应混合物在低温下搅拌10min，并在室温下搅拌20分钟，随后再次冷却至0℃一次。加入4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(180mg，1mmol)，并将该反应温热至室温，并搅拌1.5小时。然后加入水，并将该溶液用EtOAc萃取。将合并的有机物经硫酸钠干燥并浓缩，得到粗物质。将其溶于DMSO(4mL)中，并加入肼(1mL)。将生成的混合物加热至60℃，并搅拌5小时。冷却后，5-氟-6-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]-2-甲基-4(1H)-嘧啶酮腙(63mg，25％)沉淀出来，并通过过滤分离出来。LCMS：(M+H)+：253.1。
部分B：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，部分B和C，在部分B中使用5-氟-6-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]-2-甲基-4(1H)-嘧啶酮腙代替5-氟-4-肼基-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)嘧啶制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(5-氟-2-吡啶基)氨基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：450.1。
实施例239
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2-氰基乙基)(环丙基)氨基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902751
根据一般方法D，使用市售可得的3-(环丙基氨基)丙腈代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2-氰基乙基)(环丙基)氨基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+468.1。
实施例240
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902761
部分A：
(3S)-4-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-3-甲基吗啉
向(3S)-3-甲基吗啉盐酸盐(0.1591g，1.156mmol，根据实施例241中所述的方法制备的)的MeOH(3mL)溶液中加入N，N-二异丙基乙胺(0.440mL，2.526mmol)和4，6-二氯-5-氟-2-甲基嘧啶(0.2085g，1.152mmol)。将该溶液于140℃在微波辐射下加热30min，并然后真空浓缩。将生成的固体用水研磨，通过真空过滤收集，并用水洗涤。向生成的固体的二噁烷(11mL)溶液中加入肼水合物(0.210mL)。将混合物加热，并于80℃搅拌过夜，并然后冷却至室温，并真空浓缩。将残余物在DCM(100mL)和饱和的NaHCO3水溶液(30mL)之间分配。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(3S)-4-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-3-甲基吗啉(0.2148g，77％产率)，为黄色油状物。LCMS：(M+H)+：242.1。
部分B：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向(3S)-4-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-3-甲基吗啉(0.2123g，0.880mmol)的DMF(4mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸，N，N-二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物(327.1mg，0.661mmol)、N-甲基吗啉(0.290ml，2.64mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.108g，0.794mmol)和EDC(0.152g，0.793mmol)。将该溶液搅拌过夜，并然后直接通过Gilson RPLC纯化。向残余物的MeOH(7mL)溶液中加入10％Pd/C(50％水，88mg)。将混合物在气球压力下氢化1h，并然后通过PTFE膜过滤。将生成的溶液真空浓缩，溶于EtOAc中，并真空浓缩。将该固体通过真空过滤收集，并用己烷洗涤，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(0.2326g，80％产率)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：439.2。
实施例241
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902771
部分A：
(2S)-2-[(苯基甲基)氨基]-1-丙醇
向(2S)-2-氨基-1-丙醇(5.01g，66.70mmol)的甲苯(130mL)溶液中加入苯甲醛(7.08mL，70.05mmol)。该烧瓶装配有迪安-斯达克榻分水器，并将该溶液于150℃加热2h。然后将该溶液冷却至室温，并真空浓缩。向0℃的残余物的EtOH溶液(130mL)中加入NaBH4(6.31g，166.8mmol)和足够的4NHCl的二噁烷溶液以调节pH至约2。将混合物搅拌过夜，并然后真空浓缩。将残余物在1N的HCl水溶液(200mL)和DCM(100mL)之间分配。将水相用新制的DCM(100mL)洗涤，并然后用6N的NaOH水溶液调节pH＞13。将水相用DCM(2x150mL)萃取，并将合并的有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(2S)-2-[(苯基甲基)氨基]-1-丙醇(10.52g，95％)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：166.1。
部分B：
(5S)-5-甲基-4-(苯基甲基)-3-吗啉酮
向(2S)-2-[(苯基甲基)氨基]-1-丙醇(10.52g，63.67mmol)的THF(65mL)溶液中加入K2CO3(26.40g，191.0mmol)的水(65mL)溶液。将剧烈搅拌的混合物冷却至0℃，并用20分钟的时间滴加氯乙酰氯(7.10mL，89.14mmol)。将混合物搅拌1h，并然后滴加另一批的氯乙酰氯(0.500mL，6.278mmol)。将混合物搅拌1h，并然后将混合物用50％的NaOH水溶液(约20mL)调节pH＞13。将混合物搅拌，并温热至室温过夜，并然后用DCM(250mL)萃取。将有机相用1N的HCl水溶液，随后用水洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(5S)-5-甲基-4-(苯基甲基)-3-吗啉酮(12.74g，97％)，为无色油状物。LCMS：(M+H)+：206.1。
部分C：
(3S)-3-甲基-4-(苯基甲基)吗啉
向0℃的(5S)-5-甲基-4-(苯基甲基)-3-吗啉酮(12.74g，62.07mmol)的甲苯(150mL)溶液中通过加料漏斗滴加Red-Al(65％w/w在PhMe中，38mL)。将生成的溶液于60℃加热，并搅拌4h，然后冷却至40℃，并搅拌过夜。然后将该溶液冷却至0℃，并通过滴加1N的NaOH水溶液(15mL)来终止。将混合物用Et2O(100mL)稀释，并用1N的NaOH水溶液(100mL)，随后用盐水(50mL)洗涤。将有机相经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，并与MeOH(50mL)共沸，得到(3S)-3-甲基-4-(苯基甲基)吗啉(11.33g，95％)，为微粉红色的油状物。LCMS：(M+H)+：192.2。
部分D：
(3S)-3-甲基吗啉盐酸盐
向(3S)-3-甲基-4-(苯基甲基)吗啉(11.33g，59.24mmol)的MeOH(150mL)溶液中加入6N的HCl水溶液(9.9mL，59.4mmol)和10％Pd/C(50％水，1.13g)。将悬浮液在气球压力下氢化过夜，并然后通过玻璃纤维滤器过滤。将生成的黄色溶液真空浓缩，并与MeOH(4x150mL)共沸，得到(3S)-3-甲基吗啉盐酸盐(8.17g，定量产率)，为黄色的油状物，其在高真空下固化。LCMS：(M+H)+：102.2。
部分E：
2-{2-氯-5-氟-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
向(3S)-3-甲基吗啉盐酸盐(0.2059g，1.496mmol)的DMF(7.5mL)溶液中加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.7451g，1.498mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.575mL，3.301mmol)。将该溶液搅拌过夜，并然后用Et2O(150mL)稀释。将混合物用水(2x50mL)洗涤，并将合并的水相用新制的Et2O(50mL)萃取。将该Et2O层用干净的水(50mL)洗涤，并将合并的有机相用DCM(50mL)稀释，经无水Na2SO4干燥，过滤，真空浓缩，并与EtOAc共沸。将该固体通过真空过滤收集，并用己烷洗涤。将上清液真空浓缩，并通过梯度硅胶色谱法(0％至100％EtOAc的己烷溶液；1％Et3N)纯化。将所需的级分真空浓缩，并将生成的固体通过真空过滤收集，用己烷洗涤，并与第一批的固体合并，得到2-{2-氯-5-氟-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.6610g，79％)，为白色固体。LCMS：(M+H)+：562.2。
部分F：
(3S)-4-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-3-甲基吗啉二盐酸盐
向2-{2-氯-5-氟-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.6552g，1.166mmol)的DCM(12mL)溶液中加入2NHCl的Et2O溶液(12mL，24mmol)。将该溶液搅拌2天，并将生成的混合物真空浓缩。将该固体用Et2O研磨，并通过真空过滤收集，得到(3S)-4-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-3-甲基吗啉二盐酸盐(0.2543g，65％)，为黄色固体。LCMS：(M+H)+：262.0。
部分G：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
向(3S)-4-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-3-甲基吗啉二盐酸盐(251.5mg，0.752mmol)的DMF(6mL)溶液中加入(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸，N，N-二异丙基乙胺盐，异丙醇溶剂合物(306.1mg，0.619mmol)、N-甲基吗啉(0.4l0ml，3.73mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.101g，0.742mmol)和EDC(0.142g，0.741mmol)。将该溶液搅拌过夜，并然后直接通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(314.6mg，93％)，为橙色泡沫状物质。LCMS：(M+H)+：549.2。
部分H：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
向[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(309.1mg，0.563mmol)的甲醇(6mL)溶液中加入20％Pd(OH)2/C(50％水，62mg)。将悬浮液氢化1h，并然后通过PTFE膜过滤。将生成的溶液真空浓缩，并通过Gilson RPLC纯化，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-甲基-4-吗啉基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(94.0mg，36％)，为白色固体，随后由EtOAc-Et2O结晶。LCMS：(M+H)+：459.1。
实施例242
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3S，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902801
部分A：
(3S，5S)-3，5-二甲基-2-哌嗪酮
将N-{(1S)-2-[双(苯基甲基)氨基]-1-甲基乙基}-L-丙氨酸甲酯(J.Org.Chem.1995，60，4177-4183)(2.156g，6.33mmol)、37％浓盐酸(0.805mL)、5％钯/碳(0.863g)和EtOH(40mL)的混合物在氢气球下氢化48h。将混合物通过Celite硅藻土过滤，并将该固体用MeOH和CH2Cl2洗涤。将滤液合并，并在减压下浓缩。将残余物再溶于EtOH(55mL)中，加入对甲苯磺酸(0.344g)，并将混合物加热回流16h。将混合物在减压下浓缩，并在CH2Cl2和NaHCO3之间分配。将水层用CH2Cl2反萃取，并将合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过快速色谱法(9∶1，CH2Cl2：MeOH)纯化，得到N-{(1S)-1-甲基-2-[(苯基甲基)氨基]乙基}-L-丙氨酸甲酯(685mg，50％)。LCMS：(M+H)+：129.1。将剩余的水层再用40％异丙醇的CHCl3溶液萃取两次，并将合并的有机层干燥(Na2SO4)，过滤，并浓缩，得到(3S，5S)-3，5-二甲基-2-哌嗪酮(306mg，38％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分B：
(3S，5S)-3，4，5-三甲基-2-哌嗪酮
在室温下，向(3S，5S)-3，5-二甲基-2-哌嗪酮的甲醇(12mL)溶液中加入甲醛(0.345mL，37％的水溶液，4.6mmol)，随后加入硼氢化钠(261mg，6.9mmol)。将反应混合物搅拌2h，随后用二氯甲烷稀释，并用1N NaOH溶液洗涤。将水层用CH2Cl2反萃取三次，并将合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到(3S，5S)-3，4，5-三甲基-2-哌嗪酮(128mg，39％)。LCMS：(M+H)+：143.1。
部分C：
(2S，6S)-1，2，6-三甲基哌嗪盐酸盐
将1M LAH的THF溶液(3mL，3mmol)滴加到(3S，5S)-3，4，5-三甲基-2-哌嗪酮(123mg，0.86mmol)中。将该反应温热至室温，然后在室温下搅拌40min，并再回流5小时。冷却至室温后，将该反应通过依次加入H2O(0.114mL)、15％NaOH(0.114mL)和H2O(0.342mL)来终止。将混合物搅拌0.5h，并将该固体滤除，并用过量的THF洗涤。向合并的滤液中加入1.8mL 1N HCl，随后减压浓缩，得到(2S，6S)-1，2，6-三甲基哌嗪的盐酸盐(162mg，93％)。LCMS：(M+H)+：129.1。
部分D：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3S，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法G，在部分A中使用(2S，6S)-1，2，6-三甲基哌嗪盐酸盐代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚烷二氢溴酸盐制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(3S，5S)-3，4，5-三甲基-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：486.1。
实施例243
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(2S)-2-(4-吗啉基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
4-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]吗啉盐酸盐
根据实施例264，部分A至部分C，在部分A中使用市售可得的吗啉代替哌啶制备4-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]吗啉盐酸盐。LCMS：(M+H)+：171.1。
部分B：
4-{[(2S)-1-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-2-吡咯烷基]甲基}吗啉
按照类似于实施例210，部分E和部分F的方法，在部分E中使用4-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]吗啉盐酸盐代替1-{1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙基}吡咯烷盐酸盐制备4-{[(2S)-1-(5-氟-6-肼基-2-甲基-4-嘧啶基)-2-吡咯烷基]甲基}吗啉。LCMS：(M+H)+：508.2。
实施例244
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3-氟-1-氮杂环丁烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902822
根据一般方法D，使用3-氟氮杂环丁烷盐酸盐(Hulin，Bernard；Piotrowski，David W.US 2005256310)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(3-氟-1-氮杂环丁烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+433.0。
实施例245
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用市售可得的(2S)-2-吡咯烷基甲醇代替异丙胺制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：459.1。
实施例246
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2-甲基-1-吡唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902832
部分A：
3-氧代-1-吡唑烷甲酸1，1-二甲基乙基酯
向3-吡唑烷酮盐酸盐(3.84g，31.33mmol)在水(50ml)和二噁烷(10ml)中的混合物中缓慢地加入碳酸钠(6.64g，62.66mmol)，随后加入焦碳酸双(1，1-二甲基乙基)酯的二噁烷溶液(20mL)。将混合物于室温下搅拌1小时。加入水(50ml)，并将混合物用二氯甲烷(2x150mL)萃取。将合并的有机溶液用水(2x50ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到3-氧代-1-吡唑烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(4.00g，68.6％)。LCMS：(M+H)+186.9。
部分B：
2-甲基-3-氧代-1-吡唑烷甲酸1，1-二甲基乙基酯
向3-氧代-1-吡唑烷甲酸1，l-二甲基乙基酯(1.00g，5.37mmol)和碳酸钾(0.89g，6.44mmol)在DMF(10ml)中的混合物中加入碘甲烷(2M的MTBE溶液，3.22ml，6.44mmol)。将反应混合物于室温下搅拌2h。LCMS表明反应完成。将混合物用乙酸乙酯/己烷(1∶1，150ml)稀释，并用水(5x50ml)、盐水(50ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩，得到2-甲基-3-氧代-1-吡唑烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.57g，53.0％)。LCMS：(M+H)+201.0。
部分C：
2-甲基-1-吡唑烷甲酸1，1-二甲基乙基酯
向2-甲基-3-氧代-1-吡唑烷甲酸l，1-二甲基乙基酯(0.98g，4.89mmol)的无水二氯甲烷溶液中加入甲硼烷二甲基硫醚络合物(1.16ml，12.24mmol)。将混合物于室温下搅拌过夜。LCMS表明剩余～40％的原料。加入另一批的甲硼烷二甲基硫醚络合物(0.5ml，5.28mmol)，并继续搅拌过夜。将甲醇滴加到反应混合物中直至停止产生气泡。然后加入水(1ml)，并将混合物回流1小时。冷却至室温后，将混合物真空浓缩至干。将残余物溶于水(30ml)和二氯甲烷(45ml)中，将有机层分离，并将水层用二氯甲烷(45mL)萃取。将合并的有机溶液干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，得到2-甲基-1-吡唑烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.48g，52.7％)。LCMS：(2M+H)+372.9。
部分D：
1-甲基吡唑烷盐酸盐
将2-甲基-1-吡唑烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(0.48g，2.58mmol)在4N HCl的二噁烷溶液(5ml)中的溶液于室温下搅拌过夜。LCMS表明反应完成。真空除去挥发物，得到1-甲基吡唑烷盐酸盐(0.41g，推测为77％纯)，为白色固体。
部分E：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2-甲基-1-吡唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
按照类似于实施例176的方法，在部分C中使用1-甲基吡唑烷盐酸盐代替1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2-甲基-1-吡唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+444.1。
实施例247
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(2-羟基乙基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902851
部分A：
2-[(2S)-2-吡咯烷基]乙醇
根据文献方法(WO9748681，1997)，使用(S)-2-吡咯烷甲醇代替(R)-对映异构体制备2-[(2S)-2-吡咯烷基]乙醇。
部分B：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(2-羟基乙基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用2-[(2S)-2-吡咯烷基]乙醇代替部分A中的吡咯烷制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(2-羟基乙基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：453.1。
实施例248
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(2-羟基乙基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902852
根据一般方法E，在部分A中使用2-[(2S)-2-吡咯烷基]乙醇(实施例247)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(2-羟基乙基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：473.1/475.2。
实施例249
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-((2S)-2-{[(2-羟基乙基)(甲基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902861
按照类似于实施例264的方法，在部分A中使用市售可得的2-(甲氨基)乙醇代替哌啶制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-((2S)-2-{[(2-羟基乙基)(甲基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：517.0。
实施例250
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-({甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
按照类似于实施例264的方法，在部分A中使用市售可得的N-甲基-2-(甲氧基)乙胺代替哌啶制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-({甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：530.1。
实施例251
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(3，3-二氟-1-氮杂环丁烷基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902863
按照类似于实施例176的方法，在部分C中使用3，3-二氟氮杂环丁烷盐酸盐(Carling，William Robert；Mitchinson，Andrew；Russell，Michael GeoffreyNeil；Street，Leslie Joseph.WO 2000047582)代替1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐制备[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(3，3-二氟-1-氮杂环丁烷基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+450.9。
实施例252
[(2R)-3-(2-{6-[(2S)-2-氰基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902871
根据一般方法F，在部分A中使用市售可得的(2S)-2-吡咯烷甲腈盐酸盐代替3-吡咯啉制备[(2R)-3-(2-{6-[(2S0-2-氰基-1-吡咯烷基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：434.1。
实施例253
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-((2S0-2-{[乙基(甲基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902872
按照类似于实施例243的方法，在部分A中使用市售可得的乙基(甲基)胺代替吗啉制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-((2S)-2-{[乙基(甲基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：480.3。
实施例254
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{(2S)-2-[(二乙基氨基)甲基]-1-吡咯烷基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902873
按照类似于实施例243的方法，在部分A中使用市售可得的二乙胺代替吗啉制备{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{(2S)-2-[(二乙基氨基)甲基]-1-吡咯烷基}-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：494.4。
实施例255
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-((2S)-2-{[乙基(甲基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902881
按照类似于实施例197的方法，在部分A中使用市售可得的乙基(甲基)胺代替哌啶制备[(2R)-3-{2-[2-氯-6-((2S)-2-{[乙基(甲基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：500.1。
实施例256
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[(二乙基氨基)甲基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902882
按照类似于实施例264的方法，在部分A中使用市售可得的二乙胺代替哌啶制备[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[(二乙基氨基)甲基]-1-吡咯烷基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：514.0。
实施例257
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2S)-2-氰基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902883
根据一般方法D，使用市售可得的(2S)-2-吡咯烷甲腈盐酸盐代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2S)-2-氰基-1-吡咯烷基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：454.0。
实施例258
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-哌啶基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902891
部分A：
(2S)-2-(羟基甲基)-1-哌啶甲酸苯甲基酯
将(2S)-1-{[(苯基甲基)氧基]羰基}-2-哌啶甲酸(1.0g，3.798mmol)的THF(5mL)溶液冷却至-18℃，并用10分钟时间加入甲硼烷-THF络合物(3.798mL，3.798mmol)。将混合物在搅拌下温热至室温过夜，然后冷却至0℃，并加入水(4mL)，随后加入K2CO3(1.4g)。分离各相，并将水相用Et2O(3x25mL)萃取。将合并的有机相用盐水(1x25mL)洗涤，并经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩，得到(2S)-2-(羟基甲基)-1-哌啶甲酸苯甲基酯(815mg，86％)。LCMS：(M+H)+：250.2。
部分B：
(2S)-2-哌啶甲酸盐酸盐
将(2S)-2-(羟基甲基)-1-哌啶甲酸苯甲基酯(815mg，3.26mmol)溶于MeOH(30mL)和1N HCl(7.19mL，7.19mmol)的混合物中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(225mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过玻璃纤维过滤器过滤来除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的N，N-二甲基-2-(3-吡咯烷基)-2-丙胺盐酸盐(492mg，99％)。LCMS：(M+H)+：116.1
部分C：
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-哌啶基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
按照类似于实施例210，部分E和部分F的方法，在部分E中使用N，N-二甲基-2-(3-吡咯烷基)-2-丙胺盐酸盐代替1-{1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙基}吡咯烷盐酸盐制备[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-哌啶基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：453.3。
实施例259
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2-乙基-1-吡唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺.
部分A：
1-乙基吡唑烷盐酸盐
根据制备1-甲基吡唑烷盐酸盐(实施例246)的所述方法，在部分B中使用碘乙烷代替碘甲烷制备1-乙基吡唑烷盐酸盐。LCMS：(M+H)+102.2。
部分B：
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2-乙基-1-吡唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
按照类似于实施例176的方法，在部分C中使用1-乙基吡唑烷盐酸盐代替1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2-乙基-1-吡唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+458.3。
实施例260
1-{2-氯-6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺
部分A：
N，N-二乙基-1-(苯基甲基)-L-脯氨酰胺
按照类似于实施例210，部分A至部分B的方法，在部分B中使用市售可得的二甲基胺代替吡咯烷制备N，N-二乙基-1-(苯基甲基)-L-脯氨酰胺。LCMS：(M+H)+：261.1。
部分B：
N，N-二乙基-L-脯氨酰胺盐酸盐
将N，N-二乙基-1-(苯基甲基)-L-脯氨酰胺(1.603g，6.156mmol)溶于MeOH(50mL)和1N HCl(14mL，14mmol)的混合物中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(480mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过玻璃纤维过滤器过滤来除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的N，N-二乙基-L-脯氨酰胺盐酸盐(1.658g，＞99％)。LCMS：(M+H)+：171.1。
部分C：
1-{2-氯-6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用N，N-二乙基-L-脯氨酰胺盐酸盐代替异丙胺制备1-{2-氯-6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺。LCMS：(M+H)+：528.3。
实施例261
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R，5R)-5-乙基-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902911
部分A：
(2R，5R)-2-乙基-1，5-二甲基-4-(苯基甲基)哌嗪
在0℃下，向(2R，5R)-5-乙基-2-甲基-1-(苯基甲基)哌嗪(根据J.Med.Chem.2006，49，716-726中所述的方法，使用Boc-D-2-氨基丁酸代替N-Boc-L-丙氨酸制备)(902mg，4.13mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液中加入甲醛(0.435mL，37％的水溶液，5.78mmol)，随后加入三乙酰氧基硼氢化钠(1050mg，4.96mmol)。将反应混合物温热至室温，并搅拌2h，随后用二氯甲烷稀释，并用1N NaOH溶液洗涤。将有机物用盐水洗涤，干燥(MgSO4)并蒸发，得到(2R，5R)-2-乙基-1，5-二甲基-4-(苯基甲基)哌嗪(875mg，91％)。LCMS：(M+H)+：233.3。
部分B：
(2R，5R)-2-乙基-1，5-二甲基哌嗪盐酸盐
将(2R，5R)-2-乙基-1，5-二甲基-4-(苯基甲基)哌嗪(873mg，3.76mmol)溶于50mL的MeOH中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(175mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置大约3小时。然后将内容物除气，并通过Celite硅藻土过滤，并将Celite硅藻土填料(pad)用DCM和MeOH洗涤。加入7.9mL 1N HCl后，将生成的滤液真空浓缩，得到(2R，5R)-2-乙基-1，5-二甲基哌嗪的盐酸盐(800mg，100％)。LCMS：(M+H)+：143.1。
部分C：
N-[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R，5R)-5-乙基-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法G，在部分A中使用(2R，5R)-2-乙基-1，5-二甲基哌嗪盐酸盐代替(1S，4S)-2-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2，1]庚烷二氢溴酸盐制备N-[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R，5R)-5-乙基-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：500.3。
实施例262
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R，5R)-5-乙基-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺
根据一般方法A，使用(2R，5R)-2-乙基-1，5-二甲基哌嗪盐酸盐(实施例261)代替部分A中的吡咯烷，并使用3当量的DIPEA制备N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(2R，5R)-5-乙基-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：480.1。
实施例263
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(3-甲基-1-氮杂环丁烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺.
按照类似于实施例182的方法，在部分A中使用3-甲基氮杂环丁烷盐酸盐(Journal of Heterocyclic Chemistry，1971，8，961-6)代替1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(3-甲基-1-氮杂环丁烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+409.1。
实施例264
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(1-哌啶基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902932
部分A：
(2S)-1-(苯基甲基)-2-(1-吡咯烷基羰基)吡咯烷
将1-(苯基甲基)-L-脯氨酸盐酸盐(2.0g，8.247mmol)和HOBt(1.34g，9.928mmol)溶于CH2Cl2(50mL)中，并将4-甲基吗啉(2.72mL，24.822mmol)、哌啶(0.981mL，9.929mmol)和EDCI(1.906g，9.928mmol)加入到该溶液中。搅拌过夜后，将该溶液用水(50mL)洗涤，并将水层用CH2Cl2(3x50mL)萃取。将合并的有机层经无水MgSO4干燥并真空浓缩，得到(2S)-1-(苯基甲基)-2-(1-吡咯烷基羰基)哌啶(0.901g，40％)。LCMS：(M+H)+：273.1。
部分B：
1-{[(2S)-1-(苯基甲基)-2-吡咯烷基]甲基}哌啶
将(2S)-1-(苯基甲基)-2-(1-吡咯烷基羰基)哌啶(901mg，3.307mmol)溶于20mL的THF中，冷却至0℃，并然后分批加入LiAlH4(251mg，6.615mmol)。将混合物于80℃加热2h，然后冷却至RT。将该反应连续用H2O(0.300mL)、15％的NaOH水溶液(0.300mL)和H2O(0.900mL)终止，并在室温下搅拌过夜。将内容物过滤，并将滤液真空浓缩，得到1-{[(2S)-1-(苯基甲基)-2-吡咯烷基]甲基}哌啶(710mg，83％)。
部分C：
1-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]哌啶盐酸盐
将1-{[(2S)-1-(苯基甲基)-2-吡咯烷基]甲基}哌啶(710mg，2.747mmol)溶于MeOH(20mL)和1N HCl(6mL，6.044mmol)的混合物中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(213mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过玻璃纤维过滤器过滤来除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的1-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]哌啶盐酸盐(692mg，＞99％)。LCMS：(M+H)+：169.2。
部分D：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(1-哌啶基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用1-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]哌啶盐酸盐代替异丙胺制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(1-哌啶基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：581.4。
实施例265
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(2-甲基-1-氮杂环丁烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153902951
按照类似于实施例182的方法，在部分A中使用2-甲基氮杂环丁烷盐酸盐(J.Org.Chem.1961，26，138-144)代替1-(3-甲基-3-氮杂环丁烷基)吡咯烷二盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(2-甲基-1-氮杂环丁烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺，为非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+409.2。
实施例266
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2-甲基-1-氮杂环丁烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(非对映异构体的混合物)
Figure BPA00001182153902952
根据一般方法D，使用2-甲基氮杂环丁烷盐酸盐(J.Org.Chem.1961，26，138-144)代替部分A中的N-甲基哌嗪制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(2-甲基-1-氮杂环丁烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为非对映异构体的混合物。LCMS：(M+H)+429.1。
实施例267
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[(二甲基氨基)甲基]-1-哌啶基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
(2S)-2-[(二甲基氨基)羰基]-1-哌啶甲酸苯甲基酯
将(2S)-1-{[(苯基甲基)氧基]羰基}-2-哌啶甲酸(2.0g，7.595mmol)和HOBt(1.231g，9.114mmol)溶于CH2Cl2(40mL)中，并加入4-甲基吗啉(2.5mL，22.78mmol)、2.0M二甲基胺的THF溶液(4.55mL，9.114mmol)和EDCI(1.750g，9.114mmol)。将该溶液搅拌过夜，并然后用1N HCl(25mL)洗涤，并将水层用CH2Cl2(3x25mL)萃取。将合并的有机层经无水MgSO4干燥并真空浓缩。将该粗产物通过快速色谱法(Combiflash，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到(2S)-2-[(二甲基氨基)羰基]-1-哌啶甲酸苯甲基酯(1.919g，87％)。LCMS：(M+H)+：291.1。
部分B：
(2S)-N，N-二甲基-2-哌啶甲酰胺盐酸盐
将(2S)-2-[(二甲基氨基)羰基]-1-哌啶甲酸苯甲基酯(1.918g，6.609mmol)溶于MeOH(40mL)和1N HCl(14.53mL，14.53mmol)的混合物中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(575mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过玻璃纤维过滤器过滤来除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的(2S)-N，N-二甲基-2-哌啶甲酰胺盐酸盐(1.483g，＞99％)。LCMS：(M+H)+：157.2。
部分C：
(2S)-N，N-二甲基-1-(苯基羰基)-2-哌啶甲酰胺
将(2S)-N，N-二甲基-2-哌啶甲酰胺盐酸盐(880mg，4.567mmol)溶于CH2Cl2(15mL)和水(15mL)的混合物中，并然后加入固体碳酸氢钠(1.534g，18.268mmol)，随后加入苯甲酰氯(0.556mL，4.795mmol)。搅拌过夜后，分离各相，并将水相用CH2Cl2(3x50mL)萃取。将合并的有机相经无水MgSO4干燥，过滤，并真空浓缩。将该粗产物通过快速色谱法(Combiflash，0-10％甲醇/二氯甲烷)纯化，得到(2S)-N，N-二甲基-1-(苯基羰基)-2-哌啶甲酰胺(883mg，74％)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分D：
N，N-二甲基-1-[(2S)-1-(苯基甲基)-2-哌啶基]甲胺
将(2S)-N，N-二甲基-1-(苯基羰基)-2-哌啶甲酰胺(883mg，3.396mmol)溶于20mL的THF中，冷却至0℃，并然后分批加入LiAlH4(1.386mg，36.54mmol)。将混合物于80℃加热2h，然后冷却至RT。将该反应依次用H2O(1.0mL)、15％的NaOH水溶液(1.0mL)和H2O(3.0mL)终止，并在室温下搅拌过夜。将内容物过滤，并将滤液真空浓缩，得到N，N-二甲基-1-[(2S)-1-(苯基甲基)-2-哌啶基]甲胺(590mg，75％)。LCMS：(M+H)+：233.1。
部分E：
N，N-二甲基-1-[(2S)-2-哌啶基]甲胺盐酸盐
将N，N-二甲基-1-[(2S)-1-(苯基甲基)-2-哌啶基]甲胺(590mg，2.539mmol)溶于MeOH(20mL)和1N HCl(5.5mL，5.5mmol)的混合物中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(117mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过玻璃纤维过滤器过滤来除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的N，N-二甲基-1-[(2S)-2-哌啶基]甲胺盐酸盐(425mg，78％)。LCMS：(M+H)+：未检测。
部分F：
[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[(二甲基氨基)甲基]-1-哌啶基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用N，N-二甲基-1-[(2S)-2-哌啶基]甲胺盐酸盐代替异丙胺制备[(2R)-3-[2-(2-氯-6-{(2S)-2-[(二甲基氨基)甲基]-1-哌啶基}-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：501.1。
实施例268
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-苯基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用(S)-降烟碱(J.Org.Chem.2001，66，6305-6312)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-苯基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：506.2/508.2。
实施例269
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-((2S)-2-{[甲基(1-甲基乙基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902981
按照类似于实施例264的方法，在部分A中使用市售可得的甲基(1-甲基乙基)胺代替哌啶制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-((2S)-2-{[甲基(1-甲基乙基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：514.3。
实施例270
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-((2S)-2-{[甲基(1-甲基乙基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902982
按照类似于实施例243的方法，在部分A中使用市售可得的甲基(1-甲基乙基)胺代替吗啉制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-((2S)-2-{[甲基(1-甲基乙基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：494.2。
实施例271
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-((2S)-2-{[甲基(丙基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902983
按照类似于实施例243的方法，在部分A中使用市售可得的N-甲基-1-丙胺代替吗啉制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-((2S)-2-{[甲基(丙基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：494.4。
实施例272
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-((2S)-2-{[甲基(丙基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902991
按照类似于实施例264的方法，在部分A中使用市售可得的N-甲基-1-丙胺代替哌啶制备[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-((2S)-2-{[甲基(丙基)氨基]甲基}-1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：514.3。
实施例273
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153902992
部分A：
4-甲基-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-1-哌嗪胺
将市售可得的1，3-噻唑-2-甲醛(0.388mL，4.42mmol)和市售可得的4-甲基-1-哌嗪胺(0.532mL，4.42mmol)溶于MeOH(20mL)中，并冷却至0℃。然后加入甲基橙指示剂和足量的4M HCl的二噁烷溶液以保持反应混合物为酸性，并为浅的略带桃红色。然后加入氰基硼氢化钠(0.555g，8.84mmol)，并将该反应搅拌。将反应混合物蒸发，得到粗的4-甲基-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-1-哌嗪胺，为米黄色固体(2.2168g)。LCMS：(M+H)+＝213.0。
部分B：
2-{2-氯-5-氟-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯
将4-甲基-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-1-哌嗪胺(2.2169g，10.44mmol)溶于THF(30mL)和三乙胺(4.37ml，31.3mmol)中。然后加入2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(3.89g，7.83mmol)和DMSO(5mL)。将该反应搅拌过夜。然后蒸除THF，并将混合物用水稀释。将水层用乙酸乙酯萃取，并将有机物干燥(Na2SO4)并蒸发。通过硅胶色谱法和RP-HPLC纯化，得到2-{2-氯-5-氟-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.2014g，3％)。LCMS：(M+H)+＝674.6。
部分C：
2-氯-5-氟-6-肼基-N-(4-甲基-1-哌嗪基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺
在氮气氛下，将2-{2-氯-5-氟-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}-1，1，2-肼三甲酸三(1，1-二甲基乙基)酯(0.2014g，0.299mmol)溶于DCM(20mL)中。然后加入2M HCl(2.99mL，5.98mmol)，并将该反应搅拌过夜。将反应混合物蒸发，得到粗的2-氯-5-氟-6-肼基-N-(4-甲基-1-哌嗪基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺，为黄色固体(0.1683g)。LCMS：(M+H)+＝373.0。
部分D：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺
将(2R)-4-乙基-2-{[甲酰基(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)氨基]甲基}庚酸(0.3764g，1.257mmol)、2-氯-5-氟-6-肼基-N-(4-甲基-1-哌嗪基)-N-(1，3-噻唑-2-基甲基)-4-嘧啶胺(0.1683g)、NMM(0.298mL，2.71mmol)、HOAt(0.074g，0.542mmol)和EDC(0.104g，0.542mmol)溶于DMF(10mL)中。将该反应搅拌过夜。通过RP-HPLC纯化得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺，为褐色油状固体(0.1688g)。LCMS：(M+H)+＝655.4。
部分E：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
将[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基](四氢-2H-吡喃-2-基氧基)甲酰胺(0.1688g，0.258mmol)溶于水(2mL)和乙酸(8mL)中。将该反应搅拌过夜。通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(4-甲基-1-哌嗪基)(1，3-噻唑-2-基甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，为米色固体(0.0483g，25％)。LCMS：(M+H)+＝571.2。
实施例274
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153903011
部分A：
(2S)-2-({[2-氯-5-(二羟基氨基)-4-嘧啶基]氨基}甲基)-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯
将2，4-二氯-5-(二羟基氨基)嘧啶(2.5g，12.75mmol)、(2S)-2-(氨基甲基)-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.277g，6.38mmol)和DIEA(1.114mL，6.38mmol)溶于DCM(75mL)中。将混合物搅拌1h，当通过LCMS确定该反应完成时，将该溶液真空浓缩。将该粗产物通过快速色谱法(Combiflash，0-100％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到(2S)-2-({[2-氯-5-(二羟基氨基)-4-嘧啶基]氨基}甲基)-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.6362g，71％)。LCMS：(M+H)+：357.8。
部分R：
(2S)-2-{[(5-氨基-4-嘧啶基)氨基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯
将(2S)-2-({[2-氯-5-(二羟基氨基)-4-嘧啶基]氨基}甲基)-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(2.064g，5.74mmol)溶于MeOH(40mL)中，除气，并置于氩气下。加入10％Pd/C(619mg)，并将内容物彻底地除气，并在氢气球下放置2h。然后将内容物除气，并通过玻璃纤维过滤器过滤来除去Pd/C，用MeOH洗涤。将滤液真空浓缩，得到纯的(2S)-2-{[(5-氨基-4-嘧啶基)氨基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.589g，94％)。LCMS：(M+H)+：294.1。
部分C：
(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯
将(2S)-2-{[(5-氨基-4-嘧啶基)氨基]甲基}-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.6633g，5.67mmol)和亚硝酸钠(469mg，6.80mmol)溶于乙酸(5mL)和水(8mL)的混合物中，并将混合物剧烈搅拌1小时。将该溶液真空浓缩，得到(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.98g，＞99％)。LCMS：(M+H)+：305.2。
部分D：
3-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶
将(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-1-吡咯烷甲酸1，1-二甲基乙基酯(1.98g，6.54mmol)溶于CH2Cl2(10mL)和TFA(2.5mL)的混合物中，并在室温下搅拌过夜。当通过LCMS确定该反应完成时，将该溶液真空浓缩，并将残余物溶于CH2Cl2(5mL)中，并用1N的NaOH水溶液(30mL)洗涤。将水层用CH2Cl2(3x20mL)萃取。将合并的有机层经无水MgSO4干燥并真空浓缩，得到3-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(758mg，57％)。LCMS：(M+H)+：205.1。
部分E：
2，4-二氯-5-氟-6-肼基嘧啶
向肼一水合物(289μL，5.96mmol)和三乙胺(830μl，5.96mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中加入2，4，6-三氯-5-氟嘧啶(1.0g，4.96mmol)的MeOH(15mL)溶液，并将混合物搅拌过夜。当通过LCMS确定该反应完成时，将该溶液真空浓缩，并将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到2，4-二氯-5-氟-6-肼基嘧啶(358mg，32％)。LCMS：(M+H)+：196.9。
部分F：
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}[(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将2，4-二氯-5-氟-6-肼基嘧啶(358mg 1.817mmo1)、(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(746mg，1.508mmol)和HOAt(247mg，1.817mmol)溶于15mL的DMF中。加入NMM(0.798mL，7.27mmol)，随后加入EDC(348mg，1.817mmol)。在室温下搅拌过夜后，将反应混合物通过RP-HPLC纯化，得到{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}[(苯基甲基)氧基]甲酰胺(442mg，50％)。LCMS：(M+H)+：483.6。
部分G：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺
将{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(2，6-二氯-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}[(苯基甲基)氧基]甲酰胺(136mg，0.278mmol)和3-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶(63mg，0.308mmol)溶于DMSO(5mL)中，然后加入DIEA(59μL，0.308mmol)，并将该溶液于65℃加热过夜。当通过LCMS确定该反应完成时，将该溶液真空浓缩，并将生成的粗产物通过RP-HPLC纯化，得到[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺(43mg，21％)。LCMS：(M+H)+：651.6。
部分H：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，部分D，在部分D中使用[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺代替[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基][(苯基甲基)氧基]甲酰胺制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-3-基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：562.2。
实施例275
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺
按照类似于实施例210，部分E和部分F的方法，在部分E中使用4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛烷二盐酸盐(实施例172)代替1-{1-[(2S)-2-吡咯烷基]环丙基}吡咯烷盐酸盐制备((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-甲基-4，7-二氮杂螺[2.5]辛-7-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：463.8。
实施例276
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环丁基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153903042
部分A：
(2R)-3-环丁基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸
按照类似于制备中间体A的方法，在部分A中使用溴代甲基环丁烷代替3-环戊基丙酰氯制备(2R)-3-环丁基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸。
部分B：
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环丁基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
按照类似于实施例63的方法，在部分F中使用(2R)-3-环丁基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸代替(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸制备[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环丁基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：457.6。
实施例277
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环丁基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
Figure BPA00001182153903051
按照类似于实施例64的方法，在部分F中使用(2R)-3-环丁基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸(实施例281)代替(2R)-3-环戊基-2-({甲酰基[(苯基甲基)氧基]氨基}甲基)丙酸制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环丁基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：465.8。
实施例278
((3S)-1-{2-氯-6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-3-吡咯烷基)氨基甲酸甲酯
部分A：
(3S)-3-{[(甲氧基)羰基]氨基}-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯
将碳酸氢钠(2.073g，24.68mmol)溶于水(20.00mL)和DCM(20mL)的混合物中，并加入(3S)-3-氨基-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(2.88g，11.22mmol)，随后加入氯甲酸甲酯(0.953mL，12.34mmol)。将该混合物搅拌6h。然后将两相混合物分离，并将水相用DCM萃取一次。将合并的有机物经硫酸钠干燥，过滤并蒸发。然后将残余物通过硅胶色谱法(0-100％EtoAc的己烷溶液)纯化，得到(3S)-3-{[(甲氧基)羰基]氨基}-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(2g，64％)，为透明的油状物。LCMS：(M+H)+：278.9。
部分B：
(3S)-3-吡咯烷基氨基甲酸甲酯
将(3S)-3-{[(甲氧基)羰基]氨基}-1-吡咯烷甲酸苯甲基酯(2.00g，7.19mmol)溶于除气的甲醇(20mL)中，并加入Pd/C(0.4g，0.376mmol)。将反应器抽真空，并通过气球用氢气将反应器再填充。将该反应搅拌2h，随后通过Celite硅藻土过滤除去催化剂。蒸发溶剂，得到(3S)-3-吡咯烷基氨基甲酸甲酯(0.99g，76％)，为透明油状物。
部分C：
((3S)-1-{2-氯-6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-3-吡咯烷基)氨基甲酸甲酯
根据一般方法E，在部分A中使用(3S)-3-吡咯烷基氨基甲酸甲酯代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂制备((3S)-1-{2-氯-6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-3-吡咯烷基)氨基甲酸甲酯。LCMS：(M+H)+：502.2/504.1。
实施例279
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
部分A：
3-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶按照类似于实施例279，部分A至部分D的方法，在部分A中使用市售可得的2-氯-3-(二羟基氨基)吡啶代替2，4-二氯-5-(二羟基氨基)嘧啶制备3-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶。LCMS：(M+H)+：204.1。
部分B：
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用3-[(2S)-2-吡咯烷基甲基]-3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶代替异丙胺制备[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2S)-2-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶-3-基甲基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：561.2。
实施例280
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(2-呋喃基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用[2-(2-呋喃基)乙基]胺(WO9611210，1996)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂制备[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(2-呋喃基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：469.2/471.1。
实施例281
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-呋喃基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺
根据一般方法E，在部分A中使用[2-(3-呋喃基)乙基]胺(WO9611210，1996)代替异丙胺，在部分B中使用含有DCM的2.0M HCl的乙醚溶液作为溶剂制备[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{[2-(3-呋喃基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。LCMS：(M+H)+：469.2/471.1。
多晶型实施例
实施例1P
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1
多晶型1通过下面的实施例24，部分L的另一种方法的一般方法制备。
另一种方法
将乙酸乙酯(0.5mL)加入到结晶的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(多晶型1，30.8mg)中。将生成的淤浆由0-40℃用～48小时进行温度-循环16次。此时，淤浆中的固体为乙酸乙酯溶剂合物。在室温下将生成的固体和上清液通过过滤分离。将该固体在实验室环境条件下真空干燥1小时，将该溶剂合物去溶剂化得到多晶型1。
实施例2P
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2
将5.3mg的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(多晶型1)在500uL的水中浆化。将该样品使用热风器温和地加热以增加溶解度，但固体永不完全溶解。将该固体在实验室环境条件下真空干燥，并将生成的固体进行特征分析，发现其为多晶型2。
另一种方法
向反应器中加入[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(多晶型1，1.0eq)和水(20体积)。将悬浮液在T＝20℃下搅拌～60小时。将悬浮液过滤并用2.5体积水洗涤两次。将该物质在T＝60℃下减压干燥，并将其磨细(Quadro Comil，不锈钢，筛目大小：1mm)，得到[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2，为白色固体。
实施例3P
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型3
将1-丙醇(0.5mL)加入到结晶的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺(多晶型1，30.8mg)中。将生成的淤浆由0-40℃用～48小时的时间进行温度-循环16次。在室温下将生成的固体和上清液通过过滤分离。将该固体在实验室环境条件下真空干燥1小时。将生成的固体进行特征分析，发现其为多晶型3。
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]噁嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型的分析
将多晶型1和多晶型2通过FT-IR、FT-拉曼、XRPD、DSC和TGA进行分析。多晶型3通过FT-拉曼、XRPD、DSC和TGA进行分析。用于分析的样品通过本领域的标准方法在环境条件下制备。通常，将1-5mg的无水多晶型1、多晶型2或多晶型3置于仪器/样品架上。使用下面的仪器和参数。
FT-IR
仪器：Thermo Magna MidIR System
关键性运行参数：
样品扫描数：64
分辨率：4.000cm-1
填零的标准(Levels of zero filling)：2
变迹法(Apodization)：Happ-Genzel
相位校正：Mertz
背景扫描数：64
检测器：DTGS
分光镜：KBr
进样配件(Sampling Accessory)：Thermo Smart DuraScope ATR，diamondATR element
FT-拉曼
仪器：Thermo FT-拉曼System 960 Spectrometer
关键性运行参数：
检测器：Liquid Nitrogen-Cooled Germanium
分光镜：CaF2
样品扫描数：64
分辨率：4.0cm-1
填零的标准(Levels of zero filling)：2
变迹法(Apodization)：Happ-Genzel
相位校正：功率谱图(Power spectrum)
拉曼激光频率：9393.6416cm-1
XRPD
仪器：Bruker AXS PXRD General Area Detector Diffraction System
关键性运行参数：
扫描范围：3-42°2θ
发生器功率：40kV，40mA
放射源：Cu Ka
扫描类型：偶合扫描(Coupled scan)
帧数：3帧
每帧时间：5min
样品振幅：0.1-0.5mm振幅，取决于样品尺寸
检测器距离：25cm
滤色器/单色仪：Single Goebel Mirror
检测器类型：General Area Detector Diffraction
热分析
仪器：TA Instruments Thermal Analysis System(TA仪器热分析系统)，型号DSC Q100
关键性运行参数：
模型-DSC Standard Cell FC
方法-直线上升(Ramp)
盘(Pan)：封闭铝材料(Closed aluminum)
吹扫气体：N2，40mL/min
Cell# FC-00615
方法1：在30.00℃保持平衡
2：以15.00℃/min直线上升至350.00℃
仪器：TA Instruments Thermal Analysis System(TA仪器热分析系统，型号TGA Q500
关键性运行参数：
方法-直线上升(Ramp)
吹扫气体：N2，40mL/min
平衡气体：N2，40mL/min
方法1：以15.00℃/min直线上升至300.00℃

Claims (22)

1.式(I)化合物或其盐：
Figure FSB00000746420200011
其中
R1选自：C2-C7烷基和-(CH2)n-C3-C6环烷基；
R2选自：C1-C3烷基；环丙基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3烷硫基；5-元杂芳基；5-元杂环烃基；卤素；羟基甲基；和-NRaRb；
R3选自：-NR4R5；卤素；苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；和杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R4选自：H；C1-C6烷基，其任选被一个或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；
R5选自：H；C1-C6烷基，其任选被一个或两个R7基团所取代；C1-C6烷氧基；C3-C6环烷基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂环烃基，其任选被一至三个R6基团所取代；杂芳基，其任选被一至三个R6基团所取代；和苯基，其任选被一至三个R6基团所取代；
或者R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成任选被一至三个R6基团所取代的杂环烃基；
每个R6独立地选自：C1-C6烷基，其任选被一至三个R7基团所取代；羟基；C1-C3烷氧基；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；-C(O)ORc；杂环烃基；C3-C6环烷基，其任选被一个-NRaRb或吡咯烷基所取代；氧代基；氰基；-NRaRb；苯基；杂芳基；和卤素；
每个R7独立地选自：羟基；C1-C3烷氧基；卤素；苯基；氰基；-NRaRb；-C(O)NRaRb；-C(O)Rc；C3-C6环烷基，其任选被一个羟基、杂环烃基或-NRaRb基团所取代；杂环烃基；和杂芳基，其任选被一个甲基、NRaRb或羟基所取代；
每个Ra各自独立地选自：H以及任选被一个羟基、甲氧基或二甲基胺所取代的C1-C3烷基；
每个Rb独立地选自：H和C1-C3烷基；
每个Rc独立地选自：任选被一个甲氧基所取代的C1-C3烷基；苯基；杂环烃基；以及杂芳基；和
n为0-2的整数，
其中″杂芳基″是指在环中含有1-5个，合适地含有1-4个，更合适地含有1或2个杂原子作为成员原子的芳环；含有多于一个杂原子的杂芳基可以含有不同的杂原子；杂芳基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代；杂芳基是单环体系或是稠合的双环体系；单环杂芳基环具有5-6个成员原子；双环杂芳基环具有8-10个成员原子；双环杂芳基环包括那些环，其中主要的杂芳基和次要的单环环烷基、环烯基、杂环烃基、芳基或杂芳基环连接形成稠合的双环体系；杂芳基包括吡咯基、吡唑基、咪唑基、
Figure FSB00000746420200021
唑基、异
Figure FSB00000746420200022
唑基、
Figure FSB00000746420200023
二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、呋喃基、呋咱基、噻吩基、三唑基、吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、四嗪基、四唑基、吲哚基、异吲哚基、中氮茚基、吲唑基、嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、蝶啶基、噌啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、苯并
Figure FSB00000746420200024
唑基、苯并异唑基、苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并噻吩基、呋喃并吡啶基、萘啶基、吡唑并吡啶基、吡唑并嘧啶基、3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶基和3H-[1，2，3]三唑并[4，5-b]吡啶基；
″杂原子″是指氮、硫或氧原子；
″杂环烃基″是指在环中含有1-4个杂原子作为成员原子的饱和或不饱和环；杂环烃基环不是芳香性的；含有多于一个杂原子的杂环烃基可以含有不同的杂原子；杂环烃基可以任选被在此所定义的一个或多个取代基取代；杂环烃基是单环体系或稠合、螺环或桥连双环体系；单环杂环烃基环具有4-7个成员原子；双环杂环烃基环具有7-11个成员原子；在某些实施方案中，杂环烃基是饱和的；在其它实施方案中，杂环烃基是不饱和的但不是芳香性的；杂环烃基包括吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、吡喃基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢噻吩基、吡唑烷基、
Figure FSB00000746420200026
唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、高哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、1-吡唑烷基、氮杂
Figure FSB00000746420200027
基、1，3-二
Figure FSB00000746420200028
烷基、1，4-二烷基、1，3-氧硫杂环戊烷基、1，3-二噻烷基、氮杂环丁烷基、异
Figure FSB00000746420200032
唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、氮杂二环[3.2.1]辛基、氮杂二环[3.3.1]壬基、氮杂二环[4.3.0]壬基、2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚基、八氢吡咯并[1，2-a]吡嗪基、八氢吡嗪并[2，1-c][1，4]
Figure FSB00000746420200033
嗪基、氧杂二环[2.2.1]庚基、六氢-1H-氮杂
Figure FSB00000746420200034
基、2，3，4，7-四氢-1H-氮杂
Figure FSB00000746420200035
基、四氢-5H-[1，3]二氧杂环戊烯并[4，5-c]吡咯基、四氢-1H-呋喃并[3，4-c]吡咯-(3H)-基、六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢吡嗪并[1，2-a]氮杂
Figure FSB00000746420200036
-(1H)-基、六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-(1H)-基、六氢吡咯并[3，4-c]吡咯-(1H)-基、10-氧杂-4-氮杂三环[5.2.1.02，6]癸基、八氢-1(2H)-喹喔啉基；八氢-1H-环戊二烯并[b]吡嗪基、六氢呋喃并[3，4-b]吡嗪-(2H)-基、八氢-6H-吡咯并[3，4-b]吡啶基、4，7-二氮杂螺[2.5]辛基和5-氮杂螺[2.4]庚基。
2.根据权利要求1的化合物或其盐，其中R1为-(CH2)n-C3-C6环烷基。
3.根据权利要求1的化合物或其盐，其中R2为C1-C3烷基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3烷硫基；或卤素。
4.根据权利要求2的化合物或其盐，其中R2为C1-C3烷基；C1-C3烷氧基；C1-C3卤代烷基；C1-C3烷硫基；或卤素。
5.根据权利要求1-4中任一项的化合物或其盐，其中R3为-NR4R5。
6.根据权利要求5的化合物或其盐，其中R3为-NR4R5，并且R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成任选被一至三个R6基团所取代的杂环烃基。
7.根据权利要求6的化合物或其盐，其中R3为-NR4R5，并且R4和R5与同它们相连的N-原子结合到一起形成氮杂环丁烷基；吡咯烷基；哌嗪基；吗啉基；2，5-二氢-1H-吡咯基；六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-(1H)-基；异
Figure FSB00000746420200039
唑烷基；六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-(1H)-基；或2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚基，其中每个基团可任选被一至三个R6基团所取代。
8.根据权利要求1-7中任一项的化合物或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求1的化合物或其盐，所述化合物为
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1-吡咯烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[甲基(甲氧基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(2，5-二氢-1H-吡咯-1-基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-甲基-6-(1，3-噻唑烷-3-基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[3-(甲氧基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3R)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(3S)-3-(甲氧基)-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-2-甲基-6-[(1-甲基乙基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(5-氟-2-甲基-6-{甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[乙基(甲基)氨基]-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(2S)-2-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(环丁基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(环戊基氨基)-5-氟-2-甲基-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(3R)-3-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(3S)-3-(羟基甲基)-1-吡咯烷基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(2-异
Figure FSB00000746420200052
唑烷基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(3S)-3-羟基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[(3R)-3-羟基-1-吡咯烷基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(环丙基氨基)-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-5-氟-6-(甲氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[2-乙基-6-(乙氨基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{2-乙基-5-氟-6-[4-(1-甲基乙基)-1-哌嗪基]-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
1-(6-{2-[(2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基]肼基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺；
N-{(2R)-2-(环戊基甲基)-3-[2-(6-{[2-(二甲基氨基)乙基](甲基)氨基}-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基)肼基]-3-氧代丙基}-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
N-[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-2-乙基-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]-N-羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(4-甲基-1-哌嗪基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(乙氨基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-(甲氨基)-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3S)-3-羟基-1-吡咯烷基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(二甲基氨基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-2-(甲硫基)-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-{[2-(甲氧基)乙基]氨基}-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
1-[6-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[5-氟-6-[(3R)-3-羟基-1-吡咯烷基]-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-[(3R)-3-(二甲基氨基)-1-吡咯烷基]-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
((2R)-2-(环戊基甲基)-3-{2-[6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-2-(甲硫基)-4-嘧啶基]肼基}-3-氧代丙基)羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(4-吗啉基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[6-(1-氮杂环丁烷基)-2-氯-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-{2-[2-氯-6-(4-乙基-1-哌嗪基)-5-氟-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(2-羟基乙基)(甲基)氨基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[3-(甲氧基)-1-氮杂环丁烷基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-[2-(2-氯-5-氟-6-{甲基[2-(甲氧基)乙基]氨基}-4-嘧啶基)肼基]-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(8aS)-六氢吡咯并[1，2-a]吡嗪-2(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(1S，4S)-5-甲基-2，5-二氮杂二环[2.2.1]庚-2-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
1-{6-氯-2-[2-((2R)-3-环戊基-2-{[甲酰基(羟基)氨基]甲基}丙酰基)肼基]-5-氟-4-嘧啶基}-N，N-二甲基-L-脯氨酰胺；
[(2R)-3-{2-[2-氯-5-氟-6-(丙氨基)-4-嘧啶基]肼基}-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3S)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(3R)-3，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2S)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；
[(2R)-3-(2-{2-氯-6-[(2R)-2，4-二甲基-1-哌嗪基]-5-氟-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺；和
[(2R)-3-(2-{2-氯-5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]
Figure FSB00000746420200071
嗪-8(1H)-基]-4-嘧啶基}肼基)-2-(环戊基甲基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺。
10.下式的[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]
Figure FSB00000746420200081
嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺，或其药学上可接受的盐
Figure FSB00000746420200082
11.[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]
Figure FSB00000746420200083
嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1，其具有至少一个基本上如下所示的谱图：图1的FT-IR谱图、图3的FT-拉曼光谱、图6的X-射线粉末衍射图、图9的DSC热分析图以及图12的痕量TGA图。
12.[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]
Figure FSB00000746420200084
嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型1，其中所述多晶型的特征在于X-射线衍射图包括以2θ角表示的在选自下列的四个或更多位置上的峰：4.1+/-0.1、6.1+/-0.1、6.9+/-0.1、8.1+/-0.1、9.5+/-0.1、11.2+/-0.1、12.9+/-0.1、13.8+/-0.1、15.6+/-0.1和18.3+/-0.1度。
13.[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2，其具有至少一个基本上如下所示的谱图：图2的FT-IR谱图、图4的FT-拉曼光谱、图7的X-射线粉末衍射图、图10的DSC热分析图以及图13的痕量TGA图。
14.[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]
Figure FSB00000746420200086
嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型2，其中所述多晶型的特征在于X-射线衍射图包括以2θ角表示的在选自下列的四个或更多位置上的峰：7.8+/-0.1°、9.5+/-0.1°、12.3+/-0.1°、13.2+/-0.1°、15.6+/-0.1°、18.3+/-0.1°、19.0+/-0.1°、20.6+/-0.1°、21.4+/-0.1°和26.7+/-0.1°。
15.[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]
Figure FSB00000746420200087
嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型3，其具有至少一个基本上如下所示的谱图：图5的FT-拉曼光谱、图8的X-射线粉末衍射图、图11的DSC热分析图以及图14的痕量TGA图。
16.[(2R)-2-(环戊基甲基)-3-(2-{5-氟-6-[(9aS)-六氢吡嗪并[2，1-c][1，4]
Figure FSB00000746420200088
嗪-8(1H)-基]-2-甲基-4-嘧啶基}肼基)-3-氧代丙基]羟基甲酰胺的多晶型3，其中所述多晶型的特征在于X-射线衍射图包括以2θ角表示的在选自下列的四个或更多位置上的峰：6.1+/-0.1°、7.5+/-0.1°、8.2+/-0.1°、9.1+/-0.1°、12.0+/-0.1°、12.8+/-0.1°、13.4+/-0.1°、16.0+/-0.1°、23.3+/-0.1°和27.6+/-0.1°。
17.药物组合物，其包括权利要求1-16中任一项所限定的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
18.权利要求1-16中任一项所限定的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。
19.权利要求1-16中任一项所限定的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗细菌感染。
20.权利要求1-16中任一项所限定的式(I)化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗细菌感染的药物中的用途。
21.根据权利要求19或20的用途，其中所述细菌感染是由链球菌属(Streptococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、莫拉菌属(Moraxella)、嗜血杆菌属(Haemophilus)、奈瑟氏菌属(Neisseria)、枝原体属(Mycoplasma)、军团菌属(Legionella)、衣原体属(Chlamydia)、拟杆菌属(Bacteroides)、梭菌属(Clostridium)、梭杆菌属(Fusobacterium)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)或消化链球菌属(Peptostreptococcus)引起的。
22.根据权利要求21的用途，其中所述细菌感染是耳朵感染、鼻窦炎、上呼吸道感染、下呼吸道感染、生殖器感染、皮肤和软组织感染或细菌性心内膜炎。
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