CN101880259A - 一种石杉碱甲的提纯方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种易于工业化生产的石杉碱甲的提纯方法，生产工艺步骤是：原料粉碎→酸水加热提取→膜过滤除杂浓缩→氨化氯仿萃取浓缩→中压氧化铝柱层析→氯仿甲醇重结晶→干燥成品。采用本方法生产石杉碱甲，能耗低，周期短。

Description

一种石杉碱甲的提纯方法

技术领域：

本发明涉及一种石杉碱甲的提纯方法，尤其是一种采用膜分离和中压氧化铝柱纯化石杉碱甲的方法。

背景技术：

石杉碱甲

分子量：242.32；分子式：C15H18N2O；

易溶于氯仿，溶于甲醇、乙醇，微溶于水。

石杉碱甲是从中国特有植物千层塔中提取的一种生物碱，是中国独创的一种世界级新药。属于可逆性胆碱酯酶抑制剂，是目前治疗良性记忆障碍和早老性痴呆症最为安全有效的药物之一。

作为中国成药的石杉碱甲，其提取纯化方法很多。

李红英等发表的“千层塔中石杉碱甲的提取方法选择”，该文献公开的是不同浓度的酸酸溶液超声条件的提取效率优化。

查圣华等发放表的“从千层塔中微波协助提取石杉碱甲和石杉碱乙”，该文献公开了的是利用微波手段提高提取效率。

刘建廷等发表的“石杉碱甲提取工艺研究”，该文献公开的方法是千层塔干粗粉→酸解→调节pH→氯仿抽提→浓缩→纯化→重结晶→成品。

陈建华等发表的“高速逆流色谱技术制备石杉碱甲单体”，该文献公开的方法是以千层塔生物总碱为原料采用高速逆流色谱制备石杉碱甲。

专利(授权号公告号CN1207285C)“从中药千层塔中提取石杉碱甲的方法”，该专利公开的路线是酸水浸渍、浓缩氯仿萃取、柱层析、高效液相色谱分离等工序，所得产品含量98％以上。

专利(申请号200710018515)“一种从千层塔中提取分离石杉碱甲的方法”，该专利公开的方法是采用有机试剂回流提取、离子树脂柱分离、硅胶柱层析等工序提取分离石杉碱甲，所得产品含量达98％。

如上所述，现有生产石杉碱甲的方法存在着能耗高、生产量小、工业化程度较低等问题。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种石杉碱甲的提纯方法。该工艺能够降低生产能耗，减少污染，缩短生产周期。

本发明提取技术方案如下：

一种石杉碱甲的提纯方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取：取千层塔药材，粉碎，加入6-15倍量的酸性水溶液，加入40-60℃，搅拌提取1-3小时提取3-5次，合并提取液；

2)膜过滤：上述提取液微滤膜滤过，加入超滤膜超滤，透过液再过纳滤膜纳滤，收集浓缩液；

3)萃取：上述浓缩液加入氨水调节ph8-10，加入氯仿萃取3-5次，合并氯仿层萃取液；

4)氧化铝柱层析：上述氯仿层萃取液回收试剂至流膏状，加入氧化铝中压柱，甲醇-氯仿梯度洗脱，薄层检测洗脱状态，收集石杉碱甲高含量流分段，回收试剂，结晶；

5)重结晶：上述结晶物滤出，加入氯仿回流溶解后加入2-3倍体积的甲醇，冷藏结晶，滤出干燥即得产品。

如权利要求1所述的石杉碱甲的提纯方法，其特征在于所述超微粉碎为原料粉碎粒度不大于400目。

所述步骤1)中的酸性水可选ph1-3的盐酸、硫酸、醋酸或硫酸水溶液的一种。

所步骤2)述膜过滤中的膜为；微滤膜可选截留分子量10-20万的中空纤维素膜，超滤膜可选截留分量为3000-10000的中空纤维素膜，纳滤膜可选截留分子量200以下的中空纤维素膜，过滤压力控制为0.2-0.5Mpa。

所述步骤3)中的氯仿每次加入量控制在浓缩液体积的1/2-1/3。

所述步骤4)中的氧化镁为100-200目的碱性氧化铝。

所述步骤4)中梯度洗脱为：10BV甲醇→8BV甲醇氯仿(1∶1)混合液→甲醇氯仿(1∶80)混合溶液。

综上所述，本发明采用超滤膜除提取液中杂质和纳滤膜浓缩，属物理方法，减少了生产过程更多试剂使用；中压氧化铝柱上柱速度快，上样量大，缩短了生产周期。本发明属低能耗、高效率生产石杉碱甲的工业化方法。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

提取：千层塔药材粉碎，取10kg和60Lph2的盐酸水溶液，投入小型提取罐，加热40℃，动态提取1小时，提取4次，合并提取液。

膜过滤：提取液先用微滤膜处理，再加入截留分子量为3000的中空纤维素膜超滤，压力控制在0.5Mpa左右，收集透过液加入截留分子量为200的纳滤膜纳滤浓缩，得浓缩液得2L。

萃取：浓缩液加入氨水调节ph至9，加入1L氯仿，搅拌萃取，萃取3次，合并氯仿层，回收氯仿至100ml。

氧化铝柱层析：取500g碱性氧化铝装柱，把100ml浓缩液注入，取5L甲醇和4L甲醇氯仿混合液(1∶1)，加压依次注入氧化铝柱洗脱杂质，流分分别回收再利用。再取甲醇氯仿(1∶80)混合液洗脱有效成分，薄层色谱检测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂至200ml，静置结晶。

重结晶：结晶物滤出，用氯仿回流溶解，加入2倍体积的甲醇，冷藏结晶，滤出干燥得8g石杉碱甲，含量98.5％。

实施例2：

提取：千层塔药材粉碎，取10kg和150Lph3的硫酸水溶液，投入小型提取罐，加热60℃，动态提取3小时，提取2次，合并提取液。

膜过滤：提取液先用微滤膜处理，再加入截留分子量为6000的中空纤维素膜超滤，压力控制在0.3Mpa左右，收集透过液加入截留分子量为150的纳滤膜纳滤浓缩，得浓缩液得1.5L。

萃取：浓缩液加入氨水调节ph至10，加入700ml氯仿，搅拌萃取，萃取5次，合并氯仿层，回收氯仿至100ml。

氧化铝柱层析：取600g碱性氧化铝装柱，把100ml浓缩液注入，取5L甲醇和4L甲醇氯仿混合液(1∶1)，加压依次注入氧化铝柱洗脱杂质，流分分别回收再利用。再取甲醇氯仿(1∶80)混合液洗脱有效成分，薄层色谱检测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂至300ml，静置结晶。

重结晶：结晶物滤出，用氯仿回流溶解，加入3倍体积的甲醇，冷藏结晶，滤出干燥得9g石杉碱甲，含量98％。

实施例3：

提取：千层塔药材粉碎，取20kg和120Lph3的醋酸水溶液，投入小型提取罐，加热50℃，动态提取2小时，提取3次，合并提取液。

膜过滤：提取液先用微滤膜处理，再加入截留分子量为3000的中空纤维素膜超滤，压力控制在0.4Mpa左右，收集透过液加入截留分子量为200的纳滤膜纳滤浓缩，得浓缩液得4L。

萃取：浓缩液加入氨水调节ph至10，加入2L氯仿，搅拌萃取，萃取3次，合并氯仿层，回收氯仿至300ml。

氧化铝柱层析：取1200g碱性氧化铝装柱，把300ml浓缩液注入，取12L甲醇和9.6L甲醇氯仿混合液(1∶1)，加压依次注入氧化铝柱洗脱杂质，流分分别回收再利用。再取甲醇氯仿(1∶80)混合液洗脱有效成分，薄层色谱检测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂至500ml，静置结晶。

重结晶：结晶物滤出，用氯仿回流溶解，加入3倍体积的甲醇，冷藏结晶，滤出干燥得18g石杉碱甲，含量98.1％。

实施例4：

提取：千层塔药材粉碎，取30kg和180Lph2的硫酸水溶液，投入小型提取罐，加热40℃，动态提取2小时，提取3次，合并提取液。

膜过滤：提取液先用微滤膜处理，再加入截留分子量为3000的中空纤维素膜超滤，压力控制在0.5Mpa左右，收集透过液加入截留分子量为200的纳滤膜纳滤浓缩，得浓缩液得4L。

萃取：浓缩液加入氨水调节ph至9，加入2L氯仿，搅拌萃取，萃取4次，合并氯仿层，回收氯仿至400ml。

氧化铝柱层析：取2000g碱性氧化铝装柱，把400ml浓缩液注入，取20L甲醇和16L甲醇氯仿混合液(1∶1)，加压依次注入氧化铝柱洗脱杂质，流分分别回收再利用。再取甲醇氯仿(1∶80)混合液洗脱有效成分，薄层色谱检测洗脱，收集高浓度流分，回收试剂至600ml，静置结晶。

重结晶：结晶物滤出，用氯仿回流溶解，加入2倍体积的甲醇，冷藏结晶，滤出干燥得25g石杉碱甲，含量98％。

Claims (7)

1.一种石杉碱甲的提纯方法，其特征在于包含以下步骤：

1)提取：取千层塔药材，粉碎，加入6-15倍量的酸性水溶液，加入40-60℃，搅拌提取1-3小时提取3-5次，合并提取液；

2)膜过滤：上述提取液微滤膜滤过，加入超滤膜超滤，透过液再过纳滤膜纳滤，收集浓缩液；

3)萃取：上述浓缩液加入氨水调节ph8-10，加入氯仿萃取3-5次，合并氯仿层萃取液；

4)氧化铝柱层析：上述氯仿层萃取液回收试剂至流膏状，加入氧化铝中压柱，甲醇-氯仿梯度洗脱，薄层检测洗脱状态，收集石杉碱甲高含量流分段，回收试剂，结晶；

5)重结晶：上述结晶物滤出，加入氯仿回流溶解后加入2-3倍体积的甲醇，冷藏结晶，滤出去干燥即得产品。

2.如权利要求1所述的石杉碱甲的提纯方法，其特征在于所述超微粉碎为原料粉碎粒度不大于400目。

3.如权利要求1所述的石杉碱甲的提纯方法，其特征在于所述步骤1)中的酸性水可选ph1-3的盐酸、硫酸、醋酸或硫酸水溶液的一种。

4.如权利要求1所述的石杉碱甲的提纯方法，其特征在于所步骤2)述膜过滤中的膜为；微滤膜可选截留分子量10-20万的中空纤维素膜，超滤膜可选截留分量为3000-10000的中空纤维素膜，纳滤膜可选截留分子量200以下的中空纤维素膜，过滤压力控制为0.2-0.5Mpa。

5.如权利要求1所述的石杉碱甲的提纯方法，其特征在于所述步骤3)中的氯仿每次加入量控制在浓缩液体积的1/2-1/3。

6.如权利要求1所述的石杉碱甲的提纯方法，其特征在于所述步骤4)中的氧化镁为100-200目的碱性氧化铝。

7.如权利要求1所述的石杉碱甲的提纯方法，其特征在于所述步骤4)中梯度洗脱为：10BV甲醇→8BV甲醇氯仿(1∶1)混合液→甲醇氯仿(1∶80)混合溶液。