CN101835449A - 4-脒基苄胺用于美容和/或皮肤病学的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及4-脒基苄胺衍生物作为美容成分的用途和美容组合物，以及非治疗目的的美容处理皮肤和头皮的方法。所述衍生物和组合物可用作尿激酶抑制剂来预防和恢复表皮屏障的损伤。屏障异常和破裂通常分别是皮肤干燥、发痒、头皮屑和敏感皮肤知觉的起始点。这些4-脒基苄胺衍生物可以膏霜、乳液、凝胶、香波等形式用于局部的皮肤和头皮护理应用。

Description

4-脒基苄胺用于美容和/或皮肤病学的用途

背景技术

尿激酶(uPA)，也叫尿激酶-型纤溶酶原激活剂，是一种多结构域丝氨酸蛋白酶(EC 3.4.21.31)。uPA是一种411氨基酸残基蛋白，包括三个结构域：类生长因子结构域(aa 4-43)、kringle结构域(aa 47-135)和催化“B”链(氨基酸144-411)。该kringle结构域表现为结合肝素。该类生长因子结构域带有一些类似于表皮生长因子(EGF)的结构，以及因此被作为一种EGF结构域被提及。uPA被合成为酶原(pro-uPA或者单链uPA)，和通过被Lys158和Ile159之间的纤溶酶蛋白水解性裂解来活化。两种产物链通过二硫化物键保持在一起¹。

uPA由大量细胞类型例如平滑肌细胞、纤维原细胞、内皮细胞、巨噬细胞和肿瘤细胞产生。其已经作为关键角色牵涉到细胞内入侵和组织重塑作用中²。

在细胞外基质中，uPA通过其与特殊细胞表面受体uPA受体(uPAR)的交互作用被结合到细胞膜。所述的结合交互作用显然是由类EGF结构域调节的。当Pro-uPA和纤溶酶原被受体结合时，pro-uPA向活性uPA的裂解被加速。因此，丝氨酸蛋白酶纤溶酶激活pro-uPA，其依次通过分裂纤溶酶原来激活更多纤溶酶。这种正反馈循环显然限于在细胞表面的基于受体的蛋白质水解，因为在血浆中发现有大大过量的蛋白酶抑制剂¹。

最重要的uPA的内源性(endogeneous)抑制剂是丝氨酸蛋白酶抑制剂的纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)和纤溶酶原激活物抑制剂-2(PAI-2)，其不可逆的抑制蛋白酶活性。

uPA的首要底物是纤溶酶原，纤溶酶原通过细胞表面结合uPA被转化为纤溶酶。在纤溶酶原中uPA对于单肽键是高特异的。活化的纤溶酶降解细胞外基质成分(纤维蛋白、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和蛋白聚糖)并且还激活基质金属蛋白酶(MMPs)，从而促进胶原的分解^1， 3，4。该活性引导重要的过程，所述过程涉及细胞侵入和组织重塑，并且包括创伤修复、骨头再造、血管发生、肿瘤侵入和转移灶扩散²。

许多细胞类型使用uPA作为纤溶酶介导的蛋白水解降解或者细胞外支撑结构例如细胞外基质(ECM)和基底膜(BM)修饰的关键起始因子。细胞在组织和器官里由ECM和BM提供的物质框架内存在、移动和彼此相互作用。细胞在ECM内或穿过BM的移动需要局部蛋白质水解分解或者这些结构的修饰，以允许细胞侵入邻近区域，所述邻近区域以前对于细胞是不能抵达的⁵。

因此uPA抑制剂具有抗血管发生、关节炎、炎症、侵入、转移、骨质疏松和抑制肿瘤生长的活性³。

由于以uPA介导的侵入生物学过程的巨大范围，有效的和选择性的uPA抑制剂的效用被突出显示²。

由于具有类胰蛋白酶特异性的丝氨酸蛋白酶的巨大数量，包括因素VII、因素X和组织类型纤溶酶原激活物(tPA)，uPA有效和选择性抑制剂的开发是一项挑战。广泛的基于结构的药物开发已经提供了有效的和选择性的uPA抑制剂。它们一般是具有脒或者胍官能团的精氨酸模拟物(arginino mimetics)⁶，所述官能团被构造到芳香族或者杂环支架上。

在过去的几十年，美容工业已经对在不同的身体部位，在每年的不同季节和在不同的角质层(SC)空间水平内角质层结构、组分和功能中的变化有了越来越多的关注。例如，在角质层脂质或者NMF(天然保湿因子)水平的差别已知出现在不同的身体部位，在每年的冬季月份里降低水平，并且朝向角质层的外部其水平发生降低。

蛋白酶活性和含量水平的差别也已经被报告。已经表明表皮表达几种在皮肤中涉及多重活性的丝氨酸蛋白酶，所述皮肤中涉及的多重活性为：表皮的增殖、分化、脂质屏障的动态平衡和组织的改塑。最重要的，由丝氨酸蛋白酶和其他酶类一起的角质层角化粒的蛋白质水解是脱皮之前的决定性事件⁷。由于脂质处理酶类的降解和在高pH值水平的未受控制的持续的角化解链(corneodesmolysis)，丝氨酸蛋白酶的极度活跃导致屏障扰动，从而也使角质层完整性和凝聚力恶化⁸。

在角质层中的丝氨酸蛋白酶可以是对潜在的和有时非可见的皮炎症的关键标志。在这方面，提高的纤溶酶原/纤溶酶系统的活性被认为损害屏障恢复，如同蛋白酶抑制剂协助屏障恢复⁹。已经报道了下列屏障损害中uPA被激活¹⁰。增加的uPA活性从来自具有干性皮肤的受试者的面颊的胶带剥离实验(tapestrippings)中被观察到，所述干性皮肤与增加的经表皮的水损失水平相关¹¹。蛋白酶抑制剂特别是胰蛋白酶-型抑制剂已经被报告减少干性皮肤^9，10，11。

Kitamura等人¹²更进一步的证明纤溶酶原，其仅仅位于正常受试者的基底层，在干性皮肤的全部表皮细胞层里表达。然而，Kawai等人¹¹报告uPA存在于角质层并且这种酶是在角质层里面的纤溶酶原系统的激活触发器。在个体的背部皮肤上实验性诱导的干性皮肤中uPA被升高。他们进一步证明，增加的uPA活性存在于来自明显干性皮肤的受试者和具有提高的TEWL水平的受试者的面颊的角质层样品中。如果受试者具有正常外观的皮肤和低于大约16g m^-2h^-1的TEWL，那么没有发现活性。这些结论表明屏障形成失常和或屏障恢复受损的产生是由于提高的TEWL和纤溶酶活性，并且屏障修复的途径将是使用蛋白酶抑制剂。尽管事实上受试者具有临床上看起来正常的皮肤；所述在脸上提高的水平可能是由于环境影响下在脸上诱导引起亚临床微炎性症状。

重复的屏障破坏会引起表皮的超常增生并且被认为导致干性皮肤¹⁰。

令人吃惊的发现在WO01/96286⁴中描述的uPA-抑制剂可以用于局部处理皮肤和头皮屏障异常，如干燥皮肤状况、发痒、头皮屑和敏感皮肤的知觉。

发明内容

本发明涉及4-脒基苄胺衍生物作为美容成分和用于制备美容和皮肤病学组合物、以及皮肤美容治疗的非治疗目的的方法中的用途。所述的4-脒基苄胺衍生物具有下列通式(I)

其中

R¹表示H、C₁-C₈-烷基、任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基、氨基-C₁-C₅-烷基或者羟基-C₁-C₅-烷基；

R²表示H或者C₁-C₈-烷基；

R³表示羟基-C₁-C₅-烷基或者C₁-C₈-烷基；

R⁴表示H、-SO₂-R、-CO-R或者-COO-R；

R⁵表示H、OH、-CO-R或者-COO-R；

R表示C₁-C₁₆-烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基或者任选取代的杂芳基-C₁-C₄-烷基和

X表示CH或者N。

通式(I)的优选化合物，其中脒基官能团位于苯环的4号位置和/或其中

R¹表示H、C₁-C₈-烷基、任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基或者氨基-C₁-C₅-烷基；

R²表示H；

R³表示羟基-C₁-C₅-烷基；

R⁴表示-SO₂-R；

R⁵表示H；

R表示任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基和

X表示CH。

更优选的脒基苄胺衍生物是苄基磺酰基-D-Ser-homoPhe-(4-脒基-苄基酰胺(benzylamide))、苄基磺酰基-D-Ser-Lys-(4-脒基-苄基酰胺)、苄基磺酰基-D-Ser-Gly-4-脒基-苄基酰胺和苄基磺酰基-D-Ser-Ala-4-脒基-苄基酰胺。所有这些化合物显示有效的和高特异的尿激酶-抑制活性并且描述在WO01/9626864中。这些化合物适宜的使用纯的对映体。

术语“杂芳基”，对于它自己单独来说或者作为包含杂芳基的基团的一种结构要素，指由一或者两个环组成的5-11元芳香系统，其中1到3元是杂原子，选自氧、硫和氮。1到2苯环可以被稠合成杂环。其例如吡啶基、嘧啶基、哒嗪基、吡嗪基、1，3，5，-三嗪基、喹啉基、异喹啉基、喹噁啉基、喹唑啉基、酞嗪基、吡咯基、吡唑啉基、咪唑啉基、1，2，4-三唑基、四氮唑基、呋喃基、噻吩基、噁唑啉基、噻唑啉基、异噻唑啉基、苯丙噁唑基、苯丙噻吩基、吲哚基、苯并咪唑基、吲唑基、苯并三唑基和苯并噻唑基。连接能够任意地发生在杂环部分或者在苯并部分和在氮原子上或者任意碳原子上的π-过杂原子中。

任选取代的芳基和杂芳基的取代基例如卤素、C₁-C₆-烷基、C₁-C₆-卤代烷基、羟基、C₁-C₆-烷氧基、C₁-C₆-卤代烷氧基、C₁-C₆-烯基、C₂-C₆-烯氧基、C₂-C₆-炔基、C₃-C₆-炔氧基、C₁-C₆-烷氧羰基、CN、OCN、硝基、氨基、C₁-C₆-烷基氨基、二-C₁-C₆-烷基氨基、氨基羰基、C₁-C₆-烷氨基羰基、二-C₁-C₆烷氨基羰基、C₁-C₆-烷基硫代、C₁-C₆-烷基磺基(alkylsulfoxyl)、C₁-C₆-烷基磺酰基和C₃-C₆-环烷基。

这些化合物可用于美容应用中，以膏霜、乳液、凝胶、香波等形式施用，用于处理皮肤和/或头皮屏障异常，如干燥皮肤症状、瘙痒、头皮屑和/或者敏感皮肤的知觉。

依照本发明的局部有效的苄胺衍生物可以有用制成地或者制备成任何渴望想要得到的施用形式。因此，这些制剂可以是例如含水或者无水制剂、油包水(w/o)或者水包油(o/w)形式的乳剂或者微乳、多重乳剂，例如水包油包水(w/o/w)型、凝胶、香波、固体、或者气雾剂。本发明的制剂可以以例如粉末、湿饰颜片(wet patch)、洗剂、膏霜或者软膏、香波或者洗剂制剂、或者其他美容认可的形式加以利用。苄胺衍生物的有效浓度基于美容产品的总重量为约0.001-10000ppm，优选0.1-1000ppm。

本发明美容有效的苄胺衍生物，其也可以被引入制剂或者制品，可以与任意其他、通常使用和局部应用皮肤护理成分一起使用。附加皮肤护理成分的例子来自于植物、藻类、微藻、酵母、蘑菇、动物和微生物、合成和半合成物质。

·退黑激素、尿素、肌酸酐、二甲基乙醇胺及其衍生物，

·氨基酸及其衍生物(例如丝氨酸、甘氨酸、天门冬酰胺、半胱氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、N-乙酰半胱氨酸、瓜氨酸)，

·蛋白质，它们的水解产物及其衍生物(例如胶原蛋白、胶质、清蛋白、酪蛋白、弹性蛋白、角蛋白、丝胶蛋白、丝心蛋白、抗角蛋白微丝聚集蛋白(fillagrin))，

·生长因子及其衍生物(例如转化生长因子、类胰岛素生长因子、表皮生长因子、酸性和碱性纤维原细胞生长因子、神经生长因子、角蛋白生长因子、肝细胞生长因子、血小板衍生的生长因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子、血管内皮细胞生长因子)，

·酶和蛋白酶及其衍生物(木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、过氧化物岐化酶、磷脂酶、转谷氨酰胺酶)，

·酶抑制剂、蛋白酶抑制剂及其衍生物(例如氨甲环酸、大豆胰蛋白酶抑制剂、鲍曼-毕尔克(Bowman Birk)抑制剂、LEKTI、抑肽酶、弹力素、SLPI、α1-抗胰蛋白酶、α1-抗胰凝乳蛋白酶、胆固醇硫酸盐、亮肽素、抑糜蛋白酶素、组织金属蛋白酶抑制剂、系列化合物、芥提取物)，

·辅酶及其衍生物(例如辅酶Q10(ubiquinon)、烟酰胺、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、辅酶A、辅酶B12、黄素腺嘌呤二核苷、黄素单核苷酸)，

·肽例如二-、三-、四-、五-和六肽及其衍生物(例如肌肽、H-βAla-Pro-Dab-NH苄基、Cu(II)-H-Gly-His-Lys-OH、H-Gly-Leu-Phe-OH、(反-9)十八碳烯(Elaidyl)-Lys-Phe-Lys-OH、十六酰-Lys-Val-Lys-OH、H-Lys-Pro-Val-OH、十六酰-Lys-Val-Dab-OH、H-Arg-Ser-Arg-Lys-OH、十六酰-Lys-Val-Dab-Thr-OH、H-Gly-Pro-Arg-Pro-Ala-NH2、十六酰-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH，、乙酰基-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-ArgNH2)，

·碳水化合物例如单-，二-，三和寡糖类及其衍生物(例如葡萄糖、果糖、甘露糖、二羟基丙酮、赤藓酮糖、蔗糖、海藻糖、麦芽糖)，

·多糖类及其衍生物(例如半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖、β-葡聚糖、角叉藻聚糖、糖原、脱乙酰壳多糖、香菇多糖、地衣多糖、菊糖、岩藻糖、藻酸盐、木糖葡聚糖、葡聚糖、直链淀粉、果聚糖、黄原胶、支链淀粉)，

·葡糖氨基聚糖类，它们的亚单元(subunits)及其衍生物(例如透明质素、硫酸软骨素、肝素、硫酸皮肤素、葡糖醛酸、N-乙酰葡糖胺)，

·嘌呤、嘧啶、核苷酸、核苷及其衍生物(例如尿囊素、尿酸、腺苷、腺苷单磷酸、腺苷5’-三磷酸、激动素)，

·羧酸及其衍生物(例如乳酸、柠檬酸、乙醇酸、壬二酸、水杨酸、硫辛酸吡咯烷酮(pyrrolidon)羧酸、尿刊酸、咖啡酸)，

·脂肪酸及其衍生物(例如亚油酸、油酸、棕榈酸、共轭亚油酸)，

·脂类及其衍生物(例如角鲨烷、角鲨烯、甘油单酯、甘油二酯、甘油三脂、凡士林、羊毛脂)，

·鞘氨醇、鞘脂、鞘糖脂、硫脂及其衍生物(例如植物鞘氨醇、神经酰胺、N-脂酰基鞘氨醇葡糖苷、脑苷脂、神经节苷脂(gangliobrosides)、硫苷脂)，

·磷脂及其衍生物(磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰基乙醇胺)，

·甾醇、植物甾醇、皂苷及其衍生物(例如胆固醇、谷甾醇、豆固醇、菜子甾醇(kampesterol)、羽扇醇、甘草甜素)，

·黄酮类及其衍生物(例如芦丁、槲皮素、染料木素、黄豆苷元、非瑟酮、杨梅黄酮、木犀草素、陈皮素、水飞蓟宾、西利马林、芹菜素)，

·酚、多酚及其衍生物(例如表棓儿茶素、表棓儿茶素没食子酸酯、白藜芦醇、去甲二氢愈创木酸、鞣花酸、间苯二酚)，

·萜及其衍生物(例如甘草次酸、法尼醇、α-没药醇、β-没药醇)，

·生物碱及其衍生物(例如咖啡因、茶碱、可可碱)，

·苯并呋喃及其衍生物(例如地衣酸)，

·微量元素(例如Zn、Se、Mn)及其盐，

·多元醇及其衍生物(例如甘油、丙二醇、丁二醇、山梨醇、赤藓醇、己二醇、植三醇(phytantriol))，

·抗微生物成分、抗微生物肽及其衍生物(例如吡硫锌、防卫素、组织蛋白酶抑制素、皮敌菌素、富组蛋白(histatin))，

·UV吸收剂及其衍生物(例如苯甲酸盐、邻氨基苯甲酸盐、水杨酸盐、肉桂酸盐、二苯甲酮(例如Parsol^TM340)、苯并咪唑、苯并三唑(例如Tinosorb^TMM)、三嗪(例如Tinosorb^TMS)、聚硅氧烷(例如Parsol^TMSLX)、氧化钛、氧化锌、黑色素、阿伏苯宗)，

·维生素、维生素原及其衍生物(例如维生素A、B系列的维生素、维生素C、维生素D、维生素E)，

·维甲酸类及其衍生物(例如松香油、视黄醛、维A酸、异维A酸、阿利维A酸、阿维A酯、阿维A、他扎罗汀、贝沙罗汀)，

·类胡萝卜素及其衍生物(例如α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、番茄红素、芦台因(luteine)、玉米黄质、虾青素)，

·螯合剂及其衍生物(例如乙二胺四乙酸、去铁胺，、糠偶酰二肟(furildioxime))，

·润湿剂(例如甘油、丁二醇、山梨醇、尿素、N-乙酰葡糖胺、透明质酸、葡糖氨基聚糖、氨基酸、，蛋白质水解物、胶原、单、二-、寡-和多糖、

)，

·调节表皮屏障功能剂(例如神经酰胺、胆固醇、脂肪酸、角鲨烷、植物鞘氨醇、羊毛脂、卵磷脂、凡士林)，

·皮肤恢复和再生成分(例如

酵母提取物、西门肺草提取物(symphytum extract)、银杏提取物)，

·皮肤紧致和抗皱纹剂(例如积雪草、

Biopeptide CL、Kollaren PP、(反-9)十八碳烯-Lys-Phe-Lys-OH、H-Arg-Ser-Arg-Lys-OH、Argireline、Collaxyl、Dermican LS 9745)，

·缓解(soothing)和抗炎剂(例如甘菊提取物(chamomile extract)、泛醇、烟酰胺、氧化锌、真芦荟(aloe vera)、金盏花提取物、甘草提取物、金缕梅提取物、Sensicalmine、Alistine、H-Lys-Pro-Val-OH)，

·抗瘙痒成分(例如

月见草油)，

·抗头皮屑成分(例如尿囊素、二硫化硒、联苯苄唑、吡硫锌)，

·脱皮成分(例如α羟基酸、β羟基酸)，

·抗氧化剂(例如超氧化物歧化酶、辅酶Q、硫辛酸、维生素E、绿茶提取物)，

·皮脂调节和抗粉刺剂(例如

亚油酸、非洲臀果木提取物、红花百里香提取物(thymus officinalis extract)、间苯二酚、水杨酸)，

·调节牵拉痕迹试剂(例如积雪草提取物、Darutosid、Registril)，

·皮肤免疫系统调节剂(例如山金车提取物、)，

·皮肤光亮剂(例如α-熊果苷、β-熊果苷、曲酸、抗坏血酸基磷酸镁、甘草提取物、促黑素抑制素(Melanostatine)、乙酰基-Asn-Ser-Leu-Asp-Phe-NH₂)，

·皮肤晒黑剂(skin tanning agents)(赤藓酮糖、二羟基丙酮(dihydroxyacteone)、Melitane PP)，

·抗-肥胖剂(例如咖啡因、茶碱、瓜拉那提取物、

)，

·调节皮肤微循环试剂(例如精氨酸、水飞蓟宾、西利马林)，

·调节酒渣鼻主要特征例如潮红和非稳定红斑(nontransient erythema)的试剂(例如甲硝唑、壬二酸)，

·调节微血丝(couperose)和毛细管扩张剂(例如西利马林)，

·抗真菌成分(例如酮康唑(ketokonazole)，环吡酮胺(cyclopyrox)，茶树油)，

及其混合物。

可接受的载体通常可用于制备本发明的美容活性组合物或者制剂。这样载体的例子为醇、多元醇、脂肪酸、脂类、油、蜡、增稠剂、表面活性剂、乳化剂、填充剂、防腐剂、香精和香味以及染色剂、泡沫稳定剂和/或硅酮。

用于本发明的载体特别是甘油、聚甘油化合物、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、乙醇、异丙醇、琼脂、黄蓍树胶、阿拉伯树胶、植物和动物明胶、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟甲基纤维、羟丙基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯醇、聚乙烯醇醋酸酯、C_6-22脂肪醇例如鲸蜡醇、C_6-22脂肪醇酯，特别是硬脂酸、棕榈酸、月桂酸和对应的甲基、乙基和丙基酯、羊毛脂、液状石腊或者天然或者合成蜡、例如凡士林或者蜂蜡、植物油例如橄榄油、椰子油、大豆油、蓖麻油和相应的氢化油、用聚烷基氧改性的含羟基化合物，以及更多的已知用于美容制剂中的原料物质。

为了制备油包水(w/o)、水包油(o/w)或者水包油包水(w/o/w)乳剂或者微乳剂，优选使用本身已知的并且用于此目的化合物。为了制备脂相，矿物和天然油或者蜡是优选的。用醇和脂肪酸合成生产得到的酯，例如乙醇、丙醇、异丙醇、丙二醇或者甘油的脂肪酸酯、或有机的C_3-20脂肪酸的脂肪醇酯也是可用的。例如肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、油酸的酯，例如肉豆蔻酸丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、油酸异丙酯、硬脂酸丁酯、月桂酸己酯、硬脂酸2-己基癸基酯，或者天然油，例如希蒙得木油或其混合物是优选的。优选硅酮特别是二甲基聚硅氧烷，优选环状或者直链形式。

而且，本发明的制剂可以包含用于pH值调节的酸或者碱，例如氢氧化钠、磷酸，柠檬酸或者乳酸、三乙醇胺，最好作为缓冲系统。

下述实施例试图更具体的解释本发明而不是以任何形式限制它的范围。

实施例

实施例1

乳剂的制备

A相成分加热到70℃以及B相成分加热到75℃。在搅拌下将B相缓慢加入到A相。混合物冷却到50℃，均质和冷却到30℃。然后加入C相和D相成分。搅拌乳剂直至到室温。

相	成分	％m/m
			A	聚甘油-3-甲基葡糖二硬脂酸酯(Tego Care 450)	3.00
	十六/十八醇	2.25
				硬脂酸甘油酯	2.25
	Cetiol 868	10.00
				角鲨烷	5.00
B	水	66.99
				透明质酸钠	5.00
C	甘油	5.00

相	成分	％m/m
				Phenonip	0.50
D	苄基磺酰基-D-Ser-Gly-(4-脒基-苄基酰胺)	0.01

实施例2

美容凝胶的制备

A相成分在搅拌下溶解。用B相调节pH值到6.0以及然后加入C相。

相	成分	％m/m
			A	水	92.09
	1，3-丁二醇	5.00
				Phenonip	0.50
	AbilB 8843	1.50
				羧甲基纤维素	0.15
	聚羧乙烯Ultrez 10	0.75
			B	NaOH
C	苄基磺酰基-D-Ser-Gly-(4-脒基-苄基酰胺)	0.01

实施例3

角质层中TEWL和纤溶酶和uPA活性的相互关系

十个健康的高加索受试者(皮肤类型II-III)加入该研究。所有志愿者签署了知情同意书。在面颊进行连续的胶带剥离实验(

CuDermCorporation，Dallas，USA)之前(9次)，使用Aquaflux AF103(Biox Systems，London，UK)测量TEWL。受试者被要求在角质层被采样之前至少12小时不使用任何局部用药物或者化妆品。首先，在胶带剥离步骤之前15分钟，皮肤用环境温度下蒸馏水浸湿的棉垫仔细的清洁并且允许干燥。使受试者在标准条件下的环境空间内适应。皮肤位置用外科标记物标记，以确保测量探针和胶带始

终施用到相同的区域。

标准的

盘具有2.2cm的直径和3.8cm²的面积，用压力装置(CuDerm Corporation，Dallas，USA)在225g/cm²压力下放置到皮肤上5秒。剥离间隔周期为20±5秒。

胶带剥离的蛋白质含量通过用红外光密度计SquameScan^TM 850A(Heiland electronic，Wetzlar，Germany)在850nm处吸收测量来定量。SquameScan^TM 850A是特别为标准

盘的应用设计的。对蛋白质定量来说使用下列方程式：

C_蛋白[μg cm^-2]＝1.366＊吸收[％]-1.557

在吸收测量之后每个胶带剥离被立即转移到1.5ml微量离心管(Eppendorftube)，然后在750μl的0.1M Tris/HCl和0.5％Triton X-100组成的pH值为8.0的缓冲剂中以25℃和1000rpm提取15分钟。胶带剥离的提取物被混合。1.25μl的溶于DMSO中的5mM荧光探针尿激酶底物Bz-β-Ala-Gly-Arg-AMC(Pentapharm，Switzerland)和纤溶酶底物MeOSuc-Ala-Phe-Lys-AMC(Bachem，Switzerland)被加入到250μl的溶液(最终的基质浓度＝25μM)中。该溶液在37℃和1000rpm下混合。该反应在2小时后通过添加100μl的1％的乙酸到100μl的反应混合物中被停止。释放的AMC通过C18 HPLC梯度洗脱法被定量(80％水/20％乙腈/0.07％TFA至50％水/50％乙腈/0.07％TFA)。使用的柱为Symmetry C18，3.5μM，4.6mmx75mm(Waters，Milford，USA)。流速为1ml/min，注射体积为5μl和AMC的保留时间为3.5分钟。发射波长为442nm和激发波长为354nm。

数据总结在表1和图1中。在人类角质层的顶层中uPA和纤溶酶活性的存在支持了该结论，这些蛋白酶能够通过局部施用的抑制剂来抑制。

表1：10名受试者的角质层中顶部9个细胞层的TEWL和uPA和纤溶酶水平的测定。

受试者	TEWL[gm-2h-1]	uPA[nUμg-1蛋白质]	纤溶酶[nUμg-1蛋白质]
				01	41.7	2.89	5.59
02	31.2	1.81	3.59
				03	26.2	1.80	2.54
04	33.0	2.04	4.47
				05	16.1	1.43	1.52
06	23.8	0.94	2.85
				07	21.0	2.02	1.84
08	20.8	1.23	1.88

受试者	TEWL[gm-2h-1]	uPA[nUμg-1蛋白质]	纤溶酶[nUμg-1蛋白质]
				09	22.3	1.47	2.41
10	25.6	2.46	3.13

参考文献

1.Rosenberg.，S.；Doyle，，M.V.Peptide inhibitors of urokinase receptoractivity。US5656726，1997。

2.Barber；C.G.；Dickinson，R.P.2-Pyridinylguanidine urokinase inhibitors。EP1044967，2000-10-18，2000。

3.Sasaki，T.；Nojima ，M.Ozonide compounds with inhibitory activity forurokinase production and angiogenesis。US6365610，2002。

4.Stürzebecher，J.；Steinmetzer，T.；Künzel，S.；Schweinitz，A，UrokinaseInhibitors。WO 01/96286，20.12.2001，2001。

5.Bridges，A.；Schwartz，C.E.；Lottlefield，B.A.Benzothiophenes andthienothiophenes and related compounds useful，for example，as urokinaseinhibitors。EP0568289，1993-11-03，1993。

6.Deck，L.M.；Vander Jagt，D.L.；Heynekamp，J.J.Isocoumarin-basedinhibitors of urokinase-type plasminogen activator。US2006252823，2006-11-09，2006。

7.Rawlings，A.V.；Matts，P.J.，Stratum Corneum Moisturization at theMolecular Level：An Update in Relation to the Dry Skin Cycle。J Invest Dermatol2005，124。(6)，1099-1110。

8.Hachem，J.-P.；Man，M.-Q.；Crumrine ，D.；Uchida，Y.；Brown ，B.E.；Rogiers，V.；Roseeuw，D.；Feingold，K.R.；Elias，P.M.，Sustained SerineProteases Activity by Prolonged Increase in pH Leads to Degradation of LipidProcessing Enzymes and Profound Alterations of Barrier Function and StratumCorneum Integrity。J Invest Dermatol 2005，125，(3)，510-520。

9.Denda，M.；Kitamura，K.；Elias，P.M.；Feingold，K.K.，trans-4-(Aminomethyl)cyclohexane Carboxylic Acid(T-AMCHA)，an Anti-FibrinolyticAgent，Accelerates Barrier Recovery and Prevents the Epidermal HyperplasiaInduced by Epidermal Injury in Hairless Mice and Humans。J Invest Dermatol1997，109，(1)，84。

10.Katsuta，Y.；Yoshida，Y.；Kawai，E.；Kohno，Y.；Kitamura，K.，Urokinase-type plasminogen activator is activated in stratum corneum afterbarrier disruption。J Dermatol Sci 2003，32，(1)，55-57。

11.Kawai，E.；Kohno，Y.；Ogawa，K.；Sakuma，K.；Yoshikawa，N.；Aso，D.，Can Inorganic Powders Provide Any Biological Benefit in StratumCorneum，While Residing on Skin Surface。IFSCC Magazine 2002，5，(4)，269-275。

12.Kitamura，K.；Yamada，K.；Ito，A.；Fukuda，M.，Research on themechanism by which dry skin occurs and the development of an effectivecompound for its treatment。J Soc Cosmet Chem 1995，29，133-145。

Claims (17)

1.下列通式(I)的至少一种化合物作为美容成分的用途，

其中

R¹表示H、C₁-C₈-烷基、任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基、氨基-C₁-C₅-烷基或者羟基-C₁-C₅-烷基；

R²表示H或者C₁-C₈-烷基；

R³表示羟基-C₁-C₅-烷基或者C₁-C₈-烷基；

R⁴表示H、-SO₂-R、-CO-R或者-COO-R；

R⁵表示H、OH、-CO-R或者-COO-R；

R表示C₁-C₁₆-烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基或者任选取代的杂芳基-C₁-C₄-烷基和

X表示CH或者N。

2.依照权利要求1所述的至少一种化合物的用途，其特征在于苯环是在4号位被脒基官能团取代。

3.依照权利要求1和2之一所述的至少一种化合物的用途，其特征在于R¹表示H、C₁-C₈-烷基，任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基或者氨基-C₁-C₅-烷基；

R²表示H；

R³表示羟基-C₁-C₅-烷基；

R⁴表示-SO₂-R；

R⁵表示H；

R表示任选取代的芳基-C₁-C₄-烷基和

X表示CH。

4.依照权利要求1的化合物中至少一种的用途，所述化合物如下：

a)苄基磺酰基-D-Ser-Gly(4-脒基-苄基酰胺)

b)苄基磺酰基-D-Ser-Ala-(4-脒基-苄基酰胺)

c)苄基磺酰基-D-Ser-homoPhe-(4-脒基-苄基酰胺)

d)苄基磺酰基-D-Ser-Lys-(4-脒基-苄基酰胺)。

5.依照权利要求1-4之一所述的至少一种化合物的用途，其特征在于化合物以适合皮肤病学的盐的形式存在。

6.依照权利要求1-5之一所述的至少一种化合物的用途，其特征在于化合物以纯对映体存在。

7.依照权利要求1-6之一所述的至少一种化合物用于制备美容组合物的用途。

8.依照权利要求7的用途，其特征在于所述组合物以浓度范围为从0.001至10000ppm(m/m)、优选从0.1至1000ppm(m/m)含有式(I)化合物。

9.一种美容组合物，特别是局部施用美容组合物，其特征在于含有

a)通式(I)的至少一种化合物，和

b)至少一种附加的皮肤护理成分，选自氨基酸、蛋白质、蛋白水解物、生长因子、酶、蛋白酶、酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、辅酶、肽例如二-、三-、四-、五-和六肽、碳水化合物例如单-、二-、三-和寡糖、多糖、糖胺聚糖、糖胺聚糖亚单元(glycosaminoglycan subunits)、嘌呤、嘧啶、核苷酸、核苷、羧酸、饱和和不饱和脂肪酸、脂质、鞘氨醇、鞘脂、鞘糖脂、硫脂、磷脂、甾醇、植物甾醇、皂苷、黄酮类化合物、酚、多酚、萜、生物碱、苯并呋喃、微量元素及其盐、多元醇、抗微生物成分、抗微生物肽、UV吸收剂、维生素、维生素原、维生素A类、类胡萝卜素、螯合剂、润湿剂、表皮屏障功能调节剂、皮肤恢复和再生成分、皮肤紧密和抗皱剂、缓解和抗炎剂、抗瘙痒成分、抗头皮屑成分、脱皮成分例如α或者β羟基羧酸、抗氧化剂、自由基清除剂、UV-猝灭剂、皮脂调节和抗粉刺剂、牵拉痕调节剂、皮肤免疫系统调节剂、皮肤光亮剂、皮肤晒黑剂、抗-减重剂、皮肤微循环调节剂、酒渣鼻的主要特征例如潮红和非稳定红斑的调节剂、微血丝和毛细管扩张调节剂、抗真菌剂及其混合物。

10.依照权利要求9的美容组合物，其特征在于所述附加皮肤护理成分选自退黑激素、尿素、肌酸酐、二甲基乙醇胺、丝氨酸、甘氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、赖氨酸、精氨酸、门冬氨酸、谷氨酸、N-乙酰半胱氨酸、瓜氨酸、胶原、明胶、白蛋白、酪蛋白、弹性蛋白、角蛋白、丝胶、蚕丝蛋白、抗角蛋白微丝聚集蛋白、转化生长因子、类胰岛素生长因子、表皮生长因子、酸性和碱性成纤维细胞生长因子、神经生长因子、角质细胞生长因子、肝细胞生长因子、衍生自血小板的生长因子、粒-巨噬细胞集落刺激因子、血管内皮细胞生长因子、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、过氧化物歧化酶、乳过氧化物酶、磷脂酶、转谷氨酰胺酶、氨甲环酸、大豆胰蛋白酶抑制剂、鲍曼-毕尔克抑制剂、LEKTI、抑肽酶、弹力素、SLPI、α1-抗胰蛋白酶、α1-抗胰凝乳蛋白酶、胆固醇硫酸盐、亮肽素、抑糜蛋白酶素、组织金属蛋白酶抑制剂、

系列化合物、芥提取物、辅酶Q10、烟酰胺、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸、辅酶A、辅酶B12、黄素腺嘌呤二核苷酸、黄素单核苷酸、肌肽、H-βAla-Pro-Dab-NH苯甲基、Cu(II)-H-Gly-His-Lys-OH、H-Gly-Leu-Phe-OH、反9十八碳烯-Lys-Phe-Lys-OH、十六酰-Lys-Val-Lys-OH、H-Lys-Pro-Val-OH、十六酰-Lys-Val-Dab-OH、H-Arg-Ser-Arg-Lys-OH，十六酰-Lys-Val-Dab-Thr-OH、H-Gly-Pro-Arg-Pro-Ala-NH2、十六酰-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser-OH、乙酰基-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-ArgNH₂、葡萄糖、果糖、甘露糖、二羟丙酮、赤藓酮糖、蔗糖、海藻糖、麦芽糖、半乳甘露聚糖、葡甘露聚糖、β-葡聚糖、角叉菜胶、糖原、脱乙酰壳多糖、香菇多糖、地衣多糖、菊糖、岩藻糖、藻酸盐、木糖葡聚糖、葡聚糖、直链淀粉、果聚糖、黄原胶、支链淀粉、透明质素、软骨素硫酸盐、肝素、硫酸皮肤素、葡糖醛酸、N-乙酰葡糖胺、尿囊素、尿酸、腺苷、腺苷单磷酸、腺苷5’-三磷酸盐、激动素、乳酸、柠檬酸、羟乙酸、壬二酸、水杨酸、硫辛酸、吡咯烷酮羧酸、尿刊酸、咖啡酸、亚油酸、油酸、棕榈酸、共轭亚油酸、角鲨烷、角鲨烯、甘油单酯、甘油二酯、甘油三酯、凡士林、羊毛脂、植物鞘氨醇、神经酰胺、N-脂酰基鞘氨醇葡糖苷、脑苷脂、神经节苷脂、硫苷脂、磷脂酰胆碱、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、胆固醇、谷甾醇、豆甾醇、菜子甾醇、羽扇醇、甘草甜素、芦丁、槲皮素、染料木素、黄豆苷元、非瑟酮、杨梅黄酮、木犀草素、橙皮素、水飞蓟宾、水飞蓟素、芹黄素、表棓儿茶素、表棓儿茶素没食子酸酯、白藜芦醇、去甲二氢愈创木酸、鞣花酸间苯二酚、甘草次酸、法呢醇、α-没药醇、β-没药醇、咖啡因、茶碱、可可碱、松萝酸、锌-、硒-、锰-盐、甘油、丙二醇、丁二醇、山梨醇、赤藓醇、己二醇、植三醇、吡硫锌、防卫素、组织蛋白酶抑制素、皮敌菌素、富组蛋白、苯甲酸盐、邻氨基苯甲酸盐、水杨酸盐、肉桂酸盐、二苯甲酮、Parsol^TM340、苯并咪唑、苯并三唑、Tinosorb^TMM、三嗪、Tinosorb^TMS、聚硅氧烷、如Parsol^TMSLX、二氧化钛、氧化锌、黑色素、维生素A、B族维生素、维生素C、维生素D、维生素E、松香油、视黄醛、维A酸、异维A酸、阿利维A酸、阿维A酯、阿维A、他扎罗汀、贝沙罗汀、α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、番茄红素、芦台因、玉米黄质、虾青素、乙二胺四乙酸、去铁胺、糖偶酰二肟、

酵母提取物、西门肺草提取物、银杏提取物、积雪草、

甘菊提取物、真芦荟、金盏花提取物、甘草提取物、金缕梅提取物、

月见草油、绿茶提取物、

非洲臀果木提取物、红花百里香提取物、积雪草提取物、山金车提取物、

甘草提取物、

瓜拉那提取物、

甲硝唑、酮康唑、环吡酮胺、茶树油及其衍生物和它们的混合物。

11.依照权利要求9和10之一的美容组合物，其特征在于其还包含一种或者几种皮肤病学载体。

12.依照权利要求9-11之一的美容组合物，其特征在于其包含式(I)的化合物，所述化合物在载体中成为溶液、分散体、乳剂、微乳剂、纳米乳或者胶囊，优选在脂质体或者乳糜微粒中成为大-、微-或者纳米胶囊，或者包封在大-、微-或者纳米颗粒或者微海绵(microsponges)中，颗粒化或者吸收在粉末化有机聚合物、滑石、膨润土和相关矿物载体上。

13.依照权利要求9-11之一的美容组合物，其特征在于其可以是溶液、乳剂(水包油和油包水)、乳状物、洗剂、分散体、软膏、凝胶形式和粘性表面活性剂和乳化聚合物、润发油、香波、肥皂、凝胶、冻干剂(lyophilisate)、粉末、条棒、笔、喷雾剂、身体用油、面膜或者贴剂形式。

14.抑制皮肤中蛋白酶特别是尿激酶的方法，其特征在于施用依照权利要求9-13之一的包含一种或者多种式(I)化合物的组合物到皮肤和/或者头皮上。

15.依照权利要求14的方法，其特征在于所述组合物包括苄基磺酰基-D-Ser-Gly-(4-脒基-苄基酰胺)、苄基磺酰基-D-Ser-Ala-(4-脒基-苄基酰胺)、苄基磺酰基-D-Ser-homoPhe-(4-脒基-苄基酰胺)或苄基磺酰基-D-Ser-Lys-(4-脒基-苄基酰胺)或其盐。

16.非治疗目的用于保养、修复和/或者改善皮肤水合用、经表皮水分丢失、改善皮肤和/或者头皮屏障异常如干燥皮肤状况、瘙痒、头皮屑和/或敏感皮肤知觉的美容方法，其特征在于施用依照权利要求9-13之一的包含一种或者多种式(I)化合物的组合物到皮肤和/或头皮上。

17.依照权利要求16的方法，其特征在于所述组合物包括苄基磺酰基-D-Ser-Gly-(4-脒基-苄基酰胺)、苄基磺酰基-D-Ser-Ala-(4-脒基-苄基酰胺)、苄基磺酰基-D-Ser-homoPhe-(4-脒基-苄基酰胺)或苄基磺酰基-D-Ser-Lys-(4-脒基-苄基酰胺)或其盐。

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