CN115040432A - 一种psf-sod1和芦丁的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于天然药物化学领域，具体涉及一种PSF‑SOD1和芦丁的组合物及其制备方法和应用。本发明组合物按照重量份数计，包括芦丁1‑5份，PSF‑SOD11‑10份，乳化剂3‑5份，增稠剂0.5‑1份，柔润剂5‑15份，保湿剂5‑10份，化学防晒剂5‑10份，水50‑70份。本发明使用PSF‑SOD1和芦丁的组合进行防晒，芦丁作为一种高活性的抗氧化剂可以有效的捕获氧化自由基或过氧化自由基，低活性抗氧化剂PSF‑SOD1能够提供氢原子，使高活性的芦丁再生，保持长久的抗氧化效能，具有较好的体外抗氧化清除自由基的能力，获得的防晒霜对皮肤紫外损伤的症状具有较好的防护作用。

Description

一种PSF-SOD1和芦丁的组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于天然药物化学领域，具体涉及一种PSF-SOD1和芦丁的组合物及其制备方法和应用。
背景技术
由紫外线辐射导致的皮肤老化问题，受到人们的广泛关注。在紫外线的长期辐射下，皮肤会逐渐出现肤色加深、晒伤、炎症，甚至是皮肤癌的问题。紫外线可分为短波紫外线UVC(200-290nm)、中波紫外线UVB(290-320nm)、长波紫外线UVA(320-400nm)。其中，UVC会被臭氧层所吸收，不会对皮肤造成伤害；UVB和UVA均能穿过臭氧层，引起皮肤晒黑、老化，严重时将导致皮肤癌。
目前已发现许多天然植物成分具有吸收紫外线，防止紫外损伤的作用。芦丁就是其中一种。芦丁来源于芸香叶、枣、番茄中，是一种天然的黄酮苷，具有抗菌消炎、止血、抗氧化等功效。由于其具有很强的共轭性，对紫外线显示出强烈的吸收，吸收范围广，用量为常用防晒剂质量分数的1％即能达到很好的效果，是一种较好的天然防晒剂。
然而使用芦丁作为防晒霜在防晒方面还存在不足，芦丁能阻隔或吸收紫外线的防晒剂来达到防止肌肤被晒黑、晒伤，但是单一成分并不能吸收全部的辐射。另一方面在抗氧化方面也存在缺陷，主要原因是防晒霜通过防晒机理阻断的UVA和UVB只占太阳能的7％，而54％是红外辐射。芦丁不能吸收的这些辐射能够引发老化，甚至恶化紫外辐射效应，缺乏抗氧化能力。
CN111773235A公开了一种柠檬皮酚类提取物在制备预防或治疗紫外线对皮肤损伤药物中的应用，具体公开了提取物活性成分由如下组分组成：绿原酸40-50重量份，咖啡酸35-45重量份，橙皮苷1-3重量份，芸香柚皮苷2-8重量份，芦丁5-10重量份。其中，该组合物能够上调皮肤损伤小鼠皮肤组织中的SOD1、SOD2、CAT、Nrf2、HO-1、IκB-αmRNA表达和下调NF-κB、p38 MAPK、COX-2表达。然而该技术方案并没有很好的防晒功能，也没有实现抗氧化，更加没有进一步研究芦丁和其他成分的协同防晒机理。
因此，现有技术却缺乏一种能够实现防晒、抗氧化的芦丁组合物。
发明内容
针对现有技术的以上缺陷或改进需求，本发明提供了一种PSF-SOD1和芦丁的组合物，其目的在于使用PSF-SOD1和芦丁，两者起到协同增效的防晒效果，并且芦丁作为植物提取物更温和安全，使用于皮肤时具有更小的刺激，由此实现防晒、抗氧化的芦丁组合物。
为实现上述目的，按照本发明的一个方面，提供了一种PSF-SOD1和芦丁的组合物，包括一种PSF-SOD1和芦丁的组合物，按照重量份数计，包括芦丁1-5份，PSF-SOD11-10份，乳化剂3-5份，增稠剂0.5-1份，柔润剂5-15份，保湿剂5-10份，化学防晒剂5-10份，水50-70份。
植物类黄酮是一种天然存在的植物代谢物，它不仅可以让水果、蔬菜、花卉呈现出多种的颜色，同时也是非常强大的抗氧化剂，可以有效的对抗自由基，防止氧化应激，让皮肤更加健康有活力，改善皮肤老化迹象。
芦丁为黄酮类化合物，是清除自由基的强氧化剂，它可终止自由基的连锁反应，抑制生物膜上多不饱合脂肪酸的过氧化作用，清除脂质过氧化产物，保护生物膜及亚细胞结构的完整性，在机体内起着重要作用。氧分子在细胞代谢中是以单电子形式还原的，氧分子在单电子还原产生的O离子，体内继而产生H2O2以及毒性极大的羟基自由基，因此影响皮肤的嫩滑程度，甚至加速皮肤老化程度，而产品中添加芦丁能很明显地清除细胞产生的活性氧自由基。
黄酮类化合物抗氧化作用是通过酚羟基与自由基反应形成稳定的半醌式自由基结构而发生反应的，酚羟基是黄酮类化合物发挥抗氧化作用的主要基团。研究发现黄酮类化合物各环上羟基的活性相差很大，B环的酚羟基活性最高。而氢键对抗氧化剂清除自由基的能力是增强还是减弱,取决于从反应物到中间过渡态时氢键带来的稳定性是增强还是减弱。
SOD即超氧化物歧化酶，是人体细胞代谢不可缺少的活性蛋白酶。是一种金属酶。人们在研究中发现SOD是机体代谢所产生的有害物质超氧阴离子自由基的天然清除剂。机体在代谢中产生的自由基以氧自由基对机体危害最大。氧自由基包括超氧阴离子自由基、羟基自由基、过氧化氢及单线态氧等，这些都是机体正常代谢对的产物，其中超氧阴离子自由基就可以被SOD清除。
研究开发广谱、高效、安全的天然抗氧化剂，已成为当今研究领域中的热点之一。一些研究表明，某些复合抗氧化剂的抗氧化活性高于各组分在添加浓度下的活性之和，多种抗氧化剂联合使用，其效果往往要大于使用同剂量的单一抗氧化剂的效果。因此研究抗氧化剂之间的协同增效作用，寻找高效、低毒的复合型天然抗氧化剂对于高效利用抗氧化剂具有重要意义。
综述所述，芦丁作为一种高活性的抗氧化剂可以有效的捕获氧化自由基或过氧化自由基，低活性抗氧化剂PSF-SOD1能够提供氢原子，使高活性的芦丁再生，保持长久的抗氧化效能，所以，将PSF-SOD1与芦丁结合使用，可以起到一个协同增效的作用。
优选地，所述芦丁和所述PSF-SOD1的质量之比为1：(1-2)。
作为优选，所述乳化剂为PEG-9、聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷中一种或多种；
优选的，所述增稠剂为角鲨烷或甲基丙烯酸甲酯交联聚合物；
优选的，所述柔润剂为单硬脂酸甘油酯、异十三醇异壬酸酯和环五聚二甲基硅氧烷中一种或多种；
优选的，所述保湿剂为透明质酸钠、甘油、丁二醇、丙二醇和聚乙二醇400中一种或多种。
作为优选，所述化学防晒剂为二氧化钛、氧化锌、奥克立林中一种或多种。
按照本发明的另一方面，提供了一种所述的PSF-SOD1和芦丁的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)PSF-SOD1蛋白的构建，通过PCR方法，扩增出SOD1片段，随后将SOD1产物与线性载体通过重组酶进行重组，从将重组质粒转化DH5α感受态宿主菌，培养分离后获得PSF-SOD1蛋白；
(2)制备PSF-SOD1-芦丁复合物：PSF-SOD1蛋白加入PBS中，将芦丁投入反应体系中，加热充分反应，制得PSF-SOD1-芦丁的复合物；
(3)将乳化剂、增稠剂、柔润剂、保湿剂、化学防晒剂和水混合均匀均质乳化后，加入PSF-SOD1-芦丁的复合物，即可获得所述PSF-SOD1和芦丁的组合物。
作为优选，所述步骤(1)中PSF-SOD1蛋白的构建具体如下：
(1-1)PSF-SOD1蛋白的构建：通过PCR方法，以LO2细胞cDNA为模板，扩增出SOD1片段；对载体PET15b进行Nco I/Xho I双酶切，得到线性载体；将SOD1产物与线性载体通过重组酶进行重组，从将重组质粒转化DH5α感受态宿主菌，培养，测序，平板上挑选单菌落接种于含0.1Amp以上的LB培养基，培养，收集诱导表达后的菌体；
(1-2)将诱导表达菌液离心分离收集菌体，加入冰预冷的PBS，重悬后置冰浴中进行超声破碎处理，离心后取上清液，纯化浓缩，得PSF-SOD1蛋白。
作为优选，所述步骤(2)中PSF-SOD1-芦丁复合物反应温度为35-50℃。
作为优选，所述步骤(3)中将乳化剂、增稠剂、柔润剂、保湿剂、化学防晒剂和水混合均匀均质乳化，具体为：
(3-1)制备水相，将化学防晒剂、保湿剂和水加入到容器中加热混合均匀，得到组分A；
(3-2)制备油相，将乳化剂、增稠剂、柔润剂加入容器中，加热混合均匀，得到组分B；
(3-3)将组分A和组分B混合均匀后均质乳化。
作为优选，(3-1)和(3-2)中搅拌温度为80-85℃。
按照本发明的另一方面，提供了一种所述的PSF-SOD1和芦丁的组合物在美白中的应用。
本发明的有益效果有：
(1)本发明使用PSF-SOD1和芦丁的组合进行防晒，芦丁作为一种高活性的抗氧化剂可以有效的捕获氧化自由基或过氧化自由基，低活性抗氧化剂PSF-SOD1能够提供氢原子，使高活性的芦丁再生，保持长久的抗氧化效能，将PSF-SOD1与芦丁结合使用，可以起到一个协同增效的作用，实现防晒、抗氧化。
(2)本发明芦丁和PSF-SOD1的质量之比为1：(1-2)，具有较好的体外抗氧化清除自由基的能力，获得的防晒霜对皮肤紫外损伤的症状具有较好的防护作用。
附图说明
图1为PSF-SOD1-芦丁复合物对DPPH自由基清除率的测试结果图；
图2为PSF-SOD1-芦丁复合物对羟基自由基清除率的测试结果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
实施例
实施例1
一种含PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜，包括以下含量的组分：
PSF-SOD1-芦丁复合物150g，氧化锌60g，奥克立林40g，聚乙二醇40050g，PEG-9聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷30g，聚二甲基硅氧烷40g，单硬脂酸甘油酯50g，角鲨烷60g，EDTA二钠20g，甘油40g，透明质酸钠60g，苯氧乙醇0.30g，丁二醇30g，丙二醇20g，维生素E10g，其余为水。
所述PSF-SOD1-芦丁复合物，通过以下方法制备而成：
(1)PSF-SOD1蛋白的构建：通过PCR方法，以LO2细胞cDNA为模板，扩增出SOD1片段；对载体PET15b进行Nco I/Xho I双酶切，得到线性载体；将SOD1产物与线性载体通过重组酶进行重组，从将重组质粒转化DH5α感受态宿主菌，培养，测序。平板上挑选单菌落接种于含0.1Amp的LB培养基，培养，收集诱导表达后的菌体。将诱导表达菌液12000r/min离心5min，收集菌体，加入冰预冷的PBS，重悬后置冰浴中进行超声破碎处理。超声处理完毕，于4℃、13000r/min离心15min，取上清液。镍柱纯化，超滤管浓缩，得PSF-SOD1蛋白。
(2)PSF-SOD1-芦丁复合物：PSF-SOD1蛋白加入PBS中，将芦丁投入反应体系中(PSF-SOD1与芦丁的比例为1:1)，加热至40℃，磁力搅拌器上搅拌6-8小时，让其充分反应，即制得PSF-SOD1-芦丁1:1的复合物。
(3)将氧化锌、透明质酸钠、甘油、丁二醇、丙二醇、维生素E、苯氧乙醇和水加入到容器中，在80℃、2000r/min下搅拌3h，混合均匀，得到组分A；
(4)将奥克立林，聚乙二醇400，PEG-9聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷，聚二甲基硅氧烷，单硬脂酸甘油酯，角鲨烷加入容器中，在80～85℃、2000r/min下搅拌1～2h，混合均匀，得到组分B；
(5)将组分A与组分B混合，50r/min搅拌10min，然后2000r/min搅拌3min，降温至30℃均质乳化后，加入PSF-SOD1-芦丁1:1的复合物，混合均匀，制得抗氧化、抗紫外线强的防晒霜。
实施例2
一种含PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜，包括以下含量的组分：
PSF-SOD1-芦丁1:2的复合物：氧化锌6g，奥克立林4g，聚乙二醇4005g，PEG-9聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷3g，聚二甲基硅氧烷4g，单硬脂酸甘油酯5g，角鲨烷6g，EDTA二钠2g，甘油4g，透明质酸钠6g，苯氧乙醇0.3g，丁二醇3g，丙二醇2g，维生素E1g，其余为水。
所述PSF-SOD1-芦丁复合物的制备方法如下：
(1)PSF-SOD1蛋白的构建：通过PCR方法，以LO2细胞cDNA为模板，扩增出SOD1片段；对载体PET15b进行Nco I/Xho I双酶切，得到线性载体；将SOD1产物与线性载体通过重组酶进行重组，从将重组质粒转化DH5α感受态宿主菌，培养，测序。平板上挑选单菌落接种于含0.1Amp的LB培养基，培养，收集诱导表达后的菌体。将诱导表达菌液12000r/min离心5min，收集菌体，加入冰预冷的PBS，重悬后置冰浴中进行超声破碎处理。超声处理完毕，于4℃、13000r/min离心15min，取上清液。镍柱纯化，超滤管浓缩，得PSF-SOD1蛋白。
(2)PSF-SOD1-芦丁1:2的复合物：PSF-SOD1蛋白加入PBS中，将芦丁投入反应体系中(PSF-SOD1与芦丁的比例为1:2)，加热至50℃，磁力搅拌器上搅拌8小时，让其充分反应，即制得PSF-SOD1-芦丁1:2的复合物。
(3)将氧化锌、透明质酸钠、甘油、丁二醇、丙二醇、维生素E、苯氧乙醇和水加入到容器中，在80℃、2000r/min下搅拌3h，混合均匀，得到组分A；
(4)将奥克立林，聚乙二醇400，PEG-9聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷，聚二甲基硅氧烷，单硬脂酸甘油酯，角鲨烷加入容器中，在85℃、2000r/min下搅拌2h，混合均匀，得到组分B；
(5)将组分A与组分B混合，均质乳化后，加入PSF-SOD1-芦丁1:2的复合物，混合均匀，制得防晒霜。
实施例3：
一种含PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜，包括以下含量的组分：
PSF-SOD1-芦丁2:1的复合物：氧化锌6％，奥克立林4％，聚乙二醇4005％，PEG-9聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷3％，聚二甲基硅氧烷4％，单硬脂酸甘油酯5％，角鲨烷6％，EDTA二钠2％，甘油4％，透明质酸钠6％，苯氧乙醇0.3％，丁二醇3％，丙二醇2％，维生素E1％，其余为水。
所述PSF-SOD1-芦丁复合物的制备方法如下：
(1)PSF-SOD1蛋白的构建：通过PCR方法，以LO2细胞cDNA为模板，扩增出SOD1片段；对载体PET15b进行Nco I/Xho I双酶切，得到线性载体；将SOD1产物与线性载体通过重组酶进行重组，从将重组质粒转化DH5α感受态宿主菌，培养，测序。平板上挑选单菌落接种于含0.1Amp的LB培养基，培养，收集诱导表达后的菌体。将诱导表达菌液12000r/min离心5min，收集菌体，加入冰预冷的PBS，重悬后置冰浴中进行超声破碎处理。超声处理完毕，于4℃、13000r/min离心15min，取上清液。镍柱纯化，超滤管浓缩，得PSF-SOD1蛋白。
(2)PSF-SOD1-芦丁2:1的复合物：PSF-SOD1蛋白加入PBS中，将芦丁投入反应体系中(PSF-SOD1与芦丁的比例为2:1)，加热至40℃，磁力搅拌器上搅拌8小时，让其充分反应，即制得PSF-SOD1-芦丁2:1的复合物。
(3)将氧化锌、透明质酸钠、甘油、丁二醇、丙二醇、维生素E、苯氧乙醇和水加入到容器中，在80～85℃、2000r/min下搅拌3h，混合均匀，得到组分A；
(4)将奥克立林，聚乙二醇400，PEG-9聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷，聚二甲基硅氧烷，单硬脂酸甘油酯，角鲨烷加入容器中，在85℃、2000r/min下搅拌2h，混合均匀，得到组分B。
(5)将组分A与组分B混合，均质乳化后，加入PSF-SOD1-芦丁2:1的复合物，混合均匀，制得抗氧化、抗紫外线强的防晒霜。
测试实施例1
PSF-SOD1-芦丁复合物对DPPH自由基清除活性评价：取一定浓度的样品0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL于试管中加入双蒸水定容至2mL，每管分别加入2mL 0.02％的DPPH溶液，空白对照组用双蒸水代替样品，记录各组在517nm的吸光值Ai和A0。根据公式(清除率(％)＝(A0-Ai)/A0×100％)(式中，Ai表示样品组、A0表示空白对照组)，计算样品对DPPH自由基的抑制率。
PSF-SOD1芦丁复合物对羟自由基清除活性评价：配制浓度分别为0.5、1、1.5、2、2.5mg/mL的PSF-SOD1-芦丁复合物样品溶液和抗坏血酸溶液，各取其2mL，加入硫酸铁溶液和H2O2溶液，摇匀。室温下10min，加入水杨酸溶液，然后室温下30min。将蒸馏水作为空白对照，将紫外可见分光光度计设置在波长510nm处，测定其吸光度A样品。用蒸馏水代替水杨酸，按上述方法测定吸光度A对照，用蒸馏水代替PSF-SOD1芦丁复合物样品溶液，按上述方法测定吸光度A空白。计算三组平行实验的平均值。根据公式(清除率(％)＝[1-(Ai-A对照)/A0]×100％(式中，Ai表示样品组、A0表示空白对照组)，计算样品对羟自由基的抑制率。
DPPH自由基清除实验和羟基自由基清除实验是为了验证所制备的PSF-SOD1芦丁复合物的体外抗氧化性功效，如图1所示，其实验结果可看出，PSF-SOD1芦丁复合物对DPPH自由基的清除能力随着给药浓度的增加而增强，浓度8mg/mL时清除率为95.27％；如图2所示，PSF-SOD1芦丁复合物对羟基自由基清除能力随着给药浓度的增加而增强，浓度3.5mg/mL时清除率可达92.75％。以上结果说PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜具有较好的体外抗氧化清除自由基的能力。
测试实施例2
PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜的抗紫外线能力评价：
1、将30只小鼠以数字编号，平均分为6组，每组5只，分别为正常组、模型组、阳性对照组(市售防晒霜)、PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜低剂量组、PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜高剂量组。
正常组：对小鼠背部脱毛(面积为2cm×2cm)，此外不做任何实验处理；
模型组：对小鼠背部脱毛(面积为2cm×2cm)，涂布不含PSF-SOD1-芦丁复合物的防晒霜基质，给予UVB照射；
阳性对照组：对小鼠背部脱毛(面积为2cm×2cm)，每只小鼠背部皮肤均匀涂布市售防晒霜0.2g，给药2h后，进行UVB照射；
PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜低剂量组：对小鼠背部脱毛(面积为2cm×2cm)，每只小鼠背部皮肤均匀涂布PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜0.5％，给药2h后，进行UVB照射；
PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜高剂量组：对小鼠背部脱毛(面积为2cm×2cm)，每只小鼠背部皮肤均匀涂布PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜1％，给药2h后，进行UVB照射；
2、紫外损伤小鼠模型的制备：
使用UVB灯管，距离小鼠背部皮肤30cm处照射，每次照射前2h外涂药物。UVB等在照射前15min开启预热，当辐射稳定后，进行照射，每天照射2h，共计照射天数15d。照射期间，每天记录小鼠皮肤状态的改变情况，例如：红肿、脱皮、褶皱、结痂等。
3、PSF-SOD1-芦丁复合物对UVB诱导小鼠紫外损伤的防治作用：
实验第7天，正常小鼠背部皮肤未见明显变化，肉眼观察皮肤呈现正常的纹理。经UVB照射后，模型组小鼠背部皮肤红肿，伴有脱皮现象，皮肤褶皱发硬；阳性药市售防晒霜组小鼠背部皮肤损伤不明显，皮肤较薄、皱纹极少，比较饱满，提示市售防晒霜对紫外损伤皮肤有较好的防护作用；PSF-SOD1-芦丁复合物低剂量组小鼠的皮肤损伤减轻，出现红点，但向红肿发展的速度比较缓慢，皮肤较薄，皮肤皱纹、粗糙现象有所改善；PSF-SOD1-芦丁复合物高剂量组小鼠皮肤损伤不明显，皮肤较薄、皱纹较少，较为饱满。上述结果说明本发明的PSF-SOD1-芦丁复合物防晒霜对皮肤紫外损伤的症状具有较好的防护作用。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种PSF-SOD1和芦丁的组合物，其特征在于，按照重量份数计，包括芦丁1-5份，PSF-SOD11-10份，乳化剂3-5份，增稠剂0.5-1份，柔润剂5-15份，保湿剂5-10份，化学防晒剂5-10份，水50-70份。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述芦丁和所述PSF-SOD1的质量之比为1：(1-2)。
3.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述乳化剂为PEG-9、聚二甲基硅氧乙基聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷中一种或多种；
优选的，所述增稠剂为角鲨烷或甲基丙烯酸甲酯交联聚合物；
优选的，所述柔润剂为单硬脂酸甘油酯、异十三醇异壬酸酯和环五聚二甲基硅氧烷中一种或多种；
优选的，所述保湿剂为透明质酸钠、甘油、丁二醇、丙二醇和聚乙二醇400中一种或多种。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述化学防晒剂为二氧化钛、氧化锌和奥克立林中一种或多种。
5.根据权利要求1-4任一项所述的PSF-SOD1和芦丁的组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)PSF-SOD1蛋白的构建，通过PCR方法，扩增出SOD1片段，随后将SOD1产物与线性载体通过重组酶进行重组，从将重组质粒转化DH5α感受态宿主菌，培养分离后获得PSF-SOD1蛋白；
(2)制备PSF-SOD1-芦丁复合物：PSF-SOD1蛋白加入PBS中，将芦丁投入反应体系中，加热充分反应，制得PSF-SOD1-芦丁的复合物；
(3)将乳化剂、增稠剂、柔润剂、保湿剂、化学防晒剂和水混合均匀均质乳化后，加入PSF-SOD1-芦丁的复合物，即可获得所述PSF-SOD1和芦丁的组合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中PSF-SOD1蛋白的构建具体如下：
(1-1)PSF-SOD1蛋白的构建：通过PCR方法，以LO2细胞cDNA为模板，扩增出SOD1片段；对载体PET15b进行Nco I/Xho I双酶切，得到线性载体；将SOD1产物与线性载体通过重组酶进行重组，从将重组质粒转化DH5α感受态宿主菌，培养，测序，平板上挑选单菌落接种于含0.1Amp以上的LB培养基，培养，收集诱导表达后的菌体；
(1-2)将诱导表达菌液离心分离收集菌体，加入冰预冷的PBS，重悬后置冰浴中进行超声破碎处理，离心后取上清液，纯化浓缩，得PSF-SOD1蛋白。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中PSF-SOD1-芦丁复合物反应温度为35-50℃。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中将乳化剂、增稠剂、柔润剂、保湿剂、化学防晒剂和水混合均匀均质乳化，具体为：
(3-1)制备水相，将化学防晒剂、保湿剂和水加入到容器中加热混合均匀，得到组分A；
(3-2)制备油相，将乳化剂、增稠剂、柔润剂加入容器中，加热混合均匀，得到组分B；
(3-3)将组分A和组分B混合均匀后均质乳化。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3-1)和步骤(3-2)中搅拌温度为80-85℃。
10.根据权利要求1-7任一项所述的PSF-SOD1和芦丁的组合物在化妆品领域中的应用。
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