CN101808661A - 抗IgE抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及特异性针对人免疫球蛋白E(抗IgE)的新型人抗体。本发明还涉及用于治疗哮喘，尤其是变应性哮喘，以及其他IgE介导的病症，包括变应性鼻炎和食物过敏的药物组合物和方法。

Description

抗IgE抗体
发明领域
本发明涉及特异性针对人免疫球蛋白E(抗IgE)的新型人抗体。本发明的抗体特别适合于治疗哮喘，尤其是变应性哮喘，以及其他IgE介导的病症，包括变应性鼻炎和食物过敏。
发明背景
哮喘是气道的慢性炎性病症，引起易感个体中的喘息、气绝、胸部紧迫感和/或咳嗽的反复发作。本领域技术人员区分各种类型的哮喘，包括：变应性哮喘，其被认为在已发展针对环境变应原的超敏性的患者中出现；药物性哮喘，一般由针对阿司匹林或其他COX抑制剂的敏感性触发；运动性哮喘；濒死性哮喘和过急性哮喘；夜间哮喘；职业性哮喘，一般由暴露于工作场所中的特定化学制品引起。因此哮喘可以由各种刺激触发，包括：空气变应原，例如尘螨、花粉、动物毛屑、真菌孢子、羽毛......(外因性哮喘)；非特异性刺激剂，例如烟草烟雾、化学烟尘、污染、二氧化硫......(内因性哮喘)。
免疫球蛋白E(IgE)已显示涉及变应性反应，特别是变应性哮喘。最近，单克隆抗体(奥马珠单抗，也称为E25，在商品名
Figure G2008800104874D00011
下出售；Presta等人J Immunol.1993 Sep 1；151(5)：2623-32.)获得来自全世界的几个机构的批准。尽管显示出针对几种哮喘的功效，但这种抗体仍具有某些缺点。首先，这是人源化的鼠类单克隆抗体，并且像这样不完全排除人患者中的免疫反应，从而可能产生某些安全担心。其次，在治疗几种哮喘中使用的奥马珠单抗的剂量基于体重和循环游离IgE的水平。其体重和循环游离IgE偏离指定范围的患者不推荐使用这种治疗。可以治疗的那些患者可能需要接受每2周一次的高达3次皮下注射。这严重影响治疗成本，以及患者的生活质量。
希望提供全人抗IgE单克隆抗体，其将使关于在人患者中使用鼠类抗体的任何担心降到最低。此外，希望提供更有效的抗IgE单克隆抗体。增加的效力一般将导致下述利益：需要较低的剂量以达到临床利益，需要较少的注射体积(对于皮下施用)、较低的治疗成本、增加的治疗成功机率、在治疗方案中减少的施用频率，从而提供关于更广泛的治疗群体的治疗成功，包括具有更高体重和/或更高水平的循环IgE的患者，并且改善患者的生活质量。
发明概述
本发明涉及针对人IgE的人抗体(本文有时称为抗IgE抗体)、或其抗原结合部分。
在另一个实施方案中，针对人IgE的抗IgE抗体或其部分具有0.5μg/mL或更小的IC50，如通过其在细胞结合测定法中减少IgE结合的能力测量的，使用由人FcεR1转染的RBL-2H3细胞系。
在一个进一步的实施方案中，抗IgE抗体或其部分具有0.5μg/mL或更小的IC50，如通过其抑制由人FcεR1转染的RBL-2H3细胞系的IgE介导的脱颗粒能力测量的，其中RBL-2H3(FcεR1)细胞与抗IgE抗体和人IgE一起培养48小时，洗涤以去除抗IgE：IgE复合物，留下与FcεR1结合的IgE，然后用使结合的IgE交联的多克隆抗IgE抗体进行刺激，导致IgE介导的脱颗粒。在一个进一步的实施方案中，所述IC50小于0.2μg/mL、小于0.1μg/mL、小于0.08μg/mL或小于0.02μg/mL。
在另一个实施方案中，针对人IgE的抗体或其抗原结合部分不使受体结合的IgE交联，并且不刺激RBL-2H3(FcεR1)细胞的IgE依赖性脱颗粒，所述RBL-2H3(FcεR1)细胞与人IgE一起培养48小时，然后洗涤以去除未结合的IgE。本发明的针对人IgE的抗体或其抗原结合部分不具有分离的RBL-2H3(FcεR1)的激动活性。
在另一个实施方案中，针对人IgE的抗体或其抗原结合部分不使受体结合的IgE交联，并且不刺激与人IgE一起培养过夜的人血液嗜碱性粒细胞的IgE依赖性脱颗粒。本发明的针对人IgE的抗体或其抗原结合部分不具有分离的人血液嗜碱性粒细胞的激动活性。
在另一个实施方案中，针对人IgE的抗体或其抗原结合部分对于IgE是高度选择性的，超过人IgA、IgG1和IgG3。
在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合部分以15nM或更小的亲和常数KD与全长人IgE结合，如通过表面等离子体共振(BIAcore)测量的。在一个进一步的实施方案中，KD值小于10nM、小于5nM或小于3nM，如通过表面等离子体共振测量的。在特定实施方案中，KD是1pM-100nM。在其他实施方案中，KD是1pM-5nM。在其他实施方案中，KD是1pM-300pM、或1pM-200pM或小于160pM。在另一个实施方案中，抗体或其部分具有关于人IgE 2×10-4s-1或更小的解离速率(kOff)，如通过表面等离子体共振测量的。例如，在特定实施方案中，抗体或部分具有关于人IgE小于1.5×10-4s-1、小于9×10-5s-1、小于5×10-5s-1或小于2.5×10-5s-1的kOff。在另一个实施方案中，抗体或其部分具有关于人IgE超过1×104M-1s-1、超过2×104M-1s-1、超过3×104M-1s-1、超过1×105M-1s-1或超过1.5×105M-1s-1的结合率(ka)。此种K值可以通过本领域技术人员已知的任何技术进行测量，例如通过ELISAs、RIAs、流式细胞术、或表面等离子体共振例如BIACORE(TM)。
在另一个实施方案中，针对人IgE的抗体或其抗原结合部分与食蟹猴IgE交叉反应。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分与选自下述的抗体竞争结合人IgE：重组5.396.1；5.396.1 Hc-S103N Lc-K61R；重组6.605.1；6.605.1(H3Q，M13K，D82E-T25A，T53S)；重组5.948.1.和5.948.1 H100Y。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分与和选自下述的抗体相同的人IgE表位结合：重组5.396.1；5.396.1 Hc-S103N Lc-K61R；重组6.605.1；6.605.1(H3Q，M13K，D82E-T25A，T53S)；重组5.948.1.和5.948.1 H100Y。
在一个方面，本发明提供了针对人IgE的人抗体、或其抗原结合部分，其中所述抗体具有约0.1-30μg/mL的IC25ng/mL(100-5000ng/mL)，其中IC25ng/mL(100-5000ng/mL)定义为使血清样品中的游离IgE浓度从约100-5000ng/mL的起始浓度减少为约25ng/mL的浓度所需的体外抗体浓度。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的人抗体、或其抗原结合部分，其中所述抗体具有约1-25μg/mL的IC25ng/mL(500-1500ng/mL)，其中IC25ng/mL(500-1500ng/mL)定义为使血清样品中的游离IgE浓度从约500-1500ng/mL的起始浓度减少为约25ng/mL的浓度所需的体外抗体浓度。
在一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分包含具有选自SEQ ID NO：10、30、50、70、90和130的序列的H-CDR3。
在一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分包含具有选自SEQ ID NO：20、40、60、80、100和140的序列的L-CDR3。
在一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：10的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：20的序列的LCDR3的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：30的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：40的序列的LCDR3的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：50的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：60的序列的LCDR3的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：70的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：80的序列的LCDR3的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：90的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：100的序列的LCDR3的抗体
-包含具有SEQ ID NO：130的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：140的序列的LCDR3的抗体
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含分别具有SEQ ID NO：6、8、10的序列的H-CDRs(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：26、28、30的序列的H-CDRs(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：46、48、50的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：66、68、70的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：86、88、90的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；和
-包含分别具有SEQ ID NO：126、128、130的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含分别具有SEQ ID NO：16、18、20的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：36、38、40的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：56、58、60的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：76、78、80的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：96、98、100的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；和
-包含分别具有SEQ ID NO：136、138、140的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含分别具有SEQ ID NO：6、8、10的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：16、18、20的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：26、28、30的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：36、38、40的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：46、48、50的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：56、58、60的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：56、58、60的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：66、68、70的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：66、68、70的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：76、78、80的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：86、88、90的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：96、98、100的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；和
-包含分别具有SEQ ID NO：126、128、130的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：136、138、140的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体。
在另一个实施方案中，抗I gE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：84的序列的H可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：124的序列的H可变结构域的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：74的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：94的序列的L可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：134的序列的L可变结构域的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：74的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：74的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：84的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：94的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：124的序列的H可变结构域；和具有SEQID NO：94的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：84的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：134的序列的L可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：124的序列的H可变结构域；和具有SEQID NO：134的序列的L可变结构域的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：2的序列的H链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：12的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：32的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：52的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：72的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：92的序列的L链的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：132的序列的L链的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：2的序列的H链；和具有SEQ ID NO：12的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链；和具有SEQ ID NO：12的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链；和具有SEQ ID NO：32的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：2的序列的H链；和具有SEQ ID NO：32的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链；和具有SEQ ID NO：52的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链；和具有SEQ ID NO：52的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链；和具有SEQ ID NO：72的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链；和具有SEQ ID NO：72的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链；和具有SEQ ID NO：92的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链；和具有SEQ ID NO：132的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链；和具有SEQ ID NO：92的序列的L链的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链；和具有SEQ ID NO：132的序列的L链的抗体。
在一个进一步的实施方案中，抗I gE抗体或其部分选自：
-包含由SEQ ID NO：1的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：11的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：21的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：31的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：41的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：51的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：61的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：71的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：81的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：91的核酸序列编码的L链序列的抗体；和
-包含由SEQ ID NO：121的核酸序列编码的H链序列；和由SEQID NO：131的核酸序列编码的L链序列的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分(至所述部分包含至少部分重链恒定区的程度)是IgG1或IgG2亚型。在另一个方面，本发明提供了如上所述的抗体或部分的变体，其中所述变体与抗体或部分相差1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换。
在另一个方面，本发明提供了编码如上所述的抗体或部分的一条链的核酸序列。
在一个进一步的方面，本发明提供了包含编码如上所述的抗体或部分的一条链的核酸序列的载体。
在一个进一步的方面，本发明提供了适合于表达如上所述的抗体或部分的一条链的载体。
在另一个方面，本发明提供了表达如上所述的抗体或部分的一条链的细胞。
在另一个方面，本发明提供了用于制备如上所述的抗体或部分的方法，其包括培养如上所述的细胞，并且回收所述抗体或其部分。
在一个方面，抗体或其部分用于作为药物使用。
在另一个方面，抗体或其部分用于治疗选自下述的IgE介导的病症：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
在一个方面，本发明提供了包含如上所述的抗体或其部分的药物组合物。
在一个实施方案中，所述药物组合物用于治疗选自下述的IgE介导的病症：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗有此需要的受试者中选自下述的IgE介导的病症的方法：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的如上所述的抗体或其部分。
在另一个方面，本发明提供了如上所述的抗体或其部分在制备药物用于治疗选自下述的IgE介导的病症中的用途：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
在一个方面，本发明提供了选自下述的核酸序列：SEQ ID NO：1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、105、107、109、111、121、123、131和133。
在一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体选自：
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：74的序列的L可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：84的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：94的序列的L可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：124的序列的H可变结构域；和具有SEQID NO：134的序列的L可变结构域的抗体。
在一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：2的序列的H链；和具有SEQ ID NO：12的序列的L链。
在另一个方面，本发明提供了针对IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链；和具有SEQ ID NO：32的序列的L链。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链；和具有SEQ ID NO：52的序列的L链。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链；和具有SEQ ID NO：72的序列的L链。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链；和具有SEQ ID NO：92的序列的L链。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链；和具有SEQ ID NO：132的序列的L链。
在一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7977的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7982的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日在美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7981的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7980的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日在美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7985的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7984的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日在美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7983的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7978的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日在美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7979的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7986的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日在美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA。
在一个方面，本发明的上述抗体用于作为药物使用。
在另一个方面，本发明的上述抗体用于治疗选自下述的IgE介导的病症：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
在一个方面，本发明提供了包含如上所述的抗体的药物组合物。
在另一个方面，所述药物组合物用于治疗选自下述的IgE介导的病症：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
在一个方面，本发明提供了用于治疗有此需要的受试者中选自下述的IgE介导的病症的方法：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏，所述方法包括给所述受试者施用治疗有效量的如上所述的抗体。
在另一个方面，本发明提供了如上所述的抗体在制备药物用于治疗选自下述的IgE介导的病症中的用途：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
附图简述
图1和2显示了来自关于本发明的示例性抗IgE抗体的激动活性测定法(RBL-2H3(FcεR1)细胞测定法)的结果；
图3和4显示了来自关于本发明的示例性抗IgE抗体的激动活性测定法(人血液嗜碱性粒细胞测定法)的结果；和
图5显示了关于本发明的示例性抗I gE抗体的表位框并图。
发明详述
定义和一般技术
除非本文另有说明，与本发明结合使用的科学和技术术语应具有由本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另有要求，单数术语应包括复数，和复数术语应包括单数。一般地，与本文描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白质和核酸化学和杂交结合使用的专有名词和技术是本领域众所周知且通常使用的。
本发明的方法和技术一般根据本领域众所周知并且如各种一般和更专门的参考文献中描述的常规方法来执行，除非另有说明，所述参考文献在本说明书自始至终加以引用和讨论。参见例如，Sambrook J.& Russell D.Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第3版，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(2000)；Ausubel等人，Short Protocols in Molecular Biology：A Compendium of Methods from Current Protocols in MolecularBiology，Wiley，John & Sons，Inc.(2002)；Harlow and Lane UsingAntibodies：A Laboratory Manual Cold Spring Harbor LaboratoryPress，Cold Spring Harbor，N.Y.(1998)；和Coligan等人，ShortProtocols in Protein Science，Wiley，John & Sons，Inc.(2003)。酶促反应和纯化技术根据制造商的说明书来执行，如本领域通常完成的或如本文描述的。与本文描述的分析化学、合成有机化学、以及医学和药物化学结合使用的专有名词以及实验室操作和技术是本领域众所周知且通常使用的。
本说明书和权利要求自始至终，单词“包含”应理解为暗示包括所述整数或整数组，但不排除任何其他整数或整数组。
抗体相关定义
如本文所使用的，术语“种系”指抗体基因和基因区段的核苷酸序列和氨基酸序列，因为它们经由生殖细胞由双亲传递给后代。这种种系序列区别于成熟B细胞中编码抗体的核苷酸序列，其已通过B细胞成熟过程中发生的重组和高突变事件加以改变。“利用”特定种系的抗体具有这样的核苷酸或氨基酸序列，其与种系核苷酸序列或它指定的氨基酸序列最密切地比对。与种系序列比较，此种抗体通常是突变的。如本文所使用的，术语“ELISA”指酶联免疫吸附测定法。这种测定法是本领域技术人员众所周知的。这种测定法的例子可以在Vaughan，T.J.等人，Nature Biotech.14：309-314(1996)以及本申请的实施例中找到。
如本文所使用的，术语“表面等离子体共振”指这样的光学现象，其允许通过检测生物传感器矩阵内的蛋白质浓度改变来分析实时生物特异性相互作用，例如使用BIAcoreTM系统(Pharmacia Biosensor AB，Uppsala，Sweden and Piscataway，NJ.)。关于进一步的描述，参见Jonsson等人，Ann.Biol.Clin.51：19-26(1993)；Jonsson等人，Biotechniques 11：620-627(1991)；Jonsson等人，J.Mol.Recognit.8：125-131(1995)；和Johnsson等人，Anal.Biochem.198：268-277(1991)。
术语“亲和力”指抗原和抗体之间的吸引力的测量。抗体对于抗原的固有吸引力一般表示为特定抗体-抗原相互作用的结合亲和力平衡常数(KD)。当KD≤1mM、优选≤100nM时，抗体被说成特异性结合抗原。KD结合亲和常数可以通过表面等离子体共振进行测量，例如使用BIAcoreTM系统，如下文实施例中讨论的。
术语“koff”指特定抗体-抗原相互作用的解离速率常数。koff解离速率常数可以通过表面等离子体共振进行测量，例如使用BIAcore系统，如下文实施例中讨论的。
术语“表位”包括能够与免疫球蛋白或T细胞受体特异性结合或以其他方式与分子相互作用的任何蛋白质决定簇。表位决定簇一般由分子的化学活性表面分组，例如氨基酸或碳水化合物或糖侧链组成，并且一般具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。表位可以是“线性的”或“构象的”。在线性表位中，蛋白质和相互作用分子(例如抗体)之间的所有相互作用点沿着蛋白质的原始氨基酸序列线性存在。在构象表位中，相互作用点越过蛋白质上彼此分开的氨基酸残基存在。一旦测定了抗原上的所需表位，就可以产生针对那个表位的抗体，例如使用本发明中描述的技术。备选地，在开发过程中，抗体的产生和表征可以阐明关于所需表位的信息。根据这种信息，随后可以竞争性筛选与相同表位结合的抗体。达到这点的方法是执行竞争研究，以发现彼此竞争性结合的抗体，即竞争结合抗原的抗体。
可以通过使用本领域已知的方法测定抗体与相同表位结合还是交叉竞争结合抗IgE抗体。在一个实施方案中，允许本发明的抗IgE抗体在饱和条件下与IgE结合，然后测量测试抗体与IgE结合的能力。如果测试抗体能够与参考抗IgE抗体同时与IgE结合，那么测试抗体与和参考抗IgE抗体不同的表位结合。然而，如果测试抗体无法同时与IgE结合，那么测试抗体与相同表位、重叠表位或与由本发明的抗IgE抗体结合的表位紧密接近的表位结合。这个实验可以使用ELISA、RIA、BIACORETM或流式细胞术来执行。为了测试抗IgE抗体是否与另一种抗IgE抗体交叉竞争，可以以2个方向使用上文描述的竞争方法，即测定已知抗体是否阻断测试抗体并且反之亦然。在一个优选实施方案中，实验使用BIACORETM来执行。
基于其交叉竞争的用于“框并”抗体的高流通量过程在国际专利申请号WO 03/48731中描述。
如本文所使用的，术语“框并”指基于其抗原结合特征给抗体分组的方法。框的指定略微是任意的，依赖对于所有测试抗体观察到的框并模式如何不同。因此，框不一定与通过其他方式测定的表位相关，并且不应用于限定表位。
本发明的抗IgE抗体
本发明涉及针对人IgE的人抗体、或其抗原结合部分。除非另有说明，如本文所使用的，“IgE”指人IgE(人免疫球蛋白E)。
如本文所使用的，术语(完整的)“抗体”(Ab)或“免疫球蛋白”(Ig)指包含通过二硫键互相连接的2条重(H)链(约50-70kDa)和2条轻(L)链(约25kDa)。仅存在2个类型的轻链：λ和κ。在人中，它们是相似的，但每种抗体中仅存在一个类型。重链分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别使抗体的同种型限定为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。一般参见，Fundamental Immunology第7章(Paul，W.，编辑，第2版Raven Press，N.Y.(1989))。
每条重链(本文有时称为H链或Hc)由重链可变结构域(VH或H可变结构域)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域——CH1、CH2和CH3组成。每条轻链(本文有时称为L链或Lc)由轻链可变结构域(VL或L可变结构域)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由1个结构域——CL组成。在轻和重链内，可变和恒定区由约12个或更多氨基酸的“J”区连接，其中重链还包括约3个或更多氨基酸的“D”区。VH和VL区可以进一步再分成称为“互补决定区”(CDR)的高变区，由称为“构架区”(FR)的更保守区域隔开。每个VH和VL由3个CDRs(H-CDR在本文中指示来自重链的CDR；和L-CDR在本文中指示来自轻链的CDR)和4个FRs组成，从氨基末端到羧基末端以下述顺序排列：FR1，CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。关于每个结构域的氨基酸指定依照Kabat，Sequences of Proteins ofImmunological Interest(National Institutes of Health，Bethesda，MD(1987和1991))，或Chothia & Lesk，J.Mol.Biol.196：901-917(1987)；Chothia等人，Nature 342：878-883(1989)的定义。
每个重/轻链对的可变结构域(VH和VL)构成与抗原相互作用的抗原结合位点。因此，例如完整的IgG抗体具有2个结合位点。除在双功能或双特异性抗体中外，2个结合位点是相同的。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)和经典补体系统的第一种组分(C1q)。
抗体必须具有足够的抗原结合多样性以识别每种可能的抗原(多个V区)，同时维持其C区的生物有效性(少数C区)。Ig基因由允许多个V区与少数C区使用的基因区段一起随机剪接。编码IgH、κ和λ链的基因区段在3个不同染色体上发现。在B细胞发育过程中，重组酶去除来自DNA的内含子和某些外显子，并且将区段剪接成功能Ig基因。
哺乳动物中的Ig基因区段以“可变”(V)、“多样性”(D)、“连接”(J)和“恒定”(C)外显子组排列。Vκ(Vκ)区段各自编码κ链V区的前2个CDR和3个FR，加上CDR3的少数残基。Jκ(Jκ)区段各自编码CDR3的其余部分和第4个FR。Cκ(Cκ)编码κ轻链的完整C区。编码人κ链的DNA包括约40个功能Vκ(Vκ)区段、5个Jκ(Jκ)区段、和1个Cκ(Cκ)基因区段、以及包含终止密码子的某些基因区段(“假基因”)。人λ(λ)链DNA包含约30个功能Vλ(Vλ)区段以及4个Jλ(Jλ)和Cλ(Cλ)区段功能组。特定Jλ(Jλ)总是与其相应的Cλ(Cλ)配对，和全部与相同Cκ(Cκ)配对的Jκ(Jκ)不同。关于人H链的DNA包括约50个功能VH区段、30个DH区段、和6个JH区段。重链可变结构域的前2个CDR和3个FR由VH编码。CDR3由VH的少数核苷酸、全部DH和部分JH编码，而FR4由JH基因区段的其余部分编码。在DNA中还存在关于每个同种型的每个重链结构域和膜区域的个别基因区段，以其中它们由B细胞表达的顺序排列。
在本发明的各种实施方案中，抗IgE抗体的重和轻链可以任选包括信号序列。术语“信号序列”也称为信号肽或前导肽，指在蛋白质的N末端处的约15-30个氨基酸的区段，其使得蛋白质能够被分泌(经过细胞膜)。当蛋白质被分泌时，信号序列被去除。
术语“分离的蛋白质”、“分离的多肽”或“分离的抗体”是这样的蛋白质、多肽或抗体，由于其衍生起源或来源，其(1)不与在其天然状态中伴随其的天然结合的组分结合，(2)不含来自相同物种的其他蛋白质，(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)在自然界中不存在。因此，化学合成或在与其天然起源的细胞不同的细胞系统中合成的多肽将是与其天然结合的组分“分离的”。蛋白质也可以通过分离使得基本上不含天然结合的组分，使用本领域众所周知的蛋白质纯化技术。
分离的抗体的例子包括但不限于，已使用IgE亲和力纯化的抗IgE抗体，和已通过细胞系在体外合成的抗IgE抗体。
如本文所使用的，术语“人抗体”意指其中可变和恒定结构域序列是人序列的任何抗体。该术语包含具有这样的序列的抗体，所述序列衍生自人基因但已改变，例如以减少可能的免疫原性、增加亲和力、消除可能引起不希望有的折叠的半胱氨酸等。该术语还包含在非人细胞中重组产生的此种抗体，其可以赋予人细胞非一般的糖基化。这些抗体可以以各种方式进行制备，如下文描述的。特别地，它们可例如由具有人免疫球蛋白基因座的非人动物，或全人免疫系统获得。
如本文所使用的，术语抗体的“抗原结合部分”(或简单地“抗体部分”)指抗体的一个或多个片段，其保留与抗原(例如，人IgE或其部分，包括εHc C2-C4(Cε2-Cε4)和εHc C3-C4(Cε3-Cε4)结构域特异性结合的能力。已显示抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。术语抗体的“抗原结合部分”内包含的结合片段的例子包括(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab′)2片段，包含由在铰链区处的二硫桥连接的2个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段，(v)由VH结构域组成的dAb片段(Ward等人，(1989)Nature 341：544-546)；和(vi)分离的互补决定区(CDR)。此外，尽管Fv片段的2个结构域——VL和VH由分开的基因编码，但它们可以使用重组方法通过合成接头进行连接，所述合成接头使得它们能够制备为单条蛋白质链，其中VL和VH区配对以形成单价分子(称为单链Fv(scFv))；参见例如，Bird等人Science 242：423-426(1988)和Huston等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883(1988))。还在本发明内的是包含VH和/或VL的抗原结合分子。在VH的情况下，分子还可以包含CH1、铰链、CH2或CH3区中的一个或多个。此种单链抗体也意欲包含在术语抗体的“抗原结合部分”内。还包含单链抗体的其他形式，例如双抗体。双抗体是二价、双特异性抗体，其中VH和VL结构域在单条多肽链上表达，但使用太短而不允许相同链上的2个结构域之间配对的接头，从而迫使结构域与另一条链的互补结构域配对，且产生2个抗原结合位点(参见例如，Holliger等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-6448(1993)；Poljak等人Structure 2：1121-1123(1994))。
再进一步地，抗体或其抗原结合部分可以是较大的免疫粘附分子的部分，由抗体或抗体部分与一种或多种其他蛋白质或肽的共价或非共价结合形成。此种免疫粘附分子的例子包括使用链霉亲和素核心区，以制备四聚scFv分子(Kipriyanov等人Human Antibodies andHybridomas 6：93-101(1995))，以及使用半胱氨酸残基、标记肽和C末端多组氨酸标签，以制备二价和生物素化的scFv分子(Kipriyanov等人Mol.Immunol.31：1047-1058(1994))。其他例子包括其中来自抗体的一个或多个CDRs共价或非共价掺入分子内，以使得免疫粘附素与目的抗原特异性结合。在此种实施方案中，CDR(s)可以作为较大多肽链的部分掺入，可以与另一条多肽链共价连接，或可以非共价掺入。
抗体部分例如Fab和F(ab′)2片段可以使用常规技术由完整抗体进行制备，例如分别地完整抗体的木瓜蛋白酶或胃蛋白酶消化。此外，抗体、抗体部分和免疫粘附分子可以使用标准重组DNA技术来获得，如本文描述的。
在一个实施方案中，本发明的抗体是单克隆抗体。如本文所使用的，首字母简略词“mAb”指单克隆抗体，即由细胞的单个克隆群体合成且分泌的抗体。克隆群体可以是永生化细胞的克隆群体。在特定实施方案中，克隆群体中的永生化细胞是杂交细胞——杂交瘤，一般通过来自免疫动物的单个B淋巴细胞与来自淋巴肿瘤的单个细胞融合而产生。
如本文所使用的，通过编号提及的单克隆抗体是得自相同编号的杂交瘤的单克隆抗体(mAb)。例如，单克隆抗体6.605.1得自杂交瘤6.605.1。
在另一个实施方案中，本发明的单克隆抗体是重组抗体(参见下文)。抗IgE抗体的种类和亚类可以通过本领域已知的任何方法进行测定。一般而言，抗体的种类和亚类可以使用对于抗体的特定种类和亚类特异的抗体进行测定。此种抗体是商购可得的。种类和亚类可以通过ELISA、蛋白质印迹以及其他技术进行测定。备选地，种类和亚类可以这样进行测定：测序抗体的重和/或轻链的恒定结构域的全部或部分，使其氨基酸序列与免疫球蛋白的各个种类和亚类的已知氨基酸序列比较，并且测定抗体的种类和亚类。
如上所述获得的抗IgE抗体的种类可以彼此转换。在本发明的一个方面，编码VL或VH的核酸分子使用本领域众所周知的方法进行分离，从而使得它不包括编码CL或CH的核酸序列。“抗体改造”(Kontermann& Dubel，编辑，Springer-Veriag，Berlin(2001))。编码VL或VH的核酸分子随后分别与来自免疫球蛋白分子的不同种类的编码CL或CH的核酸序列可操作地连接。这可以使用包含CL或CH链的载体或核酸分子来达到，如上文描述的。例如，最初是IgM的抗IgE抗体可以种类转换成IgG。此外，种类转换可以用于使一个IgG亚类转变成另一个，例如从IgG1到IgG2。用于产生包含所需同种型的本发明抗体的优选方法包括下述步骤：分离编码抗IgE抗体的重链的核酸分子和编码抗IgE抗体的轻链的核酸分子，获得重链的可变结构域，使重链的可变结构域与所需同种型的重链的恒定结构域连接，在细胞中表达轻链和所连接的重链，并且收集具有所需同种型的抗IgE抗体。
本发明的抗IgE抗体可以是IgG、IgM、IgE、IgA或IgD分子。在一个优选实施方案中，抗IgE抗体是IgG，并且是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4亚类。在另一个优选实施方案中，抗体是亚类IgG2。
本发明的分离的抗体的例子包括但不限于，已使用人IgE亲和力纯化的抗IgE抗体，和已通过细胞系在体外合成的抗IgE抗体。
血清撤离测定法(Serum depletron assay)
在一个方面，本发明提供了针对人IgE的人抗体、或其抗原结合部分，其中所述抗体具有约0.1-30μg/mL的IC25ng/mL(100-5000ng/mL)，其中IC25ng/mL(100-5000ng/mL)定义为使血清样品中的游离IgE浓度从约100-5000ng/mL的起始浓度减少为约25ng/mL的浓度所需的体外抗体浓度。在一个实施方案中，抗体或其部分具有约0.1-25μg/mL、优选0.1-20μg/mL、优选0.1-17μg/mL、优选0.1-15μg/mL、优选0.1-11μg/mL、最优选0.1-2μg/mL的IC25ng/mL(100-5000ng/mL)。在一个实施方案中，抗体或其部分具有约1-25μg/mL、优选1-5μg/mL、优选1-2μg/mL的IC25ng/mL(100-5000ng/mL)。
更一般地，IC25ng/mL(x-y ng/mL)在本文中定义为使血清样品中的游离IgE浓度从约x-y ng/mL的起始浓度减少为约25ng/mL的浓度所需的体外抗体浓度。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的人抗体、或其抗原结合部分，其中所述抗体具有约1-25μg/mL的IC25ng/mL(500-1500ng/mL)，其中IC25ng/mL(500-1500ng/mL)定义为使血清样品中的游离IgE浓度从约500-1500ng/mL的起始浓度减少为约25ng/mL的浓度所需的体外抗体浓度。在一个实施方案中，抗体或其部分具有约1-20μg/mL、优选1-15μg/mL、优选1-10μg/mL、优选1-5μg/mL、最优选2μg/mL的IC25ng/mL(500-1500ng/mL)。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的人抗体、或其抗原结合部分，其中所述抗体具有约0.1-15μg/mL的IC25ng/mL(100-500ng/mL)，其中IC25ng/mL(100-500ng/mL)定义为使血清样品中的游离IgE浓度从约100-500ng/mL的起始浓度减少为约25ng/mL的浓度所需的体外抗体浓度。在一个实施方案中，抗体或其部分具有约0.1-10μg/mL、0.1-8μg/mL、优选0.1-5μg/mL、优选0.1-4μg/mL、优选0.1-3μg/mL、优选1.2μg/mL的IC25ng/mL(100-500ng/mL)。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的人抗体、或其抗原结合部分，其中所述抗体具有约1-30μg/mL的IC25ng/mL(1500-5000ng/mL)，其中IC25ng/mL(1500-5000ng/mL)定义为使血清样品中的游离IgE浓度从约1500-5000ng/mL的起始浓度减少为约25ng/mL的浓度所需的体外抗体浓度。在一个实施方案中，抗体或其部分具有约1-28μg/mL、优选1-27μg/mL、优选2-26μg/mL、优选2-25μg/mL的IC25ng/mL(1500-5000ng/mL)。
给定测试抗体的IC25ng/mL(x-y ng/mL)可以通过游离IgE血清撤离测试进行测定。潜在原理是使血清样品与所述测试抗体一起温育，以允许血清游离IgE与所述测试抗体结合。其后在去除先前形成的(测试抗体)-IgE复合物后，例如使用ELISA检测测定法可以检测且测量不与所述测试抗体结合的IgE量(部分)。
游离IgE对应于循环未结合的IgE，即不与抗体结合且不与任何细胞或受体结合的IgE。
更精确地，IC25ng/mL(x-y ng/mL)可以使用包括下述步骤的测定方法进行测定：
a)提供具有x-y ng/mL的起始游离IgE浓度的人血清样品；
b)提供测试抗体(测试抗IgE抗体)；
c)使用与所述平板上包被的捕获试剂相同的测试抗体制备ELISA平板(或任何其他合适的ELISA固体试剂)；
d)使步骤a)中提供的所述血清样品与步骤b)中提供的所述测试抗体一起温育，从而提供温育混合物；
e)使来自步骤d)的温育混合物与步骤c)中制备的ELISA平板一起温育；
f)洗涤步骤e)的ELISA平板；
g)检测且测量结合在所述ELISA平板上的IgE量。
本领域技术人员了解如何从源于人受试者的血样开始制备血清样品。例如，这可以涉及将血液收集到玻璃血清管(例如BectonDickinson目录号366636)内，允许凝块60分钟，然后在500xg下离心10分钟，并且收集血清上清液。所述人血清样品可以进行稀释，以便调整其起始游离IgE浓度，例如用与ELISA中使用相同的缓冲液，例如如下文实施例中描述的1％BSA/TBS。总IgE浓度可以使用标准ELISA测定法容易地进行测量，例如使用商业试剂盒(例如IBL或Bethyl销售此种检测试剂盒)。一般地，所述起始游离IgE浓度是约100-5000ng/mL。在一个方面，所述起始游离IgE浓度是约100-5000ng/mL；或约500-1500ng/mL；或约1500-5000ng/mL。本领域技术人员还了解如何制备如步骤c)中提供的ELISA平板。这一般可以通过使所需测试抗体在合适孔的平板(一般地，其中抗体的吸附不干扰后续所需反应的平板，例如Nunc Maxisorp 96孔平板(FisherScientific，目录号DIS-971-010P)上温育来执行。所述抗体一般以在合适缓冲液例如TBS中的溶液使用。温育可以持续约10、12或16小时，一般在约4℃下，以允许平板的合适包被，随后为一个或多个洗涤步骤，例如用Tween-TBS缓冲液。平板随后例如使用1％BSA-TBS进行封闭。封闭可以例如在RT下执行1小时，平板随后在步骤d)中使用前再次进行洗涤(例如用Tween-TBS)。
步骤d)的温育可以执行约10、12或16小时。温育温度一般为约37℃。温育条件一般进一步包括具有5％CO2的增湿大气。对照测定法可以可以用于显示游离IgE与捕获试剂(步骤c)的ELISA平板)结合，而(测试抗体)-IgE复合物不结合。
步骤e)的温育可以例如在RT下执行约2小时。对照测定法可以用于显示游离IgE与捕获试剂(步骤c)的ELISA平板)结合，而(测试抗体)-IgE复合物不结合。
步骤f)中的洗涤可以涉及一个或多个洗涤步骤，例如用Tween-TBS。这个步骤应确保所有(测试抗体)-IgE复合物从ELISA平板上的孔中去除。
对于步骤g)，本领域技术人员可以使用商业人IgE标准用于校准结果。步骤f)中的检测和测量可以例如使用标记的多克隆抗IgE抗体来执行。此种多克隆抗IgE抗体是商购可得的，特别是生物素化的形式。后续检测随后可以采用链霉亲和素-HRP试剂(也是商购可得的)。
在一个实施方案中，根据本发明的抗IgE抗体或其部分包含具有选自SEQ ID NO：10、30、50、70、90和130的序列的H-CDR3。在一个实施方案中，根据本发明的抗IgE抗体或其部分包含具有选自SEQID NO：20、40、60、80、100和140的序列的L-CDR3。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或部分选自：
-包含分别具有SEQ ID NO：6、8、10的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：26、28、30的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：46、48、50的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：66、68、70的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：86、88、90的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体；和
-包含分别具有SEQ ID NO：126、128、130的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含分别具有SEQ ID NO：16、18、20的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：36、38、40的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：56、58、60的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：76、78、80的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；和
-包含分别具有SEQ ID NO：96、98、100的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体。
-包含分别具有SEQ ID NO：136、138、140的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体。
在一个实施方案中，抗IgE抗体或部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：10的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：20的序列的LCDR3的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：30的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：40的序列的LCDR3的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：50的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：60的序列的LCDR3的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：70的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：80的序列的LCDR3的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：90的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：100的序列的LCDR3的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：130的序列的H-CDR3和具有SEQ ID NO：140的序列的LCDR3的抗体
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含分别具有SEQ ID NO：6、8、10的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：16、18、20的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：26、28、30的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：36、38、40的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：46、48、50的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：56、58、60的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：66、68、70的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：76、78、80的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：86、88、90的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：96、98、100的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；和
-包含分别具有SEQ ID NO：126、128、130的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：136、138、140的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：84的序列的H可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：124的序列的H可变结构域的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：74的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：94的序列的L可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：134的序列的L可变结构域的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：74的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：74的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：84的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：94的序列的L可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：124的序列的H可变结构域；和具有SEQID NO：134的序列的L可变结构域的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：2的序列的H链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链的抗体和；
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：12的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：32的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：52的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：72的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：92的序列的L链的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：132的序列的L链的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或部分选自：
-包含具有SEQ ID NO：2的序列的H链；和具有SEQ ID NO：12的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链；和具有SEQ ID NO：12的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链；和具有SEQ ID NO：32的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：2的序列的H链；和具有SEQ ID NO：32的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链；和具有SEQ ID NO：52的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链；和具有SEQ ID NO：52的序列的L链的抗体；
包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链；和具有SEQ ID NO：72的序列的L链的抗体；
包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链；和具有SEQ ID NO：72的序列的L链的抗体；
包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链；和具有SEQ ID NO：92的序列的L链的抗体；
包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链；和具有SEQ ID NO：132的序列的L链的抗体；
包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链；和具有SEQ ID NO：92的序列的L链的抗体；和
包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链；和具有SEQ ID NO：132的序列的L链的抗体。
在另一个实施方案中，抗IgE抗体或其部分(至所述部分包含至少部分重链恒定区的程度)是IgG1或IgG2亚型。本发明的示例性优选抗体包括下述抗体：
-mAb 5.396.1(由杂交瘤产生)；
-重组5.396.1；
-5.396.1 Hc-S103N Lc-K61R，有时也称为5.396.1(Hc-S103NLc-K61R)或5.396.1(S103N/K61R)或5.396.1N/R(即具有与5.396.1mAb相同的链序列，除在重链Hc和轻链Lc中指出的氨基酸置换外)；
-mAb 6.605.1(由杂交瘤产生)；
-重组6.605.1；
-6.605.1 Hc-H3Q，M13K，D82E Lc-T25A，T53S，有时也称为6.605.1(H3Q，M13K，D82E-T25A，T53S)、或6.605.1QKE/AS(即具有与6.605.1mAb相同的链序列，除在重链Hc和轻链Lc中指出的氨基酸置换外)；
-mAb 5.948.1(由杂交瘤产生)；
-重组5.948.1.
-5.948.1 Hc-H100Y，有时也称为5.948.1 H100Y(即具有与5.948.1mAb相同的链序列，除在Hc中指出的氨基酸置换外)；
这些抗体在下文实施例中更详细地描述。
在一个进一步的实施方案中，抗IgE抗体或其部分选自：
-包含由SEQ ID NO：1的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：11的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：21的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：31的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：41的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：51的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：61的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：71的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：81的核酸序列编码的H链序列；和由SEQ IDNO：91的核酸序列编码的L链序列的抗体；和
-包含由SEQ ID NO：121的核酸序列编码的H链序列；和由SEQID NO：131的核酸序列编码的L链序列的抗体。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链；和具有SEQ ID NO：32的序列的L链的抗体。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链；和具有SEQ ID NO：52的序列的L链的抗体。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链；和具有SEQ ID NO：72的序列的L链的抗体。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链；和具有SEQ ID NO：92的序列的L链的抗体。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链；和具有SEQ ID NO：132的序列的L链的抗体。
在一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7977的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7982的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7981的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7980的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7985的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7984的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在另一个方面，本发明提供了针对IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7983的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7978的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在另一个方面，本发明提供了针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7979的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7986的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在另一个方面，本发明提供了如上所述的抗体或部分的变体，其中所述变体与抗体或部分相差1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换。
本发明的一个进一步的方面是具有至少一种先前描述的功能性质的抗体或其抗原结合部分，并且包含在氨基酸序列中与SEQ ID NOs：4、24、44、64、84或124中的任何一个至少90％等同的VH结构域。在一个实施方案中，所述VH结构域在氨基酸序列中与SEQ ID NOs：4、24、44、64、84或124中的任何一个至少91％、至少93％、至少95％、至少97％、至少99％或100％等同。
本发明的一个进一步的方面是具有至少一种先前描述的功能性质的抗体或其抗原结合部分，并且包含在氨基酸序列中与SEQ ID NOs：14、34、54、74、94或134中的任何一个至少90％等同的VL结构域。在一个实施方案中，所述VH结构域在氨基酸序列中与SEQ ID NOs：14、34、54、74、94或134中的任何一个至少91％、至少93％、至少95％、至少97％、至少99％或100％等同。
关于多肽的序列相似性也称为序列同一性，一般使用序列分析软件进行测量。蛋白质分析软件使用对各种置换、缺失和其他修饰指定的相似性的测量匹配相似序列，所述修饰包括保守氨基酸置换。例如，GCG包含程序例如“Gap”和“Bestfit”，其可以与缺省参数一起用于测定紧密相关多肽之间(例如来自不同生物物种的同源多肽)、或野生型蛋白质及其突变蛋白质之间的序列同源性或序列同一性。参见例如，GCG版本6.1。多肽序列也可以使用FASTA使用缺省或推荐参数进行比较，所述FASTA是GCG版本6.1中的程序。FASTA(例如，FASTA2和FASTA3)提供了查询和搜索序列之间的最佳重叠区域的比对和序列同一性百分比(Pearson，Methods Enzymol.183：63-98(1990)；Pearson，Methods Mol.Biol.132：185-219(2000))。当使本发明的序列与包含来自不同生物的大量序列的数据库比较时，另一种优选算法是计算机程序BLAST，特别是blastp或tblastn，使用缺省参数。参见例如，Altschul等人，J.Mol.Biol.215：403-410(1990)；Altschul等人，Nucleic Acids Res.25：3389-402(1997)；引入本文作为参考。
用于同源性比较的多肽序列的长度一般将是至少约16个氨基酸残基，通常至少约20个残基，更通常至少约24个残基，一般至少约28个残基，和优选超过约35个残基。当搜索包含来自大量不同生物的序列的数据库时，优选比较氨基酸序列。
如本文所使用的，“氨基酸”通过其全名、通过与其对应的3字母编码或通过与其对应的单字母编码表示，如下表中指出的：
全名          3字母编码          单字母编码
天冬氨酸        Asp                    D
谷氨酸          Glu                    E
赖氨酸          Lys                    K
精氨酸          Arg                    R
组氨酸          His                    H
酪氨酸          Tyr                    Y
半胱氨酸        Cys                    C
天冬酰胺      Asn    N
谷氨酰胺      Gln    Q
丝氨酸        Ser    S
苏氨酸        Thr    T
甘氨酸        Gly    G
丙氨酸        Ala    A
缬氨酸        Val    V
亮氨酸        Leu    L
异亮氨酸      Ile    I
甲硫氨酸      Met    M
脯氨酸        Pro    P
苯丙氨酸      Phe    F
色氨酸        Trp    W
如本文所使用的，20种常规氨基酸及其缩写遵循惯例用法。参见Immunology-A Synthesis(第2版，E.S.Golub和D.R.Gren，编辑，Sinauer Associates，Sunderland，Mass.(1991))。
根据本发明，可以进行的一种类型的氨基酸置换是使抗体中的一个或多个半胱氨酸(其可以是化学活性的)改变成另一个残基，例如但不限于丙氨酸或丝氨酸。在一个实施方案中，存在非经典半胱氨酸的置换。置换可以在抗体的可变结构域的CDR或构架区中或恒定结构域中进行。在某些实施方案中，半胱氨酸是经典的。
可以进行的另一种类型的氨基酸置换是去除抗体中潜在的蛋白水解位点。此种位点可以存在于抗体的可变结构域的CDR或构架区中或恒定结构域中。半胱氨酸残基的置换和蛋白水解位点的去除可以减少抗体产物中的异质性危险，且从而增加其同质性。另一种类型的氨基酸置换是通过改变残基中的一个或两个来消除天冬酰胺-甘氨酸对，其形成潜在的脱酰胺位点。
在根据本发明的变体之一中可以进行的另一种类型的氨基酸置换是保守氨基酸置换。“保守氨基酸置换”是其中氨基酸残基由具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的侧链R基)的另一个氨基酸残基置换。一般而言，保守氨基酸置换将基本上不改变蛋白质的功能性质。在其中2个或更多氨基酸序列由于保守置换彼此不同的情况下，序列同一性百分比或相似性程度可以向上调整，以就置换的保守性质校准。用于进行这种调整的方法是本领域技术人员众所周知的。参见例如Pearson，Methods Mol.Biol.243：307-31(1994)。
具有相似化学性质的侧链的氨基酸组的例子包括1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；2)脂肪族-羟基侧链；丝氨酸和苏氨酸；3)含酰胺侧链；天冬酰胺和谷氨酰胺；4)芳香族侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸；和7)含硫侧链：半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守氨基酸置换组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸盐-天冬氨酸盐、和天冬酰胺-谷氨酰胺。备选地，保守替换是在Gonnet等人，Science 256：1443-45(1992)中公开的PAM250对数可能性矩阵中具有正值的任何改变。“中等保守的”替换是在PAM250对数可能性矩阵中具有非负值的任何改变。
在特定实施方案中，对于本发明的抗体或抗原结合部分的氨基酸置换是这样的，其：(1)减少对于蛋白水解的敏感性，(2)减少对于氧化的敏感性，(3)改变关于形成蛋白质复合物的结合亲和力，和(4)赋予或修饰此种类似物的其他物理化学或功能性质，但仍保留与人IgE的特异性结合。类似物可以包括对于天然存在的肽序列的各种置换。例如，单个或多个氨基酸置换，优选保守氨基酸置换，可以在通常存在的序列中进行，例如在形成分子间接触的一个或多个结构域外的多肽部分中。氨基酸置换还可以在形成改善多肽活性的分子间接触的一个或多个结构域中进行。保守氨基酸置换应基本上不改变亲本序列的结构特征；例如，替换氨基酸应不改变构成亲本序列中存在的免疫球蛋白结合结构域的反平行的β-折叠，或破坏表征亲本序列的其他类型的二级结构。一般而言，甘氨酸和脯氨酸在反平行的β-折叠中不使用。领域公认的多肽二级和三级结构的例子在Proteins，Structures and Molecular Principles(Creighton，编辑，W.H.Freeman and Company，New York(1984))；Introduction to ProteinStructure(C.Branden和J.Tooze，编辑，Garl and Publishing，New York，N.Y.(1991))；和Thornton等人，Nature 354：105(1991)中描述。
在本发明的另一个方面，抗体可以使用例如PCT公开WO98/52976和WO 00/34317中描述的技术进行去免疫，以减少其免疫原性。
在另一个实施方案中，可以制备包含与另一种多肽连接的全部或部分本发明的抗IgE抗体的融合抗体或免疫粘附素。在一个优选实施方案中，仅抗IgE抗体的可变结构域与多肽连接。在另一个优选实施方案中，抗IgE抗体的VH结构域与第一种多肽连接，而抗IgE抗体的VL结构域与第二种多肽连接，所述第二种多肽与第一种多肽以这样的方式结合，从而使得VH和VL结构域可以彼此相互作用以形成抗原结合位点。在另一个优选实施方案中，VH结构域通过接头与VL结构域分开，从而使得VH和VL结构域可以彼此相互作用(参见下文单链抗体下)。VH-接头-VL抗体随后与目的多肽连接。此外，可以产生其中2个(或更多)单链抗体彼此连接的融合抗体。如果希望产生在单条多肽链上的二价或多价抗体，或如果希望产生双特异性抗体，那么这是有用的。
为了产生单链抗体(scFv)，使编码VH-和VL-的DNA片段与编码弹性接头例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一个片段可操作地连接，从而使得VH和VL序列可以作为邻接的单链蛋白质表达，其中VL和VH结构域通过弹性接头连接。参见例如，Bird等人，Science 242：423-426(1988)；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Scl USA 85：5879-5883(1988)；McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)。如果仅使用单个VH和VL，那么单链抗体可以是单价的，如果使用2个VH和VL，那么是二价的，或如果使用超过2个VH和VL，那么是多价的。可以产生与人IgE和另一种分子特异性结合的双特异性或多价抗体。
在其他实施方案中，使用编码抗IgE抗体的核酸分子可以制备其他经修饰的抗体。例如，“κ体”(III等人，Protein Eng.10：949-57(1997))、“微型抗体”(Martin等人，EMBO J.13：5303-9(1994))、“双抗体”(Holliger等人，Proc.Natl.Acad.Scl USA 90：6444-6448(1993))、或“Janusins”(Traunecker等人，EMBO J.10：3655-3659(1991)和Traunecker等人，Int.J.Cancer(Suppl.)7：51-52(1992))可以使用标准分子生物学技术遵循说明书的教导进行制备。
在特定实施方案中，本发明的抗体可以以中性形式(包括两性离子形式)或作为带正电或负电种类呈现。在某些实施方案中，抗体可以与抗衡离子络合，以形成药学上可接受的盐。
术语“药学上可接受的盐”指包含一种或多种抗体和一种或多种抗衡离子的复合物，其中抗衡离子衍生自药学上可接受的无机和有机酸和碱。
药学上可接受的无机碱包括金属离子。较优选的金属离子包括但不限于，合适的碱金属盐、碱土金属盐和其他生理学上可接受的金属离子。衍生自无机碱的盐包括以其通常化合价的铝、铵、钙、钴、镍、钼、钒、锰、铬、硒、锡、铜、铁、亚铁、锂、镁、锰盐、亚锰、钾、铷、钠和锌。
本发明抗体的药学上可接受的酸加成盐可以由下述酸进行制备，包括但不限于，蚁酸、乙酸、乙酰氨基苯甲酸、肥酸、抗坏血酸、硼酸、丙酸、苯甲酸、樟脑酸、碳酸、环拉酸、脱氢胆酸、丙二酸、依地酸、乙基硫酸、芬地柞酸、偏磷酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、鞣酸、柠檬酸、硝酸、抗坏血酸、葡糖醛酸、马来酸、叶酸、延胡索酸、丙酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、盐酸、氢溴酸、氢碘酸、赖氨酸、异柠檬酸、三氟乙酸、扑酸、丙酸、邻氨基苯甲酸、甲磺酸、乳清酸、草酸、草乙酸、油酸、硬脂酸、水杨酸、对氨基水杨酸、硅酸、对羟基苯甲酸、烟酸、苯乙酸、扁桃酸、双羟萘酸、磺酸、甲磺酸、磷酸、膦酸、乙磺酸、乙二磺酸、铵、苯磺酸、泛酸、萘磺酸、甲苯磺酸、2-羟基乙磺酸、对氨基苯磺酸、硫酸、硝酸、亚硝酸、硫酸一甲酯、环己基氨基磺酸、β-羟丁酸、甘氨酸、甘氨酰甘氨酸、谷氨酸、卡可酸、二氨基己酸、樟脑磺酸、葡糖酸、硫氰酸、酮戊二酸、5-磷酸吡哆醛、氯苯氧乙酸、十一酸、N-乙酰-L-天冬氨酸、粘酸和半乳糖醛酸。
药学上可接受的有机碱包括三甲胺、二乙胺、N，N′-二苄乙烯二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二苄胺、二乙醇胺、乙二胺、葡甲胺(N-甲基葡糖胺)、普鲁卡因、环胺、季铵阳离子、精氨酸、甜菜碱、咖啡因、克立咪唑、2-乙氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙二胺、丁胺、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、乙基葡糖胺、葡糖胺、氨基葡糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、咪唑、异丙胺、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、吡啶、吡哆醇、钕、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三丙胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、甲胺、牛磺酸、胆酸盐、6-氨基-2-甲基-2-庚醇、2-氨基-2-甲基-1，3-丙二醇、2-氨基-2-甲基-1-丙醇、脂肪族单和二羧酸、苯基取代的链烷酸、羟基链烷酸、芳香族酸、脂肪族酸和芳香族磺酸、锶、三(羟甲基)甲基甘氨酸、肼、苯基环己胺、2-(N-吗啉代)乙磺酸、二(2-羟乙基)氨基-三(羟甲基)甲烷、N-(2-乙酰胺基)-2-氨基乙磺酸、1，4-哌嗪二乙磺酸、3-吗啉代-2-羟基丙磺酸、1，3-二[三(羟甲基)甲氨基]丙烷、4-吗啉丙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸、2-[(2-羟基-1，1-二(羟甲基)乙基)氨基]乙磺酸、N，N-二(2-羟乙基)2-氨基乙磺酸、4-(N-吗啉代)丁磺酸、3(N，N-二[2-羟乙基]氨基)2-羟基丙磺酸、2-羟基-3-[三(羟甲基)甲氨基]-1-丙磺酸、4-(2-羟乙基)哌嗪-1-(2-羟基丙磺酸)、哌嗪-1，4-二(2-羟基丙磺酸)二水化物、4-(2-羟乙基)-1-哌嗪丙磺酸、N，N-二(2-羟乙基)甘氨酸、N-(2-羟乙基)哌嗪-N′-(4-丁磺酸)、N-[三(羟甲基)甲基]-3-氨基丙磺酸、N-三(羟甲基)甲基-4-氨基丁磺酸、N-(1，1-二甲基-2-羟乙基)-3-氨基-2-羟基丙磺酸、2-(环己基氨基)乙磺酸、3-(环己基氨基)-2-羟基-1-丙磺酸、3-(环己基氨基)-1-丙磺酸、N-(2-乙酰胺基)亚氨基二乙酰乙酸、4-(环己基氨基)-1-丁磺酸、N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸、2-氨基-2-(羟甲基)-1，3-丙二醇、和氨基丁三醇。
本发明的抗IgE抗体或抗原结合部分可以与另一种分子(例如另一种肽或蛋白质)衍生或连接。一般而言，抗体或其部分这样衍生，从而使得IgE结合尤其是与游离IgE的结合不受衍生或标记的不利影响。因此，本发明的抗体和抗体部分意欲包括完整和修饰形式的本文描述的人抗IgE抗体。例如，本发明的抗体或抗体部分可以与一种或多种其他分子实体功能连接(通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他方式)，所述分子实体例如另一种抗体(例如双特异性抗体或双抗体)、检测试剂、药学试剂、和/或可以介导抗体或抗体部分与另一种分子(例如链霉亲和素核心区或多组氨酸标签)的结合的蛋白质或肽。
一种类型的衍生抗体通过使2种或更多抗体(具有相同类型或不同类型，例如以产生双特异性抗体)交联而产生。合适的交联剂包括异双功能(具有由合适的间隔物分离的2个不同反应基团)(例如间马来酰亚胺苯甲酰-N-羟基琥珀酰亚胺酯)或同双功能(例如二琥珀酰亚胺辛二酸酯)的那些。此种接头可从Pierce Chemical Company，Rockford，II获得。
抗IgE抗体还可以用化学基团进行衍生，所述化学基团例如聚乙二醇(PEG)、甲基或乙基、或碳水化合物基团。这些基团用于改善抗体的生物学特征，例如以增加血清半衰期。
根据本发明的抗体也可以进行标记。如本文所使用的，术语“标记”或“标记的”指抗体中掺入另一种分子。在一个实施方案中，标记是可检测标记，例如放射性标记的氨基酸的掺入或与生物素基部分的多肽的附着，所述生物素基部分可以通过标记的抗生物素蛋白(例如，包含可以通过光学或比色方法检测的荧光标记或酶促活性的链霉亲和素)进行检测。在另一个实施方案中，标签或标记可以是治疗的，例如药物缀合物或毒素。标记多肽和糖蛋白的各种方法是本领域已知的，并且可以使用。用于多肽的标记的例子包括但不限于下述：放射性同位素或放射性核素(例如3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc、111In、125I、131I)、荧光标记(例如FITC、罗丹明、镧系元素磷光体)、酶促标记(例如辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、萤光素酶、碱性磷酸酶)、化学发光标记、生物素基团、由次级报道分子(例如亮氨酸拉链对序列、关于次级抗体的结合位点、金属结合结构域、附加表位)识别的预定的多肽表位、磁性试剂例如钆螯合物、毒素例如百日咳毒素、泰素、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙啶、依米丁、丝裂菌素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、道诺霉素、二羟基蒽二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素及其类似物或同系物。在某些实施方案中，标记通过各种长度的间隔臂附着，以减少潜在的立体阻碍。
核酸、载体和细胞
本发明还包含编码抗IgE抗体或其抗原结合片段的核酸分子和序列。在某些实施方案中，不同核酸分子编码抗IgE免疫球蛋白的重链和轻链。在其他实施方案中，相同核酸分子编码抗IgE免疫球蛋白的重链和轻链。
除非另有说明，提及核苷酸序列包含其互补体。因此，提及具有特定序列的核酸应理解为包含其互补链，及其互补序列。术语“多核苷酸”如本文提及的意指长度为至少10个碱基的聚合、可能分离形式的核苷酸，核糖核苷酸或脱氧核苷酸或修饰形式的任一类型的核苷酸。该术语包括单链和双链形式。
在一个方面，本发明提供了编码如上所述的抗体或其部分的一条链的核酸序列。
在一个方面，本发明提供了选自下述的核酸序列：SEQ ID NO：1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、105、107、109、111、121、123、131和133。
本发明的核酸分子包括在高度严格条件下杂交的核酸，例如上文描述的那些，或者与一种或多种上述核酸序列或编码任何所提供的VH或VL序列的氨基酸序列的核酸至少70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％或99％等同的核酸。
在一个实施方案中，所述核酸序列编码针对人IgE的抗体的一条链，其中所述抗体选自：
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：74的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：84的序列的H可变结构域；和具有SEQ IDNO：94的序列的L可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：124的序列的H可变结构域；和具有SEQID NO：134的序列的L可变结构域的抗体。
在一个方面，本发明提供了这样的核酸序列，其具有ATCC保藏PTA-7977的插入物的序列；和由ATCC保藏PTA-7982的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在另一个方面，本发明提供了这样的核酸序列，其是ATCC保藏PTA-7981的插入物；和由ATCC保藏PTA-7980的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在另一个方面，本发明提供了这样的核酸序列，其是ATCC保藏PTA-7985的插入物；和由ATCC保藏PTA-7984的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在另一个方面，本发明提供了这样的核酸序列，其具有ATCC保藏PTA-7983的插入物的序列；和由ATCC保藏PTA-7978的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在另一个方面，本发明提供了这样的核酸序列，其具有ATCC保藏PTA-7979的插入物的序列；和由ATCC保藏PTA-7986的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
在一个进一步的方面，本发明提供了包含编码如上所述的抗体或部分的一条链的核酸序列的载体。
在核酸序列背景中的术语“序列同一性百分比”意指当就最大对应性比对时，2个序列中相同的残基。序列同一性比较的长度可以在至少约9个核苷酸的段上，通常至少约18个核苷酸，更通常至少约24个核苷酸，一般至少约28个核苷酸，更一般至少约32个核苷酸，和优选至少约36、48个或更多核苷酸。存在本领域已知的许多不同算法，其可以用于测量核苷酸序列同一性。例如，多核苷酸序列可以使用FASTA、Gap或Bestfit进行比较，这些是Wisconsin PackageVersion 10.0，Genetics Computer Group(GCG)，Madison，Wisconsin中的程序。FASTA包括例如程序FASTA2和FASTA3，提供了查询和搜索序列之间的最佳重叠区域的比对和序列同一性百分比(Pearson，Methods Enzymol.183：63-98(1990)；Pearson，Methods Mol.Biol.132：185-219(2000)；Pearson，Methods Enzymol.266：227-258(1996)；Pearson，J.Mol.Biol.276：71-84(1998)；引入本文作为参考)。除非另有说明，使用关于特定程序或算法的缺省参数。例如，核酸序列之间的序列同一性百分比可以使用如引入本文作为参考的GCG版本6.1中提供的FASTA与其缺省参数(字大小6和NOPAM因子用于评分矩阵)、或使用Gap与其缺省参数进行测定。
在一个进一步的方面，本发明提供了适合于表达如上所述的抗体或其部分的一条链的载体。
如本文所使用的，术语“载体”意指能够转运它已与之连接的另一种核酸的核酸分子。在某些实施方案中，载体是质粒，即另外的DNA区段可以连接到其内的DNA的环状双链部分。在某些实施方案中，载体是病毒载体，其中另外的DNA区段可以连接到病毒基因组内。在某些实施方案中，载体能够在它们已引入其内的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和附加型哺乳动物载体)。在其他实施方案中，在引入宿主细胞内后，载体(例如，非附加型哺乳动物载体)可以整合到宿主细胞的基因组内，并且从而连同宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们与之可操作地连接的基因的表达。此种载体在本文中称为“重组表达载体”(或简单地，“表达载体”)。
本发明提供了包含核酸分子的载体，所述核酸分子编码本发明的抗IgE抗体或其抗原结合部分的重链。本发明还提供了包含核酸分子的载体，所述核酸分子编码此种抗体或其抗原结合部分的轻链。本发明进一步提供了包含核酸分子的载体，所述核酸分子编码融合蛋白、经修饰的抗体、抗体片段及其探针。
编码抗IgE抗体或其部分的重或轻链的核酸分子可以从产生此种抗体的任何来源中分离。在各种实施方案中，核酸分子从表达抗IgE抗体的B细胞，或由此种B细胞产生的永生化细胞中分离，所述B细胞从用人IgE抗原免疫接种的动物中分离。分离编码抗体的核酸的方法是本领域众所周知的。参见例如，Sambrook J. & Russell D..Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第3版，Cold SpringHarbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(2000)。可以分离mRNA，并且用于产生cDNA，用于在聚合酶链反应(PCR)或抗体基因的cDNA克隆中使用。在一个优选实施方案中，核酸分子从具有来自非人转基因动物的细胞作为其融合配偶体之一的杂交瘤中分离，所述细胞产生人免疫球蛋白。在一个更加优选的实施方案中，产生人免疫球蛋白的细胞从动物(参见下文)中分离。
在某些实施方案中，编码本发明的抗IgE抗体的重链的核酸可以包含编码本发明的VH结构域的核苷酸序列，其与编码来自任何来源的重链恒定结构域的核苷酸序列框内连接。类似地，编码本发明的抗IgE抗体的轻链的核酸分子可以包含编码本发明的VL结构域的核苷酸序列，其与编码来自任何来源的轻链恒定结构域的核苷酸序列框内连接。
在本发明的一个进一步的方面，编码重(VH)和/或轻(VL)链的可变结构域的核酸分子可以“转变”成全长抗体基因。在一个实施方案中，编码VH或VL结构域的核酸分子通过插入表达载体内而转变成全长抗体基因，所述表达载体已分别编码重链恒定(CH)或轻链恒定(CL)结构域，从而使得VH区段与载体内的一个或多个CH区段可操作地连接，和/或VL区段与载体内的CL区段可操作地连接。在另一个实施方案中，编码VH和/或VL结构域的核酸分子这样转变成全长抗体基因：使用标准分子生物学技术，使编码VH和/或VL结构域的核酸分子与编码CH和/或CL结构域的核酸分子连接或相连。人重和轻链免疫球蛋白恒定结构域基因的核酸序列是本领域已知的。参见例如，Kabat等人，Sequencesof Proteins of Immunological Interest，第5版，NIH Publ.No.91-3242，1991。编码全长重和/或轻链的核酸分子随后可以由它们已引入其内的细胞表达，并且分离抗IgE抗体。
核酸分子可以用于重组表达大量抗IgE抗体。核酸分子还可以用于产生嵌合抗体、双特异性抗体、单链抗体、免疫粘附素、双抗体、突变抗体和抗体衍生物，如下文进一步描述的。
在另一个实施方案中，本发明的核酸分子用作探针或PCR引物用于特定抗体序列。例如，核酸可以在诊断方法中用作探针，或用作PCR引物以扩增DNA区域，所述DNA区域尤其可以用于分离编码抗IgE抗体的可变结构域的另外核酸分子。在某些实施方案中，核酸分子是寡核苷酸。在某些实施方案中，寡核苷酸来自目的抗体的重和轻链的高可变结构域。在某些实施方案中，寡核苷酸编码如本文所述的本发明抗体或其片段的一个或多个CDRs的全部或部分。
在另一个实施方案中，核酸分子和载体可以用于制备突变的抗IgE抗体。抗体可以在重和/或轻链的可变结构域中进行突变，例如以改变抗体的结合性质。例如，突变可以在一个或多个CDR区中进行，以增加或减少抗IgE抗体的KD，以增加或减少koff，或改变抗体的结合特异性。定点诱变中的技术是本领域众所周知的。参见例如Sambrook等人and Ausubel等人，同上。在另一个实施方案中，一个或多个突变在这样的氨基酸残基处进行，与本发明的单克隆抗体中的种系比较，所述氨基酸残基已知是改变的。突变可以在可变结构域的CDR区或构架区中或恒定结构域中进行。在一个优选实施方案中，突变在可变结构域中进行。在某些实施方案中，一个或多个突变可以在这样的氨基酸残基处进行，与本发明抗体或其片段的可变结构域的CDR区或构架区中的种系比较，所述氨基酸残基已知是改变的。
在另一个实施方案中，构架区这样突变，从而使得所产生的一个或多个构架区具有相应种系基因的氨基酸序列。突变可以在构架区或恒定结构域中进行，以增加抗IgE抗体的半衰期。参见例如，PCT公开WO 00/09560。还可以进行构架区或恒定结构域中的突变，以改变抗体的免疫原性，以提供用于与另一种分子共价或非共价结合的位点。根据本发明，单个抗体可以具有在可变结构域的任何一个或多个CDRs或构架区中或恒定结构域中的突变。
在某些实施方案中，本发明的抗IgE抗体或抗原结合部分这样进行表达：将如上获得的编码部分或全长轻和重链的DNAs插入表达载体内，从而使得基因与必需的表达控制序列例如转录和翻译控制序列可操作地连接。表达载体包括质粒，逆转录病毒，腺病毒，腺伴随病毒(AAV)，植物病毒例如花椰菜花叶病毒、烟草花叶病毒、YACs、EBV衍生的附加体等。将抗体基因连接到载体内，从而使得载体内的转录和翻译控制序列发挥其调节抗体基因的转录和翻译的预期功能。选择表达载体和表达控制序列，以与所使用的表达宿主细胞相容。抗体轻链基因和抗体重链基因可以插入分开的载体内。在一个优选实施方案中，2种基因插入相同的表达载体内。抗体基因通过标准方法(例如，在抗体基因片段和载体上的互补限制位点的连接，或如果不存在限制位点，那么平端连接)插入表达载体内。
方便的载体是编码功能上完全的人CH或CL免疫球蛋白序列的载体，具有经改造的合适限制位点，从而使得任何VH或VL序列可以容易地插入且表达，如上所述。在此种载体中，剪接通常在插入的J区中的剪接供体位点和人C结构域前的剪接受体位点之间发生，并且也在人CH外显子内存在的剪接区域处发生。多腺苷酸化和转录终止在编码区下游的天然染色体位点处发生。重组表达载体也可以编码促进抗体链从宿主细胞中分泌的信号肽。抗体链基因可以克隆到载体内，从而使得信号肽与免疫球蛋白链的氨基末端框内连接。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即来自非免疫球蛋白蛋白质的信号肽)。
除抗体链基因外，本发明的重组表达载体携带控制抗体链基因在宿主细胞中的表达的调节序列。本领域技术人员应当理解，表达载体的设计，包括调节序列的分泌，可以依赖此种因素如待转化的宿主细胞的选择、所需蛋白质表达水平等。用于哺乳动物宿主细胞表达的优选调节序列包括指导哺乳动物细胞中的高水平蛋白质表达的病毒元件，例如衍生自逆转录病毒LTRs、巨细胞病毒(CMV)(例如CMV启动子/增强子)、猴病毒40(SV40)(例如SV40启动子/增强子)、腺病毒(例如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))、多瘤的启动子和/或增强子，和强哺乳动物启动子例如天然免疫球蛋白和肌动蛋白启动子。关于病毒调节元件及其序列的进一步描述，参见例如美国专利5,168,062、4,510,245和4,968,615。用于在植物中表达抗体的方法，包括启动子和载体的描述，以及植物转化是本领域已知的。参见例如US 6,517,529。在细菌细胞或真菌细胞例如酵母细胞中表达多肽的方法也是本领域众所周知的。
除抗体链基因和调节序列外，本发明的重组表达载体可以携带另外的类型，例如调节载体在宿主细胞中的复制(例如复制起点)的序列和可选标记基因。可选标记基因促进载体已引入其内的宿主细胞的选择(参见例如，美国专利4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，一般地可选标记基因对于载体已引入其内的宿主细胞赋予针对药物(例如G418、潮霉素或甲氨蝶呤)的抗性。例如，可选标记基因包括二氢叶酸还原酶(DHFR)基因(用于在用甲氨蝶呤选择/扩增的dhfr-宿主细胞中使用)、neo基因(用于G418选择)、和谷氨酸盐合成酶基因。
如本文所使用的，术语“表达控制序列”意指实现它们与之连接的编码序列的表达和加工所需的多核苷酸序列。表达控制序列包括合适的转录起始、终止、启动子和增强子序列；有效的RNA加工信号，例如剪接和多腺苷酸化信号；使细胞质mRNA稳定的序列；增强翻译效率的序列(即，Kozak共有序列)；增强蛋白质稳定性的序列；和需要时，增强蛋白质分泌的序列。此种控制序列的性质依宿主生物而不同；在原核生物中，此种控制序列一般包括启动子、核糖体结合位点和转录终止序列；在真核生物中，一般地，此种控制序列包括启动子和转录终止序列。术语“控制序列”意欲最低限度包括其存在是表达和加工所需的所有组分，并且还可以包括其存在是有利的另外组分，例如前导序列和融合配偶体序列。
产生抗体和抗体产生细胞系的方法
在某些实施方案中，人抗体通过用人IgE抗原免疫接种非人、转基因动物来产生，所述转基因动物在其基因组内包含某些或全部人免疫球蛋白重链和轻链基因座。在一个优选实施方案中，非人动物是
Figure G2008800104874D00461
动物。(Abgenix，Inc./Amgen，Inc.-Fremont，CA)。
小鼠是经改造的小鼠品系，其包含人免疫球蛋白重链和轻链基因座的大片段，并且在小鼠抗体产生中是缺陷的。参见例如，Green等人，Nature Genetics 7：13-21(1994)以及美国专利5,916,771、5,939,598、5,985,615、5,998,209、6,075,181、6,091,001、6,114,598、6,130,364、6,162,963和6,150,584。还参见WO 91/10741、WO 94/02602、WO 96/34096、WO 96/33735、WO 98/16654、WO 98/24893、WO 98/50433、WO 99/45031、WO 99/53049、WO 00/09560和WO 00/037504。
在另一个方面，本发明提供了用于从非人、非小鼠动物制备抗IgE抗体的方法，通过用IgE抗原免疫接种包含人免疫球蛋白基因座的非人转基因动物。可以使用上文引用的文件中描述的方法产生此种动物。这些文件中公开的方法可以如US 5,994,619中所述的进行修饰。US5,994,619描述了用于产生衍生自猪和牛的新型培养内细胞团(CICM)细胞和细胞系，以及异源DNA已插入其内的转基因CICM细胞的方法。CICM转基因细胞可以用于产生克隆的转基因胚胎、胎儿和后代。US5,994,619还描述了产生能够将异源DNA传递给其后代的转基因动物的方法。在本发明的一个优选实施方案中，非人动物是哺乳动物，特别是大鼠、绵羊、猪、山羊、牛、马或鸡。
Figure G2008800104874D00471
小鼠产生全人抗体的成人样人储库，且产生抗原特异性人抗体。在某些实施方案中，通过在酵母人工染色体(YAC)中引入兆碱基大小的、人重链基因座和κ轻链基因座的种系构型片段，
Figure G2008800104874D00472
小鼠进一步包含约80％的人抗体V基因储库。在其他实施方案中，
Figure G2008800104874D00473
小鼠进一步包含几乎全部人λ轻链基因座。参见Mendez等人，Nature Genetics 15：146-156(1997)，Green和Jakobovits，J.Exp.Med.188：483-495(1998)，和WO 98/24893。
在某些实施方案中，包含人免疫球蛋白基因的非人动物是具有人免疫球蛋白“微小基因座”的动物。在微小基因座方法中，通过包括来自Ig基因座的个别基因模拟外源Ig基因座。因此，一种或多种VH基因、一种或多种DH基因、一种或多种JH基因、μ恒定结构域和第二个恒定结构域(优选γ恒定结构域)形成到构建体内用于插入动物内。这种方法尤其在美国专利5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016、5,770,429、5,789,650、5,814,318、5,591,669、5,612,205、5,721,367、5,789,215和5,643,763中描述。
动物的免疫接种可以通过本领域已知的任何方法。参见例如，Harlow和Lane，Antibodies：A Laboratory Manual，New York：ColdSpring Harbor Press，1990。用于免疫接种非人动物例如小鼠、大鼠、绵羊、山羊、猪、牛和马的方法是本领域众所周知的。参见例如，Harlow和Lane同上以及US 5,994,619。在一个优选实施方案中，人IgE抗原与佐剂一起施用，以刺激免疫应答。示例性佐剂包括完全或不完全弗氏佐剂、RIBI(胞壁酰二肽)或ISCOM(免疫刺激复合物)。此种佐剂通过使其隔绝在局部沉积中可以保护多肽不受快速分散，或它们可以包含刺激宿主分泌对于巨噬细胞是趋化性的因子和免疫系统的其他组分的物质。优选地，如果施用多肽，那么免疫接种程序表将涉及经过数周展开的多肽的2次或更多施用。实施例2例示了用于在
Figure G2008800104874D00481
小鼠中产生抗IgE单克隆抗体的方法。
用IgE抗原免疫接种动物后，可以从动物中获得抗体和/或抗体产生细胞。在某些实施方案中，通过给动物采血或处死动物从动物中获得含抗IgE抗体的血清。可以如其从动物中获得的使用血清，可以从血清中获得免疫球蛋白部分，或可以从血清中纯化抗IgE抗体。
在某些实施方案中，由从免疫接种动物中分离的细胞制备抗体产生细胞系。免疫接种后，处死动物，并且通过本领域已知的任何方法使淋巴结和/或脾脏B细胞永生化。使细胞永生化的方法包括但不限于，用癌基因转染细胞、用致癌病毒感染细胞且在就永生化细胞选择的条件下培养细胞，对细胞实施致癌物或突变化合物，使细胞与永生化细胞例如骨髓瘤细胞融合，并且使肿瘤抑制基因灭活。参见例如，Harlow和Lane同上。如果使用与骨髓瘤细胞的融合，那么骨髓瘤细胞优选不分泌免疫球蛋白多肽(非分泌细胞系)。永生化细胞使用IgE或其部分进行筛选。在一个优选实施方案中，起始筛选使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)或放射性免疫测定法来执行。ELISA筛选的例子在WO 00/37504中提供。
选择抗IgE抗体产生细胞例如杂交瘤，克隆，并且就所需特征包括强壮生长、高抗体产生和所需抗体特征进一步筛选，如下文进一步讨论的。杂交瘤可以在体内在同系动物中，在缺乏免疫系统的动物例如裸鼠中，或在体外在细胞培养中进行扩增。选择、克隆和扩增杂交瘤的方法是本领域普通技术人员众所周知的。
在一个优选实施方案中，免疫接种动物是表达人免疫球蛋白基因的非人动物，并且脾脏B细胞与来自与非人动物相同物种的骨髓瘤细胞系融合。在一个更优选的实施方案中，免疫接种动物是
Figure G2008800104874D00491
小鼠，并且骨髓瘤细胞系是非分泌小鼠骨髓瘤。在一个更加优选的实施方案中，骨髓瘤细胞系是P3-X63-Ag8.653(美国典型培养物保藏中心)。参见例如下文实施例。因此，在一个实施方案中，本发明提供了用于产生细胞系的方法，所述细胞系产生针对人IgE的人单克隆抗体或其片段，所述方法包括(a)用IgE、IgE的部分或者表达IgE的细胞或组织免疫接种本文描述的非人转基因动物；(b)允许转基因动物发动针对IgE的免疫应答；(c)从转基因动物中分离抗体产生细胞；(d)使抗体产生细胞永生化；(e)产生永生化的抗体产生细胞的个别单克隆群体；和(f)筛选永生化的抗体产生细胞，以鉴定针对IgE的抗体。
在另一个方面，本发明提供了产生人抗IgE抗体的细胞系。在某些实施方案中，细胞系是杂交瘤细胞系。在某些实施方案中，杂交瘤是小鼠杂交瘤，如上所述。在其他实施方案中，杂交瘤在非人、非小鼠物种例如大鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马中产生。在另一个实施方案中，杂交瘤是人杂交瘤。
在另一个实施方案中，用IgE抗原、原始细胞例如脾脏或外周血B细胞免疫接种转基因动物，从免疫接种的转基因动物中分离，并且鉴定产生对于所需抗原特异的抗体的个别细胞。分离来自每个个别细胞的多腺苷酸化的mRNA，并且使用有义引物和反义引物执行逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)，所述有义引物对可变结构域序列退火，例如识别人重和轻链可变结构域基因的大多数或全部FR1区的简并引物，所述反义引物对恒定或连接区序列退火。重和轻链可变结构域的cDNAs随后在任何合适的宿主细胞例如骨髓瘤细胞中进行克隆且表达，作为具有分别的免疫球蛋白恒定区例如重链和κ或λ恒定结构域的嵌合抗体。参见Babcook，J.S.等人，Proc.Natl.Acad.Scl USA93：7843-48，1996。抗IgE抗体随后可以如本文所述的进行鉴定且分离。
噬菌体展示文库
本发明提供了用于产生抗IgE抗体或其抗原结合部分的方法，其包括下述步骤：在噬菌体上合成人抗体文库，用IgE或其抗原结合部分筛选文库，分离结合IgE的噬菌体，且从噬菌体中获得抗体。例如，用于制备用于在噬菌体展示技术中使用的抗体文库的一种方法包括下述步骤：用IgE或其抗原部分免疫接种包含人免疫球蛋白基因座的非人动物，以产生免疫应答，从免疫接种动物中提取抗体产生细胞；从提取细胞中分离编码本发明抗体的重和轻链的RNA，使RNA逆转录以产生cDNA，使用引物扩增cDNA，并且将cDNA插入噬菌体展示载体内，从而使得抗体在噬菌体上表达。本发明的重组抗IgE抗体可以以这种方式获得。
通过筛选重组组合抗体文库可以分离本发明的重组人抗IgE抗体。优选地文库是使用由B细胞中分离的mRNA制备的人VL和VHcDNAs产生的scFv噬菌体展示文库。用于制备且筛选此种文库的方法是本领域已知的。用于产生噬菌体展示文库的试剂盒是商购可得的(例如Pharmacia Recombinant Phage Antibody System，目录号27-9400-01；和Stratagene SurfZAP噬菌体展示试剂盒，目录号240612)。还存在可以用于产生且筛选抗体展示文库的其他方法和试剂(参见例如，美国专利号5,223,409；PCT公开号WO 92/18619、WO 91/17271、WO92/20791、WO 92/15679、WO 93/01288、WO 92/01047、WO 92/09690；Fuchs等人.Bio/Technology 9：1370-1372(1991)；Hay等人，Hum.Antibod.Hybridomas 3：81-85(1992)；Huse等人，Science 246：1275-1281(1989)；McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；Griffiths等人，EMBO J.12：725-734(1993)；Hawkins等人，J.Mol.Biol.226：889-896(1992)；Clackson等人，Nature 352：624-628(1991)；Gram等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：3576-3580(1992)；Garrad等人，Bio/Technology 9：1373-1377(1991)；Hoogenboom等人，Nuc.Add Res.19：4133-4137(1991)；和Barbas等人，Proc.Natl.Acad.Sd.USA 88：7978-7982(1991)，所述参考文献全部引入本文作为参考。
在一个实施方案中，为了分离且产生具有所需特征的人抗IgE抗体，如本文所述的人抗IgE抗体首先用于选择具有针对IgE的相似结合活性的人重和轻链序列，使用引入本文作为参考的PCT公开号WO93/06213中描述的表位印迹方法。在这种方法中使用的抗体文库优选是如PCT公开号WO 92/01047，McCafferty等人，Nature 348：552-554(1990)；和Griffiths等人，EMBO J.12：725-734(1993)中所述制备且筛选的scFv文库，所述参考文献全部引入本文作为参考。scFv抗体文库优选使用人IgE作为抗原进行筛选。
一旦选择了起始人VL和VH结构域，就执行“混合和匹配”实验，其中起始选择的VL和VH区段的不同对就IgE结合进行筛选，以选择优选的VL/VH对组合。此外，为了进一步改善抗体的质量，优选的一个或多个VL/VH对的VL和VH区段可以进行随机突变，优选在VH和/或VL的CDR3区内，以类似于在天然免疫应答过程中负责抗体的亲和力成熟的体内体细胞突变过程的过程。这种体外亲和力成熟可以通过使用分别与VH CDR3或VL CDR3互补的PCR引物扩增VH和VL结构域来完成，所述引物已在特定位置处用4种核苷酸碱基的随机混合物进行“掺料”，从而使得所产生的PCR产物编码随机突变已引入VH和/或VL CDR3区域内的VH和VL区段。这些随机突变的VH和VL区段可以就与IgE的结合进行再筛选。从重组免疫球蛋白展示文库中筛选和分离本发明的抗IgE抗体后，可以从展示包中(例如从噬菌体基因组中)回收编码分泌抗体的核酸，并且通过标准重组DNA技术亚克隆到其他表达载体内。需要时，核酸可以进行进一步处理，以产生本发明的其他抗体形式，如下所述。为了表达通过筛选组合文库分离的重组人抗体，将编码抗体的DNA克隆到重组表达载体内，并且引入哺乳动物宿主细胞内，如上所述。
非杂交瘤宿主细胞和重组产生蛋白质的方法
在一个方面，本发明提供了允许本发明抗体或其部分的重组表达的重组宿主细胞。通过在此种重组宿主细胞中的此种重组表达产生的抗体在本文中称为“重组抗体”。本发明还提供了此种宿主细胞的后代细胞和由其产生的抗体。
如本文所使用的，术语“重组宿主细胞”(或简单地“宿主细胞”)意指重组表达载体已引入其内的细胞。应当理解“重组宿主细胞”和“宿主细胞”不仅意指特定受试细胞，还意指此种细胞的后代。因为由于突变或环境影响，某些修饰可以在后代后发生，所以此种后事实上可能不等同于亲本细胞，但仍包括在如本文所使用的术语“宿主细胞”的范围内。
此种细胞可以包含如上所述的根据本发明的载体。
在另一个方面，本发明提供了用于制备如上所述的抗体或其部分的方法。根据一个实施方案，所述方法包括培养用如上所述的载体转染或转化的细胞，并且回收所述抗体或其部分。
编码抗IgE抗体的核酸分子和包含这些核酸分子的载体可以用于转染合适的哺乳动物、植物、细菌或酵母宿主细胞。转化可以通过用于将多核苷酸引入宿主细胞内的任何已知方法。用于将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞内的方法是本领域众所周知的，并且包括葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、聚凝胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、一种或多种多核苷酸封装在脂质体中、和DNA直接显微注射到核内。此外，核酸分子可以通过病毒载体引入哺乳动物细胞内。转化细胞的方法是本领域众所周知的。参见例如，美国专利4,399,216、4,912,040、4,740,461和4,959,455。转化植物细胞的方法是本领域众所周知的，包括例如土壤杆菌属介导的转化、biolistic转化、直接注射、电穿孔和病毒转化。转化细菌和酵母细胞的方法也是本领域众所周知的。
可用作宿主用于表达的哺乳动物细胞系是本领域众所周知的，并且包括可从美国典型培养物保藏中心(ATCC)获得的许多永生化细胞系。这些尤其包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO)细胞、NS0细胞、SP2细胞、HEK-293T细胞、293 Freestyle细胞(Invitrogen)、NIH-3T3细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、非洲绿猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如Hep G2)、A549细胞和许多其他细胞系。特别优选的细胞系通过测定何种细胞系具有高表达水平进行选择。可以使用的其他细胞系是昆虫细胞系，例如Sf9或Sf21细胞。当编码抗体基因的重组表达载体引入哺乳动物宿主细胞内时，这样产生抗体：使宿主细胞培养足够的时间段，以允许抗体在宿主细胞中表达，或更优选地，抗体分泌到其中宿主细胞生长的培养基内。抗体可以使用标准蛋白质纯化方法从培养基中回收。植物宿主细胞包括例如烟草属、拟南芥属、浮萍、玉米、小麦、马铃薯等。细菌宿主细胞包括大肠杆菌(E.coli)和链霉菌属(Streptomyces)物种。酵母宿主细胞包括栗酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)、酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)。
此外，本发明的抗体或其部分由产生细胞系的表达可以使用许多已知技术得到增强。例如，谷氨酰胺合成酶基因表达系统(GS系统)是用于在某些条件下增强表达的常用方法。GS系统整体或部分与EP专利0 216 846、0 256 055、0 323 997和0 338841结合进行讨论。
可能由不同细胞系或在转基因动物中表达的抗体将具有彼此不同的糖基化模式。然而，由本文提供或包含本文提供的氨基酸序列的核酸分子编码的所有抗体是本发明的部分，与抗体的糖基化状态无关，并且更一般地，与一种或多种翻译后修饰的存在或不存在无关。
转基因动物和植物
本发明的抗IgE抗体也可以通过产生哺乳动物或植物，并且由此产生以可回收形式的抗体而转基因产生，所述哺乳动物或植物对于目的免疫球蛋白重和轻链序列是转基因的。与哺乳动物中的转基因产生结合，抗IgE抗体可以在山羊、牛或其他哺乳动物的乳中产生且回收。参见例如，美国专利5,827,690、5,756,687、5,750,172和5,741,957。在某些实施方案中，包含人免疫球蛋白基因座的非人转基因动物用人IgE或其免疫原性部分进行免疫接种，如上所述。用于在植物中制备抗体的方法例如在美国专利6,046,037和5,959,177中描述。
在某些实施方案中，通过标准转基因技术，通过将编码本发明抗IgE抗体的一种或多种核酸分子引入动物或植物内产生非人转基因动物或植物。参见Hogan和美国专利6,417,429，同上。用于制备转基因动物的转基因细胞可以是胚胎干细胞或体细胞或受精卵。转基因非人生物可以是嵌合、非嵌合异质结合体和非嵌合同质结合体。参见例如，Hogan等人，Manipulating the Mouse Embryo：A Laboratory Manual第2版，Cold Spring Harbor Press(1999)；Jackson等人，MouseGenetics and Transgenics：A Practical Approach，OxfordUniversity Press(2000)；和Pinkert，Transgenic AnimalTechnology：A Laboratory Handbook，Academic Press(1999)。在某些实施方案中，转基因非人动物通过靶向构建体具有靶向破坏和替换，所述构建体编码目的重链和/或轻链。在一个优选实施方案中，转基因动物包含且表达编码重和轻链的核酸分子，所述重和轻链与人IgE特异性结合。抗IgE抗体可以在任何转基因动物中制备。在一个优选实施方案中，非人动物是小鼠、大鼠、绵羊、猪、山羊、牛或马。非人转基因动物在血液、乳、尿、唾液、眼泪、粘液和其他体液中表达所述编码的多肽。
用于治疗哮喘和其他IgE介导的病症的药物组合物、方法
在一个方面，根据本发明的抗体或其部分用于作为药物使用。
在另一个方面，根据本发明的抗体或其部分用于治疗哮喘，特别是变应性哮喘。如上所述，哮喘和变应性哮喘是本领域充分限定的。它们是气道的慢性炎性病症，一般涉及例如喘息、气绝、胸部紧迫感和咳嗽的症状。
在另一个方面，根据本发明的抗体或其部分用于治疗其他IgE介导的病症，包括变应性鼻炎和食物过敏，包括花生过敏。
变应性鼻炎一般涉及症状的集合，包括主要在鼻、窦和眼中的炎症症状，其在暴露于空气传播的颗粒后发生。症状包括喷嚏；鼻阻塞；流鼻水(和偶然地鼻出血)；咳嗽；头痛；鼻、口、眼、咽喉、皮肤或暴露于变应原的任何区域瘙痒；嗅觉受损(和因此对于调味剂的敏感性)；鼻塞(鼻充血)；结膜炎；流眼泪；喉咙痛；和喘息。
变应性鼻炎可以是常年性和/或季节性的。常年性变应性鼻炎是全年持续的变应性鼻炎。它一般通过持续暴露于变应原例如动物毛屑、室内霉菌孢子或室尘螨而引起。季节性变应性鼻炎是仅在每年的特定时间过程中发生的变应性鼻炎。它通常通过对于季节性产生的树、草和杂草花粉的变应性而引起。
食物过敏是由蛋、花生、乳或某些其他特定食物触发的过大的免疫应答。任何食物都可以引起变态反应，但少数食物是主要罪犯。在儿童中，大多数常见食物过敏针对蛋、花生、乳、大豆、树坚果、小麦、贝类(虾、蟹、龙虾、蜗牛、蛤)。在年长儿童和成人中，大多数常见食物过敏是：花生、树坚果、贝类、鱼类。症状可以主要限制于胃和肠，或在食物消化或吸收后可能涉及机体的许多部分。症状可以包括：咽喉发痒、过敏性反应(可能导致死亡的严重的、全身变态反应)；腹痛；腹泻；恶心；呕吐；胃抽筋；口、咽喉、眼、皮肤或任何区域的瘙痒；麻疹；血管性水肿(特别是眼睑、面部、唇和舌的肿胀)；轻度头痛或昏厥；鼻充血；流鼻水；呼吸短促；喘息；吞咽困难；口腔过敏综合征。口腔过敏综合征一般包含唇、舌和咽喉瘙痒，以及有时唇肿大。
在另一个方面，根据本发明的抗体或其部分用于治疗其他IgE介导的病症，例如结膜炎、特应性皮炎、过敏性反应、接触性皮炎、变应性胃肠病、变应性肺曲霉病、变应性紫癜、湿疹、高IgE(Job′s)综合征、过敏性超敏反应、IgE骨髓瘤、炎性肠病(例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、未定型结肠炎和传染性结肠炎)、荨麻疹、牛皮癣。
在一个方面，本发明提供了包含如上所述的抗体或其部分的药物组合物。
本发明的抗体或其部分可以单独或与本发明的一种或多种其他抗体组合或与一种或多种其他药物组合(或作为其任何组合)进行施用。本发明的药物组合物、方法和用途因此还包含与其他活性剂组合(共同施用)的实施方案，如下所述。如本文所使用的，术语“共同施用”和“与......组合”提及本发明的抗体和一种或多种其他治疗剂，意指下述，并且的确涉及下述且包括下述：
-本发明的一种或多种抗体和一种或多种治疗剂的此种组合同时施用于需要治疗的患者，当此种组分一起配制到单个剂型内时，所述单个剂型基本上同时将所述组分释放给所述患者，
-本发明的一种或多种抗体和一种或多种治疗剂的此种组合基本上同时施用于需要治疗的患者，当此种组分彼此分开配制到分开的剂型内时，所述分开的剂型基本上同时由所述患者服用，因此所述组分基本上同时释放给所述患者，
-本发明的一种或多种抗体和一种或多种治疗剂的此种组合顺次施用于需要治疗的患者，当此种组分彼此分开配制到分开的剂型内，所述分开的剂型由所述患者在连续时间时服用，在每次施用之间具有显著的时间间隔，因此所述组分基本上不同时间释放给所述患者；和
-本发明的一种或多种抗体和一种或多种治疗剂的此种组合顺次施用于需要治疗的患者，当此种组分一起配制到单个剂型内，所述单个剂型以控制方式释放所述组分，因此它们在同时和/或不同时间时同时、连续和/或重叠释放给所述患者，
其中每个部分可以通过相同或不同途径施用。
在一个方面，本发明的抗体可以与另一种药剂/药物共同施用或配制用于治疗哮喘。例如，本发明的抗体可以与选自下述的一种或多种共同施用或共同配制：类固醇包括皮质类固醇(吸入的、口服的)；支气管扩张剂(例如长效β-2激动剂；短效β-2激动剂)；其他抗IgE试剂，例如IgE疫苗；白三烯拮抗剂/抑制剂；甲基黄嘌呤；针对涉及气道炎症的白介素的抗体，例如针对IL-4或IL-13或TNF的单克隆抗体；色甘酸盐，例如色甘酸钠；奈多罗米钠；antichole ginics和PDE抑制剂。
在另一个方面，本发明的抗体可以与抗组胺剂、非甾体抗炎药、解充血药、镇咳剂和止痛剂中的至少一种组合施用或配制。
一般地，本发明的抗体或其部分适合于作为与一种或多种药学上可接受的赋形剂结合的制剂施用。术语‘赋形剂’在本文中用于描述除本发明的一种或多种化合物外的任何成分。一种或多种赋形剂的选择在很大程度上依赖诸如具体施用方式、赋形剂对溶解性和稳定性的作用、以及剂型的性质的因素。如本文所使用的，“药学上可接受的赋形剂”包括生理学相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗菌剂和抗真菌剂、等渗和吸收延迟剂等。药学上可接受的赋形剂的某些例子是水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等，及其组合。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖，多元醇例如甘露醇、山梨糖醇，或氯化钠。药学上可接受物质的另外例子是湿润剂或小量辅助物质，例如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增强抗体的保存期或有效性。本发明的药物组合物和关于其制备的方法对于本领域技术人员将是显而易见的。此种组合物和关于其制备的方法可以例如在Remington′s Pharmaceutical Sciences，第19版(MackPublishing Company，1995)中发现。药物组合物优选在GMP条件下进行制造。
本发明的药物组合物可以散装、作为单个单位剂量、或作为多个单个单位剂量进行制备、包装、或销售。如本文所使用的，“单位剂量”是个别量的药物组合物，所述药物组合物包含预定量的活性成分。活性成分的量一般等于将施用于受试者的活性成分的剂量或此种剂量的方便部分，例如此种剂量的一半或三分之一。用于施用本领域中公认的肽、蛋白质或抗体的任何方法都可能适合于用于本发明的抗体和部分。
本发明的药物组合物一般适合于肠胃外施用。如本文所使用的，药物组合物的“肠胃外施用”包括特征在于受试者组织的物理伤口的任何施用途径和药物组合物通过组织中的伤口的施用，从而一般导致直接施用到血流内、到肌肉内、或到内脏器官内。肠胃外施用因此包括但不限于，通过注射组合物施用药物组合物，通过外科切口应用组合物，通过组织穿透非外科创伤应用组合物等。特别地，肠胃外施用考虑包括但不限于，皮下、腹膜内、肌内、胸骨内、静脉内、动脉内、鞘内、心室内、尿道内、颅内、滑膜内注射或输注；和肾透析输注技术。优选的实施方案包括静脉内和皮下途径。
适合于肠胃外施用的药物组合物的制剂一般包含与药学上可接受的载体组合的活性成分，所述载体例如无菌水或无菌等渗盐水。此种制剂可以以适合于推注施用或连续施用形式进行配制、包装或销售。可注射制剂可以以单位剂型，例如在包含防腐剂的安瓿或多剂量容器中进行配制、包装或销售。用于肠胃外施用的制剂包括但不限于，在油或水媒介物中的悬浮液、溶液、乳状液、糊剂等。此种制剂可以进一步包含一种或多种另外的成分，包括但不限于悬浮、稳定或分散剂。在用于肠胃外施用的制剂的一个实施方案中，活性成分以干燥(即粉剂或粒剂)形式提供，用于在重构组合物的肠胃外施用前用合适的媒介物(例如灭菌无热原水)重构。肠胃外制剂还包括水溶液，其可以包含赋形剂例如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选至3-9的pH)，但对于某些应用，它们可以更适合于配制为无菌非水溶液或干燥形式，以与合适的媒介物例如灭菌、无热原水结合使用。示例性肠胃外施用形式包括在无菌水溶液中的溶液或悬浮液，例如丙二醇或右旋糖水溶液。需要时，此种剂型可以进行适当缓冲。有用的其他肠胃外可施用的制剂包括包含以微晶形式或在脂质体制剂中的活性成分的那些。用于肠胃外施用的制剂可以配制为立即和/或缓和释放的。缓和释放制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和按程序释放。
例如，在一个方面，无菌可注射溶液可以通过将所需量的抗IgE抗体与上文列出的成分之一或组合掺入合适溶剂中进行制备进行制备，需要时，随后为过滤灭菌。一般地，分散系通过将活性化合物掺入无菌媒介物中进行制备，所述无菌媒介物包含基本分散介质和来自上文列出那些的所需其他成分。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉剂的情况下，优选制备方法是真空干燥和冷冻干燥，这产生来自其先前无菌过滤溶液的活性成分加任何另外所需成分的粉末。溶液的合适流动性可以这样得到维持：例如通过使用包衣例如卵磷脂、在分散系的情况下通过维持所需粒子大小和通过使用表面活性剂。可注射组合物的延长吸收可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂例如单硬脂酸盐和明胶来达到。
本发明的示例性、非限制性药物组合物是作为无菌水溶液的制剂，所述无菌水溶液具有约5.0-约6.5的pH，并且包含约1mg/mL-约200mg/mL本发明的抗体、约1毫摩尔-约100毫摩尔组氨酸缓冲液、约0.01mg/mL-约10mg/mL聚山梨醇酯80、约100毫摩尔-约400毫摩尔海藻糖、和约0.01毫摩尔-约1.0毫摩尔EDTA二钠二水化物。
本发明的抗体还可以鼻内或通过吸入进行施用，一般以来自干粉吸入器的干粉(单独，作为混合物，或作为混合组分颗粒，例如与合适的药学上可接受的赋形剂混合)形式，作为来自增压容器、泵、喷射器、喷雾器(优选使用电流体动力学的喷雾器以产生精细薄雾)或雾化器的气溶胶喷雾，连同使用或不使用合适的推进剂，或作为滴鼻剂。
增压容器、泵、喷射器、喷雾器或雾化器一般包含本发明抗体的溶液或悬浮液，其包含例如合适的试剂用于分散、溶解或延长活性的释放，一种或多种推进剂作为溶剂。
在以干粉或悬浮制剂使用前，药物产品一般微粒化至适合于通过吸入递送的大小(一般小于5微米)。这可以通过任何合适的粉碎方法来达到，所述方法例如螺旋气流磨、流体床气流磨、超临界流体加工以形成纳米颗粒、高压均质化、或喷雾干燥。
可以配制用于在吸入器或吹入器中使用的胶囊、水泡和药筒，以包含本发明化合物、合适的粉基和性能改良剂的粉末混合物。用于在使用电流体动力学以产生精细薄雾的喷雾器中使用的合适的溶液制剂可以包含合适剂量的本发明抗体/启动，并且启动体积可以例如从1μL到100μL不等。
合适的调味剂例如薄荷和左薄荷脑或甜味剂例如糖精或糖精钠，可以加入预期用于吸入/鼻内施用的本发明的这些制剂中。
用于吸入/鼻内施用的制剂可以配制为立即和/或缓和释放的。缓和释放制剂包括延迟、持续、脉冲、控制、靶向和按程序释放。
在干粉吸入器和气溶胶的情况下，剂量单位借助于递送测定量的阀进行确定。依照本发明的单位一般安排为施用本发明抗体的测定量或“团(puff)”。总日剂量一般将以单次剂量或更通常地作为全天的分份剂量进行施用。
本发明的抗体和抗体部分也可以配制用于口部途径施用。口部施用可以涉及吞咽，从而使得化合物加入胃肠道，和/或通过其化合物直接从口进入血流的颊、舌或舌下施用。
适合于口部施用的制剂包括固体、半固体和液体系统，例如片剂；包含多颗粒或纳米颗粒、液体或粉末的软或硬胶囊；锭剂(包括液体填充的)；咀嚼剂；凝胶剂；快速分散剂型；薄膜；胚珠(ovules)；喷雾剂；和颊/粘膜粘着糊剂。
液体制剂包括悬浮液、溶液、糖浆剂和酏剂。此种制剂可以在软或硬胶囊(例如由明胶或羟丙基甲基纤维素制备)中作为填充剂使用，并且一般包含载体，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油，以及一种或多种乳化剂和/或悬浮剂。液体制剂还可以通过例如由囊剂重构固体进行制备。
在一个方面，所述药物组合物用于治疗哮喘，包括变应性哮喘。在另一个方面，所述药物组合物用于治疗其他IgE介导的病症，包括变应性鼻炎、食物过敏(例如花生过敏)、结膜炎、特应性皮炎、过敏性反应、接触性皮炎、变应性胃肠病、变应性肺曲霉病、变应性紫癜、湿疹、高IgE(Job′s)综合征、过敏性超敏反应、IgE骨髓瘤、炎性肠病(例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、未定型结肠炎和传染性结肠炎)、荨麻疹、牛皮癣。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗有此需要的受试者中的哮喘特别是变应性哮喘的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的如上所述的抗体或其部分。
在另一个方面，本发明提供了用于治疗有此需要的受试者中的IgE介导的病症的方法，其包括给所述受试者施用治疗有效量的如上所述的抗体或其部分。
所述IgE介导的病症可以选自变应性鼻炎、食物过敏(例如花生过敏)、结膜炎、特应性皮炎、过敏性反应、接触性皮炎、变应性胃肠病、变应性肺曲霉病、变应性紫癜、湿疹、高IgE(Job′s)综合征、过敏性超敏反应、IgE骨髓瘤、炎性肠病(例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、未定型结肠炎和传染性结肠炎)、荨麻疹、牛皮癣。
在另外一个方面，本发明提供了用于治疗有此需要的受试者中的寄生虫感染的方法，其中所述寄生虫感染与升高的IgE水平相关。在一个方面，所述方法包括给所述受试者施用本发明抗体的量，其中所述量足够以这样的方式减少受试者的IgE水平，使得它们在治疗过程中无法检测。
在另外一个方面，本发明提供了如上所述的抗体或其部分在制备药物用于治疗选自下述的IgE介导的病症中的用途：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
在另外一个方面，本发明提供了如上所述的抗体或其部分在制备药物用于治疗选自下述的IgE介导的病症中的用途：结膜炎、特应性皮炎、过敏性反应、接触性皮炎、变应性胃肠病、变应性肺曲霉病、变应性紫癜、湿疹、高IgE(Job′s)综合征、过敏性超敏反应、IgE骨髓瘤、炎性肠病(例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、未定型结肠炎和传染性结肠炎)、荨麻疹、牛皮癣。
“治疗”指减轻或取消生物病症和/或至少一种其伴随症状的方法。如本文所使用的，“减轻”疾病、病症或病症意指减少疾病、病症或病状的症状的严重度和/或发生频率。此外，本文提及“治疗”包括提及治愈、姑息和预防治疗。
在一个方面，受试者是哺乳动物，优选人受试者。所述受试者可以是任何年龄的雄性或雌性。
“治疗有效量”指待施用的治疗剂的量，其将使待治疗病症的一种或多种症状减轻至一定程度。提及哮喘的治疗，治疗有效量指减轻至少一种下述症状的量：呼吸短促、胸部紧迫感、喘息、咳嗽。
给药方案可以进行调整以提供最佳所需应答。例如，可以施用单次灌注剂，可以随着时间过去施用几个分份剂量，或可以按比例减少或增加剂量，如由治疗情况的紧急性指出的。以剂量单位形式配制肠胃外组合物用于易于施用和剂量的一致性是特别有利的。如本文所使用的，剂量单位形式指适合作为单位剂量用于待治疗的患者/受试者的物理分散单位；每个单位包含计算为产生与所需药学获利者相关的所需疗效的预定量的活性化合物。关于本发明的剂量单位形式的说明书一般通过下述指示且直接依赖下述：(a)化学治疗剂的独特特征和待达到的具体治疗或预防效应，和(b)配料此种活性化合物用于治疗个体中的敏感性的领域中固有的局限性。
因此，技术人员应当理解，基于本文提供的公开内容，剂量和给药方案依照治疗领域中众所周知的方法进行调整。即，可以容易地确定最大耐受剂量，并且还可以测定对患者提供可检测治疗利益的有效量，因为关于施用每种试剂的暂时需求可以对患者提供可检测治疗利益。因此，尽管特定剂量和施用方案在本文中例示，但这些例子决不限制在实践本发明中可以提供给患者的剂量和施用方案。
应当指出剂量值可以根据待减轻的病状的类型和严重度改变，并且可以包括单次或多次剂量。应进一步理解对于任何具体受试者，根据个体需要和施用或监督组合物施用的个人的专业判断，特定给药方案应随着时间过去进行调整，并且本文阐述的剂量范围仅是示例性的，且不意欲限制要求保护的组合物的范围或实践。此外，用本发明组合物的给药方案可以基于各种因素，包括疾病类型，患者的年龄、重量、性别、医学条件，病状的严重度，施用途径，和所采用的具体抗体。因此，给药方案可以广泛改变，但可以使用标准方法进行常规测定。例如，剂量可以基于药代动力学或药效学参数进行调整，所述参数可以包括临床效应例如毒性效应和/或实验室值。因此，本发明包含如由技术人员测定的患者内剂量增加。测定合适的剂量和方案是相关领域中众所周知的，并且一旦提供本文提供的教导，就应当理解为由技术人员包含。
对于施用于人受试者，本发明的抗体或抗体部分的总月剂量一般是0.5-1200mg/患者，当然依赖施用方式。例如，静脉内月剂量可能需要约1-1000mg/患者。总月剂量可以以单次或分份剂量进行施用，并且根据医生的判断可以在本文给出的一般范围外。
关于本发明的抗体或抗体部分的治疗或预防有效量的示例性、非限制性范围是1-1000mg/患者/月。在一个实施方案中，本发明的抗体或抗体部分可以以约1-200或1-150mg/患者/月进行施用。
为了可以更好地理解本发明，阐述下述实施例。这些实施例仅为了举例说明的目的，并且不应解释为以任何方式限制本发明的范围。
本说明书中引用的所有出版物、专利和专利申请引入本文作为参考。尽管本发明已通过举例说明和实施例略微详细地描述用于清楚理解的目的，但对于本领域普通技术人员显而易见的是，根据本发明的教导，可以对其进行某些改变和修饰，而不背离附加权利要求的精神或范围。
实施例1：免疫原
下文序列是来自用作免疫原用于融合物6的人IgE的ε重链C2-C4结构域，(引起其编号从a6开始的克隆，包括6.605.1)：
PTVKILQSSCDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWLEDGQVMDVDLSTASTTQEGELASTQSELTLSQ
KHWLSDRTYTCQVTYQGHTFEDSTKKCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVN
LTWSRASGKPVNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALMRSTTKTSGPR
AAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNFMPEDISVQWLHNEVQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRL
EVTRAEWEQKDEFICRAVHEAASPSQTVQRAVSVNPGK
下文C3-C4序列是来自用作免疫原用于融合物5的人IgE的ε重链C3-C4结构域的预测序列，(引起其编号从a5开始的克隆，包括5.396.1和5.948.1)：
CADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSRASGKPVNHSTRKEEKQRNGTL
TVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHPHLPRALMRSTTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLI
QNFMPEDISVQWLHNEVQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEWEQKDEFICRAVHEAASPS
QTVQRAVSVNPGK
实施例2：免疫接种和杂交瘤产生
8-10周大的
Figure G2008800104874D00631
小鼠用10μg/小鼠的抗原在其后脚垫中进行免疫接种。这个剂量经过3-5周的时间段重复6-8次。在融合前3或4天，小鼠给予在PBS中的免疫原的最终注射。来自免疫接种小鼠的脾脏和淋巴结淋巴细胞经由电促细胞融合与非分泌骨髓瘤P3-X63-Ag8.653细胞系(ATCC目录号CRL 1580)融合，并且对这些融合细胞实施HA-DMEM选择，如先前描述的(DMEM、15％FBS、1％200mM L-谷氨酰胺、1％100X非必需氨基酸1％100X Pen/Strep、10U/mlIL-6、1小瓶/升OPI培养基补充剂、加上0.5X HA(Azaserine-Hypoxanthine，Sigma，目录#A9666))。回收全部分泌IgE特异性人IgG2抗体的杂交瘤实验对象组。
ELISA测定法用于检测抗体结合。将免疫原以在50mM碳酸氢钠缓冲液中的4ug/mL包被在96孔Immulon微量滴定板(NUNC-1mmuno平板MaxiSorp表面，Nalge Nunc International，目录号439454)上于4℃过夜。洗涤平板，并且用PBS封闭，伴随添加0.1％Tween-20和0.5％牛血清白蛋白。将抗体加入封闭的ELISA平板中，温育1小时，并且用PBS与Tween-20洗涤。通过抗IgG-辣根过氧化物酶(Pierce，目录号31420)，随后添加ABTS(Pierce，目录号37615)来检测结合。在微平板阅读器(SpectraMax Plus384，MolecularDevices)中在405nm处执行比色测量。选择用于进一步研究的杂交瘤通过有限稀释进行单细胞克隆。
实施例3：本发明的抗IgE抗体的序列
如下克隆全长抗IgE抗体并且验证来自杂交瘤的序列：
使用RNeasy Mini Kit(Qiagen，目录#74104)分离Poly(A)+mRNA，并且使用寡核苷酸(dT)引发用Superscript III First-StrandSynthesis System for RT-PCR(Invitrogen，目录#18080051)从mRNA合成cDNA。分别使用表1、2和3中列出的基因特异性引物扩增用于克隆5.396.1、6.605.1和5.948.1的寡核苷酸(dT)引发的cDNA。使用Taq DNA聚合酶(Roche目录#1146173)和PTC-200 DNA Engine(MJ Research)达到扩增，伴随如下的循环：对于重链2′@94℃；5x(30″@94℃，30″@50℃，2′30″@68℃)；25X(30″@94℃，30″@68℃，2′30″@68℃)；5″@68℃，对于轻链2′@94℃；5x(30″@94℃，30″@50℃，1′30″@68℃)；25X(30″@94℃，30″@68℃，1′30″@68℃)；5′@68℃。将PCR扩增子克隆到pCR2.1 TOPO(Invitrogen，目录#450641)内，并且使用标准方案转化到DH5α化学感受态细胞(Invitrogen目录#18258012)内。克隆使用Grills16th BDTv3.1/dGTP化学(Applied Biosystems Inc)和3730x1 DNAAnalyzer(Applied Biosystems Inc)进行序列验证。通过与′V BASE序列目录(Tomlinson，等人，J.Mol.Biol.，227，776-798(1992)；Hum.Mol.Genet.，3，853-860(1994)；EMBO J.，14，4628-4638(1995)比对来分析所有序列。分子的种系基因区段使用在表4中列出。
表1：关于5.396.1的引物(5′至3′)
  4-34   CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTGCAGCTACAGCAGTGG
  G_3UTR_R   TACGTGCCAAGCATCCTCGC
  K_O12   CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGACATCCAGATGACCCAGTCTCC
  4-34   CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTGCAGCTACAGCAGTGG
  K_3UTR_R   AGGCTGGAACTGAGGAGCAGGTG
表2：关于6.605.1的引物(5′至3′)
  oQVHLVQS_Vh5′-620   CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTTCACCTGGTGCAGTCT
  G_3UTR_R   TACGTGCCAAGCATCCTCGC
  o106-2A10-VL5′-384   CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGACATCCAGATGACCCAGTCT
  K_3UTR_R   AGGCTGGAACTGAGGAGCAGGTG
表3：关于5.948.1的引物(5′至3′)
  oS255E7a5b1Vh5′-288   CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCT
  G_3UTR_R   TACGTGCCAAGCATCCTCGC
  K_A19   CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGATATTGTGATGACTCAGTCTCCAC
  K_3UTR_R   AGGCTGGAACTGAGGAGCAGGTG
由杂交瘤产生的抗IgE抗体的全长序列如下(可变结构域以大写字母，CDR区有下划线)：
表4：由杂交瘤产生的本发明的抗IgE抗体的序列
Figure G2008800104874D00651
下表5呈现了从杂交瘤中分离的根据本发明的抗IgE抗体的种系基因区段使用和同种型：
表5：从杂交瘤中分离的抗IgE抗体的种系基因区段使用和同种型
Figure G2008800104874D00661
下文序列分析显示种系和表达序列的比对(相同残基由虚线显示，缺失/插入由杂乱标记显示，突变被列出，并且CDRs是有下划线的)。
本发明的抗体有利地是全人的。与(人源化)鼠类抗体比较，这应增加关于在人中使用的安全性。
Figure G2008800104874D00662
Figure G2008800104874D00671
实施例4：来自本发明的抗IgE抗体的可变结构域的克隆
如下将抗IgE抗体可变结构域克隆到表达载体内：
使用RNeasy Mini Kit(Qiagen，目录#74104)分离Poly(A)+mRNA，并且使用寡核苷酸(dT)引发用Superscript III First-StrandSynthesis System for RT-PCR(Invitrogen，目录#18080051)从mRNA合成cDNA。使用表6、7和8中列出的引物由寡核苷酸(dT)引发的cDNA扩增可变结构域。使用Taq DNA聚合酶(Roche目录#1-146-173)和PTC-200 DNA Engine(MJ Research)达到扩增，伴随如下的循环：2′@94℃；5x(30″@94℃，30″@50℃，30″@68℃)；25x(30″@94℃，30″@68℃，30″@68℃)；5′@68℃。随后将可变结构域克隆到哺乳动物表达载体内，所述表达载体包含CMV启动子、合适同种型的恒定结构域和转录终止子/聚腺苷酸信号。这些克隆使用Grills 16th BDTv3.1/dGTP化学(Applied Biosystems Inc)和3730x1DNA Analyzer(Applied Biosystems Inc)进行序列验证。
表6：关于5.396.1的可变结构域引物(5′至3′)
  4-34   CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTGCAGCTACAGCAGTGG
  o009C6Vh3′-298 ACTCACCTGAGGAGACGGTGACCGTGGTCCC
  o106-2A10-VL5′-384 CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGACATCCAGATGACCCAGTCT
  o1.257.1VL3′-525 CCTATTCCTTAATTAAGTTATTCTACTCACGTTTGATATCCACTTTGGTCCCAGGGCC
表7：关于6.605.1的可变结构域引物(5′至3′)
  oQVHLVQS_Vh5′-620 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTTCACCTGGTGCAGTCT
  o106-5A6Vh3′-410 ACTCACCTGAGGAGACGGTGACCAGGGTTCC
  o106-2A10-VL5′-384 CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGACATCCAGATGACCCAGTCT
omyo-VL3′-513   CCTATTCCTTAATTAAGTTATTCTACTCACGTTTGATTTCCACCTTGGTCCCTTGGCC
表8：关于5.948.1的可变结构域引物(5′至3′)
  oS255E7Vh5′-288  CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCT
  GJH6  ACTCACCTGAGGAGACGGTGACCGTGGT
  K_A19  CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGATATTGTGATGACTCAGTCTCCAC
  JK4_R  TATATTCCTTAATTAAGTTATTCTACTCACGTTTGATCTCCACCTTGGTCCCT
所得到的克隆再次进行序列验证。关于本发明的相应重组抗IgE抗体的全长序列(前导序列省略)呈现于表9中：
表9：本发明的重组抗IgE抗体的序列
Figure G2008800104874D00681
测序揭示了关于6.605.1在杂交瘤衍生的抗体序列和重组Abs序列之间的差异。然而，所述差异是恒定结构域中的等位差异，并且所有改变是沉默的第3核苷酸变化。
实施例5：诱变-根据本发明的进一步抗IgE抗体
5.396.1和6.605.1抗IgE抗体的诱变如下进行：
在克隆5.396.1的VH(S103N)中通过PCR的诱变用表10和表6中列出的引物进行。使用Taq DNA聚合酶(Roche目录#1-146-173)和PTC-200DNA Engine(MJ Research)达到扩增，伴随如下的循环：2′@94℃；5x(30″@94℃，30″@50℃，30″@68℃)；25x(30″@94℃，30″@68℃，30″@68℃)；5′@68℃。
在克隆5.396.1的VK(K61R)中通过PCR的诱变使用2步骤过程用表10和表6中列出的引物进行。步骤1涉及制备突变的重叠可变结构域片段，通过使用引物组o106-2A10-VL5′-384/o5936L(KtoR)3′-647的扩增和使用引物组o5936L(KtoR)5′-646/o1.257.1VL3′-525的扩增，并且使用Taq DNA聚合酶(Roche)和PTC-200DNAEngine(MJ Research)，伴随如下的循环：2′@94℃；5x(30″@94℃，30″@50℃，30″@68℃)；25x(30″@94℃，30″@68℃，30″@68℃)；5′@68℃。步骤2涉及完全突变的可变结构域的扩增，通过使来自步骤1的扩增片段组合，并且使用引物组o106-2A10-VL5′-384/o1.257.1VL3′-525及Taq DNA聚合酶(Roche)和PTC-200 DNA Engine(MJ Research)，伴随如下的循环：2′@94℃；5x(30″@94℃，30″@50℃，30″@68℃)；25x(30″@94℃，30″@68℃，30″@68℃)；5′@68℃。
在克隆6.605.1的VH(H3Q.M13K.D82E)中通过PCR的诱变使用2步骤过程用表10和表7中列出的引物进行。步骤1涉及制备突变的重叠可变结构域片段，通过使用引物组oIgE6605Vh_M13K-621/oIgE6605H(D82E)3′-625的扩增和使用引物组oIgE6605H(D82E)5′-624/o106-5A6Vh3′-410的扩增，并且使用来自上文的扩增条件。步骤2涉及完全突变的可变结构域的扩增，通过使来自步骤1的扩增片段组合，并且使用引物组oB8-D8-D1hGH-Vh5′-289/o106-5A6Vh3′-410，并且使用来自上文的扩增条件。
在克隆6.605.1的VK(T25A.T53S)中通过PCR的诱变使用4步骤过程用表10和表7中列出的引物进行。步骤1涉及制备突变的重叠可变结构域片段，通过使用引物组o106-2A10-VL5′-384/oIgE6605Vk-T25A3′-627的扩增和使用引物组oIgE6605Vk-T25A5′-626/omyo-VL3′-513的扩增，并且使用来自上文的扩增条件。步骤2涉及完全突变的可变结构域的扩增，通过使来自步骤1的扩增片段组合，并且使用引物组o106-2A10-VL5′-384/omyo-VL3′-513，并且使用来自上文的扩增条件。步骤3涉及使用来自步骤2的VK(T25A)可变结构域，并且制备突变的重叠可变结构域片段，通过使用引物组o106-2A10-VL5′-384/oIgE6605L(T53K)3′-637的扩增和使用引物组oIgE6605L(T53K)5′-636/omyo-VL3′-513的扩增，并且使用来自上文的扩增条件。步骤4涉及完全突变的可变结构域的扩增，通过使来自步骤3的扩增片段组合，并且使用引物组o106-2A10-VL5′-384/omyo-VL3′-513，并且使用来自上文的扩增条件。所有突变变体进行序列验证并且克隆到上文阐述的哺乳动物表达载体内。
表10：关于5.396.1和6.605.1的诱变引物(5′至3′)
  o5936HS103N-675   ACTCACCTGAGGAGACGGTGACCGTGGTCCCTTGGCCCCAGACGTCCATACCGTAGTAGTAGTAGAAGTTGTCGTTCCAGTTGTCTCTCGCACAGTA
  o5936L(KtoR)5′-646 TTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTGGATCTGGG
  o5936L(KtoR)3′-647 CCCAGATCCACTGCCGCTGAACCTTGATGGGACCCCACTTTGCAA
  olgE6605Vh_M13K-621 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTTCACCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTC
  olgE6605Vh_M13K-621 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTTCACCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTC
  olgE6605H(D82E)5′-624 GACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAACTGAGGAGCCTGAGATCTGACGAC
  olgE6605H(D82E)32625 GTCGTCAGATCTCAGGCTCCTCAGTTCCATGTAGGCTGTGCTCGTGGATGTGTC
  o5936HS103N-675   ACTCACCTGAGGAGACGGTGACCGTGGTCCCTTGGCCCCAGACGTCCATACCGTAGTAGTAGTAGAAGTTGTCGTTCCAGTTGTCTCTCGCACAGTA
  oB8-D8-D1hGH-Vh5′-289 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTCCAGCTGGTGCAGTCT
  olgE6605Vk-T25A5′-626 GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGTATTAGCAACTGGTTA
  olgE6605Vk-T25A3′-627 TAACCAGTTGCTAATACTCTGACTTGCCCGGCAAGTGATGGTGACTCTGTCTCC
  olgE6605L(T53K)5′-636 AAACTCCTGATCTATGGTGCCTCCAGTTTGAAAAGTGGGGTCCCATCAAGG
  olgE6605L(T53K)3′-637 CCTTGATGGGACCCCACTTTTCAAACTGGAGGCACCATAGATCAGGAGTTT
5.948.1抗IgE抗体的诱变可以通过定点诱变中的任何众所周知的技术来进行。
所得到的本发明的抗IgE抗体的序列(前导序列省略)在下表11中概述：
表11：本发明的抗IgE抗体的序列
Figure G2008800104874D00711
Figure G2008800104874D00721
实施例6：由ATCC的核酸保藏
下述保藏依照布达佩斯条约由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA(样品于2006年11月7日接受)进行，如表12中呈现的。
表12：关于本发明的抗IgE抗体的生物保藏
小瓶编号 载体pCR2.1topO中的插入物   ATCC专利保藏命名 SEQ IDNO：
  UC25516   来自杂交瘤的5.396.1重链全长cDNA   PTA-7977   101
  UC25517   来自杂交瘤的5.396.1轻链全长cDNA   PTA-7982   103
  UC25518   5.396.1H(S103N)-hG2重链全长cDNA   PTA-7981   21
小瓶编号 载体pCR2.1topO中的插入物   ATCC专利保藏命名 SEQ IDNO：
  UC25519   5.396.1L(K61R)-hKappa轻链全长cDNA   PTA-7980   31
  UC25520   来自杂交瘤的5.948.1重链全长cDNA   PTA-7979   109
  UC25521   来自杂交瘤的5.948.1轻链全长cDNA   PTA-7986   111
  UC25522   来自杂交瘤的6.605.1重链全长cDNA   PTA-7985   105
  UC25523   来自杂交瘤的6.605.1轻链全长cDNA   PTA-7984   107
  UC25524   6.605.1H(H3Q，M13K，D82E)-hG2重链全长cDNA   PTA-7983   61
  UC25525   6.605.1L(T25A，T53S)-hKappa轻链全长cDNA   PTA-7978   71
实施例7：本发明的抗IgE抗体的重组表达和纯化
根据厂商的方案，包含CMV启动子的表达载体在293 Freestyle(Invitrogen)细胞中进行转染。通过离心收集来自这些细胞的上清液，并且通过标准蛋白质A亲和层析法进行纯化，以分离重组免疫球蛋白。这些蛋白质随后通过SDS-PAGE、SEC(尺寸排阻层析法)、质谱仪和分光光度计测量进行表征。
实施例8：IgE结合测定法
测定法原理
测试抗IgE抗体与IgE的结合在IgE细胞结合测定法中进行测试，使用用人FcεR1转染的RBL-2H3细胞系。这种大鼠嗜碱性粒细胞细胞系是稳定的克隆，其已用人FcεR1α、β和γ受体亚单位cDNAs进行转染(由Drs Kinet和Jouvin，Beth Israel Deaconess MedicalCenter许可(Wiegand TW，等人，J Immunol.1996 Jul 1；157(1)：221-30；Dibbern DA Jr，等人，J Immunol Methods.2003 Mar 1；274(1-2)：37-45))。细胞培养24小时，然后与测试抗IgE抗体和人IgE一起温育另外24小时。洗涤以去除抗IgE：IgE复合物后，与FcεR1结合的其余IgE用生物素化的多克隆抗IgE抗体与链霉亲和素-HRP和OPD进行检测。用抗IgE抗体观察到以浓度相关方式的IgE结合中的减少。
方案
RBL-2H3(FcεR1)细胞在补充有2mM L-谷氨酰胺(Sigma，目录号G7513)、1mg/mL遗传霉素液体(Invitrogen目录号10131027)和15％FBS(PAA Laboratories GmbH，目录号A15-043)的MEM-Earles(Invitrogen目录号2109002)中进行培养。将RBL-2H3(FcεR1)细胞以1×105细胞/孔接种到无菌96孔平板(Costar，FisherScientific，目录号TKY-521-090S)内，并且在37℃、5％CO2下在增湿大气中培养过夜。第二天细胞用150μL/孔洗涤缓冲液(10％BSA，Sigma目录号A7030，在PBS，Sigma，目录号D8537中)洗涤3x。用于下述步骤的IgE和所有抗体在省略遗传霉素的培养基中进行。将1μg/mL IgE(人骨髓瘤，无叠氮化物，Serotec，目录号PHP008X2)加入所有孔中(除其中加入25μl培养基的本底对照外)。需要时稀释抗体(依赖抗体效价的0.008-3μg/mL浓度范围)，并且将25μL加入合适的孔中(除其中加入25μl培养基的本底对照和阳性对照孔外)。细胞与IgE和抗IgE抗体一起在37℃、5％CO2下在增湿大气中温育过夜。平板随后用150μL/孔洗涤缓冲液洗涤3x，以去除未结合的IgE和IgE-抗IgE复合物。结合的IgE使用稀释至10μg/mL的多克隆生物素化抗IgE抗体(Vector Laboratories，目录号BA3040)进行检测，将50μL加入所有孔中，并且在37℃、5％CO2下在增湿大气中温育2小时。细胞用150μL/孔洗涤缓冲液洗涤3x，然后与1∶250稀释的50μL/孔链霉亲和素-HRP(Amersham Bioscience，目录号RPN 1231)一起温育45分钟。细胞用150μL/孔洗涤缓冲液洗涤3x。将50μL OPD(Dako，目录号S2045)加入所有孔中，并且在用50μL 0.6M H2SO4终止反应前，允许颜色发展10分钟，并且测量在490nm处的吸光度。
结果
为了测定抗体的效价，从所有值中扣除本底吸光度，然后计算关于阳性对照(仅IgE)的平均值，并且抗体数据表示为来自阳性对照值的IgE结合的抑制百分比。抗IgE抗体的温育导致IgE结合中浓度相关的减少。本发明的抗体在与RBL-2H3(FcεR1)细胞的IgE结合中全部显示浓度相关的减少，以及小于0.5μg/mL的IC50值，并且在功能测定法中进一步测定。
在这个测定法中，IC50定义为使IgE结合减少50％所需的抗体浓度，使用关于阳性对照孔的值作为100％。
实施例9：脱颗粒测定法的抑制
测定法原理
使用RBL-2H3(FcεR1)细胞测定测试抗IgE抗体抑制IgE介导的脱颗粒的潜力。细胞与测试抗IgE抗体和人IgE一起培养48小时。洗涤细胞以去除抗IgE-IgE复合物，留下与FcεR1结合的IgE，然后用多克隆抗IgE抗体进行刺激，所述多克隆抗IgE抗体与结合的IgE交联，导致IgE介导的脱颗粒。组胺释放在这个测定法中用作终末点作为脱颗粒标记，并且用增加浓度的测试抗IgE抗体观察到组胺释放中浓度相关的减少。
方案
RBL-2H3(FcεR1)细胞在补充有2mM L-谷氨酰胺(Sigma，目录号G7513)、1mg/mL遗传霉素液体(Invitrogen目录号10131027)和15％FBS(PAA Laboratories GmbH，目录号A15-043)的MEM-Earles(Invitrogen目录号2109002)中进行培养。将RBL-2H3(FcεR1)细胞以1×105细胞/孔接种到无菌96孔平板(Costar，FisherScientific，目录号TKY-521-090S)内，并且与0.0625μg/mL IgE(人骨髓瘤，无叠氮化物，Serotec，目录号PHP008X2)和测试抗IgE抗体(依赖抗体效价的0.0001-30μg/mL浓度范围)一起在37℃、5％CO2下在增湿大气中温育48小时。细胞、抗体和IgE全部在MEM-Earles(Invitrogen目录号2109002)、2mM L-谷氨酰胺(Sigma，目录号G7513)和15％FBS(PAA Laboratories GmbH，目录号A15-043)中进行制备。48小时后，细胞用补充有10％热灭活的(56℃水浴30分钟)FBS(PAA Laboratories GmbH，目录号A15-043)、0.2％碳酸氢钠(Sigma，目录号S8761)的1x RPMI(Sigma，目录号R1145)进行洗涤，以在刺激前去除未结合的抗IgE和IgE：抗IgE复合物。用5μg/mL多克隆抗IgE抗体(Sigma，目录号I0632)刺激细胞1小时，所述抗体使受体结合的IgE交联。总组胺由2％Triton-X100(Sigma，目录号T9284)裂解的孔，以及来自用单独的刺激培养基刺激的细胞的自发释放进行测定。抗IgE和Triton-X-100在刺激培养基中进行稀释。刺激培养基包含补充有10％热灭活的(56℃水浴30分钟)FBS(PAALaboratories GmbH，目录号A15-043)、0.2％碳酸氢钠(Sigma，目录号S8761)和45％氧化氘(Fisher Scientific，目录号16631-1000)的1x RPMI(Sigma，目录号R1145)。细胞在37℃、5％CO2下在增湿大气中刺激1小时。平板随后进行离心(200xg，5分钟)，并且收集上清液用于测量组胺释放。根据制造商说明书，通过ELISA(IBL，目录号CVRE59221)测量组胺释放，作为脱颗粒的标记。
结果
组胺释放表示为总释放百分比，并且随后为了计算特定释放，如下从值％中扣除自发释放：
-总组胺释放％＝(在测试或自发对照孔中的组氨酸ng/mL/总孔中的平均组胺ng/mL)x100
-特定释放＝(测试孔中的总组胺释放％)-(来自自发孔的总组胺释放平均％)。
抗体的效应表示为由在不存在抗IgE抗体的情况下(仅IgE和细胞)温育的对照孔释放的组胺的抑制百分比。
-抑制％＝((用多克隆抗IgE刺激的平均对照孔-用多克隆抗IgE刺激的测试抗体孔)/用多克隆抗IgE刺激的平均对照孔)x100。
IC50值是使对照组胺释放抑制50％所需的抗体浓度，并且在表13中详述。本发明的抗IgE抗体是有利的，因为在抑制IgE介导的组胺释放作为脱颗粒标记方面，它们明显比E25更有效。
表13：本发明的抗IgE抗体在IgE介导的脱颗粒抑制中的IC50值
数据是具有95％置信区间的几何平均IC50
  抗IgE抗体   IC50-μg/mL(95％置信区间)  ′n′
  E25   1.47(1.24-1.74)   83
  5.396.1(重组)   0.0709(0.0572-0.0879)   43
  5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)   0.0262(0.0201-0.0341)   24
  6.605.1(重组)   0.124(0.0980-0.157)   52
  6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E Lc-T25A，T53S)   0.0736(0.0491-0.110)   4
  5.948.1-批次1(762.8μg/mL)(重组)   0.360(0.339-0.382)   3
  5.948.1-批次2(5.2mg/mL)(重组)   0.123(0.077-0.195)   24
  5.948.1-批次1(762.8μg/mL)(重组)   0.360(0.339-0.382)   3
  5.948.1(Hc-H100Y)   0.0121(0.00878-0.0167)   24
实施例10：RBL-2H3(FcεR1)激动测定法
测定法原理
使用RBL-2H3(FcεR1)细胞测定测试抗IgE抗体使受体结合的IgE交联且刺激IgE依赖性脱颗粒的潜力。细胞与人IgE一起培养48小时，然后洗涤以去除未结合的IgE。随后将抗IgE抗体加入细胞中，以测定它们是否能够结合受体结合的IgE且使受体结合的IgE交联，以引起脱颗粒。测量组胺释放作为脱颗粒标记。在所有测定法中使用阳性和阴性对照抗IgE抗体，以使得能够与测试抗IgE抗体比较。
方案
细胞如对于脱颗粒抑制测定法所述的进行培养。对于激动测定法，将细胞与0.25μg/mL IgE(人骨髓瘤，无叠氮化物，Serotec，目录号PHP008X2)以1×105细胞/孔接种到无菌96孔平板(Costar，FisherScientific，目录号TKY-521-090S)内，并且在37℃、5％CO2下在增湿大气中温育48小时。细胞和IgE在MEM-Earles(Invitrogen目录号2109002)、2mM L-谷氨酰胺(Sigma，目录号G7513)和15％FBS(PAA Laboratories GmbH，目录号A15-043)中进行制备。
48小时后，细胞用补充有10％热灭活的(56℃水浴30分钟)FBS(PAA Laboratories GmbH，目录号A15-043)和0.2％碳酸氢钠(Sigma，目录号S8761)的1x RPMI(Sigma，目录号R1145)进行洗涤，以在用抗IgE抗体刺激前去除未结合的IgE。已知使受体结合的IgE交联的多克隆抗IgE抗体(Sigma，目录号I0632)用作阳性对照。测试和对照抗体以0.04-1-μg/mL进行测试。总组胺由2％Triton-X100(Sigma，目录号T9284)裂解的孔，以及来自用单独的培养基刺激的细胞的自发释放进行测定。抗体和Triton-X-100在刺激培养基中进行稀释。刺激培养基包含补充有10％热灭活的(56℃水浴30分钟)FBS(PAA Laboratories GmbH，目录号A15-043)、0.2％碳酸氢钠(Sigma，目录号S8761)和45％氧化氘(Fisher Scientific，目录号16631-1000)的1x RPMI(Sigma，目录号R1145)。细胞在37℃、5％CO2下在增湿大气中刺激1小时。平板随后进行离心(200xg，5分钟)，并且收集上清液用于测量组胺释放。根据制造商说明书，通过ELISA(IBL，目录号CVRE59221)测量组胺释放，作为脱颗粒的标记。组胺释放计算为总释放百分比，并且抗体效应表示为总释放百分比。
结果
多克隆抗IgE在所有实验中用作阳性对照，并且这刺激组胺释放(总组胺的～30％)。有利地，当以0.04-10μg/mL的浓度测试时，本发明的抗IgE单克隆抗体无一刺激IgE介导的组胺释放超过自发释放(参见图1和2)。这种观察暗示在体内本发明的抗IgE抗体将不使FcεR1-受体结合的IgE交联，并且因此将不刺激脱颗粒。
实施例11：人血液嗜碱性粒细胞激动测定法
测定法原理
激动活性的缺乏在从新鲜全血中分离的人血液嗜碱性粒细胞中加以证实，使用与用于RBL-2H3(FcεR1)激动测定法相同的原理。
方案
使用Histopaque管(Sigma，目录号A0561)从全血中分离人单核细胞。将来自健康志愿者的新鲜人静脉血收集到包含1mL 10mg/mL肝素(Sigma，目录号H3393)的50mL管内。血液随后在5％FCS/PBS(FCS来自PAA Laboratories GmbH，目录号A15-043和PBS来自Sigma，目录号D8537)中进行1∶1稀释，并且倾入Histopaque管(Sigma，目录号A0561)内，所述管在500xg下离心35分钟。收集血沉棕黄层，洗涤且重悬浮于包含10％FBS(PAA Laboratories GmbH，目录号A15-043)的RPMI培养基(Invitrogen，目录号32404-014)中。在以6×105细胞/孔加入96孔无菌细胞培养平板(Costar，FisherScientific，目录号TKY-521-090S)前，伴随添加在具有10％FBS的RPMI培养基中以0.5μg/mL终浓度的人IgE(人骨髓瘤，无叠氮化物，Serotec，目录号PHP008X2)，将细胞稀释至1.2×107白血细胞/mL，如先前所述。细胞在37℃、5％CO2下在增湿大气中温育过夜。在用抗IgE抗体(0.15-20μg/mL)刺激前去除培养基。已知使受体结合的IgE交联的多克隆抗IgE抗体(Sigma，目录号I0632)用作阳性对照。总组胺由0.3％Triton-X100(Sigma，目录号T9284)裂解的孔进行测定，并且自发释放由用单独的培养基刺激的细胞进行测定。抗体和Triton-X-100在细胞培养基中进行稀释，并且自发孔与单独的细胞培养基一起温育。细胞培养基包含具有10％FBS(PAA LaboratoriesGmbH，目录号A15-043)的RPMI培养基(Invitrogen，目录号32404-014)。细胞在37℃、5％CO2下在增湿大气中刺激30分钟。平板随后进行离心(200xg，5分钟)，并且收集上清液用于测量组胺释放。通过ELISA测量组胺释放作为脱颗粒的标记(IBL，目录号CVRE59221，根据制造商说明书)。组胺释放计算为总释放百分比，并且抗体效应表示为总释放百分比。
结果
多克隆抗IgE在所有实验中用作阳性对照，并且这引起大量组胺释放(总组胺的～50％)。有利地，当以0.15-20μg/mL的浓度测试时，本发明的抗IgE单克隆抗体无一刺激IgE介导的组胺释放超过自发释放(参见图3和4)。本发明的抗IgE抗体对于分离的人血液嗜碱性粒细胞不具有激动活性的观察证实在RBL-2H3(FcεR1)细胞激动测定法中可见的那种(参见上文)。
实施例12：在体外来自人血清的游离IgE耗尽
测定法原理
在体外测量测试抗IgE抗体结合血清中的IgE且减少游离IgE水平的能力。测试抗IgE抗体(在下文中，测试抗体)在血清中个别温育过夜，以使得测试抗体能够与血清中的IgE结合。其余游离IgE(即不与测试抗体结合)通过ELISA进行测量，其中相同测试抗体其自身用作平板上的捕获试剂。对照测定法已显示游离IgE与捕获试剂结合，而(测试抗体)-IgE复合物则不结合。血清-(测试抗体)温育物随后与捕获试剂一起温育2小时，以使得‘其余’游离IgE能够与捕获试剂结合。平板进行洗涤以去除(测试抗体)-IgE复合物，留下与捕获试剂结合的‘其余’游离IgE。这种‘其余’游离IgE(在ELISA平板上结合)随后用生物素化的多克隆抗IgE抗体进行检测。用增加浓度的测试抗体观察到游离IgE测量中浓度相关的减少。测定法因此可以如下概述：
-使测试抗体与血清一起温育～16小时；
-为了检测游离IgE，将(测试抗体)/血清加入捕获ELISA平板中，并且温育2小时(捕获ELISA平板用相同测试抗体进行包被)；
-洗涤以去除(测试抗体)-IgE复合物，留下与平板上的捕获试剂结合的‘其余’游离IgE；
-使用生物素化的多克隆抗IgE、链霉亲和素-HRP和OPD检测系统，测量在平板上捕获的结合的‘其余’‘游离IgE’。
方案
将在50mM TBS pH 8.0(Sigma，目录号T6664)中稀释的5μL测试抗IgE抗体或不含抗体的TBS对照掺料到从健康志愿者中收集的45μl净血清内，并且在无菌96孔平板(Costar，Fisher Scientific，目录号TKY-521-090S)中在37℃5％CO2下在增湿大气中温育过夜，以允许测试抗体与血清中的IgE结合。通过用50μl 2.5μg/mL捕获抗IgE抗体(在TBS，Sigma，目录号T6664中稀释)在4℃下包被NuncMaxisorp 96孔平板(Fisher Scientific，目录号DIS-971-010P)过夜来制备ELISA平板。第二天，ELISA平板用300μL/孔洗涤缓冲液(0.05％Tween-20，Sigma，目录号P7949/TBS)洗涤1x，然后用在TBS中的150μL/孔1％BSA(Sigma，目录号A7030)在室温下封闭1小时。在加入50μl IgE标准、抗IgE/血清样品或稀释剂空白(全部在1％BSA/0.05％Tween-20/TBS稀释缓冲液中稀释)前，用300μL/孔洗涤缓冲液洗涤平板。来自NIBSC(National Institute forBiological Standards and Control，目录号75/502)的人血清IgE标准在这个测定法中用作标准，并且对于每块平板使用3-200ng/mL的标准曲线。血清需要稀释至少十分之一，以消除血清干扰。对于新供体，血清1∶10、1∶50和1∶200稀释，以测定最合适的稀释度，以消除血清干扰，同时预测标准曲线的线性部分中的值。作为一般规律，具有＜200ng/mL IgE的血清1∶10稀释，具有＞200ng/mL IgE的血清1∶50或1∶200稀释。标准和样品在室温下温育2小时，然后用300μL洗涤缓冲液洗涤4x。捕获的游离IgE用50μL/孔生物素化的多克隆抗IgE(Vector Laboratories，目录号BA3040)进行检测，所述抗IgE在1％BSA/0.05％Tween-20/TBS稀释缓冲液中稀释至0.5μg/mL。孔在室温下温育1小时，然后进行洗涤(4x300μL洗涤缓冲液)。将在稀释缓冲液中1∶1000稀释的50μL链霉亲和素-HRP(Amersham Bioscience，目录号RPN 1231)加入所有孔中，并且在室温下温育45分钟。孔进行洗涤(4x300μL洗涤缓冲液)。将50μLOPD(Dako，目录号S2045)加入所有孔中，并且在用50μl 0.6M H2SO4终止反应前，允许颜色发展10分钟，并且测量在490nm处的吸光度。通过标绘NIBSC标准曲线且由标准曲线推断IgE浓度来计算所检测到的IgE浓度。这些值随后乘以稀释因子，以产生以ng/mL的IgE浓度。游离IgE(ng/mL)针对抗体浓度进行标绘。
结果
抗体的效价表示为使血清中的游离IgE浓度减少至约25ng/mL所需的浓度(IC25ng/mL)。有利地，本发明的抗IgE抗体能够使游离减少至小于25ng/mL(参见表14-15)。
表14.使人血清样品中的游离IgE水平减少至约25ng/mL的值所需的测试抗IgE抗体浓度(μg/mL)
DIN：供体标识号
Figure G2008800104874D00811
nd：未测定。
表15.在人血清样品中游离IgE经由测试抗IgE抗体的减少。
数据是来自6-22个供体具有95％置信区间的几何平均IC25ng/mL。
  抗体   IC25ng/mL(μg/mL)   起始IgE浓度(ng/mL)  ′n′
  E25   381(184-791)   639(278-1001)   22
  5.396.1(重组)   2.0(1.0-3.8)   1207(335-2079)   12
  5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)   1.0(0.6-1.8)   791(296-1287)   21
  6.605.1(重组)   4.4(1.2-16.4)   757(206-1308)   7
  6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E Lc-T25A，T53S)   1.1(0.3-3.8)   464(255-673)   6
  5.948.1-Batch 1(762.8μg/mL)(重组)   4.7(2.6-8.3)   713(60-1365)   18
  5.948.1(Hc-H100Y)   1.2(0.5-2.6)   223(130-316)   10
本发明的抗IgE抗体(5.396.1、5.396.1Hc-SI 03N U-K61R、6.605.1、6.605.1 Hc-H3Q，M13K，D82E Lc-T25A，T53S和5.948.1)已显示使游离IgE水平减少至低于25ng/mL。E25也能够使游离IgE减少至低于25ng/mL；然而，需要明显更多的抗体(即更高的IC25ng/mL)。在临床上，这可能是有利的，因为能够降低单克隆抗体剂量，以产生对降低循环中的游离IgE水平的相同作用。此外，可以治疗增加的患者群体，即具有更高起始游离IgE浓度和/或更高体重的患者。
实施例13：超过群体免疫球蛋白的敏感性
测定法原理
在ELISA测定法中测定本发明的抗IgE抗体与其他人免疫球蛋白(IgA、IgE、IgG1和IgG3)的交叉反应性。将免疫球蛋白包被在平板上，并且在用生物素化的抗IgG2抗体检测结合前，将免疫球蛋白包被在平板上并且温育测试抗IgE抗体。
方案
将IgA(Sigma，目录号12636)、IgE(Serotec，目录号PHP008X2)、IgG1(Biodesign，目录号A50183H)、和IgG3(Biodesign，目录号A50186H)以在PBS(0.01M磷酸盐缓冲液，0.0027M氯化钾、0.137M氯化钠，pH 7.4，Sigma，目录号P4417)中的4μg/mL直接包被在NuncMaxisorp 96孔平板(Fisher Scientific，目录号DIS-971-010P)上于4℃过夜。孔用150μL洗涤缓冲液(0.05％Tween-20(Sigma，目录号P7949)/PBS)洗涤3x，然后用150μL/孔封闭缓冲液(2.5％BSA(Sigma，目录号A7030)/PBS)在室温下封闭2小时。孔用150μL洗涤缓冲液/孔洗涤3x。将对照小鼠抗IgA(Serotec，目录号MCA476G)、小鼠抗IgE(Biodesign，目录号Z86410M)、小鼠抗IgG1(Serotec，目录号MCA514G)和小鼠抗IgG3(Biodesign，目录号Z20152M)以250ng/mL、800ng/mL或50μL/孔加入对照孔中。所有测试抗体是人IgG2同种型，并且以250ng/mL、50μL/孔加入孔中。抗体在稀释缓冲液(PBS/1％BSA/0.05％Tween-20)中进行稀释，并且将这加入空白对照孔中(关于使用的每种次级抗体的一式两份孔)。抗体在室温下温育2小时。孔用150μL洗涤缓冲液/孔洗涤3x。用在稀释缓冲液中1∶8000稀释的抗小鼠IgG-HRP缀合物(Sigma，目录号A4416)检测对照抗体与免疫球蛋白的结合。将50μL/孔加入对照抗体和空白孔中。孔在室温下温育1小时，然后用150μL洗涤缓冲液/孔洗涤3x。将50μL OPD(Dako，目录号S2045)加入所有孔中，并且在用0.6M H2SO4终止反应前，允许颜色发展10分钟，并且测量在490nm处的吸光度。使用生物素化的抗人IgG2(Zymed，目录号05-3540)检测测试IgG2抗IgE抗体的结合。在50μL/孔加入测试抗体和空白孔前，这种抗体在稀释缓冲液中1∶500稀释。孔在室温下温育1小时，然后用150μL洗涤缓冲液/孔洗涤3x。将在稀释缓冲液中1∶2000稀释的链霉亲和素-HRP(Amersham Bioscience，目录号RPN 1231)加入所有孔中，并且在室温下温育45分钟。孔进行洗涤(3x150μL洗涤缓冲液)。将50μL OPD(Dako，目录号S2045)加入所有孔中，并且在用50μL 0.6M H2SO4终止反应前，允许颜色发展10分钟，并且测量在490nm处的吸光度。
结果
当以250ng/mL或800ng/mL测试时，对于本发明的任何抗IgE抗体未检测到与IgA、IgG1或IgG3的结合，而对于与IgE的结合可见大量信号(表16)。这些观察显示本发明的抗IgE抗体对于IgE是高度选择性的，超过人IgA、IgG1和IgG3。
表16：抗IgE抗体与IgA、IgG1、IgG3和IgE的结合。值是A290nm。
Figure G2008800104874D00841
实施例14：通过BIAcoreTM测定亲和常数(KD)
测定法原理
使用BIAcore 3000仪器(BIAcoreTM，Uppsala，Sweden)，用与共价固定的抗IgE抗体结合的全长人IgE(Serotec，目录号PHP008X2或Europa Bioproducts，目录号CP1035K)的连续稀释来测定动力学常数Kon和Koff。
方案
对于共价抗IgE抗体固定，使用标准EDC-NHS胺偶联化学。使用CM5传感器芯片(BIAcoreTM)和10mM乙酸钠，pH 5.0作为固定缓冲液获得50-600RU的固定结合应答。激活(用EDC-NHS)且封闭(用乙醇胺)参考流动室，但不固定蛋白质。动力学测量在HBS-EP缓冲液(10mM HEPES、150mM NaCl、3mM EDTA、0.005％v/v表面活性剂P20pH 7.4，由BIAcoreTM提供)中以50或100μL/分钟的流速执行，使用0.09-600nM的IgE浓度范围。关于每个浓度的注射时间是3.25分钟，随后为20分钟解离期。在解离期后包括再生步骤；关于各种抗体的条件在下表17中给出。
表17：关于每种抗IgE抗体的再生条件
  抗IgE抗体   再生溶液   注射时间(s)   流速(μL/分钟)
  5.396.1(重组)   10mM甘氨酸pH1.7   6   100
  5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)   10mM甘氨酸pH1.7   9   100
  6.605.1(重组)   10mM甘氨酸pH1.5   6   50
  6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82ELc-T25A，T53S)   10mM甘氨酸pH1.5   6   50
  5.948.1(重组)   10mM甘氨酸pH1.5   12   50
  5.948.1(Hc-H100Y)   10mM甘氨酸pH1.5   12   50
结果
使用BIA评估软件4.1(BIAcoreTM)和Scrubber软件版本2.0(BioLogic Software)局部拟合所有传感图。本发明的抗IgE抗体显示对于IgE的相似纳摩尔亲和力(参见表18)。
表18：关于抗IgE抗体的亲和力值
  抗IgE抗体   KD(亲和力)   结合速率(Ka)，M-1s-1   解离速率(Kd)，s-1
 5.396.1(重组)   2.50nM   3.23×104   8.09×10-5
 5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)   3.95nM   2.36×104   9.29×10-5
 6.605.1(重组)   2.74nM   6.34×104   1.74×10-4
 6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E Lc-T25A，T53S)   2.94nM   3.02×104   8.88×10-5
 5.948.1(重组)   1.32nM   2.36×104   3.11×10-5
 5.948.1(Hc-H100Y)   158.9pM   1.51×105   2.42×10-5
实施例15：表位选择性的鉴定
测定法原理
BIAcoreTM框并用于对由抗IgE抗体识别的相对表位作图。
方案
使用BIAcore 3000仪器(BIAcoreTM，Uppsala，Sweden)和标准EDC-NHS胺偶联化学，将测试抗IgE抗体(E25；重组5.396.1；5.396.1Hc-S103N L.C-K61R；重组6.605.1；6.605.1Hc-H3Q.M13K.D82E Lc-T25A，T53S；重组5.948.1和5.948.1Hc-HIOOY)固定在CM5生物传感器芯片的分开流动室上。固定缓冲液是10mM乙酸钠pH5.0。在所有情况下达到约1500RU的蛋白质密度。
使用HBS-EP运行缓冲液(0.01M HEPES pH7.4、0.15M NaCl.3mMEDTA、0.005％聚山梨醇酯20)执行表位框并实验。以100μL的体积以50μl/分钟的速率，将人IgE(5μg/mL，Serotec，目录号PHP008X2)注射经过第一个流动室。在注射完成后，将第一种抗体探针加入相同流动室中。所有探针抗体在HBS-EP中稀释至约10μg/mL的浓度，并且以100μL的体积以50μl/分钟的速率注射。当未观察到测试抗体的结合时，其后立即注射下一种测试克隆。当结合的确发生时，通过注射甘氨酸pH1.56秒使传感器表面再生。再生后，IgE再次结合，并且注射更多的测试抗体。执行这些操作，直至整个克隆实验对象组已注射在固定抗体加结合IgE的表面上。不同固定抗体加结合IgE的新流动室随后用于由测试克隆探测。
结果
抗体对的组合以这种方式进行测试，并且基于是否观察到结合产生应答矩阵(参见表19和图5)。表位框并数据暗示某些抗IgE抗体共享重叠表位，而其他的具有不同表位。
表19：表位框并应答矩阵(x＝无结合，V＝结合)
  固定的抗体  2°AbE25   2°Ab5.396.1   2°Ab5.396.1S103N/K61R   2°Ab6.605.1   2°Ab6.605.1QKET25AT53S   2°Ab5.948.1   2°Ab5.948.1H100Y
  E25   ×   ×   ×   √   √   ×   ×
  5.396.1(重组)   ×   ×   ×   ×   ×   ×   NT
  5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)   ×   ×   ×   ×   ×   ×   ×
  6.605.1(重组)   √   ×   ×   ×   ×   √   NT
  6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E Lc-T25A，T53S)   √   √   √   ×   ×   √   NT
  固定的抗体  2°AbE25   2°Ab5.396.1   2°Ab5.396.1S103N/K61R   2°Ab6.605.1   2°Ab6.605.1QKET25AT53S   2°Ab5.948.1   2°Ab5.948.1H100Y
  5.948.1(重组)   ×   ×   ×   √   √   ×   ×
  5.948.1(Hc-H100Y)   ×   NT   ×   NT   NT   ×   ×
实施例16：物种交叉反应性的鉴定
测定法原理
ELISA和BIAcoreTM实验用于测量抗IgE单克隆抗体与来自犬、大鼠、小鼠和食蟹猴的IgE的交叉反应性。
方案
使用BIAcoreTM测定针对犬、大鼠和小鼠IgE的选择性筛选。将纯化的犬(Bethyl，目录号P115)、大鼠(Serotec，目录号PRP07A)和小鼠IgE(Serotec，目录号PMP68)注射在共价固定的抗IgE抗体(E25；5.396.1；5.396.1Hc-S103N  Lc-K61R；6.605.1；6.605.1Hc-H3Q，M13K，D82E Lc-T25A，T53S；和5.948.1)上，以便测定来自这些物种的IgE是否是交叉反应的。使用BIAcore 3000仪器(BIAcoreTM，Uppsala，Sweden)和标准EDC-NHS胺偶联化学，将本发明的抗IgE抗体共价固定在CM5传感器芯片上。10mM乙酸钠pH5.0用作固定缓冲液，并且达到约125RU的固定结合应答。激活(用EDC-NHS)且封闭(用乙醇胺)参考流动室，但不固定蛋白质。结合测量在HBS-EP缓冲液(10mM HEPES、150mM NaCl、3mM EDTA、0.005％v/v表面活性剂P20 pH 7.4，由BIAcoreTM提供)中以100μL/分钟的流速执行，使用30μg/mL的IgE浓度。关于每种IgE的注射时间是3.25分钟。人IgE(30μg/mL，Serotec，目录号PHP008X2)也用作阳性对照。获得在每种IgE注射前和后的应答水平。
为了测量针对食蟹猴IgE的交叉反应性，血清用作IgE的来源，并且使用ELISA方法测试交叉反应性。将在50mM TBS pH 8.0(Sigma，目录号T6664)中以2.5μg/mL的测试抗IgE(E25；5.396.1；5.396.1Hc-S103N Lc-K61R；6.605.1；6.605.1Hc-H3Q，M13K，D82ELc-T25A，T53S；和5.948.1)包被在Nunc Maxisorp 96-孔平板(Fisher Scientific，目录号DIS-971-010P)上于4℃过夜。孔用150μL/孔洗涤缓冲液(0.05％Tween-20，Sigma，目录号P7949/TBS)洗涤1次，然后用在TBS中的150μL/孔1％BSA(Sigma，目录号A7030)在室温下封闭2小时。孔用150μL洗涤缓冲液洗涤2次。加入从纯净到在1％BSA/0.05％Tween-20/TBS稀释缓冲液中至少1∶16稀释的50μl人(内部供体)或食蟹猴血清(Harlan Sera-Lab Ltd，Loughborough)。来自NIBSC(National Institute for BiologicalStandards and Control，目录号75/502)的人血清IgE标准在这个测定法中用作标准，并且对于每块平板使用3-200ng/mL的标准曲线。孔在洗涤(3x150μL洗涤缓冲液)前在25℃下温育2小时。使用在稀释缓冲液中1∶1000稀释的生物素化的多克隆抗IgE(Kirkegaard &Perry Laboratories，目录号16-10-04)检测结合的IgE。孔在25℃下温育1小时，然后进行洗涤(3x150μL洗涤缓冲液)。将在稀释缓冲液中1∶1000稀释的链霉亲和素-HRP(Amersham Bioscience，目录号RPN 1231)加入所有孔中，并且在室温下温育45分钟。孔进行洗涤(3x300μL洗涤缓冲液)。将50μL OPD(Dako，目录号S2045)加入所有孔中，并且在用50μl 0.6M H2SO4终止反应前，允许颜色发展10分钟，并且测量在490nm处的吸光度。通过标绘NIBSC标准曲线且由标准曲线推断IgE浓度来计算所检测到的IgE浓度。这些值随后乘以稀释因子，以产生以ng/mL的IgE浓度。通过在血清中检测到的IgE浓度，并且直接与已知结合食蟹猴IgE的抗IgE抗体比较，可以估计捕获抗体结合食蟹猴IgE的能力。
结果
由BIAcoreTM执行的结合实验证实，直至30μg/mL的IgE浓度，本发明的抗IgE抗体无一与犬、大鼠或小鼠IgE相互作用。用食蟹猴血清的ELISA测定法暗示抗IgE抗体与食蟹猴IgE交叉反应至各种程度。这些数据呈现于表20中。
表20：当抗IgE单克隆抗体用作捕获抗体时，在8个食蟹猴血清样品中检测到的IgE浓度(ng/mL)。人血清样品用作对照。
Figure G2008800104874D00881
实施例17：关于本发明的抗体的序列表
表21：关于本发明的重组抗体的SEQ ID Nos
Figure G2008800104874D00891
表22：关于本发明的单克隆抗体的SEQ ID NO
Figure G2008800104874D00892
在下文序列中：可变结构域以大写字母；CDRs有下划线；蛋白质序列通过翻译获得。在所有序列中，前导序列省略。
由杂交瘤产生的5.396.1
来自杂交瘤的5.396.1重链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：101
来自杂交瘤的5.396.1重链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：102
来自杂交瘤的5.396.1轻链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：103
Figure G2008800104874D00903
来自杂交瘤的5.396.1轻链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：104
由杂交瘤产生的6.605.1
来自杂交瘤的6.605.1重链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：105
Figure G2008800104874D00905
来自杂交瘤的6.605.1重链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：106
来自杂交瘤的6.605.1轻链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：107
Figure G2008800104874D00912
来自杂交瘤的6.605.1轻链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：108
Figure G2008800104874D00913
由杂交瘤产生的5.948.1
来自杂交瘤的5.948.1重链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：109
Figure G2008800104874D00914
来自杂交瘤的5.948.1重链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：110
Figure G2008800104874D00915
来自杂交瘤的5.948.1轻链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：111
Figure G2008800104874D00916
来自杂交瘤的5.948.1轻链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：112
Figure G2008800104874D00921
重组5.396.1
重组5.396.1重链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：1
重组5.396.1重链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：2
Figure G2008800104874D00923
重组5.396.1轻链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：11
重组5.396.1轻链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：12
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNHLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTD
FTLTISS LQPEDFATYYCQQYNRHPFTFGPGTKVDIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtaswcllnnfypreakvqwkvdnalq
sgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
重组5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)
重组5.396.1(S103N)重链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：21
重组5.396.1(S103N)重链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：22
重组5.396.1(K61R)轻链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：31
Figure G2008800104874D00933
重组5.396.1(K61R)轻链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：32
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNHLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTD
FTLTISSLQPEDFATYYCQQYNRHPFTFGPGTKVDIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalq
sgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
重组6.605.1
重组6.605.1重链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：41
Figure G2008800104874D00934
重组6.605.1重链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：42
Figure G2008800104874D00941
重组6.605.1轻链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：51
重组6.605.1轻链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：52
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISNWLNWYQQKPGKAPKLLIYGASTLKSGVPSRFSGSESGTD
FTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalq
sgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E Lc-T25A，T53S)
重组6.605.1(H3Q，M13K，D82E)重链的核苷酸序列＝SEQ ID NO： 61
Figure G2008800104874D00943
重组6.605.1(H3Q，M13K，D82E)重链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：62
Figure G2008800104874D00944
重组6.605.1(T25A.T53S)轻链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：71
Figure G2008800104874D00945
重组6.605.1(T25A.T53S)轻链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO： 72
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNWLNWYQQKPGKAPKLLIYGASSLKSGVPSRFSGSESGT
DFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnal
qsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
重组5.948.1
重组5.948.1重链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：81
Figure G2008800104874D00951
重组5.948.1重链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：82
Figure G2008800104874D00952
重组5.948.1轻链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：91
Figure G2008800104874D00953
重组5.948.1轻链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：92
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLH RNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGS
GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPPATFGGGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakv
qwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
重组5.948.1(H100Y)
重组5.948.1重链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：121
重组5.948.1重链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：122
Figure G2008800104874D00962
重组5.948.1轻链的核苷酸序列＝SEQ ID NO：131
重组5.948.1轻链的衍生蛋白质序列＝SEQ ID NO：132
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHRNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGS
GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPPATFGGGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakv
qwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
全序列表
SEQ ID NO 1：重组5.396.1-全长重链核苷酸序列
Figure G2008800104874D00964
SEQ ID NO 2：重组5.396.1-全长重链预测的氨基酸序列
Figure G2008800104874D00971
SEQ ID NO 3：重组5.396.1-重链可变结构域核苷酸序列
SEQ ID NO 4：重组5.396.1-预测的重链可变结构域氨基酸序列
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTI
SVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDNWNDSFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO 5：重组5.396.1-重链CDR1核苷酸序列
GGTTACTACTGGAGC
SEQ ID NO 6：重组5.396.1-预测的重链CDR1氨基酸序列
GYYWS
SEQ ID NO 7：重组5.396.1-重链CDR2核苷酸序列
GAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGT
SEQ ID NO 8：重组5.396.1-预测的重链CDR2氨基酸序列
EIHHSGSTNYNPSLKS
SEQ ID NO 9：重组5.396.1-重链CDR3核苷酸序列
GACAACTGGAACGACTCTTTCTACTACTACTACGGTATGGACGTC 
SEQ ID NO 10：重组5.396.1-预测的重链CDR3氨基酸序列
DNWNDSFYYYYGMDV
SEQ ID NO 11：重组5.396.1-全长轻链核苷酸序列
Figure G2008800104874D00973
SEQ ID NO 12：重组5.396.1-预测的全长轻链氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNHLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTD
FTLTISSLQPEDFATYYCQQYNRHPFTFGPGTKVDIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalq
sgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ ID NO 13：重组5.396.1-轻链可变结构域核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCACTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACAT
GTCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAATCATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTA
AGTCCCTGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAAGTTCAGCGGCAGTGGATC
TGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCCTGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAAC
AGTATAATAGGCACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA
SEQ ID NO 14：重组5.396.1-预测的轻链可变结构域氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNHLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSKFSGSGSGTD
FTLTISSLQPEDFATYYCQQYNRHPFTFGPGTKVDIK
SEQ ID NO 15：重组5.396.1-轻链CDR1核苷酸序列
CGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAATCATTTAGCC
SEQ ID NO 16：重组5.396.1-预测的轻链CDR1氨基酸序列
RASQGISNHLA
SEQ ID NO 17：重组5.396.1-轻链CDR2核苷酸序列
GCTGCATCCAGTTTGCAAAGT
SEQ ID NO 18：重组5.396.1-预测的轻链CDR2氨基酸序列
AASSLQS
SEQ ID NO 19：重组5.396.1-轻链CDR3核苷酸序列
CAACAGTATAATAGGCACCCATTCACT
SEQ ID NO 20：重组5.396.1-预测的轻链CDR3氨基酸序列
QQYNRHPFT
SEQ ID NO 21：重组5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)-全长重链核苷酸序列
Figure G2008800104874D00981
SEQ ID NO 22：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-预测的全长重链氨基酸序列
Figure G2008800104874D00991
SEQ ID NO 23：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-重链可变结构域核苷酸序列
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCGGAGACCCTGTCCCTCACCTG
CGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTGGTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGG
GCTGGAGTGGATTGGGGAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGTCG
AGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGC
GGACACGGCTGTGTATTACTGTGCGAGAGACAACTGGAACGACAACTTCTACTACTACTACGGTATG
GACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTCA
SEQ ID NO 24：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-预测的重链可变结构域氨基酸序列
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLEWIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTI
SVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARDNWNDNFYYYYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO 25：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-重链CDR1核苷酸序列
GGTTACTACTGGAGC
SEQ ID NO 26：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-预测的重链CDR1氨基酸序列
GYYWS
SEQ ID NO 27：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-重链CDR2核苷酸序列
GAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGAGT
SEQ ID NO 28：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-预测的重链CDR2氨基酸序列
EIHHSGSTNYNPSLKS
SEQ ID NO 29：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-重链CDR3核苷酸序列
GACAACTGGAACGACAACTTCTACTACTACTACGGTATGGACGTC
SEQ ID NO 30：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-预测的重链CDR3氨基酸序列
DNWNDNFYYYYGMDV
SEQ ID NO 31：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-全长轻链
核苷酸序列
Figure G2008800104874D01001
SEQ ID NO 32：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-预测的全长轻链氨基酸序列
SEQ ID NO 33：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-轻链可变结构域核苷酸序列
Figure G2008800104874D01003
SEQ ID NO 34：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-预测的轻链可变结构域氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNHLAWFQQKPGKAPKSLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTD
FTLTISSLQPEDFATYYCQQYNRHPFTFGPGTKVDIK
SEQ ID NO 35：重组5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)-轻链CDR1核苷酸序列
CGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAATCATTTAGCC
SEQ ID NO 36：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-预测的轻链CDR1氨基酸序列
RASQGISNHLA
SEQ ID NO 37：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-轻链CDR2核苷酸序列
GCTGCATCCAGTTTGCAAAGT
SEQ ID NO 38：重组5.396.1(Hc-S103N U-K61R)-预测的轻链CDR2氨基酸序列
AASSLQS
SEQ ID NO 39：重组5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)-轻链CDR3核苷酸序列
CAACAGTATAATAGGCACCCATTCACT
SEQ ID NO 40：重组5.396.1(Hc-SI 03N Lc-K61R)-预测的轻链CDR3氨基酸序列
QQYNRHPFT
SEQ ID NO 41：重组6.605.1-全长重链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01011
SEQ ID NO 42：重组6.605.1-预测的全长重链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01012
SEQ ID NO 43：重组6.605.1-重链可变结构域核苷酸序列
Figure G2008800104874D01013
SEQ ID NO 44：重组6.605.1-预测的重链可变结构域氨基酸序列
QVHLVQSGAEVKMPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGR
ITMTTDTSTSTAYMDLRSLRSDDTAVYYCARDGDYYDPFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO 45：重组6.605.1-重链CDR1核苷酸序列
AGCTATGGTATCAGC
SEQ ID NO 46：重组6.605.1-预测的重链CDR1氨基酸序列
SYGIS
SEQ ID NO 47：重组6.605.1-重链CDR2核苷酸序列
TGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGC
SEQ IO NO 48：重组6.605.1-预测的重链CDR2氨基酸序列
WISAYNGNTNYAQKLQG
SEQ ID NO 49：重组6.605.1-重链CDR3核苷酸序列
GATGGGGATTACTATGATCCTTTTGACTAC
SEQ ID NO 50：重组6.605.1-预测的重链CDR3氨基酸序列
DGDYYDPFDY
SEQ ID NO 51：重组6.605.1-全长轻链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01021
SEQ ID NO 52：重组6.605.1-预测的全长轻链氨基酸序列
SEQ ID NO 53：重组6.605.1-轻链可变结构域核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGGAGACAGAGTCACCATCACTT
GCCGGACAAGTCAGAGTATTAGCAACTGGTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAA
ACTCCTGATCTATGGTGCCTCCACTTTGAAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGTGGCAGTGAATCT
GGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTCTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACA
GAGTTACAGTACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA
SEQ ID NO 54：重组6.605.1-预测的轻链可变结构域氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSISNWLNWYQQKPGKAPKLLIYGASTLKSGVPSRFSGSESGTD
FTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO 55：重组6.605.1-轻链CDR1核苷酸序列
CGGACAAGTCAGAGTATTAGCAACTGGTTAAAT
SEQ ID NO 56：重组6.605.1-预测的轻链CDR1氨基酸序列
RTSQSISNWLN
SEQ ID NO 57：重组6.605.1-轻链CDR2核苷酸序列
GGTGCCTCCACTTTGAAAAGT
SEQ ID NO 58：重组6.605.1-预测的轻链CDR2氨基酸序列
GASTLKS
SEQ ID NO 59：重组6.605.1-轻链CDR3核苷酸序列
CAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGACG
SEQ ID NO 60：重组6.605.1-预测的轻链CDR 3氨基酸序列
QQSYSTPPT
SEQ ID NO 61：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-全长重链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01031
SEQ ID NO 62：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T 25A，T53S)-预测的全长重链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01032
SEQ ID NO 63：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-重链可变结构域核苷酸序列
SEQ ID NO 64：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-预测的重链可变结构域氨基酸序列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNTNYAQKLQGR
ITMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDGDYYDPFDYWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO 65：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25AJ53S)-重链CDR1核苷酸序列
AGCTATGGTATCAGC
SEQ ID NO 66：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-预测的重链CDR1氨基酸序列
SYGIS
SEQ ID NO 67：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-重链CDR2核苷酸序列
TGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCCAGGGC
SEQ ID NO 68：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；L.C-T25AJ53S)-预测的重链CDR2氨基酸序列
WISAYNGNTNYAQKLQG
SEQ ID NO 69：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25AJ53S)-重链CDR3核苷酸序列
GATGGGGATTACTATGATCCTTTTGACTAC
SEQ ID NO 70：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-预测的重链CDR3氨基酸序列
DGDYYDPFDY
SEQ ID NO 71：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-全长轻链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01041
SEQ ID NO 72：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25AJ53S)-预测的全长轻链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01042
SEQ ID NO 73：重组6.605.1(Hc-H 3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-轻链可变结构域核苷酸序列
Figure G2008800104874D01043
SEQ ID NO 74：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K.D82E；Lc-T25A，T53S)-预测的轻链可变结构域氨基酸序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNWLNWYQQKPGKAPKLLIYGASSLKSGVPSRFSGSESGT
DFTLTISSLQPEDFATYYCQQSYSTPPTFGQGTKVEIK
SEQ ID NO 75：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-轻链CDR1核苷酸序列
CGGGCAAGTCAGAGTATTAGCAACTGGTTAAAT
SEQ ID NO 76：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-预测的轻链CDR1氨基酸序列
RASQSISNWLN
SEQ ID NO 77：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-轻链CDR2核苷酸序列
GGTGCCTCCAGTTTGAAAAGT
SEQ ID NO 78：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-预测的轻链CDR2氨基酸序列
GASSLKS
SEQ ID NO 79：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25A，T53S)-轻链CDR3核苷酸序列
CAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGACG
SEQ ID NO 80：重组6.605.1(Hc-H3Q，M13K，D82E；Lc-T25AJ53S)-预测的轻链CDR3氨基酸序列
QQSYSTPPT
SEQ ID NO 81：重组5.948.1-全长重链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01051
SEQ ID NO 82：重组5.948.1-预测的全长重链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01061
SEQ ID NO 83：重组5.948.1-重链可变结构域核苷酸序列
Figure G2008800104874D01062
SEQ ID NO 84：重组5.948.1-预测的重链可变结构域氨基酸序列
Figure G2008800104874D01063
SEQ ID NO 85：重组5.948.1-重链CDR1核苷酸序列
AGTTATGATATCAAC
SEQ ID NO 86：重组5.948.1-预测的重链CDR1氨基酸序列
SYDIN
SEQ ID NO 87：重组5.948.1-重链CDR2核苷酸序列
TGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCACAGAAGTTCCAGGGC
SEQ ID NO 88：重组5.948.1-预测的重链CDR2氨基酸序列
WMDPNSGNTGYAQKFQG
SEQ ID NO 89：重组5.948.1-重链CDR3核苷酸序列
GGCCACTATGATAGTGATGGTTATTACTCCTTCTCCGGTATGGACGTC
SEQ ID NO 90：重组5.948.1-预测的重链CDR3氨基酸序列
GHYDSDGYYSFSGMDV
SEQ ID NO 91：重组5.948.1-全长轻链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01064
SEQ ID NO 92：重组5.948.1-预测的全长轻链氨基酸序列
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHRNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGS
GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPPATFGGGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakv
qwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
SEQ ID NO 93：重组5.948.1-轻链可变结构域核苷酸序列
Figure G2008800104874D01071
SEQ ID NO 94：重组5.948.1-预测的轻链可变结构域氨基酸序列
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHRNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGS
GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPPATFGGGTKVEIK
SEQ ID NO 95：重组5.948.1-轻链CDR1核苷酸序列
AGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCATAGGAATGGATACAACTACTTGGAT
SEQ ID NO 96：重组5.948.1-预测的轻链CDR1氨基酸序列
RSSQSLLHRNGYNYLD
SEQ ID NO 97：重组5.948.1-轻链CDR2核苷酸序列
TTGGGTTCTAATCGGGCCTCC
SEQ ID NO 98：重组5.948.1-预测的轻链CDR2氨基酸序列
LGSNRAS
SEQ ID NO 99：重组5.948.1-轻链CDR3核苷酸序列
ATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACT
SEQ ID NO 100：重组5.948.1-预测的轻链CDR3氨基酸序列
MQALQTPPAT
SEQ ID NO 101：来自杂交瘤的5.396.1-重链核苷酸序列
SEQ ID NO 102：来自杂交瘤的5.396.1-预测的重链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01081
SEQ ID NO 103：来自杂交瘤的5.396.1-轻链核苷酸序列
SEQ ID NO 104：来自杂交瘤的5.396.1-预测的轻链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01083
SEQ ID NO 105：来自杂交瘤的6.605.1-重链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01084
SEQ ID NO 106：来自杂交瘤的6.605.1-预测的重链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01085
SEQ ID NO 107：来自杂交瘤的6.605.1-轻链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01086
SEQ ID NO 108：来自杂交瘤的6.605.1-预测的轻链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01091
SEQ ID NO 109：来自杂交瘤的5.948.1-重链核苷酸序列
SEQ ID NO 110：来自杂交瘤的5.948.1-预测的重链氨基酸序列
SEQ ID NO 111：来自杂交瘤的5.948.1-轻链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01094
SEQ ID NO 112：来自杂交瘤的5.948.1-预测的轻链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01095
S
EQ ID NO 121：重组5.948.1(HIOOY)-全长重链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01101
SEQ ID NO 122：重组5.948.1(H100Y)-预测的全长重链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01102
SEQ ID NO 123：重组5.948.1(H100Y)-重链可变结构域核苷酸序列
Figure G2008800104874D01103
SEQ ID NO 124：重组5.948.1(H100Y)-预测的重链可变结构域氨基酸序列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLEWMGWMDPNSGNTGYAQKFQG
RVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGYYDSDGYYSFSGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO 125：重组5.948.1(H100Y)-重链CDR1核苷酸序列
AGTTATGATATCAAC
SEQ ID NO 126：重组5.948.1(H100Y)-预测的重链CDR1氨基酸序列
SYDIN
SEQ ID NO 127：重组5.948.1(H100Y)-重链CDR2核苷酸序列
TGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCACAGAAGTTCCAGGGC
SEQ ID NO 128：重组5.948.1(H100Y)-预测的重链CDR2氨基酸序列
WMDPNSGNTGYAQKFQG
SEQ ID NO 129：重组5.948.1(H100Y)-重链CDR3核苷酸序列
GGCTACTATGATAGTGATGGTTATTACTCCTTCTCCGGTATGGACGTC
SEQ ID NO 130：重组5.948.1(H100Y)-预测的重链CDR3氨基酸序列
GYYDSDGYYSFSGMDV
SEQ ID NO 131：重组5.948.1(H100Y)-全长轻链核苷酸序列
Figure G2008800104874D01111
SEQ ID NO 132：重组5.948.1(H100Y)-预测的全长轻链氨基酸序列
Figure G2008800104874D01112
SEQ ID NO 133：重组5.948.1(H100Y)-轻链可变结构域核苷酸序列
Figure G2008800104874D01113
SEQ ID NO 134：重组5.948.1(H100Y)-预测的轻链可变结构域氨基酸序列
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHRNGYNYLDWYLQKPGQSPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGS
GSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQALQTPPATFGGGTKVEIK
SEQ ID NO 135：重组5.948.1(H100Y)-轻链CDR1核苷酸序列
AGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCATAGGAATGGATACAACTACTTGGAT
SEQ ID NO 136：重组5.948.1(H100Y)-预测的轻链CDR1氨基酸序列
RSSQSLLHRNGYNYLD
SEQ ID NO 137：重组5.948.1(H100Y)-轻链CDR2核苷酸序列
TTGGGTTCTAATCGGGCCTCC
SEQ ID NO 138：重组5.948.1(H100Y)-预测的轻链CDR2氨基酸序列
LGSNRAS
SEQ ID NO 139：重组5.948.1(H100Y)-轻链CDR3核苷酸序列
ATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACT
SEQ ID NO 140：重组5.948.1(H100Y)-预测的轻链CDR3氨基酸序列
MQALQTPPAT
序列表
 
<110>AMGEN FREMONT INC.
     PFIZER INC
 
<120>抗IgE抗体
 
<130>ABX-PF10
 
<140>PCT/US2008/004286
<141>2008-04-01
 
<150>61/008,755
<151>2007-12-20
 
<150>60/921,546
<151>2007-04-02
 
<160>140
 
<170>PatentIn version 3.3
 
<210>1
<211>1347
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>1
caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc     60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc     120
ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atccatcata gtggaagcac caactacaac     180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg     240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agacaactgg     300
aacgactctt tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc     360
gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc   420
acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg   480
acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta   540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtagtgaccg tgccctccag caacttcggc   600
acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca   660
gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg   720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag   780
gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac   840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc   900
acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag   960
tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa   1020
accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg   1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc   1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg   1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag   1260
caggggaacg tc ttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag  1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa                                       1347
 
<210>2
<211>449
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>2
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                   15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
            20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Glu Ile His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
    50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
    115         120                     125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser
    130                 135                 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
            180                 185                 190
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val
        195                 200                 205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys
    210                 215                 220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                  280                285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
    290                 295                 300
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
            340                 345                 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
        355                 360                 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala ValGlu Trp Glu
    370                 375                 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
                405                 410                 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
            420                 425                 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Set Leu Ser Leu Ser Pro Gly
        435                 440                 445
Lys
 
<210>3
<211>369
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>3
caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc    60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc    120
ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atccatcata gtggaagcac caactacaac    180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg  240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agacaactgg  300
aacgactctt tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc  360
gtctcctca                                                          369
 
<210>4
<211>123
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>4
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
 1              5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
            20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Glu Ile His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
    50                  55                  60
Set Arg Val Thr Ile Set Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                 85                 90                  95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
 
<210>5
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>5
ggttactact ggagc                                                    15
 
<210>6
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>6
Gly Tyr Tyr Trp Set
1               5
 
<210>7
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>7
gaaatccatc atagtggaag caccaactac aacccgtccc tcaagagt                48
 
<210>8
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>8
Glu Ile His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1               5                   10                  15
 
<210>9
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>9
gacaactgga acgactcttt ctactactac tacggtatgg acgtc                          45
 
<210>10
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>10
Asp Asn Trp Asn Asp Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1               5                   10                  15
 
<210>11
<211>642
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>11
gacatccaga tgacccagtc tccatcatca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc  60
atcacatgtc gggcgagtca gggcattagc aatcatttag cctggtttca gcagaaacca  120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca  180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct  240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataataggc acccattcac tttcggccct  300
gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca  360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat  420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag  480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg  540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc  600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt                     642
 
<210>12
<211>214
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn His
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr AsnArg His Pro Phe
                85                  90                 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210
 
<210>13
<211>321
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>13
gacatccaga tgacccagtc tccatcatca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc  60
atcacatgtc gggcgagtca gggcattagc aatcatttag cctggtttca gcagaaacca  120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca  180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct  240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataataggc acccattcac tttcggccct  300
gggaccaaag tggatatcaa a                                            321
 
<210>14
<211>107
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn His
             20                 25                  30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
     50                55                   60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg His Pro Phe
                85                  90                      95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
            100                 105
 
<210>15
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>15
cgggcgagtc agggcattag caatcattta gcc                                      33
 
<210>16
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>16
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Set Asn His Leu Ala
1               5                   10
 
<210>17
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>17
gctgcatcca gtttgcaaag t                                            21
 
<210>18
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>18
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
 
<210>19
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>19
caacagtata ataggcaccc attcact                              27
 
<210>20
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>20
Gln Gln Tyr Asn Arg His Pro Phe Thr
1               5
 
<210>21
<211>1347
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>21
caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc   60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc   120
ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atccatcata gtggaagcac caactacaac   180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg   240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agacaactgg   300
aacgacaact tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc   360
gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc  420
acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg  480
acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta  540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtagtgaccg tgccctccag caacttcggc  600
acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca  660
gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg  720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag  780
gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac  840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc  900
acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag  960
tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa  1020
accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg  1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc  1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg  1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag  1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag  1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa                                      1347
 
<210>22
<211>449
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>22
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
            20                  25                  30
Tyr Trp Ser TrpIle Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        35                 40                  45
Gly Glu Ile His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
     50                 55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Asn Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
        115                 120                 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser
    130                 135                 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
            180                 185                 190
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val
        195                 200                 205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys
    210                 215                 220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
    290                     295             300
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
                325                 330                     335
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
            340                 345                 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
        355                 360                 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala gal Glu Trp Glu
    370                 375                 380
Set Asn GlyGln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
385                390                 395                 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
                405                 410                 415
Set Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Set Cys Ser Val Met His Glu
            420                 425                 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Set Leu Set Leu Set Pro Gly
        435                 440                 445
Lys
 
<210>23
<211>369
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>23
caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc  60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc  120
ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atccatcata gtggaagcac caactacaac  180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg  240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agacaactgg  300
aacgacaact tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc  360
gtctcctca                                                          369
 
<210>24
<211>123
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>24
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
            20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Glu Ile His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
     50                 55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Asn Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120
 
<210>25
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>25
ggttactact ggagc                                                      15
 
<210>26
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>26
Gly Tyr Tyr Trp Ser
1               5
 
<210>27
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>27
gaaatccatc atagtggaag caccaactac aacccgtccc tcaagagt                  48
 
<210>28
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>28
Glu Ile His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1               5                   10                  15
 
<210>29
<211>45
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>29
gacaactgga acgacaactt ctactactac tacggtatgg acgtc                          45
 
<210>30
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>30
Asp Asn Trp Asn Asp Asn Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
1                   5               10                  15
 
<210>31
<211>642
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>31
gacatccaga tgacccagtc tccatcatca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc  60
atcacatgtc gggcgagtca gggcattagc aatcatttag cctggtttca gcagaaacca  120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca  180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct  240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataataggc acccattcac tttcggccct  300
gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca  360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat  420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag  480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg  540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc  600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt                     642
 
<210>32
<211>214
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn His
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg His Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115             120                     125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys gla Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Set Ser Pro Val Thr Lys Set
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210
 
<210>33
<211>321
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>33
gacatccaga tgacccagtc tccatcatca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc  60
atcacatgtc gggcgagtca gggcattagc aatcatttag cctggtttca gcagaaacca  120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca  180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct  240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataataggc acccattcac tttcggccct  300
gggaccaaag tggatatcaa a                                            321
 
<210>34
<211>107
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>34
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Set Gln Gly Ile Ser Asn His
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Set Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Set Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg His Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys
            100                 105
 
<210>35
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>35
cgggcgagtc agggcattag caatcattta gcc                               33
 
<210>36
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>36
Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn His Leu Ala
1               5                   10
 
<210>37
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>37
gctgcatcca gtttgcaaag t                                                  21
 
<210>38
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>38
Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser
1               5
 
<210>39
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>39
caacagtata ataggcaccc attcact                                           27
 
<210>40
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>40
Gln Gln Tyr Asn Arg His Pro Phe Thr
1               5
 
<210>41
<211>1335
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>41
caggttcacc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagatgc ctggggcctc agtgaaggtc  60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc  120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat  180
gcacagaagc tccagggcag aatcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac  240
atggacctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg  300
gattactatg atccttttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagcc  360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc  420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg  480
aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga  540
ctctactccc tcagcagcgt agtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac  600
acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa  660
tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc  720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg  780
gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg  840
gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg  900
gtcagcgtcc tcaccgtcgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag  960
gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag  1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag  1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag  1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc  1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc  1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc  1320
ctgtctccgg gtaaa                                                   1335
 
<210>42
<211>445
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>42
Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Met Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Ile Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
        115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145                 150                 155                 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
                165                 170                 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190
Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
        195                 200                 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu
    210                 215                 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225                 230                 235                 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                245                 250                 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
            260                 265                 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        275                         280         285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
    290                 295                 300
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305                 310                 315                 320
Val Ser AsnLys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
               325                 330                 335
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            340                 345                 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        355                 360                 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    370                 375                 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
385                 390                 395                 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
 
<210>43
<211>357
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>43
caggttcacc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagatgc ctggggcctc agtgaaggtc   60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc   120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat   180
gcacagaagc tccagggcag aatcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac   240
atggacctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg   300
gattactatg atccttttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca    357
 
<210>44
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>44
Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Met Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Ile Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
 
<210>45
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>45
agctatggta tcagc                                                            15
 
<210>46
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>46
Ser Tyr Gly Ile Ser
1               5
 
<210>47
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>47
tggatcagcg cttacaatgg taacacaaac tatgcacaga agctccaggg c                         51
 
<210>48
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>48
Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln
1               5                   10                  15
Gly
 
<210>49
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>49
gatggggatt actatgatcc tt ttgactac                                          30
 
<210>50
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>50
Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Pro Phe Asp Tyr
1               5                   10
 
<210>51
<211>642
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>51
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc  60
atcacttgcc ggacaagtca gagtattagc aactggttaa attggtatca gcagaaacca  120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatggt gcctccactt tgaaaagtgg ggtcccatca  180
aggttcagtg gcagtgaatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct  240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgac gttcggccaa  300
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca  360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat  420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag  480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg  540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc  600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt                     642
 
<210>52
<211>214
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
    多肽
 
<400>52
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp
            20                  25          30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125
Thr Ala Ser ValVal Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210
 
<210>53
<211>321
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>53
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc  60
atcacttgcc ggacaagtca gagtattagc aactggttaa attggtatca gcagaaacca  120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatggt gcctccactt tgaaaagtgg ggtcccatca  180
aggttcagtg gcagtgaatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct  240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgac gttcggccaa  300
gggaccaagg tggaaatcaa a                                            321
 
<210>54
<211>107
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>54
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Lys Set Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Set Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
 
<210>55
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>55
cggacaagtc agagtattag caactggtta aat                                           33
 
<210>56
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>56
Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp Leu Asn
1               5                   10
 
<210>57
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>57
ggtgcctcca ctttgaaaag t                                                21
 
<210>58
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>58
Gly Ala Ser Thr Leu Lys Ser
1               5
 
<210>59
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>59
caacagagtt acagtacccc tccgacg                                    27
 
<210>60
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>60
Gln Gln Set Tyr Ser Thr Pro Pro Thr
1               5
 
<210>61
<211>1335
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>61
caggtccagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc   60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc   120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat   180
gcacagaagc tccagggcag aatcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac   240
atggaactga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg   300
gattactatg atccttttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagcc   360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc   420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg  480
aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga  540
ctctactccc tcagcagcgt agtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac  600
acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa  660
tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc  720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg  780
gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg  840
gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg  900
gtcagcgtcc tcaccgtcgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag  960
gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag  1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag  1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag  1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc  1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc  1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc  1320
ctgtctccgg gtaaa                                                   1335
 
<210>62
<211>445
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>62
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Ile Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
        115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
    130                 135                 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145                 150                 155                 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
                165                 170                 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
           180                 185                 190
SerAsn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
       195                 200                 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu
    210                 215                 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225                 230                 235                 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                245                 250                 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
            260                 265                 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
    290                 295                 300
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305                 310                 315                 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                325                 330                 335
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            340                 345                 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        355                 360                 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    370                 375                 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
385                 390                 395                 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
 
<210>63
<211>357
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>63
caggtccagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc   60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc   120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat   180
gcacagaagc tccagggcag aatcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac   240
atggaactga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg   300
gattactatg atccttttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctca      357
 
<210>64
<211>119
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>64
Gln ValGln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1              5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
    50                  55                  60
Gln GlyArg Ile Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                 70                  75                  80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
        115
 
<210>65
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>65
agctatggta tcagc                                                           15
 
<210>66
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>66
Ser Tyr Gly Ile Ser
1               5
 
<210>67
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>67
tggatcagcgct tacaatgg taacacaaac tatgcacaga agctccaggg c                       51
 
<210>68
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>68
Trp Ile Set Ala Tyr Asn Gly Asa Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln
1               5                   10                  15
 
<210>69
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>69
gatggggatt actatgatcc ttttgactac                                            30
 
<210>70
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>70
Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Pro Phe Asp Tyr
1               5                   10
 
<210>71
<211>642
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>71
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc  60
atcacttgcc gggcaagtca gagtattagc aactggttaa attggtatca gcagaaacca  120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatggt gcctccagtt tgaaaagtgg ggtcccatca  180
aggttcagtg gcagtgaatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct  240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgac gttcggccaa  300
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca  360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat  420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag  480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg  540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc  600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt                     642
 
<210>72
<211>214
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>72
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210
 
<210>73
<211>321
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>73
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc  60
atcacttgcc gggcaagtca gagtattagc aactggttaa attggtatca gcagaaacca  120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatggt gcctccagtt tgaaaagtgg ggtcccatca  180
aggttcagtg gcagtgaatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct  240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgac gttcggccaa  300
gggaccaagg tggaaatcaa a                                            321
 
<210>74
<211>107
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>74
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
G1u Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
            100                 105
 
<210>75
<211>33
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>75
cgggcaagtc agagtattag caactggtta aat                                            33
 
<210>76
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>76
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Set Asn Trp Leu Asn
1               5                   10
 
<210>77
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>77
ggtgcctcca gtttgaaaag t                                                 21
 
<210>78
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>78
Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser
1               5
 
<210>79
<211>27
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>79
caacagagtt acagtacccc tccgacg                                              27
 
<210>80
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>80
Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr
1               5
 
<210>81
<211>1353
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>81
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc  60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc  120
actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atggacccta acagtggtaa cacaggctat  180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac  240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggccac  300
tatgatagtg atggttatta ctccttctcc ggtatggacg tctggggcca agggaccacg  360
gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc  420
aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa  480
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct  540
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtag tgaccgtgcc ctccagcaac  600
ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac  660
aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca  720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc  780
cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac  840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc  900
aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgtcgtgc accaggactg gctgaacggc  960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc  1020
tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag  1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac  1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc  1200
atgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg  1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac  1320
acacagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa                               1353
 
<210>82
<211>451
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>82
Gln Val Gln Leu Val Gln Set Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly His Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met
            100                 105                 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
        115                 120                 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
    130                 135                 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145                 150                 155                 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
                165                 170                 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
            180                 185                 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys
        195                 200                 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu
    210                 215                 220
Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
225                 230                 235                 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
                245                 250                 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
            260                 265                 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
        275                 280                 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe
    290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305                 310                 315                 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile
                325                 330                 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
            340                 345                 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
        355                 360                 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
    370                 375                 380
Trp Glu Set Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385                 390                 395                 400
Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
                405                 410                 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
            420                 425                 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
        435                 440                 445
Pro Gly Lys
    450
 
<210>83
<211>375
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>83
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc  60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc  120
actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atggacccta acagtggtaa cacaggctat  180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac  240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggccac  300
tatgatagtg atggttatta ctccttctcc ggtatggacg tctggggcca agggaccacg  360
gtcaccgtct cctca                                                   375
 
<210>84
<211>125
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>84
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly His Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met
            100                 105                 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
 
<210>85
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>85
agttatgata tcaac                                                     15
 
<210>86
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>86
Ser Tyr Asp Ile Asn
1               5
 
<210>87
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>87
tggatggacc ctaacagtgg taacacaggc tatgcacaga agttccaggg c                     51
 
<210>88
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>88
Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
 
<210>89
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>89
ggccactatg atagtgatgg ttattactcc ttctccggta tggacgtc                            48
 
<210>90
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>90
Gly His Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met Asp Val
1               5                   10                  15
 
<210>91
<211>660
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>91
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc  60
atctcctgta ggtctagtca gagcctcctg cataggaatg gatacaacta cttggattgg  120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc  180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc  240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactcct  300
ccggccactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaac gaactgtggc tgcaccatct  360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc  420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc  480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc  540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc  600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt  660
 
<210>92
<211>220
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>92
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
        115                 120                 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
    130                 135                 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145                 150                 155                 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
                165                 170                 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
            180                 185                 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
        195                 200                 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210                 215                 220
 
<210>93
<211>339
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>93
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc   60
atctcctgta ggtctagtca gagcctcctg cataggaatg gatacaacta cttggattgg   120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc   180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc   240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactcct   300
ccggccactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaa                          339
 
<210>94
<211>113
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>94
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65          70                          75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
            100                 105                 110
Lys
 
<210>95
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>95
aggtctagtc agagcctcct gcataggaat ggatacaact acttggat                                 48
 
<210>96
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>96
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1               5               10                      15
 
<210>97
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>97
ttgggttcta atcgggcctc c                                                 21
 
<210>98
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>98
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1               5
 
<210>99
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>99
atgcaagctc tacaaactcc tccggccact                                  30
 
<210>100
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>100
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Pro Ala Thr
1               5                   10
 
<210>101
<211>1347
<212>DNA    
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>101
caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc  60
acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc  120
ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atccatcata gtggaagcac caactacaac  180
ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg  240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agacaactgg  300
aacgactctt tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc  360
gtctcctcag cctccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc  420
acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg  480
acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta  540
cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caacttcggc  600
acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca  660
gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg  720
tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag  780
gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac  840
gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc  900
acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag  960
tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa  1020
accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg  1080
accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc  1140
gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg  1200
gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag  1260
caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag  1320
aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa                                      1347
 
<210>102
<211>449
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>102
Gln Val Gln Leu Gln Gln Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu
1               5                   10                  15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr
            20                  25                  30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
        35                  40                  45
Gly Glu Ile His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
    50                  55                  60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65                  70                  75                  80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
                85                  90                  95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val
            100                 105                 110
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
        115                 120                 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser
    130                 135                 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145                 150                 155                 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
                165                 170                 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
            180                 185                 190
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val
        195                 200                 205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys
    210                 215                 220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
225                 230                 235                 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
                245                 250                 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
            260                 265                 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
        275                 280                 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
    290                 295                 300
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305                 310                 315                 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
                325                 330                 335
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
            340                 345                 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
        355                 360                 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
    370                 375                 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
                405                 410                 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
            420                 425                 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
        435                 440                 445
Lys
 
<210>103
<211>642
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>103
gacatccaga tgacccagtc tccatcatca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc    60
atcacatgtc gggcgagtca gggcattagc aatcatttag cctggtttca gcagaaacca    120
gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca    180
aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct   240
gaagattttg caacttatta ctgccaacag tataataggc acccattcac tttcggccct   300
gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca   360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat   420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag   480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg   540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc   600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt                      642
 
<210>104
<211>214
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>104
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn His
            20                  25                  30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg His Pro Phe
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210
 
<210>105
<211>1335
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>105
caggttcacc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagatgc ctggggcctc agtgaaggtc  60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc  120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat  180
gcacagaagc tccagggcag aatcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac  240
atggacctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg  300
gattactatg atccttttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagcc  360
tccaccaagg gcccatcggt cttccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc  420
acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacttccccg aaccggtgac ggtgtcgtgg  480
aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccag ctgtcctaca gtcctcagga  540
ctctactccc tcagcagcgt ggtgaccgtg ccctccagca acttcggcac ccagacctac  600
acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa  660
tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc  720
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg  780
gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg  840
gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg  900
gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag  960
gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag  1020
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag  1080
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag  1140
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc  1200
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc  1260
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc  1320
ctgtctccgg gtaaa                                                   1335
 
<210>106
<211>445
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>106
Gln Val His Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Met Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Ile Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
            100                 105                 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
        115                 120                 125
Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu
    l30                 135                 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145                 150                 155                 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
                165                 170                 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
            180                 185                 190
Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro
        195                 200                 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu
    210                 215                 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
225                 230                 235                 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
                245                 250                 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
            260                 265                 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
        275                 280                 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
    290                 295                 300
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305                 310                 315                 320
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
                325                 330                 335
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
            340                 345                 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
        355                 360                 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
    370                 375                 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
385                 390                 395                 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
                405                 410                 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
            420                 425                 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
        435                 440                 445
 
<210>107
<211>642
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>107
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc  60
atcacttgcc ggacaagtca gagtattagc aactggttaa attggtatca gcagaaacca  120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatggt gcctccactt tgaaaagtgg ggtcccatca  180
aggttcagtg gcagtgaatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct  240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgac gttcggccaa  300
gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtcttcat cttcccgcca  360
tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat  420
cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag  480
gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg  540
ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc  600
ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt                     642
 
<210>108
<211>214
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>108
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1               5                   10                  15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Thr Ser Gln Ser Ile Ser Asn Trp
            20                  25                  30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
        35                  40                  45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
    50                  55                  60
Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65                  70                  75                  80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro
                85                  90                  95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
            100                 105                 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
        115                 120                 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
    130                 135                 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145                 150                 155                 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
                165                 170                 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
            180                 185                 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
        195                 200                 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210
 
<210>109
<211>1353
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>109
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc  60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc  120
actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atggacccta acagtggtaa cacaggctat  180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac  240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggccac  300
tatgatagtg atggttatta ctccttctcc ggtatggacg tctggggcca agggaccacg  360
gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc  420
aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa  480
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccagct  540
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtgg tgaccgtgcc ctccagcaac  600
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ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc  780
cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac  840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc  900
aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc  960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc  1020
tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag  1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac  1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc  1200
atgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg  1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac  1320
acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa                               1353
 
<210>110
<211>451
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>110
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly His Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met
            100                 105                 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
        115                 120                 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
    130                 135                 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145                 150                 155                 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
                165                 170                 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
            180                 185                 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys
        195                 200                 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu
    210                 215                 220
Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
225                 230                 235                 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
                245                 250                 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
            260                 265                 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
        275                 280                 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe
    290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305                 310                 315                 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile
                325                 330                 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
            340                 345                 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
        355                 360                 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
    370                 375                 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385                 390                 395                 400
Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
                405                 410                 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Set Cys Ser Val Met
            420                 425                 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Set Leu Ser Leu Ser
        435                 440                 445
Pro Gly Lys
    450
 
<210>111
<211>660
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>111
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc  60
atctcctgta ggtctagtca gagcctcctg cataggaatg gatacaacta cttggattgg  120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc  180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc  240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactcct  300
ccggccactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaac gaactgtggc tgcaccatct  360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc  420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc  480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc  540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc    600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt    660
 
<210>112
<211>220
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>112
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Set Gln Ser Leu Leu His Arg
            20                  25              30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Set
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Set Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
        115                 120                 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
    130                 135                 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145                 150                 155                 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
                165                 170                 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
            180                 185                 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
        195                 200                 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210                 215                 220
 
<210>113
 
<400>113
000
 
<210>114
 
<400>114
000
 
<210>115
 
<400>115
000
 
<210>116
 
<400>116
000
 
<210>117
 
<400>117
000
 
<210>118
 
<400>118
000
 
<210>119
 
<400>119
000
 
<210>120
 
<400>120
000
 
<210>121
<211>1353
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>121
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc  60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc  120
actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atggacccta acagtggtaa cacaggctat  180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac  240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggctac  300
tatgatagtg atggttatta ctccttctcc ggtatggacg tctggggcca agggaccacg    360
gtcaccgtct cctcagcctc caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc    420
aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa    480
ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct    540
gtcctacagt cctcaggact ctactccctc agcagcgtag tgaccgtgcc ctccagcaac    600
ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac    660
aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca    720
ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc    780
cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac    840
tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc    900
aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc accgtcgtgc accaggactg gctgaacggc    960
aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc    1020
tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag    1080
gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac    1140
atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc    1200
atgctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg    1260
tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac    1320
acacagaaga gcctctccct gtctccgggt aaa                                 1353
 
<210>122
<211>451
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>122
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Set Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Asp Set Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Set Gly Met
            100                 105                 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
        115                 120                 125
Lys Gly Pro Set Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser
    130                 135                 140
Glu Set Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145                 150                 155                 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
                165                 170                 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
            180                 185                 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr Tyr Thr Cys
        195                 200                 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu
    210                 215                 220
Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala
225                 230                 235                 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
                245                 250                 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
            260                 265                 270
Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
        275                 280                 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe
    290                 295                 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305                 310                 315                 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile
                325                 330                 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
            340                 345                 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
        355                 360                 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
    370                 375                 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Ash Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385                 390                 395                 400
Met Leu Asp Ser Asp Gly Set Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
                405                 410                 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
            420                 425                 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Set Leu Ser
        435                 440                 445
Pro Gly Lys
    450
 
<210>123
<211>375
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>123
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc       60
tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc    120
actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atggacccta acagtggtaa cacaggctat    180
gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac    240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaggctac    300
tatgatagtg atggttatta ctccttctcc ggtatggacg tctggggcca agggaccacg    360
gtcaccgtct cctca                                                     375
 
<210>124
<211>125
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>124
Gln Val Gln Leu Val Gln Set Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1               5                   10                  15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
            20                  25                  30
Asp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Thr Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
        35                  40                  45
Gly Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe
    50                  55                  60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65                  70                  75                  80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
                85                  90                  95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met
            100                 105                 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
        115                 120                 125
 
<210>125
<211>15
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>125
agttatgata tcaac                                                        15
 
<210>126
<211>5
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>126
Ser Tyr Asp Ile Asn
1               5
 
<210>127
<211>51
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>127
tggatggacc ctaacagtgg taacacaggc tatgcacaga agttccaggg c                   51
 
<210>128
<211>17
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>128
Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1               5                   10                  15
Gly
 
<210>129
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>129
ggctactatg atagtgatgg ttattactcc ttctccggta tggacgtc                       48
 
<210>130
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>130
Gly Tyr Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Set Gly Met Asp Val
1               5                   10                  15
 
<210>131
<211>660
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>131
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc  60
atctcctgta ggtctagtca gagcctcctg cataggaatg gatacaacta cttggattgg  120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc  180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc  240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactcct  300
ccggccactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaac gaactgtggc tgcaccatct  360
gtcttcatct tcccgccatc tgatgagcag ttgaaatctg gaactgcctc tgttgtgtgc  420
ctgctgaata acttctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc  480
caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc  540
ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc  600
gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt  660
 
<210>132
<211>220
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>132
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly SerAsn Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
            100                 105                 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
        115                 120                 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
    130                 135                 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145                 150                 155                 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
                165                 170                 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
            180                 185                 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
        195                 200                 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
    210                 215                 220
 
<210>133
<211>339
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多核苷酸
 
<400>133
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc  60
atctcctgta ggtctagtca gagcctcctg cataggaatg gatacaacta cttggattgg  120
tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc  180
tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc  240
agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactcct  300
ccggccactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaa                         339
 
<210>134
<211>113
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     多肽
 
<400>134
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1               5                   10                  15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg
            20                  25                  30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
        35                  40                  45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
    50                  55                  60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65                  70                  75                  80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
                85                  90                  95
Leu Gln Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
            100                 105                 110
Lys
 
<210>135
<211>48
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>135
aggtctagtc agagcctcct gcataggaat ggatacaact acttggat                 48
 
<210>136
<211>16
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>136
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Arg Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1               5                   10                  15
 
<210>137
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>137
ttgggttcta atcgggcctc c                                                       21
 
<210>138
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>138
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1               5
 
<210>139
<211>30
<212>DNA
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     寡核苷酸
 
<400>139
atgcaagctc tacaaactcc tccggccact                                      30
 
<210>140
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
 
<220>
<223>人工序列的描述：合成的
     肽
 
<400>140
Met Gln Ala Leu Gln Thr Pro Pro Ala Thr
1               5                   10

Claims (47)

1.针对人IgE、或其抗原结合部分的人单克隆抗体或抗原结合部分，其具有选自下述的至少一种另外性质：
a)当使用由人FcεR1转染的RBL-2H 3细胞系经由其减少IgE细胞结合测定法的能力测量时，具有0.5μg/mL或更小的IC50；
b)经由其抑制由人FcεR1转染的RBL-2H 3细胞系的IgE介导的脱颗粒能力测量时，具有0.5μg/mL或更小的IC50；
c)不使受体结合的IgE交联，并且不刺激与人IgE培养的RBL-2H3(FcεR1)细胞的IgE依赖性脱颗粒；
d)不使受体结合的IgE交联，并且不刺激人血液嗜碱性粒细胞的IgE依赖性脱颗粒；
e)对于IgE是高度选择性的，超过人IgA、IgG1和IgG3；
f)经由表面等离子体共振(BIAcore)测量时以15nM或更小的亲和常数KD与全长人IgE结合；
g)经由表面等离子体共振测量时具有对人IgE 2×10-4s-1或更小的解离速率(k Off)；和
h)结合于与选自下述的抗体相同的人IgE表位：重组5.396.1；5.396.1 Hc-S 103N Lc-K61R；重组6.605.1；6.605.1(H3Q，M13K，D82E-T25A，T53S)；重组5.948.1.和5.948.1H100Y。
2.针对人IgE的分离的人抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体具有约0.1-30μg/mL的IC25ng/mL(100-5000ng/mL)，其中所述IC25ng/mL(100-5000ng/mL)定义为使血清样品中的游离IgE浓度从约100-5000ng/mL的起始浓度减少为约25ng/mL的浓度所需的体外抗体浓度。
3.根据权利要求2的抗体或其部分，其中所述抗体具有1-30μg/mL的IC25ng/mL(500-1500ng/mL)，其中所述IC25ng/mL(500-1500ng/mL)定义为使血清样品中的游离IgE浓度从约500-1500ng/mL的起始浓度减少为约25ng/mL的浓度所需的体外抗体浓度。
4.根据前述权利要求中任一项的抗体或其部分，其中所述抗体包含具有选自SEQ ID NO：10、30、50、70、90和130的序列的H-CDR 3。
5.根据前述权利要求中任一项的抗体或其部分，其中所述抗体选自：
-包含分别具有SEQ ID NO：6、8、10的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：16、18、20的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：26、28、30的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：36、38、40的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：46、48、50的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：56、58、60的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：66、68、70的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：76、78、80的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；
-包含分别具有SEQ ID NO：86、88、90的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：96、98、100的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体；和
-包含分别具有SEQ ID NO：126、128、130的序列的H-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)的H-CDR组；和分别具有SEQ ID NO：136、138、140的序列的L-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)的L-CDR组的抗体。
6.根据前述权利要求中任一项的抗体或其部分，其中所述抗体是IgG1或IgG2亚型。
7.根据前述权利要求中任一项的抗体或其部分，其中所述抗体选自：
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域和具有SEQ ID NO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：74的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：84的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：94的序列的L可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：124的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：134的序列的L可变结构域的抗体。
8.根据前述权利要求中任一项的抗体或其部分，其中所述抗体选自：
-包含具有SEQ ID NO：2的序列的H链和具有SEQ ID NO：12的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链和具有SEQ ID NO：32的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链和具有SEQ ID NO：52的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链和具有SEQ ID NO：72的序列的L链的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链和具有SEQ ID NO：92的序列的L链的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链和具有SEQ ID NO：132的序列的L链的抗体。
9.根据前述权利要求中任一项的抗体或其部分，其中所述抗体选自：
-包含由SEQ ID NO：1的核酸序列编码的H链序列和由SEQ ID NO：11的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：21的核酸序列编码的H链序列和由SEQ IDNO：31的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：41的核酸序列编码的H链序列和由SEQ IDNO：51的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：61的核酸序列编码的H链序列和由SEQ IDNO：71的核酸序列编码的L链序列的抗体；
-包含由SEQ ID NO：81的核酸序列编码的H链序列和由SEQ IDNO：91的核酸序列编码的L链序列的抗体；和
-包含由SEQ ID NO：121的核酸序列编码的H链序列和由SEQ IDNO：131的核酸序列编码的L链序列的抗体。
10.根据前述权利要求中任一项的抗体或其部分的变体，其中所述变体与所述抗体或部分不同于有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸置换。
11.核酸序列，其编码根据前述权利要求中任一项的抗体或其部分的一条链。
12.载体，其包含根据权利要求11的核酸序列。
13.载体，其适合于表达根据权利要求1-10中任一项的抗体或其部分的一条链。
14.细胞，其表达根据权利要求1-10中任一项的抗体或其部分的一条链。
15.用于制备根据权利要求1-10中任一项的抗体或其部分的方法，其包括培养根据权利要求14的细胞，并且回收所述抗体或其部分。
16.根据权利要求1-10中任一项的抗体或其部分用于作为药物使用。
17.根据权利要求1-10中任一项的抗体或其部分，用于治疗选自下述的IgE介导的病症：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
18.药物组合物，其包含根据权利要求1-10中任一项的抗体或其部分。
19.根据前述权利要求的药物组合物，用于治疗选自下述的IgE介导的病症：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
20.用于治疗有此需要的受试者中选自下述的IgE介导的病症的方法：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏，其包括给所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-10中任一项的抗体或其部分。
21.根据权利要求1-10中任一项的抗体或其部分在制备药物用于治疗选自下述的IgE介导的病症中的用途：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
22.核酸序列，其选自SEQ ID NO：1、3、11、13、21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、101、103、105、107、109、111、121、123、131和133。
23.针对人IgE的抗体，其中所述抗体选自：
-包含具有SEQ ID NO：4的序列的H可变结构域和具有SEQ ID NO：14的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：24的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：34的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：44的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：54的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：64的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：74的序列的L可变结构域的抗体；
-包含具有SEQ ID NO：84的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：94的序列的L可变结构域的抗体；和
-包含具有SEQ ID NO：124的序列的H可变结构域和具有SEQ IDNO：134的序列的L可变结构域的抗体。
24.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：2的序列的H链和具有SEQ ID NO：12的序列的L链。
25.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：22的序列的H链和具有SEQ ID NO：32的序列的L链。
26.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：42的序列的H链和具有SEQ ID NO：52的序列的L链。
27.针对IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：62的序列的H链和具有SEQ ID NO：72的序列的L链。
28.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：82的序列的H链和具有SEQ ID NO：92的序列的L链。
29.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含具有SEQ ID NO：122的序列的H链和具有SEQ ID NO：132的序列的L链。
30.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7977的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7982的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
31.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7981的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7980的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
32.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7985的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7984的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
33.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7983的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7978的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
34.针对人IgE的抗体，其中所述抗体包含由ATCC保藏PTA-7979的插入物编码的H链；和由ATCC保藏PTA-7986的插入物编码的L链；其中所述保藏依照布达佩斯条约于2006年11月7日由美国典型培养物保藏中心(ATCC)，P.O.Box 1549，Manassas，VA 20108，USA进行。
35.根据权利要求23-34中任一项的抗体用于作为药物使用。
36.根据权利要求23-34中任一项的抗体，其用于治疗选自下述的I gE介导的病症：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
37.药物组合物，其包含根据权利要求23-34中任一项的抗体。
38.根据前述权利要求的药物组合物，其用于治疗选自下述的I gE介导的病症：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
39.用于治疗有此需要的受试者中选自下述的IgE介导的病症的方法：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏，其包括给所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求23-34中任一项的抗体。
40.根据权利要求23-34中任一项的抗体在制备药物用于治疗选自下述的IgE介导的病症中的用途：哮喘、变应性哮喘、变应性鼻炎和食物过敏。
41.核酸序列，其编码根据权利要求23-34中任一项的抗体或其部分的一条链。
42.载体，其包含根据权利要求41的核酸序列。
43.载体，其适合于表达根据权利要求23-34中任一项的抗体或其部分的一条链。
44.细胞，其表达根据权利要求23-34中任一项的抗体或其部分的一条链。
45.用于制备根据权利要求23-34中任一项的抗体或其部分的方法，其包括培养根据权利要求43的细胞，并且回收所述抗体或其部分。
46.用于减少与FcεR1的IgE结合的方法，其包括使所述IgE与根据权利要求1-10或23-34中任一项的抗体或抗原结合部分接触。
47.用于减少经由细胞的IgE介导的脱颗粒的方法，其包括使所述细胞与根据权利要求1-10或23-34中任一项的抗体或抗原结合部分接触。
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