CN107686521B - 一种人源化抗IgE单克隆抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种新型的人源化抗IgE单克隆抗体，能够与IgE结合并抑制IgE与其受体FcεRI的结合及所引发的过敏性反应，并具有更好的热稳定性。本发明提供的新型的人源化抗IgE单克隆抗体，可用于治疗过敏性疾病，用于治疗过敏性哮喘或荨麻疹。

Description

一种人源化抗IgE单克隆抗体
技术领域
本发明属于单克隆抗体领域，具体涉及一种人源化抗IgE单克隆抗体。
背景技术
免疫球蛋白E（Immunoglobulin E，IgE）是免疫球蛋白的一种，其单体由2条重链（ε链）和2条轻链组成，其中ε链含有4个Ig类恒定区，称为Cε1-Cε4。IgE的主要生理功能是参与对寄生虫如曼氏裂体吸虫、旋毛虫和肝片吸虫等的免疫反应。此外IgE在I型超敏反应（又称过敏反应或变态反应）如哮喘、鼻窦炎、过敏性鼻炎、食物过敏以及部分慢性荨麻疹和过敏性皮炎中也起着重要作用。IgE还在对过敏药物、蜜蜂叮咬、脱敏免疫治疗所准备的抗原等过敏原的免疫应答中起着关键作用。
IgE是血清中含量最低的免疫球蛋白类型，一般仅占血清Ig总含量的0.05%，却能引起最强大的炎症反应。
IgE通过与肥大细胞、嗜碱细胞表面的Fcε受体结合引发过敏反应。Fcε受体有两种，分别是高亲和力受体FcεRI和低亲和力受体FcεRII（也称作CD23），IgE能够上调这两种受体的表达。FcεRI表达于肥大细胞、嗜碱细胞以及抗原递呈树突状细胞上，抗原与肥大细胞上FcεRI结合的IgE结合后能引起IgE的桥联和FcεRI的聚集，导致脱颗粒和细胞内炎症介质的释放。嗜碱细胞，在抗原导致细胞表面的IgE交联后，释放IL-4、IL-13等2型细胞因子和其他炎症介质。FcεRII表达于B细胞上，但是IL-4能够诱导其在巨噬细胞、嗜酸细胞、血小板和一些T细胞上的表达。IgE分子上负责与FcεRI和FcεRII结合的区域分别位于重链的Cε3区和Cε4区。
IgE以及IgE合成途径和IgE介导的过敏/炎症途径成为哮喘以及其他IgE介导的疾病治疗的靶标。奥马珠单抗（Omalizumab，商品名Xolair）就是一款抗IgE靶向性药物，于2003年首次被美国食药监局（FDA）批准上市，目前被FDA批准的适应症有12岁以上人群中重度哮喘、慢性特发性荨麻疹，2015年全球销售额达20亿美元（数据来自Roche公司2015年年报）。
Omalizumab是一种人源化IgG1κ型单克隆抗体，包括大约5%的鼠源和95%的人源序列，在IgE上的结合位点位于Cε3区，能够抑制IgE与肥大细胞和嗜碱细胞表面高亲和力受体FcεRI的结合，降低FcεRI阳性细胞上表面结合IgE的水平，限制过敏反应介质的释放程度；研究表明Xolair治疗还能降低患者嗜碱细胞上FcεR1受体的数量（美国FDA发布的Xolair药品说明书处方信息，2015年12月版）。Omalizumab与IgE分子的解离常数KD大约在0.1～0.6nM左右（J Allergy Clin Immunol. 2014 Jun;133(6):1709-19.；Nat Commun. 2016 May19;7:11610. doi: 10.1038/ncomms11610.；专利CN201010125245等）。
虽然Xolair具有已验证的临床有效性并取得了商业上的成功，但是由于IgE与FcεRI的亲和力较高，解离常数（KD）根据不同报道在10-10～10-9M左右（J Immunol. 2002 Feb15;168(4):1787-95.；Nat Commun. 2016 May 19;7:11610. doi: 10.1038/ncomms11610.），Omalizumab的临床用量需要根据IgE的基础水平进行调整，在过敏性哮喘患者体内游离IgE水平可升高数倍，往往需要数百毫克才能充分抑制IgE分子与FcεRI相结合、达到治疗效果（美国FDA发布的Xolair药品说明书处方信息，2015年12月版），因此治疗费用十分昂贵，即使是在美国也受到医疗保险的限制，目前仅用于吸入激素无法控制的严重病例。理论上治疗性抗IgE抗体对IgE的亲和力越高于FcεRI，用药量就越少，越有助于降低治疗费用；用药量少还可以降低副反应发生的概率和程度。
IgE的检测也是疾病诊断或医学研究的手段。特应性（Atopic）个体的血清IgE水平可达到正常人的10倍以上。血清IgE水平检测或针对IgE的皮肤点刺试验成为一些过敏性疾病的诊断手段，或是相关临床试验的检测指标，国家食药监局已经批准了多个进口或国产的免疫球蛋白E测定试剂盒，采用的检测方法有化学发光法、免疫比浊法、荧光磁微粒酶免法等。抗IgE抗体也是IgE检测试剂盒的关键原料，高亲和力的IgE抗体有助于提高试剂盒的灵敏度和检测结果的稳定性。
目前完整的IgG型抗体分子（包括IgG1、IgG2、IgG4等亚型及其不同的糖基修饰形式）是上市抗体药物的主流形式，Fab抗体片段或单链抗体（scFv）等其他形式的抗体药物虽然也有进入临床试验并有数种上市，但是目前数量占比很少，2015年至2016年上半年欧美新批准的15种抗体药物中有14种都是全长IgG分子，仅有1种Fab抗体。
IgG型抗体分子由2条轻链（L链）和2条重链（H链）通过二硫键连接组成，每条轻链可分为可变区VL和恒定区CL，每条重链可分为可变区VH和恒定区CH，其中IgG抗体的CH区又可分为CH1、CH2、CH3。在可变区内，某些区域氨基酸残基的组成和排列次序比V区内其他区域更易变化，这些区域称为高变区（hypervariable region，HVR）。高变区实际上是特异性抗原与抗体结合的位置。由于这些高变区序列与抗原决定簇互补，故又称为互补决定区(complementarity-determining region，CDR)。每条轻链和每条重链各自含有3个CDR区：CDR1、CDR2、CDR3。天然抗体分子还带有糖基化等翻译后修饰，IgG重链第297位氨基酸天冬酰胺（N297）是一个保守的N-连接糖基化位点。
抗体属于蛋白质，其生物学活性的发挥依赖于蛋白质结构的正确性，包括一级结构和高级结构。由于蛋白质结构的热不稳定性，抗体药物或制剂需要冷藏储存，并且保质期短。提高抗体蛋白的热稳定性，对于降低抗体药物或制剂的储存成本、延长储存期、降低储存损耗具有积极的意义。
蛋白质结构的热不稳定性既来自于一级结构，如某些氨基酸残基容易发生氧化、异构化，也来自于高级结构，如蛋白质高级结构中空间上相近的氨基酸残基之间作用力的强弱，以及暴露于蛋白质表面的氨基酸残基与溶剂之间相互作用的情况，这些作用力包括氢键、离子键、疏水键、范德华力等。至今，蛋白质高级结构的预测虽然已经有多种模型和理论，但是仍是一个难题；氨基酸突变对蛋白质高级结构及其热稳定性的影响更是难以准确预测，仅是达到了一个中等偏上的预测准确率。抗体虽然是高级结构研究较多的一类蛋白质，但是其可变区的多样性导致其高级结构预测也带有一定的不确定性，目前抗体高级结构的相关研究以及开发热稳定性好的抗体主要通过大量的试验在多种技术方案中来筛选确定，具有很大的随机性。
差示扫描热量法（DSC）是一种用于表征蛋白质和生物分子稳定性的高灵敏度、全自动、高通量的方法，可以测定样品的热跃迁中点(Tm)和其它热力学参数。溶液中的生物分子在其自然（折叠）构象和变性（去折叠）构象之间保持平衡。测得的热跃迁中点（Tm）可提供快速、简易的蛋白质稳定性指示，Tm值越大，生物分子越稳定。由蛋白质和其他大分子形成的立体结构经历温度诱导的构象变化，如去折叠，造成非共价键重新分配，从而导致热吸收，差示扫描热量法能够测量这种热量的吸收（ΔH，焓变）。DSC得出的数据可为蛋白质工程、配方研究、过程开发以及最终产品配方等生物制药开发过程提供重要指导。
使用DSC法对多种IgG1抗体进行对比分析，发现在10～100℃范围内抗体的DSC曲线（以DSC法测得的热量和温度分别为y轴、x轴作图所获得的曲线）上一般有3个峰，对应于3个Tm值：Tm1、Tm2、Tm3。其中Tm1是抗体CH2区解折叠（unfolding）的温度；Tm2、Tm3是抗体Fab区、CH3区解折叠的温度（MAbs. 2014 May-Jun;6(3):649-58.；MAbs. 2015;7(1):84-95.）。对比多个报道中不同IgG1抗体的Tm值，在pH中性条件下IgG1抗体的Tm1一般在68-72℃，Tm3一般在82-86℃，Tm2在不同抗体之间往往差异较大（Protein Sci. 2013; 22(11): 1542–1551.；MAbs. 2014; 6:3, 649–658.；Protein Sci. 2011; 20(9): 1546–1557.）。有的抗体Tm2与Tm1和/或Tm3接近，DSC曲线峰值部分叠加，可以表现为仅有2个峰或1个峰（图9）。由于同一亚型的抗体有相近的恒定区（CH2、CH3），因此抗体稳定性的差异主要表现为Fab区稳定性的差异。Fab区的不稳定性可影响到抗体整体的不稳定性（Biochem Biophys ResCommun. 2007;355(3):751-7.），因此提高Fab区的稳定性十分必要。
发明内容
本发明解决的问题是现有的抗IgE抗体热稳定性差、需冷藏保存、保质期短等问题。本发明提供了一种新型的人源化抗IgE单克隆抗体，能够与IgE结合并抑制IgE与其受体FcεRI的结合及所引发的过敏性反应，并具有更好的热稳定性。
本发明的技术方案如下：
一种人源化抗IgE单克隆抗体，轻链的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3具有SEQ IDNO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3的氨基酸序列，重链的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3具有SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6的氨基酸序列。
优选的，所述的人源化抗IgE单克隆抗体，轻链、重链的可变区具有SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
优选的，所述的人源化抗IgE单克隆抗体，轻链、重链的可变区由SEQ ID NO:9、SEQID NO:10的核苷酸序列编码。
优选的，所述的人源化抗IgE单克隆抗体，重链恒定区为IgG1亚型。
优选的，所述的人源化抗IgE单克隆抗体，轻链、重链分别具有SEQ ID NO:11、SEQID NO:12的氨基酸序列。
优选的，所述的人源化抗IgE单克隆抗体，轻链、重链分别由SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:14的核苷酸序列编码。
所述的人源化抗IgE单克隆抗体在制备IgE所引起的过敏性疾病治疗药物中的用途。
优选的，所述的过敏性疾病是过敏性哮喘或荨麻疹。
所述的人源化抗IgE单克隆抗体在制备IgE检测试剂盒中的用途。
本发明的有益效果在于：所述的人源化抗IgE单克隆抗体具有更好的热稳定性，具有常温下保存时间长、产品保质期长等特点；此外，本发明提供的人源化抗IgE单克隆抗体与现有的上市抗IgE药物奥马珠单抗相比也具有更高的靶向抗原亲和力和更低的半抑制剂量（IC50）。
附图说明
图1：杂交瘤分泌的抗体与FcεRI竞争结合重组人IgE Fcε2-4蛋白的实验结果；
图2：杂交瘤分泌的抗体与重组人IgE Fcε2-4蛋白的亲和力测试结果；
图3：杂交瘤分泌的抗体可变区基因克隆所使用的引物在PCR模板上的位置；
图4：hu4F11及其各突变株与重组人IgE Fcε2-4蛋白的亲和力测试结果；
图5：hu4F11及其各突变株使用DSC法（差示扫描热量法）测试热稳定性的实验结果；
图6：hu4F11-12制剂在各种温度的储存条件下生物学活性下降幅度的测试结果；
图7：hu4F11-12抑制脱颗粒效应的测试结果；
图8：Omalizumab抑制脱颗粒效应的测试结果；
图9：IgG1抗体DSC曲线示意图。
具体实施方式
实施例1、鼠源抗IgE单克隆抗体的制备与筛选
按文献《人IgE分子Fc段受体结合区的表达、纯化及功能鉴定》（李晶，郭怀祖，杨扬等，现代免疫学，2011(06): 445-449）的方法制备重组人IgE Fcε2-4蛋白（即由IgE的Cε2-Cε4区组成的蛋白），用于免疫Balb/c小鼠，腹腔注射50μg/只/次，首次免疫混合弗氏完全佐剂，2-4次混合弗氏不完全佐剂。两周后眼眶取血，ELISA 法检测抗体滴度，选择滴度高的动物，静脉注射50μg/只。3日后取脾脏，采用聚乙二醇法进行细胞融合，HAT培养基（Invitrogen公司）加压筛选，融合细胞培养上清ELISA法检测筛选阳性克隆，并及时克隆化。杂交瘤细胞接种Balb/c小鼠腹腔，定期抽取腹水，rProteinG亲和层析纯化抗IgE单克隆抗体，然后用下面的ELISA方法筛选与FcεRI竞争结合IgE Fcε2-4的抗体克隆：
FcεRI包被96孔酶标板，1μg/孔；用3%BSA（牛血清白蛋白）封闭后，同时加入10μg/ml的Biotin（生物素）标记的重组人IgE Fcε2-4及梯度稀释的待检测抗体；而后加入HRP（辣根过氧化酶）-Avidin（亲和素），四甲基联苯胺（TMB）显色，酶标仪读数。
竞争结合实验结果见图1。
从中选择竞争结合效果最好的杂交瘤细胞克隆3G13、4F11、5C6使用BIACORE3000生物大分子相互作用仪（购自GE公司）通过SPR（表面等离子共振法）进行亲和力测定，测定方法如下：
将重组人IgE Fcε2-4蛋白偶联到固定有羧甲基葡聚糖的CM5传感器芯片（购自GEHealthcare公司，货号BR100012）上，将待检测的抗体用运行缓冲液（即HBS-EP buffer，购自GE Healthcare公司，货号BR100188）在1 nmol/L～3000 nmol/L范围内进行梯度稀释，然后分别注射进样，实验整个过程流速设定为30 μL/min，在25℃下进行，用仪器测定流动相中的蛋白与芯片表面偶联的蛋白结合所引起的折光率变化，通过仪器的配套软件计算获得Ka、Kd、KD值等动力学参数。每次测定后，注射20 μL 60 μmol/L氢氧化钠溶液除去芯片表面的结合蛋白,以便进行下一个样品的试验。
亲和力测试结果见图2。从中选择亲和力最好的编号为4F11的杂交瘤细胞克隆进行下一步研究开发。
实施例2、抗体可变区基因的克隆（5’RACE）
Trizol法（Trizol试剂购自Thermofisher公司，货号15596026）提取实施例1筛选获得的编号为4F11的杂交瘤细胞总RNA。选择抗体（IgG1，κ）重链和轻链恒定区的适当位置分别设计3条基因特异性引物：GSP1-H～GSP3-H和GSP1-L～GSP3-L，引物序列见SEQ ID NO:25～SEQ ID NO:30，其中GSP1距离可变区基因最远，用于逆转录反应，GSP2用于首轮PCR扩增，GSP3用于巢式扩增。通用引物采用5' RACE cDNA末端快速扩增系统（购自Thermofisher公司，货号18374058）中的AAP引物和AUAP引物。各引物在PCR模板上的相对位置见图3。
以GSP1为引物将总RNA逆转录成cDNA，然后给第一链cDNA的3’末端加上poly（C）尾，加尾后用GSP2和AAP为引物PCR扩增，扩增产物稀释100倍，以AUAP和GSP3为引物进行巢式PCR扩增。两次PCR反应均采用热启动，反应条件：94℃ 2分钟；94℃ 30s，56℃ 30s，72℃1min，30个循环；72℃ 7分钟。巢式PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳分离后回收纯化目的片段并克隆到pGEM-T easy载体（购自Promega公司）中，筛选阳性克隆进行DNA测序，DNA测序结果用软件翻译成氨基酸，表明4F11杂交瘤细胞所产生的单克隆抗体的轻、重链可变区分别为SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16的氨基酸序列，经抗体同源对比分析确定其轻链的CDR1、CDR2、CDR3分别为SEQ ID NO:15的第24-33、49-55、88-96位氨基酸，重链的CDR1、CDR2、CDR3分别为SEQ ID NO:16的第31-35、50-65、98-109位氨基酸。
实施例3、鼠源单抗的人源化设计
分别选择人免疫球蛋白重链III亚组（SEQ ID NO:17)和Igκ链I亚组的一致序列（SEQ ID NO:18）作为抗体轻重链的人源化模板，然后将鼠源抗体的重链和轻链CDR区分别移植到人源模板重链III亚组和Igκ链I亚组，即以轻链的CDR1、CDR2、CDR3分别替代SEQ IDNO:18的第24-34、50-56、89-97位氨基酸，以重链的CDR1、CDR2、CDR3分别替代SEQ ID NO:17的第31-35，49-66，99-102位氨基酸，构成CDR移植抗体，其轻链和重链的可变区分别具有SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20的序列。
利用Insight II程序包（购自Accelrys公司）模拟鼠源单抗可变区的三维结构，确定在CDR区周围5Å的空间范围内可能影响鼠源抗体CDR构象而又与人源模板中相应位置不同的FR区残基为重链（SEQ ID NO:16）的第37位异亮氨酸（I）、第49位丙氨酸（A）、第96位丝氨酸（S）以及轻链（SEQ ID NO:15）的第1位谷氨酰胺（Q）、第3位缬氨酸（V）、第4位亮氨酸（L）、第41位苏氨酸（T）、第45位精氨酸（R）、第46位色氨酸（W）、第70位酪氨酸（Y）。将这些鼠源氨基酸残基保留在构建的CDR移植抗体中，即对可能影响抗体亲和力的FR区重要残基进行回复突变，从而获得高亲和力的人源化抗体，命名为hu4F11，其轻链和重链可变区分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22的序列。
实施例4、提高人源化抗体hu4F11的热稳定性
为了提高抗体的稳定性，选择对hu4F11轻链可变区（SEQ ID NO:21）的第25位甲硫氨酸（M）、54位甲硫氨酸（M）、88位天冬酰胺（N）以及重链可变区（SEQ ID NO:22）的第35位甲硫氨酸（M）、64位天冬氨酸（D）、106位甲硫氨酸（M）进行突变替换，设计了几种不同的氨基酸替换方案：
轻链氨基酸替换方案1（L1）：M25A、M54A、N88Q
轻链氨基酸替换方案2（L2）：M25A、M54A、N88L
重链氨基酸替换方案1（H1）：M35A、D64E、M106A
重链氨基酸替换方案2（H2）：M35A、D64K、M106A
重链氨基酸替换方案3（H3）：M35A、D64L、M106A
将替换后的轻链可变区和重链可变区随机组合，产生六种组合，将这六种可变区组合与人源化抗体轻重链恒定区序列（SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24）连接，形成六种候选抗体：hu4F11-11（L1H1）、hu4F11-12（L1H2）、hu4F11-13（L1H3）、hu4F11-21（L2H1）、hu4F11-22（L2H2）、hu4F11-23（L2H3），
按照CHO细胞（中国仓鼠卵巢细胞）偏爱密码子对hu4F11及上述六种突变体的氨基酸序列进行逆翻译，获得轻链、重链的DNA编码序列，其中hu4F11-12的DNA编码序列见SEQID NO:13（轻链）、SEQ ID NO:14（重链）；通过化学合成DNA序列，将轻链、重链的DNA编码序列分别插入pcDNA3.1真核表达载体，转染CHO-K1细胞（ATCC编号CCL-61），在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培养基（购自Thermofisher公司，货号11320082）中37℃、5%CO2条件下表达，采用重组蛋白A亲和层析介质纯化获得抗体蛋白，以奥马珠单抗为参比品，分别用SPR法和DSC法（差示扫描热量法）测定抗体突变体对靶向抗原的亲和力和热稳定性，并与母本hu4F11和商业化的抗体药奥马珠单抗比较。
SPR法的测定流程同实施例1，测定结果见图4，从图中解离常数KD值可以看出，hu4F11-12、hu4F11-22、hu4F11-13三个突变株较好的保留了对靶向抗原的亲和力。
DSC的测定流程如下：
将待测抗体以1.0 mg/mL的浓度溶解于pH7.4的磷酸盐缓冲液（每升含氯化钠8.0g，磷酸二氢钾0.2g，十二水合磷酸氢二钠2.9g，氯化钾0.2g）中，以不含有蛋白的相应空白缓冲液作为背景对照，在VP-DSC设备（购自Microcal公司）上样测试，扫描范围为10-120℃，速率100℃/小时，起始阶段在10℃平衡10分钟。以16秒作为过滤周期（FilteringPeriod），采用统计分析软件对测得的曲线进行分析获得Tm值和ΔH值。
DSC的测定结果见图5，从中可以看出，hu4F11-12与Omalizumab及hu4F11的各种突变株相比具有更高的Tm值和ΔH值，具有更好的热稳定性。
实施例5 制剂的稳定性比较
将CHO细胞表达的hu4F11-12抗体经纯化和无菌处理后浓缩至10 mg/mL，每1.36 μmol抗体中按比例添加L-组氨酸1.8 mg、L-组氨酸盐酸盐一水化物2.8 mg、聚山梨醇20 0.5mg、蔗糖145.5 mg，制备成冻干粉剂，装于无菌玻璃药瓶中密封，分别于4℃、30℃、37℃、50℃储存3个月，然后按1mg/mL的抗体浓度重悬于水中，ELISA测定抗体的效价，ELISA方法如下：
用重组人IgE Fcε2-4蛋白包被96孔板，加入稀释1000倍后的待测抗体样品，反应1小时，再加入辣根过氧化酶标记的抗人IgG抗体，反应1小时，加入TMB底物进行显色反应，酶标仪读取OD值，每个样品做2个重复孔，取平均值。
以储存于4℃的样品测定值为基准，计算抗体效价的下降幅度（百分比），并以经同样处理的奥马珠单抗为参比品进行对比，结果见图6，从中可以看出，hu4F11-12比奥马珠单抗在30℃～50℃有更好的稳定性。
实施例6 hu4F11-12抑制IgE与细胞表面FcεRI结合导致脱颗粒的功能学试验
按照文献Application of Human FcεRI α-Chain-Transfected RBL-2H3 Cellsfor Estimation of Active Serum IgE（K Takagi, R Nakamura, R Teshima, et al.Biological & Pharmaceutical Bulletin, 2003, 26(2):252-255）的方法制作稳定转染人FcεRI的大鼠嗜碱性粒细胞（ATCC编号CRL2256），在细胞膜表面表达FcεRI，记作CRL2256-FcεRI。
将对数生长期的CRL2256-FcεRI细胞用胰蛋白酶消化、计数，PBS洗涤后，用培养液将细胞密度调至1×10^5/mL，接种入24孔细胞培养板，1mL/孔；
用完全培养液将人IgE抗体（由ATCC CRL-8033细胞系分泌表达并通过亲和层析纯化获得）稀释至100 μg/ml，将hu4F11-12抗体和对照品Omalizumab分别稀释至1.0 mg/ml、5.0 mg/ml，并将IgE与hu4F11-12抗体、IgE与Omalizumab分别等体积混合；
用完全培养液将IgE稀释至50 μg/ml，以之为稀释液，3倍比序列稀释上一步制得的混合液，各5 个浓度梯度 ；
将hu4F11-12抗体系列稀释液、Omalizumab系列稀释液分别加入24孔细胞培养板的不同孔中，1ml/孔，加入50μg/ml的IgE作为最强释放对照，加入1ml培养液作为最弱释放对照，各样品均设置复孔 ；
将24孔细胞培养板置 37℃，5％CO2培养箱中培养24小时；用无血清培养液将抗人IgE 多抗（购自晶美生物公司）稀释至10μg/ml 备用；将24孔细胞培养板上清吸弃，加入上步骤的抗人IgE多抗，2ml/孔，置37℃、5％CO 2培养箱中培养20分钟；取每孔上清检测组织胺浓度，检测结果见图7（hu4F11-12）、图8（Omalizumab），通过图中数据可得出hu4F11-12具有抑制脱颗粒的效果，并且在该实验条件下的半抑制浓度（IC50）约为0.49μg/mL，远低于Omalizumab，预期具有更小的有效使用剂量。
SEQUENCE LISTING
<110> 上海张江生物技术有限公司
<120> 一种人源化抗IgE单克隆抗体
<130>
<160> 30
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> hu4F11-12轻链CDR1
<400> 1
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<213> Artificial
<220>
<223> hu4F11-12轻链CDR2
<400> 2
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<213> Artificial
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<213> Artificial
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<223> hu4F11-12重链CDR2
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<213> Artificial
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Gly Leu Leu Asn Tyr Arg Tyr Asp Ala Gly Asp Tyr
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<210> 7
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> hu4F11-12轻链可变区
<400> 7
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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<212> PRT
<213> Artificial
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<223> hu4F11-12重链可变区
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Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ala Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Thr Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Leu Leu Asn Tyr Arg Tyr Asp Ala Gly Asp Tyr Trp Gly Gln
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> hu4F11-12轻链可变区DNA
<400> 9
cagatcgtgc tgacccagtc cccctcctcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccgcctcctc ctccgtgtcc tacatccact ggtaccagca gaagcccggc 120
accgccccca agcggtggat ctacgacacc tccaagctgg cctccggcgt gccctcccgg 180
ttctccggct ccggctccgg caccgactac accctgacca tctcctccct gcagcccgag 240
gacttcgcca cctactactg ccagcagtgg tcctccaacc cccccacctt cggccagggc 300
accaaggtgg agatcaagcg g 321
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<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> hu4F11-12重链可变区DNA
<400> 10
gaggtgcagc tggtggagtc cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggctc cctgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggctt caccttctcc tcctacgcca tggcctggat ccggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggcctcc atcaccaccg gcggcatcac ctactacccc 180
gactccgtga agggccggtt caccatctcc cgggacaact ccaagaacac cctgtacctg 240
cagatgaact ccctgcgggc cgaggacacc gccgtgtact actgctcccg gggcctgctg 300
aactaccggt acgacgccgg cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctcc 360
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<211> 213
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> hu4F11-12轻链
<400> 11
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 12
<211> 450
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> hu4F11-12重链
<400> 12
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ala Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Thr Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Leu Leu Asn Tyr Arg Tyr Asp Ala Gly Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 13
<211> 639
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> hu4F11-12轻链DNA
<400> 13
cagatcgtgc tgacccagtc cccctcctcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgggtgacc 60
atcacctgct ccgcctcctc ctccgtgtcc tacatccact ggtaccagca gaagcccggc 120
accgccccca agcggtggat ctacgacacc tccaagctgg cctccggcgt gccctcccgg 180
ttctccggct ccggctccgg caccgactac accctgacca tctcctccct gcagcccgag 240
gacttcgcca cctactactg ccagcagtgg tcctccaacc cccccacctt cggccagggc 300
accaaggtgg agatcaagcg gaccgtggcc gccccctccg tgttcatctt ccccccctcc 360
gacgagcagc tgaagtccgg caccgcctcc gtggtgtgcc tgctgaacaa cttctacccc 420
cgggaggcca aggtgcagtg gaaggtggac aacgccctgc agtccggcaa ctcccaggag 480
tccgtgaccg agcaggactc caaggactcc acctactccc tgtcctccac cctgaccctg 540
tccaaggccg actacgagaa gcacaaggtg tacgcctgcg aggtgaccca ccagggcctg 600
tcctcccccg tgaccaagtc cttcaaccgg ggcgagtgc 639
<210> 14
<211> 1350
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> hu4F11-12重链DNA
<400> 14
gaggtgcagc tggtggagtc cggcggcggc ctggtgcagc ccggcggctc cctgcggctg 60
tcctgcgccg cctccggctt caccttctcc tcctacgcca tggcctggat ccggcaggcc 120
cccggcaagg gcctggagtg ggtggcctcc atcaccaccg gcggcatcac ctactacccc 180
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cagatgaact ccctgcgggc cgaggacacc gccgtgtact actgctcccg gggcctgctg 300
aactaccggt acgacgccgg cgactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgtcctcc 360
gcctccacca agggcccctc cgtgttcccc ctggccccct cctccaagtc cacctccggc 420
ggcaccgccg ccctgggctg cctggtgaag gactacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480
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ggcctgtact ccctgtcctc cgtggtgacc gtgccctcct cctccctggg cacccagacc 600
tacatctgca acgtgaacca caagccctcc aacaccaagg tggacaagaa ggtggagccc 660
aagtcctgcg acaagaccca cacctgcccc ccctgccccg cccccgagct gctgggcggc 720
ccctccgtgt tcctgttccc ccccaagccc aaggacaccc tgatgatctc ccggaccccc 780
gaggtgacct gcgtggtggt ggacgtgtcc cacgaggacc ccgaggtgaa gttcaactgg 840
tacgtggacg gcgtggaggt gcacaacgcc aagaccaagc cccgggagga gcagtacaac 900
tccacctacc gggtggtgtc cgtgctgacc gtgctgcacc aggactggct gaacggcaag 960
gagtacaagt gcaaggtgtc caacaaggcc ctgcccgccc ccatcgagaa gaccatctcc 1020
aaggccaagg gccagccccg ggagccccag gtgtacaccc tgcccccctc ccgggacgag 1080
ctgaccaaga accaggtgtc cctgacctgc ctggtgaagg gcttctaccc ctccgacatc 1140
gccgtggagt gggagtccaa cggccagccc gagaacaact acaagaccac cccccccgtg 1200
ctggactccg acggctcctt cttcctgtac tccaagctga ccgtggacaa gtcccggtgg 1260
cagcagggca acgtgttctc ctgctccgtg atgcacgagg ccctgcacaa ccactacacc 1320
cagaagtccc tgtccctgtc ccccggcaag 1350
<210> 15
<211> 107
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 15
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Thr Ile Met Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Ser Met Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Thr Ser Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Met Ser Gly Val Pro Ala Arg Val Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Ser Met Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Asn Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg
100 105
<210> 16
<211> 120
<212> PRT
<213> Mus musculus
<400> 16
Glu Val Arg Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Met Trp Ile Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Thr Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Asp
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Asn Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Leu Leu Asn Tyr Arg Tyr Asp Met Gly Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Pro Leu Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 17
<211> 112
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Val Ile Ser Gly Asp Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
<210> 18
<211> 108
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Leu Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 19
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> CDR移植抗体轻链可变区
<400> 19
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Met Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Met Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Asn Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 20
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> CDR移植抗体重链可变区
<400> 20
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Met Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ile Thr Thr Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Asp Gly
50 55 60
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
65 70 75 80
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95
Gly Leu Leu Asn Tyr Arg Tyr Asp Met Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 21
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> 人源化抗体hu4F11轻链可变区
<400> 21
Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Met Ser Ser Ser Val Ser Tyr Ile
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Thr Ala Pro Lys Arg Trp Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Met Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Asn Gln Trp Ser Ser Asn Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 22
<211> 120
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> 人源化抗体hu4F11重链可变区
<400> 22
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ala Met Met Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Thr Thr Gly Gly Ile Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Asp
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser
85 90 95
Arg Gly Leu Leu Asn Tyr Arg Tyr Asp Met Gly Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 23
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> 人源化抗体轻链恒定区
<400> 23
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
35 40 45
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
85 90 95
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 24
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial
<220>
<223> 人源化抗体重链恒定区
<400> 24
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 25
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 重链GSP1引物
<400> 25
gtagaggtca gactgcagga c 21
<210> 26
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 重链GSP2引物
<400> 26
ctcagggaaa tagcccttga c 21
<210> 27
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 重链GSP3引物
<400> 27
agatccaggg gccagtggat agac 24
<210> 28
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 轻链GSP1引物
<400> 28
ttgctgtcct gatcagtcca act 23
<210> 29
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 轻链GSP2引物
<400> 29
tgtcgttcac tgccatcaat ctt 23
<210> 30
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial
<220>
<223> 轻链GSP3引物
<400> 30
ttgttcaaga agcacacgac tga 23

Claims (7)

1.一种人源化抗IgE单克隆抗体，其特征在于，轻链的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列，重链的互补决定区CDR1、CDR2、CDR3的氨基酸序列为SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
2.权利要求1所述的人源化抗IgE单克隆抗体，其特征在于，轻链、重链的可变区具有SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8的氨基酸序列。
3.权利要求2所述的人源化抗IgE单克隆抗体，其特征在于，重链恒定区为IgG1亚型。
4.权利要求3所述的人源化抗IgE单克隆抗体，其特征在于，轻链、重链分别具有SEQ IDNO:11、SEQ ID NO:12的氨基酸序列。
5.权利要求1-4中任一项所述的人源化抗IgE单克隆抗体在制备IgE所引起的过敏性疾病治疗药物中的用途。
6.权利要求5所述的用途，所述的过敏性疾病是过敏性哮喘或荨麻疹。
7.权利要求1-4中任一项所述的人源化抗IgE单克隆抗体在制备IgE检测试剂盒中的用途。
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