TW200904470A - Anti-IgE antibodies - Google Patents

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TW200904470A
TW200904470A TW097111898A TW97111898A TW200904470A TW 200904470 A TW200904470 A TW 200904470A TW 097111898 A TW097111898 A TW 097111898A TW 97111898 A TW97111898 A TW 97111898A TW 200904470 A TW200904470 A TW 200904470A
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Wai Liu
Mike Yeadon
Mendez Isabelle De
Alison Logan
Gerald F Casperson
Arvind Rajpal
Mark A Moffat
Wei Liao
Caroline Brown
Nurten Beyaz-Kavuncu
Judith Diaz-Collier
Sirid-Aimee Kellermann
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Pfizer
Amgen Fremont Inc
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Description

200904470 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於特定地針對人類免疫球蛋白e之新穎人類 抗體（抗-IgE)。本發明之抗體特別適於治療哮喘，尤其過 敏性哮喘’以及包括過敏性鼻炎及食物過敏症之其他邮 介導之病症。 【先前技術】 f 哮喘為導致易感染個體中喘鳴、呼吸急促、胸悶及/或 咳漱之重現性急性發作的慢性氣管發炎性病症。熟習此項 技術者區別多種類型之哮喘，包括：過敏性哮喘，據信其 出現在顯現對環境過敏原之過敏性的患者中；藥物誘發I 哮喘’其通常由對阿司匹靈（aspirin)或其他⑺乂抑制劑之 敏感性觸發；運動誘發之哮喘；瀕死性及超急性哮喘；夜 間哮喘；職業性哮喘，通常由暴露於工作場所中之某些化 學品所引起。因此，哮喘可由各種刺激物觸發，該等刺激 物包括：空中傳播之過敏原，諸如塵蟎、花粉、動物皮 屑、真菌孢子、羽毛...（外因性哮喘）；非特定刺激物，諸 如菸草煙霧、化學煙霧、污染物、二氧化硫.··（内因性哮 喘）。 已展示免疫球蛋白E(IgE)涉及過敏性反應，尤其涉及過 敏性哮喘。最近，一種單株抗體（奥馬佐單抗 (omalizumab)，亦稱為E25,以商標X〇iair(g)銷售；presta等 人，J /m·⑽/· 1993 年 9月 1 日；151(5):2623_32 )獲得全球 數個機構之批准。儘管展示抵抗嚴重哮喘之功效，但此抗 129694.doc 200904470 體仍具有一班#缺li j. ~ 。百先，此為人源化鼠類單株抗體，且 因而不完全排除人類，串、者中夕& c & 貝〜有〒之免疫反應，因此可能引起一 :安王問冑#_欠，用於治療嚴重哮喘之奥馬佐單抗之劑 量基於體重與循環游離IgE之量。不推薦體重及循環游離 I g E偏離特定範圍之*去/由 固之心者使用此治療。可治療之彼等患者
可能需要每兩週一-分垃為少L *人接文多t次皮下注射。此嚴重地影 響治療成本以及患者之生活品質。
:需要提仏將在人類患者中使用鼠類抗體的任何問題減到 最少的完全人類抗·IgE單株抗體。另彳，需要提供更有效 之抗-IgE單株抗體。增加之效能通t產生以下益處：達成 臨床益處所需要之劑量降低，所需注射體積降低（對於皮 下投藥），治療成本降低，治療成功機會增加，治療方案 中之投藥頻率減少’因此為包括具有較高體重及/或高循 環IgE量之患者的更廣泛患者群體提供治療享用權，及改 良患者之生活品質。 【發明内容】 本發明係關於針對人類1§丑之人類抗體（本文中有時稱作 抗-IgE抗體）或其抗原結合部分。 在另一實施例中，針對人類IgE之抗_IgE抗體或其部分 具有如藉由在使用經人類FcsRl轉染之rBL_2H3細胞株之 細胞結合檢定中其降低IgE結合之能力所量測之〇 5 ^/mL 或以下之IC5〇值。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分具有如藉由其抑 制經人類FcsRl轉染之RBL-2H3細胞株之IgE介導之脫粒之 129694.doc 200904470 月匕力所量測之〇5 pg/mL或以下之IC5〇值，其中將RBL-2H3 (FCeRl)細胞與抗-IgE抗體及人類IgE 一起培養48小時，將 其經洗滌以移除抗_IgE:IgE複合物，留下與FceR1結合之 IgE，隨後以多株抗_IgE抗體刺激’該多株抗_IgE抗體交聯 經結合之IgE，產生igE介導之脫粒。在另一實施例中，該 IC5〇值小於 〇.2 pg/mL，小於 0.1 pg/mL ’ 小於〇·〇8 pg/mL 或 小於 0.02 pg/mL。 在另一實施例中，針對人類IgE之抗體或其抗原結合部 分不交聯受體結合之IgE且不刺激與人類IgE —起培養48小 時隨後經洗滌以移除未結合之IgE的RBL-2H3(FcsRl)細胞 之IgE依賴性脫粒。本發明針對人類igE之抗體或其抗原結 合部分不具有關於經分離RBL-2H3(FceRl)之促效活性。 在另一實施例中，針對人類IgE之抗體或其抗原結合部 分不交聯受體結合之IgE且不刺激與人類IgE —起培養隔夜 之人類血液嗜驗性細胞之IgE依賴性脫粒。本發明針對人 類IgE之抗體或其抗原結合部分不具有關於經分離人類血 液嗜驗性細胞之促效活性。 在另一實施例中，針對人類IgE之抗體或其抗原結合部 分對於IgE具有超過對人類IgA、IgGl及IgG3之選擇性的高 度選擇性。 在另一實施例中，抗體或其抗原結合部分以如藉由表面 電漿共振（BIAcore)所量測之15 nM或以下之親和常數KD與 全長人類IgE結合。在另一實施例中，如藉由表面電漿共 振所量測’ Κ〇值小於1 0 nM，小於5 nM或小於3 nM。在某 I29694.doc -10- 200904470 在其他實施例中，KD ’ KD值為1 pM至300 些實施例中，為1 PM至10〇 ηΜ, 為1 PM至5 nM。在其他實施例中 pM ’或1 PM至200 pM，或小於16〇 pM。在另一實施例 中1 ’抗體或其部分具有如藉由表面電漿共振量測之“〖Ο4 s 1或以下之對於人類IgE之離解速率（k〇ff)。例如，在某些 實施例中，抗體或部分具有小於丨5χ1〇·4 一、小於扒⑺ S-、小於5X10-5 s-丨或小於25><1〇-5 s-,之對於人類igE之 kOff。在另一實施例中，抗體或其部分具有大於ΐχΐ〇4 M_, s·1、大於 2χ104 Μ.1 s-丨、大於 3x104 M-i s-i、大於 1χ1〇5 M-1 s_1或大於1_5χ105 M·1 s·1之對於人類IgE之締合速率（ka)。 e亥專K值可藉由熟習此項技術者已知之任何技術量測， 諸如藉由ELISA、RIA、流式細胞計數法或表面電漿共 振，諸如BIACORE(TM)量測。 在另一實施例中，針對人類IgE之抗體或其抗原結合部 分與獼猴IgE交叉反應。
在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分與選自由以下抗 體組成之群之抗體競爭以便與人類IgE結合：重組 5.396.1 ; 5.396.1 Hc-S103N Lc-K61R ;重組 6.605.1 ; 6.605.1(H3Q、M13K、D82E-T25A、T53S);重組 5.948.1 及 5.948.1 1^00丫。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分與選自由以下抗 體組成之群之抗體所結合的人類1gE之抗原決定基相同的 人類IgE之抗原決定基結合：重組5.396.1 ; 5.396.1 Hc-S103N Lc-K61R ;重組 6.605.1 ; 6.605.1(H3Q、M13K、 I29694.doc 200904470 D82E-T25A、T53S);4&5.948.1& 5.948.1 H100Y。 在一態樣中’本發明提供針對人類][gE之人類抗體或其 抗原結合部分’其中該抗體具有約〇1_3〇叫/〇^之1(：25⑽机 (100-5000 ng/mL)’ 其中該ic25 ng/mL(l〇〇-5000 ng/mL)定義 為將血清樣本中之游離IgE濃度自約100-5000 ng/mL範圍 内之初始濃度降低至約25 ng/ml之濃度所需之抗體的活體 外濃度。 在另一態樣中’本發明提供針對人類IgE之人類抗體或 其抗原結合部分，其中該抗體具有約丨_25 Mg/mL之IC25ng/mIj (500-1500 ng/mL)，其中該IC25 ng/mL(500-1500 ng/mL)定義 為將血清樣本中之游離IgE濃度自約5〇〇_15〇〇 ng/mL範圍 内之初始濃度降低至約25 ng/ml之濃度所需之抗體的活體 外濃度。 在一實施例中’抗-IgE抗體或其部分包含具有選自由 SEQ ID NO: 10、30、50、70、90及13 0組成之群之序列的 H-CDR3 〇 在一實施例中，抗-IgE抗體或其部分包含具有選自由 SEQ ID NO: 20、40、60、80、1〇〇及 140組成之群之序列 的 L-CDR3 〇 在—實施例中，抗-IgE抗體或部分係選自由以下各抗體 組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 10之序列之H-CDR3及具有SEQ ID NO: 20之序列之LCDR3的抗體；
-包含具有SEQ ID NO: 30之序列之H — CDR3及具有SEQ 129694.doc 12 200904470 ID N〇：40之序列之LCDR3的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 50之序列之H-CDR3及具有SEQ ID NO: 60之序列之LCDR3的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 70之序列之H-CDR3及具有SEQ ID NO: 80之序列之LCDR3的抗體；及 - 包含具有SEQ ID NO: 90之序列之H-CDR3及具有SEQ ID NO: 100之序列之LCDR3的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 130之序列之H-CDR3及具有 SEQ ID NO: 140之序列之LCDR3的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或部分係選自由以下各抗 體組成之群： - 包含分別具有SEQ ID NO: 6、8、10之序列之H-CDR (H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 26、28、30之序列之1^ CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合的抗 體； -包含分別具有SEQ ID NO: 46、48、50之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合的抗 體； -包含分別具有SEQ ID NO: 66、68、70之序列之！^-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合的抗 體； -包含分別具有SEQ ID NO: 86、88、90之序列之H- 129694.doc 13 200904470 CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 Η-CDR集合的抗 體；及 - 包含分別具有SEQ ID NO: 126、128、130之序列之^ CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 Η-CDR集合的抗 體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： - 包含分別具有SEQ ID NO: 16、18、20之序列之1^-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 36、38、40之序列之！^-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 56、58、60之序列之乙-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 76、78、80之序列之1^-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 96、98、100之序列之1^-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體；及 - 包含分別具有SEQ ID NO: 136、138、140之序列之[-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 129694.doc -14- 200904470 體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： - 包含分別具有SEQ ID NO: 6、8、10之序列之H-CDR (H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合及分別 具有SEQ ID NO: 16、18、20之序列之1^匚0尺([-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 26、28、30之序列之！·!-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合及分 別具有 SEQ ID NO: 36、38、40之序列之[-0〇11(1^ CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 46、48、50之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合及分 別具有SEQ ID NO: 56、58、60之序列之1^匚011(1^ CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 56、58、60之序列之！^-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之H-CDR集合及分 別具有SEQ ID NO: 66、68、70之序列之[-匚011(1^ CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 66、68、70之序列之士 CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合及分 別具有 SEQ ID NO: 76、78、80之序列之1^0〇11(1^ CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 86、88、90之序列之H- 129694.doc 15 200904470 CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 Η-CDR 集合及分 別具有 SEQ ID NO: 96、98、100之序列之[-〇011([-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體；及 - 包含分別具有SEQ ID NO: 126、128、130之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 Η-CDR集合及分 別具有 SEQ ID NO: 136、138、140之序列之[-匚011([-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 4之序列之H-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 24之序列之H-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 44之序列之H-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 64之序列之H-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 84之序列之H-可變域的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 124之序列之H-可變域的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群· -包含具有SEQ ID NO: 14之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 34之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 54之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 74之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 94之序列之L-可變域的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 134之序列之L-可變域的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 129694.doc -16- 200904470 抗體組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 4之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 14之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 24之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 14之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 24之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 34之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 4之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 34之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 44之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 54之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 64之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 5 4之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 44之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 74之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 64之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 74之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 84之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 94之序列之L-可變域的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 124之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 94之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 84之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 134之序列之L-可變域的抗體；及 - 包含具有SEQ ID NO: 124之序列之H-可變域及具有 129694.doc -17- 200904470 SEQ ID NO: 134之序列之L-可變域的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 2之序列之H-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 22之序列之H-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 42之序列之H-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 62之序列之H-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 82之序列之H-鏈的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 122之序列之H-鏈的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 12之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 32之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 52之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 72之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 92之序列之L-鏈的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 132之序列之L-鏈的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： -包含具有SEQ ID N〇：2之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 12之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 22之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 12之序列之L-鏈的抗體；
-包含具有SEQ ID NO: 22之序列之H-鏈及具有SEQ ID 129694.doc -18- 200904470 NO: 32之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 2之序列之Η-鏈及具有SEQ ID Ν 0: 3 2之序列之L -鍵的抗體， -包含具有SEQ ID NO: 42之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 52之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 62之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 52之序列之L-鏈的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 62之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 72之序列之L-鏈的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 42之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 72之序列之L-鏈的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 82之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 92之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 82之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 132之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 122之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 92之序列之L-鏈的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 122之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 132之序列之L-鏈的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： - 包含由SEQ ID NO: 1之核酸序列編碼之H-鏈序列及由 SEQ ID NO: 11之核酸序列編碼之L-鏈序列的抗體； - 包含由SEQ ID NO: 21之核酸序列編碼之H-鏈序列及 129694.doc 19 200904470 由SEQ ID NO: 3 1之核酸序列編碼之L-鏈序列的抗 體； -包含由SEQ ID NO: 41之核酸序列編碼之鏈序列及 由SEQ ID NO: 5 1之核酸序列編碼之L-鏈序列的抗 體； -包含由SEQ ID NO: 61之核酸序列編碼之H—鏈序列及 由SEQ ID NO: 7 1之核酸序列編碼之l-鏈序列的抗 體； -包含由SEQ ID NO: 81之核酸序列編碼之^鏈序列及 由SEQ ID NO: 9 1之核酸序列編碼之l-鏈序列的抗 體；及 -包含由SEQ ID NO: 1 2 1之核酸序列編碼之^鏈序列及 由SEQ ID NO: 131之核酸序列編碼之L·鏈序列的抗 體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分（在該部分包含重 鏈恆定區之至少一部分的範圍内）具有IgG1或IgG2亞型。 在另一惑樣中，本發明提供如上所述之抗體或部分之變 異體，其中該變異體與該抗體或部分之不同之處在於 2 3 4、5、6、7、8、9或10處胺基酸取代。 在另恶樣中，本發明提供編碼如上所述之抗體或部分 之一鏈的核酸序列。 在另態樣中，本發明提供包含編碼如上所述之抗體或 部分之一鏈的核酸序列的載體。 在另態樣中’本發明提供適合於表現如上所述之抗體 I29694.doc -20- 200904470 或部分之一鏈的載體。 在另心樣中，本發明提供表現如上所述之抗體或部分 之一鏈的細胞。 在另-態樣中，本發明提供製造如上所述之抗體或部分 之方法，纟包含培養如上所述之細胞及回收該抗體或其部 分。 在一態樣中，抗體或其部分係用作藥物。 在另悲樣中，抗體或其部分係用於治療選自由哮喘、 過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症組成之群的igE介 導之病症。 在-態樣中，本發明提供包含如上所述之抗體或其部分 的醫藥組合物。 在一實施例中，該醫藥組合物係用於治療選自由哮喘、 過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症組成之群的igE介 導之病症。 在另&樣中，本發明提供治療有需要之個體之選自由 哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症組成之群之
IgE介導之病症的方法’其包含向該個體投與治療有效量 之如上所述之抗體或其部分。 在另一態樣中，本發明提供如上所述之抗體或其部分在 製造用於治療選自由哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食 物過敏症組成之群的IgE介導之病症之藥物中的用^。 在一態樣中，本發明提供選自由以下各序列組成之群之 核酸序列·· SEQ m i、3、u、13、21、23、31、 129694.doc -21 - 200904470 33、41、43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、 93、1(H、i〇3、i〇5、旧、l〇9、111、121、123、131 及 133 〇 在一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中該 抗體係選自由以下各抗體組成之群： 包含具有SEQ ID NO: 4之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 14之序列之L-可變域的抗體； 包含具有SEQ ID NO: 24之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 34之序列之L-可變域的抗體； 包含具有SEQ ID NO: 44之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 54之序列之L-可變域的抗體； 包含具有SEQ ID NO: 64之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 74之序列之L-可變域的抗體；及 包含具有SEQ ID NO: 84之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 94之序列之L-可變域的抗體；及 包含具有SEQ ID NO: 124之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 134之序列之L-可變域的抗體。 在一態樣中’本發明提供針對人類IgE之抗體，其中該 抗體包含具有SEQ ID NO: 2之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 12之序列之L-鏈。 在另一態樣中’本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含具有SEQ ID NO: 22之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 32之序列之L-鏈。 在另一悲樣中’本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 129694.doc -22- 200904470 該抗體包含具有SEQ ID NO: 42之序列之Η-鏈及具有SEQ ID NO: 52之序列之L-鏈。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含具有SEQ ID NO: 62之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 72之序列之L-鏈。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含具有SEQ ID NO: 82之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 92之序列之L-鏈。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含具有SEQ ID NO: 122之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 132之序列之L-鏈。 在一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中該 抗體包含由ATCC寄存物PTA-7977之嵌入物編碼之H-鏈及 由ATCC寄存物PTA-7982之嵌入物編碼之L-鏈；其中該等 寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定（Budapest Treaty)寄存於美國菌種保存中心（ATCC)，P. 0· Box 1549, Manassas, VA 20108，USA。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含由ATCC寄存物PTA-7981之嵌入物編碼之H-鏈 及由ATCC寄存物PTA-7980之嵌入物編碼之L-鏈；其中該 等寄存物於2006年11月7曰根據布達佩斯協定寄存於美國 菌種保存中心（ATCC)，Ρ· Ο. Box 1549，Manassas, VA 20108, USA。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 129694.doc -23 - 200904470 該抗體包含由ATCC寄存物PTA-7985之嵌入物編碼之Η-鏈 及由ATCC寄存物ΡΤΑ-7984之嵌入物編碼之L-鏈；其中該 等寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定寄存於美國 菌種保存中心（ATCC)，Ρ. 0. Box 1549，Manassas，VA 20108, USA。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含由ATCC寄存物PTA-7983之嵌入物編碼之H-鏈 及由ATCC寄存物PTA-7978之嵌入物編碼之L-鏈；其中該 / 等寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定寄存於美國 菌種保存中心（ATCC)，Ρ· Ο. Box 1549，Manassas，VA 20108, USA。
在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含由ATCC寄存物PTA-7979之嵌入物編碼之H-鏈 及由ATCC寄存物PTA-7986之嵌入物編碼之L-鏈；其中該 等寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定寄存於美國 菌種保存中心（ATCC)，P. 0. Box 1549，Manassas，VA ( 20108, USA。 在一態樣中，本發明之以上抗體係用作藥物。 在另一態樣中，本發明之以上抗體係用於治療選自由哮 喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症組成之群的 IgE介導之病症。 在一態樣中，本發明提供包含如上所述之抗體的醫藥組 合物。 在另一態樣中，該醫藥組合物係用於治療選自由哮喘、 129694.doc -24- 200904470 過敏！·生哮@過敏性鼻炎及食物過敏症組成之群的邮介 導之病症。 在〜、樣中本發明提供治療有需要之個體之選自由哮 喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症組成之群之
IgE ’丨導之病症的方法’其包含向該個體投與治療有效量 之如上所述之抗體。 在另〜、樣中，本發明提供如上所述之抗體在製造用於 广治療選自由哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症 ' 組成之群的1姊介導之病症之藥物中的用途。 【實施方式】 定義及一般技術 除非本文中另作定義，否則與本發明關聯使用之科學及 技術術語將具有一般熟習此項技術者通常瞭解之含義。另 外，除非上下文另外需要，否則單數術語包括複數且複數 術語包括單數。通常，與本文中描述之細胞及組織培養、 ( 刀子生物學、免疫學、微生物學、遺傳學及蛋白質及核酸 化學及雜交關聯使用之命名法及其技術為彼等在此項技術 中熟知且通常使用者。 除非另有所述，否則本發明之方法及技術通常根據在此 項技術中熟知且如在整個本發明之說明書中引用及討論之 各種一般及更特定之參考文獻中所述之習知方法執行◊參 見，例如 Sambrook J· & Russell D·鳩c/.j M/，茗 3 版，c〇ld Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2000)； Ausubel 129694.doc •25- 200904470 等人 ’ Short Protocols in Molecular Biology: A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology, Wiley, John & Sons, Inc. (2002); Harlow 及 Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual,
Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1998)，及 Coligan 等人，/Voieh •Science，Wiley, John & Sons, Inc. (2003)。如在此項技術中 通常實現或如本文中描述之酶促反應及純化技術根據製造 商之說明書來執行。與本文中描述之分析化學、合成有機 化學及醫學及製藥化學關聯使用之命名法及其實驗室程序 及技術為彼等在此項技術中熟知且通常使用者。 在整個本說明書及申請專利範圍中，字組”包含，，理解為 暗示包括所陳述之整數或整數群，但不排除任何其他整數 或整數群。 抗體相關定義 如本文中所用，術語"生殖系"係指經由生殖細胞自親本 傳至子代之抗體基因及基因區段之核苷酸序列及胺基酸序 列。此生殖系序列不同於在成熟B細胞中編碼抗體之核苷 酸序列，其已在B細胞成熟之過程中藉由重組及超突變事 件而改變。”利用”特定生殖系之抗體具有與彼生殖系核苷 酸序列或與其確定之胺基酸序列最密切地對準之核苷酸或 胺基酸序列。該等抗體與生殖系序列相比常常突變。 如本文中所用，術語”ELISA”係指酶聯免疫吸附檢定。 此檢定為熟習此項技術者熟知。此檢定之實例可見於 129694.doc -26- 200904470
Vaughan, T.J.等人 ’ 14:309-3 14(1996)以及 本申請案之實例中。 如本文中所用，術語”表面電漿共振”係指允許藉由例如 使用 BIAcore 糸統（Pharmacia Biosensor AB，Uppsala, Sweden and Piscataway，N.J.)偵測生物感應器基質内之蛋 白貝》辰度之變化來分析即時生物特異性相互作用的光學現 象。關於其他描述，參見jonsson等人，如w別0/ 乂 f 51:19-26 (1993); J〇nsson等人’心⑽—·11:62〇_627 (1991) ，Jonsson 等人，乂从 0/ 8:125131 (1995) ’ 及 Johnsson 等人，价如办緣 i98:268 277 (1991)。 術語"親和力"係指抗原與抗體之間之吸引力之度量。抗 體對於抗原之固有吸引力通常表現為特定抗體·抗原相互 作用之結合親和平衡常數（Kd)。在Kd $ ! mM、較佳$ 1〇〇 nM時，據稱抗體特異性地結合抗原。如在以下實例中討 論，KD結合親和常數可例如使用BlAc〇reTM系統藉由表面 電漿共振來量測。 術^ kcff係扣特定抗體_抗原相互作用之離解速率常 數如在乂下實例中討論，k〇ff離解速率常數可例如使用 ΒΙΑ_™系統藉由表面電漿共振來量測。 術語"抗原決定基”包括能夠與免疫球蛋白或T細胞受體 特異性結合或以其他方式與分子相互作用之任何蛋白質決 疋子。抗原決定基決定子通常由諸如胺基酸或碳水化合物 或糖側鏈之化學活性表面分子群組成且通常具有特定三維 129694.doc -27· 200904470 結構特性収荷質比特性。抗原決定基可為"線性"或"構 形的。在線性抗原決定基中，蛋白質與相互作用分子⑽ 如抗體）之間之所有相互作用點沿蛋白質之主要胺基酸序 :線性出'見。在構形抗原決定基中’相互作用點遍及蛋白 :亡之彼此分離之胺基酸殘基出現。—旦確定抗原上之所 需抗原決定基，可例如使用在本發明中描述之技術產生彼 抗原決定基之抗體。或者，在發現過程期間，抗體之產生 及表徵可闡明有關合意抗原決定基之f訊。由此資訊，隨 後可競爭地筛選與相同抗原決定基結合之抗體。達成此之 f
方法為進行競爭研究以發現彼此競爭地結合之抗體、亦即 競爭以與抗原結合之抗體。 可藉由使用在此項技術中已知之方法判定抗體是否與相 同抗原決定基結合或與抗_IgE抗體交又競爭以結合。在一 實施例中，允許本發明之抗-IgE抗體在飽和條件下與igE 結合且隨後量測測試抗體與IgE結合之能力。若測試抗體 能夠與參考抗_IgE抗體同時與IgE結合，則測試抗體與參 考抗-IgE抗體所結合之抗原決定基不同的抗原決定基結 合。然而’若測試抗體不能同時與IgE結合，則測試抗體 與相同抗原決定基、重疊抗原決定基或緊密鄰近於本發明 之抗- IgE抗體所結合抗原決定基的抗原決定基結合。此實 驗可使用ELISA、RIA、BIACORETM或流式細胞計數法執 行。為測試抗-IgE抗體是否與另一抗-IgE抗體交叉競爭， 可在兩個方向中使用如上所述之競爭方法，亦即判定已知 抗體是否阻斷測試抗體且反之亦然。在—較佳實施例中， 129694.doc -28- 200904470 實驗使用BIACORETM執行。 基於父叉Λ兄等之區域化"彳几體之南產量方法描述於國際 性專利申請案第WO 03/4873 1號中。 如本文中所用，術語"區域化，，係指基於抗體之抗原結合 特性將抗體分組之方法。區域化之分配在某種程度上為任 意的，此視所有測試之抗體之所觀察到之結合模式的差異 程度而定。因此，區域化並不總是與用其他方式確定之抗 原決定基有關，且不應用以定義抗原決定基。 本發明之抗-IgE抗體 本發明係關於針對人類IgE之人類抗體或其抗原結合部 分。 除非另作說明，否則如本文中所用之"IgE"係指人類 IgE(人類免疫球蛋白E)。 如本文中所用’術語（完整）”抗體”（Ab)或”免疫球蛋白" (Ig)係指包含由雙硫鍵相互連接之兩個重（H)鏈（約50-70 kDa)及兩個輕（L)鏈（約25 kDa)之四聚體。僅存在兩個類型 之輕鏈：λ及κ。在人類中’其為相似的，但僅一類型存在 於每一抗體中。重鏈分類為μ、δ、γ、α或ε，且分別將抗 體同型定義為IgM、IgD ' IgG、IgA及IgE。一般參見 Fundamental Immunology > 第 7 章（Paul, W.等人，第 2 版 Raven Press, N.Y. (1989)) ° 每一重鏈（本文中有時稱作Η-鏈或He)由重鏈可變域（vH 或Η-可變域）及重鏈恒定區（CH)組成。重鏈恒定區由3個域 (CHI、CH2及CH3)組成。每一輕鏈（本文中有時稱作[_鏈 129694.doc -29< 200904470 或Lc)由輕鏈可變域（Vl或L_可變域）及輕鏈恆定區組成。輕 鏈恆定區由一個域CL組成。在輕鏈及重鏈内，可變及恆定 區由約12個或12個以上胺基酸之"J"區接合，重鏈亦包括 約3個或3個以上胺基酸之"D"區。VH及VL區域可進一步再 分成稱為"互補判定區"（CDR)之高變區，其與稱為”構架區” (FR)之更恆定之區域交替。每一 VH及VL由按以下順序自胺 基末端至羧基末端排列的三個CDR(H-CDR在本文中表示 重鏈之CDR ;且L-CDR在本文中表示輕鏈之CDR)及四個 FR組成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。 每一域之胺基酸之分配根據以下文獻之定義：Kabat， Sequences of Proteins of Immunological Interest (National
Institutes of Health, Bethesda，MD (1987 and 1991))，或
Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Chothia 等人，iVaiwre 342:878-883 (1989)。 每一重/輕鏈對之可變域（VH及VL)形成與抗原相互作用 之抗體結合位點。因此，完整IgG抗體例如具有兩個結合 位點。除在雙功能或雙特異性抗體中之外，兩個結合位點 為相同的。抗體之恆定區可介導免疫球蛋白與宿主組織或 因子之結合，該等宿主組織或因子包括免疫系統之多種細 胞（例如效應細胞）及經典補體系統之第一組份（clq)。 抗體必須具有足夠抗原結合多樣性以辨識每一可能抗原 (許多V區域）’同時保持其C區域（極少C區域）之生物有效 性。Ig基因由允許許多V區域與一些c區域一起使用之基因 區段隨機拼接在一起。編碼Ig Η、K及λ鏈之基因區段見於 129694.doc -30- 200904470 三個不同染色體中。在B細胞發育期間，重組酶自DNA移 除内含子及一些外顯子且將區段拼接成功能Ig基因。 哺乳動物中之Ig基因區段排列於”可變”（v)、”多樣性” (D)、"接合"（J)及"恒定"（C)外顯子群組中。νκ區段各自編 碼尺鏈V區域之開頭兩個CDR及三個fr，外加CDR3之一些 殘基。Jk區段各自編碼CDR3之剩餘部分及第四FR。Ck編 碼κ輕鍵之完全C區域。編碼人類κ鏈之DNA包括約40個功 能Vk區段、五個Jk區段及一個Ck基因區段，以及含有終止 密碼子之一些基因區段（"假基因”）。人類人鏈DNA含有約30 個功能νλ區段及·ίλ區段與CX區段之四個功能集合。與全部 與相同Ck配對之Jk不同，特定从總是與其相應cx配對。人 類Η鏈之DNA包括約50個功能VH區段、30個DH區段及六個 Jh區段。重鏈可變域之開頭兩個CDR及三個FR由VH編碼。 CDR3由VH之一些核苷酸、dh之全部及jH之部分編碼，同 時FR4由JH基因區段之剩餘部分編碼。在dna中亦存在針 對每一重鏈域及每一同型之膜區域的個別基因區段，其以 其由B細胞表現之順序來排列。 在本發明之各種實施例中，抗_IgE抗體之重鏈及輕鏈可 視情況地包括信號序列。亦稱為信號肽或引導肽之術語 ”信號序列”係指蛋白質之N末端處之使得蛋白質能夠被分 泌（傳經細胞膜）之約1 5至30個胺基酸之區段。當分泌蛋白 質時信號序列得以移除。 術語”經分離蛋白"、”經分離多肽"或”經分離抗體”為根 據其衍化起源或來源（1)不與在其原生狀態下伴隨其之天然 129694.doc -31 · 200904470 伴生組份相關聯，（2)不含來自相同物種之其他蛋白質， (3)由來自不同物種之細胞表現，或（4)不出現於自然界中 的蛋白質、多肽或抗體。因此’以化學方式合成或在與其 天然起源之細胞不同的細胞系統中合成的多肽為與其天然 伴生組份"分離"的。亦可藉由使用在此項技術中熟知之蛋 白質純化技術來分離而使得蛋白質大體上不含天然伴生組 份。 經分離抗體之實例包括（但不限於）已使用IgE親和力純化 之抗-IgE抗體及已藉由活體外細胞株合成之抗_IgE抗體。 如本文中所用，術語”人類抗體，'意謂可變及恆定域序列 為人類序列之任何抗體。該術語包涵具有由人類基因衍生 之序列，但其已經改變例如以降低可能免疫原性、增加親 和力、消除可導致不當摺疊之半胱胺酸等的抗體。該術語 亦包涵在非人類細胞中重組產生之該等抗體，其可賦予並 非人類細胞所特有之糖基化。此等抗體可以如下所述之多 種方式製備。特定而言’其可例如自具有人類免疫球蛋白 基因座之非人類動物或完全人類免疫系統獲得。 如本文中所用，術語抗體之”抗原結合部分"（或簡單地 抗體部分”）係指保持與抗原（例如人類IgE，或其部分，包 括 sHc C2-C4(Cs2-Cs4)及 sHc C3-C4(Cs3-Cs4)域）特異性地 結合之能力的抗體之一或多個片段。已展示可由全長抗體 之片#又執行抗體之抗原結合功能。包涵於術語抗體之”抗 原結合部分"内之結合片段的實例包括（i) Fab片段，其為 由vL Vh、cL及cHi域組成之單價片段；（η) F(ab,)2片 129694.doc •32· 200904470 段，其為包含兩個在鉸鏈區上由雙硫橋連接之Fab片段的 二價片段；（iii)由VH及CH1域組成2Fd片段；（iv)由抗體之 單臂之VL及VH域組成之Fv片段；（v)由％域組成之dAb片 段（Ward等人，（1989) Nature 341:544-546);及（vi)經分離 之互補判定區（CDR)。此外，儘管Fv片段之兩個域及 VH)由獨立基因編碼，但其可使用重組方法由合成連接子 接合，該連接子能夠使其製造成其中Vl& Vh區域成對以形 成單價分子之單蛋白鏈（稱為單鏈Fv(scFv));參見，例如
Bird 等人，& —242:423-426(1988)及 Huston 等人， Pn iVa". ί/α 85:5879-5883 (1988))。包含 γΗ 及/或VL之抗原結合分子亦在本發明内，在vH之情況下， 該分子亦可包含CH1、鉸鏈、CH2或CH3區域之一或多 者。该等單鏈抗體亦意欲包涵於術語抗體之”抗原結合部 分"内。亦包涵其他形式之單鏈抗體，諸如雙功能抗體。 雙功能抗體為二價雙特異性抗體，其中\^及火域表現於單 一多肽鏈上’但使用太短而不允許同一鏈上之兩個域之間 配對的連接子’由此迫使該等域與另一鏈之互補域配對且 建置兩個抗原結合位點（參見，例如Holliger等人，pr〇c Natl. Acad. Sci. USA 90:6444-6448 (1993)； Poljak等人， Sirwciwre 2:1121-1123 (1994))。 另外’抗體或其抗原結合部分可為更大免疫黏附分子之 部分，該等分子由抗體或抗體部分與一或多種其他蛋白質 或肽共價或非共價締合來形成。該等免疫黏附分子之實例 包括使用抗生蛋白鏈菌素核心區域以製得四聚scFv分子 129694.doc -33- 200904470 猶4 尺，Human Antib〇dies and Hybrid〇mas 6.93 101 (1995))及使用半胱胺酸殘基、標記肽及c末端聚組胺 酸標誌以製得二價及生物素化之scFv分子（Kipriyan〇v等 人，Mo/· /mm⑽0/· 31:1047-1058 (1994))。其他實例包括 將抗體之一或多個CDR共價或非共價併入分子中以使其成 為與所關注之抗原特異性地結合之免疫黏附素。在該等實 施例令，CDR可為作為更大多肽鏈之部分併入，可與另二 多肽鏈共價連接，或可非共價併入。 諸如Fab及F(ab )2片段之抗體部分可使用習知技術自全 抗體來製備，諸如分別消化全抗體之木瓜蛋白酶或胃蛋白 酶。此外，可使用如本文中描述之標準重組DNA技術獲得 抗體、抗體部分及免疫黏附分子。 在一實施例中，本發明抗體為單株抗體。如本文中所 用，縮寫字”mAb”係指單株抗體，亦即由個別細胞之無性 繁殖系群體合成及分泌之抗體。無性繁殖系群體可為永生 化細胞之無性繁殖系群體。在某些實施例中，無性繁殖系 群體中之永生化細胞為雜交細胞_融合瘤_通常由來自經免 疫動物之個別B淋巴細胞與來自淋巴細胞腫瘤之個別細胞 融合來產生。 如本文中所H編號提及之單株抗料獲自相同編號 之融合瘤的單株抗體（mAb)e例如，單株抗體6胤】獲自 融合瘤6.605.1。 在另-實施例中，本發明之單株抗體為重組抗體（參見 下文）。 129694.doc -34- 200904470 抗- IgE抗體之種類及亞類可由在此項技術中已知之任何 方法確定。通常，抗體之種類及亞類可使用對於特定種類 及亞類之抗體具有特異性之抗體來確定。該等抗體為可購 得的。種類及亞類可由ELISA、西方墨點法以及其他技術 確定。或者，種類及亞類可藉由將抗體之重鏈及/或輕鏈 之恒定域之全部或一部分測序，將其胺基酸序列與各種種 類及亞類之免疫球蛋白之已知胺基酸序列比較及確定抗體 之種類及亞類來確定。 如上所述而獲得之抗_IgE抗體之種類可轉換為另一種 類。在本發明之一態樣中’編碼1或Vh之核酸分子使用在 此項技術中熟知之方法分離以使得其不包括編碼（^或。之 核酸序列。"Antibody Engineering"(Kontermann & Dubel 編，Springer-Verlag，Berlin (2001))。編碼 VL 或 VH之核酸 分子隨後分別與編碼來自不同種類之免疫球蛋白分子的Cl 或CH之核酸序列可操作地連接。此可使用如上所述之包含 Cl或CH鏈之載體或核酸分子來達成。例如，最初為igM之 抗- IgE抗體可種類轉換成jgG。另外，種類轉換可用以將 一 IgG亞類轉化成另一亞類，例如自IgG1轉換成IgG2。產 生包含所需同型之本發明抗體的較佳方法包含以下步驟： 分離編碼抗-IgE抗體之重鏈之核酸分子及編碼抗_1找抗體 之輕鏈之核酸分子’獲得重鏈之可變域，將重鏈之可變域 與所需同型之重鏈之恆定域缚接，在細胞中表現輕鏈及經 缚接之重鏈，及收集具有所需同型之抗_IgE抗體。 本發明之抗-IgE抗體可為1§〇、IgM ' IgE、1§八或1§〇分 129694.doc -35- 200904470 子。在一較佳實施例中，抗_IgE抗體為IgG且為IgGl、 IgG2、IgG3或IgG4亞類。在另一較佳實施例中，抗體為 IgG2亞類。 本發明之經分離抗體之實例包括（但不限於）已使用人類 IgE親和力純化之抗·IgE抗體及已藉由活體外細胞株合成 之抗-IgE抗體。 血清消耗檢定 在一態樣中，本發明提供針對人類IgE之人類抗體或其 ί % 抗原結合部分，其中該抗體具有約0.1-3 0μg/mL之IC25ng/Irα (100-5000 ng/mL)，其中 IC25 ng/mL(100-5000 ng/mL)定義為 將jk清樣本中之游離IgE濃度自約100-5000 ng/mL範圍内 之初始濃度降低至約25 ng/ml之濃度所需之抗體的活體外 濃度。在一實施例中，抗體或其部分具有約0.^25 pg/mL、較佳 0.1-20、g/mL、較佳 0.1-17 pg/mL、較佳 〇,1 _ 15 pg/mL、較佳 〇_ 1 - π pg/mL ’ 最佳 0· 1-2 pg/mL 之 IC25 ng/mL(l〇〇-5000 ng/mL)。 ( 在一實施例中’抗體或其部分具有約丨_25 pg/mL、較佳 1-5 pg/mL、較佳 1-2 pg/mL 之 IC25 ng/mL(100-1500 ng/mL)。 更通常而言’ 1C25 ng/mL(x-y ng/mL)在本文中定義為將血 清樣本中之游離IgE濃度自約x_y ng/mL範圍内之初始濃度 降低至約25 ng/ml之濃度所需之抗體的活體外濃度。 在另一態樣中’本發明提供針對人類IgE之人類抗體或 其抗原結合部分，其中該抗體具有約丨_25 pg/mL之IChng/mi (500-1500 ng/mL)，其中 IC25 ng/mL(500_1500 ng/mL)定義為 129694.doc -36- 200904470 將金清樣本中之游離IgE濃度自約500-1500 ng/mL範圍内 之初始濃度降低至約25 ng/ml之濃度所需之抗體的活體外 濃度。在一實施例中，抗體或其部分具有約1-20 pg/mL、 較佳1-15 Kg/mL、較佳卜10 Pg/mL、較佳1-5 Mg/mL、最佳 2 pg/mL之 IC25 ng/mL(500-1500 ng/mL)。
在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之人類抗體或 其抗原結合部分，其中該抗體具有約0.1-15 pg/mL之IC25ng/mL (100 500 ng/mL) ’ 其中 IC25 ng/mL(l〇〇-50〇 ng/mL)定義為將 血清樣本中之游離IgE濃度自約100-500 ng/mL範圍内之初 始濃度降低至約25 ng/mL之濃度所需之抗體的活體外濃 度。在一實施例中，抗體或其部分具有約〇HO pg/mL、 〇·1 8 pg/mL、較佳 〇·ΐ-5 pg/mL、較佳 0.1-4 pg/mL、較佳 〇·1-3 pg/mL ，較佳 1.2 pg/mL 之 IC25 ng/mL(100-500 ng/mL)。 在另一怨樣中，本發明提供針對人類IgE之人類抗體或 其抗原結合部分’其中該抗體具有約〇1_3〇 pg/mL之IC25ng/n^ (1500-5000 ng/mL)，其中 ic25 ng/mL(l500-5000 ng/mL)定義 為將血清樣本中之游離1§£濃度自約1500_5〇〇〇 ng/mL範圍 内之初始濃度降低至約25 ng/ml之濃度所需之抗體的活體 外濃度。在一實施例中，抗體或其部分具有約丨_28 pg/mL、較佳 1-27 pg/mL·、較佳 2-26 pg/mL·、較佳 2-25 gg/mL 之 IC25 ng/mL(l500-5000 ng/mL)。 給疋測试抗體之1C25 ng/mL(X-y ng/mL)可藉由游離IgE血 清消耗測試來確定。基礎原理為將血清樣本與該測試抗體 129694.doc •37- 200904470 一起培育，以允許血清游離IgE與該測試抗體結合。在移 除先前形成之（測試抗體）_IgE複合物之後，可爾後例如使 用ELISA偵測檢定來偵測及量測未與該測試抗體結合之 之量（分率）。 游離IgE對應於循環未結合之IgE，亦即未與抗體結合且 未與任何細胞或受體結合之IgE。 更確切而言，K：25 ng/mL(X_y ng/mL)可使用包含下列步驟 之檢定方法來測定： a) 提供具有x-y ng/mL範圍内之初始游離IgE濃度的人類 血清樣本， b) 提供測試抗體（測試抗-IgE抗體）； C)使用與塗佈於ELISA板上之捕獲試劑相同之測試抗體 製備ELISA板（或任何其他合適ELISA固體試劑）； d) 將步驟a)中提供之該血清樣本與步驟b)中提供之該測 試抗體一起培育，由此提供培育混合物； e) 將來自步驟d)之培育混合物與在步驟c)中製備之 ELISA板一起培育； f) 洗滌步驟e)之ELISA板； g) 偵測及量測剩餘結合至該ELIS A板上之IgE之量。 熟習此項技術者瞭解由來源於人類個體之血樣開始製備 血清樣本之方法。例如’此可涉及將血液收集至玻璃血清 管（例如Becton Dickinson產品目錄第366636號）中，允許凝 血60分鐘’隨後在500xg下離心1 〇分鐘且收集血清上清 液。如以下實例中所述’該人類血清樣本可經稀釋以便例 129694.doc •38- 200904470 如使用如用於ELISA中之相同緩衝液（例如1% BSA/TBS)調 整其初始游離IgE濃度。總igE濃度可容易地使用標準 ELISA檢定’例如使用商業套組（例如IBL或Bethyl銷售之 戎4偵測套組）來量測。通常，該初始游離IgE濃度為約 100-5000 ng/mL。在一態樣中，該初始游離IgE濃度為約 100-500 ng/mL ;或約 500-1500 ng/mL ;或約 1500-5000 ng/mL。熟習此項技術者亦瞭解製備如提供於步驟c)中之 ELISA板之方法。此可通常藉由將所需測試抗體在合適孔 板（通常為抗體之吸附不干擾後續所需反應的板，例如 Nunc MaxiSorp™ % 孔板（Fisher Scientific，產品目錄第 018-971-010?號））上培育來執行。該抗體通常以處於例如 TBS之合適緩衝液中之溶液形式使用。培育可通常在約4。〇 下持續約10、12或16小時，以允許合適塗佈板，繼之以例 如使用吐溫-TBS緩衝液進行一或若干個洗滌步驟。隨後例 如使用1 % BSA-TBS將該板阻斷。阻斷可例如在室溫下執 行1小時，隨後再洗滌板（例如使用吐溫_TBS),隨後用於 步驟d)中。 步驟d)之培育可執行約10、12或16小時。培育溫度通常 為約37 C。培育條件通常另外包括具有5% c〇2之增濕氣 氛。對照檢定可用以展示游離IgE與捕獲試劑（步驟幻之 ELISA板）結合’而（測§式抗體）_ig£複合物不與其結合。 步驟e)之培育可例如在室溫下執行約2小時。對照檢定 可用以展示游離IgE與捕獲試劑（步驟幻之ELISA板）結合， 而（測試抗體）-IgE複合物不與其結合。 129694.doc -39- 200904470 步驟f)中之洗滌可涉及例如使用吐溫-TBS進行之一或若 干個洗滌步驟。此步驟應確保全部（測試抗體）-IgE複合物 自ELISA板上之孔中移除。 對於步驟g)，熟習此項技術者可使用商業人類IgE標準 物以便校準結果。步驟f)中之偵測及量測可例如使用經標 記之多株抗-IgE抗體來執行。該等多株抗-IgE抗體為可購 得的，尤其為生物素化之形式。後續偵測可隨後採用抗生 蛋白鏈菌素-HRP試劑（亦可購得）。 在一實施例中，本發明之抗-IgE抗體或其部分包含具有 選自由SEQ ID NO: 10、30、50、70及90組成之群之序列 的 H-CDR3。 在一實施例中，抗-IgE抗體或其部分包含具有選自由 SEQ ID NO: 20、40、60、80、100及 140組成之群之序列 的 L-CDR3。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或部分係選自由以下各抗 體組成之群： - 包含分別具有SEQ ID NO: 6、8、10之序列之H-CDR (H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 26、28、30之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合的抗 體； 包含分別具有SEQ ID NO: 46、48、50之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合的抗 129694.doc -40- 200904470 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 66、68、70之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 86、88、90之序列之只-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合的抗 體；及 - 包含分別具有SEQ ID NO: 126、128、130之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合的抗 體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： - 包含分別具有SEQ ID NO: 16、18、20之序列之1^-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 36、38、40之序列之1^-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 56、58、60之序列之匕-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 76、78、80之序列之1^-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體； 129694.doc -41 - 200904470 - 包含分別具有SEQ ID NO: 96、98、100之序列之1^-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體；及 - 包含分別具有SEQ ID NO: 136、138、140之序列之！^-CDR(L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗 體。 在一實施例中，抗-IgE抗體或部分係選自由以下各抗體 組成之群. - 包含具有SEQ ID NO: 10之序列之H-CDR3及具有SEQ ID NO: 20之序列之LCDR3的抗體； - 包含具有SEQ ID NO·· 30之序列之H-CDR3及具有SEQ ID NO: 40之序列之LCDR3的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 50之序列之H-CDR3及具有SEQ ID NO: 60之序列之LCDR3的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 70之序列之H-CDR3及具有SEQ ID NO: 80之序列之LCDR3的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 90之序列之H-CDR3及具有SEQ ID NO: 100之序列之LCDR3的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 130之序列之H-CDR3及具有 SEQ ID NO: 140之序列之LCDR3的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群· - 包含分別具有SEQ ID NO: 6、8、10之序列之H-CDR (H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合及分別 129694.doc -42- 200904470 具有 SEQ ID NO: 16、18、20 之序列之1^-匚011(1^-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 26、28、30之序列之仏 CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合及分 別具有 SEQ ID NO: 36、38、40之序列之！^-0〇11(1^ CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 46、48、50之序列之！^-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合及分 別具有 SEQ ID NO: 56、58、60之序列之[-匚011(1^-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 66、68、70之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合及分 別具有SEQ ID NO: 76、78、80之序列之[-匚011([-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 86、88、90之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合；及 分別具有SEQ ID NO: 96、98、100之序列之！^-匚011(1^ CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體；及 - 包含分別具有SEQ ID NO: 126、128、130之序列之11-CDR(H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合及分 別具有 SEQ ID NO: 136、138、140之序列之1^-0〇11(1^ CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群· 129694.doc -43- 200904470 -包含具有SEQ ID NO: 4之序列之H—可變域的抗體； 包含具有SEQ ID NO: 24之序列之H—可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO·· 44之序列之H—可變域的抗體； 包含具有SEQ ID NO: 64之序列之η-可變域的抗體；及 在另一實施例中’抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 14之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 34之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 54之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 74之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 94之序列之L-可變域的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 134之序列之L-可變域的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 4之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 14之序列之L·可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 24之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 14之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 24之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 34之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 4之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 34之序列之L·可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 44之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 54之序列之可變域的抗體； 129694.doc -44- 200904470 -包含具有SEQ ID NO: 64之序列之Η-可變域及具有 SEQ ID NO: 54之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 44之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 74之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 64之序列之H-可變域；及具有 SEQ ID NO: 74之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 84之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 94之序列之L-可變域的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 124之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 134之序列之L-可變域的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 2之序列之H-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 22之序列之H-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 42之序列之H-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 62之序列之H-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 82之序列之H-鏈的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 122之序列之H-鏈的抗體；及 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 12之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 32之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 52之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 72之序列之L-鏈的抗體； 129694.doc -45 - 200904470 -包含具有SEQ ID NO: 92之序列之L-鏈的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 132之序列之L-鏈的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： - 包含具有SEQ ID NO: 2之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 12之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 22之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 12之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 22之序列之H-鏈及具有SEQ ID Ν 0: 3 2之序列之L -鍵的抗體， -包含具有SEQ ID NO: 2之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 32之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 42之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 52之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 62之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 52之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 62之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 72之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 42之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 72之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 82之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 92之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 82之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 132之序列之L-鏈的抗體； 129694.doc -46- 200904470 -包含具有SEQ ID NO: 122之序列之Η-鏈及具有SEQ ID NO: 92之序列之L-鏈的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 122之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 132之序列之L-鏈的抗體。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分（在該部分包含至 少重鏈恆定區之一部分的範圍内）具有IgG1*IgG2亞型。 本發明之例示性較佳抗體包括以下抗體： -mAb 5.396.1(由融合瘤產生）； -重組5.396.1 ; -5.396.1 Hc-S103N Lc-K61R，有時亦稱作 5.396.l(Hc-S103N Lc-K61R)或 5.396.1(S103N/K61R)或 5.396.1 N/R(亦 即除重鏈He及輕鏈Lc中之所指示胺基酸取代以外，具有與 5.396.1 mAb相同之鏈序列）； -mAb 6.605.1(由融合瘤產生）； •重組 6.605.1 ; -6.605.1 Hc-H3Q，M13K，D82E Lc-T25A,T53S，有時亦 稱作 6.605.1(H3Q，M13K，D82E-T25A，T53S)，或 6.605.1 QKE/AS(亦即除重鏈He及輕鏈Lc中之所指示胺基酸取 代以外’具有與6.605,1 mAb相同之鏈序列）； -mAb 5.948,1(由融合瘤產生）； -重組 5.9 4 8,1 ; -5.948.1取-出00丫，有時亦稱作5.948.1 11100丫（亦即 除He中之所指示胺基酸取代以外，具有與5.948.1 mAb相同之鏈序列）； 129694.doc -47· 200904470 此等抗體更詳細描述於以下實例中。 在另一實施例中，抗-IgE抗體或其部分係選自由以下各 抗體組成之群： •包含由SEQ ID NO: 1之核酸序列編碼之H_鏈序列及由 SEQ ID NO: 11之核酸序列編碼之L_鏈序列的抗體； -包含由SEQ ID NO: 21之核酸序列編碼之札鏈序列及 由SEQ ID NO: Μ之核酸序列編碼之L·鏈序列的抗 體； (- '' •包含由SEQ ID NO: 41之核酸序列編碼之比鏈序列及 由SEQ ID NO: 51之核酸序列編碼之L_鏈序列的抗 體； -包含由SEQ ID NO: 61之核酸序列編碼之H•鏈序列及 由SEQ ID NO: 71之核酸序列編碼之L_鏈序列的抗 體； -包含由SEQ ID NO: 8 1之核酸序列編碼之H—鏈序列及 / 由SEQ ID NO: 91之核酸序列編碼之L_鏈序列的抗 體；及 _包含由SEQ ID NO: 121之核酸序列編碼之H-鏈序列及 由SEQ ID NO: 131之核酸序列編碼之L_鏈序列的抗 體。 在一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中該 抗體包含具有SEQ ID NO: 2之序列之沁鏈及具有让卩ID N 0: 1 2之序列之L -鍵。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 129694.doc -48- 200904470 該抗體包含具有SEQ ID NO: 22之序列之Η-鏈及具有SEQ ID NO: 32之序列之L-鏈。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含具有SEQ ID NO: 42之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 52之序列之L-鏈。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含具有SEQ ID NO: 62之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 72之序列之L-鏈。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含具有SEQ ID NO: 82之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 92之序列之L-鏈。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含具有SEQ ID NO: 122之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 132之序列之L-鏈。 在一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中該 抗體包含由ATCC寄存物PTA-7977之嵌入物編碼之H-鏈及 由ATCC寄存物PTA-7982之嵌入物編碼之L-鏈；其中該等 寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定寄存於美國菌 種保存中心（ATCC)，Ρ. Ο. Box 1549, Manassas，VA 20108, USA。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含由ATCC寄存物PTA-798 1之嵌入物編碼之H-鏈 及由ATCC寄存物PTA-7980之嵌入物編碼之L-鏈；其中該 等寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定寄存於美國 129694.doc -49- 200904470 菌種保存中心（ATCC)，P. O. Box 1549，Manassas，VA 20108, USA。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含由ATCC寄存物PTA-7985之嵌入物編碼之H-鏈 及由ATCC寄存物PTA-7984之嵌入物編碼之L-鏈；其中該 等寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定寄存於美國 菌種保存中心（ATCC)，P. 0. Box 1549，Manassas，VA 20108, USA。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含由ATCC寄存物PTA-7983之嵌入物編碼之H-鏈 及由ATCC寄存物PTA-7978之嵌入物編碼之L-鏈；其中該 等寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定寄存於美國 菌種保存中心（ATCC)，P. 0· Box 1549，Manassas, VA 20108, USA。 在另一態樣中，本發明提供針對人類IgE之抗體，其中 該抗體包含由ATCC寄存物PTA-7979之嵌入物編碼之H-鏈 及由ATCC寄存物PTA-7986之嵌入物編碼之L-鏈；其中該 等寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定寄存於美國 菌種保存中心（ATCC)，P. 0. Box 1549，Manassas，VA 20108, USA。 在另一態樣中，本發明提供如上所述之抗體或其部分之 變異體，其中該變異體與該抗體或其部分之不同之處在於 1、2、3、4、5、6、7、8、9或10處胺基酸取代。 本發明之另一態樣為具有至少一種先前描述之功能性質 129694.doc •50- 200904470
才體或其抗原結合部分，且包含胺基酸序列與SEQ ID
N〇’ 4 24、44、64、84 或 124 中任一者至少 90%—致之 vH 域在實施例中，該VH域之胺基酸序列與SEq ID N〇: 44 64、84或1 24中任一者至少91 %、至少93%、 至少95%、至少97%、至少99%或1〇〇%一致。 本發明之另一態樣為具有至少一種先前描述之功能性質 之抗體或其抗原結合部分，且包含胺基酸序列與seq m NO· 14、34、54、74、94 或 134 中任一者至少 90%—致之
Vl域在—實施例中，該VH域之胺基酸序列與SEq ID NO’ 14、34、54、74、94 或 134 中任一者至少 910/〇、至少 93 /〇、至少 95。/〇、至少 97°/〇、至少 99。/。或 1〇〇〇/0—致。 亦稱為序列一致性之多肽序列相似性通常使用序列分析 軟體來1測。蛋白質分析軟體使用分配給包括保守胺基酸 取代之各種取代、缺失及其他修飾的相似性度量來使相似 序列匹配。舉例而言，GCG含有諸如” Gap ”及"Bestfit,|之程 式，其可連同預設參數來使用以測定諸如來自不同生物體 物種之同源多肽的密切相關多肽之間或野生型蛋白質與其 突變蛋白質之間的序列同源性或序列一致性。參見，例如 GCG版本6.1。多肽序列亦可使用預設或推薦參數使用 FASTA(GCG版本6.1中之程式）來比較。FASTA(例如 FASTA2及FASTA3)提供查詢序列及搜尋序列之間之最佳重 疊區域的比對及序列一致性百分比（Pears〇n,
Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132.1 85-2 19 (2000))。在比較本發明之序列與含有來自不 129694.doc •51 - 200904470 同生物體之大量序列之資料庫時的另一較佳演算法為使用 預設參數之電腦程式BLAST、尤其blastp或tblastn。參 見’例如 Altschul 等人，^/ 施/ 出215:4〇3 41〇 (1990)，Altschul 等人，义以心及以 25:3389-402 (1997);其以引用的方式併入本文中。 比較同源性之多肽序列之長度通常至少約丨6個胺基酸殘 基、通常至少約20個殘基、更通常至少約24個殘基、通常 至少約28個殘基，且較佳大於約35個殘基。在搜尋含有來 自大量不同生物體之序列的資料庫時，較佳比較胺基酸序 列。 如在以下表中指示’如本文中所用之，，胺基酸"由其全 名、與其相應之三字母代碼或與其相應之一字母代碼表 示： 全名 天冬胺酸 麩胺酸 離胺酸 精胺酸 組胺酸 路胺酸 半胱胺酸 天冬酿胺酸 麩醯胺酸 絲、胺酸 蘇胺酸 三字母代瑪
Asp
Glu
Lys
Arg
His
Tyr
Cys
Asn
Gin
Ser
Thr
一字母代碼 D
E
K
R
H
Y
C
N
Q s
T 129694.doc -52- 200904470
甘胺酸 Gly G 丙胺酸 Ala A 纈胺酸 Val V 白胺酸 Leu L 異白胺酸 lie I 甲硫胺酸 Met M 脯胺酸 Pro P 苯丙胺酸 Phe F 色胺酸 Trp W 如本文中所用，二十種習知胺基酸及其縮寫遵循習知用 法。參見办价/2以&(第 2版，E. S. Golub 及 D· R. Gren 編 ’ Sinauer Associates, Sunderland，Mass (1991))。 根據本發明’可進行之一類型之胺基酸取代為將抗體中 之可以化學方式反應之一或多個半胱胺酸改變成另一殘 基’諸如（但不限於）丙胺酸或絲胺酸。在一實施例中，存 在非規範半胱胺酸之取代。取代可在抗體之可變域之CDR 或構架區或怪定域中進行。在某些實施例中，半胱胺酸為 規範的。 可進行之另一類型之胺基酸取代為移除抗體中之潛在蛋 白水解位點。該等位點可在抗體之可變域之CDR或構架區 或恆定域中出現。取代半胱胺酸殘基及移除蛋白水解位點 可降低抗體產物中之非均質性之風險且由此增加其均質 性。另一類型之胺基酸取代為藉由改變形成潛在脫醯胺作 用位點之天冬酿胺酸-甘胺酸殘基中之一或兩者來消除該 129694.doc -53- 200904470 等殘基對。 在根據本發明之變異體之-者中可進行之另-類型之胺 基酸取代為保守胺基酸取代。” 保寸胺基酸取代”為胺基酸 殘基U相似化學性f (例如電荷或疏水性）之側鍵μ 團之另-胺基酸殘基取代的胺基酸取代。通常，保守胺美 酸取代大體上不會改變蛋白質之功能性質1兩個或兩: 以上胺基酸序列因保守性取代而彼此不同則序列一致性 百分比或相似度可調高以校正取代之保守性質。進行此調 整之方法為熟習此項技術者熟知。參見，例如person，
Mei/zoA Me?/· 5ζ·〇/· 243:307-31 (1994)。 具有相似化學性質之側鏈之胺基酸基團的實例包括丨）脂 族側鏈：甘胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸； 2)脂族-羥基側鏈：絲胺酸及蘇胺酸；3)含有醯胺之側鏈： 天冬醯胺酸及麵醯胺酸；4)芳族側鏈：苯丙胺酸、酪胺酸 及色胺酸；5)鹼性侧鏈：離胺酸、精胺酸及組胺酸；6)酸 性側鏈.天冬胺酸及麩胺酸；及7)含硫側鏈：半胱胺酸及 曱硫胺酸。較佳保守胺基酸取代基團為：纈胺酸-白胺酸_ 異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸 '丙胺酸_纈 胺酸、麩胺酸酯-天冬胺酸酯及天冬醯胺酸-麩醯胺酸。 或者，保守置換為在揭示於Gonnet等人，心/ence 256:1443-45(1992)中之PAM250對數似然矩陣中具有正值 之任何變化。”中等保守”置換為在PAM250對數似然矩陣 中具有非負值之任何變化。 在某些實施例中，本發明之抗體或抗原結合部分之胺基 129694.doc -54* 200904470 酸取代為（1)降低對蛋白水解的敏感性，（2)降低對氧化的 敏感性，（3)改變形成蛋白質複合物之結合親和力，及（4) 賦予或改變該等類似物之其他物理化學或功能性質，但仍 保持與人類IgE之特異性結合的彼等取代。類似物可包括 天然存在之肽序列之各種取代。可在天然存在之序列中， 例如在形成分子間接觸之域外部之多肽部分中，進行單— 或多處胺基酸取代，較佳保守胺基酸取代。亦可在形成分 子間接觸之域中進行胺基酸取代，其可改良多肽之活性。 保守胺基酸取代應大體上不改變親本序列之結構特性；例 如置換胺基酸應不改變構成在親本序列中出現之免疫球蛋 白結合域之反平行β摺疊，或破壞表徵親本序列之其他類 型之二級結構。通常，甘胺酸及脯胺酸不會用於反平行p 摺疊中。業界公認之多肽二級及三級結構之實例描述於 Proteins, Structures and Molecular Principles(CrQig\iion 編，W. H. Freeman and Company, New York (1984)); Introduction to Protein Structure{C. BrandenAJ. Toozel^ ，
Garland Publishing, New York, N.Y. (1991));及 Thornton 等人，354:105(1991)中。 在本發明之另一態樣中，可使用描述於例如PCT公開案 WO 98/52976及WO 00/34317中之技術將抗體去免疫化以 降低其免疫原性。 在另一實施例中，可製得包含與另一多肽連接之本發明 之抗-IgE抗體之全部或一部分的融合抗體或免疫黏附素。 在一較佳實施例中，僅抗-IgE抗體之可變域與多肽連接。 129694.doc •55- 200904470 在另一較佳實施例中，抗_IgE抗體之％域與第一多肽連 接’同時抗-IgE抗體之VL域與第二多肽連接，該第二多肽 以使得VH及VL域可彼此相互作用以形成抗原結合位點的方 式與第一多肽相關聯。在另一較佳實施例中，¥1^域藉由使 得vH及vL域可彼此相互作用之連接子與Vl域分離（參見下 文單鏈抗體下）。VH-連接子_vL抗體隨後與所關注之多肽 連接。另外，可建置兩個（或兩個以上）單鏈抗體彼此連接 之融合抗體。若想要在單一多肽鏈上建置二價或多價抗 體，或若想要建置雙特異性抗體，則此為適用的。 為建置單鏈抗體（scFv)，編碼VH及VL之DNA片段與另一 編碼可撓性連接子（例如編碼胺基酸序列（Gly4_Ser)3)之片 丰又可操作地連接，使得vH及VL序列可表現為鄰接的單鏈蛋 白質’ vL與VH域由該可撓性連接子接合。參見，例如Bird 等人 ’ 242:423-426 (1988); Huston等人， #加/. dcfli Sc/.仍」85:5879-5883 (1988); McCafferty 等 人，3 48:5 52-5 54 (1990)。若僅使用單一 vH 及 Vl， 則單鏈抗體可為單價的’若使用兩個VH及VL，則單鏈抗體 可為二價的’或若使用兩個以上νΗ及Vl，則單鏈抗體可為 夕"ί貝的。可產生與人類IgE及另一分子特異性地結合的雙 特異性或多價抗體。 在其他實施例中，可使用編碼抗_IgE抗體之核酸分子來 製備其他修飾抗體。例如’ "Kappa抗體"（111等人， 仏g. 10: 949-57 (1997))，”微型抗體"（Martin等人， 乂 13: 5303-9 (1994))，''雙功能抗體"（Holliger等人， 129694.doc -56- 200904470 TVa". Jcai/· t/u 90: 0444-6448 (1993))，或，，固斗 M 土·笼'白 相關分子（Janusin)"(Traunecker 等人，五j 10 36 3659(1991)及 Traunecker等人，7价 j c㈣cer(增刊广 ^二5、 (1 992))可使用標準分子生物技術遵循本說明蚩一 項〜双不來制 備。 表 在某些實施例中，本發明抗體可以中性形式（包括兩性 離子形式）或以帶正或負電荷物質之形式存在。在某此實 施例中，抗體可與平衡離子複合以形成醫藥學上可接受之 鹽。 術語”醫藥學上可接受之鹽，，係指包含一或多種抗體及一 或多種平衡離子之複合物，其中該等平衡離子由醫藥學上 可接受之無機酸及有機酸及鹼衍生。 醫藥學上可接受之無機鹼包括金屬離子。更佳金屬離子 包括（但不限於）合適鹼金屬鹽、鹼土金屬鹽及其他生理學 可接受之金屬離子。由無機鹼衍生之鹽包括鋁鹽、銨鹽、 齊鹽、链鹽、錄鹽、鉬鹽、釩鹽、錳鹽、鉻鹽、硒鹽、锡 鹽、銅鹽、鐵鹽、亞鐵鹽、鋰鹽、鎂鹽、錳鹽、亞猛鹽、 鉀鹽、铷鹽、鈉鹽及鋅鹽，且呈其常見原子價形式。 本發明之抗體之醫藥學上可接受之酸加成鹽可自以下酸 製備，該等酸包括（但不限於）：甲酸、乙酸、乙醯胺基苯 甲酸、己二酸、抗壞血酸、硼酸、丙酸、苯甲酸、樟腦 酸、碳酸、環拉酸（cyclamic acid)、去氫膽酸、丙二酸、 依地酸（edetic acid)、乙基硫酸、芬地柞酸（^化仏 acid)、偏磷酸、琥珀酸、乙醇酸、葡萄糖酸 '乳酸、蘋果 129694.doc -57- 200904470 酸、酒石酸、鞣酸、檸檬酸、硝酸、抗壞血酸、葡糖搭 酸、順丁烯二酸、葉酸、反丁烯二酸、丙酸、焦葡萄酸、 天冬胺酸、糙胺酸、苯曱酸、鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、離 胺酸、異檸檬酸、三氟乙酸、雙羥萘酸、丙酸、鄰胺基苯 曱酸、甲磺酸、乳清酸、草酸、草醯乙酸、油酸、硬脂 酸、水楊酸、胺基水楊酸、發酸、對經基苯曱酸'终驗 酸、苯乙酸、扁桃酸、恩波酸（embonic acid)、項酸、曱烧 磺酸、磷酸、膦酸、乙烷磺酸、乙烷二磺酸、銨、苯續 酸、泛酸、萘確酸、甲苯續酸、2-經基乙烧石黃酸、對胺基 苯磺酸 '硫酸、硝酸、亞硝酸、硫酸單甲酯、環己基胺磺 酸、β-羥基丁酸、甘胺酸、甘胺醯基甘胺酸、楚胺酸、二 曱胂酸鹽、二胺基己酸、樟腦磺酸、葡萄糖酸、硫氰酸、 酮戊二酸、5-磷酸吡哆醛、氣化苯氧乙酸、十一烷酸、Ν_ 乙酸基-L-天冬胺酸、半乳糖二酸及半乳糖搭酸。 醫藥學上可接受之有機鹼包括三曱胺、二乙胺、Ν，Ν，_ 一苄基乙二胺、氣普魯卡因（chloroprocaine)、膽驗、二苄 基胺、二乙醇胺、乙二胺、葡曱胺（N_曱基葡萄胺）、普魯 卡因（procaine)、環胺、第四銨陽離子、精胺酸、甜菜 鹼、咖啡鹼、克立咪唑（Clemiz0le)、2_乙胺基乙醇、2_二 乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙烷二胺、丁胺、乙醇 胺、乙二胺、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、乙基葡萄胺、葡 萄胺、葡糖胺、組胺酸、海卓胺、咪唑、異丙胺、甲基葡 萄胺、嗎啉 '哌嗪、吡啶、吡哆醇、鉉、哌啶、多元胺樹 脂、普魯卡因、嘌呤、可可豆鹼、三乙胺、三丙胺、三乙 129694.doc -58- 200904470 醇胺、緩血酸胺、曱胺、牛磺酸、膽酸酯、6-胺基-2-甲 基-2-庚醇、2_胺基_2_甲基_丨，3_丙二醇、2-胺基-2-甲基-1-丙醇、脂族單羧酸及二羧酸、苯基取代之鏈烷酸、羥基鏈 烧酸、芳族酸、脂族及芳族磺酸、锶、三（羥甲基）曱基甘 胺酸、肼、苯基環己胺、2-(N-嗎啉基）乙磺酸、雙（2-羥乙 基）胺基-參（羥甲基）曱烷、N-(2-乙醯胺基）-2-胺基乙烷磺 酸、1，4-哌嗪二乙烷磺酸、3_N_嗎啉基_2-羥基丙烷磺酸、 I3-雙[參（羥曱基）曱基胺基]丙烷、4-嗎啉丙烷磺酸、4-(2-經乙基）哌嗪-1-乙磺酸、2-[(2-羥基-1，1-雙（羥甲基）乙基）胺 基]乙磺酸、N，N-雙（2-羥乙基）-2-胺基乙烷磺酸、4-(N-嗎 琳基）丁烷磺酸、3-(N,N-雙[2-羥乙基]胺基）-2-羥基丙烷磺 酸、2-羥基_3_[參（羥甲基）甲基胺基]_丨_丙烷磺酸、4_(2_羥 乙基）哌嗪-1-(2-羥基丙烷磺酸）、哌嗪-M-雙（2-羥基丙烷 磺酸）二水合物、4-(2-羥乙基）-1-哌嗪丙烷磺酸、N，N-雙 (2_羥乙基）甘胺酸、N-(2-羥乙基）哌嗪-N，-(4-丁烷磺酸）、 N-[參（羥甲基）甲基]_3_胺基丙烷磺酸、N—參（羥曱基）曱基_ 4-胺基丁烷磺酸、N-(l，l-二甲基-2-羥乙基）-3-胺基-2-羥基 丙烧磺酸、2-(環己基胺基）乙烷磺酸、3-(環己基胺基）_2_ 經基-1-丙烷磺酸、3_(環己基胺基）_丨_丙烷磺酸、N_(2_: 醯胺基）亞胺二乙酸、4-(環己基胺基）-1-丁烷磺酸、N-[參 (羥甲基）甲基]甘胺酸、2-胺基-2-(羥甲基）-1,3-丙二醇及胺 丁三醇。 本發明之抗-IgE抗體或抗原結合部分可衍生化或與另— 分子（例如另一肽或蛋白質）連接。通常，抗體或其部分經 129694.doc -59- 200904470 衍生化以使得έ士人 L, ^ t 、’、σ σ、尤其與游離IgE之結合不受衍生化 或才示記不利地影響。相應地，本發明之抗體及抗體部分音 欲包括本文中描述之人類抗规體之完整及修飾形式： 例如，本發明之抗體或抗體部分可與-或多種諸如以下各 物之其他分子實體功能性地連接（藉由化學偶合、遺傳融 合、非共價締合或以其他方式）：另—抗體（例如雙特異性 抗體或雙功能抗體）、偵測劑、醫藥劑及/或可介導抗體或 (抗體部分與另-分子之締合的蛋白質或狀（諸如抗生蛋白 鏈菌素核心區域或聚組胺酸標記）。 種類型之衍生化抗體藉由使兩個或兩個以上抗體（相 同類型或不同類型，例如為了建置雙特異性抗體）交聯來 產生。合it交聯齊J包括具有異質雙功能性（具有兩個由適 當間隔基（例如間馬來醯亞胺苯甲醯基_ N _羥基琥珀醯亞胺 酉旨）分離之具有獨特反應性之基團）或同質雙功能性（例如辛 二酸二琥珀醯亞胺基酯）之交聯劑。該等連接子可購自 【 Pierce Chemical Company, Rockford，η。 抗-IgE抗體亦可以諸如聚乙二醇（pEG)、甲基或乙基或 碳水化合物基團之化學基團來衍生化。此等基團可用於改 良抗體之生物學特性’例如增加血清半衰期。 本發明之抗體亦可經標記。如本文中所用，”標記"或 經b a己係才曰在抗體中併入另一分子。在一實施例中，標 記為可偵測標誌，例如併入經放射性標記的胺基酸或與可 藉由經標sfe之抗生物素蛋白（例如含有可藉由光學或比色 方法镇測之螢光標該或酶促活性的抗生蛋白鏈菌素）積測 129694.doc •60- 200904470 之生物素基部分的多肽連接。 牡为實鼽例中，標記或標 u可為治療劑，例如藥物結合 刃^母素。標記多肽及醣蛋 白之各種方法在此項技術中戽 、仪π丁甲為已知的且可使用。多肽之標 記之實例包括（但不限於）以下各物. 卜谷物.放射性同位素或放射 ί
性核素（例如 3H、14C、15N、35S、90Y、99Te、mIn、 12H3H)、螢光標記（例如mc、若丹明（偏咖㈣、 鑭系元素鱗光體）、酶促標記（例如辣根過氧化物酶、卜半 乳糖苦酶、螢光素酶、驗性嶙酸酶）、化學發光標諸、生 物素基團、由二級報導基因辨別之預定多肽抗原決定基 (例如白胺酸拉鏈對序列、二級抗體之結合位點、金屬結 合域、抗原決定基標記物）、磁性劑（諸如釓螯合物）、毒素 (諸如百日咳毒素）、紅豆杉醇、細胞遲緩素B、短桿菌肽 D、溴化乙錠、吐根素、絲裂黴素、依託泊苷 (etoposide)、特諾波賽（tenop〇side)、長春新鹼、長春花 驗、秋水仙素、多柔比星（d〇xorubicin)、道諾黴素 (daunorubicin)、二經基炭疽菌素二酮、米托蒽酿 (mitoxantrone) ' 光神黴素（mithramycin)、放線菌素 D、1- 去虱睾酿J、糖皮質激素、普魯卡因、丁卡因（tetracaine)、 利多卡因（lidocaine)、普萘洛爾（propranolol)及°票呤黴素 (puromycin)及其類似物或同系物。在某些實施例中，標記 由各種長度之間隔臂連接以降低潛在位阻。 核酸、載體及細胞
本發明亦包含編碼抗-IgE抗體或其抗原結合片段之核酸 分子及序列。在某些實施例中，不同核酸分子編碼抗-IgE 129694.doc 61 200904470 相同核酸分 免疫球蛋白之重鍵及輕鏈。在其他實施例中 子編碼抗-IgE免疫球蛋白之重鏈及輕鏈。 除非另作說明，否則提及之核普酸序列包涵其互補序 列:因此，提及具有特定序列之核酸應理解為包涵具有其 互補序列之互補鏈。本文所提及之術語，，聚核苷酸"意謂至 少10個鹼基長度之聚合(可能經分離)形式之核苷酸，其為 核糖核皆酸或脫氧料酸或者任-類型之料酸之修飾形 式。該術語包括單鏈及雙鏈形式。 在-態樣中，本發明提供編碼如上所述之抗體或其部分 之一鏈的核酸序列。 在-態樣中，本發明提供選自由以下組成之群之核酸序 列：SEQ ID NO:卜3、„、13、21、23 31 33 41、 43、51、53、61、63、71、73、81、83、91、93、1〇1、 103、105、1〇7、109、Ul、121、123、131 及⑴。 \ 本發明之核酸分子包括在高度嚴格條件下雜交之核酸 (諸如上述者），或與上述核酸序列中之一或多者或與編碼 所提供之VH或VL序列中任一者之胺基酸序列的核酸至少 70/。、75°/。、80%、85%、90%、95%、97%、98%或 99%- 致的核酸。 在一個實施例中，該核酸序列編碼針對人類IgE之抗體 之一鏈，其中該抗體係選自由以下組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 4之序列之仏可變域及具有SEq ID NO: 14之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 24之序列•可變域及具有 129694.doc -62· 200904470 SEQ ID NO: 34之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 44之序列之Η-可變域及具有 SEQ ID NO: 54之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 64之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 74之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 84之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 94之序列之L-可變域的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 124之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 134之序列之L-可變域的抗體。 在一態樣中，本發明提供一個核酸序列，其具有ATCC 寄存物PTA-7977之嵌入物之序列；及由ATCC寄存物PTA-7982之嵌入物編碼之L-鏈；其中該等寄存物於2006年11月 7日根據布達佩斯協定寄存於美國菌種保存中心（ATCC)， Ρ· O. Box 1549，Manassas, VA 20108，USA。 在另一態樣中，本發明提供一個核酸序列，其為ATCC 寄存物PTA-7981之嵌入物；及由ATCC寄存物PTA-7980之 嵌入物編碼之L-鏈；其中該等寄存物於2006年11月7曰根 據布達佩斯協定寄存於美國菌種保存中心（ATCC)，Ρ. Ο. Box 1 549, Manassas, VA 20108，USA。 在另一態樣中，本發明提供核酸序列，其為ATCC寄存 物PTA-7985之嵌入物；及由ATCC寄存物PTA-7984之嵌入 物編碼之L-鏈；其中該等寄存物於2006年11月7日根據布 達佩斯協定寄存於美國菌種保存中心（ATCC)，P. O. Box 1 549，Manassas, VA 20108，USA。 129694.doc -63 - 200904470 在另一態樣中，本發明提供核酸序列，其具有ATCC寄 存物PTA-7983之嵌入物之序列；及由ATCC寄存物ρτΑ· 7978之欲入物編碼之1•鏈；其中該等寄存物於2〇〇6年u月 7曰根據布達佩斯協定寄存於美國菌種保存中心（ATCC)， Ρ· 0. Box 1549, Manassas，VA 20108, USA。 在另一態樣中’本發明提供核酸序列，其具有ATCC寄 存物PTA-7979之嵌入物之序列；及由ATCC寄存物ρτΑ_ 7986之嵌入物編碼之L_鏈；其中該等寄存物於2〇〇6年丨}月 7日根據布達佩斯協定寄存於美國菌種保存中心（ATCC)， p. O. Box 1549, Manassas，VA 20108, USA。 在另一態樣中’本發明提供包含編碼如上所述之抗體或 其部分之一鏈的核酸序列的載體。 在核酸序列之上下文中之術語"序列一致性百分比，，意謂 在比對最大一致性時兩個序列中相同的殘基。序列一致性 比較之長度可達至少約九個核苷酸、通常至少約丨8個核苷 酉九更通$至少約2 4個核苷酸、通常至少約2 8個核苷酸、 更通吊至少約3 2個核苷酸且較佳至少約3 6、4 8個或4 8個以 上核苷酸之展幅。存在許多在此項技術中已知可用於量測 核苷酸序列一致性之不同演算法。舉例而言，聚核苷酸序 列可使用 FASTA、Gap 或 Bestfit(其為 Wisc〇nsin package 版 本 10.0(Genetics Computer Group (GCG), Madison, Wisconsin)中之程式）來比較。包括例如程式FASTA2及 FASTA3之FASTA提供查詢序列與搜尋序列之間之最佳重 疊區域之比對及序列一致性百分比（Pears〇n，办 129694.doc -64- 200904470
Enzymol. 183:63-98 (1990); Pearson, Methods Mol. Biol. 132:185-219 (2000)； Pearson, Methods Enzymol. 266:227-258 (1996); Pearson, 乂 Mo/_ 5z_o/_ 276:71-84 (1998);以引 用的方式併入本文中）。除非另作說明，否則使用特定程 式或演算法之預設參數《舉例而言，核酸序列之間之序列 一致性百分比可使用如提供於GCG版本6.1(以引用的方式 併入本文中）中之FASTA連同其預設參數（為6之字組長及計 分矩陣之NOPAM因子）或使用Gap連同其預設參數來測 定。 在另一態樣中’本發明提供適於表現如上所述之抗體或 其部分之一鏈的載體。 如本文中所用之術語”載體”意謂能夠運輸已連接之另一 核酸的核酸分子。在某些實施例中，載體為質體，亦即額 外DNA區段可缚接至其中之圓形雙鏈〇να片段。在某些實 施例中，載體為病毒載體，其中額外DNA區段可縛接至病 毒基因組中。在某些實施例中，載體能夠於引入其之宿主 細胞中自主複製（例如具有細菌複製起點的細菌載體及游 離型哺乳動物載體）。在其他實施例中，載體（例如非游離 型哺乳動物載體）一旦引入宿主細胞中後便可併入宿主細 胞之基因組中且藉此與宿主基因組一起複製。此外，某些 載體能夠引導表現與其可操作地連接之基因。該等載體在 本文中稱為”重組表現載體'，（或簡稱"表現載體"）。 本發明提供包含編碼本發明之抗_IgE抗體或其抗原結合 部分之重鏈的核酸分子的載體。本發明亦提供包含編碼該 129694.doc -65- 200904470 等抗體或其抗原結合部分之輕鏈的核酸分子的載體。本發 明進一步提供包含編碼融合蛋白質、修飾抗體、抗體片段 及其探針之核酸分子的載體。 編碼抗-IgE抗體或其部分之重鏈或輕鏈之核酸分子可自 產生該抗體之任何來源中分離。在各種實施例中，核酸分 子自表現抗-IgE抗體之B細胞（自以人類IgE抗原免疫之動 物中分離）中或自由該B細胞產生之永生化細胞中分離。分 離編碼抗體之核酸之方法在此項技術中熟知。參見，例如
Sambrook J. & Russell D.. Molecular Cloning: A Laboratory Manual ，第 3 版，c〇ld SpHng Harb〇r
Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y. (2000)。mRNA 可經分離且用以產生用於聚合酶鏈反應（PCR)中或cDNA選 殖抗體基因之cDNA。在一較佳實施例中，核酸分子自具 有作為融合搭配物之來自非人類轉殖基因動物之細胞的融 合瘤中分離，該細胞產生人類免疫球蛋白。在甚至更佳之 實施例中’產生人類免疫球蛋白之細胞係自Xen〇M〇use⑧ 動物（參見下文）中分離。 在某些實施例中，編碼本發明之抗_1§£抗體之重鏈之核 酸可包含與編碼來自任何來源之重鏈恆定域之核苷酸序列 同框接合之編碼本發明之乂以或的核苷酸序列。類似地，編 碼本發明之抗-IgE抗體之輕鏈的核酸分子可包含與編碼來 自任何來源之輕鏈恆定域之核苷酸序列同框接合之編碼本 發明之VL域的核苷酸序列。 在本發明之另一態樣中，編碼重（Vh)&/或輕（Vl)鏈之可 129694.doc -66 - 200904470 變域之核酸分子可”轉化，•成全長抗體基因。在一實施例 中，編碼vH或vL域之核酸分子藉由嵌入至已分別編碼重鏈 怪定（CH)域或輕鏈恆定（cL)域之表現载體中以使得vH區段 與載體内之CH區段可操作地連接且/或％區段與載體内之 cL區段可操作地連接來轉化成全長抗體基因。在另一實施 例中，編碼vH及/或vL域之核酸分子藉由使用標準分子生 物技術將編瑪VH及/或VL域之核酸分子與編碼cH及/或4域 之核酸分子連接（例如缚接）來轉化為全長抗體基因。人類 重鏈及輕鏈免疫球蛋白恆定域基因之核酸序列在此項技術 中為已知的。參見，例如Kabat等人，uences of
Proteins of Immunological Interest，第 5 版，ΝΙΗ Pub\. No. 91-3242，1991。編碼全長重鏈及/或輕鏈之核酸分子可隨 後自已引入其且分離抗-IgE抗體之細胞中表現β 核酸分子可用以重組表現大量抗-IgE抗體。如下文進一 步描述，核酸分子亦可用以產生嵌合抗體、雙特異性抗 體、單鏈抗體、免疫黏附素、雙功能抗體、突變抗體及抗 體衍生物。 在另一實施例中’本發明之核酸分子用作特異性抗體序 列之探針或PCR引子。舉例而言，核酸可用作診斷方法中 之探針或擴增可尤其用於分離編碼抗-IgE抗體之可變域之 額外核酸分子的DNA區域的PCR引子。在某些實施例中， 核酸分子為寡核苷酸。在某些實施例中，寡核苷酸來自所 關注之抗體之重鏈及輕鏈之高度可變域。在某些實施例 中’寡核苷酸編碼如本文中描述之本發明之抗體或其片段 129694.doc -67- 200904470 之CDR中之一或多者的全部或一部分。 在另一實施例中，核酸分子及載體可用以製得突變抗_ IgE抗體。抗體可在重鏈及/或輕鏈之可變域中突變，以例 如改變抗體之結合性質。例如，可在CDR區域中之一或多 者中進行突變以增加或降低抗_IgE抗體之Kd，增加或降低 koff，或改變抗體之結合特異性。定點誘變之技術在此項 技術中熟知。參見’例如Sambrook等人，及Ausubel等 人，前述。在另一實施例中，在本發明之單株抗體中之已 知與生殖系相比較得以改變之胺基酸殘基處進行一或多個 突變。突變可在可變域之CDR區域或構架區或恆定域中進 行。在一較佳實施例中，突變在可變域中進行。在某些實 施例中，在本發明之抗體或其片段之可變域之cdr區域或 構架區中之已知與生殖系相比較得以改變之胺基酸殘基處 進行一或多個突變。 在另一實施例中，構架區經突變以使得所得構架區具有 相應生殖系基因之胺基酸序列。可在構架區或恆定域中進 行突變以增加抗-IgE抗體之半衰期。參見，例如Μ公開 案WO GG/G956G。亦可進行構架區或恒定域中之突變以改 變抗體之免疫原性，提供與另—分子共價或非共價結合之 位點。根據本發明，單—姑科 "^早抗體可在可變域之CDR或構架區 之任一或多者中或在恆定域中具有突變。 ―在某些實施例中，本發明之抗抗體或抗原結合部分 藉由將纟上所述獲得之編碼部分或全長輕鏈及重鏈之DM 敌入表現载體巾以使得基因與諸如轉錄及轉譯控制序列之 129694.doc •68· 200904470 '、、要表現控制序列可操作地連接來表現。表現載體包括質 體、反轉錄病毒、腺病毒、腺相關病毒（AAV)、植物病毒 (諸如花椰菜嵌紋病毒、料錢病毒）、黏質體、yac、 V衍生之游離基因及其類似#勿。將抗體I因缚接至載體 中以使得載體内之轉錄及轉譯控制序列發揮其調節抗體基 因之轉錄及轉譯的預期功能。表現載體及表現控制序列經 k擇以與所使用之表現宿主細胞相容。抗體輕鏈基因及抗 體重鏈基因可歲人獨立載體中。在—較佳實施例中，兩種 基因般人同—表現載體中。抗體基因藉由標準方法（例如 抗體基因片段及載體上之互補限制性位點之缚接，或若不 存在限制性位點則鈍端缚接）嵌入表現載體中。 便利載體為編碼功能上完全之人類一戈Cl免疫球蛋白序 列的載體’如上所述’該序列具有經卫程化以使得任何％ 或VL序列可容易地|人及表現的適#限制性位點。在該等 載體中’拼接通常在所嵌人j區域中之拼接供體位點與人 類C域之前之拼接接納位點之間發生’且亦在人類eg外顯 子内出現之拼接區域處發生。多聚腺嘌呤及轉錄終止在編 碼區域下游之原生染色體位點處發生。重組表現载體亦可 編碼信號肽以促進自宿主細胞分泌抗體鏈。抗體鏈基因可 選殖至載體巾錢得信號肽關框以與免疫球蛋白鍵之 胺基末端連接。信號肽可為免疫球蛋白信號肽或異源信號 肽（亦即來自非免疫球蛋白蛋白質之信號肽）。 σ ^ 除抗體鏈基因之外，本發明之重組表現载體載有調節序 列以控制抗體鏈基因在宿主細胞中之表現。熟習此項技術 129694.doc -69· 200904470
者應瞭解包括選擇調節序列之表現載體之設計可視諸如待 :型之宿主細胞之選擇、所需蛋白質之表現量等之因子而 疋。哺乳動物宿主細胞表現之較佳調節序列包括引導哺乳 動物細胞中高蛋白質表現量之病毒元件，諸如由反轉錄病 毒LTR、細胞巨化病毒（CMV)(諸如cmv啟動子/強化子）、 猴病毒40(SV4())(諸如sv嫩動子/強化子）、腺病毒（例如 腺病毒主要晚期啟動子（AdMLp))、多形瘤及諸如原生免疫 球蛋白及肌動蛋白啟動子之強哺乳動物啟動子。關於病毒 調節元件及其序列之其他描述，參見例如美國專利 5，168,062、4’510,245及4,968,615。在植物中表現抗體之 方法（包括啟動子及載體以及使植物轉型之描述）在此項技 術中為已知的。參見例如us 6,5 17,529。在細菌細胞或真 菌細胞（例如酵母細胞）中表現多肽之方法在此項技術中亦 熟知。 除抗體鏈基因及調節序列之外，本發明之重組性表現載 體可載有其他序列，諸如調節載體在宿主細胞中之複製的 序列（例如複製起點）及可選擇之標記基因。可選擇之標記 基因有助於選擇已引入該載體之宿主細胞（參見，例如美 國專利 4,399,216、4,634,665 及 5，179,017)。例如，通常， 可選擇之標記基因將對於諸如G4 1 8、濕黴素或曱胺喋呤之 藥物之抗性賦予載體已引入其中之宿主細胞。例如，可選 擇之標記基因包括二氫葉酸還原酶⑴HFR)基因（用於經甲 胺π祟吟選擇/擴增之dhfr-宿主細胞中）、neo基因（用於G4 1 8 選擇）及麩胺酸酯合成酶基因。 129694.doc 70- 200904470 如本文中所用之術評，， D表見控制序列'，意謂為實現盘1適 =碼序列之表現及加工所必需之聚核*酸序列：表; 控制序列包括適當轉錄起始、終止、啟動子 列；有效RNA加工信號，令Λ 4, 曰強子序 珑諸如拼接及多聚腺嘌呤作缺.姑 細胞質mRNA穩定化之序列 …，使 斤歹】，增加轉譯有效性之序列
Kozak—致序列）；增加蛋白 P 贫白貝穩定性之序列；及在需要味 增加蛋白質分泌之序列。該等 ， /寺役制序列之性質視宿主生 / % 體而不同，在原核生物中 甲3亥4控制序列通常包括啟動 子、核糖體結合位點及轉錄終止序列；在真核生物中…亥 等控制序列通常包括啟動子及轉錄終止序列。術語”控制 序列"意欲至少包括其存在對表現及加工所必不可少的所 有組份且亦可包括其存在為有利的額外組份，例如前導序 列及融合搭配物序列。 產生抗體及抗體產生細胞株的方洼/ 在某些實施例中，人類抗體藉由以人類IgE抗原對在其 基因組内包含一些或全部人類免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因 座的非人類轉殖基因動物進行免疫來產生。在一較佳實施 例中’非人類動物為XenoMouse®動物。（Abgenix，Inc. /
Amgen, Inc.-Fremont, CA) 〇
XenoMouse®小鼠為經工程化之小鼠品系，其包含人類 免疫球蛋白重鏈及輕鏈基因座之大片段且不能充分產生小 鼠抗體。參見’例如 Green等人，Nature Genetics 7:13-21 (1994)及美國專利 5,916,771、5,939,598、5,985,615、 5,998,209、6,075,181 、6,091,001 、6，114,598、 129694.doc •71 - 200904470 6’13 0,364、6,162,963及 6,150,584。亦參見 WO 91/10741、 WO 94/02602、w〇 96/34096、WO 96/33735、WO 98/16654 ' WO 98/24893 ' WO 98/50433 > WO 99/45031 ' WO 99/53049、WO 00/09560及 WO 00/037504。 在另一態樣中，本發明提供藉由以IgE抗原對包含人類 免疫球蛋白基因座之非人類轉殖基因動物進行免疫而自非 人類非小鼠動物製得抗_IgE抗體的方法。可使用在以上引 用之文獻中描述之方法來產生該等動物。揭示於此等文獻 中之方法可如US 5,994,619中所述來改進。US 5,994,619描 述產生由豬及牛衍生之新穎經培養之内細胞團（CICM)細胞 及細胞株，及異源DNA已嵌入其中之轉殖基因ciCM細胞 的方法。CICM轉殖基因細胞可用於產生經選殖之轉殖基 因胚體、胎體及子代。us 5,994,619亦描述產生能夠將異 源DNA傳輸至其子代之轉殖基因動物之方法。在本發明之 較佳實施例中，非人類動物為哺乳動物，尤其大鼠、綿 羊、豬、山羊、牛、馬或雞。
XenoMouse®小鼠產生完全人類抗體之成年人類庫且產 生抗原特異性人類抗體。在某些實施例中，Xen〇M〇use⑧ 小鼠經由將人類重鏈基因座及κ輕鏈基因座之兆鹼基 (megabase)大小之生殖系構型片段引入酵母人造染色體 (YAC)中而含有約80%之人類抗體v基因庫。在其他實施例 中，XenoMouse®小鼠另外含有大約全部人類入輕鏈基因 座。參見Mendez等人，C5< 15:146_156 (1997)，
Green and Jakobovits，j•五印 1 88:483 495(1998)及 129694.doc •72- 200904470
Wo 98/24893。 在某些實施例中’包含人類免疫球蛋白基因之非人類動 物為具有人類免疫球蛋白”微基因座”之動物。在微基因座 方法中’經由納入來自Ig基因座之個別基因來模擬外源性 ig基因座。因此，將一或多個vH基因、—或多個基因、 或多個J η基因、μ怪疋域及第一恨定域（較佳γ恒定域）妒 成為構築體以便嵌入動物中。此方法尤其描述於美國專利 5,545,807 、 5,545,806 、 5,569,825 、 5,625,126 、 5,633,425 、 5,661,016 、 5,770,429 、 5,789,650 、 5,814,318、5,591，669、5,612,205、5,721,367、5,789 215 及 5,643,763 中。 可藉由任何在此項技術中已知之方法來使動物免疫。參 見’例如Harlow 及 Lane，山d Μα贿α/，
New York: Cold Spring Harbor Press，1990。使諸如小鼠、 大鼠、綿羊、山羊、豬、牛及馬之非人類動物免疫的方法 在此項技術中熟知。參見’例如Harlow及Lane，前述及US 5,994,619。在一較佳實施例中，將人類IgE抗原連同佐劑 一起投與以刺激免疫反應。例示性佐劑包括完全或不完全 傳氏（Freund's)佐劑、RIBI(胞壁醯二肽）或ISC〇M(免疫刺 激複合物）。該等佐劑可藉由將多肽螯合成局部寄存物來 保護夕肽使其免於快速分散，或其可含有刺激宿主分泌對 於免疫系統之巨噬細胞及其他組份具有趨化性的因子的物 質。杈佳地，若正在投與多肽，則免疫日程將涉及在若干 週内間隔開來分兩次或兩次以上投與多肽。實例2例示在 129694.doc -73 - 200904470
XenoMouse®小鼠中產生抗-lgE單株抗體之方法。 在以IgE抗原對動物進行免疫之後，可自該動物獲得抗 體及/或產生抗體之細胞。在某些實施例中，含有抗^找抗 體之血清藉由將動物放血或處死而自該動物獲得。血清可 如其由動物獲得時之原樣使用，免疫球蛋白部分可自該血 清獲得，或抗-IgE抗體可自血清中純化。 在某些實施例中，產生抗體之細胞株由自經免疫動物中 广 分離之細胞製備。免疫之後，將動物處死且淋巴結及/或 脾臟B細胞以在此項技術中已知之任何方法來永生化。使 細胞永生化之方法包括（但不限於）以致癌基因對其進行轉 染’以致癌病毒將其感染且將其在對於永生化細胞而選擇 的條件下培養’使其經受致癌性或突變化合物，使其與永 生化細胞（例如骨髓瘤細胞）融合，及將腫瘤抑制基因不活 化。參見，例如Harlow及Lane，前述。若使用與骨髓瘤細 胞之融合，則骨髓瘤細胞較佳並不分泌免疫球蛋白多肽 ( (非分泌性細胞株）。永生化細胞使用IgE或其一部分來篩 選。在一較佳實施例中，初始篩選使用酶聯免疫檢定 (ELISA)或放射免疫檢定來執行。EUSA篩選之實例提供 於 WO 00/37504 中。 如以下進一步討論，將產生抗-IgE抗體之細胞（例如融合 瘤）針對合意特性（包括強健之生長、高抗體產生量及合= 抗體特性）來進行選擇、選殖及進一步筛選。融合瘤可^ 活體内在同基因動物中、在缺乏免疫系統之動物（例如裸 既）中，或在活體外在細胞培養物中擴增。選擇、選殖及 129694.doc -74- 200904470 擴增融合瘤之方法為一般熟習此項技術者熟知。 在一較佳實施例中，經免疫之動物為表現人類免疫球蛋 白基因之非人類動物且脾臟B細胞與來自與非人類動物相 同之物種的骨髓瘤細胞株融合。在更佳實施例中，經免疫 之動物為XenoMouse®小鼠且骨髓瘤細胞株為非分泌性小 鼠骨髓瘤。在一甚至更佳之實施例中，骨髓瘤細胞株為 P3-X63-Ag8.653(美國菌種保存中心）。參見，例如以下實 例0 因此，在一實施例中，本發明提供產生產生針對IgE之 人類單株抗體或其片段之細胞株的方法，包含（a)以lgE、 IgE之一部分或表現IgE之細胞或組織對本文中描述之非人 類轉殖基因動物進行免疫；（b)允許轉殖基因動物發動對於 IgE之免疫反應，（c)自轉殖基因動物中分離產生抗體之細 胞’（d)使產生抗體之細胞永生化；（e)建置永生化產生抗 體之細胞之個別單株群體；及⑴篩選永生化產生抗體之細 胞以識別針對IgE之抗體。 在另一態樣中’本發明提供產生人類抗_IgE抗體之細胞 株。在某些實施例中，細胞株為融合瘤細胞株。在某些實 施例中’融合瘤為如上所述之小鼠融合瘤。在其他實施例 中’融合瘤在諸如大鼠、綿羊、豬、山羊、牛或馬之非人 類非小鼠物種中產生。在另一實施例中，融合瘤為人類融 合瘤。 在另一實施例中’轉殖基因動物以IgE抗原免疫，例如 脾臟或周圍金液B細胞之初級細胞自經免疫之轉殖基因動 129694.doc -75- 200904470 物中分離且識別產生對於所需抗 有特異性之抗體的個 別細胞。將來自每一個別細胞之多聚 本脲*呤化mRNA分離 且使用與可變域序列黏接之有義引 我Ή于（例如辨識人類重鏈 及輕鏈可變域基因之FR1區域中之大客 穴多數或全部的簡併引 子)及與恆定或接合區域序列黏接之反義引子來執行反轉 錄聚合酶鍵反應（RT_PCR)。隨後將重鏈及輕鏈可變域之 cDNA在例如骨髓瘤細胞之任何合適宿主細胞中選殖及表 現成具有諸如重鏈及…以域之各別免疫球蛋白怪定區 的嵌合抗體。參見Babcook, J S耸人，d » ，H寻人，pr〇c. Natl, Acad·
5W. tASVi 93:7843-48 1996。i L 5 6 了1^後如本文中描述來識別及 分離抗-IgE抗體。 嗟菌體呈現庫 本發明提供產生抗-IgE抗體或其抗原結合部分之方法， 包含以下步驟：在噬菌體上合成人類抗體之庫，以igE或 其抗體結合部分來篩選該庫，分離結合IgE之噬菌體，及 自噬菌體獲得抗體。舉例而言，製備用於噬菌體呈現技術 之抗體之庫的方法包含以下步驟：以IgE或其抗原性部分 對包含人類免疫球蛋白基因座之非人類動物進行免疫以建 置免疫反應’自經免疫之動物提取產生抗體之細胞；自所 提取細胞中分離編碼本發明之抗體之重鏈及輕鏈2RNa， 反轉錄RNA以產生CDNA，使用引子擴增cDNa，及將 cDNA嵌入嗟菌體呈現載體中以使得抗體表現於噬菌體 上。本發明之重組抗-IgE抗體可以此方式獲得。 本發明之重組人類抗-IgE抗體可藉由篩選重組組合抗體 129694.doc -76 - 200904470 庫來分離。較佳地，該庫為scFv噬菌體呈現庫，其使用由 自B細胞分離imRNA製備之人類乂及vh cDNA來產生。 此項技術中已知製備及篩選該等庫之方法。產生噬菌體呈 現庫之套組可購得（例如Pharmacia重組嗜菌體抗體系統， 產口口 目錄第 27-9400-01 號；及 stratagene SurfZAP™嗟菌體 呈現套組，產品目錄第24061 2號）。亦存在可用於產生及 篩選抗體呈現庫之其他方法及試劑（參見，例如美國專利 第 5,223,409 號；PCT 公開案第 w〇 92/18619 號、第 WO 91/17271 號、第 WO 92/20791 號、第 WO 92/15679號、第 WO 93/01288號、第 WO 92/01047號、第 WO 92/09690號； Fuchs 等人，9:1370-1372 (1991); Hay 等 人，Hum. Antibod. Hybridomas 3:81-85 (1992); Huse 等 人，*246:1275-1281 (1989); McCafferty 等人， iVaiwre 348:552-554 (1990); Griffiths 等人， 12:725-734 (1993); Hawkins等人，J. Μσ/. 5ζ·ο/. 226:889-896 (1992); Clackson等人，勤？好e 352:624-628 (1991);
Gram 等人，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:3576-3580 (1992); Garrad等人，9:1373-1377 (1991);
Hoogenboom 等人，Nuc. Acid Res. 19:4133-4137 (1991); 及 Barbas 等人，/Voc. TVa". Sci. tASJ 88:7978-7982 (1991)，其全部以引用的方式併入本文中。 在一實施例中，為分離及產生具有所需特性之人類抗_ IgE抗體’首先使用PCT公開案第WO 93/062 13號（以引用的 方式併入本文中）中描述之抗原決定基印記法將如本文中 129694.doc -77- 200904470 描述之人類抗-IgE抗體用來選擇具有對於IgE之相似結合 活性的人類重鏈及輕鏈序列。用於此方法之抗體庫較佳為 如以下各文獻中所述製備及篩選之scFv庫：PCT公開案第 WO 92/01047 號；]vicCafferty 等人，TVai⑽ 348:552-554 (1990);及 Griffiths等人 ’ J. 12:725-734 (1993)，其 全部以引用的方式併入本文中。scFv抗體庫較佳使用人類 IgE作為抗原來篩選。 一旦選擇初始人類V L及V H域’則執行"混合及匹配，，實 驗’其中不同對之起初選擇之Vl&Vh區段針對IgE結合來 篩選以選擇較佳VL/VH對組合。額外地，為進一步改良抗 體之品質’可以與在天然免疫反應期間造成抗體親和力成 A之/舌體内體細胞突變過程類似的過程將較佳vl/vh對之 VL及VH區段較佳在^及/或^之CDR3區域内進行隨機突 變。此活體外親和力成熟可藉由使用分別與Vh CDR3或VL CDR3互補之PCR引子擴增Vh及&域而實現，該等引子已 經某些位置上之四種核苷酸鹼基之隨機混合物”強化”以使 得所得PCR產物編碼隨機突變作用已引入其％及/或Vl CDR3域中之vH及vL片段。此等隨機突變之％及Vl區段可 對於與IgE之結合來重新篩選。 在自重組免疫球蛋白呈現庫篩選及分離本發明之抗-IgE 抗體之後’編碼所選擇之抗體之核酸可自呈現包裝（例如 自噬菌體基因組）中回收且藉由標準重組DNA技術次選殖 至其他表現載體中。如下所述，若需要，核酸可進一步處 理以建置本發明之其他抗體形式。如上所述，為表現藉由 129694.doc -78- 200904470 之DNA選 筛選組合庫所分離之重組人類抗體，將編碼抗體 殖至重組表現載體中且引入哺乳動物宿主細胞中 非融合瘤宿主細胞及重組產生蛋白質之方法 在-態樣中’本發明提供允許重組表現本發明抗體或其 部分之重組宿主細胞。在該等重組宿主細胞中藉由該重組 表現產生之抗體在本文中稱為，，重組抗體”。本發明亦提供 該等宿主細胞之子代細胞，及由其產生之抗體。 ϊ " 如本文中利，術語"重組宿主細胞,,（或簡稱"宿主細胞") 意謂其中已引入重組表現載體之細胞。應瞭解，，重组宿主 細胞”及宿主細胞"不僅意謂特定討論之細胞而且意謂該 細胞之子代。因為某些㈣可由於突變或環境影響而發生 於繼代中，該子代實際上可與母細胞不_致，但仍包括於 如本文中所用之術語”宿主細胞，，之範疇内。 該細胞可包含如上所述之根據本發明之載體。 在另匕、樣中，本發明提供製造如上所述之抗體或其部 分之方法。根據—實施例，該方法包含培細如上所述之 載體轉染或轉型之細胞，及回收該抗體或其部分。 編碼抗-IgE抗體之核酸分子及包含此等核酸分子之載體 可用於轉染合適哺乳動物、植物、細菌或酵母宿主細胞。 轉型可藉由將聚核普酸引人宿主細胞中之任何已知方法進 行。將異源聚核㈣引人哺乳動物細胞中之方法在此項技 =、“、、♦且包括葡聚糖介導之轉染、磷酸鈣沈澱、聚凝胺 介導之轉染、原、生質體融合、電穿孔、聚核苷酸在脂質體 封裝及將DN A直接微注射至細胞核中。另外，可藉由 129694.doc •79· 200904470 病毒載體將核酸分子引入哺乳動物細胞中。轉型細胞之方 法在此項技術中熟知。參見，例如美國專利4,399,216、 4,912,040、4,740,461及4,959,455。轉型植物細胞之方法 在此項技術中熟知，包括例如農桿菌屬介導之轉型、生物 彈射擊（biolistic)轉型、直接注射、電穿孔及病毒轉型。轉 型細菌及酵母細胞之方法在此項技術中亦熟知。 可用作用於表現之宿主的哺乳動物細胞株在此項技術中 热知且包括可購自美國菌種保存中心（ATCC)之許多永生化 細胞株。此等尤其包括中國倉鼠卵巢（CH〇)細胞、NS〇細 胞、SP2 細胞、HEK-293丁細胞、293 Freestyle 細胞 (Invitrogen)、NIH-3T3細胞、海拉細胞（HeLa ce⑴、幼小 倉鼠腎臟（BHK)細胞、非洲綠猴腎臟細胞（c〇s)、人類肝 細胞癌細胞（例如Hep G2)、A549細胞及許多其他細胞株。 經由測定哪些細胞株具有高表現量來選擇特定較佳之細胞 株。可使用之其他細胞株為昆蟲細胞株’諸如S f 9或s f 21 細胞。當將編碼抗體基因之重組表現載體引入哺乳動物宿 主細胞中時，該等抗體係藉由將該等宿主細胞培養一段足 以允許該抗體在宿主細胞中表現或更佳該抗體分泌至該等 宿主細胞在其中生長之培養基中的時間來製備。抗體可使 用標準蛋白質純化方法自培養基中回收。植物宿主細胞包 括例如於草、芥菜屬、浮萍、玉米、小麥、馬鈴薯等。細 菌宿主細胞包括大腸桿菌及鏈黴菌物種。酵母宿主細胞包 括粟/酉裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe)、釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)及甲醇酵母（Pichia pastoris)。 129694.doc •80· 200904470 另外’本發明抗體或直八 _ ^ σ . ”邛刀自製備細胞株之表現可使用 許夕已知技術來增強。例 从（r^ j如麵私醯胺合成酶基因表現系 統（GS糸統）為用於在—…
' 疋條件下增強表現之常見方法。GS 系統與 EP專利 〇 216 846、〇 256 Λ υ 256 055 、 〇 323 997及0 338 841有關完全或部分地得以討論。
不同、田胞株表現或在轉殖基因動物中之抗體可能具有 彼此不同之糖基化模式。然而’與抗體之糖基化狀態無 關，且更通常與後轉譯修飾存在與否無關，由本文中提供 之核酸分子編碼或包含本文中提供之胺基酸序列的所有抗 體為本發明之一部分。 轉殖基因動物及植物 本發明之抗-IgE抗體亦可經由產生轉殖產生所關注之免 疫球蛋白重鏈及輕鏈序列之哺乳動物或植物及自其中製備 呈可回收形式之抗體來以轉殖基因方式產生。與哺乳動物 中之轉殖基因製備有關，抗-IgE抗體可在山羊、牛或其他 哺乳動物之乳中產生且自其中回收。參見，例如美國專利 5,827,690、5,756,687、5,750，172 及 5,741，957。在某些實 施例中，如上所述，包含人類免疫球蛋白基因座之非人類 轉殖基因動物以人類IgE或其免疫原性部分來免疫。在植 物中製造抗體之方法例如描述於美國專利6,046,037及 5,959,177 中。 在某些實施例中，非人類轉瘦基因動物或植物藉由經由 標準轉殖基因技術將一或多個編碼本發明之抗-IgE抗體之 核酸分子引入動物或植物中來產生。參見Hogan及美國專 129694.doc • 81 · 200904470
利6,417,429，前述。用於製造轉殖基因動物之轉殖基因細 胞可為胚胎幹細胞或體細胞或受精卵。轉殖基因非人類生 物體可為嵌合、非嵌合雜合子及非嵌合純合子。參見，例 如 Hogan 等人，Manipulating the Mouse Embryo； A
Zabraiory Mawwa/ 第 2 版，Cold Spring Harbor Press
(1999); Jackson等人 ’ Afowse TVawsgem'd· J 户rachca/ dpproac/2，Oxford University Press (2000);及
Pinkert, Transgenic Animal Technology； A Laboratory //a«办0〇A:，Academic Press (1999)。在某些實施例中，轉殖 基因非人類動物具有經由編碼所關注之重鏈及/或輕鏈之 乾向構築體之乾向破環及置換。在一較佳實施例中，轉殖 基因動物包含且表現編碼與人類IgE特異性地結合之重鏈 及輕鏈的核酸分子。抗-IgE抗體可在任何轉殖基因動物中 製得。在一較佳實施例中，非人類動物為小鼠、大鼠、綿 羊、豬、山羊、牛或馬。非人類轉殖基因動物在血液、 礼、尿、唾液、眼淚、黏液及其他體液中表現該等經編碼 之多肽。 醫藥組合物，治療哮喘及其他i获介導之病症的方法 在一態樣中，根據本發明之抗體或其部分適用作藥物。 在另一態樣中，根據本發明之抗體或其部分用於治療哮 喘、尤其過敏性哮喘。 如上所述，哮喘及過敏性哮喘在此
在另一態樣中 急促、胸悶及咳漱之症狀。 根據本發明之抗體或其部分用於治療其 129694.doc • 82 · 200904470 匕括過破性鼻炎及食物過敏症（包括花 過敏性鼻炎通常涉及在暴露於空t傳播的顆粒之後出現 的午夕症d大I括主要在鼻、竇及眼睛中之發炎性症狀。 症狀匕括打喷是，#阻塞；流鼻洋(及偶爾鼻出血）丨咳 嗽’頭痛口腔、眼睛、咽喉、皮膚或暴露於過敏原 之任何區域發癢；嗅覺（且因此對於氣味之敏感性）削弱； 鼻塞；結膜炎；流眼淚；咽喉痛；及喘鳴。 過敏性鼻炎可為常年型及/或季節型。常年型過敏性鼻 炎為持續整年之過敏性鼻炎。其通常由連續暴露於諸如動 物皮屬、至内黴菌孢子或室内塵蜗之過敏原引^。季節型 :敏!·生鼻火為僅在—年之某些時期期間出現之過敏性鼻 人其通吊由對於季節性地產生之樹、草及雜草花粉之過 敏引起。
他IgE介導之病症 生過敏症）。 ^物過敏為由雞蛋、花生、乳或某—其他特殊食物觸發 之冷不免疫反應。任何食物均可導致過敏反應但一些食 物為主要起因。在兒童中’最常見食物過敏症為對於雞 花生乳、大豆、木本堅果、小麥、貝（蝦、蟹、龍 :蝸牛、蛤）之過敏症。在年齡稍大兒童及成人中，最 吊見“勿過敏症為：花生、木本堅果、貝、魚之過敏症。 ； 可主要褐限於胃及腸，或在食物消化或吸收之後可涉 賤之許多部分。症狀可包括：咽喉刺痛、過敏性反應 (可導一 死亡之嚴重全身過敏反應）；腹痛；腹瀉；噁心； 口·田 _ι_ ，月痙攣；口腔、咽喉、眼睛、皮膚或任何區域之發 '29694.doc • 83 - 200904470 癢；麻疹；血管性水腫（腫脹，尤其眼瞼、面容、口唇及 舌）·；頭暈或暈厥；鼻塞；流鼻洋；氣促；喘鳴；㈣困 難；口腔過敏症候群。口腔過敏症候群通常包含口辰、舌 及咽喉發疼且有時唇腫。 在另-態樣中’根據本發明之抗體或其部分用於治療其 他IgE介導之病症，諸如結膜炎、異位性皮膚炎、過敏性 反應、接觸性皮炎、過敏性胃腸病、過敏性肺麯黴病、過 敏性紫癜、濕疹、超IgE(喬氏（Job，s))症候群、過敏性過敏 症、IgE骨髓瘤、發炎性腸道疾病（例如克羅恩氏症 (Crohn’s disease)、潰瘍性結腸炎、未確定型結腸炎及感染 性結腸炎）、蓴麻療、牛皮癖。 V' 在一怨樣中，本發明提供包含如上所述之抗體或其部分 的醫藥組合物。 本發明之抗體或其部分可單獨或與一或多種本發明之其 他抗體組合或與一或多種其他藥物組合（或呈其任何組合 之形式）來投與。如以下詳述，本發明之醫藥組合物、方 法及用途因此亦包涵與其他活性劑組合（共同投與）之實施 例。 如本文中所用，關於本發明抗體及一或多種其他治療劑 之術語"共同投與”及”組合”意欲意謂以下情況且係指以下 情況且包括以下情況： -將本發明之抗體與治療劑之該組合同時投與需要治療之 患者，其中該等組份一起調配成大體上同時將該等組份釋 放至該患者的單一劑型， 129694.doc • 84- 200904470 -將本發明之抗體與治療劑之該組合大體上同時投與需要 治療之患者’其中S亥專組份彼此分開調配成大體上同時由 該患者服用之獨立劑型，因此將該等組份大體上同時釋放 至該患者， f \ -將本發明之抗體與治療劑之該組合順次投與需要治療之 患者，其中該等組份彼此分開調配成在各次投與之間之顯 著時間間隔下由該患者連續服用之獨立劑型，因此將該等 組份大體上在不同時間釋放至該患者；及 ••將本發明之抗體與治療劑之該組合順次投與需要治療之 患者，其中該等組份一起調配成以控制方式釋放該等組份 之單一劑型，因此其在同一及/或不同時間同時、連續及/ 或重疊地釋放至該患者， 其中每一部分可由相同或者不同途徑投與。 在一態樣中，本發明抗體可與用於治療哮喘之另一藥物 共投與或調配。例如，本發明抗體可與選自由以下各物組 成之群之或夕者共投與或共調配：類固醇，包括皮質類 固醇（吸入，經口）；支氣管擴張劑（諸如長效β-2促效劑； 短效β-2促效劑）.装仙ρ }其他抗“非劑，諸如IgE疫苗；白三烯栌 抗劑/抑制劑；甲基黃嘌a · σ 汽不？，針對涉及氣管發炎之介白素 的抗體，例如針針4 +、ττ，，> ^ Τ對1L_4或IL_134TNF之單株抗體；色甘 酉文’諸如色甘酸鈉；奈 '、羅米納（ned〇cromil sodium) ; ϋ 膽驗能劑及PDE抑制劑。 醇=樣中，本發明之抗體可與抗組織胺劑、非類固 “樂物、減充血劑、咳漱抑制劑及止痛藥之至少—者 129694.doc •85- 200904470 組合投與。 ::丨發明之抗體或其部分適於以結合一或多種醫藥 可接受之賦形劑之調配物形式盥。 : 語，賦形劑，以描述除本發明之 用術 σ物以外的任何成份。賦 形劑之選擇在很大程度上視諸如特定投與模式、賦形劑對 於命解性及穩定性之效應及劑型之性質之因子而定。如本 文中所：’：醫藥學上可接受之賦形劑"包括任何及所有生 理上相容之溶劑、分勒·介暫、冷止，丨 、 〜 抗菌劑及抗真菌劑、 專滲劑及吸收延遲劑及其類似物1藥學上可接受之賦形 劑之-些實例為水、鹽水、鱗酸鹽緩衝生理食鹽水、右旋 糖、甘油、乙醇及其類似物以及其組合。在多數情況下， 較佳於組合物中包括等渗劑，例如糖、多元醇(諸如甘露 糖醇、山梨糖醇)或氣化鈉。醫藥學上可接受之物質的額 外實例為濕潤劑或微量助劑物質’諸如濕潤或乳化劑、防 腐劑或緩衝劑’其增強抗體之存放期或有效性。
V 本發明之醫藥組合物及其製備方法容易為熟習此項技術 者瞭解。言亥等組合物及其製備方法可例如見驗—心 Pharmaceutical Sciences ^ % 19 ^ (Mack Publishing
Company，1995)中。醫藥組合物較佳在GMp條件下製造。 本發明醫藥組合物可以散裝形式、以單一單位劑量形式 或以複數個單-單位劑量形式製備、封裝或銷售。如本^ 中所用’ 單位劑量’’為包含預定量之活性成份的離散量之 醫藥組合物。活性成份之量通f等於投與個體之活性成份 之劑量，或該劑量之便利分率，諸如該劑量之二分之—或 129694.doc -86 - 200904470 三分之一。 在此項技術中公認之投與肽、蛋白質或抗體之任何方法 可合適地用於本發明之抗體及部分。 本發明之醫藥組合物通常適於非經腸投與。如 ’、 个又τ所 用，醫藥組合物之”非經腸投與"包括以個體之組織之實體 破裂及經由組織中之裂口投與醫藥組合物為特徵的任何= 藥途徑，因此通常導致直接投與至血流中、肌肉中或内2 為B中。因此，非經腸投與包括（但不限於）藉由注射組合 物、藉由透過手術切口施加組合物、藉由透過穿透組織之 非手術創口施加組合物及其類似方式來投與醫藥組合物。 特疋而5 ，預期非經腸投與包括（但不限於）皮下、腹膜 内、肌肉内、胸骨内、靜脈内、動脈内、鞘内、心室内、 尿道内、顱内、滑膜内注射或輸注；及腎臟滲析輸注技 術。較佳實施例包括靜脈内及皮下途徑。 L於非經腸投與之醫藥組合物之調配物通常包含與諸如 無菌水或無菌等渗鹽水之醫藥學上可接受之載劑組合之活 性成份。該等調配物可以適於大丸劑投與或適於連續投與 形式製備、封褒或銷售。可注射調配物可以單位劑型諸 如在安瓶中或在含有防腐劑之多劑量容器中製備、封裝或 M 腸才又與之調配物包括（但不限於）油性或水性媒 ^中之懸浮液、溶液'乳液，糊劑及其類似物。該等調配 物可另外#^ 3多種額外成份’包括（但不限於）懸浮 ^ '穩定劑或分散南丨 狀在非經腸投與之調配物之一實施例 平’活性成份係以乾焯r介p丨、丄 L知（亦即粉末或粒狀）形式提供，以便 129694.doc -87· 200904470 在以合適媒劑（例如無菌無熱原水）復水之後非經腸投與復 水組合物。非經腸調配物亦包括可含有諸如鹽、碳水化合 物及緩衝劑（較佳達3至9^pH值）之賦形劑的水溶液，但對 於-些應用，其可更合適地調配成無菌非水溶液，或調配 成與諸如無菌無熱原水之合適媒劑結合使用的乾焊形式。 例示㈣經腸投與形式包括例如丙二醇或右旋料=之 …、菌水/合液中之溶液或懸浮液。若需要，該等劑型可合適 地、&緩衝。其他適用的可非經腸投與之調配物包括呈微晶 形式或呈脂質體製劑形式之包含活性成份之彼等調配物。 非經腸投與之調配物可經調配以即刻釋放及/或修飾釋 放。修飾釋放調配物包括延遲釋放、持續釋放、脈衝釋 放、控制釋放、靶向釋放及程式化釋放。 例如’在一態樣中’無菌可注射溶液可藉由將所需量之 抗-IgE抗體視需要與以上列舉之成份之一者或其組合一起 併入合適溶劑中，繼之以過濾滅菌來製備。通常，分散液 藉由將活性化合物併人含有驗性分散介質及來自彼等以上 所列舉者之所需其他成份的無菌媒劑中來製備。在使用用 於製備無菌可注射溶液之無菌粉末的情況下，較佳製備方 法為真空乾燥及冷純燥，其產生活性成份加來自其先前 滅菌過濾溶液之任何額外所需成份的粉末。可（例如）藉由 使用塗料(諸如卵磷脂)、藉由在分散情況下維持所需粒徑 及藉由使用界面活性劑來保持溶液之適當流動性。可藉2 包括延遲吸收之試劑(例如單硬脂酸鹽及明膠)於組合：中 來實現可注射組合物之延長吸收。 129694.doc •88· 200904470 本發明之例示性非限制性醫藥組合物為呈無菌水溶液形 式之調配物，其具有約5.0至約6 5範圍内之pH值，且包含 約1 mg/mL至約200 mg/mL之本發明抗體、約j mM至約ι〇〇 mM之組胺酸緩衝劑、約〇.〇1 mg/mL至約1〇之聚山 梨醇酯80、約1〇〇 mM至約4〇〇 mM之海藻糖及約〇〇ι 至約1.0 mM之EDTA二鈉二水合物。 本發明之抗體亦可在使用或不使用合適推進劑之情況下 通常以乾粉形式（單獨、呈與合適醫藥學上可接受之賦形 劑混合之混合物形式或混合組份顆粒形式）自乾粉吸入器 以氣溶膠喷霧形式自增壓容器、泵浦、喷霧器（spray)、霧 化器（較佳使用電水動力學以產生精細霧狀物之霧化器）或 喷霧器（nebuliser)或以滴鼻劑形式經鼻内或藉由吸入來投 與。 增壓容器、泵浦、噴霧器（spray)、霧化器或噴霧器 (nebuliser)通常含有本發明抗體之溶液或懸浮液該溶液 或懸洋液包含例如用於分散、溶解或延長釋放活性物的合 適劑、作為溶劑之推進劑。 在用於乾粉或懸浮液調配物中之前，藥品通常經微粉化 至適於藉由吸入來輸送之大小（通常小於5微米）。此可藉由 任何適當碾碎方法來達成，諸如形成奈米顆粒之螺旋噴射 研磨、流化床噴射研磨、超臨界流體處理，高壓均化或噴 霧乾燥。 ' 用於吸入器或吹入器中之膠囊、發泡藥及藥筒可經調配 以含有本發明化合物之粉末混合物、合適粉末基質及效能 129694.doc -89- 200904470 改質劑。 用於使用電水動力學以產生精細霧狀物之霧化器中之合 適溶液調配物可含有每次致動之合適劑量之本發明抗體且 致動體積可例如在1 pL至1 00 pL之範圍内變動。 諸如薄荷腦及左薄荷腦之合適調味劑或諸如糖精或糖精 納之甜味劑可添加至彼等意欲吸入/鼻内投與之本發明之 調配物中。 吸入/鼻内投與之調配物可經調配以即刻釋放及/或修飾 釋放。修飾釋放調配物包括延遲釋放、持續釋放、脈衝釋 放、控制釋放、乾向釋放及程式化釋放。 在乾卷吸入器及氣務益之情況下，劑量單位藉助於輸送 經計量之量的閥來確定。根據本發明之單位通常經配置以 投與經計量之劑量或”噴送量"之本發明抗體。總日劑量一 般以單一劑量形式或更通常以一日期間之分次劑量形式來 投與。 本發明之抗體及抗體部分亦可經調配以經口途徑投與。 經口投藥可涉及使得化合物進入胃腸道之吞咽及/或化合 物藉以直接自口腔進入血流之頻内、經舌或舌下投與。 適於經口投藥之調配物包括固體、半固體及液體系統， 諸如錠劑；含有多或奈米微粒、液體或粉末之軟或硬膠 囊’ 口含劑（包括液體填充型）；咀嚼劑；凝膠劑；快速分 散劑型；膜劑；胚珠；噴霧劑；及頰内/黏膜黏附貼片。 液體調配物包括懸浮液、溶液、糖漿劑及酏劑。該等調 配物可用作軟或硬膠囊（例如自明膠或羥丙基曱基纖維素 129694.doc -90· 200904470 :付)：之填充劑且通常包含例如水、乙醇、$乙二醇、 甲基纖維素或合適油之載劑及一或多種乳化劑及/ 來製^ 。液體調配物亦可藉由將固體例如自藥囊中復水 哮^。^樣中’該醫藥組合物用於治療哮喘，包括過敏性 f 在另-態樣中，該醫藥组合物用於治療其他咕介導之 :::包括過敏性鼻炎、食物過敏症(諸如花生過敏症)、 、，'口膜炎、異位十峰由當火 、 膚犬、過敏性反應、接觸性皮炎、過敏 病㈣n過敏性紫癒、濕療、超
IgE( rsj氏）症候群、過敏柯、两台々产 矸過破丨生過敏症、IgE骨髓瘤、發炎性腸 道疾病（例如克羅恩氏症 火 貝為14 1口腸火、未確定型結腸 火及感染性結腸炎)、蓴痲疹、牛皮癣。 山在另恶樣中’本發明提供治療有需要之個體中之哮 口而、尤其過敏性哮σ史沾士 的方法，其包含向該個體投與治療有 效里之如上所述之抗體或其部分。
〜、樣中，本發明提供治療有需要之個體中之IgE 7丨導之病症的方沐，甘^人 去八包含向該個體投與治療有效量之如 上所述之抗體或其部分。 性m導之病症可選自由以下各病症組成之群：過敏 、民物過敏症(諸如花生過敏症)、結膜炎、異位性 皮膚乂、過敏性反廣、垃雜u丄 接觸性皮炎、過敏性胃腸病、^ & 性肺麯黴病、過敏性紫癍 '瓦次 丙過敏 廄轉、超1找（喬氏）症候群、過 敏性過敏症、IgE骨趟瘤、發炎性腸道疾病（例如克羅恩氏 129694.doc 91 200904470 症、潰瘍性結腸炎、未確定型結腸炎及感染性結腸炎）、 蓴痲疹、牛皮癬。 在另一態樣中，本發明提供治療有需要之個體之寄生蟲 感染的方法，丨中該寄生蟲感染與較高IgE含量相關。在 -態樣中，該方法包含向該個體投與一定量之本發明抗 體，其中該量足以以使得個體之IgE含量在治療過程中不 可谓測之方式來降低個體之IgE含量。 在另一態樣中，本發明提供如上所述之抗體或其部分在 製造用於治療選自由哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食 物過敏症組成之群的IgE介導之病症之藥物中的用途。 在另態樣中，本發明提供如上所述之抗體或其部分在 製造用於治療選自由以下各病症組成之群之IgE介導之病 症之藥物中的用途：結膜炎、異位性皮膚炎、過敏性反 應、接觸性皮炎、過敏性胃腸病、過敏性肺麯黴病、過敏 I"生冬瘋濕療、超IgE(喬氏）症候群、過敏性過敏症、igE 骨髓瘤、發炎性腸道疾病（例如克羅恩氏症、潰瘍性結腸 炎、未確定型結腸炎及感染性結腸炎）、蓴痲療、牛皮 癖。 ·'治療”係指減輕或消除生物病症及/或其伴隨症狀之至少 一者的方法。如本文中所用，”減輕"疾病、病症或病狀意 5胃降低疾病、病症或病狀之症狀之嚴重程度及/或出現頻 率另外，在本文中長·及治療•'包括提及治癒性、緩解性 及預防性治療。 在一癌、樣中’個體為哺乳動物，較佳人類個體。該個體 129694.doc -92- 200904470 可為任何年齡之雄性或者雌性。 症之症狀 ，治療有 胸悶、喘 治療有效量，’係指在某種程度上減輕所治療病 之-或多者的所投與治療劑之量。關於治療哮喘 效量係指減輕以下症狀之至少一者之量：氣促、 鳴、咳嗽。 給藥方案可經調整以提供最佳所需反 ί 投與單-丸劑，可隨時間投與若干分次劑量或劑量；隨: 療情況之迫切要求所指示按比例降低或增加。尤其有; 地’將非經腸組合物調配成單位劑型以便於投藥及劑量； 均一性。如本文中所用之單位劑型係指適合作為單次⑹ 用於待治療之患者/個體的實體離散單位；各單位含= 定數量之計劃與所需醫藥載劑相關聯用以產生所需:療交 應的活性化合物。本發明之單位劑型的規格通常由以下: 素來限;t且直接視其而定：⑷化療劑之獨有特性及待^ 之特定治療或預防效應，及(b)混配該活性化合物以治療啦 體中之敏感性的技術中所固有的限制。 ％' 因此’熟練此項技術者基於本文中提供之本揭示宰應理 解劑量及給藥方案係根據治療技術中熟知之方法來調: 亦即，可容易地確立最大可容許劑量，且如同可確定二 每一藥劑以向患者提供可偵測治療益處之臨時 Λ /、 亦可確定向患者提供可偵測治療益處的有效量。因此， 然本文中例示某些劑量及投與方案，但是此等實例決不^ 制在實踐本發明中可向患者提供之劑量及投與方案。又 應注意劑量值可隨待減輕之病狀之類型及嚴重程户 而變 129694.doc -93 - 200904470 化，且可包括單一或多次劑量。應進 定個體，特定方索 α ,瞭解對於任何特 督組合物^ ㈣個體㈣及投與組合物或監 又 >、之個人之職業判斷來隨時間調整， 闡明之劑量範圍僅為例 本文中 合物之範•或實務人 來限制所主張之組 I , 實 外’本發明之組合物之給藥方窣可 土於夕種因子’包括疾病類型，患者之年齡、^ ' 別、醫學病狀，病狀之嚴重度 1± ^M m , 仅锻迷徑’及所用特定
給藥方案可廣泛變化，但可使用標準方心 :=確：。例如，劑量可基於藥物動力學或藥效學參數 周i，其可包括諸如毒性效應之臨床效應及/或實驗室 值。因此’本發明包涵如由熟練此項技術者所確定之串者 内劑量擴大。確定適當劑量及方案在相關技術中熟知且應 理解熟練此項技術者—旦獲得本文中揭示之教示，即可* 成此確定。 疋 對於投與人類個體，當然視投與模式而^ ’本發明抗體 或抗體部分之總每月劑量通常在每患者0.5-削mg之範圍 ^例如’靜脈内每月劑量可需要約卜刪毫克/患者。總 母月劑置可以單一或分次劑量投與且可在醫師之酌情處理 下超出本文中給定之典型值範圍。 本發明抗體或抗體部分之治療或預防有效量之例示性非 限制性範圍為1-1000毫克/患者/月。在一實施例中，本發 明之抗體或其部分可以約卜15〇毫克/患者/月來投 與0 為了可更好地瞭解本發明，闈明以下實例。此等實例僅 129694.doc •94· 200904470 為達成說明之目的且不應理解為以任何方式限制本發明之 範疇。 本說明書中引用之所有公開案、專利及專利申請案以引 用的方式併入本文中。儘管為達成清楚瞭解之目的已經由 說明及實例相當詳細地描述以上本發明，但一般熟習此項 技術者應顯而易見按照本發明之教示可在不悖離附加申請 專利範圍之精神或範疇之情況下對其進行某些變化及修 改。 實例1 :免疫原
以下序列為來自用作融合體6(產生編號以6開始之純 系，包括6.605.1)之免疫原的人類1§£的£重鏈〇2-€4域： PTVKILQSSCDGGGHFPPTIQLLCLVSGYTPGTINITWLEDGQVMDVD LSTASTTQEGELASTQSELTLSQKHWLSDRTYTCQVTYQGHTFEDSTK KCADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWS RASGKPVNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTH PHLPRALMRSTTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNF MPEDISVQWLHNEVQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEW EQKDEFICRAVHEAASPSQTVQRAVSVNPGK 以下C3-C4序列為來自用作融合體5(產生編號以5開始之 純系，包括5.396.1及5.948.1)之免疫原的人類IgE的ε重鏈 C3-C4域之預測序列：
CADSNPRGVSAYLSRPSPFDLFIRKSPTITCLVVDLAPSKGTVNLTWSR
ASGKPVNHSTRKEEKQRNGTLTVTSTLPVGTRDWIEGETYQCRVTHP
HLPRALMRSTTKTSGPRAAPEVYAFATPEWPGSRDKRTLACLIQNFM 129694.doc -95- 200904470
PEDISVQWLHNEVQLPDARHSTTQPRKTKGSGFFVFSRLEVTRAEWE
QKDEFICRAVHEAASPSQTVQRAVSVNPGK 實例2:免疫及融合瘤產生
八至十週齡XenoMouse®小鼠在其後部足墊中以10微克/ 小鼠之抗原來免疫。此劑量在三至五週期限内重複六至八 次。融合之前三或四日，給予小鼠最終注射之PB S中之免 疫原。來自經免疫之小鼠之脾臟及淋巴結淋巴細胞經由電 細胞融合與非分泌性骨髓瘤P3-X63-Ag8.653細胞株（ATCC / ' 產品目錄第CRL 1580號）融合，且此等融合細胞經受如先 前所述之 HA-DMEM 選擇（DMEM，15% FBS，1% 200 mM L-麩胺醯胺，1% 100X非必需胺基酸1% 100X Pen/Strep， 10 U/ml IL-6，1小瓶/公升OPI培養基補充劑，加0.5X HA(重氮絲胺酸-次黃嘌吟，Sigma，產品目錄第A9666 號））。回收一組全部分泌IgE特異性人類IgG2抗體之融合 瘤。 ELISA檢定用以偵測抗體結合。在4°C下將免疫原以50 mM碳酸氫納緩衝液中之4 pg/mL之濃度來塗佈至96孔 Immulon微量滴定板（NUNC-Immuno™板 MaxiSorpT 表面， Nalge Nunc International，產品目錄第 439454號）。將板洗 滌，且隨後以添加0.1%吐溫-20及0.5%牛血清白蛋白之PBS 來阻斷。將抗體添加至經阻斷之ELIS A板，培育1小時， 且以具有吐温-20之PBS洗滌。結合由抗-人類IgG-辣根過 氧化物酶（Pierce，產品目錄第31420號）偵測，繼之以添加 ABTS(Pierce，產品目錄第37615號）。比色量測在405 nm 129694.doc -96- 200904470 下在微板讀取器（SpectraMax Plus 384，Molecular Devices) 中執行。 經選擇用於進一步研究之融合瘤為由限制稀釋法選殖之 单一細胞。 實例3 :本發明之抗-IgE抗體之序列 如下自融合瘤選殖全長抗-IgE抗體且進行序列驗證： 聚（A)+ mRNA使用RNeasy微型套組（Qiagen，產品目錄 第 74104號）分離且以用於 RT-PCR之 Superscript III First-Strand合成系統（Invitrogen，產品目錄第18080051號）使用 寡聚（dT)引發而自mRNA合成cDNA。純系5.396.1、6.605.1 及5.948.1之經寡聚（dT)引發之cDNA分別使用列於表1、2 及3中之基因特異性引子來擴增。擴增使用Taq DNA聚合 酶（Roche，產品目錄第1146173號）及PTC-200 DNA引擎 (MJ Research)以如下循環來達成：對於重鏈，在94。(3下 2，； 5x(在 94°C 下 30"，在 50°C 下 30”，在 68。(：下 2,30"); 25X(在 94°C 下 30”，在 68t：下 30"，在 68。(：下 2'30，，）；在 68°C 下5'，對於輕鍵，在94°C下2' ; 5x(在94°C下30"，在50°C下 30”，在 68t：下 Γ30") ; 25X(在 94°C 下 30"，在 68°C 下 30", 在68°C下1'3 0”）；在68°C下5'。使用標準方案將pcr擴增子 選殖至pCR2.1 TOPO(Invitrogen ’產品目錄第450641號）中 且轉型至DH5a化學感受態細胞（Invitrogen，產品目錄第 18258012號）中。純系使用 Grills 16th BDTv3.1/dGTP化學 (Applied Biosystems Inc)及 3730x1 DNA 分析器（Applied Biosystems Inc)進行序列驗證。所有序列均藉由與”v 129694.doc -97- 200904470 BASE序歹ij目錄”比對來分析（Tomlinson等人，J. Μο/. 5/σ/.， 227, 776-798 (1992); Hum. Mol. Genet., 3, 853-860 (1994); 五MBO /.，14, 4628-4638 (1995)。該等分子之生殖系基因 區段用途列於表4中。 表1 : 5.396.1之引子（5'至3’)
4-34 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTGCAGCT ACAGCAGTGG G—3UTR—R TACGTGCCAAGCATCCTCGC K—012 CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGACATCCAGATG ACCCAGTCTCC K_3UTR_R AGGCTGGAACTGAGGAGCAGGTG
表2 : 6.605.1之引子（5'至3J
oQVHLVQS_Vh5'-620 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGT TCACCTGGTGCAGTCT G—3UTR—R TACGTGCCAAGCATCCTCGC ol06-2A10-VL5'-384 CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGACATC CAGATGACCCAGTCT K_3UTR—R AGGCTGGAACTGAGGAGCAGGTG 表3 : 5.948.1之引子（5’至3')
oS255E7a5blVh5'-288 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGT GCAGCTGGTGCAGTCT G—3UTR—R TACGTGCCAAGCATCCTCGC KA19 CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGATATTG TGATGACTCAGTCTCCAC K一 3UTRR AGGCTGGAACTGAGGAGCAGGTG 由融合瘤產生之抗-IgE抗體之全長序列如下（可變域呈大 寫體，CDR區域加下劃線）： 129694.doc •98· 200904470 表4 :由融合瘤產生之本發明抗-IgE抗體之序列 來自融合瘤之mAb 序列識別符SEQ ID NO 5.396.1 6.605.1 5.948.1 重鏈 全長 DNA 101 105 109 蛋白質 102 106 110 輕鏈 全長 DNA 103 107 111 蛋白質 104 108 112 以下表5提供自融合瘤分離之根據本發明之抗-IgE抗體 之生殖系基因區段用途及同型： 表5 :自融合瘤分離之抗-IgE抗體之生殖系基因區段用途 及同型 純系 重鏈 輕鏈 同型 VH D Jh VK Jk 5.396.1 4-34 1-1 JH6b LI JK3 IgG2 6.605.1 1-18 3-22 JH4b 012 JK1 IgG2 5.948.1 1-08 3-22 JH6b A3 JK4 IgG2 以下序列分析展示生殖系與所表現序列之比對（一致殘 基由破折號展示，缺失/敌入由散列符號展示，列出突 變，且CDR加下劃線）。 本發明抗體有利地為完全人類抗體。與（人源化）鼠類抗 體相比較，此增加用於人類中之安全性。 5.396.1 V«
生殖系 QVOLQOWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIROPPGKGLEWIGEINHSGSTNYNPSLKS 5.396.1 -----------------------------------------------------------------------------------------------------Η------------------------ 129694.doc -99- 200904470
生殖系 RVTISVDTSKNOFSLKLSSVTAADTAVYYCARDNWND##YYYYGMDVWGOGTTVTVSS 5.396.1 -----------------------------------------------------------------------SF--------------------------------------
Vk
生殖系 DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASOGISNYLAWFOOKPGKAPKSLIYAASSLOS 5.396.1 --------------------------------------------------------H-----------------------------------------------
生殖系 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOYNSYPFTFGPGTKVDIK 5.396.1 --------K----------------------------------------------------RH----------------------- 6.605.1
VH
生殖系 OVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVROAPGOGLEWMGW1SAYNGNTNYAOKLOG 6.605.1 ——H----------------M-----------------------------------------------------------------------------------------------------
生殖系 RVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARYYYDSSGYYYYFDYWGOGTLVTVSS 6.605.1 -I--------------------------D------------------------------UUMOGD——DP-----------------------------
Vk (-
生殖系 DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASOSISSYLNWYOOKPGKAP1CLLIYAASSLOS 6.605.1 -------------------------------------------T-——-NW-------------------------------G——T-K-
生殖系 GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOSYSTPWTFGOGTKVEIK 6.605.1 ---------------E----------------------------------------------------P--------------------- 5.948.1
VH
生殖系 OVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYP1NWVROATGOGLEWMGWMNPNSGNTGYAOKFOG 5.948.1 ----------------------------------------------------------------------------------------------------D--------------------------
生殖系 RVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTAVYYCAR##YDS###YYYYGMDVWG〇GTTVTVSS 5.948.1 -------------------------------------------------------------GHDGY-SFS---------------------------
Vk
生殖系 DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHSNGYNYLDWYLOKPGOSPOLLIYLGSNRAS 5.948.1 ---------------------------------------------------------R----------------------------------------------------------
生殖系 GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMOALOTP##TFGGGTKVEIK 5.948.1 ----------------------------------------------------------------------------PA--------------------- 實例4 :本發明抗-IgE抗體之可變域之選殖 將抗-IgE抗體可變域如下選殖至表現載體中： 聚（A)+ mRNA使用RNeasy微型套組（Qiagen，產品目錄 第 74104 號）分離且以用於 RT-PCR 之 Superscript III First-Strand合成系統（Invitrogen，產品目錄第18080051號）使用 寡聚（dT)引發而自mRNA合成cDNA。可變域自寡聚（dT)引 發之cDNA使用列於表6、7及8中之引子來擴增。擴增使用 -100- 129694.doc 200904470
TaqDNA聚合酶（Roche，產品目錄第l-146-173號）及PTC-200 DNA引擎（MJ Research)以如下循環來達成：在94°C下 2’ ； 5x(在 94°C 下 30"，在 50°C 下 30"，在 68°C 下 30”）； 25x(在 94°C 下 30"，在 68°C 下 30"，在 68°C 下 30”）；在 68°C 下 5'。隨後將可變域選殖至含有CMV啟動子、適當同型之恆 定域及轉錄終止子/聚A信號之哺乳動物表現載體中。此等 純系使用 Grills 16th BDTv3.1/dGTP 化學（Applied Biosystems Inc)及 3730x1 DNA分析器（Applied Biosystems ' Inc)進行序列驗證。 表6: 5.396.1之可變域引子至31)
4-34 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTGCAGCT ACAGCAGTGG o009C6Vh3'- 298 ACTCACCTGAGGAGACGGTGACCGTGGTCCC 〇 106-2 A10-VL5'-384 CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGACATCCAGATG ACCCAGTCT ol.257.lVL3' -525 CCTATTCCTTAATTAAGTTATTCTACTCACGTTTGATAT CCACTTTGGTCCCAGGGCC 表7: 6.605.1之可變域引子（5·至3')
oQVHLVQS Vh5'-620 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTTC ACCTGGTGCAGTCT ol06-5A6Vh3'-410 ACTCACCTGAGGAGACGGTGACCAGGGTTCC 〇106-2A10-VL5'- 384 CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGACATCCA GATGACCCAGTCT omyo-VL3'-513 CCTATTCCTTAATTAAGTTATTCTACTCACGTTTG ATTTCCACCTTGGTCCCTTGGCC 129694.doc -101 - 200904470 表8 : 5.948.1之可變域引子（5’至3')
〇S255E7Vh5'-288 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTG CAGCTGGTGCAGTCT GJH6 ACTCACCTGAGGAGACGGTGACCGTGGT K—A19 CTTTCTCTCCACAGGCGTGCACTCCGATATTGT GATGACTCAGTCTCCAC JK4_R TATATTCCTTAATTAAGTTATTCTACTCACGTTT GATCTCCACCTTGGTCCCT 所得純系再進行序列驗證。本發明之相應重組抗-IgE抗 / 體之全長序列（前導序列省略）如表9中所提供： 表9 :本發明之重組抗-IgE抗體之序列 Γ - — 重組Ab 序列識別符SEQ ID NO 5.396.1 6.605.1 5.948.1 宣鏈 全長 DNA 1 41 81 蛋白質 2 42 82 可變域 DNA 3 43 83 蛋白質 4 44 84 CDR1 DNA 5 45 85 蛋白質 6 46 86 CDR2 DNA 7 47 87 蛋白質 8 48 88 CDR3 DNA 9 49 89 蛋白質 10 50 90 輕鏈 ' 全長 DNA 11 51 91 蛋白質 12 52 92 可變域 DNA 13 53 93 蛋白質 14 54 94 CDR1 1 DNA 15 55 95 蛋白質 16 56 96 CDR2 DNA 17 57 97 蛋白質 18 58 98 CDR3 DNA 19 59 99 蛋白質 20 60 100 129694.doc •102- 200904470 測序揭示融合瘤衍生之抗體之序列與6.6〇51之重組Ab 之序列之間的差異。然@，該等差異為怪定域中之對偶基 因差異且所有變化均為靜止第三核苷酸變化。 實例5 :誘變-根據本發明之其他抗_IgE抗體 5.396.1及6.605.1抗-igE抗體之誘變如下進行：
純系5.396.1之VH中之經由pcR之誘變（sl〇3N)以列於表 10及表6中之引子來進行。擴增使用丁叫DNA聚合酶 (Roche，產品目錄第 1_146_173號）及1>丁(：;_2〇〇 DNA 引擎（MJ
Research)以如下循環來達成：在94。〇下2，； 5χ(在94°c下 30"，在 50C 下 30"，在 68°C 下 30”）； 25x(在 94。(3 下 30"，在 68C 下 30" ’ 在 68C 下 30”）；在 68〇C 下 5'。 純系5.396.1之VK中之經由Pcr之誘變（K61R)以列於表1〇 及表ό中之引子使用兩步法來進行。步驟一涉及經由使用 引子集 ol06-2A10-VL5，-384/o5936L(KtoR)3'-647之擴增及 使用引子集 〇5936L(KtoR)5'-646/ol.257.1 VL3'-525 之擴增 且使用Taq DNA聚合酶（R0che)及PTC-200 DNA引擎（MJ Research)以如下循環來製造突變重疊可變域片段：在94。〇 下 21 ; 5x(在 94°C 下 30”，在 50t：下 30”，在 68〇C 下 30"); 25x(在 94°C 下 30" ’ 在 68°C 下 30π，在 68°C 下 30”）；在 68。(：下 5' °步驟二涉及藉由將來自步驟一之經擴增片段組合且使 用引子集 ol06-2A10-VL5，-384/ol.257.1VL3，-525 及 Taq DNA 聚合酶（Roehe)及 PTC-200 DNA 引擎（MJ Research)以 如下循環來擴增完整突變可變域：在94°C下2' ; 5x(在94〇C 下 30”，在 5(TC 下 30"，在 68°C 下 30”）； 25x(在 94。(：下 30，，， 129694.doc -103 - 200904470 在 68°C 下 3 0’·，在 68°C 下 3 0");在 68°C 下 5'。 純系6.605.1之VH中之經由PCR之誘變（H3Q、M13K、 D82E)以列於表1 0及表7中之引子使用兩步法來進行。步驟 一涉及藉由使用引子集〇IgE6605Vh_M13K-621/ oIgE6605H(D82E)3'-625 之擴增及使用引子集 〇IgE6605H (D82E)5’-624/ol06-5A6Vh3，-410之擴增且使用由上所述之 擴增條件來製造突變重疊可變域片段。步驟二涉及藉由將 來自步驟一之經擴增片段組合且使用引子集〇6848-D1 hGH-Vh5，-289/〇 106-5A6Vh3，-410 且使用由上所述之擴 增條件來擴增完整突變可變域。 純系6.605.1之¥&中之經由？€11之誘變（丁25八、丁538)以列 於表10及表7中之引子使用四步法來進行。步驟1涉及藉由 使用引子集 〇106-2A10-VL5，-384/oIgE6605Vk-T25A3，-627 之擴增及使用引子集 〇IgE6605Vk-T25A5’-626/omyo-VL3·-513之擴增且使用由上所述之擴增條件來製造突變重疊可 變域片段。步驟2涉及藉由將來自步驟一之經擴增片段組 合且使用引子集 ol06-2A10-VL5'-384/omyo-VL3'-513 且使 用由上所述之擴增條件來擴增完整突變可變域。步驟3涉 及使用來自步驟2之VK(T25A)可變域及藉由使用引子集 ol06-2A10-VL5'-384/oIgE6605L(T53K)3’-637 之擴增及使 用引子集oIgE6605L(T53K)5，-636/omyo-VL3，_513 之擴增且 使用由上所述之擴增條件來製造突變重疊可變域片段。步 驟4涉及藉由將來自步驟三之經擴增片段組合且使用引子 集 ol06-2A10-VL5’-3 84/omyo-VL3'-513 且使用由上所述之 129694.doc -104- 200904470 擴增條件來擴增完整突變可變域。如以上說明，將所有突 變變異體進行序列驗證且選殖至哺乳動物表現載體中。 表10 : 5.3 96.1及6.605.1之誘變引子（5·至3')
O5936HS10 3N-675 ACTCACCTGAGGAGACGGTGACCGTGGTCCCTTGGCC CCAGACGTCCATACCGTAGTAGTAGTAGAAGTTGTCGT TCCAGTTGTCTCTCGCACAGTA o5936L(Kt oR)5'-646 TTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTCAGCGGCAGTG GATCTGGG o5936L(Kt oR)3，-647 CCCAGATCCACTGCCGCTGAACCTTGATGGGACCCCA CTTTGCAA oIgE6605V h M13K-621 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTTCACCTG GTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCT CAGTGAAGGTC oIgE6605V h M13K-621 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTTCACCTG GTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCT CAGTGAAGGTC oIgE6605H( D82E)5'- 624 GACACATCCACGAGCACAGCCTACATGGAACTGAGGA GCCTGAGATCTGACGAC oIgE6605H( D82E)3'- 625 GTCGTCAGATCTCAGGCTCCTCAGTTCCATGTAGGCTG TGCTCGTGGATGTGTC 0B8-D8-DlhGH-Vh5 丨-289 CCTTTCTCTCCACAGGCGCGCACTCCCAGGTCCAGCT GGTGCAGTCT oIgE6605V k-T25A5'- 626 GGAGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGA GTATTAGCAACTGGTTA oIgE6605V k-T25A3'- 627 TAACCAGTTGCTAATACTCTGACTTGCCCGGCAAGTGA TGGTGACTCTGTCTCC oIgE6605L( T53K)5'- 636 AAACTCCTGATCTATGGTGCCTCCAGTTTGAAAAGTGG GGTCCCATCAAGG oIgE6605L( T53K)3'- 637 CCTTGATGGGACCCCACTTTTCAAACTGGAGGCACCAT AGATCAGGAGTTT 129694.doc -105- 200904470 5.948.1抗-IgE抗體之誘變可藉由定點誘變之任何熟知技 術來進行。 本發明之所得抗-IgE抗體之序列（前導序列省略）如以下 表11中所概述： 表11 :本發明之抗-IgE抗體之序列 重組Ab 序列識別符 SEQ ID NO 5.396.1 (Hc- S103N; Lc-K61R) 6.605. l(Hc- H3Q,M13K，D82E; Lc-T25A，T53S) 5.948.1 (HI 00Y) 重鏈 全長 DNA 21 61 121 蛋白質 22 62 122 可變域 DNA 23 63 123 蛋白質 24 64 124 CDR1 DNA 25 65 125 蛋白質 26 66 126 CDR2 DNA 27 石7 127 蛋白質 28 68 128 CDR3 DNA 29 69 129 蛋白質 30 70 130 輕鏈 全長 DNA 31 71 131 蛋白質 32 72 132 可變域 DNA 33 73 133 蛋白質 34 74 134 CDR1 DNA 35 75 135 蛋白質 36 76 136 CDR2 DNA 37 77 137 蛋白質 38 78 138 CDR3 DNA 39 79 139 蛋白質 40 80 140 129694.doc -106- 200904470 實例6 : ATCC之核酸寄存物 以下如表12中所提供之寄存物根據布達佩斯協定寄存於 美國菌種保存中心（ATCC)，p. 〇. Box 1549, Manassas，VA 20108，USA(樣本於2006年11月7日接收）。 表1 2 :本發明抗-IgE抗體之生物寄存物 小瓶編號 載體PCR2.1 TOPO中之嵌入物 ATCC專利 寄存編號 SEQID NO: UC25516 來自融合瘤之5.396.1重鏈全長cDNA PTA-7977 101 UC25517 來自融合瘤之5.396.1輕鏈全長CDNA PTA-7982 103 UC25518 5·396.1 H(S103N)-hG2 重鏈全長 cDNA PTA-7981 21 UC25519 5.396.1 L(K61R)-hK 輕鏈全長 cDNA PTA-7980 31 UC25520 來自融合瘤之5.948.1重鏈全長cDNA PTA-7979 109 UC25521 來自融合瘤之5.948.1輕鏈全長cDNA PTA-7986 111 UC25522 來自融合瘤之6.605.1重鏈全長cDNA PTA-7985 105 UC25523 來自融合瘤之6.605.1輕鏈全長cDNA PTA-7984 107 UC25524 0.605.1 H(H3Q，M13K，D82E)-hG2 重鏈 全長cDNA PTA-7983 61 UC25525 6.605.1 L(T25A，T53S)-hK 輕鏈全長 cDNA PTA-7978 71 實例7 :本發明抗-IgE抗體之重組表現及純化 根據供應商之方案將含有CMV啟動子之表現載體轉染於 293 Freestyle(Invitrogen)細胞中。將來自此等細胞之上清 液藉由離心收集且藉由標準蛋白質-A親和層析純化以分離 重組免疫球蛋白。此等蛋白質隨後以SDS-PAGE、SEC(尺 寸排阻層析）、質譜儀及分光光度計來表徵。 實例8 : IgE結合檢定 129694.doc -107- 200904470 檢定原理 測5式抗-IgE抗體與igE之結合在使用以人類FcsR1轉染之 RBL-2H3細胞株之IgE細胞結合檢定中測試。此大鼠嗜鹼 性細胞株為已以人類FcsRla、β及γ受體子單位cDNA轉染 之疋純系（獲Beth Israel Deaconess醫療中心之Kinet及 Jouvin 博士之許可（Wiegand tw 等人，J /_Μ„ο/· 1996 年 7 月 1 日 ’ 157(1):221-30 ; Dibbern DA Jr等人，J /麵 2003年 3月 1 日；274(1-2):37-45))。將細胞培養 24 小時’隨後再連同測試抗-IgE抗體及人類IgE培育24小 時。洗蘇以移除抗_IgE:IgE複合物之後，將其餘與FcsR1結 合之IgE以生物素化之多株抗“找抗體連同抗生蛋白鏈菌 素-HRP及OPD來偵測。觀察到igE結合以與抗_igE抗體之 濃度相關之方式而降低。 方案 RBL-2H3(FcsRl)細胞培養於MEM-Earles(Invitrogen，產 品目錄第21090〇2號）中’該培養基補充有2 mM L-麵胺醯 胺（Sigma，產品目錄第G7513號）、1 mg/mL遺傳黴素液體 (Invitrogen，產品目錄第 10131027 號）及 15% FBS(PAA Laboratories GmbH，產品目錄第 A15-043號）。將 RBL-2H3 (FceR 1)細胞以1 X 1 〇5細胞/孔接種於無菌96孔板（Costar, Fisher Scientific ’ 產品目錄第 TKY-521-090S 號）中且在 37°C下在具有5°/。C02之增濕氣氛中培養隔夜。次曰將細胞 以150微升/孔之洗滌緩衝液（於PBS(Sigma，產品目錄第 D8537號）中之10。/。BSA(Sigma產品目錄第A7030號））洗滌 129694.doc -108 - 200904470 三次。將用於以下步驟之IgE及所有抗體在省略遺傳黴素 之培養基中處置。將25 μί 1 pg/mL· IgE(人類骨髓瘤，無疊 氮化物，Serotec，產品目錄第PHP008X2號）添加至所有孔 (除添加25 μΐ培養基之本底對照孔之外）中。將抗體視需要 稀釋（視抗體之力價而定〇.〇〇8_3 pg/mL濃度範圍）且將25 μί添加至適當孔（除添加25 μι培養基之本底對照及陽性對 照孔之外）中。將細胞連同IgE及抗_IgE抗體在37t：下在具 有5 /。C〇2之增濕氣氛中培育隔夜。隨後將板以i 5 〇微升/孔 洗滌緩衝液洗滌三次以移除未結合之IgE及“匕抗_IgE複合 物。使用稀釋至10 ^/mL之多株生物素化之抗·IgE抗體 (Vector Laboratories，產品目錄第BA3〇4〇號）來偵測結合 之IgE ’將50 μί添加至所有孔中且在37〇c下在具有5% c〇2 之增濕氣氛中培育2小時。將細胞以1 50微升/孔洗滌緩衝 液洗滌三次且隨後連同以1:25〇稀釋之5〇微升/孔抗生蛋白 鏈囟素-HRP(Amersham Bioscience，產品目錄第 rpn 123 1 唬）培育45分鐘。將細胞以1 5〇微升/孔洗滌緩衝液洗滌三 次。將50 jiL OPD(Dako ’產品目錄第S2045號）添加至所有 孔中且允許顏色顯現10分鐘，隨後以5〇 〇.6 μ 止反應且在490 nm下量測吸光度。 結果 為測定抗體之力價，自所有值減去本底吸光度且隨後計 算陽性對照（僅IgE)之平均值且抗體數據表現為自陽性對照 值之IgE結合抑制百分比。抗—igE抗體之培育導致igE結合 之與濃度相關之降低。本發明抗體全部展示與RBL_ 129694.doc -109- 200904470 2H3(FceR1)細胞之IgE結合的與濃度相關之降低且π”值小 於0.5 pg/mL，且進一步在功能檢定中評估。 在此檢定中，Κ：5〇值定義為使用陽性對照孔之值作為 100%，降低IgE結合達50%所需之抗體之濃度。 實例9:脫粒抑制之檢定 檢定原理 測試抗-IgE抗體抑制IgE介導之脫粒之潛力使用RBl_2H3 (FcsRl )細胞來測定。將細胞連同測試抗_IgE抗體及人類 IgE培養48小時。洗滌細胞以移除抗_IgE:IgE複合物，留下 與FceRl結合之IgE ’隨後以多株抗_igE抗體刺激，該抗體 交聯經結合之IgE ’導致IgE介導之脫粒。將作為脫粒之標 誌的組織胺釋放用作此檢定中之端點且隨著測試抗_1§£抗 體之濃度增加觀察到組織胺釋放之與濃度相關之降低。 方案 將 RBL-2H3(FcsRl)細胞培養於MEM-Earles(Invitrogen， 產品目錄第2109002號）中，該培養基補充有2 mM L-麩胺 醯胺（Sigma，產品目錄第G75 1 3號）、1 mg/mL遺傳黴素液 體（Invitrogen，產品目錄第 10131027 號）及 15% FBS(PAA Laboratories GmbH，產品目錄第 A15-043 號）。將 RBL-2H3(FceRl)細胞以lxlO5細胞/孔接種於無菌96孔板 (Costar，Fisher ScientiHc ’ 產品目錄第 TKY-521-090S號） 中且在37。(：下在具有5% C02之增濕氣氛中連同0.0625 pg/mL· IgE(人類骨髓瘤，無疊氮化物，Serotec，產品目錄 第PHP008X2號）及測試抗-IgE抗體（視抗體之力價而定 129694.doc -110- 200904470 0.0001-30 pg/mL濃度範圍）培育48小時。細胞、抗體及IgE 全部在 MEM-Earles(Invitrogen，產品目錄第 2109002號）、2 mM L-麩胺醯胺（Sigma，產品目錄第〇7513號）及15% FBS(PAA Laboratories GmbH，產品目錄第 A15-043號）中製 備。48小時之後，將細胞以補充有1 〇%加熱不活化（56°C水 分批處理30分鐘）之FBS(PAA Laboratories GmbH，產品目 錄弟A15-043號）、0.2%碳酸氯納（Sigma，產品目錄第 S8761號）之lx RPMI(Sigma，產品目錄第ri 145號）洗滌以 f 移除未結合之抗-IgE及IgE:抗-IgE複合物，隨後進行刺 激。將細胞以5 pg/mL多株抗-IgE抗體（Sigma，產品目錄第 10632號）刺激1小時，該抗體交聯受體結合之IgE。總組織 胺自 2% Triton(Triton)-X100(Sigma，產品目錄第 T9284號） 溶解之孔測定且自細胞之自發釋放以單獨刺激培養基來刺 激。將抗-IgE及Triton-X-100稀釋於刺激培養基中。刺激 培養基包含補充有1 0%加熱不活化（56°C水分批處理3 0分 ( 鐘）之 FBS(PAA Laboratories GmbH，產品目錄第 A1 5-043 i 號）、2%碳酸氫納（Sigma，產品目錄第S876 1號）及45%氧化 氘（Fisher Scientific，產品目錄第 16631-1000 號）之 1χ RPMI(Sigma ’產品目錄第R1145號）。將細胞在37°C下在具 有5°/。C〇2之增濕氣氛中刺激1小時。隨後將板離心 (200xg，5分鐘）且收集上清液以量測組織胺釋放。根據製 造商之用法說明藉由ELISA(IBL，產品目錄第CVRE59221 號）量測作為脫粒之標誌之組織胺釋放。 結果 129694.doc -111 - 200904470 組織胺釋放表現為總釋放之百分比，且隨後為計算特異 性釋放’如下自％值減去自發釋放： -總組織胺釋放％=(測試或自發對照孔中之組織胺 ng/mL/全部孔中之平均組織胺ng/mL)xl〇〇 -特異性釋放=(測試孔中之總組織胺釋放％)-(自發孔之 總組織胺釋放之平均。/〇)。 抗體之效應表現為自不存在抗_Igg抗體之情況下（僅〗找 及細胞）培育之對照孔之組織胺釋放的抑制百分比 -%抑制=((以多株抗_IgE刺激之平均對照孔-以多株 抗-IgE刺激之測試抗體孔）/以多株抗巧非刺激之平均 對照孔100。 IC5 〇值為抑制對照組織胺釋放達$ 〇 %所需之抗體之濃产 且詳述於表13中。本發明抗_lgE抗體為有利的，因為其在 抑制IgE介導之作為脫粒之標誌的組織胺釋放上比E25顯著 更有效。 表1 3 ·本發明抗-IgE抗體在抑制IgE介導之脫粒中之1匸5〇值 數據為具有95%置信區間之幾何平均IC5〇值。 抗-IgE抗體 IC50-pg/mL (95%置信區間） 'η* E25 1.47(1.24-1.74) 83 5.396.1(重組） 0.0709(0.0572-0.0879) 43 5.396.1(Hc-S103NLc-K61R) 0.0262(0.0201-0.0341) 24 6.605.1(重·组） 0.124(0.0980-0.157) ^52~~ 6.605_l(Hc-H3Q、M13K、D82ELc-T25A、T53S) 0.0736(0.0491-0.110) — 4 129694.doc -Π2- 200904470 5.948.1-批次 1(762.8 pg/mL)(重組） 0.360(0.339-0.382) 3 5.948.1-批次2(5.2 mg/mL)(重組） 0.123(0.077-0.195) 24 5.948. l(Hc-H100Y) 0.0121(0.00878-0.0167) 24 實例10 : RBL-2H3(FcsRl)促效劑檢定 檢定原理 測試之抗-IgE抗體交聯受體結合之IgE及刺激IgE依賴性 脫粒之潛力係使用RBL-2H3(FcsRl)細胞測定。將細胞與人 類IgE培養48小時，隨後洗滌以移除未結合之IgE。隨後將 測試之抗-IgE抗體添加至細胞中以測定其是否能夠結合且 交聯受體結合之IgE而導致脫粒。測量組織胺之釋放作為 脫粒之標誌。在所有檢定中使用陽性及陰性對照之抗-IgE 抗體以便能夠與測試之抗-IgE抗體進行比較。 方案 如抑制脫粒之檢定所述來培養細胞^對於促效劑檢定’ 將細胞以lxlO5個細胞/孔連同0.25 pg/mL IgE(人類骨髓 瘤，無疊氮化物，Serotec，產品目錄第PHP008X2號）接種 於滅菌 96孔板（Costar，Fisher Scientific，產品目錄第 TKY-521-090S號）中，且在37°C下在5°/〇 C02之增濕氣氛中培育 48小時。細胞及IgE在MEM-Earles(Invitrogen，產品目錄 第2 1 09002號）、2 mM L-麩醯胺酸（Sigma，產品目錄第 G75 13號）及 15% FBS(PAA Laboratories GmbH ’ 產品目錄 第A15-043號）中製備。 48小時之後，細胞以補充有10%加熱不活化（56。。水浴30 分鐘）之 FBS(PAA Laboratories GmbH，產品目錄第 A15-043 129694.doc -113 - 200904470
號）及0.2%碳酸氫鈉（Sigma，產品目錄第S8761號）之lx RPMI(Sigma，產品目錄第Rl 1 45號）洗滌以移除未結合之 IgE，隨後以抗-IgE抗體刺激。使用已知可交聯受體結合 之IgE的多株抗-IgE抗體（Sigma，產品目錄第10632號）作為 陽性對照。測試及對照抗體以0.04 -1 〇 pg/mL測試。總組織 胺係由2% Triton-X100(Sigma，產品目錄第T9284號）溶解 之孔測定，自發釋放係由僅以培養基刺激之細胞測定。抗 體及Triton-X-100稀釋於刺激培養基中。刺激培養基包含 補充有10%加熱不活化（56°C水浴30分鐘）之FBS(PAA
Laboratories GmbH，產品目錄第 A1 5-043 號）、2%碳酸氫 納（Sigma ’產品目錄第S8761號）及45%氧化氘（Fisher
Scientific，產品目錄第 16631-1000號）之 ΐχ RPMI(Sigma， 產品目錄第R1145號）。細胞在37。(：下在5% C02之增濕氣氛 中刺激1小時。隨後將板離心（2〇〇xg，5分鐘），且收集上清 液以測量組織胺之釋放。組織胺之釋放係藉由 EL1SA(1BL ’產品目錄第CVRE59221號）根據製造商之說明 测量’作為脫粒之標誌、。組織胺之釋放以總釋放之百分比 計算’且抗體之效應以總釋放之百分比表現。 結果 在所有實驗中使用多株抗_IgE作為陽性對照，其刺激組 ’’气胺釋放（約3 0%之總組織胺）。有利地，本發明之抗 早株抗體在以0.04-10 pg/mL之濃度測試時無一者刺激igE ”導之組織胺釋放高於自發釋放（參見圖丨及2)。此觀察結 果提不在活體内本發明抗_IgE抗體不會交聯F“Ri受體結 129694.doc Π4 200904470 合之IgE，且因此不會刺激脫粒。 實例11:人類血液嗜鹼性細胞促效檢定 檢定原理 使用與關於RBL-2H3(FcsRl)促效檢定相同之原理在自新 鮮全血中分離之人類血液喷驗性細胞中證實促效活性之缺 乏。 方案 使用Histopaque管（Sigma，產品目錄第A056 1號）自全血 中分離人類單核細胞。將來自健康自願者之新鮮人類靜脈 也收集於含有1 mL 10 mg/mL肝素（Sigma，產品目錄第 H3393號）之50 mL管中。隨後將血液以1:1稀釋於5〇/。 FCS/PBS(FCS 來自 PAA Laboratories GmbH，產品目錄第 A1 5-043號且PBS來自Sigma，產品目錄第D8537號）中且傾 入Histopaque管（Sigma，產品目錄第A0561號）中，將其在 500xg下離心35分鐘。將白血球層收集，洗滌且再懸浮於 含有 10% FBS(PAA Laboratories GmbH，產品目錄第 A15-043號）之RPMI培養基（Invitrogen，產品目錄第32404-014 號）中。將細胞稀釋至1.2χ107白血球/毫升，隨後以6χ105 細胞/孔添加至96孔無菌細胞培養板（Costar，Fisher
Scientific ’產品目錄第TKY-521-090S號）且如先前所述添 加於具有10% FBS之RPMI培養基中之0.5 pg/mL最終濃度 之人類IgE(人類骨越瘤，無疊氮化物，Serotec，產品目錄 第PHP008X2號）。將細胞在37°C下在具有5% C02之增濕氣 氛中培育隔夜。移除培養基，隨後以抗-IgE抗體（0.1 5-20 129694.doc -115- 200904470 pg/mL)刺激。已知交聯受體結合之lgE的多株抗-IgE抗體 (Sigma，產品目錄第10632號）用作陽性對照。總組織胺自 0.3% Triton-X100(Sigma，產品目錄第T9284號）溶解之孔 測定且自以單獨培養基刺激之細胞測定自發釋放。將抗體 及Triton-X-100稀釋於細胞培養基中且自發孔以單獨細胞 培養基來培育。細胞培養基包含具有10% FBS(PAA Laboratories GmbH，產品目錄第 A1 5-043 號）之 RPMI培養 基（Invitrogen，產品目錄第32404-014號）。將細胞在37。匸 下在具有5°/。C02之增濕氣氛中刺激3〇分鐘。隨後將板離心 (200xg，5分鐘）且收集上清液以量測組織胺釋放。藉由 ELIS A量測作為脫粒之標誌之組織胺釋放（IBL，產品目錄 第CVRE5922 1號，根據製造商之用法說明）。組織胺釋放 經計异為總釋放之百分比且抗體之效應表現為總釋放之百 分比。 結果 在所有實驗中多株抗-IgE用作陽性對照且此導致較大組 織胺釋放（約50%之總組織胺）。有利地，本發明之抗_IgE 單株抗體在0· 1 5-20 pg/mL之濃度下測試時無一者刺激IgE 介導之組織胺釋放高於此等細胞之自發釋放（參見圖3及 4)。本發明抗-IgE抗體對於經分離人類血液嗜鹼性細胞不 具有促效活性的觀察結果證實於RBL-2H3(FCeRl)細胞促效 檢定中所見者（參見上文）。 實例I2 ·活體外人類企清之游離IgE消耗 檢定原理 129694.doc -116- 200904470 測試抗-IgE抗體與血清中之IgE結合及降低游離IgE之含 量的能力在活體外量測。將測試抗_IgE抗體（下文中之測試 抗體）個別地在血清中培育隔夜以使得測試抗體能夠與血 清中之IgE結合。其餘游離IgE(亦即未與測試抗體結合）藉 由ELIS A量測，其中相同測試抗體本身用作板上之捕獲試 劑。對照檢定已展示游離IgE與捕獲試劑結合，而（測試抗 體）-IgE複合物並不與其結合。隨後將血清_(測試抗體）培 育物連同捕獲試劑培育2小時以使得，其餘，游離IgE能夠與 捕獲試劑結合。將板洗滌以移除（測試抗體）_IgE複合物， 留下與捕獲試劑結合之，其餘，游離IgE。此，其餘，游離IgE(結 合至ELISA板上）隨後以生物素化之多株抗-丨非抗體偵測。 隨著測試抗體之濃度增加觀察到游離IgE量測中與濃度相 關之降低。 因此檢定可概述如下： -培育測試抗體與血清約丨6小時； -為偵測游離IgE，添加（測試抗體）/血清至捕獲eusa 板中且培育2小時（捕獲ELISA板以相同測試抗體塗 佈）； -洗滌以移除（測試抗體）_IgE複合物，留下與板上之捕 獲試劑結合之'其餘，游離IgE ; .使用生物素化之多株抗-IgE、抗生蛋白鏈菌素-HRp及 OPD偵測系統來量測捕獲至板上之經結合之，其餘，游 離 IgE，。 方案 129694.doc 200904470 將稀釋於50 mM TBS(pH值8.0)(Sigma，產品目錄第 T6664號）中之5 μί測試抗-IgE抗體或不具有抗體之tbS對 照刺突至自健康自願者收集之4 5 μΐ純淨血清中且在3 7。(：下 在具有5% C02之增濕氣氛中在無菌96孔板（Costar，Fisher Scientific ’產品目錄第TKY-521-090S號）中培育隔夜以允 許測試抗體與血清中之IgE結合。ELISA板藉由在4。(：下以 50 μΐ 2.5 pg/mL捕獲抗-IgE抗體（稀釋於TBS中，Sigma，產 品目錄第T6664號）塗佈Nunc Maxisorp 96孔板（Fisher Scientific，產品目錄第DIS-971-010P號）隔夜來製備。次 日，將ELISA板以300微升/孔洗滌緩衝液（0.05%吐溫_20, Sigma，產品目錄第P7949/TBS號）洗務1次，隨後在室溫下 以150微升/孔之TBS中之1% BSA(Sigma，產品目錄第 A7030號）阻斷1小時。隨後將板以300微升/孔洗滌緩衝液 洗滌1次，隨後添加50 μΐ之全部稀釋於1% BSA/0.05%吐 溫-20/TBS稀釋劑緩衝液中之IgE標準物、抗-IgE/血清樣本 或稀釋劑空白。來自NIBSC(國家生物學標準與控制研究所 (National Institute for Biological Standards and Control) > 產品目錄第75/502號）之人類血清IgE標準物用作此檢定中 之標準物且在每一板上使用3-200 ng/mL之標準曲線。血 清需要以至少1比1 0來稀釋以消除血清干擾。對於新供 體’將血清以1:10、1:50及1:200稀釋以確定消除血清干擾 的最合適稀釋度，同時預測標準曲線之線性部分中之值。 通常，將具有<200 ng/mL IgE之血清以1:1〇稀釋，將具有 >200 ng/mL IgE之血清以1:50或1:200稀釋。將標準物及樣 129694.doc -118- 200904470 本在室溫下培育2小時，隨後以300 pL洗滌緩衝液洗滌4 次。經捕獲之游離IgE以在l%BSA/0_05%吐溫-20/TBS稀釋 劑緩衝液中稀釋至0,5 pg/mL之50微升/孔生物素化之多株 抗-IgE(Vector Laboratories，產品目錄第 BA3040號）來情 測。將孔在室溫下培育i小時，隨後洗滌（4x300 μί洗滌緩 衝液）。將50 pL以1:1〇〇〇稀釋於稀釋劑緩衝液中之抗生蛋 白鍵囷素-HRP(Amersham Bioscience，產品目錄第RPN 123 1號）添加至所有孔中且在室溫下培育45分鐘。洗滌孔 (4x300 μί洗滌緩衝液）。將50叫〇PD(Dako，產品目錄第 S2045號）添加至所有孔中且允許顏色顯現丨〇分鐘，隨後以 5 0 μΐ 0·6 M HJO4停止反應且在490 nm下量測吸光度。所 偵測IgE之濃度藉由將NIBSC標準曲線作圖及自標準曲線 外推IgE濃度來計算。隨後將此等值乘以稀釋因子以給出 以ng/mL為單位之IgE濃度。將游離igE(ng/mL)相對於抗體 濃度作圖。 結果 抗體力價表現為將血清中之游離IgE濃度降低至約25 ng/mL所需之濃度（ic25 ng/mL)。有利地，本發明抗_ig£抗體 能夠將游離IgE降低至小於25 ng/mL(參見表14-15)。 表14.將人類血清樣本中之游離IgE含量降低至約25 ng/mL 之值所需之測試抗-IgE抗體之濃度（pg/mL) DIN :供體識別號碼 129694.doc -119· 200904470 捕獲/測試 抗體 E25 5.396.1 (重組） 5.396.1 S103N K61R 6.605.1 (重組） 6.605.1 H3Q M13K D82E T25A T53S 5.948.1 (重組） 5.948.1 H100Y 平均初始 游離IgE 含量 (ng/mL) 血清樣本 將游離IgE濃度降低至約25 ng/mL之值所需之測試抗體之濃度(pg/mL) DIN 0461 65 nd 0.15 nd nd 1.47 80 DIN 0155 103 nd 0.14 nd nd 1. 81 0.34 93 DIN 0649 139 nd 0.46 nd nd 1.95 0.39 93 DIN 0623 實驗2 90 nd 0.20 nd nd 4.13 0.76 133 DIN 0623 實驗1 39 0,27 0,37 0,38 0,19 0,50 nd 145 DIN 0591 139 nd 0.24 nd nd 2.35 0.55 152 丽 0347 211 nd 0.48 nd nd 4.92 1.33 221 DIN 0321 實驗1 105 0,67 0,85 1,99 0,51 1,34 nd 262 DIN 0321 實驗2 202 nd 0.45 nd nd 7.90 2.55 265 DIN 0632 實驗2 275 nd nd nd nd 6.31 2.29 289 DIN 0011 實驗2 325 nd 0.77 nd nd 6.34 2.96 326 DIN 0284 145 0,87 0,98 2,40 0,99 2,45 nd 339 DIN 0632 實驗1 385 1,43 U1 nd 2,80 8,91 nd 532 DIN 0451 實驗2 587 nd 2.21 nd nd 39.67 10.46 534 DIN 0011 貪驗1 202 0,98 1,12 5,00 2,29 3,3〇 nd 555 DIN 0451 實驗1 410 1,81 1,59 10,84 3,71 11,61 nd 557 DIN 0707 653 2,87 2,75 nd nd nd nd 1051 DIN 0749 843 3,12 2,83 nd nd nd nd 1140 DIN 0356 2334 3,60 4,31 11,63 nd nd nd 1350 DIN 0251 2914 3,87 4,68 27,94 nd nd nd 1632 DIN 0382 10629 5,74 7,09 nd nd 25,00 nd 2827 DIN 0748 30737 10,92 10,69 nd nd 25,13 nd 4609 具有95% 381 2.0 1.0 4.4 1.1 4.7 1.2 置信區間 (184-791) (1.0-3.8) (0.6-1.8) (1.2-16.4) (0.3-3.8) (2.6-8.3) (0.5-2.6) 之幾何平 均 nd :未測定 129694.doc -120- 200904470 表1 5.人類血清樣本中藉由測試抗-IgE抗體減少游離 IgE。 數據為來自6-22個供體之具有95%置信區間之幾何平均
IC25 ng/mL 抗體 IC25 ng/mL (pg/mL) 初始IgE濃度 (ng/mL) 'η' E25 381(184-791) 639(278-1001) 22 5.396.1(重組） 2.0(1.0-3.8) 1207(335-2079) 12 5.396.1 (Hc-S 103N Lc-K61R) 1.0(0.6-1.8) 791(296-1287) 21 6.605.1(重組） 4.4(1.2-16.4) 757(206-1308) 7 6.605.1 (Hc-H3Q ' M13K ' D82E Lc-T25A > T53S) 1.1(0.3-3.8) 464(255-673) 6 5.948.1-批次 1(762.8 pg/mL)(重組） 4.7(2.6-8.3) 713(60-1365) 18 5.948. l(Hc-H100Y) 1.2(0.5-2.6) 223(130-316) 10 已展示本發明抗-IgE抗體（5.396.1、5.396.1 Hc-S103N LC-K61R、6.605.1、6.605.1 Hc-H3Q、M13K、D82E Lc-T25A、T53S及5.948.1)將游離IgE含量降低至低於25 ng/mL。E25亦能將游離IgE降低至低於25 ng/mL ;然而， 需要顯著更多抗體（亦即，較高IC25 ng/mL)。臨床上，此可 有利地能夠降低單株抗體劑量以產生降低循環中之游離 IgE含量的相同效應。另外，可治療增加之患者群體，亦 即具有較高初始游離IgE濃度及/或較高體重之彼等患者。 實例13:對其他免疫球蛋白之選擇性 檢定原理 本發明抗-IgE抗體與其他人類免疫球蛋白（IgA、IgE、 129694.doc -121 - 200904470 1吕01及4〇3)之交叉反應性在丑!^15六檢定中測定。將免疫球 蛋白塗佈在板上且培育測試抗-IgE抗體，隨後偵測與生物 素化之抗- IgG2抗體之結合。 方案 在4°C下將IgA(Sigma，產品目錄第12636號）、IgE (Serotec，產品目錄第 PHP008X2號）、IgGl(Biodesign，產 品目錄第A50183H號）及IgG3(Biodesign，產品目錄第 A50186H號）以於PBS(0,01 Μ磷酸鹽緩衝劑、0.0027 Μ氣化 鉀、0.137 Μ氣化鈉，pH值7.4，Sigma，產品目錄第Ρ4417 號）中之4 pg/mL之濃度直接塗佈在Nunc MaxisorpTM 96孔 板（Fisher Scientific，產品目錄第 DIS-971-010P 號）上隔 夜。將孔以150 pL洗滌緩衝液（0.05%吐溫-20(Sigma，產品 目錄第P7949號）/PBS)洗滌三次，隨後在室溫下以150微升/ 孔阻斷緩衝液（2.5% BSA(Sigma，產品目錄第A7030 號）/PBS)阻斷2小時。將孔以150 μί洗滌緩衝液/孔洗滌三 次。將對照小鼠抗-IgA(Serotec，產品目錄第MCA476G號）、 小鼠抗-IgE (Biodesign，產品目錄第Z86410M號）、小鼠抗-IgGl (Serotec，產品目錄第MCA514G號）及小鼠抗-IgG3 (Biodesign，產品目錄第 Z20152M 號）以 250 ng/mL、800 ng/mL或50微升/孔添加至對照孔中。全部測試抗體均為人 類IgG2同型且以250 ng/mL、50微升/孔添加至孔中。將抗 體稀釋於稀釋劑緩衝液（PBS/1% BSA/0.05%吐溫-20)中且 將此添加至空白對照孔中（對於每一所用二級抗體之雙重 孔）。將抗體在室溫下培育2小時。將孔以1 5 0 μί洗滌緩衝 129694.doc •122· 200904470 液/孔洗滌三次。對照抗體與免疫球蛋白之結合以1:8000稀 釋於稀釋劑緩衝液中之抗-小鼠IgG_HRp結合物（sigma，產 品目錄第A44 1 6號）來偵測。將5 〇微升/孔添加至對照抗體 及空白孔中。將孔在室溫下培育1小時，隨後以丨5〇 pL洗 滌緩衝液/孔洗滌三次。將50 μ1 〇PD(Dako，產品目錄第 S2045號）添加至所有孔中且允許顏色顯現1〇分鐘隨後以〇 6 M HJO4停止反應且在490 nm下量測吸光度。使用生物素 化之抗-人類IgG2(Zymed，產品目錄第05 — 3540號）來偵測 測試IgG2抗-IgE抗體之結合。將此抗體以丨：5 〇〇稀釋於稀釋 劑緩衝液中，隨後添加50微升/孔至測試抗體及空白孔 中。將孔在室溫下培育1小時’隨後以丨5〇 洗滌緩衝液/ 孔洗蘇三次。將以丨：2〇〇〇稀釋於稀釋劑緩衝液中之抗生蛋
白鏈菌素-HRP(Amersham Bioscience，產品目錄第RPN 1 23 1號）添加至所有孔中且在室溫下培育45分鐘。洗滌孔 (3x150 pL洗滌緩衝液）。將5〇 μι 〇pD(Dak〇，產品目錄第 S2045號）添加至所有孔中且允許顏色顯現1〇分鐘隨後以5〇 μ!^ 0·6 Μ ΗΑ〇4停止反應且在49〇 nm下量測吸光度。 結果 本發明抗-IgE抗體中之任一者在25〇 ng/mL或800 ng/mL 下測試時未债測到與IgA、IgG1或IgG3之結合，而觀察到 與IgE結合之較大信號（表16)。此觀察結果展示本發明抗_ IgE抗體對於IgE具有超過對IgA、IgG1& IgG3之選擇性的 高度選擇性。 129694.doc -123- 200904470 表16 :抗-IgE抗體與IgA、IgGl、IgG3及IgE之結合。值 為 A29O nm。 抗體 免疫球蛋白 IgA IgGl IgG3 IgE 5.396.1(重組） 0.04 0.07 0.05 2.83 5.396.1 S103N/K61R 0.04 0.08 0.05 2.80 6.605.1(重組） 0.04 0.07 0.05 3.01 6.605.1 H3QM13KD82E/T25AT53S 0.04 0.07 0.04 2.92 5.948.1(重組） 0.04 0.07 0.04 2.57 5.948.1(Hc-H100Y) 0.05 0.06 0.06 1.05 實例14 :藉由BIAcoreTM測定親和常數（KD) 檢定原理 使用 BIAcore™ 3000儀器（BIAcore™，Uppsala，Sweden) 以與共價固定之抗-IgE抗體結合之全長人類IgE(Serotec， 產品目錄第PHP008X2號或Europa Bioproducts，產品目錄 第CPI 03 5K號）之連續稀釋物來測定動力學常數kcn & kQff。 方案 對於共價抗-IgE抗體固定，使用標準EDC-NHS胺偶合化 學。使用CM5感應器晶片（BIAcore™)及10 mM乙酸鈉（pH 值5.0)作為固定緩衝液來獲得50-600 RU之固定結合反應。 將基準流槽活化（以EDC-NHS)且阻斷（以乙醇胺）但沒有固 定蛋白質。使用0.09-600 nM之IgE濃度範圍在50或100 pL/min之流動速率下在HBS-EP缓衝液（10 mM HEPES， 150 mM NaCl，3 mM EDTA，0,005% v/v 界面活性劑 129694.doc -124- 200904470 P20(pH值7.4)，由BIAcore™供應）中執行動態量測。每一 濃度之注射時間為3.25分鐘，繼之以20分鐘離解階段。離 解階段之後包括再生步驟；用於各種抗體之條件在以下表 1 7中給出。 表17:用於每一抗-IgE抗體之再生條件 抗-IgE抗體 再生溶液 注射時間 (s) 流動速率 (μ!7πΰη) 5.396.1(重組） 10 mM甘胺 酸，pH值1.7 6 100 5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R) 10 mM甘胺 酸，pH值1.7 9 100 6.605.1(重組） 10 mM甘胺 酸，pH值1.5 6 50 6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E Lc-T25A、T53S) 10 mM甘胺 酸，pH值1.5 6 50 5.948.1(重組） 10 mM甘胺 酸，pH值1.5 12 50 5.948.1(Hc-H100Y) 10 mM甘胺 酸，pH值1.5 12 50 結果 所有感應圖譜均使用BIA評估軟體4.1(BIAcoreTM)及 Scrubber軟體版本2_0(BioLogic Software)來局部地擬合。 本發明抗-IgE抗體展示相似的對IgE之奈莫耳親和力（參見 表 18)。 129694.doc -125 - 200904470 表1 8 :抗-IgE抗體之親和力值 抗-IgE抗體 KD (親和力） 締合速率 (ka)，Μ-1 s-1 離解速率 (kd)，s·1 5.396.1(重組） 2.50 nM 3.23χ104 8.09χ10'5 5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R) 3.95 nM 2.36xl04 9.29x10'5 6.605.1(重組） 2.74 nM 6.34χ104 1.74χ1〇·4 6.605.l(Hc-H3Q、M13K、D82E Lc-T25A、T53S) 2.94 nM 3.02χ104 8.88χ10'5 5.948.1(重組） 1.32 nM 2.36χ104 3.11χ10'5 5.948.1(Hc-H100Y) 158.9 pM 1.51χ105 2.42χ10'5 實例15 :抗原決定基選擇性之識別 檢定原理 BIAcore™區域化用以將抗-IgE抗體所識別之相對抗原決 定基定位。 方案 使用 BIAcoreTM 3000儀器（BIAcore™，Uppsala，Sweden) 及標準EDC-NHS胺偶合化學將測試抗-IgE抗體（E25 ;重組 5.396.1 ； 5.396.1 Hc-S 103N Lc-K61R ;重組 6.605· 1 ; 6.605.1 Hc-H3Q、M13K、D82E Lc-T25A、T53S ;重組 5.948.1及5.94 8.1 Hc-HIOOY)固定在CM5生物感應器晶片之 獨立流槽上。固定緩衝液為10 mM乙酸鈉（pH值5.0)。在所 有情況下均達成大約1500 RU之蛋白質密度。 使用 HBS-EP運作緩衝液（0.01 M HEPES(pH值 7.4)，0.15 M NaCl，3 mM EDTA，0.005°/。聚山梨醇酯20)執行抗原決 129694.doc -126- 200904470 定基區域化實驗。將人類IgE(5 pg/mL，Serotec，產品目 錄第PHP008X2號）以100 pL之體積以50微升/分鐘之速率注 入第一流槽中。在注射完成之後，將第一抗體探針添加至 同一流槽中。將所有探針抗體稀釋至在HBS-EP中之約1 0 pg/mL之濃度，且以100 μί之體積以50微升/分鐘之流動速 率注射。當未觀察到測試抗體之結合時，隨後立即注射下 一測試純系。當結合發生時，感應器表面藉由注射甘胺酸 (pH值1.5)6秒來再生。在再生之後，IgE再結合且注射其他 測試抗體。執行此等程序直至整組純系已注射於固定抗體 加結合之IgE之表面上。隨後使用具有不同固定抗體加結 合之IgE之新流槽以便用測試純系來探查。 結果 以此方式測試抗體對之組合且基於是否觀察到結合來建 置反應矩陣（參見表19及圖5)。抗原決定基區域化數據提示 某些抗-IgE抗體共有重疊抗原決定基，而其他抗體具有不 同抗原決定基。 表19 :抗原決定基區域化反應矩陣（x=無結合，V=結合）
固定抗體 2°Ab E25 2°Ab 5.396.1 2°Ab 5.396.1 S103N/K61R 2°Ab 6.605.1 2°Ab 6.605.1 QKE T25A T53S 2°Ab 5.948.1 2°Ab 5.948.1 H100Y E25 X X X V V X X 5.396.1 (重組） X X X X X X NT 5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R) X X X X X X X 129694.doc -127- 200904470
6.605.1 (重組） V X X X X V NT 6.605.l(Hc-H3Q、 M13K ' D82E Lc-T25A、 T53S) V V V X X V NT 5.948.1 (重組） X X X V V X X 5.948. l(Hc-H100Y) X NT X NT NT X X 實例16 :物種交叉反應性之識別 檢定原理 使用ELISA及BIAcore™實驗量測抗-IgE單株抗體與來自 狗、大鼠、小鼠及獼猴之IgE之交又反應性。 方案 針對狗、大鼠及小鼠IgE之選擇性篩選使用BIAcore™來 測定。經純化之狗IgE(Bethyl，產品目錄第P115號）、大鼠 IgE(Serotec，產品目錄第 PRP07A號）及小鼠 IgE(Serotec， 產品目錄第PMP68號）注射於共價固定之抗-IgE(E25 ; 5.396.1 ； 5.396.1 Hc-S103N Lc-K61R ； 6.605.1 ； 6.605.1 Hc-H3Q、M13K、D82E Lc-T25A、T53S ;及 5.948.1)上以 便測定來自此等物種之IgE是否交又反應。使用 BIAcoreTM3000儀器（BIAcore™，Uppsala，Sweden)及標準 EDC-NHS偶合化學將本發明抗-IgE抗體共價固定在CM5感 應器晶片上。將10 mM乙酸鈉（pH值5.0)用作固定緩衝液且 達成125 RU之固定結合反應。將基準流槽活化（以EDC-NHS)且阻斷（以乙醇胺），但沒有固定蛋白質。使用30 129694.doc -128 - 200904470
pg/mL之IgE濃度在loo微升/分鐘之流動速率下在hbS-EP 緩衝液（10 mM HEPES，150 mM NaCl，3 mM EDTA， 0.005% v/v界面活性劑P2〇(pH值7.4)，由BlAcore™供應）中 執行結合量測。每一 IgE之注射時間為3.25分鐘。人類
IgE(30 pg/mL，Serotec，產品目錄第 PHP008X2號）亦用作 1¼性對照。獲得注射每一 I g E前後之反應水準。 為量測相對於獼猴IgE之交叉反應性，將血清用作IgE來 源且使用ELISA方法測試交叉反應性。在4〇c下將測試 抗-IgE(E25 ; 5.396.1 ； 5.396.1 Hc-S103N Lc-K61R ; 6.605.1 ； 6.605.1 Hc-H3Q、M13K、D82E Lc-T25A、 丁538;及 5.948.1)以於50 mM TBS(pH 值 8.0)(Sigma，產品 目錄苐 T6664號）中之 2.5 pg/mL 塗佈在 Nunc Maxisorp™ 96 孔板（Fisher Scientific，產品目錄第 DIS-971-01 〇P號）上隔 仪。將孔以1 5 0微升/孔洗務緩衝液（〇. 〇 5 %吐溫_ 2 〇， Sigma，產品目錄第P7949/TBS號）洗滌一次，隨後在室溫 下以TBS中之150微升/孔1% BSA(Sigma，產品目錄第 A7030號）阻斷2小時。將孔以150 pL洗滌緩衝液洗條兩 次。添加50 μί純淨至在1% BSA/0.05%吐溫-20/TBS稀釋劑 緩衝液中以至少1:1 6稀釋之人類（内部供體）或獼猴血清 (Harlan Sera-Lab Ltd, Loughborough)。來自 NIBSC(國家生 物學標準與控制研究所，產品目錄第75/502號）之人類金清 IgE標準物用作此檢定中之標準物且在每一板上使用3_2〇〇 ng/mL之標準曲線。將孔在25°C下培育2小時，隨後洗條 (3χ150 μί洗滌緩衝液）。使用以ι:ι〇〇〇稀釋於稀釋劑緩衝 129694.doc -129- 200904470 液中之生物素化之多株抗巧找㈤如吕讓d & peW Laboratories ’產品目錄第16_1〇_〇4號）偵測經結合之。 將孔在25 C下培育1小時，隨後洗滌（3 χ〗5〇叫洗滌緩衝 液）。將以1:1000稀釋於稀釋劑緩衝液中之抗生蛋白鏈菌 素-HRP(Amersham Bioscience，產品目錄第 RpN 1231號）添 加至所有孔中且在室溫下培育45分鐘。洗滌孔（3><15〇卟 洗滌緩衝液）。將5〇叫OPD(Dak〇,產品目錄第82〇45號） 添加至所有孔中且允許顏色顯現1〇分鐘，隨後以5〇 〇6 Μ ΗΑ〇4停止反應且在490 nm下量測吸光度。所偵測igE之 /辰度藉由將NIBSC標準曲線作圖及自標準曲線外推IgE濃 度來計算。隨後將此等值乘以稀釋因子以給出以叫化[為 單位之IgE濃度。捕捉抗體結合獼猴IgE之能力可藉由在血 清中偵測之IgE之濃度估算且直接與已知結合獼猴IgE之 抗-IgE抗體相比較。 結果 藉由BIAcoreTM進行之結合實驗證明本發明抗-igE抗體無 者與IgE濃度多至30 pg/mL之狗IgE、大鼠igE或小鼠IgE 相互作用。獼猴血清之ELISA檢定提示抗_IgE抗體在不同 程度上與獼猴IgE交叉反應。此等數據提供於表2〇中。 129694.doc -130- 200904470 表20 :當抗-IgE單株抗體用作捕捉抗體時在8個獼猴血清 樣本中偵測之IgE濃度（ng/mL)。人類血清樣本用作 對照。 捕捉抗體 血清樣本 人類 血清 獼 猴 1 獼 猴 2 獼 猴 3 獼 猴 4 獼 猴 5 獼 猴 6 獼 猴 7 獼 猴 8 測試1 E25 250 172 52 166 13 232 30 0 nd 5.396.1 (重組） 385 30 0 27 0 37 3 0 nd 5.396.1 (HC-S103N LC-K61R) 399 41 0 39 0 57 0 0 nd 6.605.1 (重組） 397 120 91 107 0 140 0 0 nd 6.605.1 (Hc-H3Q、 M13K、 D82E Lc-T25A、 T53S) 437 133 103 122 0 173 19 0 nd 5.948.1 (批次2) (重組） 468 481 464 457 39 837 53 8 nd 測試2 E25 319 146 104 135 14 252 28 0 25 5.396.1 (HC-S103N LC-K61R) 357 57 39 53 0 102 0 0 0 5.948.1 (批次2) (重組） 431 289 328 309 38 630 62 0 56 5.948.1 (Hc-HIOOY) 408 170 199 178 25 420 39 0 36 129694.doc -131 - 200904470 實例17 :本發明抗艎之序列清單
表21 :本發明重組抗體之SEQ ID NO 重組Ab 序列識別符 SEQ ID NO 5.396.1 5.396.1 (Hc-S103N ； Lc- K61R) 6.605.1 6.605.1 (Hc-H3Q、 M13K、 D82E ； Lc-T25A、 T53S) 5.948.1 5.948.1 (H100Y) 重 全長 DNA 1 21 41 61 81 121 鍵 蛋白質 2 22 42 62 82 122 可變域 DNA 3 23 43 63 83 123 蛋白質 4 24 44 64 84 124 CDR1 DNA 5 25 45 65 85 125 蛋白質 6 26 46 66 86 126 CDR2 DNA 7 27 47 67 87 127 蛋白質 8 28 48 68 88 128 CDR3 DNA 9 29 49 69 89 129 蛋白質 10 30 50 70 90 130 輕 全長 DNA 11 31 51 71 91 131 鏈 蛋白質 12 32 52 72 92 132 可變域 DNA 13 33 53 73 93 133 蛋白質 14 34 54 74 94 134 CDR1 DNA 15 35 55 75 95 135 蛋白質 16 36 56 76 96 136 CDR2 DNA 17 37 57 77 97 137 蛋白質 18 38 58 78 98 138 CDR3 DNA 19 39 59 79 99 139 蛋白質 20 40 60 80 100 140 129694.doc -132- 200904470 表22 :本發明單株抗體之SEQ ID NO 來自融合瘤之mAb 序列識別符 SEQ ID NO 5.396.1 6.605.1 5.948.1 重鏈 全長 DNA 101 105 109 蛋白質 102 106 110 輕鏈 全長 DNA 103 107 111 蛋白質 104 108 112 在以下序列中：可變域呈大寫體形式；CDR加下劃線； 蛋白質序列由轉譯衍生。在所有序列中，前導序列均省 略。 由融合瘤產生之5.396.1 來自融合瘤之5.396.1重鏈之核苷睃序列=SEQ ID NO: 101
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCG
GAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTG
GTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGG
AGTGGATTGGGGAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCC
GTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAAC
CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTG
TGTATTACTGTGCGAGAGACAACTGGAACGACTCTTTCTACTACTAC
TACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCT CAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagc ggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgac cagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgc cctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca agacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtctt cctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggac gtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagac aaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactg gctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctc caaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaag aaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaat gggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagca agctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgc 129694.doc -133- 200904470 acaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 來自融合瘤之5.396.1重鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 102
OVOLOOWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIROPPGKGLE
WIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNOFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDNWNDSFYYYYGMDVWGOGTTVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgcl vkdyfpepvtvswnsgaltsgvh^avlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktver kccvecppcpappvagpsvflJ^pkpkdtlmisrtpevtcwvdvshedpevqfirwyvdgvevhnakt kpreeqfnstfrvvsvltwhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtk nqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmh ealhnhytqkslslspgk 來自融合瘤之5.396.1輕鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 103
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCACTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACATGTCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAAT
CATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCC
TGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAAGTTC
AGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCC
TGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGG CACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAcgaactg tggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctg ctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactccc aggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaa agcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaa gagcttcaacaggggagagtgt 來自融合瘤之5.396.1輕鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 104
DIOMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQGISNHLAWFOOKPGKAPKSLIY
AASSLOSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOYNRHPFTF GPGTKVDIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec 由融合瘤產生之6.605.1 來自融合瘤之6.605.1重鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 105
CAGGTTCACCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGATGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCA
GCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCA 129694.doc -134- 200904470 CAGAAGCTCCAGGGCAGAATCACCATGACCACAGACACATCCACG AGCACAGCCTACATGGACCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACG GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGGATTACTATGATCCTTTTGA CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAgcctccaccaaggg cccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggt caaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacacctt cccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggca cccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaa tgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacc caaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccc cgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagc agttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagta caagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagc cccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc tgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaa 、 ctacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaaga gcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcaga agagcctctccctgtctccgggtaaa 來自融合瘤之6.605.1重鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 106 OVHLVOSGAEVKMPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWYRQAPGQGLE WMGWISAYNGNTNYAOKLOGRITMTTDTSTSTAYMDLRSLRSDDTAV ΥΎ CARDGDYYDPFDYWGOGTLVTVSSastkgpsvfblapcsrstsestaalgclvkdy fpepvtvswnsgaltsgvhtij}avlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvciktverkccv ecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfhwyvdgvevhnaktkpre eqfhstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqv t sltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealh ^ nhytqkslslspgk 來自融合瘤之6.605.1輕鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 107
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGAGTATTAGCAAC
TGGTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCC
TGATCTATGGTGCCTCCACTTTGAAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTC
AGTGGCAGTGAATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTC
TGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAG TACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAcgaa ctgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgc ctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactc ccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagc aaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcaca 129694.doc -135- 200904470 aagagcttcaacaggggagagtgt 來自融合瘤之6.605.1輕鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 108
DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRTSOSISNWLNWYOOKPGKAPKLLI
YGASTLKSGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOSYSTPPTF GQGTKVEIKrtvaapsvfi^psdeqlksgtaswcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec 由融合瘤產生之5.948.1 來自融合瘤之5.948.1重鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 109
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG f GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA
1 GTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGA GTGGATGGGATGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCA CAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATA AGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACG GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCACTATGATAGTGATGGTTATTA CTCCTTCTCCGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACC GTCTCCTCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccg agagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcag gcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtg gtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacacc aaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcagga ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgt ggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcata atgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgc 、 accaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgag aaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggagga gatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtg ggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttctt cctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcat gaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 來自融合瘤之5.948.1重鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 110
OVQLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVROATGOGLE
WMGWMDPNSGNTGYAOKFOGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARGHYDSDGYYSFSGMDVWGOGTTVTVSSastkgpsvfplapcsrstse staalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvl^avlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntk 129694.doc -136- 200904470 vdktverkccvecppcpappvagpsvflippkpkdtlmisrtpevtcwvdvshedpevqfhwyvdgv evhnaktkpreeqfiistfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsiikglpapiektisktkgqprepqvytlpp sreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvf scsvmhealhnhytqkslslspgk 來自融合瘤之5.948.1輕鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 111
GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGG
AGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCAT
AGGAATGGATACAACTACTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGC
AGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGG
GTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACAC
TGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTG
CATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACTTTCGGCGGAGGGACC AAGGTGGAGATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcag ttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaag gtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcaccta cagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtca cccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt 來自融合瘤之5.948.1輕鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 112 DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHRNGYNYLDWYLOKPGQS POLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMOA LOTPPATF GGGTK VEIKrtvaapsvfifppsdeq Iks gtas wcllnnfypreakvq wkvdnal qsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec 重組 5.396.1 重組5.396.1重鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 1
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCG
GAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTG
GTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGG
AGTGGATTGGGGAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCC
GTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAAC
CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTG
TGTATTACTGTGCGAGAGACAACTGGAACGACTCTTTCTACTACTAC
TACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCT CAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagc ggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgac cagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgc cctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca agacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtctt 129694.doc -137- 200904470 cctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggac gtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagac aaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactg gctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctc caaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaag aaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaat gggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagca agctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgc acaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 重組5.396.1重鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 2
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLE
WIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDNWNDSFYYYYGlMDDVWGQGTTVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgcl vkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktver kccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevqfhwyvdgvevhnakt kpreeqihstfrvvsvltwhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtk nqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmh ealhnhytqkslslspgk 重組5.396.1輕鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 11
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCACTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACATGTCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAAT
CATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCC
TGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAAGTTC
AGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCC
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AASSLOSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCOOYNRHPFTF GPGTKVDIKrtvaapsvf^psdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfhrgec 重組 5.396.l(Hc-S103N Le-K61R) 重組5.396.1(81031^)重鏈之核苷酸序列=8£()1〇?^〇:21 129694.doc -138- 200904470 CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCG GAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTG GTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGG AGTGGATTGGGGAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCC GTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAAC CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTG TGTATTACTGTGCGAGAGACAACTGGAACGACAACTTCTACTACTA CTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCC TCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacag cggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctga ccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtg ccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggac aagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacetgtggcaggaccgtcagtct tcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtgga f cgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga ' caaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggact ggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatc tccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgacca agaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagca atgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacag caagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctct gcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 重組5.396.1(S103N)重鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 22 OVOLOOWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIROPPGKGLE WIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNOFSLKLSSVTAADTAVYYC I ARDNWNDNFYYYYGMDVWGOGTTVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgcl vkdyfpepvtvswnsgaltsgvl^avlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktver kccvecppcpappvagpsvflQjpkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevqfnwyvdgvevhnakt kpreeqfnstfrvvsvltwhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtk nqvsitcivkgfypsdiavewesngqpennykttppmidsdgsfflyskitvdksrwqqgnvfscsvmh ealhnhytqkslslspgk 重組5.396.1(K61R)輕鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 31
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCACTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACATGTCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAAT
CATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCC
TGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTC
AGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCC
TGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGG CACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAcgaactg 129694.doc -139- 200904470 tggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctg ctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactccc aggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaa agcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaa gagcttcaacaggggagagtgt 重組5.396.1(K61R)輕鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 32
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AASSLOSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCOOYNRHPFTF GPGTKVDIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnniypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfhrgec 重組 6.605.1 重組6.605.1重鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 41
CAGGTTCACCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGATGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCA
GCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCA
CAGAAGCTCCAGGGCAGAATCACCATGACCACAGACACATCCACG
AGCACAGCCTACATGGACCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGGATTACTATGATCCTTTTGA CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAgcctccaccaaggg cccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggt caaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacacctt cccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgccctccagcaacttcggca cccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaa tgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacc caaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccc cgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagc agttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagta caagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagc cccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc tgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaa ctacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaaga gcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaa gagcctctccctgtctccgggtaaa 重組6.605.1重鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 42
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WMGWISAYNGNTNYAOKLOGRITMTTDTSTSTAYMDLRSLRSDDTAV 129694.doc -140- 200904470 YY CARDGDYYDPFDYWGQGTLVTV SSastkgpsvfylapcsrstsestaalgclvkdy fpepvtvswnsgaltsgvhtfj)avlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccv ecppcpappvagpsvfl^pkpkdtlmisrtpevtcwvdvshedpevqfiiwyvdgvevhnaktkpre eqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqv sltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealh nhytqkslslspgk 重組6.605.1輕鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 51
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGAGTATTAGCAAC
TGGTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCC
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TGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAG TACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAcgaa ctgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgc ctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactc ccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagc aaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcaca aagagcttcaacaggggagagtgt 重組6.605.1輕鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 52
DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRTSOSISNWLNWYOOKPGKAPKLLI
YGASTLKSGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOSYSTPPTF GQGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnniypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec 重組 6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E Lc-T25A、T53S)~~ 重組6.605.1(H3Q、M13K、D82E)重鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 61
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCA
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AGCACAGCCTACATGGAACTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGGATTACTATGATCCTTTTGA CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAgcctccaccaaggg cccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggt caaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacacctt cccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgccctccagcaacttcggca 129694.doc -141 - 200904470 cccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaa tgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacc caaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccc cgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagc agttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagta caagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagc cccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc tgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaa ctacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaaga gcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaa gagcctctccctgtctccgggtaaa 重組6.605.1(113〇、]\1131^、〇82£)重鏈之衍生蛋白質序列 = SEQ ID NO: 62
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WMGWISAYNGNTNYAQKLQGRITMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAV YY CARDGDYYDPFDYWGQGTLVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdy fpepvtvswnsgaltsgvhtfjpavlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccv ecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevqfnwyvdgvevhnaktkpre eqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqv sltclvkgfypsdiave'wesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfsesvmhealh nhytqkslslspgk 重組6.605.1(T25A、T53S)輕鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 71
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AGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGTATTAGCAAC
TGGTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCC
TGATCTATGGTGCCTCCAGTTTGAAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTT
CAGTGGCAGTGAATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGT
CTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACA GTACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAcg aactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgt gcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaa ctcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctg agcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgt cacaaagagcttcaacaggggagagtgt 重組6·605·1(Τ25Α、T53S)輕鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 72 129694.doc -142- 200904470
DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASOSISNWLNWYQQKPGKAPKLLI
YGASSLKSGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLOPEDFATYYCQQSYSTPPTF GQGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec 重組 5.948.1 重組5.948.1重鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 81
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA
GTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCA
CAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATA
AGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCACTATGATAGTGATGGTTATTA
CTCCTTCTCCGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACC GTCTCCTCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccg agagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcag gcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgta gtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacacc aaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcagga ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgt ggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcata atgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgc accaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgag aaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggagga gatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtg ggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttctt cctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcat gaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 重組5.948.1重鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 82
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLE
WMGWMDPNSGNTGYAOKFOGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARGHYDSDGYYSFSGMDVWGOGTTVTVSSastkgpsvfplapcsrstse staalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntk vdktverkccvecppcpappvagpsvfl^pkpkdtlmisrtpevtcwvdvshedpevqfhwyvdgv evhnaktkpreeqfhstfrwsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlpp sreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvf scsvmhealhnhytqkslslspgk 重組5.948.1輕鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 91
GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGG 129694.doc -143- 200904470
AGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCAT
AGGAATGGATACAACTACTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGC
AGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGG
GTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACAC
TGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTG
CATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACTTTCGGCGGAGGGACC AAGGTGGAGATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcag ttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaag gtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcaccta cagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtca cccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt 重組5.948.1輕鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 92
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHRNGYNYLDWYLOKPGOS
PQLLIYLGSNRASGVPDRPSGSGSGTDFTLKISRYEAEDVGVYYCMQA LQTPPATFGGGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnal qsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec 重組 5.948.1(H100Y) 重組5.948.1重鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 121
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA
GTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCA
CAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATA
AGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCTACTATGATAGTGATGGTTATTA
CTCCTTCTCCGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACC GTCTCCTCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccg agagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcag gcgctctgaccagcggcgtg cacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgccctccagcaa cttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttga gcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccc caaaacccaaggacaccctcatgatctccc ggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtac gtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgt ggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaa aggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtaca ccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctacc ccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccat gctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaa 129694.doc -144- 200904470 cgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccggg taaa 重組5.948.1重鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 122
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLE
WMGWMDPNSGNTGYAQKFOGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARGYYDSDGYYSFSGMDVWGQGTTVTVSSastkgpsvfplapcsrstse staalgclvkdyipepvtvswnsgaltsgvhtipavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntk vdktverkccvecppcpappvagpsvf^pkpkdtlmisrtpevtcwvdvshedpevqfiiwyvdgv evhnaktkpreeqfiistfrwsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlpp sreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvf scsvmhealhnhytqkslslspgk 重組5.948.1輕鏈之核苷酸序列=SEQ ID NO: 131
GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGG
AGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCAT
AGGAATGGATACAACTACTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGC
AGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGG
GTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACAC
TGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTG
CATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACTTTCGGCGGAGGGACC AAGGTGGAGATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcag ttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaag gtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcaccta cagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtca cccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt 重組5.948.1輕鏈之衍生蛋白質序列=SEQ ID NO: 132
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHRNGYNYLDWYLQKPGOS
POLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQA LQTPPATFGGGTKVEIKrtvaapsvflfppsdeqlksgtaswclInnfypreakvqwkvdnal qsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec 序列之完整清單 SEQ ID NO 1 :重組5.396.1-全長重鏈核苷酸序列
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCG
GAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTG
GTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGG
AGTGGATTGGGGAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCC
GTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAAC
CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTG
TGTATTACTGTGCGAGAGACAACTGGAACGACTCTTTCTACTACTAC 129694.doc -145 - 200904470 TACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCT CAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagc ggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgac cagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgc cctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca agacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtctt cctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggac gtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagac aaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactg gctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctc caaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaag aaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaat gggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagca agctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgc / acaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa SEQ ID NO 2 :重組5.396.1-全長重鏈預測胺基酸序列
QVQLQOWGAGLLKPSETLSLTCAYYGGSFSGYYWSWIROPPGKGLE
WIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNOFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDNWNDSFYYYYGMDVWGOGTTVTVSSastkgpsvfblapcsrstsestaalgcl vkdj^epvtvswnsgaltsgvh^avlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktver kccvecppcpappvagpsvflippkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnakt kpreeqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtk nqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmh ealhnhytqkslslspgk SEQ ID N03:重組5.396.1-重鏈可變域核苷酸序列
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCG 、 GAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTG GTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGG AGTGGATTGGGGAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCC GTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAAC CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTG TGTATTACTGTGCGAGAGACAACTGGAACGACTCTTTCTACTACTAC TACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCT CA SEQ ID NO 4 :重組5.396.1-預測重鏈可變域胺基酸序列
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLE
WIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNOFSLKLSSVTAADTAVYYC
ARDNWNDSFYYYYGMDVWGOGTTVTVSS 129694.doc -146- 200904470 8£〇1〇]^0 5:重組5.396.1-重鏈€0111核苷酸序列
GGTTACTACTGGAGC SEQ ID NO 6 :重組5.396.1-預測重鏈CDR1胺基酸序列
GYYWS SEQ ID NO 7:重組5.396.1-重鏈CDR2核苷酸序列
GAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGA
GT SEQ ID NO 8 :重組5.396.1-預測重鏈CDR2胺基酸序列
EIHHSGSTNYNPSLKS SEQ ID NO 9:重組5.396.1-重鏈CDR3核苷酸序列
GACAACTGGAACGACTCTTTCTACTACTACTACGGTATGGACGTC 8£〇10 1^0 10:重組5.396.1-預測重鏈€01^3胺基酸序列
DNWNDSFYYYYGMDV SEQ ID NO 11 :重組5.396.1-全長輕鏈核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCACTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACATGTCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAAT
CATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCC
TGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAAGTTC
AGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCC
TGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGG CACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAcgaactg tggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctg ctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactccc aggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaa agcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaa gagcttcaacaggggagagtgt SEQ ID NO 12 :重組5.396.1-預測全長輕鏈胺基酸序列
DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASOGISNHLAWFOOKPGKAPKSLIY
AASSLQSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOQYNRHPFTF GPGTKVDIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec 129694.doc -147- 200904470 SEQ ID NO 13 :重組5.396.1-輕鏈可變域核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCACTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACATGTCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAAT
CATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCC
TGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAAGTTC
AGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCC
TGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGG
CACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA SEQ ID NO 14 :重組5.396.1-預測輕鏈可變域胺基睃序列
DIOMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASOGISNHLAWFQQKPGKAPKSLIY
AASSLOSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOYNRHPFTF
GPGTKVDIK 8£(5 1〇1^〇15:重組5.396.1-輕鏈0〇只1核苷酸序列
CGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAATCATTTAGCC SEQIDN0 16:重組5.396·1-預測輕鏈CDR1胺基酸序列
RASOGISNHLA 8£(^10 1\0 17:重組5.396.1-輕鏈€0只2核苷酸序列
GCTGCATCCAGTTTGCAAAGT 8£〇10 1\0 18:重組5.396.1-預測輕鏈€01^2胺基酸序列
AASSLOS 8£〇1〇]\0 19:重組5.396.1-輕鏈€01^3核苷酸序列
CAACAGTATAATAGGCACCCATTCACT 8£(^1〇]\〇20:重組5.396.1-預測輕鏈€〇113胺基酸序列
OOYNRHPFT SEQID^ίO21:重組5.396.1(Hc-S103NLcK61R)-全長重 鏈核苷睃序列
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCG
GAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTG
GTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGG 129694.doc -148 - 200904470
AGTGGATTGGGGAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCC
GTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAAC
CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTG
TGTATTACTGTGCGAGAGACAACTGGAACGACAACTTCTACTACTA
CTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCC TCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacag cggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctga ccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtg ccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggac aagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtct tcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtgga cgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaaga caaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggact ggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatc tccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgacca agaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagca atgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacag caagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctct gcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa 8£〇10 1^0 22:重組5.396.1(11〇81031^1^-尺6111)-預測全 長重鍵胺基酸序列
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLE
WIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNOFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDNWNDNFYYYYGMDVWGQGTTVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgcl vkdyfpepvtvswnsgaltsgvh^avlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktver kccvecppcpappvagpsvf^pkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevqfnwyvdgvevhnakt kpreeqfnstfrvvsvltwhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtk nqvsitcivkgfypsdiavewesngqpennykttppmidsdgsfflyskitvdksrwqqgnvfscsvmh ealhnhytqkslslspgk 8£〇10 1\0 23:重組5.396.1(11〇8103]\1^-尺6111)-重鏈可 變域核苷酸序列
CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCG
GAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTG
GTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGG
AGTGGATTGGGGAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCC
GTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAAC
CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTG
TGTATTACTGTGCGAGAGACAACTGGAACGACAACTTCTACTACTA
CTACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCC 129694.doc -149- 200904470
TCA SEQ ID NO 24 :重組5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)-預測重 鏈可變域胺基酸序列
OVOLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIROPPGKGLE
WIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNOFSLKLSSVTAADTAVYYC
ARDNWNDNFYYYYGMDVWGOGTTVTVSS 8£卩1〇]\〇25:重組5.396.1(11(：-810；31^1^«：6111)重鏈 CDR1核苷酸序列
GGTTACTACTGGAGC ( 8丑〇10 1\0 26:重組5.396.1(11<:-8103]\1^-1<：6111)-預測重 鏈CDR1胺基酸序列
GYYWS SEQ ID NO 27:重組 5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)-重鏈 CDR2核苷酸序列
GAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCCGTCCCTCAAGA
GT 8£()10]\0 28:重組5.396.1(11〇81031^1^_仄6111)-預測重 ( 鏈CDR2胺基酸序列
EIHHSGSTNYNPSLKS SEQ ID NO 29:重組 5.396.1(Hc-S103N LC-K61R)·重鏈 CDR3核苷酸序列
GACAACTGGAACGACAACTTCTACTACTACTACGGTATGGACGTC 8£(?1〇]\〇30:重組5.396.1(11<!-8103]^1^-«：6111)-預測重 鏈CDR3胺基酸序列
DNWNDNFYYYYGMDV SEQ ID NO 31 :重組5.396.1(Hc-S103N LC-K61R)-全長輕 129694.doc -150- 200904470 鏈核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCACTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACATGTCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAAT
CATTTAGGCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCC
TGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTC
AGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCC
TGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGG CACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAcgaactg tggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctg ctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactccc aggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaa agcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaa gagcttcaacaggggagagtgt % 8£〇10 1^0 32:重組5.396.1(11〇8103]\1^46111)-預測全 長輕鏈胺基酸序列
DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASOGISNHLAWFOOKPGKAPKSLIY
AASSLOSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOQYNRHPFTF GPGTKVDIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec SEQIDNO33:重組5.396.1(Hc-S103NLc-K61R)-輕鏈可 變域核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCACTGTCTGCATCTGTAGG AGACAGAGTCACCATCACATGTCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAAT ί CATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCC TGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTC AGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCC TGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGG CACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAA SEQ ID NO 34 :重組5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)-預測輕 鏈可變域胺基睃序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASOGISNHLAWFOOKPGKAPKSLIY
AASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOYNRHPFTF
GPGTKVDIK 8£<)10]\0 35:重組5.396.1(11〇81031^1^-«：6111)-輕鏈 129694.doc -151 - 200904470 CDR1核苷酸序列
CGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAATCATTTAGCC SEQ ID NO 36 :重組5.396.1(Hc-S103N Lc-K61R)-預測輕 鏈CDR1胺基酸序列
RASQGISNHLA 8£卩1〇]\〇37:重組 5.396.1(11(；-8103]\1^-尺6111)-輕鏈 CDR2核苷酸序列
GCTGCATCCAGTTTGCAAAGT 8£()1〇]\〇38:重組5.396.1(11<:-8103]\1^-1<：6111)-預測輕 鏈CDR2胺基睃序列
AASSLQS SEQ ID NO 39:重組 5.396.1(Hc-S103N LC-K61R)-輕鏈 CDR3核苷酸序列
CAACAGTATAATAGGCACCCATTCACT 8£〇10^0 40:重組5.396.1(11〇8103]\1^_«：611^)-預測輕 鏈CDR3胺基酸序列
OOYNRHPFT SEQ ID NO 41 :重組6.605.1-全長重鏈核苷酸序列
CAGGTTCACCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGATGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCA
GCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCA
CAGAAGCTCCAGGGCAGAATCACCATGACCACAGACACATCCACG
AGCACAGCCTACATGGACCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGGATTACTATGATCCTTTTGA CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAgcctccaccaaggg cccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggt caaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacacctt cccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgccctccagcaacttcggca 129694.doc -152- 200904470 cccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaa tgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacc caaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccc cgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagc agttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagta caagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagc cccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc tgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaa ctacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaaga gcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaa gagcctctccctgtctccgggtaaa SEQ ID NO 42 :重組6.605.1-預測全長重鏈胺基酸序列
QVHLVQSGAEVKMPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLE
WMGWISAYNGNTNYAOKLOGRITMTTDTSTSTAYMDLRSLRSDDTAV YYCARDGDYYDPFDYWGOGTLVTVSSastkgpsvfblapcsrstsestaalgclvkdv fpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccv ecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfiiwyvdgvevhnaktkpre eqfnstfrvvsvltwhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqv sltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealh nhytqkslslspgk SEQ ID NO 43 :重組6.605.1-重鏈可變域核苷酸序列
CAGGTTCACCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGATGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCA
GCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCA
CAGAAGCTCCAGGGCAGAATCACCATGACCACAGACACATCCACG
AGCACAGCCTACATGGACCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGGATTACTATGATCCTTTTGA
CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA SEQ ID NO 44 :重組6.605.1-預測重鏈可變域胺基酸序列
OVHLVQSGAEVKMPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVROAPGOGLE
WMGWISAYNGNTNYAOKLOGRITMTTDTSTSTAYMDLRSLRSDDTAV
YYCARDGDYYDPFDYWGOGTLVTVSS SEQ ID NO 45 :重組6.605.1-重鏈CDR1核苷酸序列
AGCTATGGTATCAGC 8£()1〇]\〇46:重組6.605.1-預測重鏈€〇111胺基酸序列 129694.doc -153 - 200904470
SYGIS SEQ ID NO 47 :重組6.605.1-重鏈CDR2核苷酸序列
TGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCC
AGGGC SEQ ID NO 48 :重組6.605.1-預測重鏈CDR2胺基酸序列
WISAYNGNTNYAOKLOG SEQ ID NO 49 :重組6.605.1-重鏈CDR3核苷酸序列
GATGGGGATTACTATGATCCTTTTGACTAC ^ SEQ ID NO 50 :重組6.605.1-預測重鏈CDR3胺基酸序列 f
" DGDYYDPFDY SEQ ID NO 51 :重組6.605.1-全長輕鏈核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGAGTATTAGCAAC
TGGTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCC
TGATCTATGGTGCCTCCACTTTGAAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTC
AGTGGCAGTGAATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTC
TGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAG TACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAcgaa ctgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgc ctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactc ccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagc aaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcaca aagagcttcaacaggggagagtgt SEQ ID NO 52 :重组6.605.1-預測全長輕鏈胺基酸序列
DIOMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSOSISNWLNWYOOKPGKAPKLLI
YGASTLKSGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCOOSYSTPPTF GQGTKVEIKrtvaapsvfifypsdeqlksgtaswcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec SEQ ID NO 53 :重組6.605.1-輕鏈可變域核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGAGTATTAGCAAC
TGGTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCC
TGATCTATGGTGCCTCCACTTTGAAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTC 129694.doc -154- 200904470
AGTGGCAGTGAATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTC
TGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAG
TACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA SEQ ID NO 54 :重組6.605.1-預測輕鏈可變域胺基睃序列
DIQMTOSPSSLSASVGDRVTITCRTSOSISNWLNWYOOKPGKAPKLLI
YGASTLKSGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOSYSTPPTF
GQGTKVEIK SEQ ID NO 55 :重組6.605.1-輕鏈CDR1核苷酸序列
CGGACAAGTCAGAGTATTAGCAACTGGTTAAAT 8£()1〇1^〇56:重組6.605.1-預測輕鏈€〇111胺基酸序列
RTSOSISNWLN 8£〇1〇]\〇57:重組6.605.1-輕鏈€〇只2核苷酸序列
GGTGCCTCCACTTTGAAAAGT SEQ ID NO 58 :重組6.605.1-預測輕鏈〇〇112胺基酸序列
GASTLKS 8£()1〇~〇59:重組6.605.1-輕鏈€〇113核苷睃序列
CAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGACG SEQ ID NO 60 :重組6.605.1-預測輕鏈〇〇1^3胺基酸序列
OOSYSTPPT 8£〇10 1\0 61:重組 6.605.1(11(：-113(^、]\113尺、082£;
Lc-T25A、T53S)-全長重鏈核苷酸序列
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCA
GCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCA
CAGAAGCTCCAGGGCAGAATCACCATGACCACAGACACATCCACG
AGCACAGCCTACATGGAACTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGGATTACTATGATCCTTTTGA CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAgcctccaccaaggg cccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggt caaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacacctt 129694.doc -155- 200904470 cccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtagtgaccgtgccctccagcaacttcggca cccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaa tgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacc caaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccc cgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagc agttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagta caagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagc cccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc tgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaa ctacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaaga gcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaa gagcctctccctgtctccgggtaaa 8£()10]\0 62:重組6.605.1(11〇1139、]\1131^、082£;
Lc-T25A、T53S)-預測全長重鏈胺基睃序列
OYQLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLE
WMGWISAYNGNTNYAOKLOGRITMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAV YY CARDGDYYDPFDYWGQGTLVTVSSastkgpsvfplapcsrstsestaalgclvkdy fjpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccv ecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqihwyvdgvevhnaktkpre eqfnstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqv sltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealh nhytqkslslspgk 8£()10]\0 63:重組6.605.1(11〇113(3、]\1131<；、082£;
Lc-T25A、T53S)-重鏈可變域核苷酸序列
CAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCA
GCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCA
CAGAAGCTCCAGGGCAGAATCACCATGACCACAGACACATCCACG
AGCACAGCCTACATGGAACTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGGATTACTATGATCCTTTTGA
CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCA 8£〇10 1^0 64:重組 6.605.1(11卜113(3、]\1131^、082£;
Lc-T25A、T53S)-預測重鏈可變域胺基酸序列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWYRQAPGQGLE
WMGWISAYNGNTNYAOKLOGRITMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAV
YYCARDGDYYDPFDYWGQGTLVTVSS 129694.doc -156- 200904470 SEQ ID NO 65 :重組 6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E ;
Lc-T25A、T53S)-重鏈CDR1核苷酸序列
AGCTATGGTATCAGC SEQIDNO66:重組6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E;
Lc-T25A、T53S)-預測重鏈CDR1胺基睃序列
SYGIS 8£〇1〇]^0 67:重組6.605.1(11(：_113()、]\1131^、082£;
Lc-T25A、T53S)-重鏈CDR2核苷酸序列
: TGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCACAGAAGCTCC
AGGGC 8£〇1〇]>[〇68:重組6.605.1(11(；_113〇、]\1131^、082£;
Lc-T25A、T53S)-預測重鏈CDR2胺基酸序列
WISAYNGNTNYAOKLQG 8£〇10 1\0 69:重組 6.605.1(11〇113(?、]\1131^、082£;
Lc-T25A、T53S)-重鏈CDR3核苷酸序列
GATGGGGATTACTATGATCCTTTTGACTAC ( SEQ ID NO 70 :重組 6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E ;
Lc-T25A、T53S)-預測重鏈CDR3胺基酸序列
DGDYYDPFDY SEQIDNO71:重組 6.605.1(Hc·H3Q、M13K、D82E;
Lc-T25A、T53S)-全長輕鏈核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGTATTAGCAAC
TGGTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCC
TGATCTATGGTGCCTCCAGTTTGAAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTT
CAGTGGCAGTGAATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGT
CTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACA GTACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAcg 129694.doc -157- 200904470 aactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgt gcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaa ctcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctg agcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgt cacaaagagcttcaacaggggagagtgt 8£〇1〇\〇72:重組 6.605.1(11<:-113(3、]\113尺、〇82£;
Lc-T25A、T53S)-預測全長輕鏈胺基酸序列
DIOMTOSPSSLSASVGDRVTITCRASOSISNWLNWYQQKPGKAPKLLI
YGASSLKSGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOSYSTPPTF GQGTKVEIKrtvaapsvfif^psdeqlksgtasvvdlnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfiirgec f SEQ ID NO 73 :重組6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E ;
Lc-T25A、T53S)-輕鏈可變域核苷酸序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGGCAAGTCAGAGTATTAGCAAC
TGGTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCC
TGATCTATGGTGCCTCCAGTTTGAAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTT
CAGTGGCAGTGAATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGT
CTGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACA
GTACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAA 8£〇10 1^0 74:重組6.605.1(11(：-113(^、1\113〖、082£;
Lc-T25A、T53S)-預測輕鏈可變域胺基酸序列
DIOMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASOSISNWLNWYOQKPGKAPKLLI
YGASSLKSGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOSYSTPPTF
GQGTKVEIK 8£<)1〇]^〇75:重組6.605.1(11(：-113()、]\1131<：、〇82£;
Lc-T25A、T53S)-輕鏈CDR1核苷酸序列
CGGGCAAGTCAGAGTATTAGCAACTGGTTAAAT SEQIDNO76:重組6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E;
Lc-T25A、T53S)-預測輕鏈CDR1胺基酸序列
RASOSISNWLN 129694.doc -158- 200904470 SEQ ID NO 77 :重組 6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E ;
Lc-T25A、T53S)-輕鏈CDR2核苷酸序列
GGTGCCTCCAGTTTGAAAAGT SEQ ID NO 78 :重組6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E ;
Lc-T25A、T53S)-預測輕鏈CDR2胺基酸序列
GASSLKS SEQ ID NO 79 :重組 6.605.1(Hc_H3Q、M13K、D82E ;
Lc-T25A、T53S)-輕鏈CDR3核苷酸序列
CAACAGAGTTACAGTACCCCTCCGACG SEQIDNO80:重組 6.605.1(Hc-H3Q、M13K、D82E;
Lc-T25A、T53S)-預測輕鏈CDR3胺基酸序列
OOSYSTPPT SEQ ID NO 81:重組5.948.1-全長重鍵核苷酸序列
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA
GTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCA
CAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATA
AGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCACTATGATAGTGATGGTTATTA
CTCCTTCTCCGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACC GTCTCCTCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccg agagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcag gcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgta gtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacacc aaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcagga ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgt ggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcata atgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgtcgtgc accaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgag aaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggagga gatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtg ggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttctt 129694.doc -159- 200904470 cctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcat gaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccgggtaaa SEQ ID NO 82 :重組5.948.1-預測全長重鏈胺基酸序列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLE
WMGWMDPNSGNTGYAOKFOGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARGHYDSDGYYSFSGMDVWGQGTTVTYSSastkgpsvfplapcsrstse staalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntk vdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgv evhnaktkpreeqfiistfrwsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlpp sreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvf scsvmhealhnhytqkslslspgk SEQ ID NO 83 :重組5.948.1-重鏈可變域核苷酸序列
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA
GTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCA
CAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATA
AGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCACTATGATAGTGATGGTTATTA
CTCCTTCTCCGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACC
GTCTCCTCA SEQ ID NO 84 :重組5.948.1-預測重鏈可變域胺基酸序列
OVOLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVROATGOGLE
WMGWMDPNSGNTGYAOKFOGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTA
VYYCARGHYDSDGYYSFSGMDVWGQGTTVTVSS 8£()1〇]\0 85:重組5.948.1-重鏈€01^1核苷酸序列
AGTTATGATATCAAC 8£(5 1〇]\0 86:重組5.948.1-預測重鏈€0只1胺基睃序列
SYDIN SEQ ID NO 87 :重組5.948.1-重鏈CDR1核苷睃序列
TGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCACAGAAGTTCC
AGGGC SEQ ID NO 88 :重組5.948.1-預測重鏈CDR2胺基酸序列 129694.doc -160- 200904470
WMDPNSGNTGYAOKFOG SEQ ID NO 89 :重組5.948.1-重鏈CDR3核苷酸序列
GGCCACTATGATAGTGATGGTTATTACTCCTTCTCCGGTATGGACGTC SEQ ID NO 90 :重組5.948.1-預測重鏈CDR3胺基酸序列
GHYDSDGYYSFSGMDV SEQ ID NO 91 :重組5.948.1-全長輕鏈核苷酸序列 GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGG AGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCAT AGGAATGGATACAACTACTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGC f AGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGG GTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACAC TGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTG CATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACTTTCGGCGGAGGGACC AAGGTGGAGATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcag ttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaag gtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcaccta cagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtca cccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt SEQ ID NO 92 :重組5.948.1-預測全長輕鏈胺基酸序列
DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHRNGYNYLDWYLQKPGOS
POLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQA LQTPPArFGGGTKVEIKrtvaapsvfiippsdeqlksgtaswcllnnfypreakvqwkvdnal qsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfiirgec SEQ ID NO 93:重組5.948.1-輕鏈可變域核苷酸序列
GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGG
AGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCAT
AGGAATGGATACAACTACTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGC
AGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGG
GTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACAC
TGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTG
CATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACTTTCGGCGGAGGGACC
AAGGTGGAGATCAAA SEQ ID NO 94 :重組5.948.1-預測輕鏈可變域胺基睃序列
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHRNGYNYLDWYLOKPGQS
POLLIYLGSNRASGVPDRPSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQA 129694.doc -161 - 200904470
LQTPPATFGGGTKVEIK SEQ ID NO 95 :重組5.948.1-輕鏈CDR1核苷酸序列
AGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCATAGGAATGGATACAACTACTTGG
AT SEQ ID NO 96 :重組5.948.1•預測輕鏈CDR1胺基酸序列
RSSOSLLHRNGYNYLD SEQ ID NO 97 :重組5.948.1-輕鏈CDR2核苷酸序列
TTGGGTTCTAATCGGGCCTCC SEQ ID NO 98 :重組5.948.1-預測輕鏈CDR2胺基酸序列 # '
LGSNRAS 8瓦(^1〇]\0 99:重組5.948.1-輕鏈€0113核苷酸序列
ATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACT SEQ ID NO 100 :重組5.948.1-預測輕鏈CDR3胺基酸序列
MOALQTPPAT SEQ ID NO 101 :來自融合瘤之5.396.1-重鏈核苷酸序列 CAGGTGCAGCTACAGCAGTGGGGCGCAGGACTGTTGAAGCCTTCG GAGACCCTGTCCCTCACCTGCGCTGTCTATGGTGGGTCCTTCAGTG GTTACTACTGGAGCTGGATCCGCCAGCCCCCAGGGAAGGGGCTGG ( AGTGGATTGGGGAAATCCATCATAGTGGAAGCACCAACTACAACCC GTCCCTCAAGAGTCGAGTCACCATATCAGTAGACACGTCCAAGAAC CAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCTG TGTATTACTGTGCGAGAGACAACTGGAACGACTCTTTCTACTACTAC TACGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCT CAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagc ggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgac cagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgc cctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggaca agacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtctt cctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggac gtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagac aaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactg gctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctc caaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaag 129694.doc -162- 200904470 aaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaat gggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttcttcctctacagca agctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgc acaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa SEQ ID NO 102 :來自融合瘤之5.396.1-預測重鏈胺基酸 序列
QVQLQQWGAGLLKPSETLSLTCAVYGGSFSGYYWSWIRQPPGKGLE
WIGEIHHSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNOFSLKLSSVTAADTAVYYC ARDNWNDSFYYYYGMDVWGOGTTVTVSSastkgpsvffalapcsrstsestaalgcl vkdj^epvtvswnsgaltsgvh^avlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktver kccvecppcpappvagpsvflfjjpkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgvevhnakt kpreeqfnstfrvvsvltwhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtk nqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmh ealhnhytqkslslspgk SEQ ID NO 103 :來自融合瘤之5.396.1-輕鏈核苷睃序列
GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCATCACTGTCTGCATCTGTAGG
AGACAGAGTCACCATCACATGTCGGGCGAGTCAGGGCATTAGCAAT
CATTTAGCCTGGTTTCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAGTCCC
TGATCTATGCTGCATCCAGTTTGCAAAGTGGGGTCCCATCAAAGTTC
AGCGGCAGTGGATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGCC
TGCAGCCTGAAGATTTTGCAACTTATTACTGCCAACAGTATAATAGG CACCCATTCACTTTCGGCCCTGGGACCAAAGTGGATATCAAAcgaactg tggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctg ctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactccc aggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagcaa agcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaa gagcttcaacaggggagagtgt SEQ ID NO 104:來自融合瘤之5.396.1-預測輕鏈胺基酸 序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASOGISNHLAWFOOKPGKAPKSLIY
AASSLOSGVPSKFSGSGSGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOYNRHPFTF GPGTKVDIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnniypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec SEQ ID NO 105 :來自融合瘤之6.605.1-重鏈核苷酸序列
CAGGTTCACCTGGTGCAGTCTGGAGCTGAGGTGAAGATGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGTTACACCTTTACCA 129694.doc -163 - 200904470
GCTATGGTATCAGCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATCAGCGCTTACAATGGTAACACAAACTATGCA
CAGAAGCTCCAGGGCAGAATCACCATGACCACAGACACATCCACG
AGCACAGCCTACATGGACCTGAGGAGCCTGAGATCTGACGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGATGGGGATTACTATGATCCTTTTGA CTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAgcctccaccaaggg cccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccgagagcacagcggccctgggctgcctggt caaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcaggcgctctgaccagcggcgtgcacacctt cccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtggtgaccgtgccctccagcaacttcggca cccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacaccaaggtggacaagacagttgagcgcaaa tgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcaggaccgtcagtcttcctcttccccccaaaacc caaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccc cgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagc agttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagta caagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagc cccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacc tgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaa ctacaagaccacacctcccatgctggactcegacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaaga gcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacgcaga agagcctctccctgtctccgggtaaa SEQ ID NO 106:來自融合瘤之6.605.1-預測重鏈胺基酸 序列 QVHLVQSGAEVKMPGASVKVSCKASGYTFTSYGISWVRQAPGQGLE WMGWISAYNGNTNYAQKLOGRITMTTDTSTSTAYMDLRSLRSDDTAV YYCARDGDYYDPFDYWGOGTLVTVSSastkgpsvfblapcsrstsestaalgclvkdy fpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntkvdktverkccv 《 ecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevqfhwyvdgvevhnaktkpre 、 eqfiistfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlppsreemtknqv sltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealh nhytqkslslspgk SEQ ID NO 107 :來自融合瘤之6.605.1-輕鏈核苷酸序列 GACATCCAGATGACCCAGTCTCCATCCTCCCTGTCTGCATCTGTAGG AGACAGAGTCACCATCACTTGCCGGACAAGTCAGAGTATTAGCAAC TGGTTAAATTGGTATCAGCAGAAACCAGGGAAAGCCCCTAAACTCC TGATCTATGGTGCCTCCACTTTGAAAAGTGGGGTCCCATCAAGGTTC AGTGGCAGTGAATCTGGGACAGATTTCACTCTCACCATCAGCAGTC TGCAACCTGAAGATTTTGCAACTTACTACTGTCAACAGAGTTACAG TACCCCTCCGACGTTCGGCCAAGGGACCAAGGTGGAAATCAAAcgaa ' ctgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcagttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgc ctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaaggtggataacgccctccaatcgggtaactc 129694.doc -164- 200904470 ccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcacctacagcctcagcagcaccctgacgctgagc aaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcaca aagagcttcaacaggggagagtgt SEQ ID NO 108 :來自融合瘤之6.605.1-預測輕鏈胺基酸 序列
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSOSISNWLNWYQOKPGKAPKLLI
YGASTLKSGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLOPEDFATYYCOOSYSTPPTF GQGTKVEIKrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvte qdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec SEQ ID NO 109 :來自融合瘤之5.948.1-重鏈核苷酸序列
,· CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
f GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA GTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGA GTGGATGGGATGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCA CAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATA AGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACG GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCCACTATGATAGTGATGGTTATTA CTCCTTCTCCGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACC GTCTCCTCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccg agagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcag gcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccagctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgtg gtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacacc aaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcagga ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctcccggacccctgaggtcacgtgcgt f ggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtacgtggacggcgtggaggtgcata l atgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgtggtcagcgtcctcaccgttgtgc accaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaaaggcctcccagcccccatcgag aaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtacaccctgcccccatcccgggagga gatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctaccccagcgacatcgccgtggagtg ggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccatgctggactccgacggctccttctt cctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaacgtcttctcatgctccgtgatgcat gaggctctgcacaaccactacacgcagaagagcctctccctgtctccgggtaaa SEQ ID NO 110 :來自融合瘤之5.948.1-預測重鏈胺基酸 序列
OVQLVOSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVROATGOGLE
WMGWMDPNSGNTGYAQKFOGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARGHYDSDGYYSFSGMDVWGOGTTVTVSSastkgpsvfblapcsrstse staalgclvkd>^epvtvswnsgaltsgyhtfyavlqssglyslssvvtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntk 129694.doc -165- 200904470 vdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvwdvshedpevqfiiwyvdgv evhnaktkpreeqfiistfrwsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlpp sreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvf scsvmhealhnhytqkslslspgk SEQ ID NO 111 :來自融合瘤之5.948.1-輕鏈核苷酸序列
GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGG
AGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCAT
AGGAATGGATACAACTACTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGC
AGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGG
GTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACAC
TGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTG
CATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACTTTCGGCGGAGGGACC AAGGTGGAGATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcag ttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaag gtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcaccta cagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtca cccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt SEQ ID NO 112 :來自融合瘤之5.948.1-預測輕鏈胺基酸 序列
DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHRNGYNYLDWYLQKPGQS
PQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMOA LOTPPATFGGGTKVEIKrtvaapsvfifbpsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnal qsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec SEQ ID NO 121 :重組5.948.1(H100Y)-全長重鏈核苷酸序列
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA
GTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCA
CAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATA
AGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCTACTATGATAGTGATGGTTATTA
CTCCTTCTCCGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACC GTCTCCTCAgcctccaccaagggcccatcggtcttccccctggcgccctgctccaggagcacctccg agagcacagcggccctgggctgcctggtcaaggactacttccccgaaccggtgacggtgtcgtggaactcag gcgctctgaccagcggcgtgcacaccttcccggctgtcctacagtcctcaggactctactccctcagcagcgta gtgaccgtgccctccagcaacttcggcacccagacctacacctgcaacgtagatcacaagcccagcaacacc aaggtggacaagacagttgagcgcaaatgttgtgtcgagtgcccaccgtgcccagcaccacctgtggcagga ccgtcagtcttcctcttccccccaaaacccaaggacaccctcatgatctccc 129694.doc -166- 200904470
Ggacccctgaggtcacgtgcgtggtggtggacgtgagccacgaagaccccgaggtccagttcaactggtac gtggacggcgtggaggtgcataatgccaagacaaagccacgggaggagcagttcaacagcacgttccgtgt ggtcagcgtcctcaccgtcgtgcaccaggactggctgaacggcaaggagtacaagtgcaaggtctccaacaa aggcctcccagcccccatcgagaaaaccatctccaaaaccaaagggcagccccgagaaccacaggtgtaca ccctgcccccatcccgggaggagatgaccaagaaccaggtcagcctgacctgcctggtcaaaggcttctacc ccagcgacatcgccgtggagtgggagagcaatgggcagccggagaacaactacaagaccacacctcccat gctggactccgacggctccttcttcctctacagcaagctcaccgtggacaagagcaggtggcagcaggggaa cgtcttctcatgctccgtgatgcatgaggctctgcacaaccactacacacagaagagcctctccctgtctccggg taaa SEQ ID NO 122 :重組5.948.1(H100Y)-預測全長重鏈胺基 睃序列
QVOLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVRQATGQGLE
WMGWMDPNSGNTGYAOKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTA VYYCARGYYDSDGYYSFSGMDVWGOGTTVTVSSastkgpsvfplapcsrstse staalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslsswtvpssnfgtqtytcnvdhkpsntk vdktverkccvecppcpappvagpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevqfnwyvdgv evhnaktkpreeqfhstfrvvsvltvvhqdwlngkeykckvsnkglpapiektisktkgqprepqvytlpp sreemtknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppmldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvf scsvmhealhnhytqkslslspgk SEQ ID NO 123 :重組5.948.1(H100Y)-重鏈可變域核苷酸 序列
CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGG
GCCTCAGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCACCA
GTTATGATATCAACTGGGTGCGACAGGCCACTGGACAAGGGCTTGA
GTGGATGGGATGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCA
CAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATA
AGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACG
GCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGCTACTATGATAGTGATGGTTATTA
CTCCTTCTCCGGTATGGACGTCTGGGGCCAAGGGACCACGGTCACC
GTCTCCTGA SEQ ID NO 124:重組5.948.1(H100Y)-預測重鏈可變域胺 基睃序列
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYDINWVROATGOGLE
WMGWMDPNSGNTGYAOKPOGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSEDTA
VYYCARGYYDSDGYYSFSG3VIDVWGOGTTVTVSS SEQ ID NO 125:重組5.948.1(11100¥)-重鏈€0111核苷酸 129694.doc -167- 200904470 序列
AGTTATGATATCAAC SEQ ID NO 126:重組5.948.1(11100¥)-預測重鏈€0111胺 基酸序列
SYDIN SEQ ID NO 127:重組5.948.1(11100¥)-重鏈€0只2核苷酸 序列
TGGATGGACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCACAGAAGTTCC
AGGGC SEQ ID NO 128:重組5.948.1(11100¥)-預測重鏈€0112胺 基酸序列
WMDPNSGNTGYAOKFQG SEQ ID NO 129:重組 5.948.1(11100¥)-重鏈€01^核苷酸 序列 GGCTACTATGATAGTGATGGTTATTACTCCTTCTCCGGTATGGACGTC SEQ ID NO 130:重組 5.948.1(11100¥)-預測重鏈€0113胺 基酸序列
GYYDSDGYYSFSGMDV SEQ ID NO 131 :重組5.948.1(H100Y)-全長輕鏈核苷酸 序列
GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGG
AGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCAT
AGGAATGGATACAACTACTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGC
AGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGG
GTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACAC
TGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTG
CATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACTTTCGGCGGAGGGACC AAGGTGGAGATCAAAcgaactgtggctgcaccatctgtcttcatcttcccgccatctgatgagcag 129694.doc -168- 200904470 ttgaaatctggaactgcctctgttgtgtgcctgctgaataacttctatcccagagaggccaaagtacagtggaag gtggataacgccctccaatcgggtaactcccaggagagtgtcacagagcaggacagcaaggacagcaccta cagcctcagcagcaccctgacgctgagcaaagcagactacgagaaacacaaagtctacgcctgcgaagtca cccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagagcttcaacaggggagagtgt SEQ ID NO 132 :重組5.948.1(H100Y)-預測全長輕鏈胺基 酸序列 DIVMTOSPLSLPVTPGEPASISCRSSOSLLHRNGYNYLDWYLOKPGOS PQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQA LQTPPATF GGGTKVEIKrtvaapsvfifijpsdeq lksgtas wcllnnfypreakvq wkvdnal qsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec SEQ ID NO 133 :重組5.948.1(H100Y)-輕鏈可變域核苷酸 序列
GATATTGTGATGACTCAGTCTCCACTCTCCCTGCCCGTCACCCCTGG
AGAGCCGGCCTCCATCTCCTGTAGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCAT
AGGAATGGATACAACTACTTGGATTGGTACCTGCAGAAGCCAGGGC
AGTCTCCACAGCTCCTGATCTATTTGGGTTCTAATCGGGCCTCCGGG
GTCCCTGACAGGTTCAGTGGCAGTGGATCAGGCACAGATTTTACAC
TGAAAATCAGCAGAGTGGAGGCTGAGGATGTTGGGGTTTATTACTG
CATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACTTTCGGCGGAGGGACC
AAGGTGGAGATCAAA SEQ ID NO 134 :重組5.948.1(H100Y)-預測輕鏈可變域胺 基酸序列
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHRNGYNYLDWYLOKPGOS
POLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMOA
LOTPPATFGGGTKVEIK SEQ ID NO 135:重組 5.948.1(11100¥)-輕鏈€01^1核苷酸 序列
AGGTCTAGTCAGAGCCTCCTGCATAGGAATGGATACAACTACTTGG ΛΓ SEQ ID NO 136:重組 5.948.1(11100¥)-預測輕鏈€0111胺 基睃序列
RSSQSLLHRNGYNYLD 129694.doc -169- 200904470 SEQ ID NO 137:重組 5.948·1(Η100Υ)-輕鏈 CDR2核苷酸 序列
TTGGGTTCTAATCGGGCCTCC SEQ ID NO 138:重組 5.948.1(11100¥)-預測輕鏈€01^2胺 基酸序列
LGSNRAS SEQ ID NO 139:重組5.948.1(11100¥)-輕鏈€01^3核苷酸 序列
ATGCAAGCTCTACAAACTCCTCCGGCCACT SEQ ID NO 140:重組 5.948.1(11100¥)-預測輕鏈€0113胺 基酸序列
MOALOTPPAT 【圖式簡單說明】 圖1及圖2展示本發明之例示性抗-IgE抗體之促效活性檢 定（RBL-2H3(FcsRl)細胞檢定）之結果； 圖3及圖4展示本發明之例示性抗-IgE抗體之促效活性檢 定（人類血液嗜鹼性細胞檢定）之結果；及 圖5展示本發明之例示性抗-IgE抗體之抗原決定基區域 化定位。 129694.doc -170- 200904470 序歹1J表 <110>美商輝瑞大藥廠 〇 美商艾默根佛蒙特有限公司 <120>抗-IgE抗體 <I30> ABX-PF10 <140> 097111898 <141> 2008/04/01 <150> 61/008,755 <151> 2007-12-20 <!50> 60/92),546 <151> 2007-04-02 <)60> 140 <170> Patentln version 3.3 <210> I <2!1> 1347 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 1 caggtgcagc accigcgctg ccagggaagg ccgtccctca aagctgagct aacgactct t gtctcctcag acctccgaga acggtgtcgt cagtcctcag acccagacct gilgagcgca tcagtcttcc gtcacgigcg gtggacggcg acgt tccgtg tacaagtgca accaaagggc accaagaacc gtggagtggg gactccgacg caggggaacg tacagcagtg tctatggtgg ggctggaglg agagtcgagt ctgtgaccgc tctactacta cctccaccaa gcacagcggc ggaactcagg gactctactc acacctgcaa aatgt tgtgt tct tcccccc tggtggtgga tggaggtgca tggtcagcgt aggtctccaa agccccgaga aggicagcci agagcaatgg gctccttcit tct tctcatg gggcgcagga gtccttcagt gattggggaa caccatatca cgcggacacg ctacggtatg gggcccatcg cctgggcigc cgctctgacc cctcagcagc cgtagatcac cgagtgccca aaaacccaag cgtgagccac taatgccaag ccicaccgtc caaaggcctc accacaggtg gacctgcctg gcagccggag cctctacagc ctccgtgatg ctgt tgaagc ggttactact atccatcata gtagacacgt gctgtgtatt gacgtctggg gtcttccccc ctggtcaagg agcggcgtgc gtagtgaccg aagcccagca ccgtgcccag gacaccctca gaagaccccg acaaagccac gtgcaccagg ccagccccca tacaccctgc gtcaaaggcl aacaactaca aagctcaccg catgaggctc cttcggagac ggagctggat gtggaagcac ccaagaacca actgtgcgag gccaagggac tggcgccctg actacttccc acaccttccc igccctccag acaccaaggt caccacctgt tgatctcccg aggtccagtt gggaggagca actggctgaa tcgagaaaac ccccatcccg tciaccccag agaccacacc tggacaagag tgcacaacca cctgiccctc ccgccagccc caactacaac gttctccctg agacaactgg cracggtcacc ctccaggagc cgaaccggtg ggctgtccta caacttcggc ggacaagaca ggcaggaccg gacccctgag caactggtac gttcaacagc cggcaaggag catctccaaa ggaggagatg cgacatcgcc tcccatgctg caggtggcag ctacacacag 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 ]〇20 1080 1140 1200 1260 1320 129694-序列表.doc 200904470 aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa <210> 2 <211> 449 <212> PRT <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400〉 2
Gin Val Gin Leu Gin Gin 丁rp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30
Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45 f Gly Glu lie His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys " 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110
Trp-Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser ]30 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 llir Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr G!n Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys 210 215 220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser -2- 1347 129694-序列表.doc 200904470 245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270
Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 290 295 300
Val Ser Val Leu 丁hr Val Val His G】n Asp 丁rp Leu Asn Giy Lys Glu 305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro He Glu Lys 325 330 335
Thr He Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Mel Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr 355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu 385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415
Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Va! Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445
Lys <210> 3 <211> 369 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 3 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atccatcata gtggaagcac caactacaac ccgtccctca agagtcgagt caccataica gtagacacgt ccaagaacca gttctccclg aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agacaacigg 129694-序列表.doc 200904470 aacgactctt tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc gtctcctca <210〉 4 <211> 123 <212> PRT <2]3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 4
Gin Val Gin Leu Gin Gin Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30
Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Glu He His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Ser Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 5 <211> 15 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 5 ggttactact ggagc <210> 6 <211> 5 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 6
Gly Tyr Tyr Trp Ser <210> 7 4- 129694-序列表.doc 200904470 <211> 48 <212> DNA <2Π>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 7 gaaatccatc atagtggaag caccaactac aacccgtccc tcaagagt 48 <2I0> 8 <211> 16 <212> PRT <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 8
Glu lie Hi^ His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 ]〇 15 <210> 9 <211> 45 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 9 gacaactgga acgactct 11 ctactactac tacggtatgg acgtc 45 <210> 10 <211> 15 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 10
Asp Asn Trp Asn Asp Ser Phe Tyr Tyr Tyr 丁yr Gly Met Asp Val 15 10 15 <210> 11 <21]> 642 <2)2> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 11 gacatccaga tgacccagtc tccatcatca ctgtctgcal ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacatgtc gggcgagtca gggcattagc aatcat ttag cctggt t tea gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagti igcaaagtgg ggtcccatca 180 aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat t icactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagat 11 tg caact tat ta c tgccaacag taiaataggc acccaltcac t ucggccct 300 gggaccaaag tggatatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctgtct teat ct tcccgcca 360 129694-序列表.doc 420 200904470 480 540 600 642 tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tctgttgtgt gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg laactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcttcaac aggggagagt gt <210> 12 <211> 214 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 12
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Va! 丁hr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin G]y lie Ser Asn His 20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys P「o Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu He 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Arg His Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val 丁hr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 129694-序列表.doc 200904470 <2】0> 13 <211> 32]
<212> DNA <2丨3>人造序列 <220〉 <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 13 gacatccaga tgacccagtc tccatcatca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacatgtc gggcgagtca gggcattagc aatcatttag cctggtttca gcagaaacca gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca aagttcagcg gcagtggalc tgggacagai ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct gaagat 11ig caact tatta ctgccaacag tataataggc acccattcac i ttcggccct gggaccaaag tggatatcaa a <210> 14 <21]> 107 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 14
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn His 20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Arg His Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105 <210> 15 <211〉 33 <212> DNA <2]3>人造序列 <220> <223:>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <40〇> 15 cgggcgagtc agggcattag caatcattta gcc 129694-序列表.doc 200904470 <2I0> 16 <211> 11 <212> PRT <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 16
Arg Ala Ser Gin Gly Me Ser Asn His Leu 1 5 10 <210> 17 <211> 21 <212> DNA <2〗3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 17 gctgcatcca gt t tgcaaag t <210> 18 <211> 7 <212> PR丁 <2】3>人造序列 <220> <223〉人造序列之描述：合成肽 <400> 18
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <2I0> 19 -<211〉 27 <212> rnk <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 19 caacagtala ataggcaccc aticact
<21ϋ> 20 <21]> 9 <212> PRT 人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 20
Gin Gin Tyr Asn Arg His Pro Phe Thr <210> 21 <211> 1347 <212> DNA <2】3>人造序列 <220> 129694-序列表.doc 200904470 <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 21 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa aiccatcata gtggaagcac caactacaac ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg aagctgagct ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag agacaactgg aacgacaact tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc gtctcctcag cciccaccaa gggcccatcg gtcttccccc tggcgccctg ctccaggagc acctccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc ggctgtccta cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtagtgaccg tgccctccag caacltcggc acccagacct acacctgcaa cgtagatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca gttgagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgigcccag caccacctgt ggcaggaccg icagtcticc tcitcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatcicccg gacccctgag gtcacgtgcg tggtggigga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac giggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gttcaacagc acgiiccgtg tggtcagcgt cctcaccgic gtgcaccagg actggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgcig gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgaig catgaggctc igcacaacca ctacacacag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa <210> 22 <211> 449 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 22
Gin Val Gin Leu Gin Gin Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30
Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp He 35 40 45
Gly Glu lie His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60 129694-序列表.doc -9- 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 )260 1320 1347 200904470
Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Asn Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Π5 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe f 165 170 175
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Va) Glu Arg Lys 210 2)5 220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Me Ser 245 250 255
Arg Thr Pro Glu Va) Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270
Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 3]0 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335
Thr lie Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr •10- 129694-序列表.doc 200904470 355 360 365
Cys Leu Va! Lys Gly Phe 丁yr Pro Ser Asp lie Ala Val Glu 丁rp Glu 370 375 380
Ser Asn (Jly Gin Pro G]u Asn Asn Tyr Lys Thr 丁hr Pro Pro Met Leu 385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415
Se「 Arg 丁rp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 s 5 i 3 H 4 u Le
Le Γ c s s Ly no 14 G 4 Γ Th Γ Ty Γ e s u 5 c 4 L 4
G
Lys <210> 23 <211> 369 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 23 caggtgcagc tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc ct tcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atccatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aagctgagcl ctgtgaccgc cgcggacacg gclgtgtaiI actgtgcgag agacaactgg 300 aacgacaact tctactacta ctacggtatg gacgtctggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 24 <211> 123 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <4〇〇> 24 Gin Val Gin Π n G,r u c G p
Gllo G Γ £ 5 SI o Γ p s Ly u Le u Le 丁hr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val 丁yr Gly G)y Ser Phe Ser G】y Tyr 20 25 30
Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Me 35 40 45
Gly Glu lie His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys -Π - 129694-序列表.doc 200904470 50 55 60
Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Pbe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Asn Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Thr 115 Val Thr Val Ser Ser 120 <210> 25 <2il> 15 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> ^ <223>人造序列之描述 :合成寡核苷酸 <400> 25 ggttactact ggagc 15 <210> 26 <211〉 5 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述 <400> 26 Gly 丁yr Tyr Trp Ser ] 5 :合成肽 <210> 27 <211> 48 <212> DNA <2]3>人造序列 \ <220> <223>人造序列之描述 <400> 27 :合成寡核苷酸 gaaatccatc atagtggaag caccaaciac aacccgtccc tcaagagt 48 <210> 28 <213> 16 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述 :合成肽 <400> 28
Glu He His His Ser Gly Ser 丁hr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 15 10 15 <210> 29 <211> 45 -12- 129694-序列表.doc 200904470
<212> DNA <2】3>人造序列 <220> a … <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 29 gacaactgga acgacaactt ctactactac tacggtatgg acgtc
<210> 30 <21]> 15 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 30
Asp Asn Trp Asn Asp Asn Phe Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 15
<210> 31 <211> 642 <212> DNA <2丨3>人造序列 <22ϋ> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 \ <400> 31 gacatccaga atcacatgtc gggaaagccc aggttcagcg gaagat tttg gggaccaaag tctgatgagc cccagagagg gagagtgtca ctgagcaaag ctgagctcgc tgacccagtc gggcgagtca ctaagtccct gcagtggatc caacttatta tggatatcaa agt tgaaatc ccaaagtaca cagagcagga cagactacga ccgtcacaaa tccatcalca gggcattagc gatctatgct tgggacagal ctgccaacag acgaactgtg tggaacigcc gtggaaggtg cagcaaggac gaaacacaaa gagcttcaac ctgtctgcat aatcat t tag gcatccagtt t tcactctca tataataggc gctgcaccat ictgttgtgl gataacgccc agcacctaca gtctacgcct aggggagagt ctgtaggaga cctggtttca tgcaaagtgg ccatcagcag acccat tcac cigtcttcat gcctgctgaa tccaatcggg gcctcagcag gcgaagtcac gt cagagtcacc gcagaaacca ggtcccatca cctgcagcct tt tcggccct ct tcccgcca taacticiat taactcccag caccctgacg ccatcagggc <210> 32 <211> 214 <212> PRT <2]3>人造序列 <22D> <223>人造序列之描述：合成多狀 <400> 32
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Hi s
Ser Asn 30 -13 - 129694-序列表.doc 200904470
Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Arg His Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Va! Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Scr Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 200 205 195
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 33 <211> 321 , <212> DNA l <213>人造序列 <220> <223〉人造序列之描述： 合成聚核苷酸 <400〉 33 gacatccaga tgacccagtc tccatcatca cigtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacatgtc gggcgagtca gggcattagc aatcatt tag cctggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagtccct gatciatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggt tcagcg gcagtggatc tgggacagat t tcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattitg caact tatta ctgccaacag tataataggc acccat tcac 11 tcggccci 300 gggaccaaag tggatatcaa a 321
<210> 34 <211> 107 <2\2> PRT 129694·序列表.doc 14- 200904470 <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 34
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn His 20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu lie 35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala 丁hr Tyr Tyr Cys Gin Gin 丁yr Asn Arg His Pro Phe 85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp lie Lys 100 105
<210> 35 <211> 33 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成募核苷酸 <400> 35 cgggcgagtc agggcattag caatcattta gcc 33 <210> 36 <211> 11
/ <212〉 PRT 1 <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 36
Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn His Leu Ala 1 5 10 <210> 37 <211> 21 <212> DNA <2丨3>人造序列 艺梁人造序列之描述：合成寡核普酸 <400> 37 gctgcatcca gt t tgcaaag t 21 15- 129694-序列表.doc 200904470 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220〉 <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 38
Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser 1 5 <210> 39 <211> 27 <2)2> DNA <2〗3>人造序列 <220> 一 <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 39 caacagtata ataggcaccc attcact <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 40
Gin Gin Tyr Asn Arg His Pro Phe Thr 1 5 <210> 41 <211> 1335 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 27 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 <400> 41 caggttcacc tcctgcaagg cctggacaag gcacagaagc atggacctga gatlactatg tccaccaagg acagcggccc aactcaggcg ctctactccc acctgcaacg tgt tgtgtcg iggtgcagtc citctggtta ggcitgagtg tccagggcag ggagcctgag atcct titga gcccatcggt tgggctgcct ctctgaccag tcagcagcgt tagatcacaa agtgcccacc tggagctgag cacct ttacc gatgggatgg aatcaccatg atctgacgac ctaciggggc cttccccctg ggtcaaggac cggcgtgcac agtgaccgtg gcccagcaac gtgcccagca gtgaagatgc agctatggta atcagcgctt accacagaca acggccgtgt cagggaaccc gcgccctgct lacttccccg accttcccgg ccctccagca accaaggtgg ccacctgtgg ctggggcctc tcagctgggt acaatggtaa catccacgag at tactgtgc tggtcaccgt ccaggagcac aaccggtgac ctgtcctaca acttcggcac acaagacagt caggaccgtc agtgaaggtc gcgacaggcc cacaaactat cacagcctac gagagatggg ctcctcagcc ctccgagagc ggtgtcgtgg gtcctcagga ccagacct ac tgagcgcaaa aglet tcctc -16- 129694·序列表.doc 200904470 ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atcicccgga cccctgaggt cacgtgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata algccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgigtg gtcagcgtcc tcaccgtcgt gcaccaggac iggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag gictccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccaicccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caaciacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc ctgtctccgg gtaaa
<210> 42 <211> 445 /' <212> PRT k <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 42
Gin Val His Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Met Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
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Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu 130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160
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Gin Val His Leu Val Gin Ser Giy Ala Glu Val Lys Met Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Gly lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu 丁rp Met 35 40 45
Gly Trp He Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu 50 55 60 G]n Gly Arg lie Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 l〇 15
Asp Arg Va! Thr Me TTir Cys Arg Thr Ser Gin Ser He Ser Asn Trp 20 25 30
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Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140
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Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Thr Ser Gin Ser lie Ser Asn Trp 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
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<212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 57 ggtgcctcca ctttgaaaag t <210> 58 <211> 7 <212> PRT <2!3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 58
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Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr l s <210> 61 <211> 1335 <212> DNA <2】3>人造序列 <220〉 <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400〉 61 caggtccagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc tcctgcaagg cttciggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggl gcgacaggcc f cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactai gcacagaagc tccagggcag aatcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac atggaactga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatggg gaitactatg atcctutga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcagcc iccaccaagg gcccatcggt cliccccctg gcgccctgct ccaggagcac ctccgagagc acagcggccc tgggctgcct ggtcaaggac tacticcccg aaccggtgac ggtgtcgtgg aactcaggcg ctctgaccag cggcgtgcac accttcccgg ctgtcctaca gtcctcagga ctctactccc tcagcagcgi agtgaccgtg ccctccagca acitcggcac ccagacctac acctgcaacg tagatcacaa gcccagcaac accaaggtgg acaagacagt tgagcgcaaa tgllgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttccic ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcaia atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac guccgtgtg / gtcagcgtcc tcaccgtcgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagccictcc ctgtctccgg gtaaa <210> 62 <21]> 445 <212> PRT <213>人造序列 <220> A … <223>人造序列之描述：合成多肽 129694-序列表.doc -24- 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 660 720 780 84ϋ 900 960 1020 1080 Π40 1200 1260 1320 1335 200904470 <400> 62
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
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Gin Va) Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 ]〇 15 26· 60 120 180 240 300 357 129694-序列表.doc 200904470
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Trp He Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gin Lys Leu Gin 1 5 10 15
<210〉 69 <21]> 30 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220〉 <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 69 gatg£ggatt actatgatcc tmgactac
<210〉 70 <211> 10 <212> PRT ( <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 70
Asp Gly Asp Tyr Tyr Asp Pro Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 71 <211> 642 <212> DNA <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸-<400> 71 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcactlgcc gggcaagtca gagtattagc aactggttaa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaaactcct gatctatggt gcctccagtt tgaaaagtgg ggtcccatca aggttcagtg gcagtgaatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag ictgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccctccgac gttcggccaa gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gctgcaccat ctglcttcat ctlcccgcca tcuatgagc agttgaaatc tggaactgcc icigugtgt gcctgctgaa taacttctat cccagagagg ccaaagiaca gtggaaggtg gataacgccc iccaatcggg taactcccag gagagtgica cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagcicgc ccgicacaaa gagcttcaac aggggagagt gt <210> 72 <211> 214 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> 129694-序列表,d〇c -28- 200904470 <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 72
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Trp 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
SerGluScG.vThrAspPhe^r Leu Thr He Ser Ser Leu Gin Pro f ^ Asp Phe A.a Thr Ty, Tyr CyS G,n G,n Ser Tyr Ser Pro Pro
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 115 】20 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 MO
Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gin Ser Gly Asn Ser Gin 145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <2]〇> 73 <2Π> 321 <2]2> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述··合成聚核苷酸 <400> 73 gacatccaga tgacccagtc tccatccicc ctgtctgcat cigtaggaga cagagtcacc atcacltgcc gggcaagica gagtattagc aaciggttaa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaaactcct gatctatggt gcctccagtt tgaaaagtgg ggtcccatca •29· 60 】20 129694-序列表.doc 180 200904470 aggttcagtg gcagtgaatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240 gaagaiittg caacttacta ctgtcaacag agttacagta cccciccgac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggaaatcaa a 321 <210> 74 <211> 107 <212> PRT <213>人造序列 <22D> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 74
Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15
Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Ser lie Ser Asn Trp 20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ne 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60
Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95
Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu Me Lys 100 105 <210〉 75 <21]> 33 <212> DNA <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 75 cgggcaagic agagtattag caactggtta aat 33
<2!0> 76 <211> 11 <2!2> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 76
Arg Ala Ser Gin Ser ile Ser Asn Trp Leu Asn <210> 77 <211> 21 30- 129694-序列表.doc 200904470
<2I2> DNA <2丨3>人造序列 <220> _ <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 77 ggtgcctcca gtttgaaaag t 21
<2Ι0> 78 <211> 7 <212> PRT 人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 78
Gly Ala Ser Ser Leu Lys Ser
<210> 79 <21I> 27 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220〉 <223>人造序列之描述：合成募核苷酸 <400> 79 caacagagtt acagtacccc tccgacg 27 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 80
Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Pro Thr 1 5
<210> 81 <211> 1353 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400〉 81 caggtgcagc tggigcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc .120 actggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atggacccta acagtggtaa cacaggctat 180 gcacagaagt iccagggcag agicaccatg accaggaaca cctccataag cacagcciac 240 atggagctga gcagcctgag atcigaggac acggccgtgt aitacigtgc gagaggccac 300 tatgatagtg atggttatta ctccnctcc ggtatggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctcagccic caccaagggc ccatcggtct tccccctggc gccctgctcc 420 -31 - 129694-序列表 tj〇c 480 200904470 aggagcacct ccgagagcac agcggccctg ggctgcctgg tcaaggacta cttccccgaa ccggtgacgg tgtcgtggaa ctcaggcgct ctgaccagcg gcgtgcacac cttcccggct gtcctacagt ccicaggact ctactccctc agcagcgtag tgaccgtgcc ctccagcaac ttcggcaccc agacctacac ctgcaacgta gatcacaagc ccagcaacac caaggtggac aagacagttg agcgcaaatg ttgtgtcgag tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca ggaccgtcag let tcctct t ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac iggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc aacagcacgt tccgtgiggt cagcgtcctc accgtcgtgc accaggactg getgaaegge aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccaicga gaaaaccatc tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca caggtgiaca cccigccccc atcccgggag gagaigacca agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggetteta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc r aigctggact ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg iggcagcagg ggaacgtcil ctcatgctcc gtgatgcatg aggetetgea caaccactac acacagaaga gcctctccct gtciccgggt aaa <210> 82 <211> 451 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 82
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Va] Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Asp ile Asn Trp Val Arg Gin A]a Thr Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe 55 60
Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly His Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Mel 100 105 110
Asp Va] Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr 115 120 125 129694-序列表 d〇c -32- 540 600 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1353 200904470
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser 130 135 140
Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu 145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His 165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser 180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr 丁yr Thr Cys 195 200 205
Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu 210 215 220
Ary Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala 225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255
Me Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Vat Asp Val Ser His 260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe 290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp 丁卬 Leu Asn Gly 305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie 325 330 335
Glu Lys Thr Me Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val 340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu 370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro 385 390 395 400
Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val 405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430 •33 - 129694-序列表.doc 200904470
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445
Pro Gly Lys 450 <210> 83 <211> 375 <212> DNA <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 83 caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc iccigcaagg cttctggata caccttcacc agttatgata tcaactgggt gcgacaggcc aciggacaag ggcttgagtg gatgggaigg atggacccta acagtggtaa cacaggctal wacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctcxauag cacagcciac citggagctga gcagccigag atcigaggac acggccgigl attactgtgc gagaggccac latgatagtg atggttaita ctcctlctcc gglatggacg tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct cctca <210> 84 <21]> 125 <212> PRT <2]3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 84
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Asp lie Asn Trp Val Arg Gin Ala Thr Gly Gin Gly Leu Glu Trp Mel 35 40 45
Gly Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60
Gin G]y Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys S5 90 95
Ala Arg Gly His Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 34- 129694-序列表.doc 200904470 <210> 85 <211> 15 <212> DNA <2!3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成募核苷酸 <400〉 85 agttatgata tcaac 15 <210> 86 <211> 5 <212> PR丁 <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 86
Ser Tyr Asp lie Asn <210> 87 <211〉 51 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 87 tggatggacc ctaacagtgg taacacaggc tatgcacaga agttccaggg c 51 <210> 88 <211> 17 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 88
Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 15 10 15
Gly <210> 89 <21l> 48 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 89 ggccactatg alagtgatgg ttatlactcc ttctccggta tggacgtc 48 <210> 90 <211> 16 -35- 129694·序列表.doc 200904470 <212> PR丁 <W3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 90
Gly His Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met Asp Va] 15 10 15 <210> 91 <211> 660 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 91 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgta ggtctagtca gagcctcctg cataggaatg gatacaacta ct tggat tgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct at t tgggt tc taatcgggcc ]80 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagat11tac actgaaaatc 240 agcagagigg aggctgagga tgttggggtt tattactgca tgcaagctct acaaactcct 300 ccggccactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaac gaactgtggc tgcaccatct 360 gtctteatci tcccgccatc igatgagcag ttgaaatctg gaactgccic tgttgtgtgc 420 ctgctgaaia act ictatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 4S0 caatcgggta acicccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc 540 ctca^cagca cccigacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagl ctacgcctgc 600 gaagicaccc atcag—ggcct gagctcgccc gtcacaaaga gettcaacag gggagagrtgt 660 <210> 92 <211> 220 <212〉 PRT <2丨3>人造序列 ξ <220> 、 人造序列之描述：合成多肽 <400> 92
Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Arg 20 25 30
Asn Giy 丁yr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60
e s c ph s Γ A e o s 7 lo .—-8 s Ly u Le Γ Th c ph p s 5 A 7 Γ Th • 36 - 129694-序列表.doc 200904470
Ser Arg Val Giu A】a Glu Asp Val Gly Val 丁yr Tyr Cys Met Gin Ala 85 90 95
Leu Gin Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie 100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lie Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125
Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160
Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser 195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 220 <21ϋ> 93 <211> 339 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 93 gatattgtga 丨gactcagtc tccactctcc ctgcccgica cccctggaga gccggcctcc atctcctgta ggtctagtca gagcctcctg cataggaatg gatacaacta cttggattgg tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggtlc taatcgggcc tccgggglcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc agcagagtgg aggctgagga tgttggggtt tatlactgca tgcaagctct acaaactcct ccggccacti 〖cggcggagg gaccaaggtg gagalcaaa <210> 94 <211> 113 <212> PRT <2!3>人造序列 <22ϋ> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 94
Asp lie Val Met Thr G'ln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Arg 20 25 30 -37- 60 120 180 240 300 339 129694-序列表.doc 200904470
Asn Gly Tyr Asn 丁yr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Giy Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu ile 丁yr Leu G!y Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser A「g Val Glu Ala G]u Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin Ala S5 90 95
Leu Gin Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie 100 105 110
Lys <210> 95 f <211> 48
I <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 95 aggtctagtc agagcctcct gcataggaat ggatacaact acttggat 48 <210> 96 <211> 16 <212> PRT <2〗3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 96
Arg Ser vSer Gin Ser Leu Leu His Arg Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 15 10 15 ·〆 V <210> 97
<211> 21 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 97 ttgggttcta atcgggcctc c 21 <210> 98 <211> 7 <212> PRT <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 38- 129694-序列表.doc 200904470 <400> 98
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
<210> 99 <211> 30 <212> DNA <2]3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 99 atgcaagctc tacaaactcc tccggccact 30 <210> 100 <2Π> !0 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 100
Met Gin Ala Leu Gin Thr Pro Pro Ala Thr 1 5 10 <210> 101 <211> 1347 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 101 caggtgcagc tacagcagtg gggcg-cagga ctgitgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acclgcgctg tctatggtgg gtcct tcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gaitggggaa aiccatcata gtggaagcac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagl caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccclg 240 aagctgagci ctgtgaccgc cgcggacacg gctgigiait actgtgcgag agacaactgg 300 aacgactctt tctactacta ctacggtaig gacgictggg gccaagggac cacggtcacc 360 gtctcctcag cctccaccaa gggcccaicg gtcttccccc tg^cgccctg ctccaggagc 420 acciccgaga gcacagcggc cctgggctgc ctggtcaagg actacttccc cgaaccggtg 480 acggtgtcgt ggaactcagg cgctctgacc agcggcgtgc acaccttccc agctgtccta 540 cagtcctcag gactctactc cctcagcagc gtggtgaccg tgccctccag caact tcggc 600 acccagacct acacc tgcaa cgugatcac aagcccagca acaccaaggt ggacaagaca 660 ^ngagcgca aatgttgtgt cgagtgccca ccgtgcccag caccacctgt ggcaggaccg 720 icagtct tcc tcttcccccc aaaacccaag gacaccctca tgatctcccg gacccctgag 780 gtcacgigcg tggiggtgga cgtgagccac gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 840 gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccac gggaggagca gucaacagc 900 acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtt gtgcaccagg ac丨ggctgaa cggcaaggag 960 lacaagtgca aggtciccaa caaaggcctc ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa 1020 -39- 129694-序列表.doc 200904470 accaaagggc agccccgaga accacaggtg tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacacc tcccatgctg gaciccgacg gctccttcu cctclacagc aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcaig ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa <210> 102 <2Π> 449 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400〉丨02
Gin Val Gin Leu Gin Gin Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 15 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30
Tyr Trp Ser Trp He Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45
Gly Glu I!e His His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60
Ser Arg Val Thr He Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala A!a Asp 丁hr Ala Val Tyr 丁yr Cys Ala 85 90 95
Arg Asp Asn Trp Asn Asp Ser Phe Tyr Tyr Tyr 丁yr Gly Met Asp Val 100 105 110
Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly I!5 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser 130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175
Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gin Thr Tyr Thr Cys Asn Val 195 200 205 40- 1080 1140 1200 1260 1320 1347 129694-序列表.doc 200904470
Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val GIu Arg Lys 210 215 220
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro 225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie Ser 245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270
Pro G]u Val Gin Phe Asn 丁rp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val 290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys 325 330 335 I'hr He Ser Lys Thr Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr 340 345 350 l.eu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Mel Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu 丁hr 355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp He Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380
Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu 385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415
Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445
Lys <2I0> 103 <211> 642 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 103 • 41 - 129694-序列表.doc 200904470 gacatccaga alcacatgtc gggaaagccc aagt tcagcg gaagatntg gggaccaaag tctgatgagc cccagagagg gagaglgtca ctgagcaaag ctgagctcgc tgacccagtc gggcgagtca ctaagiccct gcagtggatc caact tat ta tggatatcaa agt tgaaatc ccaaagtaca cagagcagga cagactacga ccgtcacaaa tccatcaica gggcaitagc gatctatgct tgggacagat cigccaacag acgaactgtg tggaactgcc gtggaaggtg cagcaaggac gaaacacaaa gagcttcaac cigtcigcat aatcat ttag gcalccagtt ttcactctca tataataggc gctgcaccat tctgttgtgt gataacgccc agcacctaca gtciacgcct aggggagagi ctgiaggaga cctggt tica tgcaaagtgg ccatcagcag acccat tcac ctgtcttcat gcctgctgaa tccaatcggg gcctcagcag gcgaagicac gt cagagtcacc gcagaaacca ggtcccatca cctgcagcct 11 tcggccct cttcccgcca taacttctat taactcccag caccctgacg ccaicagggc 60 120 180 240 300 360 420 480 540 600 642 <210> 104 <211> 214 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 104
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Glu Ser Val Thr Giu Gin Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 -42- 129694-序列表.doc 200904470
Ser Thr Leu Leu Ser Lys Ala Asp 丁yr Glu Lys His Lys Val 丁yr 180 】85 190
Ala Cys Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205
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Gin Val His Leu Val Gin Ser G]y Ala Glu Val Lys Mel Pro Gly Ala 1 5 10 ]5
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<21ϋ> 107 <21]> 642 <212> DNA <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 10*7 gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ct^tcigcat cigtaggaga cagagicacc atcactigcc ggacaagtca gagtattagc aactggttaa attggtatca gcagaaacca gggaaagccc ctaaactcct gatctatggt gcctccactt igaaaagtgg ggtcccatca aggttcagtg gcagtgaatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct gaagattttg caacttacta ctgtcaacag agitacagta cccctccgac gticggccaa gggaccaagg tggaaatcaa acgaactgtg gcigcaccat ctgtcttcat citcccgcca tctgatgagc agttgaaatc tggaactgcc tclgttgtgt gccigctgaa laacttctat cccagagagg ccaaagtaca gtggaaggtg gataacgccc tccaatcggg taactcccag gagagtgtca cagagcagga cagcaaggac agcacctaca gcctcagcag caccctgacg ctgagcaaag cagactacga gaaacacaaa gtctacgcct gcgaagtcac ccatcagggc ctgagctcgc ccgtcacaaa gagcitcaac aggggagagi gt -45- 129694-序列表.doc 200904470 <210> 108 <211> 214 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400> 108
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Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr I]e Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 GIu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 丁hr Phe Giy Gin Gly 丁hr Lys Val Glu He Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110
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Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 245 250 255 lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His 260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe Asn Ser Thr Phe 290 295 300
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Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Va] Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Me 325 330 335 (jlu Lys 丁hr lie Ser Lys Thr Lys Gly Ci!n Pro Arg Glu Pro Gin Val 340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser 355 360 365 -48- 129694-序列表.doc 200904470
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Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin Ala 85 90 95
Leu Gin Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie 100 105 110
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Glu On Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Va] Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160
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Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Va】Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser G]y Tyr 丁hr Phe 丁hr Ser Tyr 20 25 30
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Asp Lys Ser Arg 丁rp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met 420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu Ser 435 440 445
Pro Gly Lys 450 <210> )23 <211> 375 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400〉 123 caggigcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc tcctgcaagg cttctggaia caccttcacc agltatgata tcaactgggt gcgacaggcc aciggacaag ggcttgagtg gaigggatgg atggacccia acagtggtaa cacaggctat gcacagaagt tccagggcag agtcaccatg accaggaaca cctccataag cacagcctac atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attacigtgc gagaggctac tatgatagtg aiggttatta ctccttctcc ggtatggacg tctggggcca agggaccacg gtcaccgtct cctca <210> 124 <211> 125 53- 129694-序列表.doc 200904470
<212> PRT <2Π>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400〉 124
Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly 丁yr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30
Asp lie Asn Trp Val Arg Gin Ala Thr Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn riTir Gly Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60
Gin Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asn Thr Ser lie Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met 100 105 110
Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210〉 125 <211> 15 <212> DNA <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成募核苷酸 <400> 125 agt tatgata \caac <210> 126 <211> 5 <212> PRT <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 126
Ser Tyr Asp 11 e Asn <210> 127 <211> 51 <212> DNA <2!3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 54- 129694-序列表.doc 200904470 <400> 127 tggatggacc ctaacagtgg taacacaggc tatgcacaga agttccaggg c 51 <210> 128 <211> 17 <212> PR丁 <2丨3>人造序列 合成肽 <220> , <223>人造序列之描述 <400> 128 。
Trp Met Asp Pro Asn Ser Gly Asn Thr Gly Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 15 10 15
Gly <210> 129 <211> 48 <212> DNA <2】3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 129 ggctactatg atagtgatgg ttattactcc ttctccggta tggacgtc 48 <210> 130 <211> 16 <212〉 PR丁 <2】3>人造序列 <22〇> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 130
Gly Tyr Tyr Asp Ser Asp Gly Tyr Tyr Ser Phe Ser Gly Met Asp Val 15 10 15 <210> 131 <211> 660 <212> DNA <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 131 gaiat tgiga igactcagtc tccactcicc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgta ggtctagtca gagcctcctg cataggaatg gatacaacta ct tggat tgg 120 tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc 180 tccggggtcc dgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggcigagga ign^gggt t tattacigca tgcaagcict acaaactcct 300 ccggccacti icggcggagg gaccaaggtg gagatcaaac gaactgtggc tgcaccatct 360 gtcttcatct tcccgccatc igatgagcag t tgaaatcig gaactgcctc tgt tgtgtgc 420 ctgctgaata act tctatcc cagagaggcc aaagtacagt ggaaggtgga taacgccctc 480 -55- 129694-序列表.doc 540 200904470 caatcgggta actcccagga gagtgtcaca gagcaggaca gcaaggacag cacctacagc ctcagcagca ccctgacgct gagcaaagca gactacgaga aacacaaagt ctacgcctgc gaagtcaccc atcagggcct gagctcgccc gtcacaaaga gcttcaacag gggagagtgt <210> 132 <211> 220 <212> PRT <2丨3>人造序列 ίΐδ人造序列之描述：合成多肽 <40〇> 132
Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly i 5 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Arg 20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys He 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val 丁yr Tyr Cys Met Gin Ala 85 90 95
Leu Gin Thr Pm Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie 100 105 Π0
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe ile Phe Pro Pro Ser Asp 115 120 125
Glu Gin Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Va! Cys Leu Leu Asn Asn , 130 135 140 4 K ,
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gin Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 145 150 155 160
Gin Ser Gly Asn Ser Gin Glu Ser Val Thr Glu Gin Asp Ser Lys Asp 165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Scr 195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 2】0 215 220 <2I〇> 133 -56- 600 660 129694-序列表.doc 200904470 <211> 339 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成聚核苷酸 <400> 133 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc aictcctgta ggtctagtca gagcctcctg caiaggaatg gatacaacta ctiggattgg tacctgcaga agccagggca gtctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcgggcc tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagatutac actgaaaatc agt;agagigg aggcigagga tgUggggtt lauaclgca igcaagctct acaaactcct ccggccactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaa
<2!ϋ> 134 <211> 113 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成多肽 <400〉134 A^p lie Val Me: Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Arg 20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45
Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60
Asp Arg Phe Ser G]y Ser Gly Ser G'ly 丁hr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin Ala 85 90 95
Leu Gin Thr Pro Pro Ala Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie 100 105 110
<210> 135 <211> 48 <2]2> DNA <213>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 135 aggtctagtc agagcctcct gcataggaat ggaiacaact acttggat -57- 129694·序列表.doc 200904470 <210> 136 <211> 16 <212> PRT <2!3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 136
Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Arg Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp 15 10 15 <210> 137 <2】1> 21 <212> DNA <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 <400> 137 t tgggt tcta atcgggcctc c <210> 138 <211> 7 <212> PRT <2丨3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 138
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser <210> 139 <211> 30 <212> DNA <2!3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成寡核苷酸 i: <400> 139 \ atgcaagcic tacaaactcc tccggccact <210> 140 <21l> 30 <212> PRT <2!3>人造序列 <220> <223>人造序列之描述：合成肽 <400> 140
Met Gin Ala Leu Gin Thr Pro Pro Ala Thr 1 5 10 58- 129694-序列表.doc

Claims (1)

  1. 200904470 十、申請專利範圍： 1. 一種針對人類IgE之人類單株抗體或抗原結合部分或 其抗原結合部分，其具有至少一種選自由以下組成之群 的其他性質： a) 如使用人類FceR1轉染之RBL_2H3細胞株之細胞結合 檢定中其降低IgE之能力所測量，具有〇 5 pg/mL或以下 的IC5〇值； b) 如其抑制IgE介導之人類FcsRl轉染之RBL-2H3細胞株 之脫粒的能力所測量，具有〇 5 gg/mL或以下的IC5〇值； c) 不交聯受體結合之IgE，且不刺激與人類IgE—起培養 之RBL-2H3(FcsRl)細胞之IgE依賴性脫粒； d) 不交聯受體結合之igE，且不刺激人類血液嗜鹼性細 胞之IgE依賴性脫粒； e) 對於IgE之選擇性高於對於人類IgA、igG 1及1gG3 ; f) 如表面電漿共振所測量，以丨5 nM或以下之親和力常 數KD與全長人類IgE結合； g) 如表面電漿共振所測量，具有2X 1 〇·4 s_1或以下之對於 人類IgE之離解速率（0ff rate)(kOff); h) 結合於人類IgE之抗原決定基相同於選自由以下組成 之群之抗體所結合的人類IgE之抗原決定基：重組 5.396.1 ; 5.396.1 Hc-S103N Lc-K61R;重組 6.605·1 ; 6.605.1(H3Q、M13K、D82E-T25A、T53S);重組5·948·1 及 5.948.1 H100Y。 2. 一種分離之針對人類IgE之人類抗體或其抗原結合部 129694.doc 200904470 分， 其中該抗體具有約 0.1-30 pg/mL 之 IC25 ng/mL(100-5000 ng/mL)， 其中該IC25 ng/mL( 1 00-5000 ng/mL)定義為將血清樣本中游 離IgE濃度自約100-5000 ng/mL範圍内之初始濃度降低至 約25 ng/ml之濃度所需之抗體的活體外濃度。 3 ·如請求項2之抗體或其部分， 其中該抗體具有約1-30 pg/mL之IC25 ng/mL(500-1500 ng/mL)， 其中該IC25 ng/mL(5〇〇-l 500 ng/mL)定義為將血清樣本中游 離IgE濃度自約500-1500 ng/mL範圍内之初始濃度降低至 約25 ng/ml之濃度所需之抗體的活體外濃度。 4 ·如前述請求項中任一項之抗體或其部分， 其中該抗體包含具有一個選自由SEQ ID NO: 1 〇、30、 50、70、90及130組成之群之序列的H-CDR3。 5 ·如前述請求項中任一項之抗體或其部分， 其中該抗體係選自由以下組成之群： -包含分別具有SEQ ID NO: 6、8、1 〇之序列之H-CDRs (H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合及分別具 有 SEQ ID NO: 16、18、20 之序列之 l_CDRs(l_ CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； -包含分別具有SEQ ID NO: 26、28、3〇之序列之士 CDRS(H-CDR1、H_CDR2、h_CDR3)之 h cdr 集合及 分別具有 SEQ m NO: 36、38、4〇之序列 2L_CDRs(L_ 129694.doc 200904470 CDRl、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 46、48、50之序列之11-CDRs(H-CDRl、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合及 分別具有SEQ ID NO: 56、58、60之序列之1^-匚01^(1^ CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； -包含分別具有SEQ ID NO: 66、68、70之序列之11-CDRs(H-CDRl、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合及 分別具有 SEQ ID NO: 76、78、80之序列之 L-CDRs(L- f、 CDRl、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體； - 包含分別具有SEQ ID NO: 86、88、90之序列之^ CDRs(H-CDRl、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR集合及 分別具有SEQ ID NO: 96、98、100之序列之L-CDRs (L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之L-CDR集合的抗體；及 - 包含分別具有SEQ ID NO: 126、128、130之序列之11-CDRs(H-CDRl、H-CDR2、H-CDR3)之 H-CDR 集合及 分別具有 SEQ ID NO: 136、138、140之序列之L-CDRs (L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3)之 L-CDR集合的抗體。 6. 如前述請求項中任一項之抗體或其部分， 其中該抗體為IgGl或IgG2亞型。 7. 如前述請求項中任一項之抗體或其部分， 其中該抗體係選自由以下組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 4之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 14之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 24之序列之H-可變域及具有SEQ 129694.doc 200904470 ID NO: 34之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 44之序列之Η-可變域及具有SEQ ID NO: 54之序列之L-可變域的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 64之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO·· 74之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 84之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 94之序列之L-可變域的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 124之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 134之序列之L-可變域的抗體。 8. 如前述請求項中任一項之抗體或其部分， 其中該抗體係選自由以下組成之群： -包含具有SEQ ID NO: 2之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 12之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 22之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 32之序列之L-鏈的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 42之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 52之序列之L-鏈的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 62之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 72之序列之L-鏈的抗體； - 包含具有SEQ ID NO: 82之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 92之序列之L-鏈的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 122之序列之H-鏈及具有SEQ ID NO: 132之序列之L-鏈的抗體。 9. 如前述請求項中任一項之抗體或其部分， 129694.doc 200904470 其中該抗體係選自由以下組成之群： -包含由SEQ ID NO: 1之核酸序列編碼之H_鏈序列及由 SEQ ID NO: 11之核酸序列編碼之L-鏈序列的抗體； -包含由SEQ ID NO: 21之核酸序列編碼之札鏈序列及 由SEQ ID NO: 31之核酸序列編碼之L-鏈序列的抗體； -包含由SEQ ID NO: 41之核酸序列編碼之h-鏈序列及 由SEQ ID NO: 5 1之核酸序列編碼之L-鏈序列的抗體； '包含由SEQ !D NO: 6 1之核酸序列編碼之η-鏈序列及 由SEQ ID NO: 71之核酸序列編碼之L-鏈序列的抗 體；及 -包含由SEQ ID NO: 8 1之核酸序列編碼之^鏈序列及 由SEQ ID NO: 9 1之核酸序列編碼之L-鏈序列的抗 體；及 -包含由SEQ ID NO: 121之核酸序列編碼之H-鏈序列及 由SEQ ID NO: 1 3 1之核酸序列編碼之l-鏈序列的抗 體。 1 〇· —種如前述請求項中任一項之抗體或其部分之變異體， 其中該變異體與該抗體或其部分不同之處在於1、2、 3、4、5、6、7、8、9或1〇處胺基酸取代。 11. 一種核酸序列’其編碼如前述請求項中任一項之抗體或 其部分之一鍵。 12. -種載體’其包含如請求項u之核酸序列。 13’種載體’其適於表現如請求項1至1〇中任一項之抗體 或其部分之一鍵。 129694.doc 200904470 1 4. 一種細胞， 部分之一鏈 其表現如請求項 至10中任一項之抗體或其 15. 一種製造如請求項 法，其包含培養如 分。 1至10中任一項之抗體或其部分的方 4求項14之細胞及回收該抗體或其部 16. 如請求項1至1 〇中釭 ^ ^ 任一項之抗體或其部分，其係用作藥 物。 17.如請求項1至 U T任一項之抗體或其部分，其係用於治 療選自由哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症 組成之群的IgE介導之病症。 種W藥 '纟且合物’其包含如請求項1至1G中任-項之抗 體或其部分。 19. 如月;』述哨求項之醫藥組合物，其係用於治療選自由哮 喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症組成之群的 IgE介導之病症。 20. 種/σ療有需要之個體的IgE介導之病症的方法，該病 症係選自由哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏 症組成之群，該方法包含向該個體投與治療有效量之如 請求項1至1 〇中任一項之抗體或其部分。 2 1. —種如請求項1至丨〇中任一項之抗體或其部分之用途，其 係用於製造用於治療選自由哮喘、過敏性哮喘、過敏性 鼻炎及食物過敏症組成之群之IgE介導之病症的藥物。 22. —種核酸序列，其係選自由SEq ID N〇: }、3、u、13、 21、23、31、33、41、43、51、53、61、63、71、73、 129694.doc 200904470 81、83 ' 91、93、101、l〇3、105、107、109、111、 121、123、131及133組成之群。 23. —種針對人類igE之抗體，其中該抗體係選自由以下組 成之群： -包含具有SEQ ID NO: 4之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 14之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 24之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 34之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 44之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 54之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 64之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 74之序列之L-可變域的抗體； -包含具有SEQ ID NO: 84之序列之H-可變域及具有SEQ ID NO: 94之序列之L-可變域的抗體；及 -包含具有SEQ ID NO: 124之序列之H-可變域及具有 SEQ ID NO: 134之序列之L-可變域的抗體。 24. —種針對人類IgE之抗體，其中該抗體包含具有SEq ID NO·· 2之序列之η-鏈及具有SEQ ID NO: 12之序列之L-鏈。 25. —種針對人類IgE之抗體，其中該抗體包含具有SEq ID NO: 22之序列之η-鏈及具有SEQ ID NO: 32之序列之L- 鍵0 26· —種針對人類IgE之抗體，其中該抗體包含具有SEq ID NO: 42之序列之H_鏈及具有SEQ ID NO: 52之序列之L- 129694.doc 200904470 鏈。 27. —種針對人類IgE之抗體，其中該抗體包含具有SEQ ID NO: 62之序列之Η-鏈及具有SEQ ID NO: 72之序列之L- 鏈。 28. —種針對人類IgE之抗體，其中該抗體包含具有SEQ ID NO: 82之序列之Η-鏈及具有SEQ ID NO: 92之序列之L- 鍵。 29. —種針對人類IgE之抗體，其中該抗體包含具有SEQ ID NO: 122之序列之Η-鏈及具有SEQ ID NO: 132之序列之L- 鍵。 30. —種針對人類IgE之抗體，其中該抗體包含由ATCC寄存 物PTA-7977之嵌入物編碼之H-鏈及由ATCC寄存物PTA-7982之嵌入物編碼之L-鏈； 其中該等寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定 (Budapest Treaty)寄存於美國菌種保存中心（ATCC)，P. O. Box 1M9，Manassas，VA 20108, USA。 31. —種針對人類IgE之抗體，其中該抗體包含由ATCC寄存 物PTA-7981之嵌入物編碼之H-鏈及由ATCC寄存物PTA-7980之嵌入物編碼之L-鏈； 其中該等寄存物於2006年11月7曰根據布達佩斯協定寄 存於美國菌種保存中心（ATCC)，Ρ. Ο. Box 1549, Manassas，VA 20108, USA。 32. —種針對人類IgE之抗體，其中該抗體包含由ATCC寄存 物PTA-7985之嵌入物編碼之H-鏈及由ATCC寄存物PTA- 129694.doc 200904470 7984之嵌入物編碼之L —鏈； 其中該等寄存物於2006年11月7日根據布達佩斯協定寄 存於美國菌種保存中心（ATCC)，P. 〇. B0X 1549, Manassas，VA 20108, USA。 3 3.—種針對人類igE之抗體，其中該抗體包含由ATCC寄存 物PTA-7983之嵌入物編碼之H-鏈及由ATCC寄存物pta_ 7978之嵌入物編碼之L-鏈； 其中該等寄存物於2006年11月7日根據布連佩斯協定寄 存於美國菌種保存中心（ATCC)，Ρ. 〇. β〇χ 1549, Manassas, VA 20108, USA。 34. —種針對人類lgE之抗體，其中該抗體包含由ATCC寄存 物PTA-7979之嵌入物編碼之H-鏈及由ATCC寄存物PTA_ 7986之嵌入物編碼之L-鏈； 其中該等寄存物於2006年11月7曰根據布達佩斯協定寄 存於美國菌種保存中心（ATCC)，P. 〇. B〇x 1549 Manassas，VA 20108，USA 〇 3 5 .如凊求項2 3至3 4中任一項之抗體’其係用作藥物。 3 6.如請求項23至34中任一項之抗體，其係用於治療選自由 哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症組成之群 的IgE介導之病症。 3 7. —種醫藥組合物，其包含如請求項23至34中任一項之抗 體。 3 8.如前述請求項之醫藥組合物，其係用於治療選自由哮 喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏症組成之群的 129694.doc 200904470 IgE介導之病症。 39. —種治療有需要之個體之IgE介導之病症的方法，該病 症係選自由哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及食物過敏 症組成之群，該方法包含向該個體投與治療有效量之如 凊求項2 3至3 4中任一項之抗體。 40. —種如請求項23至34中任一項之抗體之用途，其係用於 製造用於治療選自由哮喘、過敏性哮喘、過敏性鼻炎及 f '' 食物過敏症組成之群之IgE介導之病症的藥物。 41. 種核酸序列’其編碼如請求項23至3 4中任—項之抗體 或其部分之一鏈。 42. —種載體，其包含如請求項4丨之核酸序列。 43. —種載體，其適於表現如請求項23至34中任一項之抗體 或其部分之 '""鍵。 44. 一種細胞，其表現如請求項23至34中任一項之抗體或其 部分之一鍵。 45· 一種製造如請求項23至34中任一項之抗體或其部分的方 法’其包含培養如請求項43之細胞及回收該抗體或其部 分。 46. —種降低IgE與FcέR1結合的方法，其包含使該IgE與如 請求項1至1 0或23至34中任一項之抗-IgE抗體或抗原結合 部分接觸。 47. —種降低IgE介導之細胞脫粒的方法，其包含使該細胞 與如請求項1至10或23至34中任一項之抗-IgE抗體或抗原 結合部分接觸。 129694.doc -10-
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