CN107207589A - 抗il‑25抗体及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种与人白介素‑25(IL‑25)结合的抗体及其使用方法。根据某些实施方式，本发明的抗体以较高的亲和性与人IL‑25结合。在某些实施方式中，本发明包括与人IL‑25结合并阻断IL‑25介导的细胞信号传导的抗体。本发明的抗体可以是全人源的、非天然存在的抗体。本发明的抗体用于治疗与IL‑25的活性或表达相关的各种病症，包括哮喘、过敏、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、包括溃疡性结肠炎和克隆氏病的炎性肠病(IBD)、特应性皮炎(AD)以及嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA)(也称为Churg‑Strauss综合征)。

Description

抗IL-25抗体及其使用方法
发明领域
本发明涉及与白介素-25(IL-25)特异性结合的抗体及其抗原结合片段，包含这些抗体的药物组合物及其使用方法。
背景技术
白介素-25(IL-25)是一种在结构上与白介素-17(IL-17)相关的细胞因子并且有时将其称为IL-17E。其是一种与异二聚体IL-17RB/IL-17RA受体相互作用并通过其传递信号的分泌的、同型二聚体糖蛋白(Iwakura等，(2010),Immunity,34:149)。IL-25由Th2细胞、上皮细胞、内皮细胞、肺泡巨噬细胞、肥大细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞产生(Rouvier,E.等，(1993),J.Immunol.150:5445-5456；Pan,G.等，(2001),J.Immunol.167:6559-6567；Kim,M.等，(2002),Blood 100:2330-2340)。通过IL-25传递的信号与嗜酸性粒细胞的募集、Th2和Th9应答的引发以及Th1和Th17细胞应答的抑制相关。IL-25在多种组织中诱导包括IL-4、IL-5和IL-13在内的其他细胞因子的产生(Fort,MM等，(2001),Immunity15:985-995)。
IL-25参与与胃肠道相关的慢性炎症并且在与肠道的自身免疫性疾病(如炎性肠病
(IBD))相关的染色体区域中鉴定了IL-25基因(Büning,C.等，(2003),Eur.J.Immunogenet.Oct；30(5):329-333)。IL-25在来自哮喘患者的样品中也已显示出了上调(Sherkat,R.等，(2014),Asia Pac.Allergy Oct；4(4):212-221)。因此，IL-25信号的阻断对治疗多种与IL-25的活性或表达相关的病症可能是有用的。
在例如美国专利号8,785,605、8,658,169和8,206,717以及PCT公开WO2011/123507、WO2010/038155和WO2008/129263中提及了抗-IL-25抗体。尽管如此，在本领域中对用于治疗与IL-25的表达和/或信号传递相关的疾病或病症、或者用于治疗与IL-25的表达和/或信号传递相关的其他病况的新型IL-25拮抗剂(如本发明的抗-IL-25抗体)仍存在需求。
发明内容
本发明提供了与人白介素-25(IL-25)特异性结合的分离的抗体及其抗原结合片段。
在第一个方面，本发明提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人白介素-25(IL-25)特异性结合，其中所述抗体或其抗原结合片段显示出两个或多个下述特征：
(a)是全人源单克隆抗体；
(b)根据表面等离子体共振测定在25℃时以小于约120pM的KD与人IL-25结合；
(c)根据表面等离子体共振测定在25℃时以大于约105分钟的解离半衰期(t1/2)与人IL-25结合；
(d)以小于约2.0nM的IC50阻断在工程化以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中的人IL-25信号传导；
(e)以小于约16nM的IC50阻断在人外周血单核细胞(PBMC)中的人IL-25信号传导；
(f)在过表达IL-25的哺乳动物中降低循环和/或肺IgE水平；
(g)在过表达IL-25的哺乳动物中减少杯状细胞化生；
(h)包含三个重链互补性决定区(HCDR)，所述重链互补性决定区包含在含有表1中所示的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)中；或者
(i)包含三个轻链互补性决定区(LCDR)，所述轻链互补性决定区包含在含有表1中所示的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)中。
本发明的分离的抗体和抗原结合片段是有用的，尤其是用于治疗与白介素-25(IL-25)的活性或表达相关的疾病和病症。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段根据表面等离子体共振测定在25℃或37℃时以小于约100pM的KD与人IL-25特异性结合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，根据表面等离子体共振测定在25℃或37℃时所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以小于约60pM的KD与人IL-25特异性结合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，根据表面等离子体共振测定在25℃或37℃时所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以小于约40pM的KD与人IL-25特异性结合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，根据表面等离子体共振测定在25℃或37℃时所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以小于约20pM的KD与人IL-25特异性结合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，根据表面等离子体共振测定在25℃时所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以大于约150分钟的t1/2与人IL-25特异性结合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，根据表面等离子体共振测定在25℃时所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以大于约200分钟的t1/2与人IL-25特异性结合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，根据表面等离子体共振测定在25℃时所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以大于约250分钟的t1/2与人IL-25特异性结合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，根据表面等离子体共振测定在25℃时所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以大于约400分钟的t1/2与人IL-25特异性结合。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段与人IL-25特异性结合并且以小于约720pM的IC50阻断工程化以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中的人IL-25的信号传导。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段与人IL-25特异性结合并且以小于约500pM的IC50阻断工程化以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中的人IL-25的信号传导。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段与人IL-25特异性结合并且以小于约100pM的IC50阻断工程化以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中的人IL-25的信号传导。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段与人IL-25特异性结合并且以小于约2.0nM的IC50阻断人PBMC中的人IL-25的信号传导。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段与人IL-25特异性结合并且以小于约700pM的IC50阻断人PBMC中的人IL-25的信号传导。
在一个实施方式中，本发明提供了一种抗-IL-25抗体或其抗原结合片段，所述抗-IL-25抗体或其抗原结合片段与人IL-25特异性结合并且以范围从约30pM至约150pM的IC50阻断人PBMC中的人IL-25的信号传导。
本发明的抗体可以是全长的(例如IgG1或IgG4抗体)或者可以仅包含抗原结合部分(例如Fab、F(ab’)2或scFv片段)，以及可以对其进行修饰以影响功能，例如以消除残余的效应物功能(Reddy等，2000,J.Immunol.164:1925-1933)。
本发明的示例性抗-IL-25抗体列于本文的表1和表2中。表1列出了示例性抗-IL-25抗体的重链可变区(HCVR)、轻链可变区(LCVR)、重链互补性决定区(HCDR1、HCDR2和HCDR3)和轻链互补性决定区(LCDR1、LCDR2和LCDR3)的氨基酸序列标识。表2列出了示例性抗-IL-25抗体的HCVR、LCVR、HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3的核酸序列标识。
本发明提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含HCVR，所述HCVR含有：选自表1中所列的任意HCVR氨基酸序列的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含LCVR，所述LCVR含有：选自表1中所列的任意LCVR氨基酸序列的氨基酸序列，或所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含HCVR和LCVR氨基酸序列对(HCVR/LCVR)，所述氨基酸序列对包含表1中所列的任意LCVR氨基酸序列与表1中所列的任意HCVR氨基酸序列的配对。根据某些实施方式，本发明提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段含有包含在表1中所列的任意示例性抗-IL-25抗体中的HCVR/LCVR氨基酸序列对。
一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人白介素-25(IL-25)结合，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补性决定区(CDR)，所述重链可变区包含表1中所示的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，所述轻链可变区具有表1中所示的氨基酸序列。
在一个实施方式中，与IL-25特异性结合的所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：(a)HCVR的CDR，所述HCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242和258；以及(b)LCVR的CDR，所述LCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和266。
在一个实施方式中，与IL-25特异性结合的所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：(a)HCVR的CDR，所述HCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：98、114、130和178；以及(b)LCVR的CDR，所述LCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：106、122、138和186。
在一个实施方式中，与IL-25特异性结合的所述分离的抗体或其抗原结合片段包含选自下组的HCVR氨基酸序列：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242和258。
在一个实施方式中，与IL-25特异性结合的所述分离的抗体或其抗原结合片段包含选自下组的LCVR氨基酸序列：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和266。
在一个实施方式中，与IL-25特异性结合的所述分离的抗体或其抗原结合片段包含选自下组的HCVR氨基酸序列：SEQ ID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242和258；以及选自下组的LCVR氨基酸序列：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和266。
在一个实施方式中，与IL-25特异性结合的所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCVR/LCVR氨基酸序列对的CDR，所述HCVR/LCVR氨基酸序列对选自下组：SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。
在一个实施方式中，与IL-25特异性结合的所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCVR/LCVR氨基酸序列对的CDR，所述HCVR/LCVR氨基酸序列对选自下组：SEQ ID NO：98/106、114/122、130/138和178/186。
在一个实施方式中，与IL-25特异性结合的所述分离的抗体或其抗原结合片段包含选自下组的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。
在一个实施方式中，与IL-25特异性结合的所述分离的抗体或其抗原结合片段包含选自下组的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO：98/106、114/122、130/138和178/186。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1(HCDR1)，所述HCDR1含有选自表1中所列的任意HCDR1氨基酸序列的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR2(HCDR2)，所述HCDR2含有选自表1中所列的任意HCDR2氨基酸序列的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR3(HCDR3)，所述HCDR3含有选自表1中所列的任意HCDR3氨基酸序列的氨基酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1(LCDR1)，所述LCDR1含有选自表1中所列的任意LCDR1氨基酸序列的氨基酸序列，或序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR2(LCDR2)，所述LCDR2含有选自表1中所列的任意LCDR2氨基酸序列的氨基酸序列，或序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR3(LCDR3)，所述LCDR3含有选自表1中所列的任意LCDR3氨基酸序列的氨基酸序列，或序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含HCDR3和LCDR3氨基酸序列对(HCDR3/LCDR3)，所述氨基酸序列对包含表1中所列的任意LCDR3氨基酸序列与表1中所列的任意HCDR3氨基酸序列的配对。根据某些实施方式，本发明提供了抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段含有包含在表1中所列的任意示例性抗-IL-25抗体中的HCDR3/LCDR3氨基酸序列对。在某些实施方式中，所述HCDR3/LCDR3氨基酸序列对包含SEQ ID NO：104/112、120/128、136/144和184/192。
本发明还提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段含有包含在表1中所列的任意示例性抗-IL-25抗体中的一组6个CDR(即HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3)。在某些实施方式中，所述HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3氨基酸序列组选自下组：(a)SEQ ID NO：100、102、104、108、110、112；(b)SEQID NO：116、118、120、124、126、128；(c)SEQ ID NO：132、134、136、140、142、144；以及(d)SEQID NO：180、182、184、188、190、192。
在相关的实施方式中，本发明提供了与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段含有包含在表1中列出的任意示例性抗-IL-25抗体所定义的HCVR/LCVR氨基酸序列对中的一组6个CDR(即HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3)。例如，本发明包括与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段含有包含在HCVR/LCVR氨基酸序列对中的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、LCDR3氨基酸序列组，所述HCVR/LCVR氨基酸序列对选自下组：98/106、114/122、130/138和178/186。用于标识HCVR和LCVR氨基酸序列中的CDR的方法和技术是本领域公知的，并且其能够用于识别本申请中公开的特定HCVR和/或LCVR氨基酸序列中的CDR。能够用于识别CDR边界的示例性的常规方法包括例如Kabat定义、Chothia定义和AbM定义。一般而言，Kabat定义基于序列的可变性，Chothia定义基于结构环区域的位置，而Abm定义是介于Kabat和Chothia方法之间的折中方法。参见例如Kabat,“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991)；Al-Lazikani等，J.Mol.Biol.273:927-948(1997)和Martin等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86:9268-9272(1989)。也可以利用公共数据库来识别抗体中的CDR序列。
在一个实施方式中，本发明提供了一种与IL-25特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)HCDR1结构域，所述HCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244和260；
(b)HCDR2结构域，所述HCDR2结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246和262；
(c)HCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248和264；
(d)LCDR1结构域，所述LCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252和268；
(e)LCDR2结构域，所述LCDR2结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254和270；以及
(f)LCDR3结构域，所述LCDR3结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256和272。
在一个实施方式中，本发明提供了一种与IL-25特异性结合的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)HCDR1结构域，所述HCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：100、116、132和180；
(b)HCDR2结构域，所述HCDR2结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：102、118、134和182；
(c)HCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：104、120、136和184；
(d)LCDR1结构域，所述LCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：108、124、140和188；
(e)LCDR2结构域，所述LCDR2结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：110、126、142和190；以及
(f)LCDR3结构域，所述LCDR3结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：112、128、144和192。
在一个实施方式中，本发明提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含选自下组的一组6个CDR：(a)SEQ ID NO：100、102、104、108、110、112；(b)SEQ ID NO：116、118、120、124、126、128；(c)SEQ ID NO：132、134、136、140、142、144；以及(d)SEQ ID NO：180、182、184、188、190、192。
在一个实施方式中，本发明提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人白介素-25(IL-25)结合，其中所述抗体或其抗原结合片段与参照抗体竞争结合人IL-25，所述参照抗体包含表1中所示的重链可变区/轻链可变区(HCVR/LCVR)氨基酸序列对。所述参照抗体包含选自下组的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。
在一个实施方式中，本发明提供了一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人白介素-25(IL-25)结合，其中所述抗体或其抗原结合片段与参照抗体结合至人IL-25上的相同表位，所述参照抗体包含表1中所示的重链可变区/轻链可变区(HCVR/LCVR)氨基酸序列对。所述参照抗体包含选自下组的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。
在第二个方面，本发明提供了编码抗-IL-25抗体或其部分的核酸分子。例如，本发明提供了编码表1中列出的任意HCVR氨基酸序列的核酸分子；在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自表2中列出的任意HCVR核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了编码表1中列出的任意LCVR氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自表2中列出的任意LCVR核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了编码表1中列出的任意HCDR1氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自表2中列出的任意HCDR1核酸序列，或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了编码表1中列出的任意HCDR2氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自表2中列出的任意HCDR2核酸序列，或所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了编码表1中列出的任意HCDR3氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自表2中列出的任意HCDR3核酸序列，或所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了编码表1中列出的任意LCDR1氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自表2中列出的任意LCDR1核酸序列，或所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了编码表1中列出的任意LCDR2氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自表2中列出的任意LCDR2核酸序列，或所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了编码表1中列出的任意LCDR3氨基酸序列的核酸分子。在某些实施方式中，所述核酸分子包含多核苷酸序列，所述多核苷酸序列选自表2中列出的任意LCDR3核酸序列，或所述基本上与其相似的序列与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列。
本发明还提供了编码HCVR的核酸分子，其中所述HCVR包含一组3个CDR(即HCDR1、HCDR2、HCDR3)，其中所述HCDR1、HCDR2、HCDR3氨基酸序列组由表1中列出的任意示例性抗-IL-25抗体所定义。
本发明还提供了编码LCVR的核酸分子，其中所述LCVR包含一组3个CDR(即LCDR1、LCDR2、LCDR3)，其中所述LCDR1、LCDR2、LCDR3氨基酸序列组由表1中列出的任意示例性抗-IL-25抗体所定义。
本发明还提供了编码HCVR和LCVR两者的核酸分子，其中所述HCVR包含表1中列出的任意HCVR氨基酸序列的氨基酸序列，以及其中所述LCVR包含表1中列出的任意LCVR氨基酸序列的氨基酸序列。在某些实施方式中，所述核酸分子包含选自表2中列出的任意HCVR核酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列的多核苷酸序列，以及选自表2中列出的任意LCVR核酸序列或与其具有至少90％、至少95％、至少98％或至少99％的序列一致性的基本上与其相似的序列的多核苷酸序列。在根据本发明这一方面的某些实施方式中，所述核酸分子编码HCVR和LCVR，其中所述HCVR和LCVR两者均来源于表1中列出的同一抗-IL-25抗体。
在第三个方面，本发明提供了重组表达载体，所述重组表达载体能够表达包含抗-IL-25抗体的重链或轻链可变区的多肽。例如，本发明包括重组表达载体，所述重组表达载体包含上文所述的任意核酸分子，即编码如表1中所示的任意HCVR、LCVR和/或CDR序列的核酸分子。在本发明的范围内还包括引入了此类载体的宿主细胞，以及通过在允许生产所述抗体或抗体片段的条件下培养所述宿主细胞以生产所述抗体或其部分并且回收所生产的抗体和抗体片段的方法。
本发明包括具有经修饰的糖基化模式的抗-IL-25抗体。在一些实施方式中，通过修饰去除不需要的糖基化位点可能是有用的，或者例如抗体在寡糖链上缺乏岩藻糖部分以增加抗体依赖性细胞毒性(ADCC)功能(参见Shield等，(2002)JBC 277:26733)。在其他应用中，可以进行半乳糖基化修饰以改善补体依赖性细胞毒性(CDC)。
在第四个方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含至少一种与IL-25特异性结合的本发明的抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体。
在相关的方面，本发明涉及一种组合物，其是抗-IL-25抗体与第二治疗剂的组合。在一个实施方式中，所述第二治疗剂是与抗-IL-25抗体组合有利的任意药剂。所述第二治疗剂可以用于减轻炎性疾病或病症或者减轻炎性疾病或病症的至少一种症状。
在某些实施方式中，所述第二治疗剂可以选自下组：非甾体抗炎药(NSAID)、类固醇、皮质类固醇(吸入或局部)、免疫抑制剂(例如环磷酰胺)、抗胆碱能药(例如噻托铵)、毒蕈碱剂(例如格隆铵)、磷酸二酯酶抑制剂(例如茶碱、罗氟司特、西洛司特)、β阻断剂、环孢菌素、他克莫司、吡美莫司、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、色甘酸钠、蛋白酶抑制剂、支气管扩张剂、β-2-激动剂、抗组胺剂、肾上腺素、减充血剂、白三烯抑制剂、肥大细胞抑制剂、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)拮抗剂、TNF拮抗剂、IgE拮抗剂、IL-1拮抗剂、IL-4或IL-4R拮抗剂、IL-13或IL-13R拮抗剂、IL-4/IL-13双重拮抗剂、IL-5拮抗剂、IL-6或IL-6R拮抗剂、IL-8拮抗剂、IL-9拮抗剂、IL-12/23拮抗剂、IL-22拮抗剂、IL-17拮抗剂、IL-31拮抗剂、IL-33拮抗剂、胸腺基质淋巴细胞生成素蛋白(TSLP)拮抗剂、口服PDE4抑制剂以及IL-25的不同抗体。
在第五个方面，本发明提供了一种使用本发明的抗-IL-25抗体或抗体的抗原结合部分治疗与IL-25的活化或表达相关的疾病或病症或者与所述疾病或病症相关的至少一种症状的治疗方法。根据本发明这一方面的治疗方法包括向需要其的对象施用治疗有效量的包含本发明的抗体或抗体的抗原结合片段的药物组合物。所治疗的病症是通过靶向IL-25和/或通过抑制IL-25介导的信号传导来改善、减轻、抑制或阻止的任何疾病或病状。
在某些实施方式中，拟使用本发明的抗-IL-25抗体或其抗原结合部分治疗的疾病或病症可以选自下组：哮喘、过敏、过敏性鼻炎、过敏性气道炎症、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、嗜酸性粒细胞性肺炎、嗜酸性粒细胞性食道炎、嗜酸性粒细胞增多综合征、移植物抗宿主病、特应性皮炎(AD)、荨麻疹(包括慢性特发性荨麻疹)、银屑病、炎性肠病(IBD)、关节炎、葡萄膜炎、心血管疾病、疼痛、多发性硬化、狼疮、血管炎以及嗜酸性肉芽肿性多血管炎((EGPA)，也称为Churg-Strauss综合征)。
在一个实施方式中，可以通过本发明的抗体或其抗原结合片段治疗的哮喘可以选自下组：过敏性哮喘、非过敏性哮喘、严重顽固性哮喘、哮喘恶化、病毒诱导的哮喘或病毒诱导的哮喘恶化、类固醇抵抗性哮喘、类固醇敏感性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘或非嗜酸性粒细胞性哮喘以及以气道炎症或气道高反应性(AHR)为特征的其他相关病症。
在一个实施方式中，可以通过本发明的抗体或其抗原结合片段治疗的COPD部分地是与香烟烟雾、空气污染、职业性化学品、过敏或气道高反应性相关的或由香烟烟雾、空气污染、职业性化学品、过敏或气道高反应性引起的。
在一个实施方式中，可以通过本发明的抗体或其抗原结合片段治疗的AD部分地是与表皮屏障功能障碍、过敏或辐射暴露相关的或由表皮屏障功能障碍、过敏或辐射暴露引起的。
可以通过本发明的抗体或其抗原结合片段治疗的过敏是对食物、花粉、霉菌、尘螨、动物或动物皮屑过敏。
在一个实施方式中，可以通过本发明的抗体或其抗原结合片段治疗的IBD可以选自下组：溃疡性结肠炎、克隆氏病、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、转流性结肠炎、白塞氏综合征、感染性结肠炎、未定型结肠炎以及以大肠或结肠的粘膜层炎症为特征的其他病症。
在一个实施方式中，可以通过本发明的抗体或其抗原结合片段治疗的关节炎可以选自下组：骨关节炎(OA)、类风湿性关节炎和银屑病性关节炎。
通过对下文中详细的描述的回顾，其他实施方式将是显而易见的。
附图说明
图1：针对人IL-25的抗-IL-25抗体之间的交叉竞争。
具体实施方式
在对本发明进行描述前，应理解本发明不限于所描述的特定方法和实验条件，因为这些方法和条件是可以改变的。还应理解本申请中所使用的术语仅旨在用于描述特定实施方式，并且不旨在限制，因为本发明的范围将仅由所附的权利要求限制。
除非另有定义，本申请中使用的所有技术和科学术语均与本发明所属领域普通技术人员的通常理解具有相同的含义。在本申请中所使用的术语“约”当用于指特定列举的数值时，意味着该值可以从所列举的值变化不超过1％。例如，如在本申请中所使用的，表述“约100”包括99和101以及其间的所有值(例如99.1、99.2、99.3、99.4等)。
尽管与本申请中所描述的那些类似或等效的任意方法和材料均能够用于实施或测试本发明，但是现在描述的是优选的方法和材料。在本说明书中提及的所有专利、申请和非专利出版物均通过引用整体并入本申请。
定义
表述“白介素-25”、“IL-25”等、又称为“IL-17E”是指包含登记号NP_073626.1的氨基酸残基33至177中所示的氨基酸序列的人细胞因子(除表明是来自于另一物种)。含有myc-myc-六组氨酸标签的人IL-25如SEQ ID NO:273所示(其中氨基酸残基1-145是不含信号序列的人IL-25且氨基酸残基146-173是myc-myc-六组氨酸标签)。本申请还描述了其他IL-25蛋白，包括猴IL-25(登记号XP_001107906.2的氨基酸33-176)，含有myc-myc-六组氨酸标签的猴IL-25如SEQ ID NO:274所示(其中氨基酸残基1-144是食蟹猴IL-25且氨基酸残基145-172是myc-myc-六组氨酸标签)；小鼠IL-25(登记号NP_542767.1的氨基酸17-169)，含有myc-myc-六组氨酸标签的小鼠IL-25如SEQ ID NO:275所示(其中氨基酸残基1-153是小鼠IL-25且氨基酸残基154-181是myc-myc-六组氨酸标签)；以及大鼠IL-25(登记号NP_001178936.1的氨基酸残基17-169)，含有myc-myc-六组氨酸标签的大鼠IL-25如SEQ IDNO:276所示(其中氨基酸残基1-153是大鼠IL-25且氨基酸残基154-181是myc-myc-六组氨酸标签的氨基酸残基154-181)。
除非明确地表明是来自非人物种，否则本申请中所有提及的蛋白、多肽和蛋白片段旨在指各蛋白、多肽或蛋白片段的人源版本。因此，表述“IL-25”指人IL-25，除非特别表明是来自非人物种，例如“猴IL-25”、“小鼠IL-25”、“大鼠IL-25”等。
如在本申请中所使用的，表达“抗-IL-25抗体”包括具有单特异性的单价抗体，以及双特异性抗体，所述双特异性抗体包含结合IL-25的第一臂和结合第二(靶)抗原的第二臂，其中所述抗-IL-25臂包含本申请的表1中所示的任意HCVR/LCVR或CDR序列。表述“抗-IL-25抗体”还包括抗体药物缀合物(ADC)，所述抗体药物缀合物包含与药物或毒素(即细胞毒剂)缀合的抗-IL-25抗体或其抗原结合部分。表述“抗-IL-25抗体”还包括抗体放射性核素缀合物(ARC)，所述抗体放射性核素缀合物包含与放射性核素缀合的抗-IL-25抗体或其抗原结合部分。
在本申请中使用的术语“抗-IL-25抗体”指包含至少一个特异性结合至或与IL-25或IL-25的部分相互作用的互补性决定区(CDR)的任意抗原结合分子或分子复合物。术语“抗体”包括免疫球蛋白分子，所述免疫球蛋白分子含有四条多肽链(两条重链(H)和两条轻链(L)互相之间通过二硫键连接)，以及其多聚体(例如IgM)。各条重链包含重链可变区(本申请中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域CH1、CH2和CH3。各条轻链包含轻链可变区(本申请中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域(CL1)。可以将VH和VL区进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，其散布在更为保守的称为框架区(FR)的区域中。各个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，其从氨基末端到羧基末端以下述顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本发明不同的实施方式中，抗-IL-25抗体(或其抗原结合部分)的FR可以与人种系序列是相同的，或者可以是天然或人工修饰的。可以基于对两个或多个CDR的并行分析(side-by-side analysis)定义氨基酸的共有序列。
在本申请中使用的术语“抗体”还包括全抗体分子的抗原结合片段。在本申请中使用的术语抗体的“抗原结合部分”、抗体的“抗原结合片段”等包括任意酶促可获得的、合成的或基因工程改造的特异性地与抗原结合以形成复合物的多肽或糖蛋白。可以通过使用任意适宜的标准技术(如蛋白水解消化或对涉及编码抗体可变和任选地恒定结构域的DNA的操纵和表达的重组基因工程技术)从例如全抗体分子中获得抗体的抗原结合片段，。此类DNA是已知的和/或易于从例如商业来源、DNA文库(包括例如噬菌体-抗体文库)获得的，或者能够被合成的。可以化学地或使用分子生物学技术(例如将一个或多个可变和/或恒定结构域排布成适宜的构型，或者引入密码子、形成半胱氨酸残基、修饰、加入或缺失氨基酸等)对DNA进行测序和调控。
抗原结合片段的非限制性实例包括：(i)Fab片段；(ii)F(ab')2片段；(iii)Fd片段；(iv)Fv片段；(v)单链Fv(scFv)分子；(vi)dAb片段；以及(vii)由模拟抗体高变区的氨基酸残基组成的最小识别单元(例如分离的互补决定区(CDR)如CDR3肽)或受限制的FR3-CDR3-FR4肽。其他工程化的分子，如结构域特异性抗体、单结构域抗体、结构域缺失的抗体、嵌合抗体、CDR移植抗体、双体、三体、四体、微型抗体、纳米抗体(例如单价纳米抗体、二价纳米抗体等)、小型模块化免疫药物(SMIP)和鲨鱼可变IgNAR结构域也包括在如本申请所使用的表述“抗原结合片段”中。
抗体的抗原结合片段将通常包括至少一个可变结构域。可变结构域可以是任意尺寸或氨基酸组合并且将通常包括至少一个CDR，其邻近一个或多个框架序列或在一个或多个框架序列的框架中。在具有与VL结构域结合的VH结构域的抗原结合片段中，所述VH和VL结构域可以位于相对于彼此适宜的任意排布下。例如，所述可变区可以是二聚的并且含有VH-VH、VH-VL或VL-VL二聚体。或者，所述抗体的抗原结合片段可以含有单体的VH或VL结构域。
在某些实施方式中，抗体的抗原结合片段可以含有与至少一个恒定结构域共价连接的至少一个可变结构域。可以见于本发明抗体的抗原结合片段中的非限制性的、示例性的可变和恒定结构域配置包括：(i)VH-CH1；(ii)VH-CH2；(iii)VH-CH3；(iv)VH-CH1-CH2；(v)VH-CH1-CH2-CH3；(vi)VH-CH2-CH3；(vii)VH-CL；(viii)VL-CH1；(ix)VL-CH2；(x)VL-CH3；(xi)VL-CH1-CH2；(xii)VL-CH1-CH2-CH3；(xiii)VL-CH2-CH3；以及(xiv)VL-CL。在任意可变和恒定结构域的配置(包括任意上文列出的示例性配置)中，所述可变和恒定结构域彼此间可以直接连接或者通过全长或部分铰链或接头区连接。铰链区可以由至少2个(例如5、10、15、20、40、60个或更多个)氨基酸组成，其在单一多肽分子中的相邻可变和/或恒定结构域之间形成柔性或半柔性的连接。而且，本发明抗体的抗原结合片段可以包括上文列出的任意可变和恒定结构域配置彼此之间和/或与一个或多个单体VH或VL结构域非共价结合(例如通过二硫键)的同源二聚体或异源二聚体(或其他多聚体)。
与全抗体分子一样，抗原结合片段可以是单特异性的或多特异性的(例如双特异性的)。抗体的多特异性抗原结合片段通常包括至少两个不同的可变结构域，其中各可变结构域能够特异性与不同的抗原或同一抗原上不同的表位结合。使用本领域常规技术可以获得的任意多特异性抗体形式(包括本申请公开的示例性双特异性抗体形式)可以适用于本发明抗体的抗原结合片段的背景中。
本发明的抗体可以通过阻断或以其他方式干扰IL-25与一个或多个其受体组件之间的相互作用发挥功能。或者，本发明的抗体可以通过不涉及阻断IL-25与其受体之间相互作用的机制抑制IL-25介导的信号传导。在其他实施方式中，本发明的抗体可以通过补体依赖性细胞毒性(CDC)或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)发挥功能。“补体依赖性细胞毒性(CDC)”指在存在补体的条件下通过本发明的抗体将表达抗原的细胞裂解。“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)”指细胞介导的反应，其中表达Fc受体(FcR)的非特异性细胞毒性细胞(例如自然杀伤(NK)细胞、中性粒细胞和巨噬细胞)识别结合在靶细胞上的抗体并且从而导致靶细胞裂解。能够使用本领域熟知和能够获得的检测方法检测CDC和ADCC。(参见例如美国专利号5,500,362和5,821,337以及Clynes等，(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)95:652-656)。抗体的恒定区在抗体固定补体和介导细胞依赖性细胞毒性的能力中是重要的。因而，可以基于抗体是否需要介导细胞毒性来选择抗体的同种型。
在本申请中使用的术语“人源抗体”旨在包括非天然存在的人源抗体。该术语包括在非人哺乳动物或在非人哺乳动物的细胞中重组生产的抗体。该术语并非旨在包括从人源对象中分离或产生的抗体。
在一些实施方式中，本发明的抗体可以是重组的和/或非天然存在的人源抗体。在本申请中使用的术语“重组人源抗体”旨在包括利用重组方法制备、表达、形成或分离的所有人源抗体，如使用转染进入宿主细胞的重组表达载体(在下文中进一步描述)表达的抗体，从重组的、组合人源抗体库(在下文中进一步描述)中分离的抗体，从针对人源免疫球蛋白基因的转基因动物(例如小鼠)分离的抗体(参见例如Taylor等(1992)Nucl.AcidsRes.20:6287-6295)或者由涉及将人源免疫球蛋白基因序列与其他DNA序列剪接的任意其他方法制备、表达、形成或分离的抗体。在某些实施方式中，对此类重组的人源抗体进行体外诱变(或者当使用针对人Ig序列的转基因动物时进行体细胞诱变)，这样重组抗体VH和VL区的氨基酸序列尽管是与人源种系VH和VL序列相关的序列，但是其可能不是体内人源抗体种系库中天然存在的。
人源抗体可以以两种形式存在，这与铰链的异质性有关。在一种形式中，免疫球蛋白分子包含约150-160kDa的稳定的四链构建体，其中二聚体之间通过链间重链二硫键保持在一起。在第二种形式中，二聚体不通过链间二硫键连接并且形成由共价偶联的轻链和重链(半抗体)组成的约75-80kDa的分子。即使在进行亲和纯化后，这些形式也非常难以分离。
第二种形式在不同的完整IgG同种型中的出现频率由抗体铰链区的同种型相关的结构差异所导致，但不仅限于此。在人IgG4铰链的铰链区中的单个氨基酸取代能够将第二种形式(Angal等，(1993)Molecular Immunology 30:105)的出现显著降至使用人IgG1铰链通常观察到的水平。本发明包含在铰链、CH2或CH3区域具有一个或多个突变的抗体，其可能是想要的，例如在生产中为提高所需抗体形式的得率。
术语“特异性结合”或“特异性结合至”等类似术语指抗体或其抗原结合片段与抗原形成在生理条件下相对稳定的复合物。特异性的结合可以以至少约1x10-6M或更低(例如KD越小表明结合越紧密)的平衡解离常数来表征。确定两个分子是否特异性结合的方法是本领域技术人员熟知的，并且包括例如平衡透析法、表面等离子体共振等。如本申请所述的，已通过表面等离子体共振(例如BIACORETM)鉴定出了特异性结合至IL-25的抗体。而且，如在本申请中所使用的，将与IL-25蛋白以及一种或多种其他抗原结合的多特异性抗体或者与IL-25的两个不同区域结合的双特异性抗体也认为是“特异性结合”的抗体。
本发明的抗体可以是分离的抗体。在本申请中使用的术语“分离的抗体”指已从其天然环境的至少一个组分中鉴定和分离和/或回收的抗体。例如，从生物体的至少一个组分或者从抗体天然存在或天然产生的组织或细胞中分离或除去的抗体是用于本发明目的的“分离的抗体”。分离的抗体还包括重组细胞中的原位抗体。分离的抗体是已进行了至少一个纯化或分离步骤的抗体。根据某些实施方式，分离的抗体可以是基本上不含其他细胞物质和/或化学物质的。
本申请公开的抗-IL-25抗体可以在重链和轻链可变结构域的框架和/或CDR区中包含一个或多个氨基酸的取代、插入和/或缺失。通过将本申请所公开的氨基酸序列与从例如公共抗体序列数据库中获得的序列进行比较能够容易地确定此类突变。一旦获得，能够针对一个或多个所需的性质，如改善的结合特异性、增加的结合亲和性、改善的或增加的拮抗或激动的生物学性质(视情况而定)、降低的免疫原性等，容易地对含有一个或多个突变的抗体和抗原结合片段进行检测。采用这种一般方法获得的抗体和抗原结合片段包含在本发明中。
本发明还包括抗-IL-25抗体，所述抗-IL-25抗体包含本申请所公开的任意HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列的具有一个或多个保守的取代的变体。例如，本发明包括抗-IL-25抗体，所述抗-IL-25抗体含有相对于本申请表1中所示的任意HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列具有带有例如10个或更少的、8个或更少的、6个或更少的、4个或更少的等保守的氨基酸取代的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列。
术语“表位”指与抗体分子的可变区中的被称为抗体结合簇(paratope)的特异性抗原结合位置相互作用的抗原决定簇。一个抗原可以具有一个以上的表位。因此，不同抗体可以与抗原上的不同区域结合并且可以具有不同的生物效应。表位可以是具有构象的或线形的。具有构象的表位是由线形多肽链的不同区段的空间上并置的氨基酸产生的。线形表位是由多肽链中相邻的氨基酸残基产生的。在某些情况下，表位可以包括抗原上的糖、磷酰基或磺酰基部分。
术语“基本上的一致性”或“基本上一致的”当涉及核酸或其片段时表示当将其与其他核酸(或其互补链)进行包含适当的核苷酸插入或缺失的最佳比对时，通过如下文所讨论的任意本领域熟知的序列一致性算法如FASTA、BLAST或Gap的测定，在至少约95％，且更优选地至少约96％、97％、98％或99％的核苷酸碱基中具有核苷酸序列一致性。在某些例子中，与对照核酸分子具有基本上的一致性的核酸分子可以编码与由所述对照核酸分子编码的多肽具有相同或基本上相似的氨基酸序列的多肽。
在用于多肽时，术语“基本上的相似性”或“基本上相似的”指两条多肽序列当(例如通过使用缺省缺口权重的GAP或BESTFIT程序)进行最佳比对时，具有至少95％的序列一致性，甚至更优选地至少98％或99％的序列一致性。优选地，不相同的残基位置的差别为保守性氨基酸取代。“保守性氨基酸取代”是氨基酸残基被带有具有相似化学性质(例如电荷或疏水性)的侧链(R基)的另一个氨基酸取代。在通常情况下，保守性氨基酸取代将不会实质性地改变蛋白的功能性性质。在两个多个氨基酸序列彼此之间的差别为保守性取代的情况下，可以对序列一致性的百分比或相似性的百分比进行上调以校正所述取代的保守性性质。用于进行这种调整的方法是本领域技术人员熟知的。参见例如Pearson(1994)MethodsMol.Biol.24:307-331，其通过引用并入本申请。含有具有相似化学性质的侧链的氨基酸组的示例包括(1)脂肪族侧链：甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸；(2)脂肪族-羟基侧链：丝氨酸和苏氨酸；(3)含有酰胺的侧链：天冬酰胺和谷氨酰胺；(4)芳香侧链：苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸；(5)碱性侧链：赖氨酸、精氨酸和组氨酸；(6)酸性侧链：天冬氨酸和谷氨酸；和(7)含硫侧链：半胱氨酸和甲硫氨酸。优选的保守性氨基酸取代组是：缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸、苯丙氨酸-酪氨酸、赖氨酸-精氨酸、丙氨酸-缬氨酸、谷氨酸-天冬氨酸和天冬酰胺-谷氨酰胺。或者，保守性替换是在Gonnet等((1992)Science 256:1443 45)所公开的PAM250对数-似然性矩阵中具有正值的任意改变。“适度保守性的”替换是在PAM250对数-似然性矩阵中具有非负值的任意改变。
多肽的序列相似性(也将其称为序列一致性)通常使用序列分析软件测定。蛋白分析软件通过使用分配给不同取代、缺失和其他修饰(包括保守性氨基酸取代)的相似性度量值来匹配相似序列。例如，GCG软件中包含如Gap和Bestfit的程序，可以使用其并用缺省参数来确定密切相关的多肽之间，如来自不同种类的生物体的同源性多肽或者野生型蛋白与其突变蛋白之间的序列同源性或序列一致性。参见例如GCG6.1版。也可以使用采用缺省或推荐参数的在GCG 6.1版中的程序FASTA对多肽序列进行比较。FASTA(例如FASTA2和FASTA3)提供了查询序列和检索序列之间的比对和最佳重叠区域的序列一致性百分率(Pearson(2000)，如上所述)。当将本发明的序列与包含来自不同生物体的大量序列的数据库进行比较时，另一种优选的算法是计算机程序BLAST，特别是使用缺省参数的BLASTP或TBLASTN。参见例如Altschul等，(1990)J.Mol.Biol.215:403 410和Altschul等，(1997)Nucleic Acids Res.25:3389402，其均通过引用并入本申请。
pH-依赖性结合
本发明包括具有pH依赖性结合特性的抗-IL-25抗体。例如，本发明的抗-IL-25抗体在酸性pH下与在中性pH下相比可以显示出与IL-25减少的结合。或者，本发明的抗-IL-25抗体在酸性pH下与在中性pH下相比可以显示出与IL-25增加的结合。表述“酸性pH”包括小于约6.2的pH值，例如约6.0、5.95、5.9、5.85、5.8、5.75、5.7、5.65、5.6、5.55、5.5、5.45、5.4、5.35、5.3、5.25、5.2、5.15、5.1、5.05、5.0或更低。在本申请中使用的表述“中性pH”指约7.0至约7.4的pH。表述“中性pH”包括约7.0、7.05、7.1、7.15、7.2、7.25、7.3、7.35和7.4的pH值。
在某些情况下，“在酸性pH下与在中性pH下相比与IL-25的结合减少”以在酸性pH下抗体与IL-25结合的KD值与在中性pH下抗体与IL-25结合的KD值的比值表示(或者反之亦然)。例如，如果抗体或其抗原结合片段显示出的酸性/中性KD的比值为约3.0或更高，则可以认为抗体或其抗原结合片段显示出针对本发明目的的“在酸性pH下与在中性pH下相比与IL-25的结合减少”。在某些示例性的实施方式中，针对本发明的抗体或抗原结合片段的酸性/中性KD的比值可以是约3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11.0、11.5、12.0、12.5、13.0、13.5、14.0、14.5、15.0、20.0、25.0、30.0、40.0、50.0、60.0、70.0、100.0或更高。
可以例如通过在一群抗体中筛选在酸性pH下与在中性pH下相比与特定抗原的结合的减少(或增加)获得具有pH依赖性结合特性的抗体。此外，在氨基酸水平上对抗原结合结构域的修饰可以产生具有pH依赖性特性的抗体。例如，通过使用组氨酸残基取代抗原结合结构域(例如在CDR中)的一个或多个氨基酸，可以获得在酸性pH下与在中性pH下相比抗原结合减少的抗体。
包含Fc变体的抗-IL-25抗体
根据本发明的某些实施方式，提供了包含Fc结构域的抗-IL-25抗体，所述Fc结构域含有增加或减少抗体与FcRn受体结合(例如在酸性pH下与在中性pH下相比)的一个或多个突变。例如，本发明包括在Fc结构域的CH2或CH3区中包含突变的抗-IL-25抗体，其中所述突变增加Fc结构域与FcRn在酸性环境中的亲和性(例如，在pH范围从约5.5至约6.0的内涵体中)。当向动物施用时，此类突变可以导致抗体的血清半衰期的增加。此类Fc修饰的非限制性示例包括例如在以下位置的修饰：250(例如E或Q)；250和428(例如L或F)；252(例如L/Y/F/W或T)、254(例如S或T)和256(例如S/R/Q/E/D或T)；或者在以下位置的修饰：428和/或433(例如H/L/R/S/P/Q或K)和/或434(例如H/F或Y)；或者在位置250和/或428的修饰；或者在位置307或308的修饰(例如308F、V308F)和在位置434的修饰。在一个实施方式中，所述修饰包括428L(例如M428L)和434S(例如N434S)的修饰；428L、259I(例如V259I)和308F(例如V309F)的修饰；433K(例如H433K)和434(例如434Y)的修饰；252、254和256(例如252Y、254T和256E)的修饰；250Q和428L修饰(例如T250Q和M428L)；以及307和/或308修饰(例如308F或308P)。
例如，本发明包括包含Fc结构域的抗-IL-25抗体，所述Fc结构域含有一对或多对或者一组或多组选自下组的突变：250Q和248L(例如T250Q和M248L)；252Y、254T和256E(例如M252Y、S254T和T256E)；428L和434S(例如M428L和N434S)；以及433K和434F(例如H433K和N434F)。前述Fc结构域突变的所有可能的组合以及本申请所公开的抗体可变结构域中的其他突变均包含在本发明的范围内。
抗体的生物学特性
本发明包括根据表面等离子体共振在25℃时的测定以小于约120pM的KD与人IL-25结合的抗-IL-25抗体。根据某些实施方式，本发明包括以小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、小于约18pM、小于约16pM、小于约14pM或小于约12pM的KD与人IL-25结合的抗-IL-25抗体。
本发明包括根据表面等离子体共振在25℃时的测定以大于约105分钟的解离半衰期(t1/2)与人IL-25结合的抗-IL-25抗体。根据某些实施方式，本发明包括以大于约105分钟、大于约150分钟、大于约175分钟、大于约200分钟、大于约250分钟、大于约300分钟、大于约350分钟、大于约400分钟、大于约450分钟、大于约500分钟、大于约550分钟、大于约600分钟、大于约700分钟、大于约800分钟、大于约900分钟、大于约1000分钟、大于约1100分钟或大于约1200分钟的t1/2与人IL-25结合的抗-IL-25抗体。
本发明包括可以结合或不结合猴IL-25或者小鼠或大鼠IL-25的抗-IL-25抗体。如在本申请中所使用的，抗体“不结合”特定抗原(例如猴、小鼠或大鼠IL-25)指如果当在抗原结合检测如表面等离子体共振中测试抗体时，其显示出大于约1000nM的KD或者在此类检测中不显示出任何抗原结合。根据本发明的这一方面，能够用于确定抗体结合或不结合特定抗原的另一种检测形式是ELISA。
本发明包括在经工程化改造以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中以小于约2.0nM的IC50阻断人IL-25的信号传导的抗-IL-25抗体。例如，如在本申请的实施例6中所示的，将HEK293细胞工程化改造以稳定表达人IL-17RA(登记号NP_055154.3的氨基酸1至866)和IL-17RB(登记号NP_061195.2的氨基酸1至502)。该细胞系还可以包括能够检测IL-25介导的通过IL-17RA/IL-17RB受体的信号传导的报告元件(例如由IL-25结合至其受体诱导的荧光素酶报告子或其他可检测报告子)。使用实施例6中所描述的检测形式或基本上类似的检测形式，可以根据使IL-25介导的信号降至当不存在抗体时观察到的最大信号的50％时所需的抗体浓度计算IC50值。因而，根据某些实施方式，本发明包括根据使用本申请实施例6中所描述的检测形式或基本上类似的检测形式测定的在经工程化改造以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中以小于约720pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM、小于约20pM、小于约10pM或小于约5pM的IC50阻断人IL-25的信号传导的抗-IL-25抗体。
本发明包括在人外周血单核细胞(PBMC)中以小于约16nM的IC50阻断人IL-25的信号传导的抗-IL-25抗体。例如，如在本申请的实施例7中所示的，分离的PBMC和IL-25以及不同量的抗-IL-25抗体共孵育，并且检测由细胞产生的IL-5的水平以显示IL-25介导的信号传导的程度。使用实施例7中所描述的检测形式或基本上类似的检测形式，可以根据使IL-25介导的信号降至当不存在抗体时观察到的最大信号的50％时所需的抗体浓度计算IC50值。因而，根据某些实施方式，本发明包括根据使用本申请实施例7中所描述的检测形式或基本上类似的检测形式测定的在PBMC中以小于约5nM、小于约4nM、小于约3nM、小于约1nM、小于约900pM、小于约800pM、小于约700pM、小于约600pM、小于约500pM、小于约400pM、小于约300pM、小于约200pM、小于约100pM、小于约90pM、小于约80pM、小于约70pM、小于约60pM、小于约50pM、小于约40pM、小于约30pM或小于约20pM的IC50阻断人IL-25的信号传导的抗-IL-25抗体。在一个实施方式中，本发明的抗-IL-25抗体以范围从约30pM至约150pM的IC50在人PBMC中阻断人IL-25的信号传导。
本发明抗体的结合特征(例如上文所述的任意结合特征)当以术语“通过表面等离子体共振检测”公开时指涉及抗体与抗原之间相互作用的相关结合特征是使用表面等离子体共振仪(例如仪，GE Healthcare)采用如本申请的实施例2中所描述的标准Biacore检测条件或采用基本上类似的检测形式测得的。在某些实施方式中，结合参数在25℃下检测，而在其他实施方式中，结合参数在37℃下检测。
本发明包括降低过表达IL-25的哺乳动物的循环IgE水平和/或在其肺中所见的IgE水平的抗-IL-25抗体，如在实施例8所描述的模型中所示的。本申请的实施例8中还描述了在过表达IL-25的哺乳动物中减少杯状细胞化生的抗-IL-25抗体。
本发明包括与IL-25特异性结合的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含含有选自表1中列出的任意HCVR和/或LCVR氨基酸序列的氨基酸序列的HCVR和/或LCVR。
本发明的抗体可以具有一个或多个上述的生物学特征或其任意组合。上述列举的本发明抗体的生物学特征并不是穷举的。在阅读了包括本申请工作实施例在内的本公开后，本发明抗体的其他生物学特征对本领域技术人员而言将是显而易见的。
表位定位和相关技术
本发明的抗体结合的表位可以由IL-25蛋白的具有3个或多个(例如3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20个或更多个)氨基酸的单一连续序列组成。或者，表位可以由IL-25的多个非连续的氨基酸(或氨基酸序列)组成。在一些实施方式中，表位位于或接近于IL-25与IL-25受体相互作用的表面。在其他实施方式中，表位位于或接近于IL-25不与IL-25受体相互作用的表面，例如在IL-25表面上的某一位置，当抗体与这样的表位在此处结合时不干扰IL-25与其受体之间的相互作用。
可以采用本领域的普通技术人员公知的多种技术确定抗体是否与多肽或蛋白中的“一个或多个氨基酸相互作用”。示例性的技术包括例如可以采用常规的交叉阻断检测如Antibodies,Harlow和Lane(Cold Spring Harbor Press,Cold Spring Harb.,NY)中所描述的，丙氨酸扫描突变分析、肽印迹分析(Reineke,2004,Methods Mol Biol 248:443-463)和肽裂解分析。此外，可以使用如抗原的表位删除、表位提取和化学修饰(Tomer,2000,Protein Science 9:487-496)的方法。另一种能够用于鉴定与抗体相互作用的多肽中的氨基酸的方法是通过质谱检测的氢/氘交换。一般而言，所述氢/氘交换的方法涉及用氘标记感兴趣的蛋白、随后将抗体与氘标记的蛋白结合。接下来，将该蛋白/抗体复合物转移至水中以使得在除了受抗体保护的残基(其仍为氘标记)以外的所有残基发生氢-氘交换。在抗体解离后，对靶蛋白进行蛋白酶裂解和质谱分析，从而揭示对应于和抗体相互作用的特定氨基酸的氘标记残基。参见例如Ehring(1999)Analytical Biochemistry 267(2):252-259；Engen和Smith(2001)Anal.Chem.73:256A-265A。
本发明还包括与本申请所述的任意特异性的示例性抗体(例如包含本申请的表1中所示的任意氨基酸序列的抗体)结合相同表位的抗-IL-25抗体。同样地，本发明还包括与本申请所述的任意特异性的示例性抗体(例如包含本申请的表1中所示的任意氨基酸序列的抗体)竞争性地结合IL-25的抗-IL-25抗体。
通过使用本领域公知的常规方法和本申请中的示例能够容易地确定抗体是否与对照抗-IL-25抗体结合至相同表位或与对照抗-IL-25抗体竞争结合。例如，为确定是否待测抗体与本发明的对照抗-IL-25抗体结合至相同表位，允许对照抗体与IL-25蛋白结合。接下来，评估待测抗体与IL-25分子结合的能力。在使用对照抗-IL-25抗体饱和结合后，如果待测抗体能够与IL-25结合，则能够得出结论待测抗体与对照抗-IL-25抗体结合至不同的表位。另一方面，在使用对照抗-IL-25抗体饱和结合后，如果待测抗体不能与IL-25分子结合，则待测抗体可能结合至与本发明的对照抗-IL-25抗体结合的表位相同的表位。然后可以进行附加的常规实验(例如肽突变和结合分析)以确证是否所观察到的待测抗体结合的缺乏事实上是由于其与对照抗体结合相同的表位导致的抑或是否是空间位阻(或另外的现象)导致了所观察到的结合的缺乏。可以使用ELISA、RIA、表面等离子体共振、流式细胞术或本领域中任意其他定量或定性的抗体结合检测进行这种类型的实验。根据本发明的某些实施方式，如果例如根据竞争性结合测定的结果(参见例如Junghans等，Cancer Res.1990:50:1495-1502)1、5、10、20或100倍过量的一个抗体对另一个抗体的结合的抑制为至少50％但优选地75％、90％或甚至99％时，则两个抗体结合至相同的(或重叠的)表位。或者，如果抗原中降低或消除一个抗体结合的基本上所有氨基酸的突变降低或消除另一个抗体的结合，则认为两个抗体结合相同的表位。如果降低或消除一个抗体结合的氨基酸的突变中仅一个子集降低或消除另一个抗体的结合，则认为两个抗体具有“重叠的表位”。
为确定是否抗体与对照抗-IL-25抗体竞争结合(或交叉竞争结合)，在两个方向上进行上文所述的结合方法：在第一个方向上，在饱和条件下将对照抗体与IL-25蛋白结合，随后评估待测抗体与IL-25分子的结合。在第二个方向上，在饱和条件下将待测抗体与IL-25分子结合，随后评估对照抗体与IL-25分子的结合。如果在这两个方向上仅第一(饱和的)抗体能够与IL-25分子结合，则得出结论待测抗体和对照抗体竞争与IL-25的结合(参见例如，在本申请实施例4中所描述的检测形式，在其中将IL-25蛋白捕获于传感器尖端上并使用对照抗体[mAb-1]和待测抗-IL-25抗体[mAb-2]以两种结合顺序依次处理涂覆了IL-25的传感器尖端)。根据本领域普通技术人员的理解，与对照抗体竞争结合的抗体并不一定与对照抗体结合至相同表位，但可能通过与重叠或邻近表位的结合在空间上阻断对照抗体的结合。
人源抗体的制备
本发明的抗-IL-25抗体可以是全人源但是非天然存在的抗体。用于产生单克隆抗体包括全人源单克隆抗体的方法是本领域公知的。可以将任意此类公知的方法用于本发明的背景下以制备特异性与人IL-25结合的人源抗体。
通过使用技术(参见例如US 6,596,541，瑞恩泽制药公司，)或任意其他公知的用于生成单克隆抗体的方法，首先分离具有人源可变区和小鼠恒定区的对过敏原具有高亲和性的嵌合抗体。技术涉及生成转基因小鼠，所述小鼠具有含有与内源性小鼠恒定区基因座可操作地连接的人源重链和轻链可变区的基因组，以使得所述小鼠在抗原的刺激下产生包含人源可变区和小鼠恒定区的抗体。编码所述抗体的重链和轻链可变区的DNA被分离并且与编码人源重链和轻链恒定区的DNA可操作地连接。然后在能够表达全人源抗体的细胞中表达所述DNA。
在通常情况下，使用目标抗原攻击小鼠，并且从表达抗体的小鼠中回收淋巴细胞(如B细胞)。可以将所述淋巴细胞与骨髓瘤细胞系融合以制备永生化的杂交瘤细胞系，并且对此类杂交瘤细胞系进行筛选和选择以鉴定产生对目标抗原具有特异性的抗体的杂交瘤细胞系。可以分离编码所述重链和轻链可变区的DNA并且将其与所需的同种型的重链和轻链恒定区连接。可以在细胞如CHO细胞中生产此类抗体蛋白。或者，可以直接从抗原特异性淋巴细胞中分离编码抗原特异性嵌合抗体或轻链和重链可变结构域的DNA。
如在下面的实验章节中所述的，对分离的具有人源可变区和小鼠恒定区的高亲和性嵌合抗体进行表征并对所需的特征包括亲和性、选择性、表位等进行选择。然后，使用所需的人源恒定区取代所述小鼠的恒定区以生成本发明的全人源抗体，例如野生型或经修饰的IgG1或IgG4。虽然可以根据特定用途改变所选择的恒定区，高亲和性抗原结合和靶点特异性特征均保留在可变区中。
在通常情况下，当通过与固定在固相上或在溶液相中的抗原的结合进行检测时，本发明的抗体具有非常高的亲和性，通常具有的KD从约10-12至约10-9M。
生物等价物
本发明的抗-IL-25抗体和抗体片段包含具有与本申请所述抗体的氨基酸序列不同的氨基酸序列，但是仍保持了结合人源IL-25的能力的蛋白。此类变体抗体和抗体片段当与母体序列进行比较时包含一个或多个氨基酸插入、缺失或取代，但是显示出基本上与所描述的抗体等价的生物活性。同样地，本发明的编码抗-IL-25抗体的DNA序列与所公开的序列相比包含一个或多个核苷酸插入、缺失或取代，但是其编码的抗-IL-25抗体或抗体片段基本上是本发明的抗-IL-25抗体或抗体片段的生物等价物。此类变体氨基酸和DNA序列的示例如上文所讨论的。
如果例如两种抗原结合蛋白或抗体是药学等价物或药学替代物，即在类似的实验条件下单剂量或多剂量给予相同摩尔剂量时其吸收速率和吸收程度未显示出显著差异，则认为这两者是生物等价物。如果一些抗体在其吸收程度上是等价的但在吸收速率上不是等价的，仍可以将其认为是等价物或药学替代物，并且仍可以认为其是生物等价物，由于这种在吸收速率上的差异是有意的并且已经反映在标签中，其对例如长期使用时达到有效的机体药物浓度不是必要的，并且就所研究的特定药品而言被认为是在医学上无足轻重的。
在一个实施方式中，如果两种抗原结合蛋白在安全性、纯度和效能方面不存在具有临床意义的差异，则认为其是生物等价物。
在一个实施方式中，如果患者能够在对照产品和生物产品之间进行一次或多次的转换而没有升高的产生不良反应的风险的预期，则认为这两种抗原结合蛋白是生物等价物，所述升高的产生不良反应的风险包括与无这种转换的连续疗法相比免疫原性出现具有临床意义的改变或有效性降低。
在一个实施方式中，如果两种抗原结合蛋白针对使用的一种或多种病况通过共同的一种或多种作用机制发挥作用(在此类作用机制公知的范围内)，则认为其是生物等价物。
生物等效性可以通过体内和/或体外方法证明。生物等效性的测定包括，例如(a)在人或其他哺乳动物中的体内检测，其中在血液、血浆、血清或其他生物液体中测定抗体或其代谢产物的浓度对时间的函数；(b)与在人体内的生物利用度数据具有相关性并可对在人体内的生物利用度数据进行合理预测的体外检测；(c)在人或其他哺乳动物中进行的体内检测，其中测定抗体(或其靶点)适当的急性药理学作用对时间的函数；和(d)确定抗体的安全性、有效性或者生物利用度或生物等效性的对照良好的临床试验。
可以通过例如对残基或序列进行各种取代或者对对于生物活性来说并非必需的末端或中间的残基和序列进行缺失来构建本发明的抗-IL-25抗体的生物等价物变体。例如，非生物活性所必需的半胱氨酸残基可被缺失或使用其他氨基酸将其取代以防止在还原过程中形成不必要的或不正确的分子内二硫键桥。在其他情况下，生物等价物抗体可以包括包含改变了抗体的糖基化特征的氨基酸改变(例如消除或除去糖基化的突变)的抗-IL-25抗体变体。
物种选择性和物种交叉反应
根据某些实施方式，本发明提供了与人IL-25结合但不与来自其他物种的IL-25结合的抗-IL-25抗体。本发明还包括与人IL-25及与来自一个或多个非人物种的IL-25结合的抗-IL-25抗体。例如，本发明的抗IL-25抗体可以结合至人IL-25，并且可以结合或不结合(视情况而定)小鼠、大鼠、豚鼠、仓鼠、沙鼠、猪、猫、狗、兔、山羊、绵羊、奶牛、马、骆驼、食蟹猴、绒猴、恒河猴或黑猩猩IL-25中的一种或多种。根据本发明的某些示例性的实施方式，提供了与人IL-25和食蟹猴(例如Macaca fascicularis)IL-25特异性结合的抗-IL-25抗体。本发明的其他抗-IL-25抗体与人IL-25结合但不与食蟹猴IL-25结合或与食蟹猴IL-25仅具有较弱的结合。
多特异性抗体
本发明的抗体可以是单特异性的或多特异性的(例如双特异性)。多特异性抗体可以对一个靶多肽的不同表位是特异性的或者可以含有对一个以上的靶多肽具有特异性的抗原结合结构域。参见例如Tutt等，1991,J.Immunol.147:60-69；Kufer等，2004,TrendsBiotechnol.22:238-244。本发明的抗-IL-25抗体可以连接至或与另一种功能性分子例如另一种肽或蛋白共表达。例如，抗体或其片段可以功能性地连接(例如通过化学偶联、基因融合、非共价结合或其他方式)至一个或多个其他的分子部分(如另一个抗体或抗体片段)，以产生具有第二结合特异性的双特异性或多特异性抗体。
本发明包括双特异性抗体，其中免疫球蛋白的一个臂与人IL-25结合，并且免疫球蛋白的另一个臂对第二抗原具有特异性。与IL-25结合的臂可以包含本申请的表1中所示的任意HCVR/LCVR或CDR氨基酸序列。
能够用于本发明背景下的示例性双特异性抗体形式包括使用第一免疫球蛋白(Ig)CH3结构域和第二Ig CH3结构域，其中所述第一和第二Ig CH3结构域彼此间存在至少一个氨基酸的差异，并且与缺乏氨基酸差异的双特异性抗体相比其中至少一个氨基酸的差异降低了双特异性抗体与蛋白A的结合。在一个实施方式中，所述第一IgCH3结构域结合蛋白A并且所述第二Ig CH3结构域含有减少或消除与蛋白A的结合的突变如H95R修饰(根据IMGT外显子编号；根据EU编号为H435R)。所述第二CH3还可以包括Y96F修饰(根据IMGT；根据EU为Y436F)。可以存在于第二CH3中的其他修饰包括：在IgG1抗体的情况下D16E、L18M、N44S、K52N、V57M和V82I(根据IMGT；根据EU为D356E、L358M、N384S、K392N、V397M和V422I)；在IgG2抗体的情况下N44S、K52N和V82I(IMGT；根据EU为N384S、K392N和V422I)；以及在IgG4抗体的情况下Q15R、N44S、K52N、V57M、R69K、E79Q和V82I(根据IMGT；根据EU为Q355R、N384S、K392N、V397M、R409K、E419Q和V422I)。上文所述的双特异性抗体形式的变体包括在本发明的范围内。
能够用于本发明背景下的其他示例性的双特异性形式包括，但不限于，例如基于scFv的或双体双特异性形式、IgG-scFv融合、双可变结构域(DVD)-Ig、四价体杂交瘤、knob-into-hole型抗体、共有轻链(例如具有knob-into-hole结构的共有轻链等)、CrossMab、CrossFab(SEED)体、亮氨酸拉链、Duobody、IgG1/IgG2、双作用Fab(DAF)-IgG和Mab2双特异性形式(参见例如Klein等，2012,mAbs 4:6,1-11，并且作为本申请中引用的参考文献，其对前述的形式进行了综述)。也可以使用肽/核酸缀合构建双特异性抗体，例如其中将具有正交化学反应性的非天然氨基酸用于生成位点特异性抗体-寡核苷酸缀合物，其随后自组装成具有所定义的组分、价态和几何形状的多聚体复合物(参见例如Kazane等，J.Am.Chem.Soc.[Epub:Dec.4,2012])。治疗性制剂和施用
本发明提供了包含本发明的抗-IL-25抗体或其抗原结合片段的药物组合物。使用提供改善的转移、递送、耐受等的适宜的载体、赋形剂和其他试剂配置本发明的药物组合物。多种适宜的制剂能够在药物化学家公知的处方集Remington's PharmaceuticalSciences,Mack Publishing Company,Easton,PA中找到。这些制剂包括例如粉剂、糊剂、软膏、凝胶、蜡、油、脂质、含有脂质(阳离子或阴离子)的囊泡(如LIPOFECTINTM，LifeTechnologies,卡尔斯巴德,加利福尼亚州)、DNA缀合物、无水吸收糊剂、水包油和油包水乳剂、乳状碳蜡(各种分子量的聚乙二醇)、半固体凝胶和含有半固体混合物的碳蜡。亦参见Powell等，"Compendium of excipients for parenteral formulations"PDA(1998)JPharm Sci Technol 52:238-311。
可以根据患者的年龄和身材、靶疾病、病状、施用途径等改变向患者施用的抗体的剂量。通常根据体重或体表面积计算优选剂量。在成人患者中，通常以约0.01至约20mg/kg体重、更优选地约0.02至约7、约0.03至约5或者约0.05至约3mg/kg体重的单一剂量静脉内施用本发明的抗体可能是有利的。可以根据病况的严重程度调整治疗的频率和持续时间。可以根据经验确定施用抗-IL-25抗体的有效剂量和方案；例如可以通过周期性评估监测患者的进展并相应地对剂量进行调整。而且，可以使用本领域公知的方法确定物种间的剂量比例(例如Mordenti等，1991,Pharmaceut.Res.8:1351)。
各种递送系统是公知的并且可以用于施用本发明的药物组合物，例如包封在脂质体中、微粒、微囊、能够表达突变型病毒的重组细胞、受体介导的胞吞作用(参见例如Wu等，1987，J.Biol.Chem.262:4429-4432)。引入的方法包括但不限于皮内、肌内、腹腔内、静脉内、皮下、鼻内、硬膜外和口服途径。所述组合物可以通过任意常规的途径施用，例如通过输注或推注、通过经上皮或粘膜层(例如口腔粘膜、直肠和小肠粘膜等)的吸收并且可以与其他生物活性剂一起施用。施用可以是全身性的或局部的。
可以使用标准针头和注射器皮下或静脉内递送本发明的药物组合物。此外，对于皮下递送，笔递送装置能够容易地用于递送本发明的药物组合物。此类笔递送装置可以是可重复使用的或一次性的。可重复使用的笔递送装置通常使用含有药物组合物的可替换的药筒。一旦药筒中的所有药物组合物已经施用并且所述药筒是空的时，空的药筒能够容易地被弃去并且被含有所述药物组合物的新药筒替换。然后可以重新使用所述药物递送装置。在一次性的笔递送装置中，无可替换的药筒。相反地，所述一次性笔递送装置在所述装置中的储液槽中预充了所述药物组合物。一旦所述药物组合物的储液槽变空，则将整个装置弃去。
多种可重复使用的笔和自动注射器递送装置可应用于本发明药物组合物的皮下递送。例如包括但不一定限于AUTOPENTM(Owen Mumford,Inc.,伍德斯托克,英国)、DISETRONICTM笔(Disetronic Medical Systems,波道夫(Bergdorf),瑞士)、HUMALOG MIX75/25TM笔、HUMALOGTM笔、HUMALIN 70/30TM笔(Eli Lilly and Co.,印第安纳波利斯,美国印第安纳州)、NOVOPENTMI、II和III(Novo Nordisk,哥本哈根,丹麦)、NOVOPEN JUNIORTM(NovoNordisk,哥本哈根,丹麦)、BDTM笔(Becton Dickinson,富兰克林湖,美国新泽西州)、OPTIPENTM、OPTIPEN PROTM、OPTIPEN STARLETTM和OPTICLIKTM(sanofi-aventis,法兰克福,德国)仅列举了其中的几个。可应用于本发明的药物组合物皮下递送的一次性笔递送装置的例子包括但不一定限于SOLOSTARTM笔(sanofi-aventis)、FLEXPENTM(Novo Nordisk)和KWIKPENTM(Eli Lilly)、SURECLICKTM自动注射器(Amgen,千橡市,美国加利福利亚州)、PENLETTM(Haselmeier,斯图加特,德国)、EPIPEN(Dey,L.P.)和HUMIRATM笔(Abbott Labs,雅培公园，美国伊利诺斯州)仅列举了其中的几个。
在某些情况下，所述药物组合物可以在控释系统中递送。在一个实施方式中，可以使用泵(参见Langer，如上所述；Sefton,1987,CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.14:201)。在另一个实施方式中，可以使用多聚体材料，参见Medical Applications of ControlledRelease,Langer and Wise(eds.),1974,CRC Pres.,Boca Raton,Florida。在又一个实施方式中，可以将控释系统置于所述组合物的靶点附近，以使得仅需要全身剂量的一部分。(参见例如Goodson,1984,in Medical Applications of Controlled Release,supra,vol.2,pp.115-138)。在Langer，1990,Science 249:1527-1533的综述中对其他控释系统进行了讨论。
可注射的制剂可以包括用于静脉内、皮下、皮内和肌内注射，点滴输注等的剂型。可以采用公知的方法制备这些可注射剂型。例如，可以通过例如将上文所述的抗体或其盐溶解、混悬或乳化于常规用于注射的无菌水性介质或油性介质中制备可注射制剂。作为用于注射的水性介质，例如有生理盐水、含有葡萄糖和其他助剂等的等渗溶液，可以将其与适宜的增溶剂如醇(例如乙醇)、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇)、非离子表面活性剂[例如聚山梨醇酯80、HCO-50(氢化蓖麻油的聚氧乙烯(50mol)加合物)]等联用。作为油性介质，使用例如芝麻油、豆油等，其可以与增溶剂如苯甲酸苄酯、苄醇等联用。因此，优选将所制备的注射剂填充入适宜的安瓿中。
有利地，将上文所述的用于口服或胃肠外的药物组合物制成符合匹配的活性成分剂量的单位剂量剂型。这种单位剂量的剂型包括例如片剂、丸剂、胶囊、注射剂(安瓿)、栓剂等。所含的上述抗体的量通常为单位剂量约5至约500mg每剂；特别是在注射剂形式中，优选地包含约5至约100mg的上述抗体，而对于其他剂型来说优选地包含约10至约250mg的上述抗体。
抗体的治疗用途
本发明包含包括向需要其的对象施用包含抗-IL-25抗体的治疗组合物的方法。治疗组合物可以包含本申请公开的任意抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以及药学上可接受的载体或稀释剂。
本发明的抗体是有用的，尤其是用于治疗、预防和/或减轻与IL-25的表达或活性相关的或由其介导的，或者可以通过阻断IL-25与IL-25受体之间的相互作用或以其他方式抑制IL-25的活性和/或信号传导治疗的任何疾病或病症。
本发明包括通过向需要此类治疗的患者施用如本申请其他部分所公开的抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以治疗或预防哮喘的方法。如在本申请中所使用的，术语“哮喘”包括但不限于过敏性哮喘、非过敏性哮喘、严重顽固性哮喘、哮喘恶化、病毒诱导的哮喘或病毒诱导的哮喘恶化、类固醇抵抗性哮喘、类固醇敏感性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘或非嗜酸性粒细胞性哮喘等以及以气道炎症或气道高反应性(AHR)为特征的其他相关病症。该术语还旨在包括病毒诱导的哮喘恶化。
本发明包括通过向需要此类治疗的患者施用如本申请其他部分所公开的抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以治疗或预防慢性阻塞性肺病(COPD)的方法。如在本申请中所使用的，术语“COPD”包括但不限于以在几个月内未发生显著变化的肺呼气流量减少和强制排空缓慢为特征的疾病和病症。根据本发明这一方面的方法可以用于治疗例如与香烟烟雾(例如长期吸烟)、空气污染(例如二氧化硫、二手烟等)、职业性化学品(例如镉)、过敏或AHR相关或由上述原因引起的COPD。
本发明还包括通过向需要此类治疗的患者施用如本申请其他部分所公开的抗-IL-25抗体或其抗原结合片段治疗或预防炎性肠病(IBD)的方法。如在本申请中所使用的，术语“IBD”包括但不限于溃疡性结肠炎、克隆氏病、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、转流性结肠炎、白塞氏综合征、感染性结肠炎、未定型结肠炎以及以大肠或结肠的粘膜层炎症为特征的其他相关病症。
本发明还包括通过向需要此类治疗的患者施用如本申请其他部分所公开的抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以治疗或预防特应性皮炎(AD)的方法。如在本申请中所使用的，术语“AD”包括但不限于以强烈瘙痒(例如严重瘙痒)且以鳞状和干性湿疹损伤为特征的炎性皮肤病。术语“AD”包括由表皮屏障功能障碍、过敏(例如对某些食物、花粉、霉菌、尘螨、动物等过敏)、辐射暴露和/或哮喘引起的或与之相关的AD。根据本发明这一方面的方法可以用于治疗例如轻度、中度、中度至重度和重度形式的AD。
本发明还包括通过向需要此类治疗的患者施用如本申请其他部分所公开的抗-IL-25抗体或其抗原结合片段以治疗或预防疾病和病症如嗜酸性肉芽肿性血管炎或EGPA(也称为Churg-Strauss综合征)、过敏、过敏性鼻炎、过敏性气道炎症、食物过敏、荨麻疹(包括慢性特发性荨麻疹)、嗜酸性粒细胞性肺炎、嗜酸性粒细胞性食道炎、嗜酸性粒细胞增多综合征、特发性肺纤维化、过敏性肺炎、类风湿性关节炎、血管炎、葡萄膜炎、癌症和移植物抗宿主病的方法。
本发明还提供了用于治疗其他炎性病症、心血管疾病、中枢神经系统疾病、疼痛、关节炎(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、银屑病性关节炎等)、巨细胞性动脉炎、血管炎、一般血管疾病、过敏性紫癜、多发性硬化症、狼疮和干燥综合征的方法。
在本申请所述治疗方法的背景下，抗-IL-25抗体可以作为单一疗法(即作为唯一治疗剂)或者与一种或多种其他治疗剂(在本申请的其他部分描述了其实例)联合施用。
联用疗法和制剂
本发明包括组合物和治疗制剂以及治疗方法，所述组合物和治疗处方包含与一种或多种附加治疗活性组分联用的本申请所述的任意抗-IL-25抗体，所述治疗方法包括向需要其的对象施用此类联用。
本发明的抗-IL-25抗体可以与一种或多种选自下组的附加治疗活性组分共同制剂和/或联合施用，例如IL-4或IL-4R拮抗剂(例如抗-IL-4或抗-IL-4R抗体)、IL-13拮抗剂(例如抗-IL-13或抗-IL-13R抗体)、IL-6或IL-6R拮抗剂(例如抗-IL-6或抗-IL-6R抗体，参见例如US7,582,298)、抗-IL-1拮抗剂(例如利洛纳塞)、TNF拮抗剂(例如依那西普(恩利TM))、IgE拮抗剂以及IL-5、IL-8、IL-9、IL-17、IL-17Ra、IL-22、TSLP和IL-33拮抗剂。
在治疗哮喘和相关病况的背景下，附加治疗活性组分可以选自下组：长效β2-激动剂(LABA，例如沙美特罗或福莫特罗)、吸入性皮质类固醇(ICS，例如氟替卡松或布地奈德)、LABA与ICS的组合(例如氟替卡松+沙美特罗[例如(葛兰素史克)]；或布地奈德+福莫特罗[例如(阿斯利康)])、全身性皮质类固醇(例如口服或静脉内)、甲基黄嘌呤、奈多罗米钠、色甘酸钠、以及针对下述细胞因子和/或其受体任意一种或多种的拮抗剂(例如抗体)：IL-4、IL-5、IL-8、IL-9、IL-13、IL-17、IL-33、TSLP及其组合。
在治疗特应性皮炎和相关状况的背景下，附加治疗活性组分可以选自下组：局部皮质类固醇(TCS，例如氢化可的松、倍他米松戊酸酯、倍他米松二丙酸酯、双氟米松戊酸酯、氢化可的松-17-丁酸酯、糠酸莫米松、醋丙氢可的松、丙酸氯倍他索、哈西奈德、丁酸氯倍他松和曲安奈德)、他克莫司、吡美莫司、环孢霉素、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、色甘酸钠、蛋白酶抑制剂、针对下述细胞因子和/或其受体的任意一种或多种的拮抗剂(例如抗体)：IL-4、IL-5、IL-13、IL-17、IL-33、TSLP及其组合。根据本发明这一方面的某些实施方式，将向对象施用抗-IL-25抗体与非药物疗法如紫外线(UV)光疗结合。
在治疗慢性阻塞性肺病(COPD)的背景下，附加治疗活性组分可以选自下组：β2激动剂、抗胆碱能药、IL-5抗体(例如美泊利单抗)或IL-13抗体(例如lebrukuzimab)。例如，可以用于与本发明的抗体联用以治疗COPD的药剂可以包括下述中的任意一种或多种：茚达特罗(β2激动剂)、格隆铵(毒蕈碱剂)、噻托铵(抗胆碱能药)、阿地铵(抗毒蕈碱剂)、芜地溴铵(抗胆碱能剂)或维兰特罗(长效β2激动剂)。可以用于与本发明的抗体联用以治疗COPD的其他药剂包括磷酸二酯酶抑制剂(例如茶碱、罗氟司特、西洛司特)、内源性阿片或β-肾上腺素拮抗剂(β阻断剂)。
在治疗血管炎特别是Churg-Strauss综合征(CSS)的背景下，附加治疗活性组分可以选自类固醇、皮质类固醇和免疫抑制剂(例如环磷酰胺)。
在治疗过敏的背景下，本发明的抗-IL-25抗体可以与用于治疗过敏反应的任意姑息疗法联用，或者可以与标准免疫疗法(SIT)一起用于治疗过敏状况，或者可以用于减轻与过敏反应相关的至少一种症状。例如，附加治疗活性组分可以选自抗组胺剂、类固醇、皮质类固醇、减充血剂、白三烯抑制剂和肥大细胞抑制剂。可以用于与本发明的抗-IL-25抗体联用以治疗过敏的其他药剂可以是任意一种或多种下述细胞因子和/或其受体的拮抗剂：IL-1、IL-4、IL-5、IL-8、IL-9、IL-13、IL-17、TSLP、IL-33或TNF拮抗剂。
本发明的抗-IL-25抗体还可以与抗病毒剂、抗生素、镇痛剂、氧、抗氧化剂、COX抑制剂、心脏保护剂、金属螯合剂、IFN-γ和/或NSAID联合施用和/或共同制剂。
可以在施用本发明的抗-IL-25抗体之前不久、同时或之后不久施用附加治疗活性组分(例如上文所列的任意药剂或其衍生物)(针对本公开的目的，将此类施用方案认为是抗-IL-25抗体与附加治疗活性组分的“联合”施用)。本发明包括其中本发明的抗-IL-25抗体与本申请其他部分所述的一种或多种附加治疗活性组分共同制剂的药物组合物。
施用方案
根据本发明的某些实施方式，可以在一个规定的时间范围内向对象施用多剂量的抗-IL-25抗体(或包含抗-IL-25抗体与本申请提及的任意附加治疗性活性剂的组合的药物组合物)。根据本发明这一方面的方法包括顺序地向对象施用多剂量的本发明的抗-IL-25抗体。如本申请所使用的，“顺序地施用”指在不同的时间点向对象施用各剂量的抗-IL-25抗体，例如在由预定的间隔(例如小时、天、周或月)分隔的不同天。本发明包括包含顺序地向患者施用单一初始剂量的抗-IL-25抗体，随后一个或多个第二剂量的抗-IL-25抗体，以及任选地随后一个或多个第三剂量的抗-IL-25抗体的方法。
术语“初始剂量”、“第二剂量”和“第三剂量”指施用抗-IL-25抗体的时间顺序。因此，所述“初始剂量”是在治疗方案开始时施用的剂量(也称为“基线剂量”)；所述“第二剂量”是在初始剂量之后施用的剂量；以及所述“第三剂量”是在第二剂量之后施用的剂量。所述初始、第二和第三剂量可以均包含相同量的抗-IL-25抗体，但是通常在施用频率方面其彼此之间可以是不同的。然而，在某些实施方式中，在治疗过程中，在初始、第二和/或第三剂量中所含的抗-IL-25抗体的量彼此之间是改变的(例如适当地上调或下调)。在某些实施方式中，在治疗方案开始时施用两个或多个(例如2、3、4或5)剂量作为“负荷剂量”，随后在降低频率的基础上施用后续剂量(例如“维持剂量”)。
在本发明的某些示例性实施方式中，各第二和/或第三剂量均在立即在前剂量1至26(例如1、11/2、2、21/2、3、31/2、4、41/2、5、51/2、6、61/2、7、71/2、8、81/2、9、91/2、10、101/2、11、111/2、12、121/2、13、131/2、14、141/2、15、151/2、16、161/2、17、171/2、18、181/2、19、191/2、20、201/2、21、211/2、22、221/2、23、231/2、24、241/2、25、251/2、26、261/2或更多)周后施用。如本申请所使用的，短语“立即在前剂量”指在多次施用的顺序中在下一个剂量施用前向患者施用的抗-IL-25抗体的剂量，在所述顺序中无插入剂量。
根据本发明这一方面的方法可以包括向患者施用任意数量的第二和/或第三剂量的抗-IL-25抗体。例如，在某些实施方式中，仅向患者施用单一的第二剂量。在其他实施方式中，向患者施用两个或多个(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)第二剂量。同样地，在某些实施方式中，仅向患者施用单一的第三剂量。在其他实施方式中，向患者施用两个或多个(例如2、3、4、5、6、7、8或更多)第三剂量。施用方案可以在特定对象生存期间无限制地使用，或者直至此类治疗不再有治疗性的需求或益处。
在涉及多个第二剂量的实施方式中，可以以与其他第二剂量相同的频率施用各第二剂量。例如，可以在立即在前剂量1-2周或者1-2个月后向患者施用各第二剂量。类似地，在涉及多个第三剂量的实施方式中，可以以与其他第三剂量相同的频率施用各第三剂量。例如，可以在立即在前剂量2-12周后向患者施用各第三剂量。在本发明的某些实施方式中，在治疗方案的过程中向患者施用的第二和/或第三剂量的频率可以改变。在治疗过程中还可以由医师根据临床检查后各患者的需要调整施用频率。
本发明包括其中以第一频率(例如每周一次、每两周一次、每三周一次、每月一次、每两个月一次等)向患者施用2至6个负荷剂量，随后在更低频率的基础上向患者施用两个或多个维持剂量的施用方案。例如，根据本发明的这一方面，如果以每月一次的频率施用负荷剂量，则可以每6周一次、每两个月一次、每三个月一次等向患者施用维持剂量。
抗体的诊断用途
本发明的抗-IL-25抗体还可以用于检测和/或测定样品中的IL-25或表达IL-25的细胞，例如用于诊断目的。例如，抗-IL-25抗体或其片段可以用于诊断特征为IL-25的异常表达(例如过表达、低表达、缺乏表达等)的状况或疾病。针对IL-25的示例性诊断检测可以包括例如将来自患者的样品与本发明的抗-IL-25抗体接触，其中所述抗-IL-25抗体使用可检测的标签或报告分子标记。或者，在诊断应用中可以将未标记的抗-IL-25抗体与其自身具有可检测标签的第二种抗体联用。可检测标记或报告分子可以是放射性同位素如3H、14C、32P、35S或125I；荧光或化学发光部分如荧光素异硫氰酸酯或罗丹明；或酶如碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶或荧光素酶。能够用于检测或测定样品中的IL-25的特异性的示例性检测包括酶联免疫吸附检测(ELISA)、放射性免疫检测(RIA)和荧光活化细胞分选(FACS)。
能够用于根据本发明的IL-25诊断检测的样品包括来自患者的任意组织或液体样品，在正常或病理状况下其含有可检测量的IL-25蛋白或其片段。在通常情况下，将测定来自健康患者(例如未患有与异常的IL-25水平或活性相关的疾病或状况的患者)的特定样品中的IL-25的水平以建立初始的基线或标准IL-25水平。然后将IL-25的该基线水平与在来自疑似患有IL-25相关疾病或病况的个体的样品中测得的IL-25的水平进行比较。
实施例
阐述下述实施例以便向本领域普通技术人员提供如何制备和使用本发明的方法和组合物的完整公开和描述，并且其并非旨在限制发明人所认为的其发明的范围。已作出努力以确保关于所使用数字的准确性(例如数量、温度等)，但是应对一些实验误差和偏差予以考虑。除非另外指出，份数以重量份计、分子量是平均分子量、温度是摄氏度和压力是处于或接近大气压。
实施例1：抗-IL-25抗体的产生
通过使用重组人IL-25(R&D Systems，目录号：1258)免疫小鼠(即包含编码人免疫球蛋白重链可变区和κ轻链可变区的经基因工程改造的小鼠)以获得抗-IL-25抗体。通过IL-25特异性免疫检测监测抗体的免疫应答。当产生了所需要的免疫应答时，收集脾细胞并与小鼠骨髓瘤细胞融合以保持其活力并形成杂交瘤细胞系。对杂交瘤细胞系进行筛选和选择以鉴定生产IL-25特异性抗体的细胞系。使用这项技术获得了若干抗-IL-25嵌合抗体(即具有人源可变结构域和小鼠恒定结构域的抗体)。此外，如US 2007/0280945A1中所描述的，直接从抗原阳性B细胞分离了若干全人抗-IL-25抗体，无需与骨髓瘤细胞融合。
在下述的实施例中详细描述了根据该实施例的方法产生的示例性抗-IL-25抗体的某些生物学性质。
实施例2：重链和轻链可变区的氨基酸和核酸序列
表1中列出了所选的本发明的抗-IL-25抗体的重链和轻链可变区以及CDR的氨基酸序列标识。相应的核酸序列标识如表2中所示。
表1：氨基酸序列标识
表2：核酸序列标识
在本申请中的抗体通常根据下述命名法：Fc前缀(例如“H1H”、“H1M”、“H4H”等)，随后为数字标识(例如“11009”、“10690”、“10861”等)，随后为“P”或“N”后缀，如表1和表2中所示。因此，根据这种命名法，可以将本申请中的抗体称为例如“H1M11009N”、“H2M10690N”、“H4H10861P”等。在本申请中使用的抗体命名中的H1M、H2M、H4H前缀表示特定的抗体Fc区同种型。例如，“H1M”抗体具有小鼠IgG1Fc、“H2M”抗体具有小鼠IgG2Fc和“H4H”抗体具有人源IgG4Fc(由抗体名称中的第一个“H”表示所有可变区是全人源的)。本领域的普通技术人员将理解，可以将具有特定Fc同种型的抗体转换为具有不同Fc同种型的抗体(例如可以将具有小鼠IgG1Fc的抗体转换为具有人源IgG4的抗体等等)，但是如论如何，以表1和2中显示的数字标识表示的可变结构域(包括CDR)将是保持不变的，并且无论Fc结构域的性质如何，预计其结合性质将是相同的或基本上相似的。
在下述实施例中使用的比较抗体
在下述实验中包括了抗-IL25的比较抗体以用于比较目的。特别地，“比较I”是带有具有如US8,658,169中所示的“RH2.5_R71V”的相应结构域的氨基酸序列的重链和轻链可变结构域的抗-IL-25抗体。
实施例3：来源于表面等离子体共振的人单克隆抗-IL-25抗体的结合亲和性和动力学常数
在Biacore 4000仪器(GE医疗)上使用实时表面等离子体共振生物传感器检测确定IL-25结合至纯化的抗-IL-25抗体的平衡解离常数(KD值)。通过胺与多克隆家兔抗-小鼠抗体(GE医疗,#BR-1008-38)或与单克隆小鼠抗-人Fc抗体(GE医疗,#BR-1008-39)偶联将Biacore传感器表面衍生化以捕获表达不同恒定区的抗-IL-25抗体。所有Biacore结合研究均在HBST运行缓冲液(0.01M HEPES pH 7.4，0.15M NaCl，3mM EDTA，0.05％v/v表面活性剂P20)中进行。所有IL-25试剂均表达C-末端myc-myc-六组氨酸标签(在本申请中称为“IL-25-MMH”)。以30μL/min的流速将在HBST运行缓冲液中制备的不同浓度(范围从100nM至3.7nM，3倍稀释)的人IL-25-MMH(SEQ ID NO:273)、猴IL-25-MMH(SEQ ID NO:274)、小鼠IL-25-MMH(SEQ ID NO:275)和大鼠IL-25-MMH(SEQ ID NO:276)注射至已捕获了抗-IL-25抗体的表面上。监测4分钟所有IL-25-MMH试剂与各已捕获的单克隆抗体的结合并且监测10分钟其在HBST运行缓冲液中的解离。如下表中所示的所有结合动力学实验均在25℃或37℃下进行。通过使用Scrubber 2.0c曲线拟合软件将实时传感图拟合为1:1结合模型来确定动力学结合(ka)和解离(kd)速率常数。根据动力学速率常数计算结合解离平衡常数(KD)和解离半衰期(t1/2)：KD(M)＝kd/ka和t1/2(min)＝(ln2/(60*kd)。在25℃或37℃下人、猴、小鼠和大鼠IL-25-MMH结合至抗-IL-25抗体的结合动力学参数如表3至10所示。(“NB”表示在所测试的实验条件下未观察到结合；“IC”表示由于非特异性背景与抗-mFc表面的结合导致的不确定的结合)。
表3：在25℃时抗-IL-25单克隆抗体与人IL-25结合的结合动力学参数
表4：在37℃时抗-IL-25单克隆抗体与人IL-25结合的结合动力学参数
表5：在25℃时抗-IL-25单克隆抗体与猴IL-25结合的结合动力学参数
*IC＝表示由于非特异性背景与抗-mFc表面的结合导致的不确定的结合
表6：在37℃时抗-IL-25单克隆抗体与猴IL-25结合的结合动力学参数
*IC＝表示由于非特异性背景与抗-mFc表面的结合导致的不确定的结合
表7：在25℃时抗-IL-25单克隆抗体与小鼠IL-25结合的结合动力学参数
*NB＝表示在所测试的实验条件下未观察到结合
表8：在37℃时抗-IL-25单克隆抗体与小鼠IL-25结合的结合动力学参数
*NB＝表示在所测试的实验条件下未观察到结合
表9：在25℃时抗-IL-25单克隆抗体与大鼠IL-25结合的结合动力学参数
*NB＝表示在所测试的实验条件下未观察到结合
表10：在37℃时抗-IL-25单克隆抗体与大鼠IL-25结合的结合动力学参数
*NB＝表示在所测试的实验条件下未观察到结合
在25℃时，本发明的抗-IL-25抗体以范围从11.6pM至36.2nM的KD值与人IL-25结合，而比较1以120pM的KD值与人IL-25结合(表3)。在37℃时，本发明的抗-IL-25抗体以范围从26.8pM至61.4nM的KD值与人IL-25结合，而比较1以134pM的KD值与人IL-25结合(表4)。在25℃时，17个本发明的抗-IL-25抗体中有14个以范围从4.02pM至218pM的KD值与猴IL-25结合，而比较1以88.0pM的KD值与猴IL-25结合(表5)。在37℃时，17个本发明的抗-IL-25抗体中有14个以范围从23.6pM至189pM的KD值与猴IL-25结合，而比较1以47.3pM的KD值与猴IL-25结合(表6)。三个本发明的抗体在25℃或37℃时未显示出与猴IL-25的确定的结合。在25℃时，17个本发明的抗-IL-25抗体中有7个以范围从570pM至82.3nM的KD值与小鼠IL-25结合，而比较1以205pM的KD值与小鼠IL-25结合(表7)。在37℃时，17个本发明的抗-IL-25抗体中有7个以范围从243pM至137nM的KD值与小鼠IL-25结合，而比较1以80.8pM的KD值与小鼠IL-25-MMH结合(表8)。10个本发明的抗体在25℃或37℃时均未显示出与小鼠IL-25的结合。在25℃时，17个本发明的抗-IL-25抗体中有7个以范围从132pM至103nM的KD值与大鼠IL-25结合，而比较1以103pM的KD值与大鼠IL-25结合(表9)。在37℃时，17个本发明的抗-IL-25抗体中有7个以范围从60.2pM至115nM的KD值与大鼠IL-25结合，而比较1以64.2pM的KD值与大鼠IL-25结合(表10)。10个本发明的抗体在25℃或37℃时未显示出与大鼠IL-25的结合。
实施例4：抗-IL-25抗体的交叉竞争
在Octet QK384生物传感器(Pall ForteBio Corp.)上使用实时、无标记的生物层干涉量度检测确定抗-IL-25单克隆抗体之间的结合竞争。
整个实验在25℃下在HBST动力学缓冲液(0.01M HEPES pH7.4，0.15M NaCl，3mMEDTA，0.05％v/v表面活性剂P20，0.1mg/ml BSA)中进行，以1000rpm的速度振荡摇板。为了评估两个抗体是否能够彼此之间竞争与表达C-末端myc-myc-六组氨酸标签的重组人IL-25(hIL-25-MMH；SEQ ID NO:273)上其各自的表位的结合，首先通过将生物传感器浸没入含有4μg/mL hIL-25-MMH溶液的孔中5分钟，将约～0.5至0.7nm hIL-25-MMH捕获于包被了抗-五-His抗体的Octet生物传感器(Fortebio Inc,#18-5079)上。然后通过浸入含有50μg/mLmAb-1溶液的孔中5分钟，使用第一抗-IL-25单克隆抗体(在本申请中称为mAb-1)饱和捕获了抗原的生物传感器。随后，再将生物传感器浸入含有50μg/mL第二抗-IL-25单克隆抗体(在本申请中称为mAb-2)溶液的孔中。在实验的每步之间在HBST动力学缓冲液中洗涤生物传感器。在实验过程中监测实时结合应答并记录每步结束时的结合应答。对mAb-2结合至预先复合了mAb-1的hIL-25-MMH的应答进行比较并确定不同抗-IL-25单克隆抗体的竞争性/非竞争性行为。在一些情况下，抗-IL-25抗体不能完全饱和己捕获了hIL-25-MMH的表面，导致在自竞争期间会观察到一定量的结合信号。因此，通过从特异性mAb-2结合中减去自竞争信号产生交叉竞争矩阵并且将小于0nm的任何结合信号均记录为0nm。结果汇总于图1中。mAb标识及其对应的抗体以及针对hIL-25-MMH结合至抗-五-His传感器和针对mAb-1结合至已捕获的hIL-25-mmh所观察到的结合应答的要点如表11中所示。
表11：与图1中所示的交叉竞争测定中所测试的抗体相对应的抗体标识
在图1中，具有黑色字体的浅灰色方框表示自竞争。在两个方向上不依赖于结合顺序的抗体竞争以具有白色字体的黑色方框表示。抗体之间无竞争(提示具有不同结合表位)以具有黑色字体的白色方框表示。具有白色字体的深灰色方框表示同种型对照抗体和仅为缓冲剂的结合应答。
该实施例表明本发明的若干抗体与本发明的一种或多种其他抗体交叉竞争与IL-25的结合；而本发明的某些抗体(例如H1M11009N[12])显示出与所测试的其他抗体具有较少的交叉竞争或无交叉竞争。
实施例5：抗-IL-25抗体阻断IL-25与IL-17RB的结合
在竞争夹心ELISA中对抗-IL-25抗体阻断人IL-25与其天然受体之一人IL-17RB的结合的能力进行了检测。
使用在PBS缓冲液中的2μg/mL的表达C-末端人Fc标签的人IL-17RB蛋白胞外域(hIL17RB-hFc；R&D Systems，#1207-BR)在4℃下将96孔酶标板包被过夜。随后使用0.5％(w/v)BSA的PBS溶液阻断非特异性结合位点。将恒定浓度为2nM的表达C-末端myc-myc-六组氨酸标签的人IL-25(hIL-25-MMH；SEQ ID NO:273)加入抗体的系列稀释物中，以使得抗体的终浓度范围从0至200nM。将抗体/hIL-25-MMH混合物在室温下(RT)孵育1小时，随后将其转移至包被了hIL-17RB-hFc的酶标板中。在RT下孵育1小时后，洗涤孔，并使用与辣根过氧化物酶缀合的抗-myc多克隆抗体(Novus Biologicals，#NB600-341)检测与板结合的hIL-25-MMH。使用TMB溶液将样品显色以产生比色反应，然后使用1M硫酸淬灭，随后在Victor X5酶标仪上测定405nm处的吸光度。使用PrismTM软件(GraphPad)中的S型(Sigmoidal)剂量-效应模型进行数据分析。使用计算得到的IC50值作为阻断效能的指示，其定义为使hIL-25-MMH与hIL-17RB-hFc的结合阻断50％所需的抗体浓度。将仅恒定浓度的hIL-25-MMH的测定吸光度定义为0％阻断并且将未加入hIL-25-MMH测定的吸光度定义为100％阻断。根据从上文定义的100％阻断中减去在存在抗体时观察到的信号降低情况相对于单独hIL-25-MMH的信号与背景(单独的与HRP缀合的二抗的信号)之差的比值计算阻断百分率。使用含有最高浓度各抗体的孔的吸光度值确定最大阻断百分率。所测试各抗体的IC50值和最大阻断百分率如表12中所示。
表12：抗体阻断IL-25与IL-17RB的结合
(*)–对于该测定而言，经计算测定的理论下限为1.0nM，其中将溶液中二聚体hIL-25MMH固定为2nM的浓度。
将不影响恒量hIL-25-MMH的信号或显示出使结合信号降低25％或以下的抗体定义为非阻断剂。理论测定下限为0.5nM，这表示更低的IC50计算值可能不能代表定量的蛋白-抗体位点结合。出于这个原因，在表12中将IC50计算值低于0.5nM的抗体报告为5.0E-10M。
如表12中所示，在所测试的17个抗-IL-25抗体中有16个以范围从小于0.5nM至31nM的IC50值和范围从70％至98％的最大阻断百分率阻断2nM hIL-25-MMH与hIL-17RB-hFc的结合。比较1以小于0.5nM的IC50值阻断90％的2nM hIL-25-MMH与hIL-17RB-hFc的结合。将一个抗体H1M11009N鉴定为在这些测定条件下的非阻断剂。
实施例6：抗-IL-25抗体在经工程改造以表达IL-17RA和IL-17RB的细胞系中阻断IL-25介导的信号传导
开发一项生物检测以在体外检测IL-25介导的细胞信号传导和测量本发明的抗-IL-25抗体阻断IL-25信号传导的程度。
针对这项检测，建立稳定表达人IL-17RA(登记号NP_055154.3的氨基酸1至886)、IL-17RB(登记号NP_061195.2的氨基酸1至502)和Act1(登记号NP_001157753.1的氨基酸1至564)以及荧光素酶报告蛋白[NFκB应答元件(5x)-荧光素酶-IRES-GFP]的HEK293细胞系。将所得到的稳定细胞系(称为HEK293/NFκB-luc/hIL17RA/hIL17RB/hAct1)分离并维持在含有10％FBS、NEAA、青霉素/链霉素、500μg/mL G418、100μg/mL潮霉素B和1μg/mL嘌呤霉素的10％DMEM中。
以10,000个细胞/孔的密度将细胞接种于96孔测定板中，各孔中含有补充了0.1％FBS的OPTIMEM，然后在37℃5％CO2条件下孵育过夜。次日，为了确定IL-25的剂量效应，将表达C-末端myc-myc六组氨酸标签的人IL-25(hIL-25-MMH；SEQ ID NO:273)、表达C-末端myc-myc六组氨酸标签的食蟹猴IL-25(MfIL-25-MMH；SEQ ID NO:274)或表达C-末端myc-myc六组氨酸标签的小鼠IL-25(mIL-25-MMH；SEQ ID NO:275)以1:3的比例系列稀释(从3nM至0.0001nM)并加入细胞。将含有稀释缓冲液但不含IL-25的对照也加入一个细胞样品中。为了测量抑制情况，将抗体系列稀释并加入细胞，随后加入恒定浓度的IL-25(对于两个hIL-25-MMH均为5pM、对于MfIL-25-MMH为12pM和对于mIL-25-MMH为10pM)。在加入细胞前，抗体的系列稀释比例为1:3，其从100nM起始至降至0.002nM的范围，外加一个仅含缓冲液不含抗体的对照样品。在37℃5％CO2条件下中孵育5.5小时后，加入试剂(Promega，#E6051)，使用Victor X(Perkin Elmer)酶标仪检测荧光素酶活性。使用Prism 5软件(GraphPad)通过非线性回归(4-参数logistics分析)对结果进行分析以获得EC50和IC50值。结果如表13中所示。
表13：IL-25介导的信号转导的抑制
NB＝非阻断剂
如在表13中所示的，hIL-25-MMH在两个独立的检测日中以2.9pM和16pM的EC50值活化；mfIL-25-MMH以19pM的EC50值活化；以及mIL-25-MMH以8.4pM的EC50值活化。
对于阻断而言，本发明的17个抗体中有15个以范围从27pM至1.8nM的IC50值完全阻断5pM hIL-25-MMH对HEK293/NFκB-luc/hIL17RA/hIL17RB/hAct1细胞的刺激，而比较1在两个独立的测定日中以720pM和220pM的IC50值完全阻断。所测试的两个抗体H2aM10690N和H1M11009N在高抗体浓度下部分抑制5pM hIL-25-MMH。所测试的全部14个本发明的抗体以范围从22pM至400pM的IC50值完全阻断12pM MfIL-25-MMH对HEK293/NFκB-luc/hIL17RA/hIL17RB/hAct1细胞的刺激，而比较1以380pM的IC50值完全阻断。所测试的6个本发明的抗体中有5个以范围从670pM至15nM的IC50值完全阻断10pM mIL-25-MMH对HEK293/NFκB-luc/hIL17RA/hIL17RB/hAct1细胞的刺激，而比较1以610pM的IC50值完全阻断。还对同种型对照抗体进行了测试并且其在任何检测中均未显示出抑制。
实施例7：抗-IL-25抗体在基于原代细胞的检测中阻断IL-25介导的信号传导
使用采用外周血单核细胞(PBMC)的基于原代细胞的检测(参见Rickel等，TheJournal of Immunology,2008,vol.181(6)pp.4299-4310)对本发明抗-IL-25抗体的阻断能力进行进一步评估。
利用密度梯度离心从来自两名不同供体的新鲜全血中纯化PBMC。简言之，将K2EDTA全血在RPMI 1640中稀释两倍，在Ficoll-Paque(GE Healthcare，#17-1440-03)上小心分层并离心20分钟。吸取含有PBMC界面层，转移至新试管中并使用PBS洗涤两次。以2x106个细胞/mL的终浓度在补充了10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100ng/mL重组胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP；R&D Systems，#1398-TS/CF)的RPMI 1640中将分离的PBMC接种于75cm2培养瓶中。24小时后，收集细胞，在RPMI 1640中洗涤，并以3x105个细胞/mL的终浓度在补充了10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的RPMI 1640中接种于圆底96孔板中。然后将细胞与50ng/mL TSLP、10ng/mL人IL-2(IL-2；R&D Systems，#202-IL/CF)、1nM表达C-末端myc-myc六组氨酸标签的人IL-25(hIL-25-MMH；SEQ ID:273)以及从200nM至48.8pM的抗体的系列稀释物一起孵育，每孔的终体积为200μL。各样品一式三份进行测试。当存在抗体时，将其加入使用IL-25预孵育30分钟后的细胞。
然后在37℃下在含5％CO2的湿润培养箱中孵育细胞72小时。随后使用市售ELISA(R&D Systems，#DY205)检测培养物上清液中的IL-5水平。对于ELISA而言，根据生产厂商的说明书使用捕获抗体包被96孔平底板。洗涤和封闭后，将100μL未经稀释的培养物上清液加入板中并孵育2小时。随后按照生产厂商的说明书洗涤和检测。结果汇总于表14和15中。
表14：hIL-25-MMH诱导人PBMC释放IL-5
表15：抗-IL-25抗体阻断hIL-25-MMH诱导的人PBMC中IL-5的释放
如表14中所示，1nM人IL-25-MMH，在存在TSLP和IL-2时，诱导由供体#727058-059中获得的人总PBMC释放0.071ng/mL IL-5和诱导由供体#727060中获得的人总PBMC释放0.599ng/mL IL-5。
如表15中所示，所检测的全部4个本发明的抗-IL-25抗体阻断由1nM hIL-25-MMH诱导的IL-5从人PBMC中的释放，对于供体#727058-059其IC50值范围从39.2pM至1.149nM，以及对于供体#727060其IC50值范围从129.6pM至677.1pM。比较1对于供体#727058-059以5.685nM的IC50值阻断IL-5的释放，对于供体#727060以15.9nM的IC50值阻断IL-5的释放。
本实施例证实了本发明的抗-IL-25抗体能够以比抗-IL-25的比较抗体更高的程度高效阻断IL-25在细胞中的信号传导。
实施例8：IL-25流体力学递送DNA(HDD)诱导的肺嗜酸性粒细胞增多、杯状细胞化生和提高血清IgE以研究候选mAb的体内效能
通过流体力学递送DNA(HDD)在野生型(WT)小鼠中过表达人IL-25。对于HDD实验而言，注射给予WT小鼠25μg表达全长人IL-25(参见NM_022789.3；hIL-25以及亦参见SEQ IDNO:277(DNA)和SEQ ID NO:278(蛋白))的质粒或25μg无编码序列的相同质粒(空载体)。在HDD注射前三天、HDD注射当天以及然后在HDD注射后第2天和第4天，皮下注射给予注射hIL-25质粒的小鼠亚组IL-25抗体或相同剂量的同种型对照抗体。在HDD注射后7天处死小鼠，并收集血液和肺。通过ELISA对血清IgE水平定量；通过使用胶原酶处理后分离肺浸润细胞和流式细胞术对肺嗜酸性粒细胞增多进行评估；以及通过对肺切片进行高碘酸希夫氏染色(PAS)定量评估杯状细胞化生。
各组小鼠的实验剂量和给药方案如表16A和16B中所示。
表16A：研究1
表16B：研究2
循环IgE水平的测量
经由使用27G1/2 1ml TB注射器(BD,#309306)的末端心脏穿刺从各只小鼠收集血液样品并将收集得到的血液置于BD血清分离管(BD,#365956)中。离心后，收集血清并随后转移至新管中。
为确定血清样品中的总IgE浓度，根据生产厂商的说明书使用夹心ELISA OPTEIA试剂盒(BD,#555248)以及B组BD OPTEIA试剂(BD,#550534)。简言之，在试剂稀释剂中稀释血清样品并置于使用抗-IgE捕获抗体包被的96孔板中。使用生产厂商提供的经纯化的小鼠IgE作为对照标准品。洗涤后，使用生物素化的抗-小鼠IgE抗体检测与板结合的总IgE，随后加入抗生物素蛋白链菌素-辣根过氧化物酶缀合物。之后加入显色物质3,3’,5,5’-四甲基联苯胺以产生比色反应，然后使用1M硫酸中和，随后在Molecular Devices SpectraMax M5酶标仪上于450nm处检测吸光度。使用PrismTM软件(GraphPad)进行数据分析。各实验组循环IgE的平均量以ng/mL±标准偏差(SD)表示，如表18和19中所示。
收集用于肺细胞浸润分析的肺
放血处死后，从各只小鼠中取出右肺尾叶，切成尺寸约2至3mm的小块，并将其置于在Hank平衡盐溶液(HBSS)(Gibco,#14025)中稀释的含20μg/mL DNAse(Roche,#10104159001)和0.7U/mL Liberase TH(Roche,#05401151001)的溶液中，将其在37℃水浴中孵育20分钟并且每5分钟涡旋一次。通过加入终浓度10mM的乙二胺四乙酸(Gibco,#15575)终止反应。随后使用温和MACS(Miltenyi Biotec,#130-095-937)解离每个肺并且之后过滤通过70μm滤器并离心。将所得到的肺球团在1mL 1X红细胞裂解缓冲液(Sigma,#R7757)中重悬以除去红细胞。在室温下孵育3分钟后，加入3mL1x DMEM使红细胞裂解缓冲液失活。然后将细胞混悬液离心，并且将所得到的细胞球团在5mL MACS缓冲液(自动MACS运行缓冲液；Miltenyi Biotec,#130-091-221)中重悬。将重悬的样品过滤通过70μm滤器并以1x106个细胞每孔的密度接种于96孔V-底板中。然后将细胞离心并使用1X PBS洗涤球团。在第二次离心后，将细胞球团重悬于使用1X PBS以1:1000的比例稀释的100μL可固定水溶性死细胞染料(Life Technologies,#L34957)中以确定细胞活力并且在室温下避光孵育20分钟。在1X PBS中洗涤1次后，在4℃下将细胞在含10μg/mL纯化的大鼠抗-小鼠CD16/CD32Fc封闭物(克隆：2.4G2；BD Biosciences,#553142)的MACS缓冲溶液中孵育10分钟。将细胞洗涤1次并且然后在经MACS缓冲液稀释的适宜抗体混合物(表17中所述的)中于4℃下避光孵育30分钟。抗体孵育后，将细胞在MACS缓冲液中洗涤2次，在BDcytofix(BD Biosciences,#554655)中重悬，并且然后在4℃下避光孵育15分钟。随后洗涤细胞，在MACS缓冲液中重悬，并且然后转移至BD FACS管(BD Biosciences,#352235)中，用于通过流式细胞术对嗜酸性粒细胞进行分析。
将嗜酸性粒细胞定义为活的CD45+、GR1-、CD11clo、SiglecFhi。数据以在免疫细胞群中嗜酸性粒细胞的频率表示(CD45+细胞％±SD)，如表20和21所示。
表17：流式细胞术分析使用的抗体
抗体 荧光染料 生产厂商 目录号 最终稀释
CD11c APC BD Biosciences 550261 1/100
CD45 PerCP Cy5.5 eBiosciences 45-0454-82 1/800
F4/80 太平洋蓝 eBiosciences 48-4801-82 1/200
Siglec-F PE BD Biosciences 552126 1/100
Ly6G(Gr-1) APC-eFluor780 eBiosciences 47-5931-82 1/200
收集用于杯状细胞化生分析的肺
放血处死后，从各只小鼠中取出左肺并将其置于含有5mL在1X磷酸盐缓冲液中的4％(w/v)多聚甲醛(Boston Bioproducts,#BM-155)溶液的管中并在室温下放置至少24小时。然后将肺样品吸干并转移至含70％乙醇的管中。将样品送至Histoserv,Inc(Germantown,MD)进行石蜡包埋、切片和高碘酸希夫氏(PAS)染色。
使用Zeiss Axio成像A2显微镜(40X物镜)获取PAS染色肺切片的照片。将PAS染色阳性的细胞鉴定为杯状细胞并在主支气管上皮1至2mm的纵切面内对其进行计数。以相对于所分析的上皮切片中的细胞总数表示杯状细胞计数。数据以杯状细胞频率±SD表示，如表22中所示。
表18：来自研究1的小鼠总IgE的循环水平
表19：来自研究2的小鼠总IgE的循环水平
显示了通过Kruskal-Wallis检验结合Dunn多重比较后检验确定的与空载体组相比的统计学显著性(**p<0.001)。
表20：来自研究1的肺嗜酸性粒细胞频率
显示了通过Kruskal-Wallis检验结合Dunn多重比较后检验确定的与同种型对照相比的统计学显著性(**p<0.001)。
表21：来自研究2的肺嗜酸性粒细胞频率
显示了通过Kruskal-Wallis检验结合Dunn多重比较后检验确定的与hIL-25相比的统计学显著性(*p<0.01)。
表22：来自研究2的杯状细胞化生
与通过HDD获得空载体的野生型小鼠的循环IgE水平(对于研究1为311±200ng/mL和对于研究2为1186±1370ng/mL)相比，通过HDD过表达人IL-25的野生型小鼠显示出升高的循环IgE水平(对于研究1为3417±1627ng/mL和对于研究2为1186±1370ng/mL)。当给予通过HDD过表达人IL-25的小鼠IL-25抗体时，在各研究中循环IgE的水平均降低，如表18和19中所示。与通过HDD获得空载体的野生型小鼠中的肺嗜酸性粒细胞频率(对于研究1为1.47±0.16％和对于研究2为6.35±1.46％)相比，通过HDD过表达人IL-25的野生型小鼠显示出肺嗜酸性粒细胞频率增加的趋势(对于研究1为17.20±2.39％和对于研究2为32.29±18.35％)。当给予通过HDD过表达人IL-25的小鼠IL-25抗体时，在各研究中肺嗜酸性粒细胞频率降低，如表20和21中所示。与通过HDD获得空载体的野生型小鼠中的杯状细胞化生(对于研究2为1.15±1.67)相比，通过HDD过表达人IL-25的野生型小鼠显示出杯状细胞化生增加的趋势(对于研究2为59.63±39.74)。当给予通过HDD过表达人IL-25的小鼠IL-25抗体时，杯状细胞化生频率降低，如表22中所示。
实施例9：在WT和IL-25KO小鼠中的慢性房屋尘螨过敏原(HDM)诱导的肺部炎症
为了确定IL-25在相关体内模型中的作用，在野生型小鼠(WT)和小鼠IL-25缺失纯合子小鼠(IL-25KO小鼠)中进行了慢性房屋尘螨过敏原(HDM)诱导的肺部炎症研究。
连续12周，每周5天向IL-25KO小鼠和WT小鼠鼻内施用在20μL 1X磷酸盐缓冲液(PBS)中稀释的50μg房屋尘螨提取物(HDM；Greer,#XPB70D3A2.5)或20μL1X PBS。在研究第13周的第1天处死所有小鼠并收集其肺脏。各组小鼠的实验剂量和给药方案如表23中所示。
表23：各组小鼠的实验剂量和给药方案
收集用于肺细胞浸润分析的肺
放血处死后，从各只小鼠中取出右肺尾叶，切成尺寸约2至3mm的小块，并将其置于在Hank平衡盐溶液(HBSS)(Gibco,#14025)中稀释的含20μg/mL DNAse(Roche,#10104159001)和0.7U/mL Liberase TH(Roche,#05401151001)的溶液中，将其在37℃水浴中孵育20分钟并且每5分钟倒转一次。通过加入终浓度10mM的乙二胺四乙酸(Gibco,#15575)终止反应。随后使用温和MACS(Miltenyi Biotec,#130-095-937)解离每个肺并且之后过滤通过70μm滤器并离心。将所得到的肺球团在1mL 1X红细胞裂解缓冲液(Sigma,#R7757)中重悬以除去红细胞。在室温下孵育3分钟后，加入3mL MACS缓冲液(自动MACS运行缓冲液；Miltenyi Biotec,#130-091-221)使红细胞裂解缓冲液失活。然后将细胞混悬液离心，并且将所得到的细胞球团在5mL MACS缓冲液中重悬。将重悬的样品过滤通过70μm滤器并以1x106个细胞每孔的密度接种于96孔V-底板中。然后将细胞离心并使用1XPBS洗涤球团。在第二次离心后，将细胞球团重悬于使用1X PBS以1:1000的比例稀释的100μL可固定水溶性死细胞染料(Life Technologies,#L34957)中以确定细胞活力并且在室温下避光孵育20分钟。在1X PBS中洗涤1次后，在4℃下将细胞在含10μg/mL纯化的大鼠抗-小鼠CD16/CD32Fc封闭物(克隆：2.4G2；BD Biosciences,#553142)的MACS缓冲溶液中孵育10分钟。将细胞洗涤1次并且然后在经MACS缓冲液稀释的适宜抗体混合物(表24中所述的)中于4℃下避光孵育30分钟。抗体孵育后，将细胞在MACS缓冲液中洗涤2次，在BDcytofix(BD Biosciences,#554655)中重悬，并且然后在4℃下避光孵育15分钟。随后洗涤细胞，在MACS缓冲液中重悬，并且然后转移至BD FACS管(BD Biosciences,#352235)中，用于通过流式细胞术对中性粒细胞和淋巴细胞进行分析。
将中性粒细胞定义为活的CD45+、F4/80-、Ly6G+、Ly6CInt。中性粒细胞的数据以所分析的活细胞频率表示(活细胞频率，±SD)，如表25中所示。将CD4和CD8T细胞分别定义为活的SSCLo、FSCLo、CD45+、CD19-、CD3+、CD8-、CD4+和活的SSCLo、FSCLo、CD45+、CD19-、CD3+、CD8+、CD4-。CD4和CD8T细胞的数据以CD4T细胞频率相对于CD 8T细胞频率表示(CD4/CD8比值，±SD)，如表25中所示。将活化的CD4T细胞定义为活的CD45+、SSCLo、FSCLo、CD3+、CD19-、CD4+、CD8-和CD69+细胞。将活化的CD8T细胞定义为活的CD45+、SSCLo、FSCLo、CD3+、CD19-、CD4+、CD8-和CD69+。活化细胞的数据以在母体群中活化细胞(CD69+)的频率表示(CD4或CD8T细胞的频率，±SD)，如表25中所示。
表24：流式细胞术分析使用的抗体
抗体 荧光染料 生产厂商 目录号 最终稀释
CD11c APC BD Biosciences 550261 1/100
CD45 PerCP Cy5.5 eBiosciences 45-0454-82 1/800
F4/80 太平洋蓝 eBiosciences 48-4801-82 1/200
Siglec-F PE BD Biosciences 552126 1/100
Ly6G(Gr-1) APC-eFluor780 eBiosciences 47-5931-82 1/200
CD3 PE-Cy7 BD Biosciences 552774 1/200
CD19 eFluor 450 eBiosciences 48-0193-82 1/200
CD4 APC-H7 BD Biosciences 560181 1/200
CD8 APC eBiosciences 17-0081-82 1/200
CD69 PE eBiosciences 12-0691-82 1/200
收集用于细胞因子分析的肺：
放血处死后，从各只小鼠中取出右肺的颅叶和中叶并将其置于含有添加了1XHalt蛋白酶抑制剂混合物(Pierce,#78430)的组织蛋白提取剂(1X T-PER试剂；Pierce,#78510)溶液的管中。所有随后的步骤在冰上进行。调整各样品中T-PER试剂(含有蛋白酶抑制剂混合物)的体积以符合组织与T-PER的比例为1:7.5(w/v)。使用一次性研磨杵(ArgosTechnologies，目录号P9950-901)在管中对肺样品手工匀浆。将所得到的裂解物离心为球团碎片。将含有可溶性蛋白提取物的上清液转移至新管中并在4℃下保存直至进行进一步分析。
使用Bradford测定测量肺蛋白提取物中的总蛋白含量。对于该测定而言，将10μL经稀释的提取物样品置于96孔板中，设置为双复孔，并且与200μL 1X染料试剂(Biorad,#500-0006)混合。使用在1X T-Per试剂中初始为700μg/mL的牛血清白蛋白(Sigma,#A7979)系列稀释物作为标准品以确定提取物的提取蛋白浓度。在室温下孵育5分钟后，在Molecular Devices SpectraMax M5酶标仪上测定595nm处的吸光度。使用GraphPadPrismTM软件进行数据分析以确定总蛋白含量。
根据生产厂商的说明书，使用促炎性嵌板1(小鼠)多重免疫测定试剂盒(MesoScale Discovery,#K15048D)检测肺蛋白提取物中的细胞因子浓度。简言之，以50μL/孔将校准品和样品(使用稀释剂41稀释)加入预先包被捕获抗体的板中并且在室温下孵育2小时，同时以700rpm振摇。然后使用含有0.05％(w/v)吐温-20的1X PBS洗板3次，随后加入25μL使用稀释剂45稀释的检测抗体溶液。再在室温下孵育2小时同时进行振摇后，洗板3次，并将150μL 2X读数缓冲液加入各孔中。立即在MSD仪上读取电化学发光结果。使用GraphPad PrismTM软件进行数据分析。
将所检测的在肺总蛋白提取物中每种细胞因子的浓度均归一化至通过Bradford测定检测的提取物的总蛋白含量，并且以pg细胞因子每mg总肺蛋白(pg/mg肺蛋白，±SD)表示，如表26中所示。
表25：通过流式细胞术确定的肺细胞浸润频率
显示了通过双因素ANOVA检验结合Tukey多重比较后检验确定的与WT HDM组相比的统计学显著性(**p<0.001；***p<0.0001)。
表26：在肺蛋白提取物中的细胞因子浓度
显示了通过双因素ANOVA检验结合Tukey多重比较后检验确定的与WT HDM组相比的统计学显著性(**p<0.001；***p<0.0001)。
如表25中所示，与仅暴露于PBS的WT小鼠相比，在WT小鼠中长期或慢性暴露于HDM诱导肺中性粒细胞的显著增加。在WT小鼠中的慢性HDM攻击还诱导在肺中CD4与CD8T细胞平衡的偏移，以及增加了活化的CD4和CD8T细胞的频率。与WT小鼠相比，在IL-25KO小鼠中由慢性HDM攻击诱导的肺中性粒细胞和肺细胞炎症的这些其他特征的增加均显著降低。
与仅暴露于PBS的WT小鼠相比，长期暴露于HDM诱导的WT小鼠肺中促炎性细胞因子如IL-1β和TNFα的水平显著增加。而相反的是，如表26中所示，IL-25KO小鼠长期暴露于HDM未显著增加肺中这两种细胞因子的水平。
总之，长期暴露于HDM在WT小鼠中诱导肺炎症特征，这在受到相同攻击的IL-25KO小鼠的肺中不存在。
本发明并不旨在通过本申请所述的特定实施方式限制范围。事实上，除了本申请所描述的那些外，对本发明的不同修订将是本领域技术人员从前述说明书和附图中显而易见的。此类修订旨在落入所附权利要求的范围内。
序列表
<110> 瑞泽恩制药公司
<120> 抗IL-25抗体及其使用方法
<130> A0034WO01
<150> 62/054,167
<151> 2014-09-23
<160> 278
<170> 用于Windows 4.0版的FastSEQ
<210> 1
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 1
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtagagc ctggggggtc ccttagactc 60
tcctgtgtag cctctggatt cactttcagt aacgcctgga tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggttggccat attgaaagga aaactgatgg tgggacaaca 180
gacttcgctg cacccgtgaa aggcagattc accatctcaa gagatgattc aaaaaacacg 240
ctgtatctgc aaatgaacag cctgaaaacc gaggacacag ccgtgtatta ctgtaccaca 300
gtgggcccct acagtgtccc ttttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 2
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Glu Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Gly His Ile Glu Arg Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr Asp Phe Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr
65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Thr Val Gly Pro Tyr Ser Val Pro Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
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ggattcactt tcagtaacgc ctgg 24
<210> 4
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
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Gly Phe Thr Phe Ser Asn Ala Trp
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
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attgaaagga aaactgatgg tgggacaaca 30
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
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Ile Glu Arg Lys Thr Asp Gly Gly Thr Thr
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成的
<400> 7
accacagtgg gcccctacag tgtccctttt gactac 36
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成的
<400> 8
Thr Thr Val Gly Pro Tyr Ser Val Pro Phe Asp Tyr
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atcacttgcc gggcaagtca gagcattggc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag acttacagta cccccatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a 321
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
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<212> DNA
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<220>
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 12
Gln Ser Ile Gly Ser Tyr
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 13
gctgcatcc 9
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 14
Ala Ala Ser
1
<210> 15
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 15
caacagactt acagtacccc catcacc 27
<210> 16
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 16
Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr
1 5
<210> 17
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 17
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc agctatggta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180
gcacagaagc tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240
atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagttccc 300
ataactggaa ctacctggtt cgacccctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 18
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Pro Ile Thr Gly Thr Thr Trp Phe Asp Pro Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 19
ggttacacct ttaccagcta tggt 24
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 20
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Gly
1 5
<210> 21
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 21
atcagcgctt acaatggtaa caca 24
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 22
Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr
1 5
<210> 23
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 23
gcgagagttc ccataactgg aactacctgg ttcgacccc 39
<210> 24
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 24
Ala Arg Val Pro Ile Thr Gly Thr Thr Trp Phe Asp Pro
1 5 10
<210> 25
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 25
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag acttacagta cccccatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a 321
<210> 26
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 26
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 27
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 27
cagagcatta gcagctat 18
<210> 28
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 28
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 29
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 29
gctgcatcc 9
<210> 30
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 30
Ala Ala Ser
1
<210> 31
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 31
caacagactt acagtacccc catcacc 27
<210> 32
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 32
Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr
1 5
<210> 33
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 33
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agtcactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggaatg gattggtttt atctattaca gtgggagcac caacttcaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatttca atagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcagacacg gccgtgtatt actgtgcgag acatgactac 300
aatgactacg agctcaacta cttcgatctc tggggccgtg gcaccctggc ctctgtctcc 360
tca 363
<210> 34
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 34
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser His
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Phe Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Ile Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg His Asp Tyr Asn Asp Tyr Glu Leu Asn Tyr Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Ala Ser Val Ser Ser
115 120
<210> 35
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 35
ggtggctcca tcagtagtca ctac 24
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 36
Gly Gly Ser Ile Ser Ser His Tyr
1 5
<210> 37
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 37
atctattaca gtgggagcac c 21
<210> 38
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 38
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 39
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 39
gcgagacatg actacaatga ctacgagctc aactacttcg atctc 45
<210> 40
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 40
Ala Arg His Asp Tyr Asn Asp Tyr Glu Leu Asn Tyr Phe Asp Leu
1 5 10 15
<210> 41
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 41
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcattagc agctatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtcaacag acttacagta cccccatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a 321
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 43
cagagcatta gcagctat 18
<210> 44
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 44
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 45
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 45
gctgcatcc 9
<210> 46
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 46
Ala Ala Ser
1
<210> 47
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 47
caacagactt acagtacccc catcacc 27
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 48
Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Ile Thr
1 5
<210> 49
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 49
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccaggt ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgc ctccatcagt aattactact ggagttggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gattggatat atcttttaca gtgggaacac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatttca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc cgcagacacg gccgtgtatt actgtgcgag agtcaggttc 300
agtgactacg aactaaactg gttcgacccc tggggccagg ggaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 50
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 50
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Ala Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Val Arg Phe Ser Asp Tyr Glu Leu Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 51
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 51
ggtgcctcca tcagtaatta ctac 24
<210> 52
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 52
Gly Ala Ser Ile Ser Asn Tyr Tyr
1 5
<210> 53
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 53
atcttttaca gtgggaacac c 21
<210> 54
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 54
Ile Phe Tyr Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 55
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 55
gcgagagtca ggttcagtga ctacgaacta aactggttcg acccc 45
<210> 56
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 56
Ala Arg Val Arg Phe Ser Asp Tyr Glu Leu Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 57
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 57
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtat ttctgggcga gcgggccacc 60
atcaactgca ggtccagcca gagtgttttt ctcggctcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaacctgg acagcctcct aaactactca tttactgggc gtcttcccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtcag ggacagattt cactctcact 240
atcaacagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata tttcattact 300
ccgctcactt tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaa 339
<210> 58
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 58
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Phe Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Phe Leu Gly
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ser Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Asn Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Phe Ile Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 59
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 59
cagagtgttt ttctcggctc caacaataag aactac 36
<210> 60
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 60
Gln Ser Val Phe Leu Gly Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 61
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 61
tgggcgtct 9
<210> 62
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 62
Trp Ala Ser
1
<210> 63
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 63
cagcaatatt tcattactcc gctcact 27
<210> 64
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 64
Gln Gln Tyr Phe Ile Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 65
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 65
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttacttct ggagctggat ccggcaggcc 120
ccaggaaagg gactggagtg gattggattt atcgattaca gtgggagcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagttgaact ctgtgaccgc cgcagacacg gccgtctatt actgtgcgag acaagagatc 300
attaacttcg agctgaactg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt cactgtctcc 360
tca 363
<210> 66
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 66
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Asp Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gln Glu Ile Ile Asn Phe Glu Leu Asn Trp Phe Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 67
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 67
ggtggctcca tcagtagtta cttc 24
<210> 68
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 68
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Phe
1 5
<210> 69
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 69
atcgattaca gtgggagcac c 21
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 70
Ile Asp Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 71
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 71
gcgagacaag agatcattaa cttcgagctg aactggttcg acccc 45
<210> 72
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 72
Ala Arg Gln Glu Ile Ile Asn Phe Glu Leu Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 73
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 73
gacatcgtga tgacccagtc tccagcctcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta tacagttcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aacctgctca tttactggtc atctacccgg 180
gactccgggg tccctgaccg attcagtggc agcggttctg gggcagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttttagtact 300
ccgtggacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 74
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 74
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ser Ser Thr Arg Asp Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Phe Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 75
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 75
cagagtgttt tatacagttc caacaataag aactac 36
<210> 76
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 76
Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 77
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 77
tggtcatct 9
<210> 78
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 78
Trp Ser Ser
1
<210> 79
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 79
cagcaatatt ttagtactcc gtggacg 27
<210> 80
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 80
Gln Gln Tyr Phe Ser Thr Pro Trp Thr
1 5
<210> 81
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 81
caggttcagc tggtgcagtc cggagctgag gtgaagaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgtaagg cttctggtta cacctttagt agttatggta ttagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatgataa cacacagtat 180
gcacagaaat tccagggcag agtcaccatg accacagaca catccacgag cacagcctac 240
atggagctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagtccca 300
ttacaatggt tcggggagtc ctttgaccac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 82
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 82
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Asp Asn Thr Gln Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Pro Leu Gln Trp Phe Gly Glu Ser Phe Asp His Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 83
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 83
ggttacacct ttagtagtta tggt 24
<210> 84
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 84
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 85
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 85
atcagcgctt acaatgataa caca 24
<210> 86
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 86
Ile Ser Ala Tyr Asn Asp Asn Thr
1 5
<210> 87
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 87
gcgagagtcc cattacaatg gttcggggag tcctttgacc ac 42
<210> 88
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 88
Ala Arg Val Pro Leu Gln Trp Phe Gly Glu Ser Phe Asp His
1 5 10
<210> 89
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 89
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtggggga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca ggacattaac aactatttaa attggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatcttttct acatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggctc tggaacagat ttcactctca ccatcagcag tctccaatct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacag actttcatta ccccgctcac tttcggcggc 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 90
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 90
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ser Thr Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ser
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Phe Ile Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 91
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 91
caggacatta acaactat 18
<210> 92
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 92
Gln Asp Ile Asn Asn Tyr
1 5
<210> 93
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 93
tctacatcc 9
<210> 94
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 94
Ser Thr Ser
1
<210> 95
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 95
caacagactt tcattacccc gctcact 27
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 96
Gln Gln Thr Phe Ile Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 97
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 97
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acttgtactg tctctggtgg ctccatcagt aattacttct ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gattgggttt aactataaca gtgggagcac caactataac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatttca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agggtataac 300
tggaactacg aaatagcttg gttcgacccc tggggccagg gaaccctggt cactgtctcc 360
tca 363
<210> 98
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 98
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Phe Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Asn Tyr Asn Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Tyr Asn Trp Asn Tyr Glu Ile Ala Trp Phe Asp Pro Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 99
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 99
ggtggctcca tcagtaatta cttc 24
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 100
Gly Gly Ser Ile Ser Asn Tyr Phe
1 5
<210> 101
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 101
aactataaca gtgggagcac c 21
<210> 102
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 102
Asn Tyr Asn Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 103
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 103
gcgagagggt ataactggaa ctacgaaata gcttggttcg acccc 45
<210> 104
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 104
Ala Arg Gly Tyr Asn Trp Asn Tyr Glu Ile Ala Trp Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 105
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 105
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gagcataagc agttatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ttgtcaacag agttacctta ccccgctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 106
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 106
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Leu Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 107
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 107
cagagcataa gcagttat 18
<210> 108
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 108
Gln Ser Ile Ser Ser Tyr
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 109
gctgcatcc 9
<210> 110
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 110
Ala Ala Ser
1
<210> 111
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 111
caacagagtt accttacccc gctcact 27
<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 112
Gln Gln Ser Tyr Leu Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 113
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 113
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgatgaagc ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagt cttctgactt cgcctttacc acctatggca tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggatgg atcagcgctt acaatggtaa cacaaactat 180
gaacagaggt tccagggcag aatcaccatg accacagaca catccacgac cacagtttat 240
atggagttga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagatccc 300
gactattgta gtagtaacac ctgttctgat gcttttgatt tgtggggcca agggacaatg 360
gtcaccgtct cttca 375
<210> 114
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 114
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ser Ser Asp Phe Ala Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Glu Gln Arg Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Ile Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Thr Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Pro Asp Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Cys Ser Asp Ala Phe
100 105 110
Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 115
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 115
gacttcgcct ttaccaccta tggc 24
<210> 116
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 116
Asp Phe Ala Phe Thr Thr Tyr Gly
1 5
<210> 117
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 117
atcagcgctt acaatggtaa caca 24
<210> 118
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 118
Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Asn Thr
1 5
<210> 119
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 119
gcgagagatc ccgactattg tagtagtaac acctgttctg atgcttttga tttg 54
<210> 120
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 120
Ala Arg Asp Pro Asp Tyr Cys Ser Ser Asn Thr Cys Ser Asp Ala Phe
1 5 10 15
Asp Leu
<210> 121
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 121
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtacgaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcgagtca gggcattacc aattatttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagttc ctaaggtcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180
cggttcagtg gcagtggctc tgggacagaa ttcactctcg ccatcagcag cctgcagcct 240
gaggatgttg caacttattt ctgtcaacag tatggcagtg ccccttggac gttcggccaa 300
gggaccaagg tggaaatcaa a 321
<210> 122
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 122
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Arg
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Val Pro Lys Val Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Ala Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Gly Ser Ala Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 123
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 123
cagggcatta ccaattat 18
<210> 124
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 124
Gln Gly Ile Thr Asn Tyr
1 5
<210> 125
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 125
gctgcatcc 9
<210> 126
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 126
Ala Ala Ser
1
<210> 127
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 127
caacagtatg gcagtgcccc ttggacg 27
<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 128
Gln Gln Tyr Gly Ser Ala Pro Trp Thr
1 5
<210> 129
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 129
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaaac ctggggcctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctgagta cacctttagc aactatggca tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gtcttgagtg gttggggtgg atcggcgctt atagtggttt cacaaaatat 180
gcacagaagg tccaggacag aatcaccatg accacagacg catccacgac cacagcctac 240
atggagctga gaaacctgag atctgacgac acggccgtgt attattgtgc gagagtggga 300
actggaactg actcttactt tgacttctgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360
<210> 130
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 130
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Glu Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Trp Ile Gly Ala Tyr Ser Gly Phe Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Val
50 55 60
Gln Asp Arg Ile Thr Met Thr Thr Asp Ala Ser Thr Thr Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Asn Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gly Thr Gly Thr Asp Ser Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 131
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 131
gagtacacct ttagcaacta tggc 24
<210> 132
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 132
Glu Tyr Thr Phe Ser Asn Tyr Gly
1 5
<210> 133
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 133
atcggcgctt atagtggttt caca 24
<210> 134
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 134
Ile Gly Ala Tyr Ser Gly Phe Thr
1 5
<210> 135
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 135
gcgagagtgg gaactggaac tgactcttac tttgacttc 39
<210> 136
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 136
Ala Arg Val Gly Thr Gly Thr Asp Ser Tyr Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 137
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 137
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgcc gggcaagtca gaacattaac agtcatttaa attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatttatact gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatta 180
agattcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg gaatttacat ctgtcaacag acttacataa cccctctcac tttcggcggt 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 138
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 138
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asn Ile Asn Ser His
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Leu Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Ile Tyr Ile Cys Gln Gln Thr Tyr Ile Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 139
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 139
cagaacatta acagtcat 18
<210> 140
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 140
Gln Asn Ile Asn Ser His
1 5
<210> 141
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 141
actgcatcc 9
<210> 142
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 142
Thr Ala Ser
1
<210> 143
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 143
caacagactt acataacccc tctcact 27
<210> 144
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 144
Gln Gln Thr Tyr Ile Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 145
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 145
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga cttgtgaagt cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gcctggaatg gattggattt atctattaca gtgggagcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccttttca gtagacactt ccaaaaacca cttctccctg 240
aagctgaact ctgtgaccgc cacagacacg gccgtgtatt actgtgcgcg acattacttt 300
gattcgggga cttatgaact ggggcctttt gactactggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 146
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 146
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Ser Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Phe Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn His Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Thr Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg His Tyr Phe Asp Ser Gly Thr Tyr Glu Leu Gly Pro Phe Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 147
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 147
ggtggctcca tcagtagtta ctac 24
<210> 148
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 148
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 149
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 149
atctattaca gtgggagcac c 21
<210> 150
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 150
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 151
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 151
gcgcgacatt actttgattc ggggacttat gaactggggc cttttgacta c 51
<210> 152
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 152
Ala Arg His Tyr Phe Asp Ser Gly Thr Tyr Glu Leu Gly Pro Phe Asp
1 5 10 15
Tyr
<210> 153
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 153
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gaatatttta ttaacttcca gtaataagaa ctacttaact 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc atctattcgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca ctttatttct gtcagcaata ttatattact 300
ccattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa 339
<210> 154
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 154
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Asn Ile Leu Leu Thr
20 25 30
Ser Ser Asn Lys Asn Tyr Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Ile Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Leu Tyr Phe Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ile Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
Lys
<210> 155
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 155
cagaatattt tattaacttc cagtaataag aactac 36
<210> 156
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 156
Gln Asn Ile Leu Leu Thr Ser Ser Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 157
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 157
tgggcatct 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 158
Trp Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 159
cagcaatatt atattactcc attcact 27
<210> 160
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 160
Gln Gln Tyr Tyr Ile Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 161
<211> 372
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 161
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt gattactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gattggccat atctattaca gtgggagcac caaccacaac 180
ccctccctca agagtcgagt cgccatatca gtcgacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aggctgtact ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgtgcgag agacgggtat 300
agtagctcgt ccggcttcta ctacttcggt atggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360
accgtctcct ca 372
<210> 162
<211> 124
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 162
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Asp Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly His Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn His Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Ala Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Arg Leu Tyr Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asp Gly Tyr Ser Ser Ser Ser Gly Phe Tyr Tyr Phe Gly Met Asp
100 105 110
Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 163
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 163
ggtggctcca tcagtgatta ctac 24
<210> 164
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 164
Gly Gly Ser Ile Ser Asp Tyr Tyr
1 5
<210> 165
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 165
atctattaca gtgggagcac c 21
<210> 166
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 166
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 167
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 167
gcgagagacg ggtatagtag ctcgtccggc ttctactact tcggtatgga cgtc 54
<210> 168
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 168
Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Ser Ser Ser Gly Phe Tyr Tyr Phe Gly Met
1 5 10 15
Asp Val
<210> 169
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 169
gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtcggaga cagagtcacc 60
atcacttgct gggccagtca ggacattaac agttatttag cctggtatca gcaaaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctttgct gcatccactt tgcaaggtgg ggtcccttct 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcaacac cttagtagtt tccctcccac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a 321
<210> 170
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 170
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Ala Ala Ser Thr Leu Gln Gly Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Leu Ser Ser Phe Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 171
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 171
caggacatta acagttat 18
<210> 172
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 172
Gln Asp Ile Asn Ser Tyr
1 5
<210> 173
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 173
gctgcatcc 9
<210> 174
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 174
Ala Ala Ser
1
<210> 175
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 175
caacacctta gtagtttccc tcccacc 27
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 176
Gln His Leu Ser Ser Phe Pro Pro Thr
1 5
<210> 177
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 177
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaggc cttcggagac cctatccctc 60
atctgcactg tctctggtgg ctccatcaat agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggaatg gattggatat atctattaca gtgggagcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca ggagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagct ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtgtatt actgcgcgag aggggtaatc 300
tggaactacg aactccgaga atttgactac tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 178
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 178
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Ile Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Gly Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Val Ile Trp Asn Tyr Glu Leu Arg Glu Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 179
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 179
ggtggctcca tcaatagtta ctac 24
<210> 180
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 180
Gly Gly Ser Ile Asn Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 181
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 181
atctattaca gtgggagcac c 21
<210> 182
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 182
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 183
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 183
gcgagagggg taatctggaa ctacgaactc cgagaatttg actac 45
<210> 184
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 184
Ala Arg Gly Val Ile Trp Asn Tyr Glu Leu Arg Glu Phe Asp Tyr
1 5 10 15
<210> 185
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 185
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gagtgtttta gacagttcca acaataagaa ctacttagtt 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct gagctgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttattttact 300
ccgctcacct tcggcggagg gaccaaggtg gagatcaaa 339
<210> 186
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 186
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Glu Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Phe Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 187
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 187
cagagtgttt tagacagttc caacaataag aactac 36
<210> 188
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 188
Gln Ser Val Leu Asp Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 189
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 189
tgggcatct 9
<210> 190
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 190
Trp Ala Ser
1
<210> 191
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 191
cagcaatatt attttactcc gctcacc 27
<210> 192
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 192
Gln Gln Tyr Tyr Phe Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 193
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 193
cagctgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaggc cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcagtg tctcgagtgg ctccatcaga agtagtaatt actactgggg ctggatccgc 120
cagcccccag ggaagggact ggagtggatt gggaatatct attatagtgg gaacaccttc 180
tataacccgt ccctcaaggg tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240
tccctgaagc tgagctctgt gaccgccaca gacacggctg tgtattactg tgcgagacaa 300
ggatatagtg actacgagtt gaactggttc gacccctggg gccagggaac cctggtcacc 360
gtctcctca 369
<210> 194
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 194
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Arg Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Val Ser Ser Gly Ser Ile Arg Ser Ser
20 25 30
Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly Asn Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr Phe Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Gly Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Thr Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gln Gly Tyr Ser Asp Tyr Glu Leu Asn Trp Phe Asp Pro
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 195
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 195
agtggctcca tcagaagtag taattactac 30
<210> 196
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 196
Ser Gly Ser Ile Arg Ser Ser Asn Tyr Tyr
1 5 10
<210> 197
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 197
atctattata gtgggaacac c 21
<210> 198
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 198
Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr
1 5
<210> 199
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 199
gcgagacaag gatatagtga ctacgagttg aactggttcg acccc 45
<210> 200
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 200
Ala Arg Gln Gly Tyr Ser Asp Tyr Glu Leu Asn Trp Phe Asp Pro
1 5 10 15
<210> 201
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 201
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggtgctgt ctctgggcga gagggccacc 60
ttcaactgca agtccagcca gagtgtttta gacagttcca acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagttgctca tttactgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt ctctctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca ctttattact gtcaacaatt ttataatagt 300
ccgtggacgt tcggccaagg gaccaaggtg gaaatcaaa 339
<210> 202
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 202
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Val Leu Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Phe Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Asp Ser
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Phe Tyr Asn Ser Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 203
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 203
cagagtgttt tagacagttc caacaataag aactac 36
<210> 204
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 204
Gln Ser Val Leu Asp Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 205
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 205
tgggcatct 9
<210> 206
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 206
Trp Ala Ser
1
<210> 207
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 207
caacaatttt ataatagtcc gtggacg 27
<210> 208
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 208
Gln Gln Phe Tyr Asn Ser Pro Trp Thr
1 5
<210> 209
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 209
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccaggg ctggtgaagc cctcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcaat agttattctt ggacctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggaatg gattggaaat atctataata gtgagaatac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatatca gttgacacgt ccaagagtca ggtttccctg 240
aaactgaact ctgtgaccgc tgcggacacg gccgtatatt actgtgcgag aacatataac 300
tggaactacg aaataggggc catgggcgtc tggggccagg ggaccacggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 210
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 210
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Asn Ser Tyr
20 25 30
Ser Trp Thr Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Asn Ile Tyr Asn Ser Glu Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Ser Gln Val Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Thr Tyr Asn Trp Asn Tyr Glu Ile Gly Ala Met Gly Val Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 211
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 211
ggtggctcca tcaatagtta ttct 24
<210> 212
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 212
Gly Gly Ser Ile Asn Ser Tyr Ser
1 5
<210> 213
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 213
atctataata gtgagaatac c 21
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 214
Ile Tyr Asn Ser Glu Asn Thr
1 5
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<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 215
gcgagaacat ataactggaa ctacgaaata ggggccatgg gcgtc 45
<210> 216
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 216
Ala Arg Thr Tyr Asn Trp Asn Tyr Glu Ile Gly Ala Met Gly Val
1 5 10 15
<210> 217
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 217
gacatcgtga tgacccagtt tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcaactgca agtccagcca gaatgtttta atcacctcca acaataagaa ttatttagct 120
tggtaccagc agaaaccagg acagcctcct aagctgctca tttactgggc ttccacccgg 180
gaattcgggg tccctgcccg attcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcagcaata ttatagtact 300
ccattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa 339
<210> 218
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 218
Asp Ile Val Met Thr Gln Phe Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Asn Val Leu Ile Thr
20 25 30
Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Phe Gly Val
50 55 60
Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
Lys
<210> 219
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 219
cagaatgttt taatcacctc caacaataag aattat 36
<210> 220
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 220
Gln Asn Val Leu Ile Thr Ser Asn Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 221
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
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tgggcttcc 9
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<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 222
Trp Ala Ser
1
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 223
cagcaatatt atagtactcc attcact 27
<210> 224
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 224
Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 225
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 225
caggttcagc tggtgcagtc tggagctgag gtgaagaagc ctgggacctc agtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggtta cacctttacc aactatggta tcagttgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag gtcttgagtg gttgggatgg atcagcgctt ataatgataa cacagactat 180
gcacagaaac tccaggccag agtcaccatg accacagaca cattcacgag cacagcctac 240
atggacctga ggagcctgag atctgacgac acggccgtgt attactgtgc gagagttcct 300
ataactggaa ctacctcaag ttttgacttc tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc 360
tca 363
<210> 226
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 226
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Asp Asn Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Ala Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Phe Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Pro Ile Thr Gly Thr Thr Ser Ser Phe Asp Phe Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 227
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 227
ggttacacct ttaccaacta tggt 24
<210> 228
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 228
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly
1 5
<210> 229
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 229
atcagcgctt ataatgataa caca 24
<210> 230
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 230
Ile Ser Ala Tyr Asn Asp Asn Thr
1 5
<210> 231
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 231
gcgagagttc ctataactgg aactacctca agttttgact tc 42
<210> 232
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 232
Ala Arg Val Pro Ile Thr Gly Thr Thr Ser Ser Phe Asp Phe
1 5 10
<210> 233
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 233
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atctcttgcc gggcaagtca gaccatttac agctatttaa attggtttca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctatgat gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagtg gcagtggctc tgggacacat ttcactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaggattttg caacttactt ctgccaacag acttacagta cccctctcac tttcggcgga 300
gggaccaagg tggagatcaa a 321
<210> 234
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 234
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Thr Ile Tyr Ser Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr His Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 235
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 235
cagaccattt acagctat 18
<210> 236
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 236
Gln Thr Ile Tyr Ser Tyr
1 5
<210> 237
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 237
gatgcatcc 9
<210> 238
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 238
Asp Ala Ser
1
<210> 239
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 239
caacagactt acagtacccc tctcact 27
<210> 240
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 240
Gln Gln Thr Tyr Ser Thr Pro Leu Thr
1 5
<210> 241
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 241
caggtgcagc tgcaggagtc gggcccagga ctggtgaaac cttcggagac cctgtccctc 60
acctgcactg tctctggtgg ctccatcagt agttactact ggagctggat ccggcagccc 120
ccagggaagg gactggagtg gattggcttt atctattaca gtgggagcac caactacaac 180
ccctccctca agagtcgagt caccatctca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240
aagctgagtt ctgtgaccgc cgcagacacg gccgtgtatt actgtgcgag acatgacagt 300
gactacgaac tctacggtat ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcac cgtctcctca 360
<210> 242
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 242
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr
20 25 30
Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg His Asp Ser Asp Tyr Glu Leu Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 243
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 243
ggtggctcca tcagtagtta ctac 24
<210> 244
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 244
Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 245
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 245
atctattaca gtgggagcac c 21
<210> 246
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 246
Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 247
<211> 42
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 247
gcgagacatg acagtgacta cgaactctac ggtatggacg tc 42
<210> 248
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 248
Ala Arg His Asp Ser Asp Tyr Glu Leu Tyr Gly Met Asp Val
1 5 10
<210> 249
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 249
gacatcgtga tgacccagtc tccagactcc ctggctgtgt ctctgggcga gagggccacc 60
atcacctgca agtccagcca gagtatttta tacaactccg acaataagaa ctacttagct 120
tggtaccagc agaaatcagg acagcctcct aagctgctca tttcctgggc atctacccgg 180
gaatccgggg tccctgaccg tttcagtggc agcgggtctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagcc tgcaggctga agatgtggca gtttattact gtcaacaata tttttttact 300
ccattcactt tcggccctgg gaccaaagtg gatatcaaa 339
<210> 250
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 250
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Ile Leu Tyr Asn
20 25 30
Ser Asp Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Ser Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Phe Phe Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile
100 105 110
Lys
<210> 251
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 251
cagagtattt tatacaactc cgacaataag aactac 36
<210> 252
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 252
Gln Ser Ile Leu Tyr Asn Ser Asp Asn Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 253
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 253
tgggcatct 9
<210> 254
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 254
Trp Ala Ser
1
<210> 255
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 255
caacaatatt tttttactcc attcact 27
<210> 256
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 256
Gln Gln Tyr Phe Phe Thr Pro Phe Thr
1 5
<210> 257
<211> 363
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 257
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt aactacgaca tacactgggt ccgccaagtt 120
ccaggaaaag gtctggagtg gatctcaact attggttctg ctggtgatac attctatcca 180
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caaatgaaca gcctgagagc cggggactcg gctgtatatt actgtgcaag aggggataac 300
tggaactacg tttcatggtt cttcgatctc tggggccgtg gcaccctggt cactgtctcc 360
tca 363
<210> 258
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 258
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Asp Ile His Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Ser Thr Ile Gly Ser Ala Gly Asp Thr Phe Tyr Pro Gly Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Glu Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Gly Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Asp Asn Trp Asn Tyr Val Ser Trp Phe Phe Asp Leu Trp Gly
100 105 110
Arg Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 259
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 259
ggattcacct tcagtaacta cgac 24
<210> 260
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 260
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Asp
1 5
<210> 261
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 261
attggttctg ctggtgatac a 21
<210> 262
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 262
Ile Gly Ser Ala Gly Asp Thr
1 5
<210> 263
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 263
gcaagagggg ataactggaa ctacgtttca tggttcttcg atctc 45
<210> 264
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 264
Ala Arg Gly Asp Asn Trp Asn Tyr Val Ser Trp Phe Phe Asp Leu
1 5 10 15
<210> 265
<211> 321
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 265
gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctacat ctgtcggaga cagagtcacc 60
atcacgtgct gggccagtca ggacatcagc agttttttag cctggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaaactcct gatctatgct gcgtccgttt tgcaaagtgg ggtcccatca 180
aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag tctgcagcct 240
gaagattttg caacttatta ctgtcagcag gttaatagtt acccgatcac cttcggccaa 300
gggacacgac tggagattaa a 321
<210> 266
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 266
Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Phe
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Val Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Asn Ser Tyr Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 267
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 267
caggacatca gcagtttt 18
<210> 268
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 268
Gln Asp Ile Ser Ser Phe
1 5
<210> 269
<211> 9
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 269
gctgcgtcc 9
<210> 270
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 270
Ala Ala Ser
1
<210> 271
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 271
cagcaggtta atagttaccc gatcacc 27
<210> 272
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的
<400> 272
Gln Gln Val Asn Ser Tyr Pro Ile Thr
1 5
<210> 273
<211> 173
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hIL-25-MMH
aa 1-145: hIL-25 (NP_073626.1的aa 33-177)
aa 146-173: myc-myc-六组氨酸 标签
<400> 273
Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys Gly Gln Asp Thr Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val Pro Pro Leu Glu Pro
20 25 30
Ala Arg Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asp Gly
35 40 45
Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Glu Leu Asp Arg
50 55 60
Asp Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys
65 70 75 80
Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His Met Asp Pro Arg Gly
85 90 95
Asn Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro
100 105 110
Cys His Gly Glu Lys Gly Thr His Lys Gly Tyr Cys Leu Glu Arg Arg
115 120 125
Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met
130 135 140
Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Gly Gly Glu Gln Lys
145 150 155 160
Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His His His
165 170
<210> 274
<211> 172
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> MfIL-25-MMH
aa 1-144: 食蟹猴IL-25 (XP_001107906.2的aa 33-176)
aa 145-172: myc-myc-六组氨酸 标签
<400> 274
Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys Gly Tyr Pro Ser Glu
1 5 10 15
Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val Pro Pro Leu Lys Pro Ala
20 25 30
Ser Leu Asp Phe His Ser Val Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asp Gly Pro
35 40 45
Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Glu Leu Asp Arg Asp
50 55 60
Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys Pro
65 70 75 80
His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His Met Asp Pro Arg Gly Asn
85 90 95
Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro Cys
100 105 110
His Gly Lys Lys Gly Asn His Lys Gly Tyr Cys Leu Glu Arg Arg Leu
115 120 125
Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met Gly
130 135 140
Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu Gly Gly Glu Gln Lys Leu
145 150 155 160
Ile Ser Glu Glu Asp Leu His His His His His His
165 170
<210> 275
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 小鼠IL-25-MMH
aa 1-153: 小鼠IL-25 (NP_542767.1的aa 17-169)
aa 154-181: myc-myc-六组氨酸 标签
<400> 275
Val Ser Leu Arg Ile Gln Glu Gly Cys Ser His Leu Pro Ser Cys Cys
1 5 10 15
Pro Ser Lys Glu Gln Glu Pro Pro Glu Glu Trp Leu Lys Trp Ser Ser
20 25 30
Ala Ser Val Ser Pro Pro Glu Pro Leu Ser His Thr His His Ala Glu
35 40 45
Ser Cys Arg Ala Ser Lys Asp Gly Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser
50 55 60
Pro Trp Ser Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Val Pro Gln Asp
65 70 75 80
Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr
85 90 95
Gly Ser His Met Asp Pro Leu Gly Asn Ser Val Pro Leu Tyr His Asn
100 105 110
Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro Cys His Gly Glu Glu Gly Thr His
115 120 125
Arg Arg Tyr Cys Leu Glu Arg Arg Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys
130 135 140
Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu
145 150 155 160
Glu Asp Leu Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His
165 170 175
His His His His His
180
<210> 276
<211> 181
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 大鼠IL-25-MMH
aa 1-153: 大鼠IL-25 (NP_001178936.1的aa 17-169)
aa 154-181: myc-myc-六组氨酸 标签
<400> 276
Val Ser Leu Arg Ile Gln Glu Asp Cys Ser His Leu Pro Arg Cys Cys
1 5 10 15
Pro Ser Lys Gln Gln Glu Phe Pro Glu Glu Trp Leu Lys Trp Asn Pro
20 25 30
Ala Pro Val Ser Pro Pro Glu Pro Leu Arg His Thr His His Pro Glu
35 40 45
Ser Cys Arg Ala Ser Lys Asp Gly Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser
50 55 60
Pro Trp Ser Tyr Glu Leu Asp Arg Asp Leu Asn Arg Val Pro Gln Asp
65 70 75 80
Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr
85 90 95
Gly Ser His Met Asp Pro Met Gly Asn Ser Val Pro Leu Tyr His Asn
100 105 110
Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro Cys His Gly Glu Gln Gly Ala His
115 120 125
Gly Arg Tyr Cys Leu Glu Arg Arg Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys
130 135 140
Val Cys Val Arg Pro Arg Met Met Ala Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu
145 150 155 160
Glu Asp Leu Gly Gly Glu Gln Lys Leu Ile Ser Glu Glu Asp Leu His
165 170 175
His His His His His
180
<210> 277
<211> 1335
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IL-25 (NM_022789.3)
<400> 277
ggcttgctga aaataaaatc aggactccta acctgctcca gtcagcctgc ttccacgagg 60
cctgtcagtc agtgccccac ttgtgactga gtgtgcagtg cccagcatgt accaggtcag 120
tgcagagggc tgcctgaggg ctgtgctgag agggagagga gcagagatgc tgctgagggt 180
ggagggaggc caagctgcca ggtttggggc tgggggccaa gtggagtgag aaactgggat 240
cccaggggga gggtgcagat gagggagcga cccagattag gtgaggacag ttctctcatt 300
agccttttcc tacaggtggt tgcattcttg gcaatggtca tgggaaccca cacctacagc 360
cactggccca gctgctgccc cagcaaaggg caggacacct ctgaggagct gctgaggtgg 420
agcactgtgc ctgtgcctcc cctagagcct gctaggccca accgccaccc agagtcctgt 480
agggccagtg aagatggacc cctcaacagc agggccatct ccccctggag atatgagttg 540
gacagagact tgaaccggct cccccaggac ctgtaccacg cccgttgcct gtgcccgcac 600
tgcgtcagcc tacagacagg ctcccacatg gacccccggg gcaactcgga gctgctctac 660
cacaaccaga ctgtcttcta ccggcggcca tgccatggcg agaagggcac ccacaagggc 720
tactgcctgg agcgcaggct gtaccgtgtt tccttagctt gtgtgtgtgt gcggccccgt 780
gtgatgggct agccggacct gctggaggct ggtccctttt tgggaaacct ggagccaggt 840
gtacaaccac ttgccatgaa gggccaggat gcccagatgc ttggcccctg tgaagtgctg 900
tctggagcag caggatcccg ggacaggatg gggggctttg gggaaagcct gcacttctgc 960
acattttgaa aagagcagct gctgcttagg gccgccggaa gctggtgtcc tgtcattttc 1020
tctcaggaaa ggttttcaaa gttctgccca tttctggagg ccaccactcc tgtctcttcc 1080
tcttttccca tcccctgcta ccctggccca gcacaggcac tttctagata tttccccctt 1140
gctggagaag aaagagcccc tggttttatt tgtttgttta ctcatcactc agtgagcatc 1200
tactttgggt gcattctagt gtagttacta gtcttttgac atggatgatt ctgaggagga 1260
agctgttatt gaatgtatag agatttatcc aaataaatat ctttatttaa aaatgaaaaa 1320
aaaaaaaaaa aaaaa 1335
<210> 278
<211> 177
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IL-25
<400> 278
Met Arg Glu Arg Pro Arg Leu Gly Glu Asp Ser Ser Leu Ile Ser Leu
1 5 10 15
Phe Leu Gln Val Val Ala Phe Leu Ala Met Val Met Gly Thr His Thr
20 25 30
Tyr Ser His Trp Pro Ser Cys Cys Pro Ser Lys Gly Gln Asp Thr Ser
35 40 45
Glu Glu Leu Leu Arg Trp Ser Thr Val Pro Val Pro Pro Leu Glu Pro
50 55 60
Ala Arg Pro Asn Arg His Pro Glu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Asp Gly
65 70 75 80
Pro Leu Asn Ser Arg Ala Ile Ser Pro Trp Arg Tyr Glu Leu Asp Arg
85 90 95
Asp Leu Asn Arg Leu Pro Gln Asp Leu Tyr His Ala Arg Cys Leu Cys
100 105 110
Pro His Cys Val Ser Leu Gln Thr Gly Ser His Met Asp Pro Arg Gly
115 120 125
Asn Ser Glu Leu Leu Tyr His Asn Gln Thr Val Phe Tyr Arg Arg Pro
130 135 140
Cys His Gly Glu Lys Gly Thr His Lys Gly Tyr Cys Leu Glu Arg Arg
145 150 155 160
Leu Tyr Arg Val Ser Leu Ala Cys Val Cys Val Arg Pro Arg Val Met
165 170 175
Gly

Claims (42)

1.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人白介素-25(IL-25)特异性结合，其中所述抗体或其抗原结合片段显示出两个或多个下述特征：
(a)是全人源单克隆抗体；
(b)根据表面等离子体共振测定在25℃时以小于约120pM的KD与人IL-25结合；
(c)根据表面等离子体共振测定在25℃时以大于约105分钟的解离半衰期(t1/2)与人IL-25结合；
(d)以小于约2nM的IC50阻断在工程化以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中的人IL-25信号传导；
(e)以小于约16nM的IC50阻断在人外周血单核细胞(PBMC)中的人IL-25信号传导；
(f)在过表达IL-25的哺乳动物中降低循环和/或肺IgE水平；
(g)在过表达IL-25的哺乳动物中减少杯状细胞化生；
(h)包含三个重链互补性决定区(HCDR)，所述重链互补性决定区包含在含有表1中所示的氨基酸序列的重链可变区(HCVR)中；或者
(i)包含三个轻链互补性决定区(LCDR)，所述轻链互补性决定区包含在含有表1中所示的氨基酸序列的轻链可变区(LCVR)中。
2.根据权利要求1所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中根据表面等离子体共振测定在25℃或37℃时所述抗体或其抗原结合片段以小于约100pM的KD与人IL-25结合。
3.根据权利要求1或2所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中根据表面等离子体共振测定在25℃或37℃时所述抗体或其抗原结合片段以小于约60pM的KD与人IL-25结合。
4.根据权利要求1-3中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中根据表面等离子体共振测定在25℃或37℃时所述抗体或其抗原结合片段以小于约40pM的KD与人IL-25结合。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中根据表面等离子体共振测定在25℃或37℃时所述抗体或其抗原结合片段以小于约20pM的KD与人IL-25结合。
6.根据权利要求1-5中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中根据表面等离子体共振测定在25℃时所述抗体或其抗原结合片段以大于约150分钟的t1/2与人IL-25结合。
7.根据权利要求1-6中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中根据表面等离子体共振测定在25℃时所述抗体或其抗原结合片段以大于约200分钟的t1/2与人IL-25结合。
8.根据权利要求1-7中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中根据表面等离子体共振测定在25℃时所述抗体或其抗原结合片段以大于约250分钟的t1/2与人IL-25结合。
9.根据权利要求1-8中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中根据表面等离子体共振测定在25℃时所述抗体或其抗原结合片段以大于约400分钟的t1/2与人IL-25结合。
10.根据权利要求1-9中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于约720pM的IC50阻断在工程化以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中的人IL-25信号传导。
11.根据权利要求1-10中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于约500pM的IC50阻断在工程化以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中的人IL-25信号传导。
12.根据权利要求1-11中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于约100pM的IC50阻断在工程化以表达IL-25受体(IL-17RA/IL-17RB)的细胞中的人IL-25信号传导。
13.根据权利要求1-12中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于约2.0nM的IC50阻断在人PBMC中的人IL-25信号传导。
14.根据权利要求1-13中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以小于约700pM的IC50阻断在人PBMC中的人IL-25信号传导。
15.根据权利要求1-14中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段以范围从约30pM至约150pM的IC50阻断在人PBMC中的人IL-25信号传导。
16.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人白介素-25(IL-25)结合，其中所述抗体或其抗原结合片段与参照抗体竞争结合人IL-25，所述参照抗体包含表1中所示的重链可变区/轻链可变区(HCVR/LCVR)氨基酸序列对。
17.根据权利要求16所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述参照抗体包含选自下组的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。
18.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人白介素-25(IL-25)结合，其中所述抗体或其抗原结合片段与参照抗体结合至人IL-25上的相同表位，所述参照抗体包含表1中所示的重链可变区/轻链可变区(HCVR/LCVR)氨基酸序列对。
19.根据权利要求18所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述参照抗体包含选自下组的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。
20.根据权利要求19所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述参照抗体包含选自下组的HCVR/LCVR氨基酸序列对：SEQ ID NO：98/106、114/122、130/138和178/186。
21.一种分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段与人白介素-25(IL-25)结合，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)重链可变区(HCVR)的互补性决定区(CDR)，所述重链可变区包含表1中所示的氨基酸序列；以及(b)轻链可变区(LCVR)的CDR，所述轻链可变区具有表1中所示的氨基酸序列。
22.根据权利要求1-15或21中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)HCVR的CDR，所述HCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242和258；以及(b)LCVR的CDR，所述LCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和266。
23.根据权利要求1-15或21-22中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：(a)HCVR的CDR，所述HCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：98、114、130和178；以及(b)LCVR的CDR，所述LCVR具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：106、122、138和186。
24.根据权利要求1-15或21-23中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含：HCVR/LCVR的CDR，所述HCVR/LCVR的氨基酸序列对选自下组：SEQ ID NO：98/106、114/122、130/138和178/186。
25.根据权利要求1-15或21-24中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCVR氨基酸序列，所述HCVR氨基酸序列选自下组：SEQID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242和258。
26.根据权利要求1-15或21-25中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含LCVR氨基酸序列，所述LCVR氨基酸序列选自下组：SEQID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和266。
27.根据权利要求1-15或21-26中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCVR氨基酸序列，所述HCVR氨基酸序列选自下组：SEQID NO：2、18、34、50、66、82、98、114、130、146、162、178、194、210、226、242和258；和LCVR氨基酸序列，所述LCVR氨基酸序列选自下组：SEQ ID NO：10、26、42、58、74、90、106、122、138、154、170、186、202、218、234、250和266。
28.根据权利要求1-15或21-27中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含HCVR/LCVR氨基酸序列对，所述HCVR/LCVR氨基酸序列对选自下组：SEQ ID NO：2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、226/234、242/250和258/266。
29.根据权利要求1-15或21-28中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)HCDR1结构域，所述HCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：4、20、36、52、68、84、100、116、132、148、164、180、196、212、228、244和260；
(b)HCDR2结构域，所述HCDR2结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：6、22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、198、214、230、246和262；
(c)HCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：8、24、40、56、72、88、104、120、136、152、168、184、200、216、232、248和264；
(d)LCDR1结构域，所述LCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：12、28、44、60、76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、236、252和268；
(e)LCDR2结构域，所述LCDR2结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：14、30、46、62、78、94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、254和270；以及
(f)LCDR3结构域，所述LCDR3结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、192、208、224、240、256和272。
30.根据权利要求1-15或21-29中任意一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：
(a)HCDR1结构域，所述HCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：100、116、132和180；
(b)HCDR2结构域，所述HCDR2结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：102、118、134和182；
(c)HCDR3结构域，所述HCDR3结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：104、120、136和184；
(d)LCDR1结构域，所述LCDR1结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：108、124、160和188；
(e)LCDR2结构域，所述LCDR2结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：110、126、142和190；以及
(f)LCDR3结构域，所述LCDR3结构域具有选自下组的氨基酸序列：SEQ ID NO：112、128、144和192。
31.根据权利要求1-15或21-30中任意一项所述的分离的抗体或抗原结合片段，其中所述分离的抗体或其抗原结合片段包含选自下组的一组6个CDR：(a)SEQ ID NO：100、102、104、108、110、112；(b)SEQ ID NO：116、118、120、124、126、128；(c)SEQ ID NO：132、134、136、140、142、144；以及(d)SEQ ID NO：180、182、184、188、190、192。
32.一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1-15或21-31中任意一项所述的抗体或抗原结合片段和药学上可接受的载体或稀释剂。
33.一种用于治疗与白介素-25(IL-25)的活性或表达相关的疾病或病症的方法，所述方法包括向需要此类治疗的对象施用权利要求32所述的药物组合物。
34.根据权利要求33所述的方法，其中所述疾病或病症选自下组：哮喘、过敏、过敏性鼻炎、过敏性气道炎症、慢性阻塞性肺疾病(COPD)、嗜酸性粒细胞性肺炎、嗜酸性粒细胞性食道炎、嗜酸性粒细胞增多综合征、移植物抗宿主病、特应性皮炎(AD)、银屑病、炎性肠病(IBD)、关节炎、葡萄膜炎、心血管疾病、疼痛、多发性硬化、狼疮、血管炎、慢性特发性荨麻疹以及嗜酸性肉芽肿性多血管炎(Churg-Strauss综合征)。
35.根据权利要求34所述的方法，其中所述哮喘选自下组：过敏性哮喘、非过敏性哮喘、严重顽固性哮喘、哮喘恶化、病毒诱导的哮喘或病毒诱导的哮喘恶化、类固醇抵抗性哮喘、类固醇敏感性哮喘、嗜酸性粒细胞性哮喘或非嗜酸性粒细胞性哮喘以及以气道炎症或气道高反应性(AHR)为特征的其他相关病症。
36.根据权利要求34所述的方法，其中所述COPD是部分地与香烟烟雾、空气污染、职业性化学品、过敏或气道高反应性相关或由香烟烟雾、空气污染、职业性化学品、过敏或气道高反应性引起的疾病或病症。
37.根据权利要求34所述的方法，其中所述AD部分地与表皮屏障功能障碍、过敏或辐射暴露相关或由表皮屏障功能障碍、过敏或辐射暴露引起。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述过敏是对食物、花粉、霉菌、尘螨、动物或动物皮屑过敏。
39.根据权利要求34所述的方法，其中所述IBD选自下组：溃疡性结肠炎、克隆氏病、胶原性结肠炎、淋巴细胞性结肠炎、缺血性结肠炎、转流性结肠炎、白塞氏综合征、感染性结肠炎、未定型结肠炎以及以大肠或结肠的粘膜层炎症为特征的其他病症。
40.根据权利要求34所述的方法，其中所述关节炎选自下组：骨关节炎、类风湿性关节炎和银屑病性关节炎。
41.根据权利要求33所述的方法，其中向所述患者施用的所述药物组合物与第二治疗剂联用。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述第二治疗剂选自下组：非甾体抗炎药(NSAID)、类固醇、皮质类固醇(吸入或局部)、免疫抑制剂(例如环磷酰胺)、抗胆碱能药(例如噻托铵)、毒蕈碱剂(例如格隆铵)、磷酸二酯酶抑制剂(例如茶碱、罗氟司特、西洛司特)、β阻断剂、环孢菌素、他克莫司、吡美莫司、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、色甘酸钠、蛋白酶抑制剂、支气管扩张剂、β-2-激动剂、抗组胺剂、肾上腺素、减充血剂、白三烯抑制剂、肥大细胞抑制剂，胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)拮抗剂、TNF拮抗剂、IgE拮抗剂、IL-1拮抗剂、IL-4或IL-4R拮抗剂、IL-13或IL-13R拮抗剂、IL-4/IL-13双重拮抗剂、IL-5拮抗剂、IL-6或IL-6R拮抗剂、IL-8拮抗剂、IL-9拮抗剂、IL-12/23拮抗剂、IL-22拮抗剂、IL-17拮抗剂、IL-31拮抗剂、IL-33拮抗剂、口服PDE4抑制剂以及IL-25的不同抗体。
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