CN101795708A

CN101795708A - 利用pcv2抗原减少猪的伴随感染

Info

Publication number: CN101795708A
Application number: CN200880105658A
Authority: CN
Inventors: 维基·法钦格; 克努特·埃尔伯斯; 玛丽昂·基克斯莫勒
Original assignee: Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
Priority date: 2007-09-04
Filing date: 2008-09-02
Publication date: 2010-08-04
Anticipated expiration: 2028-09-02
Also published as: SI2197486T1; CN101795708B; MX2010002435A; DK2197486T3; BRPI0816919A2; CA2698301C; AU2008294753A1; US9132186B2; EP2197486A2; US7829274B2; EP2197486B1; PT2197486E; TW200911284A; WO2009030684A3; PL2197486T3; CA2698301A1; US20110052629A1; AU2008294753B2; TWI458491B; RU2010112939A

Abstract

本发明涉及一种减少猪只或猪群由除PCV2以外的病原体所引起伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤。本发明亦关于一种改善猪只对除PCV2以外的病原体伴随感染之抗性的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原的免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤。

Description

利用PCV2抗原减少猪的伴随感染

序列表

本申请包括纸件和计算机可读格式的序列表，其中之教示及内容以引用方式并入本文中。该序列表与并入WO 06/072065中之序列表相同。

发明背景

发明领域

本发明涉及兽医学领域，尤其涉及感染性疾病。此外，本发明涉及一种减少猪只由除PCV2以外的病原体所引起之伴随感染(concomitantinfection)的方法。

背景

1996年，一种称为″离乳后仔猪多系统消耗症候群″(PostweaningMultisystemic Wasting Syndrome，PMWS)之新出现的疾病描述于参考文献中，比在加拿大(Canada)所观测到之病例早五年(Clark T.Pathology of thePostweaning Multisystemic Wasting Syndrome of Pigs.1996第22-5页)。2型猪环状病毒(Porcine cirocvirus type 2，PCV2)已鉴定为此疾病症候群之主要病原体。PMWS当时已在世间实际上所有的产猪区域中皆可观测到(BrunborgIM，Moldal T，Jonassen CM.J Virol Methods 2004年12月15日；122(2)：171-8)。5周龄至15周龄之猪只最常被感染(Allan G，McNeilly F.PMWS/PCVD：Diagnosis，Disease and Control：What do we know？2006年7月16日-2006年7月19日；2006；Allan GM等人，Vet Microbiol 2004年2月4日；98(2)：165-8；ChaeC.Vet J 2004年7月；168(1)：41-9)。临床病征包括死亡率之明显增加、消瘦、全身淋巴结肿大、呼吸系统病征及偶发苍白、黄疸及腹泻(Chae C.Vet J 2005年5月；169(3)：326-36；Segales J.等人，Vet Microbiol 2004年2月4日；98(2)：151-8)。该等临床病征在单一PMWS感染之猪群中不能全部看到，但临床病征之表现似乎与优先靶向不同器官系统之农场特异性共感染病原体间接相关(Krakowka S.等人，Vet Pathol 2001年1月；38(1)：31-42)。流行病学调查已表明，最常与该疾病症候群组合出现的为猪繁殖及呼吸症候群病毒(PRRSV)、猪流感病毒(SIV)、猪细小病毒(PPV)、猪副嗜血杆菌(Haemophilusparasuis)、胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae；APP)、猪链球菌(Streptococcus suis)及猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)(ChaeC.Vet J，2004年7月；168(1)：41-9)。

对于PMWS之产生，已假设免疫系统之激活为关键性事件(Krakowka S.等人，Vet Pathol 2001年1月；38(1)：31-42)。虽然实验上用PCV2单独接种仅产生临床上无症状之感染及极有限的炎症组织学证据，但PCV2与PPV或PRRSV之双重感染引起更严重的临床病征、肉眼可见病变及组织病变、感染组织内更广扩散及更高之PCV2病毒负荷。由于单独PRRSV或PPV感染不会引起可比较的临床病征或病变，因此该等发现似乎主要由PCV2引起(Allan等人，J Comp Pathol 1999年7月；121(1)：1-11；Allan GM等人，Arch Virol2000；145(11)：2421-9；Harms PA等人，Vet Pathol 2001年9月；38(5)：528-39；Krakowka S等人，Vet Pathol 2000年5月；37(3)：254-63；Ostanello F等人，Vet Microbiol 2005年7月1日；108(3-4)：179-86；Rovira A等人，J Virol 2002年4月；76(7)：3232-9)。此外，若用不完全弗氏佐剂(incomplete Freund′sadjuvant)中之匙孔血蓝蛋白(KLH/ICFA)免疫刺激猪只，则在其它共感染原不存在的情况下亦可达成疾病严重程度之类似增大(Krakowka S.等人，VetPathol 2001年1月；38(1)：31-42)。

PCV2对猪只免疫系统的影响尚未完全得知。已报导，PCV2复制之主要靶细胞为单核细胞/巨噬细胞系，以及其它抗原呈递细胞，诸如滤泡树突状细胞(Darwich L等人，Arch Virol 2004年5月；149(5)：857-74)。若干研究提出，PCV2感染正在分裂的细胞、巨噬细胞及B淋巴细胞，诱导B细胞之细胞凋亡，从而导致淋巴组织损伤，引起大量淋巴细胞缺失(Darwich L等人，ArchVirol 2004年5月；149(5)：857-74)。尤其经PMWS感染之猪只展示滤泡中心与滤泡旁区域之组织细胞浸润及淋巴细胞缺失，表明症状与PCV2之存在相关(Segales J.等人，Vet Microbiol 2004年2月4日；98(2)：151-8；Darwich L等人，Arch Virol 2004年5月；149(5)：857-74)。该等事实让有些人认为PCV2感染会导致免疫抑制(Darwich L等人，Arch Virol 2004年5月；149(5)：857-74；Krakowka S等人，Viral Immunol 2002；15(4)：567-82)。

基于DNA疫苗治疗PCV2感染、尤其PMWS的方法描述于美国专利第6,703,023号中。在WO 03/049703中，描述包含PCV1骨架之活嵌合疫苗之制备，其中PCV1骨架之基因经病原性PCV2病毒株之免疫原性基因置换。WO99/18214已提供用于制备灭活的PCV2疫苗的若干PCV2病毒株及程序。基于ORF-2之有效亚单位疫苗已报导于WO 06/072065中。预期该等疫苗之任一者均可用于针对PMWS之猪之疫苗接种/治疗。

尚无有关PCV2感染对因各种猪相关病原体所引起之伴随感染之发生率的潜在影响之报导。具体而言，并无有关PCV2对特定病原体(诸如胸膜肺炎放线杆菌、猪副嗜血杆菌、猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、PRRSV、沙门氏菌(Salmonella spp.)、SIV或猪链球菌)之潜在影响的报导。此外，即便在短时间内了解不同的PCV2疫苗，但其对猪之非PCV2之伴随感染的影响尚未得知。

附图说明

图1：PCV2病毒血症之概况。在指定时间点时，从预选的安慰剂治疗动物(图1A；n＝110)及疫苗接种动物(图1B；n＝110)收集血样。根据定量PCR的结果，将动物划分为具有亚临床病毒负荷(10⁴-10⁶gE/ml)的动物、和具有临床相关病毒负荷(＞10⁶gE/ml)的动物。白色条形表示每个取样日具有亚临床病毒负荷之动物之比例，黑色条形表示每个取样日具有临床相关病毒负荷之动物之比例。

发明内容

本发明系基于令人意外之发现：PCV2疫苗不仅可减少猪只或猪群之PCV2感染百分比，且亦可减少由非环状病毒之病原体、尤其除PCV2以外的病原体所引起的伴随感染之百分比。

因此，根据一方面，本发明涉及一种减少猪只或猪群因一或多种除PCV2以外的病原体所引起的伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤。

如本文中所使用的术语″伴随感染″意谓(但不限于)由非环状病毒、尤其除PCV2以外的病毒、细菌、真菌或蠕虫病原体所引起之猪之任何感染。如本文中所使用的术语″伴随病原体″意谓(但不限于)非环状病毒、尤其非PCV2之猪之病原体。因此，根据另一方面，本发明提供一种减少猪只或猪群因一或多种非环状病毒、尤其非PCV2之病毒、细菌、真菌或蠕虫病原体所引起的伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤。优选地，该等伴随感染系由一或多种细菌、病毒或真菌病原体或其组合所引起。更优选地，该等伴随感染系由一或多种细菌或病毒病原体或其组合所引起。

根据本发明之另一方面，术语″伴随感染″亦意谓经一或多种非环状病毒、尤其非PCV2之伴随病原体感染的猪只与PCV2共感染。因此，根据另一方面，本发明提供一种减少与PCV2共感染之猪只或猪群之伴随感染之百分比的方法，其中伴随感染系由一或多种非环状病毒、尤其除PCV2以外的病原体引起，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤。优选地，该等伴随感染系由一或多种非环状病毒、尤其非PCV2之病毒、细菌、真菌或蠕虫病原体引起。

如本文中所使用的术语″与PCV2共感染″意谓(但不限于)与PCV2共感染之任何形式，此意谓PCV2感染先于、同时或后于除环状病毒、尤其除PCV2以外的其它病原体的感染。其亦包括PCV2感染之亚临床病程、临床显性病程、暴发性病程及慢性病程。在本文之上下文中，显性病程不限于PMWS，且亦包括PCV2感染之任何其它临床表现，诸如猪呼吸道疾病复征(PRDC)、猪皮肤病及肾病症候群(PDNS)、繁殖失败(reproductive failure)、肉芽肿性肠炎、潜在地先天性震颤(potentially，congenital tremors)(CT-AII)及围产期心肌炎(Chae，Veterinary J.，2005；169：326-336)。

然而，术语″伴随感染″未必意谓猪只或猪群与PCV2共感染。术语″伴随感染″亦指(但不限于)猪只或猪群暴露于PCV2的情况或存在PCV2感染风险的情况。因此，根据另一方面，本发明提供一种使暴露于PCV2或有PCV2感染危险或易感染PCV2之猪只或猪群伴随感染之百分比降低的方法，其中伴随感染系由一或多种非环状病毒、尤其除PCV2以外的病原体引起，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤。优选地，该等伴随感染系由一或多种非环状病毒、尤其非PCV2之病毒、细菌、真菌或蠕虫病原体引起。

术语″减少伴随感染之百分比″意谓，关于非环状病毒之病原体，经该病原体感染之猪只数目相比未疫苗接种之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。在本文之上下文中，术语″未疫苗接种之对照组″意谓未投与有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的一组猪只。因此，根据另一方面，本发明亦提供一种减少猪只或猪群因除PCV2以外的病原体所引起的伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤，其中针对该非环状病毒之病原体，经该病原体感染之猪只数目相比未疫苗接种之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。优选地，伴随感染系由非环状病毒、尤其非PCV2之病毒、细菌或真菌病原体引起。更优选地，该等猪只或该猪群系如以上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。

由非环状病毒、尤其非PCV2之病毒、细菌或真菌病原体所引起的伴随感染会导致受感染动物之肠道、呼吸道、繁殖、中枢神经或运动症状。可使各别病原体所引起之彼等临床症状之任一者之发生率降低。因此，根据另一方面，本发明涉及一种减少猪只或猪群因一或多种非PCV2之肠道、呼吸道、繁殖、中枢神经或运动病原体所引起的伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤。优选地，该等猪只系如以上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。更优选地，关于非环状病毒之肠道、呼吸、繁殖、中枢神经或运动病原体，经该肠道、呼吸道、繁殖、中枢神经或运动病原体感染之猪只数目相比未疫苗接种之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。

肠道病原体为例如胞内劳森氏菌(Lawsonia intracellularis)、大肠杆菌(E.coli)、猪链球菌、梭菌属(Clostridium spp.)、沙门氏菌属、短螺旋体属(Brachyspira spp.)、轮状病毒或冠状病毒。呼吸道病原体为例如PRRSV、猪肺炎支原体、猪鼻支原体。繁殖病原体为例如钩端螺旋体属(Leptospira spp.)、PRRSV、衣原体属(Chlamydia spp.)。运动病原体为例如猪鼻支原体、红斑丹毒丝菌(Erysipelotrix rusiopathiae)。中枢神经系统病原体为例如伪狂犬病毒、猪链球菌、嗜血杆菌属(Haemophilus sp.)。

一般而言，术语″除PCV2以外的病原体″意谓(但不限于)一或多种选自由以下病原体组成之群之病原体：猪放线杆菌(Actinobacillus suis)；化脓隐秘杆菌(Arcanobacterium pyogene)；胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumonia，APP)；非洲猪瘟病毒；曲霉属(Aspergillus spp.)；星状病毒(Astroviruse)；猪蛔虫(Ascaris suum)；芽囊原虫属(Blastocystis spp.)；支气管败血性博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)；短螺旋体属(Brachyspiraspp.)，猪痢疾短螺旋体(B.hyodysenteriae)、结肠菌毛样短螺旋体(B.pilosicoli)；猪布鲁氏菌(Brucella suis)、猪布鲁氏菌变种1、2及3；念珠菌属(Candida spp.)；典型猪瘟病毒；梭菌属(Clostridium spp.)，尤其艰难梭菌(C.difficile)、A型、B型及C型产气荚膜梭菌(C.perfringens)、诺维梭菌(C.novyi)、败毒梭菌(C.septicum)、艰难梭菌、破伤风梭菌(C.tetani)；衣原体属(Chlamydia spp.)、隐孢子虫属(Cryptosporidium spp.)；脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus)；猪附红细胞体病(Eperythrozoonosis suis)；红斑丹毒丝菌；大肠杆菌；镰孢属(Fusarium spp.)；猪副嗜血杆菌；猪血球凝集性脑脊髓炎病毒(Hemagglutinating encephalomyelitis virus)；E型肝炎病毒；日本脑炎病毒；胃红色猪圆线虫(Hyostrongylus rubidus)；胞内劳森氏菌；钩端螺旋体属(Leptospira spp.)，澳洲钩端螺旋体(L.australis)、犬钩端螺旋体(L.canicola)、流感伤寒性钩端螺旋体(L.grippotyphosa)、波摩拿钩端螺旋体(L.pomona)、黄疸出血性钩端螺旋体(L.icterohaemorrhagicae)、问号钩端螺旋体(L.interrogans)、塔拉索夫钩端螺旋体(L.tarassovi)、哈特焦螺旋体(L.hardjo)、赛罗钩端螺旋体(L.sejroe)、布拉迪斯钩端螺旋体(L.bratislava)；曼氏溶血杆菌(Mannheimia haemolytica)；梅南高病毒(Menangle virus)；分支杆菌属(Mycobacterium spp.)、鸟分枝杆菌(M.avium)、胞内分枝杆菌(M.intracellulare)、结核分支杆菌(M.tuberculosis)；支原体属(Mycoplasma spp.)、猪肺炎支原体、猪鼻支原体；尼帕病毒(Nipah virus)；食道口线虫属(Oesophagostum spp.)、有齿食道口线虫(Oesophagostum dentatum)、长尾肠食道口线虫(Oesophagostum quadrospinulatum)；巴氏杆菌属(Pasteurella spp.)，多杀性巴氏杆菌；青霉属(Penicillium spp.)；猪腺病毒；猪细胞巨大病毒；猪肠杯状病毒；猪肠细小核糖核酸病毒；猪细小病毒；猪呼吸道冠状病毒；PRRS病毒；伪狂犬病毒；呼肠孤病毒；轮状病毒；腮腺炎病毒；沙门氏菌属(Salmonella spp.)，鼠伤寒沙门氏菌(S.typhimurium)、霍乱沙门氏菌(S.choleraesuis)、都柏林沙门氏菌(S.dublin)；疥螨属(Sarcoptes spp.)；猪葡萄球菌(Staphylococcus hyicus)；链球菌属，猪链球菌、豕链球菌(S.porcinus)、停乳链球菌(S.dysgalactiae)、停乳链球菌似马亚种(S.dysgalactiae subsp.equisimilis)；兰氏类圆线虫(Strongyloides ransomi)；猪疱疹病毒；猪流感病毒；猪痘病毒；传染性胃肠炎病毒；鞭虫属(Trichuris spp.)；绦虫属(Taeniaspp.)；旋毛形线虫(Trichinella spiralis)；水泡性口膜炎病毒(Vesicular stomatitisvirus)；猪水泡疹病毒(virus of vesicular exanthema of swine)；西尼罗河病毒(West Nile virus)；或耶尔森氏菌属(Yersina spp.)，假结核耶尔森氏菌(Y.pseudotuberculosis)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Y.enterocolitica)。

因此，根据另一方面，本发明涉及一种减少猪只或猪群因一或多种除PCV2以外的病原体所引起的伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤，其中引起伴随感染的病原体系选自由以下组成之群：猪放线杆菌；化脓隐秘杆菌；胸膜肺炎放线杆菌(APP)；非洲猪瘟病毒；曲霉属；星状病毒；猪蛔虫；芽囊原虫属；支气管败血性博德特氏菌；短螺旋体属，猪痢疾短螺旋体、多毛短螺旋体；猪布鲁氏菌、猪布鲁氏菌变种1、2及3；念珠菌属；典型猪瘟病毒；梭菌属，尤其艰难梭菌、A型、B型及C型产气荚膜梭菌、诺维梭菌、败毒梭菌、艰难梭菌、破伤风梭菌；衣原体属、隐孢子虫属；脑心肌炎病毒；猪附红细胞体病；红斑丹毒丝菌；大肠杆菌；镰孢属；猪副嗜血杆菌；猪血球凝集性脑脊髓炎病毒；E型肝炎病毒；日本脑炎病毒；胃红色猪圆线虫；胞内劳森氏菌；钩端螺旋体属，澳洲钩端螺旋体、犬钩端螺旋体、流感伤寒性钩端螺旋体、波摩拿钩端螺旋体、黄疸出血性钩端螺旋体、问号钩端螺旋体、塔拉索夫钩端螺旋体、哈特焦螺旋体、赛罗钩端螺旋体、布拉迪斯钩端螺旋体；曼氏溶血杆菌；梅南高病毒；分支杆菌属，鸟分枝杆菌、胞内分枝杆菌、结核分支杆菌；支原体属，猪肺炎支原体、猪鼻支原体；尼帕病毒；食道口线虫属、有齿食道口线虫、长尾肠食道口虫；巴氏杆菌属，多杀性巴氏杆菌；青霉属；猪腺病毒；猪细胞巨大病毒；猪肠杯状病毒；猪肠细小核糖核酸病毒；猪细小病毒；猪呼吸道冠状病毒；PRRS病毒；伪狂犬病毒；呼肠孤病毒；轮状病毒；腮腺炎病毒；沙门氏菌属，鼠伤寒沙门氏菌、霍乱沙门氏菌、都柏林沙门氏菌；疥螨属；猪葡萄球菌；链球菌属，猪链球菌、豕链球菌、停乳链球菌、停乳链球菌似马亚种；兰氏类圆线虫；猪疱疹病毒；猪流感病毒；猪痘病毒；传染性胃肠炎病毒；鞭虫属；绦虫属；旋毛形线虫；水泡性口膜炎病毒；猪水泡疹病毒；西尼罗河病毒；或耶尔森氏菌属，假结核耶尔森氏菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌。

优选地，该等伴随感染系由一或多种选自由以下组成之群之病原体引起：胸膜肺炎放线杆菌；猪副嗜血杆菌；猪鼻支原体；多杀性巴氏杆菌；PRRS；沙门氏菌属及猪链球菌。最优选地，该等伴随感染系由一或多种选自由以下组成之群之病原体引起：胸膜肺炎放线杆菌；猪副嗜血杆菌；猪鼻支原体；多杀性巴氏杆菌；PRRS；沙门氏菌属及猪链球菌。更优选地，该等伴随感染系由一或多种选自由以下组成之群之病原体引起：胸膜肺炎放线杆菌；猪鼻支原体及PRRS。最优选系由猪鼻支原体及/或PRRS引起。

优选地，该等猪只系如以上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。更优选地，关于上述非环状病毒之该等病原体，经一或多种该等病原体感染之猪只数目相比未疫苗接种之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。在多重感染的情况下，如上所述之减少率系针对各种特定病原体。举例而言，受多重感染之猪只之伴随感染减少10％以上意谓，对于特定病原体，感染率减少10％以上。其未必意谓，与未疫苗接种之对照组相比，关于所有病原体之感染率减少10％以上；或关于猪群，该猪群中不到10％之猪只经所有该等病原体感染。

如本文中所使用的术语″PCV2抗原″系指引发宿主抵抗PCV2之免疫反应的氨基酸序列。如本文中所使用的抗原包括任何PCV2蛋白之全长序列、其类似物或其免疫原性片段。

术语″免疫原性片段″系指包括一或多个表位且从而引发宿主之免疫学反应的蛋白质片段。该等片段可使用此项技术中熟知的多种表位定位技术鉴别。参见例如Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology，第66卷(Glenn E.Morris编，1996)Humana Press，Totowa，New Jersey。举例而言，线性表位可藉由例如在固体载体上同时合成大量与蛋白质分子之各部分对应的肽且在该等肽仍附着于载体上时使该等肽与抗体反应来确定。该等技术在此项技术中已知且描述于以下文献中：例如美国专利第4,708,871号；Geysen等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：3998-4002；Geysen等人(1986)Molec.Immunol.23：709-715。类似地，易于藉由例如X射线晶体学及二维核磁共振术测定氨基酸之空间构象来鉴别构象表位。参见例如EpitopeMapping Protocols，同上。

该定义亦包括合成抗原，例如多表位、侧翼表位及其它重组或合成来源之抗原。参见例如Bergmann等人(1993)Eur.J.Immunol.23：2777-2781；Bergmann等人(1996)，J.Immunol.157：3242-3249；Suhrbier，A.(1997)，Immunol.and Cell Biol.75：402-408；Gardner等人，(1998)第12届AIDS会议(12th World AIDS Conference)，Geneva，Switzerland，1998年6月28日-7月3日。

″免疫反应″意谓(但不限于)宿主中发生针对有关抗原、免疫原性组合物或疫苗的细胞介导之免疫反应及/或抗体介导之免疫反应。通常，″免疫反应″包括(但不限于)一或多种以下效应：产生或激活特异性针对有关抗原或包括于组合物或疫苗中之抗原的抗体、B细胞、辅助性T细胞、抑制性T细胞及/或细胞毒性T细胞。优选地，宿主将呈现治疗性或保护性免疫(记忆)反应，以致对新感染之抗性增强及/或疾病之临床严重程度降低。此保护作用系由以下证明：一或多种与PCV2感染关联之症状之数目减少或严重程度降低，或症状消失；病毒血症之发作延迟；病毒续存减少；总病毒负荷降低及/或病毒排出减少。

本文中所使用的术语″免疫原性组合物″或″疫苗″(两术语以同义使用)系指含有PCV2抗原的任何医药组合物，该组合物可用于预防或治疗个体之PCV2感染相关疾病或病状。优选之免疫原性组合物可诱导、刺激或增强针对PCV2的免疫反应。因此，此术语涵盖如下所述的亚单位免疫原性组合物，以及含有完整杀死或减毒及/或灭活PCV2的组合物。

因此，根据一方面，本发明涉及一种减少猪只或猪群因一或多种除PCV2以外的病原体所引起伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪的步骤，其中包含PCV2抗原的免疫原性组合物为亚单位免疫原性组合物、含有完整杀死或减毒及/或灭活PCV2的组合物。优选地，该等猪只系如上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。更优选地，经一或多种非环状病毒之病原体所感染之猪只数目比未接种疫苗之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。

如本文中所使用的术语″亚单位免疫原性组合物″系指含有至少一种来源于PCV2或与来自PCV2之抗原同源之免疫原性多肽或抗原但非全部抗原的组合物。此组合物实质上不含完整PCV2。因此，″亚单位免疫原性组合物″系由至少部分经纯化或分离(优选实质上经纯化)的来自PCV2之免疫原性多肽或其重组类似物制备。亚单位免疫原性组合物可包含亚单位抗原或实质上无来自PCV2之其它抗原或多肽或呈自PCV2分离之形式之所感兴趣之抗原。优选亚单位免疫原性组合物包含如下所述的PCV2 ORF-2蛋白。包含WO 06/072065中所提供之任何PCV2抗原的亚单位免疫原性组合物最优选，该专利全文皆以引用方式并入本文中。

根据另一方面，如本文中所使用的免疫原性组合物最优选包含由PCV2之ORF-2表达的多肽或其片段。本文中用于制备该组合物且本文中所提供之方法中的PCV2 ORF-2DNA及蛋白质为PCV2分离株中之高度保守结构域，且因此，任何PCV2 ORF-2可有效用作如本文中所使用之PCV2 ORF-2 DNA及/或多肽之来源。优选PCV2 ORF-2蛋白为WO 06/072065之SEQ ID NO：11之彼蛋白质。另一种优选PCV ORF-2多肽系以WO 06/072065之SEQ ID NO：5提供。然而，本领域技术人员了解此序列之序列同源性可改变多达6-10％且仍保持使其适用于免疫原性组合物中的抗原特性。免疫组合物之抗原特性例如可藉由WO 06/072065之实例4所提供之激发实验评估。此外，当与由如WO 06/072065中所提供之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之多核苷酸序列编码的PCV2 ORF-2蛋白相比，经修饰抗原赋予至少70％、优选80％、更优选90％的保护性免疫作用时，该经修饰抗原之抗原特性仍得以保持。

因此根据一方面，本发明涉及一种减少猪只或猪群因除PCV2以外的病原体所引起的伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原的免疫原性组合物投与该(等)猪只，其中该PCV2抗原为抗原PCV2 ORF-2蛋白，其与由如WO 06/072065中所提供之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之多核苷酸序列编码的PCV2 ORF-2蛋白相比具有至少70％、优选80％、更优选90％之保护性免疫作用。优选地，该PCV2 ORF-2具有WO06/072065之SEQ ID NO：11或SEQ ID NO：5之序列。优选地，该等猪只系如以上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。更优选地，与未疫苗接种之对照组相比，经非环状病毒之该等病原体感染之猪只数目减少40％以上、优选50％以上、更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。

在有些形式中，PCV2 ORF-2蛋白之免疫原性部分系作为包含PCV2抗原之免疫原性组合物之抗原组分使用。如本文中所使用的术语″免疫原性部分″分别指PCV2 ORF-2蛋白及/或多核苷酸之截短及/或取代形式或片段。优选地，此等截短及/或取代形式或片段包含全长ORF-2多肽之至少6个毗连氨基酸。更优选地，该等截短或取代形式或片段具有全长PCV ORF-2多肽之至少10个、更优选至少15个且更优选至少19个毗连氨基酸。此态样中之两种优选序列系如WO 06/072065之SEQ ID NO：9及SEQ ID NO：10所提供。应进一步了解此等序列可为更大片段或截短形式之一部分。

如上所述，更优选PCV2 ORF-2多肽为由SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之核苷酸序列编码的任一种多肽。然而，本领域技术人员了解此序列之序列同源性可改变多达6-20％且仍保持使其适用于免疫原性组合物中的抗原特性。在有些形式中，此PVC2 ORF-2多肽之截短或取代形式或片段系用作组合物之抗原组分。优选地，此等截短或取代形式或片段包含例如SEQ IDNO：3或SEQ ID NO：4之全长PCV2 ORF-2核苷酸序列之至少18个毗连核苷酸。更优选地，该等截短或取代形式或片段具有全长PCV2 ORF-2核苷酸序列(例如SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4)之至少30个、更优选至少45个且更优选至少57个毗连核苷酸。

此项技术中已知的″序列同一性″系指两个或两个以上多肽序列或者两个或两个以上多核苷酸序列(亦即，参考序列与待与该参考序列比较之给定序列)之间的关系。序列同一性系藉由在已将给定序列与参考序列最佳对准以产生最高序列相似度(如藉由该等序列串之间的匹配所确定)之后将该等序列相比较来测定。在此对准之后，逐位判明序列同一性，举例而言，若在一特定位置处，核苷酸或氨基酸残基一致，则彼位置处之序列″一致″。接着用该等位置一致之总数除以参考序列中核苷酸或残基之总数以得到序列一致％。序列同一性易于藉由已知方法计算，包括(但不限于)以下文献所述之方法：Computational Molecular Biology，Lesk，A.N.编，Oxford UniversityPress，New York(1988)；Biocomputing：Informatics and Genome Projects，Smith，D.W.编，Academic Press，New York(1993)；Computer Analysis ofSequence Data，第I部分，Griffin，A.M.及Griffin，H.G.编，Humana Press，NewJersey(1994)；Sequence Analysis in Molecular Biology，von Heinge，G.，Academic Press(1987)；Sequence Analysis Primer，Gribskov，M.及Devereux，J.编，M.Stockton Press，New York(1991)；及Carillo，H.及Lipman，D.，SIAM J.Applied Math.，48：1073(1988)，该等文献之教示内容系以引用方式并入本文中。测定序列同一性的优选方法可设计成得到所测序列之间的最大匹配。测定序列同一性的方法已汇编成公开可用的计算机程序，其可测定给定序列之间的序列同一性。该等程序之实例包括(但不限于)GCG程序包(Devereux，J.等人，Nucleic Acids Research，12(1)：387(1984))、BLASTP、BLASTN及FASTA(Altschul，S.F.等人，J.Molec.Biol.，215：403-410(1990))。BLASTX程序系自NCBI及其它来源(BLAST Manual，Altschul，S.等人，NCVINLM NIH Bethesda，MD 20894，Altschul，S.F.等人，J.Molec.Biol.，215：403-410(1990)，该等文献之教示内容系以引用方式并入本文中)公开可用。该等程序使用预设间隙权重将序列最佳地对准，以便产生给定序列与参考序列之间最高水平的序列同一性。举一种多核苷酸为例，若该多核苷酸具有与参考核苷酸序列具有例如至少85％、优选90％、甚至更优选95％之″序列同一性″的核苷酸序列，则预期该给定多核苷酸之核苷酸序列与参考序列一致，其中例外为，相对于参考核苷酸序列之每100个核苷酸，该给定多核苷酸序列可包括至多15个、优选至多10个、甚至更优选至多5个点突变。换言之，在具有相对于参考核苷酸序列具有至少85％、优选90％、甚至更优选95％同一性之核苷酸序列的多核苷酸中，参考序列之至多15％、优选10％、甚至更优选5％之核苷酸可缺失或经另一核苷酸取代，或者可将占参考序列之总核苷酸至多15％、优选10％、甚至更优选5％之量之核苷酸插入参考序列中。参考序列之该等突变可发生于参考核苷酸序列之5′或3′末端位置处或发生于彼等末端位置之间的任一处，散布于参考序列内个别核苷酸间或参考序列内一或多个毗连基团中。类似地，举一种多肽为例，若该多肽具有与参考氨基酸序列具有例如至少85％、优选90％、甚至更优选95％序列同一性之给定氨基酸序列，则预期该多肽之给定氨基酸序列与参考序列一致，其中例外为，相对于参考氨基酸序列之每100个氨基酸，该给定多肽序列可包括至多15个、优选至多10个、甚至更优选至多5个氨基酸改变。换言之，为获得与参考氨基酸序列具有至少85％、优选90％、甚至更优选95％序列同一性的给定多肽序列，参考序列中至多15％、优选至多10％、甚至更优选至多5％之氨基酸残基可缺失或经另一氨基酸取代，或者可将占参考序列之氨基酸残基总数至多15％、优选至多10％、甚至更优选至多5％之量之氨基酸插入参考序列中。参考序列之该等改变可发生于参考氨基酸序列之胺基或羧基末端位置处或发生于彼等末端位置之间的任一处，散布于参考序列内个别残基间或参考序列内一或多个毗连基团中。优选地，不一致之残基位置的不同之处在于保守性氨基酸取代。然而，当测定序列同一性时，保守性取代不作为匹配包括在内。

如本文中所使用的″序列同源性″系指一种测定两个序列之相关性的方法。为测定序列同源性，将两个或两个以上序列最佳对准，且必要时引入间隙。然而，与″序列同一性″相比，当测定序列同源性时，保守性氨基酸取代系视为匹配。换言之，为获得与参考序列具有95％序列同源性的多肽或多核苷酸，参考序列中85％、优选90％、甚至更优选95％之氨基酸残基或核苷酸必须匹配或包含另一氨基酸或核苷酸之保守性取代，或者可将占参考序列之总氨基酸残基或核苷酸(不包括保守性取代)至多15％、优选至多10％、甚至更优选至多5％之量之氨基酸或核苷酸插入参考序列中。优选地，同源序列包含至少50个、甚至更优选至少100个、甚至更优选至少250个且甚至更优选至少500个核苷酸的伸长。

″保守性取代″系指氨基酸残基或核苷酸经具有类似特性或性质(包括尺寸、疏水性等)的另一氨基酸残基或核苷酸取代，以使得总体功能性不会发生明显变化。

″经分离″意谓″经人工″改变其自然状态，亦即，若其存在于自然界中，则其已有别于或已脱离其最初环境，或两者。举例而言，当该术语用于本文中时，天然存在于活有机体中的多核苷酸或多肽系未″经分离″，但与其自然状态之共存物质分离之相同多核苷酸或多肽系″经分离″。

因此，根据一方面，本发明涉及一种减少猪只或猪群因一或多种除PCV2以外的病原体所引起的伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原的免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤，其中该PCV2ORF-2蛋白为上述彼等蛋白质中之任一种。优选地，该PCV2ORF-2蛋白为：

i)包含WO 06/07065之SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11之序列的多肽；

ii)与i)之多肽至少80％同源的任何多肽；

iii)i)及/或ii)之多肽的任何免疫原性部分；

iv)iii)之免疫原性部分，其包含WO 06/072065之SEQ ID NO：5、SEQID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11之序列中所包括之至少10个毗连氨基酸；

v)由包含WO 06/072065之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之序列之DNA编码的多肽；

vi)由与v)之多核苷酸至少80％同源之多核苷酸编码的任何多肽；

vii)由v)及/或vi)之多核苷酸编码之多肽之任何免疫原性部分；

viii)vii)之免疫原性部分，其中编码该免疫原性部分的多核苷酸包含WO 06/072065之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之序列中所包括的至少30个毗连核苷酸。

优选地，彼等免疫原性部分之任一者具有由WO 06/07065之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之序列编码之PCV2 ORF-2蛋白的免疫原性特性。

优选地，该等受感染猪只系如以上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。更优选地，关于一或多种非环状病毒之该等病原体，经该等病原体感染之猪只数目相比未疫苗接种之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。

根据另一方面，PCV2ORF-2蛋白系以有效治疗亚临床感染PCV2之动物的抗原包涵量(antigen inclusion level)提供于免疫原性组合物中。优选地，PCV2ORF-2蛋白包涵量为每毫升最终免疫原性组合物至少0.2微克抗原(μg/ml)，更优选约0.2至约400μg/ml，更优选约0.3至约200μg/ml，甚至更优选约0.35至约100μg/ml，更优选约0.4至约50μg/ml，更优选约0.45至约30μg/ml，更优选约0.6至约15μg/ml，甚至更优选约0.75至约8μg/ml，甚至更优选约1.0至约6μg/ml，更优选约1.3至约3.0μg/ml，甚至更优选约1.4至约2.5μg/ml，甚至更优选约1.5至约2.0μg/ml，且最优选约1.6μg/ml。

根据另一方面，PCV ORF-2抗原包涵量为每剂最终抗原组合物至少0.2微克如上所述之PCV2 ORF-2蛋白(微克/剂)，更优选约0.2至约400微克/剂，更优选约0.3至约200微克/剂，甚至更优选约0.35至约100微克/剂，更优选约0.4至约50微克/剂，更优选约0.45至约30微克/剂，更优选约0.6至约15微克/剂，甚至更优选约0.75至约8微克/剂，甚至更优选约1.0至约6微克/剂，更优选约1.3至约3.0微克/剂，甚至更优选约1.4至约2.5微克/剂，甚至更优选约1.5至约2.0微克/剂，且最优选约1.6微克/剂。

用于本发明之免疫原性组合物中的PCV2ORF-2多肽可以包括PCV2ORF2之分离及纯化、标准蛋白质合成及重组方法的任何方式获得。获得PCV2 ORF-2多肽的优选方法提供于WO 06/072065中，该专利之教示及内容系以全文引用方式并入本文中。简言之，将易感细胞用含有PCV2 ORF-2DNA编码序列的重组病毒载体感染，藉由重组病毒表达PCV2 ORF-2多肽，且藉由过滤自上清液中回收所表达之PCV2 ORF-2多肽且藉由任何习知方法，优选使用二乙烯亚胺灭活，接着中和以终止灭活过程。

如本文中所使用的免疫原性组合物亦指包含以下之组合物：i)优选上述浓度之上述任何PCV2ORF-2蛋白；及ii)表达该PCV2 ORF-2蛋白之病毒载体、优选重组杆状病毒之至少一部分。此外，免疫原性组合物可包含：i)优选上述浓度之上述任何PCV2 ORF-2蛋白；ii)表达该PCV2 ORF-2蛋白之病毒载体、优选重组杆状病毒之至少一部分；及iii)细胞培养上清液之一部分。

因此，根据一方面，本发明涉及一种减少猪只或猪群因一或多种除PCV2以外的病原体所引起的伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原的免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤，其中该PCV2抗原为重组PCV2 ORF-2，优选为杆状病毒表达之PCV2 ORF-2。优选地，彼等重组PCV2 ORF-2或杆状病毒表达之PCV2 ORF-2具有如上所述之序列。

如本文中所使用的免疫原性组合物亦指一种包含以下的组合物：i)优选上述浓度之上述任何PCV2 ORF-2蛋白；ii)表达该PCV2 ORF-2蛋白之病毒载体、优选重组杆状病毒之至少一部分；及iii)细胞培养物之一部分；其中该等组分中约90％具有小于1μm之尺寸。

如本文中所使用的免疫原性组合物亦指一种包含以下的组合物：i)优选上述浓度之上述任何PCV2 ORF-2蛋白；ii)表达该PCV2 ORF-2蛋白之病毒载体之至少一部分；iii)细胞培养物之一部分；iv)及将重组病毒载体灭活的灭活剂，优选BEI，其中组分i)至iii)中约90％具有小于1μm之尺寸。优选地，BEI系以使杆状病毒有效灭活的浓度、优选以2至约8mM BEI之量、优选约5mM BEI之量存在。

如本文中所使用的免疫原性组合物亦指一种包含以下之组合物：i)优选上述浓度之上述任何PCV2 ORF-2蛋白；ii)表达该PCV2 ORF-2蛋白之病毒载体之至少一部分；iii)细胞培养物之一部分；iv)将重组病毒载体灭活的灭活剂，优选BEI；及v)使灭活剂介导之灭活终止的中和剂，其中组分i)至iii)中约90％具有小于1μm之尺寸。优选地，若灭活剂为BEI，则该组合物包含与BEI等量之硫代硫酸钠。

将多肽并入可投与PCV2易感动物的组合物中。在优选形式中，组合物亦可包括本领域技术人员已知的其它组分(亦参见Remington′sPharmaceutical Sciences.(1990)，第18版，Mack Publ.，Easton)。此外，组合物可包括一或多种兽医学上可接受之载剂。如本文中所使用，″兽医学上可接受之载剂″包括任何及所有溶剂、分散介质、包衣剂、佐剂、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗菌剂及抗真菌剂、等渗剂、吸附延迟剂及其类似载剂。在一优选实施例中，免疫原性组合物包含优选上述浓度之如本文所提供的PCV2 ORF2蛋白质，其系与佐剂，优选卡波普(Carbopol)及生理盐水混合。

本领域技术人员应了解，本文中所用的组合物可并入已知之生理学上可接受之无菌可注射溶液中。为制备即用型非经肠注射或输注溶液，水性等渗溶液(诸如盐水或相应的血浆蛋白溶液)易于使用。此外，本发明之免疫原性及疫苗组合物可包括稀释剂、等渗剂、稳定剂或佐剂。稀释剂可包括水、盐水、右旋糖、乙醇、甘油及其类似物。等渗剂可包括氯化钠、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇及乳糖等。稳定剂包括白蛋白及乙二胺四乙酸之碱金属盐等。

本文中所使用的″佐剂″可包括氢氧化铝及磷酸铝、皂苷例如Quil A、QS-21(Cambridge Biotech Inc.，Cambridge MA)、GPI-0100(GalenicaPharmaceuticals，Inc.，Birming-ham，AL)、油包水型乳液、水包油型乳液、水包油包水型乳液(water-in-oil-in-water emulsion)。乳液尤其可基于轻液态石蜡油(欧洲药典类型)；由烯烃(尤其异丁烯或癸烯)寡聚所产生之类异戊二烯油，诸如角鲨烷或角鲨烯油；含有直链烷基之酸或醇之酯，更尤其植物油、油酸乙酯、丙二醇二(辛酸酯/癸酸酯)、三(辛酸/癸酸)甘油酯或丙二醇二油酸酯；分支链脂肪酸或醇之酯，尤其异硬脂酸酯。使用油与乳化剂组合以形成乳液。乳化剂优选为非离子型界面活性剂，尤其视需要乙氧基化之脱水山梨糖醇酯、二缩甘露醇酯(mannide)(例如无水甘露糖醇油酸酯)、乙二醇酯、聚甘油酯、丙二醇酯及油酸酯、异硬脂酸酯、蓖麻油酸酯或羟基硬脂酸酯，及聚氧丙烯-聚氧乙烯共聚物嵌段，尤其普流尼克(Pluronic)产品，尤其L121。参见Hunter等人，The Theory and Practical Application of Adjuvants(Stewart-Tull编，D.E.S.).JohnWiley and Sons，NY，第51-94页(1995)及Todd等人，Vaccine 15：564-570(1997)。

举例而言，可使用M.Powell及M.Newman(Plenum Press，1995)所编辑之″Vaccine Design，The Subunit and Adjuvant Approach″第147页所述的SPT乳液及该书第183页所述的乳液MF59。

佐剂之另一实例为选自丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物及顺丁烯二酸酐与烯基衍生物之共聚物的化合物。有利的佐剂化合物为尤其与糖或多元醇之聚烯基醚交联的丙烯酸或甲基丙烯酸聚合物。该等化合物已以术语卡波姆(carbomer)为人所知(Phameuropa，第8卷，第2期，1996年6月)。熟悉此项技术者亦可参考美国专利第2,909,462号，该专利描述与具有至少3个羟基、优选不超过8个羟基之多羟基化合物交联的该等丙烯酸系聚合物，其中至少三个羟基之氢原子经具有至少2个碳原子之不饱和脂族基团置换。优选基团为含有2至4个碳原子的彼等基团，例如乙烯基、烯丙基及其它烯系不饱和基团。不饱和基团本身可含有其它取代基，诸如甲基。以品名卡波普(BFGoodrich，Ohio，USA)销售的产品尤其适当。其与烯丙基蔗糖或与烯丙基异戊四醇交联。其中，可提及卡波普974P、934P及971P。以使用优选每剂约500μg至约5mg之量、甚至更优选每剂约750μg至约2.5mg之量且最优选每剂约1mg之量之卡波普、尤其使用卡波普971P最优选。

其它适当佐剂包括(但不限于)RIBI佐剂系统(Ribi Inc.)、嵌段共聚物(CytRx，Atlanta GA)、SAF-M(Chiron，Emeryville CA)、单磷酰基脂质A、阿夫立定脂质胺佐剂(Avridine lipid-amine adjuvant)、来自大肠杆菌(重组或以其它方式)之热不稳定肠毒素、霍乱毒素、IMS 1314或胞壁酰二肽等。

优选地，佐剂系以每剂约100μg至约10mg之量添加。甚至更优选地，佐剂系以每剂约100μg至约10mg之量添加。甚至更优选地，佐剂系以每剂约500μg至约5mg之量添加。甚至更优选地，佐剂系以每剂约750μg至约2.5mg之量添加。最优选地，佐剂系以每剂约1mg之量添加。

此外，组合物可包括一或多种医药学上可接受之载剂。如本文中所使用，″可药用载剂″包括任何及所有溶剂、分散介质、包衣剂、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗菌剂及抗真菌剂、等渗剂、吸附延迟剂及其类似载剂。最优选地，本文中所提供之组合物含有自活体外培养细胞之上清液中所回收之PCV2 ORF2蛋白，其中该等细胞经含有PCV2 ORF2 DNA且表达PCV2ORF2蛋白之重组病毒载体感染，且其中该细胞培养物经约2mM至约8mMBEI、优选经约5mM BEI处理以将病毒载体灭活且经相当浓度之中和剂、优选硫代硫酸钠溶液处理以达约2mM至约8mM、优选约5mM之最终浓度。

根据另一实施方案，本发明亦关于PCV2抗原用于制备免疫原性组合物之用途，该免疫原性组合物可减少猪只或猪群因一或多种除PCV2以外的病原体所引起之伴随感染，其中该免疫原性组合物包含：i)优选上述浓度之上述任何PCV2 ORF-2蛋白；ii)表达该PCV2 ORF-2蛋白之病毒载体之至少一部分；iii)细胞培养物之一部分；iv)将重组病毒载体灭活的灭活剂，优选BEI；及v)与BEI等量之使灭活剂所介导之灭活终止的中和剂，优选硫代硫酸钠；及vi)上述量之适当佐剂，优选卡波普971；其中组分i)至iii)中约90％具有小于1μm之尺寸。优选地，该等猪只系如以上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。更优选地，关于一或多种非环状病毒之该等病原体，经该等病原体感染之猪只数目相比未疫苗接种之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。

根据另一方面，该免疫原性组合物进一步包含生理学上可接受之浓度之医药学上可接受之盐，优选磷酸盐。优选地，将该免疫原性组合物之pH值调节至生理pH值，意谓介于约6.5与7.5之间。

如本文中所使用的免疫原性组合物亦指每毫升包含以下的组合物：i)至少1.6μg之上述PCV2 ORF-2蛋白；ii)表达该PCV2 ORF-2蛋白之杆状病毒之至少一部分；iii)细胞培养物之一部分；iv)约2至8mM BEI；v)与BEI等量之硫代硫酸钠；及vi)约1mg卡波普971；及vii)生理学上可接受之浓度之磷酸盐；其中组分i)至iii)中约90％具有小于1μm之尺寸且将该免疫原性组合物之pH值调节至约6.5至7.5。

免疫原性组合物可进一步包括一或多种其它免疫调节剂，诸如介白素、干扰素或其它细胞激素。免疫原性组合物亦可包括庆大霉素(Gentamicin)及硫柳汞(Merthiolate)。虽然用于本发明之上下文中之佐剂及添加剂之量及浓度易由本领域技术人员测定，但本发明涵盖包含约50μg至约2000μg佐剂及优选约250μg/ml剂量之疫苗组合物的组合物。因此，如本文中所使用的免疫原性组合物亦指包含约1μg/ml至约60μg/ml抗生素且更优选小于约30μg/ml抗生素的组合物。

如本文中所使用的免疫原性组合物亦指一种包含以下的组合物：i)优选上述浓度之上述任何PCV2 ORF-2蛋白；ii)表达该PCV2 ORF-2蛋白之病毒载体之至少一部分；iii)细胞培养物之一部分；iv)将重组病毒载体灭活的灭活剂，优选BEI；及v)与BEI等量之使由灭活剂所介导之灭活终止的中和剂，优选硫代硫酸钠；vi)上述量之适当佐剂，优选卡波普971；vii)医药学上可接受之浓度之盐水缓冲液，优选磷酸盐；及viii)抗微生物活性剂；其中组分i)至iii)中约90％具有小于1μm之尺寸。

如本文中所使用的免疫原性组合物亦指

CircoFLEX^TM(Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc，St Joseph，MO，USA)、Circo(MerialSAS，Lyon，France)、CircoVent(Intervet Inc.，Millsboro，DE，USA)或SuvaxynPCV-2 One

(Fort Dodge Animal Health，Kansas City，KA，USA)。因此，根据另一方面，本发明涉及一种减少猪只或猪群因一或多种除PCV2以外的病原体所引起的伴随感染之百分比的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤，其中该包含PCV2抗原的免疫原性组合物为

CircoFLEX^TM、

CircoVent及/或Suvaxyn PCV-2 One

其优选为

CircoFLEX^TM。优选地，该等受感染猪只系如以上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。更优选地，关于一或多种非环状病毒之该等病原体，经该等病原体感染之猪只数目相比未疫苗接种之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。

如本文中所使用的术语″有效量之PCV2抗原″意谓(但不限于)引发或能够引发投与该有效量之PCV2抗原之动物之免疫反应的PCV2抗原量。

该量视疫苗成分及投药时程而定。通常，当将灭活病毒或改良活病毒制剂用于组合疫苗时，疫苗之量含有每剂约10^2.0至约10^9.0TCID₅₀，优选每剂约10^3.0至约10^8.0TCID₅₀，更优选每剂约10^4.0至约108.0TCID₅₀。具体而言，当将改良活PCV2用于疫苗中时，投与易感动物之推荐剂量优选为每剂约10^3.0TCID₅₀(50％终点组织培养感染剂量)至每剂约10^6.0TCID₅₀且更优选每剂约10^4.0TCID₅₀至每剂约10^5.0TCID₅₀。一般而言，当使用纯化抗原时，抗原之量将介于0.2与5000微克之间且介于10^2.0与10^9.0TCID₅₀之间，优选介于10^3.0与10^6.0TCID₅₀之间，更优选介于10^4.0与10^5.0TCID₅₀之间。

亚单位疫苗一般系以每剂至少0.2μg抗原、优选每剂约0.2至约400μg、更优选每剂约0.3至约200μg、甚至更优选每剂约0.35至约100μg、更优选每剂约0.4至约50μg、更优选每剂约0.45至约30μg、更优选每剂约0.6至约16μg、甚至更优选每剂约0.75至约8μg、甚至更优选每剂约1.0至约6μg、更优选每剂约1.3至约3.0μg的抗原包涵量投与。

将PCV2抗原投与猪只不仅可使由非环状病毒、尤其除PCV2以外的病原体所引起的伴随感染之百分比减少，且亦可使健康状况、尤其对该等伴随感染的抗性普遍改善。因此，根据另一方面，本发明亦关于一种改善猪只对一或多种除PCV2以外的病原体之伴随感染之抗性的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原的免疫原性组合物投与该(等)猪只之步骤。优选地，该等猪只系如以上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。

如本文中所使用的术语″改善猪只对伴随感染之抗性″系指(但不限于)一种方法，其中关于非环状病毒之病原体，经该病原体感染之猪只数目相比未疫苗接种之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。因此，根据另一方面，本发明亦关于一种改善猪只对因一或多种除PCV2以外的病原体所引起之伴随感染之抗性的方法，该方法包含将有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物投与该(等)猪只的步骤，其中关于一或多种非环状病毒之该等病原体，经该等病原体感染之猪只数目相比未疫苗接种之对照组减少10％以上、优选20％以上、更优选30％以上、甚至更优选40％以上、甚至更优选50％以上、甚至更优选60％以上、甚至更优选80％以上、甚至更优选100％以上。优选地，该等猪只系如以上所定义与PCV2共感染，暴露于PCV2，或具有PCV2感染危险，或易感染PCV2。

优选实施方式详述

以下实例阐明本发明之优选材料及程序。尽管可使用与本文中所述类似或相当的任何方法及材料实施或测试本发明，但现描述优选方法、装置及材料。然而，应了解，该等实例仅出于说明而提供，且其中任何内容均不应视为对本发明之总体范围之限定。

实施例1检测PCV-2感染动物之伴随感染

研究群体

此研究于德国南部进行。商业性杂交育种之杂交猪只(Landrace或Edelschwein(母)×Pietrain(公))获自15个不同育种场，它们都属于″pig-producer community″。这些育种场在规模(50至300头母猪)、管理及卫生条件各方面都有不同。所有育种场之猪仔之常规预防措施包括铁注射、牙及尾切断术及阉割。不同育种场之猪仔在约4周龄离乳后，转移至具有全进全出制(all-in-all-out)生产系统的养育场(nursery farm)。将其混杂圈养于三个带有围栏的畜舍中，其设计成每个围栏可容纳60至120头猪只。养育场所之常规预防措施包括，到达后头十天用盐酸四环素进行预防性治疗。养育期间将食物组成改变四次。给这些动物提供的是基于大麦及矿物质之自制饲料。约12周龄时，将猪只转移至具有全进全出制生产系统的育肥场(fatteningfarm)。将其重新混杂并圈养于两个具有围栏的畜舍中，其设计成每个围栏可容纳10至30头猪只。育肥期间将食物组成改变三次。提供的是基于大麦、小麦、玉米及乳清浓缩物之自制饲料。将猪只在育肥场置留13至18周。

病史

PMWS之疾病模式在2002年11月开始研究的约三年前就已有明显临床表现，且在2002年12月经血清学证实。在养育结束/育肥开始时，动物开始呈现PMWS之典型病征，诸如消瘦、呼吸道病征及死亡率明显增大。此疾病因PRRSV共感染而并发。养育期间(4-12周龄)的死亡率一般为3.5％-4.8％，偶有峰值水平高达10％死亡率的报导。育肥中期至后期期间，呼吸道病征及生长迟缓在PCV2感染动物中占主导。育肥期间(12-26周龄猪)的死亡率为约1.7-2.4％，淘汰数为1％。平均每日增重仅为中度(每日719-731克)。研究开始的三个月前，基于临床表现和PCV2病毒血症(两者皆于动物达约9至13周龄时发生)验证对PMWS之诊断。在PCV2感染动物之肺灌洗样本中鉴别出作为共感染病原体的PRRSV及猪鼻支原体。

测试物

为进行抗PCV2主动免疫，施用灭活的亚单位疫苗(

CircoFLEX^TM，Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH)。此疫苗含有PCV2之ORF2衣壳蛋白作为活性组分，并含有卡波姆作为佐剂。ORF2序列来自北美PCV2分离株，该株是从两个具有PMWS病征之猪只之扁桃体及肝样本中分离得到的。随后，将ORF2序列插入杆状病毒表达系统，用草地夜蛾(Sodopterafrugiperda)这种粘虫的卵巢得来的昆虫细胞株(SF+细胞)作为宿主。对照是含有无PCV2衣壳蛋白之细胞培养上清液的安慰剂，以卡波姆作为佐剂。

实验设计

现场试验(field trial)遵循“Good Clinical Practice，GCP”原则，采用随机、负对照、双盲、平行研究设计。根据初始体重及同窝仔分配原则，将总共1519头健康猪仔均等分布于两个治疗组中。离乳前一周，将一组猪仔(n＝754)用

CircoFLEX^TM疫苗接种，另一组(n＝765)接受安慰剂。当猪仔达25.4±3.18(平均值±S.D.)日龄时，于右颈区经肌肉内施用单次1ml剂量之测试物。离乳之后，将两个治疗组之猪只保持于混合组中直至研究终结，以便使病原体之均匀暴露最大化。

聚合酶链反应

如所述使用聚合酶链反应以便检测肺组织样本中下列各项的特异性核酸：PRRSV(Mardassi H等人，J Clin Microbiol 1994；32(9)：2197-203)、猪鼻支原体(Caron J.等人，J Clin Microbiol 2000；38(4)：1390-6)、猪肺炎支原体(Calsamiglia M等人，J Vet Diagn Invest 1999年5月；11(3)：246-51)、猪链球菌(Wisselink HJ等人，J Clin Microbiol 2002年8月；40(8)：2922-9)、多杀性巴氏杆菌(Townsend KM等人，J Clin Microbiol 1998年4月；36(4)：1096-100)、胸膜肺炎放线杆菌(Schaller A等人，Apx toxins in Pasteurellaceae species fromanimals.Vet Microbiol 2000年6月12日；74(4)：365-76)、支气管败血性博德特氏菌(Hozbor D等人，Res Microbiol 1999年6月；150(5)：333-41)及猪副嗜血杆菌(Calsamiglia M等人，J Vet Diagn Invest 1999年3月；11(2)：140-5)。

为量化血清中之PCV2病毒负荷，可根据以下文献中所述之方法将PCV2基因组等效物量化：Brunborg等人，2004；J.Virol Methods 122：171-178。为进行PCV2扩增，使用引物PCV2-84-1265U21及PCV2-84-1319L21。基于验证实验，将阳性样本之截止水平设定为每毫升血清10⁴份模板拷贝。所有PCV2DNA量化实验皆由bioScreen GmbH，Münster，Germany执行。

结果

PCV2病毒血症

研究了在预选的″样本动物″的血液中，所观测到的PMWS特征性临床表现及损伤的出现及严重程度是否与PCV2病毒血症的出现有关。如图1所示，在安慰剂治疗组，动物为约9-10周龄时出现PCV2病毒血症。约11至14周龄时，高达85％的PCV2阳性动物达到峰值水平。自14周龄直至育肥结束时，PCV2病毒血症动物所占比例减少，但不再达到基线水平。病毒血症之个别持续期平均持续56天(数据未展示)。

与安慰剂治疗组相比，疫苗接种组中PCV2阳性动物之比例明显减少(p＜0.0001)，且处于病毒血症高峰的阳性动物不超过35％(图1B)。疫苗接种动物之病毒血症之平均持续期减少31天(p＜0.0001；资料未展示)。

另一焦点为检查动物之病毒负荷。在此研究中，安慰剂治疗组动物在病毒血症初期动物为约10-15周龄时，主要观测到与临床相关的病毒负荷(每毫升血清中＞10⁶gE)(图1A)。在11周龄时，具有临床相关病毒负荷之动物的比例(40％)高于具有亚临床相关病毒负荷之动物的比例(37％)。此比率在病毒血症之后期(17-25周龄)因临床相关感染明显减少而发生很大变化。在PCV2阳性的疫苗接种动物中，在所分析的所有时间点，亚临床感染占主导(图1B)。

总而言之，研究期间在选定研究点之PCV2概况如下表征：a)在研究第9-10周时PCV2病毒血症发作，此与PMWS之临床病征及损伤之发作一致；b)在PCV2病毒血症之早期，安慰剂治疗之动物具有高病毒负荷；c)与安慰剂治疗动物相比，疫苗接种动物之病毒血症持续期明显减少、且具有临床相关及亚临床相关病毒负荷之动物之百分比明显降低。

经安慰剂治疗的动物中伴随感染的存在

迄今所得的结果证实了所分析之研究群体的PMWS诊断、并表明抗PCV2疫苗接种可大大保护动物免受PMWS影响。因此，该安慰剂对照免疫接种实验允许对PMWS引起动物之潜在免疫抑制之假设进行测试。据推测，在有PCV2相关免疫缺陷之情况下，PCV2病毒血症发作后共感染之频率在安慰剂治疗动物中比在疫苗接种动物中高。因此在第一步骤中更详细地分析研究动物暴露于机会致病性生物的情况。由于对临床表现的监测已表明动物主要受呼吸道病征影响，因此决定选死亡动物之肺样本用PCR筛检相应病原体。表3中仅呈现安慰剂治疗动物之结果，因为认为它们反映最接近自然场所之条件。

PCV2病毒血症发作之前(3-8周龄)，在安慰剂治疗动物5个肺样本中有2所检测出的唯一病原体为猪链球菌。PCV2病毒血症发作时(9-10周龄)，发现安慰剂治疗动物8个肺样本中有1个样本对PCV2呈阳性，而所分析之8个肺样本中有4个样本经测试对PRRSV呈阳性。其它以单独或与上两种病原体组合之形式检出但量少的病原体为猪鼻支原体、猪肺炎支原体及猪链球菌。在PCV2病毒血症急性期期间(11-16周龄)，在安慰剂治疗动物之肺样本中检测到最高量之共感染病原体。在所测试之对PCV2呈阳性的17个肺样本中，亦发现12个肺样本对PRRSV呈阳性及13个肺样本对猪鼻支原体呈阳性。此外，偶尔检测到猪链球菌或多杀性巴氏杆菌共感染。最后，在病毒血症之后期(17-26周龄)，猪肺炎支原体共感染占主导(7个PCV2阳性肺样本中有6个)，但亦发现猪鼻支原体、胸膜肺炎放线杆菌及猪链球菌共感染。在病毒血症发作之后的全部时期(生命之第9-26周)，安慰剂治疗动物22个肺样本中仅2个样本经测试对单独PCV2呈阳性。在大部分所分析之肺样本中，检测出PCV2与两或三种机会致病菌组合的阳性。由此，在研究过程中，发现PCV2感染与若干呼吸道伴随感染有关。PCV2病毒血症之发作及高峰与PRRSV及猪鼻支原体共感染之发作及高峰一致，而PCV2病毒血症后期伴有猪肺炎支原体感染之发作。

通过抗PCV2疫苗接种减少共感染

对肺样本中检测到的呼吸道病原体的频率进行比较，结果发现，两个治疗组在PCV2病毒血症发作之前的一段时间内无较大差异(数据未展示)。PCV2病毒血症发作之后(10-26周龄)，经测试对猪鼻支原体及PRRSV呈阳性之疫苗接种动物之肺样本的比例分别减少71％(p＝0.0293)及46％(p＝0.2847)(表1)。

表1：B05 BIVI 030之研究结果

此外，偶尔发现安慰剂治疗动物之肺样本对胸膜肺炎放线杆菌呈阳性。在第二次研究中，观测到两个治疗组在对猪肺炎支原体、猪链球菌或多杀性巴氏杆菌呈阳性之肺样本数量方面存在微小的差异。如表2中所示，该等病原体仅以低频率出现(猪链球菌、多杀性巴氏杆菌)或在PCV2感染之极后期出现(猪肺炎支原体)。

在另一研究(研究B05 BIVI 013)中，观测疫苗接种动物对伴随病原体的类似抗性，如表2中所示。

表2：B05 BIVI 013之研究结果

因此，在针对PCV-2之疫苗接种的影响下，PCV2感染之频率以及胸膜肺炎放线杆菌、猪副嗜血杆菌、猪鼻支原体、多杀性巴氏杆菌、PRRSV、沙门氏菌属、猪链球菌共感染之频率大为减少。

在另一研究中，亦观测到疫苗接种动物对猪肺炎支原体之类似抗性。

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[25]Calsamiglia M，Pijoan C，Solano G，Rapp-Gabrielson V.Development of anoligonucleotide-specific capture plate hybridization assay for detection of Haemophilus。

序列表

<110>贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡有限公司(BOEHRINGER INGELHEIM VETMEDICA INC)

<120>利用PCV2抗原减少猪的伴随感染

<130>P10-0100

<160>11

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>8

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>这是修饰的Kozak序列.

<400>1

ccgccatg 8

<210>2

<211>6

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>这是重组Eco R1序列.

<400>2

gaattc 6

<210>3

<211>713

<212>DNA

<213>猪环状病毒(Porcine circovirus)

<400>3

cagctatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60

ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120

gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtggaga 180

aggaaaaatg gcatcttcaa cacccgcctc tcccgcacct tcggatatac tgtgacgact 240

ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300

gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360

gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420

acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480

gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540

aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600

gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660

tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttaa accctaaatg aat 713

<210>4

<211>713

<212>DNA

<213>猪环状病毒

<400>4

ccgccatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60

ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120

gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtcaagg 180

ctaccacagt cacaacgccc tcctgggcgg tggacatgat gagatttaat attgacgact 240

ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300

gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360

gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420

acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480

gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540

aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600

gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660

tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttga accctaagaa ttc 713

<210>5

<211>233

<212>PRT

<213>猪环状病毒

<400>5

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg Hi s Arg Pro Arg

1 5 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro

20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr

50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val

65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg Ile Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr

100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr

130 135 140

Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr

145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn

180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe

210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro

225 230

<210>6

<211>233

<212>PRT

<213>猪环状病毒

<400>6

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg

1 5 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro

20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr

50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val

65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg Ile Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr

100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr

130 135 140

Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr

145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn

180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe

210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Glu Pro

225 230

<210>7

<211>756

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>该序列来自2型猪环状病毒，第二开放阅读框，

并带有来自pGEM T-easy载体的部分序列。

<400>7

gcggccgcgg gaattcgatc cgccatgacg tatccaagga ggcgttaccg cagaagaaga 60

caccgccccc gcagccatct tggccagatc ctccgccgcc gcccctggct cgtccacccc 120

cgccaccgct accgttggag aaggaaaaat ggcatcttca acacccgcct ctcccgcacc 180

ttcggatata ctgtcaaggc taccacagtc acaacgccct cctgggcggt ggacatgatg 240

agatttaata ttgacgactt tgttcccccg ggagggggga ccaacaaaat ctctataccc 300

tttgaatact acagaataag aaaggttaag gttgaattct ggccctgctc ccccatcacc 360

cagggtgata ggggagtggg ctccactgct gttattctag atgataactt tgtaacaaag 420

gccacagccc taacctatga cccatatgta aactactcct cccgccatac aatcccccaa 480

cccttctcct accactcccg ttacttcaca cccaaacctg ttcttgactc cactattgat 540

tacttccaac caaataacaa aaggaatcag ctttggctga ggctacaaac ctctagaaat 600

gtggaccacg taggcctcgg cactgcgttc gaaaacagta aatacgacca ggactacaat 660

atccgtgtaa ccatgtatgt acaattcaga gaatttaatc ttaaagaccc cccacttgaa 720

ccctaagaat tctatcacta gtgaattcgc ggccgc 756

<210>8

<211>10387

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>这是2型猪环状病毒ORF-2构建体，含杆状病毒和pGEM T-easy编码序列。

<400>8

aagctttact cgtaaagcga gttgaaggat catatttagt tgcgtttatg agataagatt 60

gaaagcacgt gtaaaatgtt tcccgcgcgt tggcacaact atttacaatg cggccaagtt 120

ataaaagatt ctaatctgat atgttttaaa acacctttgc ggcccgagtt gtttgcgtac 180

gtgactagcg aagaagatgt gtggaccgca gaacagatag taaaacaaaa ccctagtatt 240

ggagcaataa tcgatttaac caacacgtct aaatattatg atggtgtgca ttttttgcgg 300

gcgggcctgt tatacaaaaa aattcaagta cctggccaga ctttgccgcc tgaaagcata 360

gttcaagaat ttattgacac ggtaaaagaa tttacagaaa agtgtcccgg catgttggtg 420

ggcgtgcact gcacacacgg tattaatcgc accggttaca tggtgtgcag atatttaatg 480

cacaccctgg gtattgcgcc gcaggaagcc atagatagat tcgaaaaagc cagaggtcac 540

aaaattgaaa gacaaaatta cgttcaagat ttattaattt aattaatatt atttgcattc 600

tttaacaaat actttatcct attttcaaat tgttgcgctt cttccagcga accaaaacta 660

tgcttcgctt gctccgttta gcttgtagcc gatcagtggc gttgttccaa tcgacggtag 720

gattaggccg gatattctcc accacaatgt tggcaacgtt gatgttacgt ttatgctttt 780

ggttttccac gtacgtcttt tggccggtaa tagccgtaaa cgtagtgccg tcgcgcgtca 840

cgcacaacac cggatgtttg cgcttgtccg cggggtattg aaccgcgcga tccgacaaat 900

ccaccacttt ggcaactaaa tcggtgacct gcgcgtcttt tttctgcatt atttcgtctt 960

tcttttgcat ggtttcctgg aagccggtgt acatgcggtt tagatcagtc atgacgcgcg 1020

tgacctgcaa atctttggcc tcgatctgct tgtccttgat ggcaacgatg cgttcaataa 1080

actcttgttt tttaacaagt tcctcggttt tttgcgccac caccgcttgc agcgcgtttg 1140

tgtgctcggt gaatgtcgca atcagcttag tcaccaactg tttgctctcc tcctcccgtt 1200

gtttgatcgc gggatcgtac ttgccggtgc agagcacttg aggaattact tcttctaaaa 1260

gccattcttg taattctatg gcgtaaggca atttggactt cataatcagc tgaatcacgc 1320

cggatttagt aatgagcact gtatgcggct gcaaatacag cgggtcgccc cttttcacga 1380

cgctgttaga ggtagggccc ccattttgga tggtctgctc aaataacgat ttgtatttat 1440

tgtctacatg aacacgtata gctttatcac aaactgtata ttttaaactg ttagcgacgt 1500

ccttggccac gaaccggacc tgttggtcgc gctctagcac gtaccgcagg ttgaacgtat 1560

cttctccaaa tttaaattct ccaattttaa cgcgagccat tttgatacac gtgtgtcgat 1620

tttgcaacaa ctattgtttt ttaacgcaaa ctaaacttat tgtggtaagc aataattaaa 1680

tatgggggaa catgcgccgc tacaacactc gtcgttatga acgcagacgg cgccggtctc 1740

ggcgcaagcg gctaaaacgt gttgcgcgtt caacgcggca aacatcgcaa aagccaatag 1800

tacagttttg atttgcatat taacggcgat tttttaaatt atcttattta ataaatagtt 1860

atgacgccta caactccccg cccgcgttga ctcgctgcac ctcgagcagt tcgttgacgc 1920

cttcctccgt gtggccgaac acgtcgagcg ggtggtcgat gaccagcggc gtgccgcacg 1980

cgacgcacaa gtatctgtac accgaatgat cgtcgggcga aggcacgtcg gcctccaagt 2040

ggcaatattg gcaaattcga aaatatatac agttgggttg tttgcgcata tctatcgtgg 2100

cgttgggcat gtacgtccga acgttgattt gcatgcaagc cgaaattaaa tcattgcgat 2160

tagtgcgatt aaaacgttgt acatcctcgc ttttaatcat gccgtcgatt aaatcgcgca 2220

atcgagtcaa gtgatcaaag tgtggaataa tgttttcttt gtattcccga gtcaagcgca 2280

gcgcgtattt taacaaacta gccatcttgt aagttagttt catttaatgc aactttatcc 2340

aataatatat tatgtatcgc acgtcaagaa ttaacaatgc gcccgttgtc gcatctcaac 2400

acgactatga tagagatcaa ataaagcgcg aattaaatag cttgcgacgc aacgtgcacg 2460

atctgtgcac gcgttccggc acgagctttg attgtaataa gtttttacga agcgatgaca 2520

tgacccccgt agtgacaacg atcacgccca aaagaactgc cgactacaaa attaccgagt 2580

atgtcggtga cgttaaaact attaagccat ccaatcgacc gttagtcgaa tcaggaccgc 2640

tggtgcgaga agccgcgaag tatggcgaat gcatcgtata acgtgtggag tccgctcatt 2700

agagcgtcat gtttagacaa gaaagctaca tatttaattg atcccgatga ttttattgat 2760

aaattgaccc taactccata cacggtattc tacaatggcg gggttttggt caaaatttcc 2820

ggactgcgat tgtacatgct gttaacggct ccgcccacta ttaatgaaat taaaaattcc 2880

aattttaaaa aacgcagcaa gagaaacatt tgtatgaaag aatgcgtaga aggaaagaaa 2940

aatgtcgtcg acatgctgaa caacaagatt aatatgcctc cgtgtataaa aaaaatattg 3000

aacgatttga aagaaaacaa tgtaccgcgc ggcggtatgt acaggaagag gtttatacta 3060

aactgttaca ttgcaaacgt ggtttcgtgt gccaagtgtg aaaaccgatg tttaatcaag 3120

gctctgacgc atttctacaa ccacgactcc aagtgtgtgg gtgaagtcat gcatctttta 3180

atcaaatccc aagatgtgta taaaccacca aactgccaaa aaatgaaaac tgtcgacaag 3240

ctctgtccgt ttgctggcaa ctgcaagggt ctcaatccta tttgtaatta ttgaataata 3300

aaacaattat aaatgctaaa tttgtttttt attaacgata caaaccaaac gcaacaagaa 3360

catttgtagt attatctata attgaaaacg cgtagttata atcgctgagg taatatttaa 3420

aatcattttc aaatgattca cagttaattt gcgacaatat aattttattt tcacataaac 3480

tagacgcctt gtcgtcttct tcttcgtatt ccttctcttt ttcatttttc tcctcataaa 3540

aattaacata gttattatcg tatccatata tgtatctatc gtatagagta aattttttgt 3600

tgtcataaat atatatgtct tttttaatgg ggtgtatagt accgctgcgc atagtttttc 3660

tgtaatttac aacagtgcta ttttctggta gttcttcgga gtgtgttgct ttaattatta 3720

aatttatata atcaatgaat ttgggatcgt cggttttgta caatatgttg ccggcatagt 3780

acgcagcttc ttctagttca attacaccat tttttagcag caccggatta acataacttt 3840

ccaaaatgtt gtacgaaccg ttaaacaaaa acagttcacc tcccttttct atactattgt 3900

ctgcgagcag ttgtttgttg ttaaaaataa cagccattgt aatgagacgc acaaactaat 3960

atcacaaact ggaaatgtct atcaatatat agttgctgat atcatggaga taattaaaat 4020

gataaccatc tcgcaaataa ataagtattt tactgttttc gtaacagttt tgtaataaaa 4080

aaacctataa atattccgga ttattcatac cgtcccacca tcgggcgcgg atcagatctg 4140

cagcggccgc gggaattcga tccgccatga cgtatccaag gaggcgttac cgcagaagaa 4200

gacaccgccc ccgcagccat cttggccaga tcctccgccg ccgcccctgg ctcgtccacc 4260

cccgccaccg ctaccgttgg agaaggaaaa atggcatctt caacacccgc ctctcccgca 4320

ccttcggata tactgtcaag gctaccacag tcacaacgcc ctcctgggcg gtggacatga 4380

tgagatttaa tattgacgac tttgttcccc cgggaggggg gaccaacaaa atctctatac 4440

cctttgaata ctacagaata agaaaggtta aggttgaatt ctggccctgc tcccccatca 4500

cccagggtga taggggagtg ggctccactg ctgttattct agatgataac tttgtaacaa 4560

aggccacagc cctaacctat gacccatatg taaactactc ctcccgccat acaatccccc 4620

aacccttctc ctaccactcc cgttacttca cacccaaacc tgttcttgac tccactattg 4680

attacttcca accaaataac aaaaggaatc agctttggct gaggctacaa acctctagaa 4740

atgtggacca cgtaggcctc ggcactgcgt tcgaaaacag taaatacgac caggactaca 4800

atatccgtgt aaccatgtat gtacaattca gagaatttaa tcttaaagac cccccacttg 4860

aaccctaaga attctatcac tagtgaattc gcggccgccg gccgctccag aattctagaa 4920

ggtacccggg atcctttcct gggacccggc aagaaccaaa aactcactct cttcaaggaa 4980

atccgtaatg ttaaacccga cacgatgaag cttgtcgttg gatggaaagg aaaagagttc 5040

tacagggaaa cttggacccg cttcatggaa gacagcttcc ccattgttaa cgaccaagaa 5100

gtgatggatg ttttccttgt tgtcaacatg cgtcccacta gacccaaccg ttgttacaaa 5160

ttcctggccc aacacgctct gcgttgcgac cccgactatg tacctcatga cgtgattagg 5220

atcgtcgagc cttcatgggt gggcagcaac aacgagtacc gcatcagcct ggctaagaag 5280

ggcggcggct gcccaataat gaaccttcac tctgagtaca ccaactcgtt cgaacagttc 5340

atcgatcgtg tcatctggga gaacttctac aagcccatcg tttacatcgg taccgactct 5400

gctgaagagg aggaaattct ccttgaagtt tccctggtgt tcaaagtaaa ggagtttgca 5460

ccagacgcac ctctgttcac tggtccggcg tattaaaaca cgatacattg ttattagtac 5520

atttattaag cgctagattc tgtgcgttgt tgatttacag acaattgttg tacgtatttt 5580

aataattcat taaatttata atctttaggg tggtatgtta gagcgaaaat caaatgattt 5640

tcagcgtctt tatatctgaa tttaaatatt aaatcctcaa tagatttgta aaataggttt 5700

cgattagttt caaacaaggg ttgtttttcc gaaccgatgg ctggactatc taatggattt 5760

tcgctcaacg ccacaaaact tgccaaatct tgtagcagca atctagcttt gtcgatattc 5820

gtttgtgttt tgttttgtaa taaaggttcg acgtcgttca aaatattatg cgcttttgta 5880

tttctttcat cactgtcgtt agtgtacaat tgactcgacg taaacacgtt aaataaagct 5940

tggacatatt taacatcggg cgtgttagct ttattaggcc gattatcgtc gtcgtcccaa 6000

ccctcgtcgt tagaagttgc ttccgaagac gattttgcca tagccacacg acgcctatta 6060

attgtgtcgg ctaacacgtc cgcgatcaaa tttgtagttg agctttttgg aattatttct 6120

gattgcgggc gtttttgggc gggtttcaat ctaactgtgc ccgattttaa ttcagacaac 6180

acgttagaaa gcgatggtgc aggcggtggt aacatttcag acggcaaatc tactaatggc 6240

ggcggtggtg gagctgatga taaatctacc atcggtggag gcgcaggcgg ggctggcggc 6300

ggaggcggag gcggaggtgg tggcggtgat gcagacggcg gtttaggctc aaatgtctct 6360

ttaggcaaca cagtcggcac ctcaactatt gtactggttt cgggcgccgt ttttggtttg 6420

accggtctga gacgagtgcg atttttttcg tttctaatag cttccaacaa ttgttgtctg 6480

tcgtctaaag gtgcagcggg ttgaggttcc gtcggcattg gtggagcggg cggcaattca 6540

gacatcgatg gtggtggtgg tggtggaggc gctggaatgt taggcacggg agaaggtggt 6600

ggcggcggtg ccgccggtat aatttgttct ggtttagttt gttcgcgcac gattgtgggc 6660

accggcgcag gcgccgctgg ctgcacaacg gaaggtcgtc tgcttcgagg cagcgcttgg 6720

ggtggtggca attcaatatt ataattggaa tacaaatcgt aaaaatctgc tataagcatt 6780

gtaatttcgc tatcgtttac cgtgccgata tttaacaacc gctcaatgta agcaattgta 6840

ttgtaaagag attgtctcaa gctcgccgca cgccgataac aagccttttc atttttacta 6900

cagcattgta gtggcgagac acttcgctgt cgtcgacgta catgtatgct ttgttgtcaa 6960

aaacgtcgtt ggcaagcttt aaaatattta aaagaacatc tctgttcagc accactgtgt 7020

tgtcgtaaat gttgtttttg ataatttgcg cttccgcagt atcgacacgt tcaaaaaatt 7080

gatgcgcatc aattttgttg ttcctattat tgaataaata agattgtaca gattcatatc 7140

tacgattcgt catggccacc acaaatgcta cgctgcaaac gctggtacaa ttttacgaaa 7200

actgcaaaaa cgtcaaaact cggtataaaa taatcaacgg gcgctttggc aaaatatcta 7260

ttttatcgca caagcccact agcaaattgt atttgcagaa aacaatttcg gcgcacaatt 7320

ttaacgctga cgaaataaaa gttcaccagt taatgagcga ccacccaaat tttataaaaa 7380

tctattttaa tcacggttcc atcaacaacc aagtgatcgt gatggactac attgactgtc 7440

ccgatttatt tgaaacacta caaattaaag gcgagctttc gtaccaactt gttagcaata 7500

ttattagaca gctgtgtgaa gcgctcaacg atttgcacaa gcacaatttc atacacaacg 7560

acataaaact cgaaaatgtc ttatatttcg aagcacttga tcgcgtgtat gtttgcgatt 7620

acggattgtg caaacacgaa aactcactta gcgtgcacga cggcacgttg gagtatttta 7680

gtccggaaaa aattcgacac acaactatgc acgtttcgtt tgactggtac gcggcgtgtt 7740

aacatacaag ttgctaacgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc 7800

gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta 7860

atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa 7920

cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat 7980

tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 8040

agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 8100

aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 8160

gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 8220

tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 8280

cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 8340

ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 8400

cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 8460

atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 8520

agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 8580

gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 8640

gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 8700

tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 8760

agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 8820

gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 8880

aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 8940

aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 9000

ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat 9060

gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg 9120

aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg 9180

ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat 9240

tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc 9300

ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt 9360

cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc 9420

agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga 9480

gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc 9540

gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa 9600

acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta 9660

acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg 9720

agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg 9780

aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat 9840

gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt 9900

tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa 9960

aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct 10020

ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag 10080

acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc 10140

ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg 10200

cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga 10260

agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc 10320

aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc 10380

cagtgcc 10387

<210>9

<211>20

<212>PRT

<213>猪环状病毒

<400>9

Ser Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His His Pro Pro Ser

1 5 10 15

His Leu Gly Gln

20

<210>10

<211>19

<212>PRT

<213>猪环状病毒

<400>10

Pro Arg His His Tyr Arg Pro Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr

1 5 10 15

Thr Leu Ser

<210>11

<211>233

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>这是2型猪环状病毒第二开放阅读框的氨基酸序列。

<400>11

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg Hi s Arg Pro Arg

1 5 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro

20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Arg Thr

50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val

65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg Ile Lys Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr

100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr

130 135 140

Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr

145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn

180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Ile Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe

210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro

225 230

Claims

1.减少猪只或猪群中由一或多种除PCV2以外的病原体引起的伴随感染的百分比的方法，其包括对所述猪只或猪群施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤。

2.权利要求1之方法，其特征在于该伴随感染由病毒、细菌及/或真菌病原体引起。

3.权利要求2之方法，其特征在于该伴随感染由病毒病原体引起。

4.权利要求3之方法，其特征在于该伴随感染由PRRS引起。

5.权利要求2之方法，其特征在于该伴随感染由细菌病原体引起。

6.权利要求2之方法，其特征在于该伴随感染由肠道病原体引起。

7.权利要求2之方法，其特征在于该伴随感染由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae)、猪副嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)、猪鼻支原体(Mycoplasma hyrhinis)、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyo-pneumoniae)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)、沙门氏菌(Salmonellaspp.)、猪链球菌(Strepococcus suis)引起。

8.权利要求1至7中任一项之方法，其特征在于该等猪只或该猪群经PCV2感染。

9.权利要求1至8中任一项之方法，其特征在于，与未接种疫苗之对照组相比，与所述一或多种感染有关的伴随感染的百分比减少10％以上。

10.权利要求1至9中任一项之方法，其特征在于该PCV-2抗原为灭活的PCV-2、改良活PCV2或其任何免疫原性部分。

11.权利要求1至10中任一项之方法，其特征在于该PCV-2抗原为PCV2ORF-2或包含PCV2 ORF-2。

12.改善猪只对一或多种除PCV2以外的病原体伴随感染的抗性的方法，其包括对所述猪只施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤。

13.权利要求12之方法，其特征在于该伴随感染由病毒、细菌及/或真菌病原体引起。

14.权利要求13之方法，其特征在于该伴随感染由病毒病原体引起。

15.权利要求14之方法，其特征在于该伴随感染由PRRS引起。

16.权利要求13之方法，其特征在于该伴随感染由细菌病原体引起。

17.权利要求13之方法，其特征在于该伴随感染由肠道病原体引起。

18.权利要求13之方法，其特征在于该伴随感染由胸膜肺炎放线杆菌、猪副嗜血杆菌、猪鼻支原体、猪肺炎支原体、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌属、猪链球菌引起。

19.权利要求11至16中任一项之方法，其特征在于该等猪只被PCV2感染。

20.权利要求11至17中任一项之方法，其特征在于，与未接种疫苗之对照组相比，与所述一或多种感染有关之伴随感染之百分比减少10％以上。

21.权利要求11至18中任一项之方法，其特征在于该PCV-2抗原为灭活的PCV2、改良活PCV-2或其任何免疫原性部分。

22.权利要求11至19中任一项之方法，其特征在于该PCV-2抗原为PCV-2ORF-2或包含PCV-2ORF-2。

23.PCV-2抗原制备免疫原性组合物的用途，所述组合物用于减少猪只或猪群由一或多种除PCV2以外的病原体所引起之伴随感染。

24.权利要求21之用途，其特征在于该伴随感染由病毒、细菌及/或真菌病原体引起。

25.权利要求22之用途，其特征在于该伴随感染由病毒病原体引起。

26.权利要求23之用途，其特征在于该伴随感染由PRRS引起。

27.权利要求22之用途，其特征在于该伴随感染由细菌病原体引起。

28.权利要求23之用途，其特征在于该伴随感染由胸膜肺炎放线杆菌、猪副嗜血杆菌、猪鼻支原体、猪肺炎支原体、多杀性巴氏杆菌、沙门氏菌属、猪链球菌引起。

29.权利要求21至26中任一项之用途，其特征在于该等猪只或该猪群被PCV-2感染。

30.权利要求21至27中任一项之用途，其特征在于，与未接种疫苗之对照组相比，与所述一或多种感染有关之伴随感染之百分比减少10％以上。

31.权利要求21至28中任一项之用途，其特征在于该PCV-2抗原为灭活的PCV-2、改良活PCV-2或其任何免疫原性部分。

32.权利要求21至29中任一项之用途，其特征在于该PCV-2抗原为PCV-2ORF-2或包含PCV-2 ORF-2。