CN101578110A

CN101578110A - 治疗猪呼吸道疾病综合征

Info

Publication number: CN101578110A
Application number: CNA2008800017310A
Authority: CN
Inventors: 维基·法钦格; 克努特·埃尔伯斯; 玛丽昂·基克斯莫勒; 弗朗索瓦-泽维尔·奥维伦; 伊莎贝尔·弗赖因冯里奇索芬; 阿克塞尔·利谢夫斯基
Original assignee: Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
Current assignee: Boehringer Ingelheim Vetmedica GmbH
Priority date: 2007-01-03
Filing date: 2008-01-02
Publication date: 2009-11-11
Also published as: ES2773599T3; UA100502C2; CA2674188A1; US10010604B2; EP1941903A1; MX2009006541A; US9522182B2; ZA200903860B; CL2008000008A1; US20080305128A1; KR20090099005A; US20150273046A1; US20130115236A1; CN102872457A; WO2008081015A1; DK3017829T3; JP2010526023A; AU2008203710A1; AR064725A1; TW200848073A

Abstract

本发明涉及包含猪2型圆环病毒(PCV2)抗原的免疫原性组合物用于预防及治疗动物、尤其猪的猪呼吸道疾病综合征(PRDC)的用途。

Description

治疗猪呼吸道疾病综合征

序列表

本申请包含纸件形式和计算机可读形式的序列表，其中的教导和内容都引入本文做参考。该序列表与WO 06/072065的序列表一致。

发明领域

背景技术

猪2型圆环病毒(PCV2)为小型(直径为17nm-22nm)二十面体无包膜DNA病毒，其含有单链环状基因组。PCV2与猪1型圆环病毒(PCVl)共有大约80％之序列一致性。然而，与通常为非致病性之PCV1不同，猪感染PCV2近来已与多种疾病综合症(其共同称作猪圆环病毒疾病(PCVD)(亦称作猪圆环病毒相关疾病(PCVAD)))相关(Allan等人，2006，IPVS Congress)。通常认为离乳后多系统消耗性综合症(Postweaning Multisystemic WastingSyndrome；PMWS)为PCVD之主要临床表现(Harding等人，1997，Swine HealthProd；5：201-203；Kennedy等人，2000，J Comp Pathol；122：9-24)。PMWS侵袭介于5-18周龄之猪。PMWS之临床特征在于消瘦、皮肤苍白、生长迟滞、呼吸窘迫、腹泻、黄疸及黄胆。在一些受感染之猪中，将显而易见所有症状之组合，而其它受感染之猪将仅具有所述症状中之一或两者(Muirhead，2002，Vet.Rec.；150：456)。在尸检期间，显微镜可见及肉眼可见之病灶亦出现于多个组织及器官上，其中淋巴器官为最常见之病灶部位(Allan及Ellis，2000；J Vet.Diagn.Invest.，12：3-14)。已观测到PCV2核酸或抗原之量与显微镜可见淋巴病灶严重性之间的较强相关性。感染PCV2之猪之死亡率可达80％。

目前对PCV2参与除PMWS之外的猪疾病中的程度尚不甚了解(Chae，Veterinary J.，2005；169：326-336)。存在若干种在文献中报导之潜在相关病状，其包括猪呼吸道疾病综合征(PRDC)、猪皮肤病及肾病综合症(PDNS)、繁殖障碍、肉芽肿性肠炎及潜在先天性震颤(CT-AII)及周产期心肌炎(Chae，Veterinary J.，2005；169：326-336)。其中，由于PRDC之一般高流行性、高发病率(在感染农场为30％-70％)及死亡率(在感染农场为4％-6％)，认为其在欧洲具有最大经济影响(Kim等人，Veterinary J.，2003；166：251-256)。

罹患PRDC的猪的肺炎是由于病毒性病原体和细菌性病原体组合所致，所述病原体如PRRSV、猪流感病毒(Swine influenza virus；SIV)、猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae)、胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)及多杀巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)。尽管病因学涉及多种病原体且在各农场之间不同，但PRRSV及猪肺炎支原体为两种最常见的从表现PRDC的PCV2阳性猪分离到的病原体(Kim等人，Veterinary J.，2003；166：251-256)。仍未知PCV2是否在PRDC之病因或PRDC之临床迹象(clinical sign)之表现、严重性或延长中起任何作用。

与其它病毒性病原体相比，在罹患PRDC之猪之肺病灶中一致诊断出PCV2。前瞻性研究已证明由共同感染PCV2及PRRSV产生之肺炎及通常系统性疾病比与单独感染任一病原体相关之疾病更严重。因此可假定在PCV2与其它病原体之间存在明显协同效应，其已在该领域中之呼吸道疾病病例中观测到(Ellis等人，Veterinary Microbiol.，2004；98：159-163)。然而，仍未知PCV2(若存在于罹患PRDC之猪中)是否对猪之PRDC之临床迹象具有任何影响。由于在肥育(fattening)结束时具有高达100％血清反应阳性之PCV2动物普遍存在，类似地PCV2可对PRDC之疾病表现完全无影响，但仅为不相关共感染病原体。

尽管PMWS通常侵袭幼猪(通常介于5与12周龄之间)，但PRDC主要可见于生长至肥育猪(通常约为16至22周龄)中。发病率在30％-70％范围内，其中平均死亡率为4％-6％(Kim等人，Veterinary J.，2003；166：251-256)。PRDC之临床迹象为难以用抗生素疗法治愈之长期且异常严重之咳嗽及呼吸困难(dyspnea)、生长缓慢、饲料效率(feed efficiency)降低、昏睡(lethargy)、厌食(anorexia)及在肥育中期至后期死亡率显著增加。

显微镜可见病灶PRDC之特点为具有支气管周及细支气管周纤维化之支气管性间质性肺炎。巨噬细胞之浸润显著增厚肺泡隔(Chae，Veterinary J.，2005；169：326-336)。

基于DNA疫苗之治疗PCV2感染之方法描述于美国专利第6,703,023号中。在WO 03/049703中描述嵌合活疫苗的制备，该嵌合活疫苗包含PCV-1骨架，且该骨架中有基因被致病性PCV2病毒株的免疫原性基因置换。WO99/18214已提供若干种PCV2病毒株及用于制备PVC2灭活疫苗的方法。但未曾报导功效资料。WO 06/072065已报导有效的基于ORF-2的亚单位疫苗。任一种上述疫苗都意欲用于3周龄以上的猪的疫苗接种/治疗。任何所述疫苗均未描述用于免疫预防或治疗罹患PRDC之猪、尤其罹患PRDC之PCV2阳性猪。

此外，尚无人描述：所述疫苗赋予抗PCV2感染的保护性免疫力，或降低、减轻已具有抗PCV2抗体(优选具有母体抗PC2抗体)的猪中与其相关之任何临床症状的严重性，或治愈与其相关之任何临床症状。

附图说明

图1：按周数分组的各个组之间体重增加程度的差异。

图2：研究过程中体重差异(IVP-CP)及平均病毒负载量(log 10)的变化。

发明内容

PRDC之特征在于多种临床迹象，其包括难以用抗生素疗法治愈之长期且异常严重之咳嗽及呼吸困难、生长缓慢、饲料效率降低、昏睡、厌食及在肥育中期至后期死亡率显著增加。这些临床迹象与多种不同病原体有关。迄今未知是否PCV2参与PRDC及(若参与时)PCV2参与PRDC的程度。已意外发现在各种病原体中，PCV2亦在PRDC之临床迹象之表现、严重性及延长中起重要作用。因此在各种病原体中，PCV2是猪PRDC的其中一种病原体。

一般而言，一种病原体对如PRDC之多病因疾病(等于多因素疾病)之影响不可预测。病原体可无影响，但亦转移、抑制、替代、覆盖或加强其它病原体对多因素疾病(如PRDC)之临床迹象之表现、严重性及延长的影响。举例而言，若存在至少一种其它病原体，则多因素疾病(如PRDC)之一种病原体之减少或消除可对彼疾病之临床征兆无影响，但亦可显著减少彼疾病之临床症状，即使在任何其它病原体存在下亦如此。所涉及之病原体之数目愈多，则仅一种病原体之减少或消除对疾病之表现持续时间、严重性或延长之正面影响的期望愈低。如今已意外发现藉由用PCV2抗原免疫预防或治疗受威胁或受感染动物可减轻或降低猪之PRDC临床迹象之表现、严重性及延长。详言之，在感染PCV2以及已知造成猪之PRDC或与其相关之病原体(诸如PRRSV、猪肺炎支原体、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体和/或多杀巴斯德氏菌)之猪中，PRDC之临床迹象或与其相关之临床迹象之严重性及延长可强烈减轻及降低。换言之，用PCV2抗原来免疫预防及治疗罹患PRDC之猪对猪之整体健康、肥育期间之体重增加及猪肥育中期至晚期之死亡率具有正面影响，尤其因为已知所述因素(整体健康、体重增加、死亡率)受PRRSV、猪肺炎支原体、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体和/或多杀巴斯德氏菌负面影响。

因此，根据一方面，本发明提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象之方法，其包含向需要此治疗之动物施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤。

与PRDC相关之临床迹象选自由咳嗽及呼吸困难、生长缓慢、饲料效率降低、昏睡、厌食和/或在肥育中期至后期死亡率显著增加组成的组。因此根据另一方面，本发明涉及一种免疫预防及治疗动物之咳嗽及呼吸困难、生长缓慢、饲料效率降低、昏睡、厌食和/或与PRDC相关之死亡率显著增加的方法，其包含向需要此治疗之动物施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤。优选地，该咳嗽及呼吸困难系难以用抗生素疗法治愈。

本文中术语″抗原″系指引起宿主免疫反应之氨基酸序列。本文中，抗原包括任何PCV2蛋白之全长序列、其类似物或其免疫原性片段。术语″免疫原性片段″系指包括一或多个表位且由此引起宿主免疫反应之蛋白质片段。可使用本领域已知的任何数目之表位定位技术来鉴别所述片段。例如参见Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology，第66卷(Glenn E.Morris编，1996)Humana Press，Totowa，New Jersey。举例而言，可藉由(例如)同时在固体支撑物上合成大量肽(所述肽对应于蛋白质分子的各个部分)且使所述肽与抗体反应(同时所述肽仍与支撑物连接)来测定线性表位。所述技术为本领域已知且描述于(例如)美国专利第4,708,871号；Geysen等人(1984)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：3998-4002；Geysen等人(1986)Molec.Immunol.23：709-715中。同样地，构象性表位易于通过用X射线晶体学及2维核磁共振等方法测定氨基酸的空间构形而加以鉴别。例如参见EpitopeMapping Protocols，同上。

合成抗原亦包括于该定义中，例如多表位、侧接表位及其它重组或合成得到之抗原。例如参见Bergmann等人(1993)Eur.J.Immunol.23：2777-2781；Bergmann等人(1996)，J.Immunol.157：3242-3249；Suhrbier，A.(1997)，Immunol.and Cell Biol.75：402-408；Gardner等人，(1998)12th World AIDSConference，Geneva，Switzerland，1998年6月28日-7月3日。

″免疫反应″意谓(但不限于)在宿主中发生抗目标抗原、免疫原性组合物或疫苗的细胞和/或抗体介导的免疫反应。通常，″免疫反应″包括(但不限于)一或多种以下效应：特异性针对目标组合物或疫苗中所包括之一或多种抗原之抗体、B细胞、辅助T细胞、抑制T细胞和/或细胞毒性T细胞的产生或活化。优选地，宿主将显示治疗性或保护性免疫学(记忆)反应以使得对新感染之抗性将增强和/或疾病之临床严重性降低。此保护将由PCV2感染之数目或严重性的降低或一或多种与PCV2感染相关之症状之缺乏、病毒血症发作之延迟、病毒持续性降低、总病毒负载量降低和/或病毒性排泄物减少来证实。

本文中术语″免疫原性组合物″或″疫苗″(两种术语系同义使用)系指含有PCV2抗原之任何药物组合物，该组合物可用于预防或治疗受检者之PCV2感染相关疾病或病状。优选免疫原性组合物可诱发、刺激或增强针对PCV2之免疫反应。因此该术语涵盖如下所述之亚单位免疫原性组合物，以及含有全灭活或减毒和/或失活PCV2之组合物。

因此根据另一方面，本发明涉及一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向需要此治疗的动物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该免疫原性组合物为亚单位免疫原性组合物、含有全灭活或减毒和/或失活PCV2之组合物。

本文中术语″亚单位免疫原性组合物″系指含有至少一种来源于PCV2之抗原或与PCV2之抗原同源的免疫原性多肽或抗原、而非所有抗原的组合物。此组合物大体上不含完整PCV2。因此，″亚单位免疫原性组合物″系由来自PCV2或其重组类似物之至少部分纯化或分级分离(优选大体上纯化)之免疫原性多肽制备。亚单位免疫原性组合物可包含大体上不含来自PCV2之其它抗原或多肽或呈分级分离形式的目标亚单位抗原。优选免疫原性亚单位组合物包含如下所述之PCV2ORF-2蛋白质。最优选者为免疫原性亚单位组合物，其包含WO 06/072065中提供之PCV2抗原中之任一者，该文献系以引用的方式全部并入本文中。

根据其它方面，本文所述免疫原性组合物最优选包含由PCV2ORF-2表达之多肽或其片段。在本文中用于制备组合物且在本文所述方法中的PCV2ORF-2DNA及蛋白质为PCV2分离株内高度保守之域，且进而任何PCV2ORF-2可有效作为如本文中使用之PCV ORF-2DNA和/或多肽的来源。优选PCV2ORF-2蛋白质为WO 06/072065之SEQ ID NO：11之PCV2ORF-2蛋白质。另一优选PCV ORF-2多肽系以WO 06/072065之SEQ ID NO：5形式提供。然而，本领域技术人员应了解此序列可在序列同源性方面改变多达6％-10％且仍保持使其适用于免疫原性组合物中之抗原特征。免疫学组合物之抗原特征可(例如)由如由WO 06/072065之实例4提供之激发实验评估。此外，与如WO 06/072065中提供之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之多核苷酸序列编码的PCV2ORF-2蛋白质相比，当经修饰抗原赋予至少70％、优选80％、更优选90％之保护免疫性时，经修饰抗原之抗原特征仍得以保持。

因此根据另一方面，本发明提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象之方法，其包含向需要此治疗的动物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该PCV2抗原为抗原PCV2ORF-2蛋白质，与如由WO06/072065中提供之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之多核苷酸序列编码的PCV2ORF-2蛋白质相比，其具有至少70％、优选80％、甚至更优选90％之保护免疫性。该PCV2ORF-2优选具有WO 06/072065之SEQ ID NO：11或SEQID NO：5之序列。

在一些形式中，PCV2ORF-2蛋白质之免疫原性部分系用作包含PCV2抗原之免疫原性组合物中的抗原组份。本文中术语″免疫原性部分″系指PCV2ORF-2蛋白质和/或多核苷酸各自之截短形式和/或经取代形式或片段。优选地，所述截短形式和/或经取代形式或片段应包含全长ORF-2多肽之至少6个连续氨基酸。更优选地，截短形式或经取代形式或片段应具有全长PCV ORF-2多肽之至少10个，更优选至少15个且更优选至少19个连续氨基酸。此方面中之两个优选序列系以WO 06/072065之SEQ ID NO：9及SEQ IDNO：10形式提供。应进一步了解所述序列可为较大片段或截短形式之部分。

如上所述，另一优选PCV2ORF-2多肽为由SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之核苷酸序列编码之任一多肽。然而，本领域技术人员应了解此序列可在序列同源性方面改变多达6％-20％且仍保持使其适用于免疫原性组合物中之抗原特征。在一些形式中，此PVC2ORF-2多肽之截短或经取代形式或片段系用作组合物中之抗原组份。优选地，所述截短或经取代形式或片段应包含(例如)SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之全长PCV2ORF-2核苷酸序列之至少18个连续核苷酸。更优选地，所述截短或经取代形式或片段应具有(例如)SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之全长PCV2ORF-2核苷酸序列之至少30个、更优选至少45个且更优选至少57个连续核苷酸。

本领域已知的″序列一致性″系指两个或两个以上多肽序列或两个或两个以上多核苷酸序列(亦即参考序列与待与参考序列比较之给定序列)之间之关系。如由所述序列之间的匹配所测定，序列一致性系在序列经最优选比对以产生最高序列相似度后，藉由比较给定序列与参考序列而测定。在此比对后，在位置-位置基础上确定序列一致性，例如，若在一特定位置处核苷酸或氨基酸残基一致，则所述序列在彼位置处″一致″。随后将所述位置一致性之总数除以参考序列中核苷酸或残基之总数以得到序列一致性百分比。可易于由已知方法来计算序列一致性，所述方法包括(并不限于)以下文献中描述之方法：Computational Molecular Biology，Lesk，A.N.编，OxfordUniversity Press，New York(1988)；Biocomputing：Informatics and GenomeProjects，Smith，D.W.编，Academic Press，New York(1993)；Computer Analysisof Sequence Data，部分I，Griffin，A.M.及Griffin，H.G.编，Humana Press，NewJersey(1994)；Sequence Analysis in Molecular Biology，von Heinge，G.，Academic Press(1987)；Sequence Analysis Primer，Gribskov，M.及Devereux，J.编，M.Stockton Press，New York(1991)；及Carillo，H.及Lipman，D.，SIAM J.Applied Math.，48：1073(1988)，其教示内容系以引用的方式并入本文中。测定序列一致性之优选方法经设计以得到所测试序列之间的最大匹配。测定序列一致性之方法已在测定给定序列之间的序列一致性之公开可用计算机程序中编码。所述程序之实例包括(但不限于)GCG程序套件(Devereux，J.等人，Nucleic Acids Research，12(1)：387(1984))、BLASTP、BLASTN及FASTA(Altschul，S.F.等人，J.Molec.Biol.，215：403-410(1990))。BLASTX程序可公开获自NCBI及其它来源(BLAST Manual，Altschul，S.等人，NCVINLM NIH Bethesda，MD 20894，Altschul，S.F.等人，J.Molec.Biol.，215：403-410(1990)，其教示内容系以引用的方式并入本文中)。所述程序使用预设空隙权重(default gap weight)最优选比对序列以产生给定序列与参考序列之间的最高程度之序列一致性。举例而言，具有与参考核苷酸序列具有至少(例如)85％、优选90％、甚至更优选95％″序列一致性″之核苷酸序列之多核苷酸意谓除给定多核苷酸序列可在参考核苷酸序列之每各100个核苷酸中包括至多15个、优选至多10个、甚至更优选至多5个点突变之外，给定多核苷酸之核苷酸序列与参考序列一致。换言之，在具有相对于参考核苷酸序列具有至少85％、优选90％、甚至更优选95％一致性之核苷酸序列之多核苷酸中，参考序列中之至多15％、优选10％、甚至更优选5％之核苷酸可缺失或经另一核苷酸取代，或可将参考序列中全部核苷酸之至多15％、优选10％、甚至更优选5％之多个核苷酸插入参考序列中。参考序列之所述突变可发生在参考核苷酸序列之5′或3′末端位置处或所述末端位置之间的任何地方，个别地散布于参考序列中之核苷酸之间或参考序列内之一或多个连续群中。同样地，具有与参考氨基酸序列具有至少(例如)85％、优选90％、甚至更优选95％序列一致性之给定氨基酸序列之多肽意谓除给定多肽序列可在参考核苷酸序列之每各100个氨基酸中包括至多15、优选至多10、甚至更优选至多5个氨基酸变异之外，多肽之给定氨基酸序列与参考序列一致。换言之，为获得与参考氨基酸序列具有至少85％、优选90％、甚至更优选95％序列一致性之给定多肽序列，参考序列中之至多15％、优选至多10％、甚至更优选至多5％之氨基酸残基可缺失或经另一氨基酸取代，或可将参考序列中氨基酸残基总数之至多15％、优选至多10％、甚至更优选至多5％之多个氨基酸插入参考序列中。参考序列之所述变异可发生于参考氨基酸序列之胺基末端或羧基末端位置处或所述末端位置之间的任何地方，个别地散布于参考序列中之残基之间或参考序列内之一或多个连续群中。优选地，不一致之残基位置系因保守性氨基酸取代而不同。然而，当测定序列一致性时，不包括保守性取代作为匹配。

本文所述″序列同源性″系指一种测定两个序列之相关性的方法。为测定序列同源性，最优选比对两个或两个以上序列且必要时引入空隙。然而，与″序列一致性″不同，当测定序列同源性时，将保守性氨基酸取代计为匹配。换言之，为获得与参考序列具有95％序列同源性之多肽或多核苷酸，参考序列中之85％、优选90％、甚至更优选95％之氨基酸残基或核苷酸须与另一氨基酸或核苷酸匹配或包含经另一氨基酸或核苷酸之保守性取代，或可将参考序列中全部氨基酸残基或核苷酸(不包括保守性取代)之至多15％、优选至多10％、甚至更优选至多5％之多个氨基酸或核苷酸插入参考序列中。同源序列优选包含至少一段50个，甚至更优选至少100个，甚至更优选至少250个且甚至更优选至少500个核苷酸。

″保守性取代″系指一个氨基酸残基或核苷酸经另一个具有类似特征或性质(包括大小、疏水性等)之氨基酸残基或核苷酸取代，以使得整体功能不显著改变。

″分离″意谓″藉由人工″自其天然状态改变，亦即若其存在于自然界中，则其已自原始环境改变或移出，或两者。举例而言，天然存在于活有机体中之多核苷酸或多肽系未经″分离″，当该术语用于本文中时，与天然状态之共存物质分离之相同多核苷酸或多肽系经″分离″。

因此，根据另一方面，本发明提供一种预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象之方法，其包含向需要此治疗之动物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该PCV2ORF-2蛋白质为上述蛋白质中之任一者。该PCV2ORF-2蛋白质优选为：

i)包含WO 06/07065之SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11之序列的多肽；

ii)与i)之多肽至少80％同源的任何多肽，

iii)i)和/或ii)之多肽之任何免疫原性部分，

iv)iii)之免疫原性部分，其包含包括于WO 06/072065之SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10或SEQ ID NO：11之序列中的至少10个连续氨基酸，

v)由包含WO 06/072065之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之序列的DNA编码之多肽，

vi)由与v)之多核苷酸至少80％同源之多核苷酸编码的任何多肽，

vii)由v)和/或vi)之多核苷酸编码之多肽的任何免疫原性部分，

viii)vii)之免疫原性部分，其中编码该免疫原性部分之多核苷酸包含包括于WO 06/072065之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之序列中的至少30个连续核苷酸。

所述免疫原性部分中之任一者优选具有由WO 06/07065之SEQ ID NO：3或SEQ ID NO：4之序列编码的PCV2ORF-2蛋白质之免疫原性特征。

根据另一方面，PCV2ORF-2蛋白质系以可有效诱发所需免疫反应(亦即降低PRDC和/或与PRDC相关之任何临床症状之发病率、减轻PRDC和/或与PRDC相关之任何临床症状之严重性或预防或减少PRDC和/或与PRDC相关之任何临床症状)之抗原包涵量提供于免疫原性组合物中。PCV2ORF-2蛋白质包涵量优选为每毫升最终免疫原性组合物至少0.2μg抗原(μg/ml)、更优选约0.2μg/ml至约400μg/ml、更优选约0.3μg/ml至约200μg/ml、甚至更优选约0.35μg/ml至约100μg/ml、更优选约0.4μg/ml至约50μg/ml、更优选约0.45μg/ml至约30μg/ml、更优选约0.6μg/ml至约15μg/ml、甚至更优选约0.75μg/ml至约8μg/ml、甚至更优选约1.0μg/ml至约6μg/ml、更优选约1.3μg/ml至约3.0μg/ml、甚至更优选约1.4μg/ml至约2.5μg/ml、甚至更优选约1.5μg/ml至约2.0μg/ml且最优选约1.6μg/ml。

根据另一方面，PCV ORF-2抗原包涵量为每剂最终抗原组合物至少0.2微克如上所述之PCV2ORF-2蛋白质(微克/剂)、更优选约0.2微克/剂至约400微克/剂、更优选约0.3微克/剂至约200微克/剂、甚至更优选约0.35微克/剂至约100微克/剂、更优选约0.4微克/剂至约50微克/剂、更优选约0.45微克/剂至约30微克/剂、更优选约0.6微克/剂至约15微克/剂、甚至更优选约0.75微克/剂至约8微克/剂、甚至更优选约1.0微克/剂至约6微克/剂、更优选约1.3微克/剂至约3.0微克/剂、甚至更优选约1.4微克/剂至约2.5微克/剂、甚至更优选约1.5微克/剂至约2.0微克/剂且最优选约1.6微克/剂。

可以包括PCV2ORF2之分离及纯化、标准蛋白质合成及重组方法之任何方式获得用于本发明之免疫原性组合物中之PCV2ORF-2多肽。用于获得PCV2ORF-2多肽之优选方法提供于WO 06/072065中，其教示及内容系以引用的方式全部并入本文中。简言之，用含有PCV2ORF-2DNA编码序列之重组病毒载体感染易感细胞，由重组病毒表达PCV2ORF-2多肽且藉由过滤自上清液回收所表达之PCV2ORF-2多肽且由任何常规方法、优选使用二元氮丙啶使其失活，随后将其中和以终止失活过程。

本文所述免疫原性组合物亦系指包含以下各物之组合物：i)优选具有上述浓度之上述PCV2ORF-2蛋白质中之任一者，及ii)表达该PCV2ORF-2蛋白质之病毒载体、优选重组杆状病毒之至少一部分。此外，免疫原性组合物可包含：i)优选具有上述浓度之上述PCV2ORF-2蛋白质中之任一者，ii)表达该PCV2ORF-2蛋白质之病毒载体、优选重组杆状病毒之至少一部分，及iii)一部分细胞培养物上清液。

因此，根据另一方面，本发明提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象之方法，其包含向需要此治疗的动物施用有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该PCV2抗原为重组PCV2ORF-2、优选为杆状病毒表达之PCV2ORF-2。所述重组或杆状病毒表达PCV2ORF-2优选具有如上所述之序列。

本文所述免疫原性组合物亦系指包含以下各物之组合物：i)优选具有上述浓度之上述PCV2ORF-2蛋白质中之任一者，ii)表达该PCV2ORF-2蛋白质之病毒载体、优选重组杆状病毒之至少一部分，及iii)一部分细胞培养物；其中约90％之组份具有小于1μm之大小。

本文所述免疫原性组合物亦系指包含以下各物之组合物：i)优选具有上述浓度之上述PCV2ORF-2蛋白质中之任一者，ii)表达该PCV2ORF-2蛋白质之病毒载体之至少一部分，iii)一部分细胞培养物，iv)及使重组病毒载体失活之失活剂，优选为BEI，其中约90％之组份i)至组份iii)具有小于1μm之大小。BEI优选以可有效使杆状病毒失活之浓度存在，优选为2mM至约8mMBEI、优选约5mM BEI之量。

本文所述免疫原性组合物亦系指包含以下各物之组合物：i)优选具有上述浓度之上述PCV2ORF-2蛋白质中之任一者，ii)表达该PCV2ORF-2蛋白质之病毒载体之至少一部分，iii)一部分细胞培养物，iv)使重组病毒载体失活之失活剂，优选为BEI，及v)终止由失活剂所介导之失活之中和剂，其中约90％之组份i)至组份iii)具有小于1μm之大小。优选地，若失活剂为BEI，则该组合物包含与BEI等量之硫代硫酸钠。

将多肽并入可施用对PCV2感染敏感之动物之组合物中。在优选形式中，组合物亦可包括本领域技术人员已知之其它组份(亦参见Remington′sPharmaceutical Sciences.(1990)。第18版，Mack Publ.，Easton)。另外，该组合物可包括一或多种兽医学上可接受之载剂。本文中，“兽医学上可接受之载剂”包括任何及所有溶剂、分散介质、涂料、佐剂、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂、吸收延迟剂及其类似载剂。在一优选实施例中，免疫原性组合物包含优选具有上述浓度之如由此提供之PCV2ORF-2蛋白质，其系与佐剂(优选Carbopol)及生理盐水混合。

本领域技术人员应了解本文中所用之组合物可并有已知可注射、生理学上可接受之无菌溶液。为制备用于非经肠注射或输液之即用溶液，现成可用诸如盐水或相应血浆蛋白质溶液之等渗水溶液。另外，本发明之免疫原性组合物及疫苗组合物可包括稀释剂、等渗剂、稳定剂或佐剂。稀释剂可包括水、盐水、右旋糖、乙醇、甘油及其类似物。等渗剂尤其可包括氯化钠、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇及乳糖。稳定剂尤其包括白蛋白及乙二胺四乙酸之碱金属盐。

本文所述″佐剂″可包括氢氧化铝及磷酸铝；皂素，例如Quil A、QS-21(Cambridge Biotech Inc.，Cambridge MA)、GPI-0100(GalenicaPharmaceuticals，Inc.，Birmingham，AL)；油包水乳液；水包油乳液；水/油/水乳液。乳液尤其可基于轻液体石蜡油(European Pharmacopea类型)；由烯烃、尤其异丁烯或癸烯之低聚合产生之类异戊二烯油，诸如角鲨烷油或角鲨烯油；含有直链烷基之酸或醇之酯，更特定言之植物油、油酸乙酯、丙二醇二-(辛酸酯/癸酸酯)、甘油三-(辛酸酯/癸酸酯)或丙二醇二油酸酯；支链脂肪酸或醇之酯，尤其异硬脂酸酯。该油系与乳化剂组合使用以形成乳液。乳化剂优选为非离子型界面活性剂，尤其视情况经乙氧基化之脱水山梨糖醇酯、二缩甘露醇酯(例如无水甘露糖醇油酸酯)、乙二醇酯、聚甘油酯、丙二醇酯，及油酸酯、异硬脂酸酯、蓖麻油酸酯或羟基硬脂酸酯，及聚氧化丙烯-聚氧化乙烯共聚物嵌段体，尤其泊洛尼克(Pluronic)产品，尤其为L121。参见Hunter等人，The Theory and Practical Application ofAdjuvants(Stewart-Tull，D.E.S.编).John Wiley and Sons，NY，第51-94页(1995)及Todd等人，Vaccine 15：564-570(1997)。

举例而言，有可能使用″Vaccine Design，The Subunit and AdjuvantApproach″，M.Powell及M.Newman编，Plenum Press，1995之第147页所述之SPT乳液，及此同一本着作之第183页所述之乳液MF59。

佐剂之另一实例为选自丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物及顺丁烯二酸酐及烯基衍生物之共聚物的化合物。有利佐剂化合物为尤其与糖或多元醇之聚烯基醚交联之丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物。所述化合物称为术语卡波姆(carbomer)(Phameuropa，第8卷，第2期，1996年6月)。本领域技术人员亦可参看美国专利第2,909,462号，其描述与具有至少3个羟基、优选不超过8个羟基之多羟基化合物交联的所述丙烯酸聚合物，其中至少三个羟基之氢原子经具有至少2个碳原子之不饱和脂族基团置换。优选基团为含有2至4个碳原子之基团，例如乙烯基、烯丙基及其它烯系不饱和基团。所述不饱和基团可自身含有诸如甲基之其它取代基。以名称Carbopol(BF Goodrich，Ohio，USA)销售之产品尤其适合。其与烯丙基蔗糖或烯丙基异戊四醇交联。其中，可提及Carbopol 974P、Carbopol 934P及Carbopol 971P。最优选使用优选每剂约500μg至约5mg之量、甚至更优选每剂约750μg至约2.5mg之量且最优选每剂约1mg之量的Carbopol，尤其使用Carbopol 971P。

其它适合佐剂尤其包括(但不限于)RIBI佐剂系统(Ribi Inc.)、嵌段共聚物(CytRx，Atlanta GA)、SAF-M(Chiron，Emeryville CA)、单磷酰基脂质A、安夫利定(Avridine)脂质胺佐剂、来自大肠杆菌(E.coli)之热不稳定肠毒素(重组或其它)、霍乱毒素、IMS 1314或胞壁酰二肽。

优选添加每剂约100μg至约10mg佐剂。甚至更优选添加每剂约100μg至约10mg佐剂。甚至更优选添加每剂约500μg至约5mg佐剂。甚至更优选添加每剂约750μg至约2.5mg佐剂。最优选添加每剂约1mg佐剂。

另外，组合物可包括一或多种医药上可接受之载剂。本文中，″医药上可接受之载剂″包括任何及所有溶剂、分散介质、涂料、稳定剂、稀释剂、防腐剂、抗细菌剂及抗真菌剂、等渗剂、吸收延迟剂及其类似物。由此提供之组合物最优选含有自活体外培养细胞之上清液回收的PCV2ORF-2蛋白质，其中所述细胞系经含有PCV2ORF-2DNA且表达PCV2ORF-2蛋白质之重组病毒载体感染，且其中该细胞培养物系经约2mM至约8mM BEI、优选约5mM BEI处理以使病毒载体失活，且用相等浓度之中和剂(优选硫代硫酸钠溶液)处理至最终浓度为约2mM至约8mM、优选约5mM。

本发明亦涉及免疫原性组合物用于免疫预防或治疗PRDC或减少与PRDC相关之任何临床迹象的用途，该免疫原性组合物包含：i)优选具有上述浓度之上述PCV2ORF-2蛋白质中之任一者，ii)表达该PCV2ORF-2蛋白质之病毒载体之至少一部分，iii)一部分细胞培养物，iv)使重组病毒载体失活之失活剂，优选为BEI，及v)终止由失活剂所介导之失活之中和剂，优选为与BEI等量之硫代硫酸钠；及vi)适当佐剂，优选为上述量之Carbopol 971；其中约90％之组份i)至组份iii)具有小于1μm之大小。根据另一方面，此免疫原性组合物进一步包含呈生理学上可接受之浓度的医药学上可接受之盐、优选磷酸盐。优选将该免疫原性组合物之pH值调节至生理pH值，意谓介于约6.5与7.5之间。

本文所述免疫原性组合物亦系指一种组合物，其每一毫升包含：i)至少1.6μg上述PCV2ORF-2蛋白质；ii)表达该PCV2ORF-2蛋白质之杆状病毒之至少一部分；iii)一部分细胞培养物；iv)约2mM至8mM BEI；v)与BEI等量之硫代硫酸钠；及vi)约1mg Carbopol 971；及vii)生理学上可接受之浓度之磷酸盐；其中约90％之组份i)至组份iii)具有小于1μm之大小且将该免疫原性组合物之pH值调节至约6.5至7.5。

免疫原性组合物可进一步包括一或多种其它免疫调节剂，诸如白细胞介素、干扰素或其它细胞因子。免疫原性组合物亦可包括庆大霉素(Gentamicin)及硫柳汞(Merthiolate)。尽管本领域技术人员可易于确定适用于本发明情况下之佐剂及添加剂之量及浓度，但本发明涵盖包含约50μg至约2000μg佐剂之组合物且优选每毫升剂量疫苗组合物包含约250μg佐剂。因此，本文所述免疫原性组合物亦系指包含约1μg/ml至约60μg/ml抗生素且更优选小于约30μg/ml抗生素之组合物。

本文所述免疫原性组合物亦系指包含以下各物之组合物：i)优选具有上述浓度之上述PCV2ORF-2蛋白质中之任一者，ii)表达该PCV2ORF-2蛋白质之病毒载体之至少一部分，iii)一部分细胞培养物，iv)使重组病毒载体失活之失活剂，优选为BEI，及v)终止由失活剂所介导之失活之中和剂，优选为与BEI等量之硫代硫酸钠；vi)适当佐剂，优选为上述量之Carbopol 971；vii)医药学上可接受之浓度之盐水缓冲液，优选为磷酸盐，及viii)抗微生物活性剂；其中约90％之组份i)至组份iii)具有小于1μm之大小。

本文所述免疫原性组合物亦系指

CircoFLEX^TM(BoehringerIngelheim Vetmedica Inc，St Joseph，MO，USA)、Circo

(Merial SAS，Lyon，France)、Porcilis PCV(Intervet Inc.，Millsboro，DE，USA)或Suvaxyn PCV-2One

(Fort Dodge Animal Health，Kansas City，KA，USA)。因此，本发明亦提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向需要此治疗之动物施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该包含PCV2抗原之免疫原性组合物为

CircoFLEX^TM、Circo

Porcilis PCV和/或Suvaxyn PCV-2One其优选为

CircoFLEX^TM。

如上所述，PCV2已经鉴别为PRDC之一种相关病原体。大多数罹患PRDC之猪对PCV2呈阳性(例如Kim等人，Veterinary Journal(2003)166：251-256)。用PCV2抗原来治疗猪使得PRDC之呼吸道症状减少(参见实施例3)。因此根据另一方面，本发明提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向需要此治疗之动物施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该PRDC或与PRDC相关之所述临床迹象系与PCV2相关或由PCV2造成。此外，本发明亦提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向需要此治疗之动物施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该PRDC或与PRDC相关之所述临床迹象系与PCV2及PRRSV、胸膜肺炎放线杆菌、猪肺炎支原体、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌(Streptococcus suis)和/或多杀巴斯德氏菌相关或由其造成。

因为PCV2为PRDC之一种病原体，所以对PCV2呈阳性之畜群比不含PCV2之畜群具有更高的患上PRDC或患上更严重持续时间之具有严重临床症状之PRDC的风险。本文中术语″对PCV2呈阳性之畜群″意谓畜群动物之至少1％、优选10％、更优选30％、甚至更优选50％、最优选70％感染有PCV2或在任何时间变为感染有PCV2。此未必意谓该畜群之任何动物均出现已知由PCV2造成之临床症状(诸如PMWS或PRDC)。因此根据另一方面，本发明亦提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向需要此治疗之动物施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该动物属于对PCV2呈阳性之畜群。PRDC和/或与PRDC相关之任何临床迹象优选系由PCV2造成。

因为在共感染PRDC之其它致病性病原体之动物中，PRDC及PRDC之临床症状亦可减轻或减少，所以本发明亦提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向需要此治疗之动物施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该动物属于对PCV2及一或多种选自由PRRSV、猪肺炎支原体、胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌组成的组之其它病原体呈阳性的畜群。PRDC和/或与PRDC相关之任何临床迹象优选系由PCV2及至少一种其它PRDC致病性病原体造成。本文中术语″对PCV2及一或多种选自由PRRSV、猪肺炎支原体、胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌组成的组之其它病原体呈阳性的畜群″意谓畜群动物之至少10％、优选30％、更优选50％、甚至更优选70％感染有PCV2及至少一种下文列出之其它病原体或在任何时间变为感染有PCV2及至少一种下文列出之其它病原体感染。此未必意谓该畜群之任何动物均出现已知由PCV2及至少一种上文列出之病原体造成之临床症状(例如PRDC)。PRDC和/或与PRDC相关之任何临床迹象优选至少由PCV2造成。

PRDC并非仅侵袭确定数目之动物，其通常侵袭畜群之所有动物(整个畜群)。换言之，若农场中至少一只动物发生PRDC，则PRDC之病原体持续存在于彼农场之牲畜中。因此根据另一方面，本发明亦提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向需要此治疗之动物施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该动物属于对PCV2呈阳性之畜群。PRDC和/或与PRDC相关之任何临床迹象优选系由PCV2造成。本文中术语″对PCV2呈阳性之畜群″意谓畜群动物之至少1％、优选10％、更优选30％、甚至更优选50％、最优选70％感染有PCV2或在任何时间变为感染有PCV2。此未必意谓该农场之任何动物均出现已知由PCV2造成之临床症状(诸如PMWS或PRDC)。PRDC和/或与PRDC相关之任何临床迹象优选系由PCV2造成。

因为在共感染PRDC之其它致病性病原体之动物中，PRDC及PRDC之临床症状亦可减轻或减少，所以本发明亦提供一种免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向需要此治疗之动物施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，其中该动物属于对PCV2及一或多种选自由PRRSV、猪肺炎支原体、胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血性博德特氏菌、猿流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌组成的组之其它病原体呈阳性的农场。PRDC和/或与PRDC相关之任何临床迹象优选系由PCV2及至少一种其它PRDC致病性病原体造成。本文中术语″对PCV2及一或多种选自由PRRSV、猪肺炎支原体、胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌组成的组之其它病原体呈阳性的畜群″意谓畜群动物之至少10％、优选30％、更优选50％、甚至更优选70％感染有PCV2及至少一种下文列出之其它病原体或在任何时间变为感染有PCV2及至少一种下文列出之其它病原体。此未必意谓该畜群之任何动物均出现已知由PCV2及至少一种上文列出之病原体造成之临床症状(例如PRDC)。

母源免疫性已显示可赋予一定程度的对抗PCV2感染及与PCV2感染相关之临床疾病之保护。此保护已显示为效价依赖性：较高效价通常具保护性，而较低效价不具保护性(McKeown等人，2005；Clin.Diagn.Lab.Immunol.；12：1347-1351)。断乳动物之平均抗体半衰期已估算为19.0天，在群体内PCV2被动抗体衰减窗相对较宽(Opriessnig等人，2004，J.Swine Health Prod.12：186-191)。母源抗体之存在不仅可赋予一定程度的对抗病毒感染之保护(然而其不可预测)，而且已知亦可能削弱免疫作用之功效。已惊奇地发现抗PCV2抗体(尤其多至1∶20480之抗PCV2抗体效价)之存在不影响PCV2治疗之功效。因此，根据另一方面，本发明亦提供一种预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向具有抗PCV2抗体之需要此治疗之动物施用治疗有效量的PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤，优选其中该动物具有达1∶100、优选大于1∶100、甚至更优选大于1∶250、甚至更优选大于1∶500、甚至更优选1∶640、甚至更优选大于1∶750、最优选大于1∶1000之可检测抗PCV2抗体效价。优选地，该抗PCV2抗体效价在特异性抗PCV2免疫检定中、优选在如实施例2中所述之检定中可检测且可定量。

检测及定量抗PCV2抗体之方法为本领域已知。举例而言，PCV2抗体之检测及定量可由Magar等人，2000，Can.J.Vet Res.；64∶184-186或Magar等人，2000，J.Comp.Pathol.；123：258-269中所述之间接免疫荧光法进行。定量抗PCV2抗体之其它检定描述于Opriessnig等人，2006，美国猪兽医协会第37届年会(37^th Annual Meeting of the American Association of SwineVeterinarians)中。此外，实施例2亦描述一种本领域技术人员可使用之间接免疫荧光检定。在结果有争议及有任何疑问之情况下，本文所提及之抗PCV2效价系指由/可由实施例2中所述之检定估算出之抗PCV2效价。

根据另一更通用方面，本发明提供一种免疫预防年幼动物中优选与PCV2相关或由PCV2造成之PRDC，或减少由PRDC造成或与PRDC相关之临床症状的方法，其包含向需要此治疗之彼年幼动物施用有效量之PCV2抗原的步骤。

本文中术语″年幼动物″系指1至22天龄之动物。术语年幼动物优选意谓1至20天龄之动物。术语年幼动物更优选系指1至15天龄、甚至更优选1天龄至14天龄、甚至更优选1至12天龄、甚至更优选1至10天龄、甚至更优选1至8天龄、甚至更优选1至7天龄、甚至更优选1至6天龄、甚至更优选1至5天龄、甚至更优选1至4天龄、甚至更优选1至3天龄、甚至更优选1或2天龄之动物，最优选系指1天龄之动物。因此根据另一方面，本发明提供一种免疫预防年幼动物中优选与PCV2相关或由PCV2造成之PRDC，或减少由PRDC造成或与PRDC相关之临床症状的方法，其包含向需要此治疗之1至22天龄、优选1至20天龄、更优选1至15天龄、甚至更优选1至14天龄、甚至更优选1至12天龄、甚至更优选1至10天龄、甚至更优选1至8天龄、甚至更优选1至7天龄、甚至更优选1至6天龄、甚至更优选1至5天龄、甚至更优选1至4天龄、甚至更优选1至3天龄、甚至更优选1或2天龄、最优选1天龄之动物施用有效量之PCV2抗原的步骤。举例而言，有证据证明在19至22天龄时进行疫苗接种/治疗展示高疫苗接种功效。此外，在12至18天龄时进行疫苗接种/治疗亦已展示可极有效减少与PRDC相关或由PRDC造成之临床症状、降低总病毒负载量、缩减病毒血症之持续时间、延迟病毒血症之发作、体重增加。

由于PCV2在野外普遍存在，所以大多数年幼仔猪关于PCV2呈血清阳性。因此根据另一方面，本发明提供一种优选在疫苗接种当天免疫预防具有抗PCV2抗体之年幼动物中优选与PCV2相关或由PCV2造成之PRDC，或减少由PRDC造成或与PRDC相关之临床症状的方法，其包含向需要此治疗之1至22天龄、优选1至20天龄、更优选1至15天龄、甚至更优选1至14天龄、甚至更优选1至12天龄、甚至更优选1至10天龄、甚至更优选1至8天龄、甚至更优选1至7天龄、甚至更优选1至6天龄、甚至更优选1至5天龄、甚至更优选1至4天龄、甚至更优选1至3天龄、甚至更优选1或2天龄、最优选1天龄之动物施用有效量之PCV2抗原的步骤。在疫苗接种/治疗当天，所述年幼动物优选具有在疫苗接种/治疗当天高达1∶100、优选大于1∶100、甚至更优选大于1∶250、甚至更优选大于1∶500、甚至更优选1∶640、甚至更优选大于1∶750、最优选大于1∶1000之可检测抗PCV2抗体效价。

如上所述，用PCV2抗原对罹患PRDC之动物进行疫苗接种/治疗使得与未经疫苗接种之对照动物相比病毒血症阶段缩短。与相同物种之未经疫苗接种之对照动物相比，平均缩短时间为15.4天。因此，根据另一方面，本发明亦提供一种治疗或免疫预防动物中优选与PCV2相关或由PCV2造成之PRDC，或减少由PRDC造成或与PRDC相关之临床症状的方法，其包含向需要此治疗的动物施用有效量之PCV2抗原的步骤，其中与相同物种之未经治疗对照组之动物相比，治疗或免疫预防使得病毒血症阶段缩短5天或5天以上、优选6天或6天以上、甚至更优选7天或7天以上、甚至更优选8天或8天以上、甚至更优选9天、甚至更优选10天、甚至更优选12天、甚至更优选14天、最优选多于15天。

一般而言，对罹患PRDC之猪进行疫苗接种使得体重增加损失减小、临床呼吸道征象(诸如咳嗽及呼吸困难)减少、病毒血症持续时间较短、病毒血症较早结束及病毒负载量较低。因此，根据另一方面，本发明提供一种治疗或免疫预防动物中优选与PCV2相关或由PCV2造成之PRDC，或减少与PRDC相关或由PRDC造成之临床症状的方法，其包含向需要此治疗之动物施用有效量之PCV2抗原的步骤，其中该治疗或免疫预防使得与相同物种之未经治疗对照组之动物相比疫苗功效参数得以改良，所述疫苗功效参数系选自由体重增加损失减小、临床呼吸道征象(诸如咳嗽及呼吸困难)减少、病毒血症持续时间较短、病毒血症较早结束、较低病毒负载量或其组合组成的组。

本文中术语″有效量″意谓(但不限于)在该有效剂量之PCV2抗原所施用之动物中引起或能够引起免疫反应的抗原量。

有效量视疫苗成份及投药时程而定。通常，当在组合疫苗中使用失活病毒或经修饰活病毒制剂时，疫苗含有每剂约10^2.0至约10^9.0TCID₅₀、优选每剂约10^3.0至约10^8.0TCID₅₀、更优选每剂约10^4.0至约10^8.0TCID₅₀之量。详言之，当在疫苗中使用经修饰活PCV2时，待施用易感动物之推荐剂量优选为每剂约10^3.0TCID₅₀(组织培养物感染剂量50％终点)至每剂约10^6.0TCID₅₀且更优选为每剂约10^4.0TCID₅₀至每剂约10^5.0TCID₅₀。一般而言，当使用经纯化抗原时，抗原之量将介于0.2微克与5000微克之间，且介于10^2.0与10^9.0TCID₅₀之间、优选介于10^3.0与10^6.0TCID₅₀之间、更优选介于10^4.0与10^5.0TCID₅₀之间。

亚单位疫苗通常系以每剂至少0.2μg抗原、优选每剂约0.2μg至约400μg、更优选每剂约0.3μg至约200μg、甚至更优选每剂约0.35μg至约100μg、更优选每剂约0.4μg至约50μg、更优选每剂约0.45μg至约30μg、更优选每剂约0.6μg至约16μg、甚至更优选每剂约0.75μg至约8μg、甚至更优选每剂约1.0μg至约6μg、更优选每剂约1.3μg至约3.0μg之抗原含量施用。

出人意料地发现前述免疫原性组合物之免疫预防用途可有效减少动物中优选至少由PCV2造成之PRDC造成或与其相关的临床症状。此外，本文中所述之抗原组合物降低总圆环病毒负载量，其包括较迟发作、较短持续时间、病毒血症较早结束及病毒负载量降低及其在罹患PRDC之动物中之免疫抑制性影响，且进而产生较高程度之一般疾病抵抗性及降低之PRDC发病率。

根据本发明之组合物可经皮内、气管内或阴道内施用。该组合物优选可经肌肉内或鼻内施用，最优选经肌肉内施用。在动物体内，可证实经由静脉内或藉由直接注射入靶组织中来施用上述药物组合物为有利的。就全身性施用而言，静脉内、血管内、肌肉内、鼻内、动脉内、腹膜内、经口或鞘内途径优选。可经皮下、皮内、皮肤内、心脏内、小叶内、骨髓内、肺内或直接在待处理组织(结缔组织、骨组织、肌肉组织、神经组织、上皮组织)中或其附近实现更局部施用。视治疗之所需持续时间及有效性而定，可例如在每日基础上一次或若干次(亦间歇地)历时若干天、数周或数月且以不同剂量来施用根据本发明之组合物。

优选地，至少一个剂量之如上所述之免疫原性组合物系经肌肉内施用有需要之受检者。根据另一方面，如本文中所述之PCV2抗原或包含任何此PCV2抗原之免疫原性组合物系装入瓶中且以每剂一(1)mL之量施用。因此，根据另一方面，本发明亦提供一种包含如本文中所述之PCV-2抗原的1ml免疫原性组合物，其系用于治疗或免疫预防动物中优选由PCV2造成之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与其相关的任何临床迹象，其包含向需要此治疗的动物施用有效量之PCV2抗原的步骤。

根据另一方面，向有需要之受检者给予至少一个剂量之如上所述之免疫原性组合物的至少一次进一步投药，其中该第二或任何进一步投药系在初始或任何先前投药后给予至少14天。免疫原性组合物优选与免疫刺激物一起施用。该免疫刺激物优选给予至少两次。优选地，在免疫刺激物之第一次投药与第二次或任何进一步投药之间为至少3天、更优选至少5天、甚至更优选至少7天。优选地，在初始施用本文中提供之免疫原性组合物后给予免疫刺激物至少10天、优选15天、甚至更优选20天、甚至更优选至少22天。优选免疫刺激物为(例如)优选用不完全佛氏佐剂(Freund′sadjuvant)(KLH/ICFA)乳化之匙孔螺血氰蛋白(keyhole limpet hemocyanin；KLH)。然而，由此应了解亦可使用本领域技术人员已知之任何其它免疫刺激物。本文中术语″免疫刺激物″意谓优选在未起始或增强特异性免疫反应(例如对抗特定病原体之免疫反应)之情况下，可触发免疫反应之任何药剂或组合物。进一步指示施用适合剂量之免疫刺激物。

本发明亦涉及PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物用于制备药物的用途，其中该药物系用于免疫预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象。PRDC或与PRDC相关之临床迹象优选系至少由PCV2、更优选以及一或多种其它病原体造成，所述病原体系选自由PRRSV、猪肺炎支原体、胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血性博德特氏菌、猿(Simian)流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌组成的组。更优选地，PCV2抗原为重组抗原、优选PCV2ORF-2、甚至更优选

CircoFLEX^TM。

本文所述″动物″意谓猪类(swine)、猪(pig)或仔猪(piglet)。因此，根据另一方面，本发明提供一种免疫预防及治疗猪之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，其包含向需要此治疗之猪施用治疗有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物的步骤。优选地，PRDC系至少由PCV2、优选以及至少一种已知造成PRDC之其它病原体(例如PRRSV、猪肺炎支原体、胸膜肺炎放线杆菌、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌)造成。PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性组合物优选为前述任一者，PCV2抗原最优选为

CircoFLEX^TM。

优选实施方式详述

以下实施例描述了本发明优选的材料和方法。尽管在实施或测试本发明时可使用与本文所述类似或等效的任何方法和材料，但现在描述优选的方法、装置、以及材料。但应理解，这些实施例仅仅是举例说明，不应被视为对本发明总体范围的任何限制。

实施例1

制备PCV2ORF-2抗原

将初始SF+细胞培养物从液氮储存器中取出，在无菌旋转烧瓶中的Excell 420培养基(JRH Biosciences，Inc.，Lenexa，KS)中悬浮培养，持续搅拌。使所述培养物在100-250mL旋转烧瓶中含有25-150毫升Excell 420的无血清培养基中生长。当细胞增殖至细胞密度为1.0-8.0×10⁶细胞/ml时，将其以0.5-1.5×10⁶细胞/ml的种植密度分至新容器中。随后使经过扩大培养的培养物在至多36升旋转烧瓶中或在至多300升不锈钢生物反应器中于25-29℃生长2-7天时间。

接种后，将烧瓶在27℃培育4小时。随后，用含有PCV2ORF-2基因(SEQID NO：4)的重组杆状病毒对每个烧瓶进行接种。含有PCV2ORF-2基因的重组杆状病毒按WO 06/072065所述制备。在接种杆状病毒后，将所述烧瓶在27±2℃培育7天，期间以100rpm搅拌。所述烧瓶使用通风盖以容许空气流动。

培育后，收获所得上清液，将其过滤以移除细胞碎片并灭活。上清液通过将温度升至37±2℃而灭活，添加二元氮丙啶(binary ethlylenimine，BEI)至终浓度为5mM。随后将样品持续搅拌72-96小时。添加1.0M硫代硫酸钠溶液，使最终最小浓度为5mM，以中和任何残余BEI。在灭活后，添加约0.5-2.5毫克/剂的、经磷酸盐缓冲液及Carpopol缓冲的PCV2ORF-2。最终每一剂包含约16微克PCV2ORF-2抗原。

实施例2

抗PCV-2免疫分析

将WO 02/07721所述PK15(例如ATCC CCL-33)或VIDO R1细胞接种至96孔板(约20.000-60.000个细胞/孔)。当单层约65％至85％铺满时，将细胞用PCV2分离物感染。将经感染的细胞培育48小时。移除培养基，用PBS将孔洗涤两次。弃去洗涤缓冲剂，将细胞在约-20℃用冷50/50甲醇/丙酮固定剂(约100微升/孔)处理约15分钟。弃去固定剂，所述板在空气中干燥。在PBS中制备猪血清样品的系列稀释液，添加至所述板中，36.5±1℃培育约1小时，若血清样品中有抗体则能够发生结合。抗PCV2的阳性及阴性对照样品(阳性对照及阴性对照样品)的系列稀释液并行进行。随后将所述板用PBS洗涤三次。弃去PBS。随后将所述板用在PBS中以1∶100稀释的市售山羊抗猪FITC偶联物染色，36.5±1℃培育约1小时，这样能够检测出与感染细胞结合的抗体。在培育完成后，自培育箱中移出微滴板，弃去偶联物，用PBS将所述板洗两次。通过UV显微镜检读板，将各孔读为阳性或阴性。用阳性对照及阴性对照样品监测该测试系统。若对照在预期范围内，则测试方法所用参数导致的结果是可接受的。用显示特异性IFA反应性的最高稀释度计算血清抗体效价，用适合的Reed-Muench公式计算每一稀释度的阳性孔数或50％终点。

实施例3

PCV2ORF-2(

CircoFLEX ^TM )在PRDC治疗中的功效

目的

此研究旨在证实

CircoFLEX控制PCV2相关PRDC的功效。

研究的实施

此研究中包括1542只普通猪(conventional pig)，它们属于三个连续周组(week group)，每组有约500只猪。将这些猪按照体重、以及是否一窝所生区分开，随机分配至一个疫苗接种组(n＝769)及一个对照组(n＝773)。

-组1：在研究当天(第0天)，对约20日龄的猪进行单次肌肉接种，所接种的是，作为活性物质的含有PCV2ORF-2蛋白(RP为1(每剂1ml))的CircoFLEX，及作为佐剂的

-组2：对照组接受1ml对照物品，其包含无PCV2ORF-2蛋白的细胞培养物上清液及作为佐剂的

-组3：未经治疗的猪。

在肥育结束时(研究第22周)终止研究。

所记录的参数

参数记录如下：

-个体体重(所有动物)

-“僵猪(runt)”率(所有动物)

-临床迹象(所有动物)

-死亡率(所有动物)

-血清中之PCV2病毒血症：病毒血症之发作、结束、持续时间，病毒负载量(17％的研究动物)

-尸检(若可能，每一只死亡或安乐死动物)

农场之发病情况

根据饲养及肥育农场的发病史，动物自肥育中期开始经历与猪呼吸道疾病综合征(PRDC)相关之呼吸道症状。这些症状伴有肥育期间的体重增加程度降低(ADWG 750-780g)及死亡率增加(5.5-6.6％)。此时被认为涉及PRDC的病原体为PCV2、PRRSV、多杀巴斯德氏菌、支气管败血性博德特氏菌，有时还涉及SIV。此研究中还发现，猪肺炎支原体及猪鼻支原体与此疾病综合征有关。有趣的是，此研究的结果表明，PRRSV和猪肺炎支原体的感染(infection)在PCV2病毒血症发作的约4-6周前出现。然而，根据整个研究期间动物死亡数、以及PCV2病毒血症发作前后呼吸道症状的频率来看，这些动物一直未受这两种感染性病原体影响(rather unaffected)。

结果

体重、体重增加、平均每日体重增加(ADWG)

在研究启始时两个处理组之体重相当。在研究第17周及第22周，疫苗接种组之体重显著高于安慰剂处理组之体重(分别为p＝0.0007及p＜0.0001)。

自研究启始至研究第22周，疫苗接种组动物比安慰剂处理组动物多增重2.8kg。此对应于，从研究启始至研究第17周时疫苗接种组动物的ADWG高13g/d，至研究第22周时疫苗接种组动物的ADWG高18g/d。对于整个肥育期(研究第7-22周)而言，ADWG因此可从安慰剂处理组动物的777g/d(相当于过去的750-780g/d ADWG)增加至疫苗接种组动物的803g/d(表1及图1)。

表1：体重、体重增加及ADDWG之比较(所有三个周组之汇集数据)

1)组间比较之t检验之p值，ns：不显著，^***显著，p≤0.001

血液中之病毒血症

结果表明，疫苗接种组动物的病毒血症的发作略迟(晚1.5天)、结束得显著较早(p＜0.0001)、持续时间显著较短(p＜0.0001)、每只动物之阳性取样天数显著较少(p＜0.0001)、且病毒负载量总体上显著减少(p＜0.0001)。在研究第17周时观测到有病毒血症的动物的比例最高，其中在安慰剂组中75％有病毒血症，在疫苗接种组中28％有病毒血症。

表2：血液中病毒血症之比较(所有三个周组之汇集数据)

研究周数	安慰剂处理组(平均值)	疫苗接种组(平均值)	差值(CP-IVP)	p值²⁾
研究周数	安慰剂处理组(平均值)	疫苗接种组(平均值)	差值(CP-IVP)	p值²⁾	病毒血症发作	104.4天	105.9天	-1.5天	0.3244ns
病毒血症结束	138.7天	123.3天	15.4天	＜0.0001^***	病毒血症发作	104.4天	105.9天	-1.5天	0.3244ns
病毒血症结束	138.7天	123.3天	15.4天	＜0.0001^***	病毒血症期间	34.3天	17.4天	16.9天	＜0.0001^***
阳性取样天数	4.3天	1.4天	2.9天	＜0.0001^***	病毒血症期间	34.3天	17.4天	16.9天	＜0.0001^***
阳性取样天数	4.3天	1.4天	2.9天	＜0.0001^***	平均总gE¹⁾(log 10)	22.7	7.1	15.6	＜0.0001^***

¹⁾gE：每毫升之基因组等效物

²⁾p值(组间比较的Wilcoxon Mann-whitney检验)，ns：不显著，^***显著，p≤0.001

血液中病毒血症与体重之相关性

图2示出两个处理组在整个研究期间取样动物的病毒负载量，以及两个处理组在不同称重时间点所有动物活体重量的差异(对照产品(Control Product，CP)-研究用兽医产品(Investigational Veterinary Product，IVP))。将体重差异曲线与表示病毒负载量的柱进行比较可明显发现，所观测到的两个处理组之间的体重差异(研究第17周及第22周)出现在病毒血症发作(研究第14-16周)后。当病毒负载量在研究第17周出现峰值后降低时，组间体重差异进一步增加，直至肥育结束。这些信息一起表明，疫苗接种组在研究第17周及第22周所观测到的较大体重增加与病毒血症的发作、持续时间及水平有关联。

通过计算Spearman秩系数(rank coefficient)证实，在研究第17周及第22周的安慰剂处理组动物中，病毒血症与增重之差异之间有统计学显著相关性。安慰剂处理组动物的低体重与病毒血症早发作、持续时间长及病毒负载量高有关。而疫苗接种组动物未发现此种相关性，表明疫苗接种组动物体重较高是病毒血症发作推迟、持续时间较短以及血液中病毒负载量较低的结果。

僵猪率

在任一称重时间点，未在疫苗接种组与安慰剂处理组之间观测到僵猪率的显著差异。在PCV2病毒血症发作(研究第14-16周)后，两个处理组的僵猪率都较低(2.2％-3.9％)。

表3：僵猪率之比较(所有三个周组之汇集数据)

P：组间比较的t检验的p值；p＞0.05无显著性

临床迹象

在病毒血症发作前，主要临床迹象为跛行(lameness)、咳嗽及腹泻(diarrhea)(在8％-12％的动物中)。这些迹象在两个处理组中出现频率相等。对死亡动物进行尸检且随后进行微生物学检验发现，猪链球菌可能是引起跛行的感染性病原体，副猪嗜血菌(Haemophilus parasuis)及支气管败血性博德特氏菌可能是引起咳嗽的感染性病原体，溶血性大肠杆菌可能是腹泻的原因。

在病毒血症发作后，在两个处理组动物中观测到的主要临床症状为咳嗽及跛行。其它感染性病原体的定期血清学分析物、及尸检后的微生物学发现表明，PCV2病毒血症伴有(在先的)PRRSV和猪肺炎支原体感染。这两种病原体与PCV2一起形成PRDC的一部分，该部分被认为引起病毒血症发作后咳嗽动物数增加。与安慰剂处理组动物相比，在疫苗接种组动物中咳嗽及呼吸困难的频率分别降低12.2％及17.5％。但这些发现不具有任何统计学意义。病毒血症发作后的跛行频率比病毒血症发作前增加，最可能是由慢性猪链球菌关节炎所致，或由关节结构虚弱造成，且以相同方式影响两个处理组(p＝0.8321)。同样地，病毒血症发作后其它临床表现(腹泻、皮肤异常、行为)的出现频率在两个处理组之间几乎相等。

死亡率

在病毒血症发作前，两个处理组中死亡率相当(疫苗接种组动物：5.20％，安慰剂处理组动物：5.17％)。在病毒血症发作后，安慰剂处理组动物具有比疫苗接种组动物显著较高的死亡率(疫苗接种组动物：1.51％，安慰剂处理组动物：3.68％，p＝0.0127)。疫苗接种组动物的死亡率比安慰剂处理组动物的下降59％。

结论

所述研究已在肥育后期有典型PRDC症状的农场进行。猪在17-19周龄时发展出呼吸道症状、死亡率增加、且体重增加幅度减小。通过血清学及微生物学筛查发现，PCV2、PRRSV、猪肺炎支原体、猪鼻支原体及多杀巴斯德氏菌都可能参与此种疾病综合征。

与经安慰剂处理之对照组相比，疫苗接种组的以下统计学显著表现值得注意：

-增重损失减小

-死亡率降低

-病毒血症持续时间缩短、且病毒血症较早结束

-病毒负载量降低

-咳嗽及呼吸困难减少

如所预期，僵猪率未观测到统计学显著差异，因为僵猪的出现并非PRDC的典型表现。

将这些表现汇总能得出以下结论：

1.本研究在肥育中期至后期受PRDC影响的畜群中进行。PCV2显然参与此种疾病综合征，因为仅在病毒血症发作后观测到呼吸道症状、增重损失及死亡率增加。

2.用

CircoFLEX^TM对动物进行疫苗接种可降低或甚至防止与PCV2关联性PRDC有关的临床相关性决定因素。

序列表

<110>贝林格尔.英格海姆维特梅迪卡公司(BOEHRINGER INGELHEIM VETMEDICA INC.)

<120>治疗猪呼吸道疾病综合征

<130>P01-2174

<160>11

<170>PatentIn version 3.3

<210>1

<211>8

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>经修饰的Kozak序列

<400>1

ccgccatg 8

<210>2

<211>6

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>重组Eco R1序列

<400>2

gaattc 6

<210>3

<211>713

<212>DNA

<213>猪圆环病毒(Porcine circovirus)

<400>3

cagctatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60

ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120

gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtggaga 180

aggaaaaatg gcatcttcaa cacccgcctc tcccgcacct tcggatatac tgtgacgact 240

ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300

gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360

gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420

acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480

gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540

aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600

gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660

tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttaa accctaaatg aat 713

<210>4

<211>713

<212>DNA

<213>猪圆环病毒

<400>4

ccgccatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60

ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120

gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtcaagg 180

ctaccacagt cacaacgccc tcctgggcgg tggacatgat gagatttaat attgacgact 240

ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300

gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360

gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420

acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480

gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540

aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600

gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660

tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttga accctaagaa ttc 713

<210>5

<211>233

<212>PRT

<213>猪圆环病毒

<400>5

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg

1 5 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro

20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr

50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val

65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg Ile Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr

100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr

130 135 140

Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr

145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn

180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe

210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro

225 230

<210>6

<211>233

<212>PRT

<213>猪圆环病毒

<400>6

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg

1 5 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro

20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr

50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val

65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg Ile Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr

100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr

130 135 140

Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr

145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn

180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe

210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Glu Pro

225 230

<210>7

<211>756

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>来自猪第二型圆环病毒开放阅读框2，还有一部分来自pGEM T-easy载体

<400>7

gcggccgcgg gaattcgatc cgccatgacg tatccaagga ggcgttaccg cagaagaaga 60

caccgccccc gcagccatct tggccagatc ctccgccgcc gcccctggct cgtccacccc 120

cgccaccgct accgttggag aaggaaaaat ggcatcttca acacccgcct ctcccgcacc 180

ttcggatata ctgtcaaggc taccacagtc acaacgccct cctgggcggt ggacatgatg 240

agatttaata ttgacgactt tgttcccccg ggagggggga ccaacaaaat ctctataccc 300

tttgaatact acagaataag aaaggttaag gttgaattct ggccctgctc ccccatcacc 360

cagggtgata ggggagtggg ctccactgct gttattctag atgataactt tgtaacaaag 420

gccacagccc taacctatga cccatatgta aactactcct cccgccatac aatcccccaa 480

cccttctcct accactcccg ttacttcaca cccaaacctg ttcttgactc cactattgat 540

tacttccaac caaataacaa aaggaatcag ctttggctga ggctacaaac ctctagaaat 600

gtggaccacg taggcctcgg cactgcgttc gaaaacagta aatacgacca ggactacaat 660

atccgtgtaa ccatgtatgt acaattcaga gaatttaatc ttaaagaccc cccacttgaa 720

ccctaagaat tctatcacta gtgaattcgc ggccgc 756

<210>8

<211>10387

<212>DNA

<213>人工的

<220>

<223>猪第二型圆环病毒，ORF-2构建体，含杆状病毒及pGEM T-easy编码序列。

<400>8

aagctttact cgtaaagcga gttgaaggat catatttagt tgcgtttatg agataagatt 60

gaaagcacgt gtaaaatgtt tcccgcgcgt tggcacaact atttacaatg cggccaagtt 120

ataaaagatt ctaatctgat atgttttaaa acacctttgc ggcccgagtt gtttgcgtac 180

gtgactagcg aagaagatgt gtggaccgca gaacagatag taaaacaaaa ccctagtatt 240

ggagcaataa tcgatttaac caacacgtct aaatattatg atggtgtgca ttttttgcgg 300

gcgggcctgt tatacaaaaa aattcaagta cctggccaga ctttgccgcc tgaaagcata 360

gttcaagaat ttattgacac ggtaaaagaa tttacagaaa agtgtcccgg catgttggtg 420

ggcgtgcact gcacacacgg tattaatcgc accggttaca tggtgtgcag atatttaatg 480

cacaccctgg gtattgcgcc gcaggaagcc atagatagat tcgaaaaagc cagaggtcac 540

aaaattgaaa gacaaaatta cgttcaagat ttattaattt aattaatatt atttgcattc 600

tttaacaaat actttatcct attttcaaat tgttgcgctt cttccagcga accaaaacta 660

tgcttcgctt gctccgttta gcttgtagcc gatcagtggc gttgttccaa tcgacggtag 720

gattaggccg gatattctcc accacaatgt tggcaacgtt gatgttacgt ttatgctttt 780

ggttttccac gtacgtcttt tggccggtaa tagccgtaaa cgtagtgccg tcgcgcgtca 840

cgcacaacac cggatgtttg cgcttgtccg cggggtattg aaccgcgcga tccgacaaat 900

ccaccacttt ggcaactaaa tcggtgacct gcgcgtcttt tttctgcatt atttcgtctt 960

tcttttgcat ggtttcctgg aagccggtgt acatgcggtt tagatcagtc atgacgcgcg 1020

tgacctgcaa atctttggcc tcgatctgct tgtccttgat ggcaacgatg cgttcaataa 1080

actcttgttt tttaacaagt tcctcggttt tttgcgccac caccgcttgc agcgcgtttg 1140

tgtgctcggt gaatgtcgca atcagcttag tcaccaactg tttgctctcc tcctcccgtt 1200

gtttgatcgc gggatcgtac ttgccggtgc agagcacttg aggaattact tcttctaaaa 1260

gccattcttg taattctatg gcgtaaggca atttggactt cataatcagc tgaatcacgc 1320

cggatttagt aatgagcact gtatgcggct gcaaatacag cgggtcgccc cttttcacga 1380

cgctgttaga ggtagggccc ccattttgga tggtctgctc aaataacgat ttgtatttat 1440

tgtctacatg aacacgtata gctttatcac aaactgtata ttttaaactg ttagcgacgt 1500

ccttggccac gaaccggacc tgttggtcgc gctctagcac gtaccgcagg ttgaacgtat 1560

cttctccaaa tttaaattct ccaattttaa cgcgagccat tttgatacac gtgtgtcgat 1620

tttgcaacaa ctattgtttt ttaacgcaaa ctaaacttat tgtggtaagc aataattaaa 1680

tatgggggaa catgcgccgc tacaacactc gtcgttatga acgcagacgg cgccggtctc 1740

ggcgcaagcg gctaaaacgt gttgcgcgtt caacgcggca aacatcgcaa aagccaatag 1800

tacagttttg atttgcatat taacggcgat tttttaaatt atcttattta ataaatagtt 1860

atgacgccta caactccccg cccgcgttga ctcgctgcac ctcgagcagt tcgttgacgc 1920

cttcctccgt gtggccgaac acgtcgagcg ggtggtcgat gaccagcggc gtgccgcacg 1980

cgacgcacaa gtatctgtac accgaatgat cgtcgggcga aggcacgtcg gcctccaagt 2040

ggcaatattg gcaaattcga aaatatatac agttgggttg tttgcgcata tctatcgtgg 2100

cgttgggcat gtacgtccga acgttgattt gcatgcaagc cgaaattaaa tcattgcgat 2160

tagtgcgatt aaaacgttgt acatcctcgc ttttaatcat gccgtcgatt aaatcgcgca 2220

atcgagtcaa gtgatcaaag tgtggaataa tgttttcttt gtattcccga gtcaagcgca 2280

gcgcgtattt taacaaacta gccatcttgt aagttagttt catttaatgc aactttatcc 2340

aataatatat tatgtatcgc acgtcaagaa ttaacaatgc gcccgttgtc gcatctcaac 2400

acgactatga tagagatcaa ataaagcgcg aattaaatag cttgcgacgc aacgtgcacg 2460

atctgtgcac gcgttccggc acgagctttg attgtaataa gtttttacga agcgatgaca 2520

tgacccccgt agtgacaacg atcacgccca aaagaactgc cgactacaaa attaccgagt 2580

atgtcggtga cgttaaaact attaagccat ccaatcgacc gttagtcgaa tcaggaccgc 2640

tggtgcgaga agccgcgaag tatggcgaat gcatcgtata acgtgtggag tccgctcatt 2700

agagcgtcat gtttagacaa gaaagctaca tatttaattg atcccgatga ttttattgat 2760

aaattgaccc taactccata cacggtattc tacaatggcg gggttttggt caaaatttcc 2820

ggactgcgat tgtacatgct gttaacggct ccgcccacta ttaatgaaat taaaaattcc 2880

aattttaaaa aacgcagcaa gagaaacatt tgtatgaaag aatgcgtaga aggaaagaaa 2940

aatgtcgtcg acatgctgaa caacaagatt aatatgcctc cgtgtataaa aaaaatattg 3000

aacgatttga aagaaaacaa tgtaccgcgc ggcggtatgt acaggaagag gtttatacta 3060

aactgttaca ttgcaaacgt ggtttcgtgt gccaagtgtg aaaaccgatg tttaatcaag 3120

gctctgacgc atttctacaa ccacgactcc aagtgtgtgg gtgaagtcat gcatctttta 3180

atcaaatccc aagatgtgta taaaccacca aactgccaaa aaatgaaaac tgtcgacaag 3240

ctctgtccgt ttgctggcaa ctgcaagggt ctcaatccta tttgtaatta ttgaataata 3300

aaacaattat aaatgctaaa tttgtttttt attaacgata caaaccaaac gcaacaagaa 3360

catttgtagt attatctata attgaaaacg cgtagttata atcgctgagg taatatttaa 3420

aatcattttc aaatgattca cagttaattt gcgacaatat aattttattt tcacataaac 3480

tagacgcctt gtcgtcttct tcttcgtatt ccttctcttt ttcatttttc tcctcataaa 3540

aattaacata gttattatcg tatccatata tgtatctatc gtatagagta aattttttgt 3600

tgtcataaat atatatgtct tttttaatgg ggtgtatagt accgctgcgc atagtttttc 3660

tgtaatttac aacagtgcta ttttctggta gttcttcgga gtgtgttgct ttaattatta 3720

aatttatata atcaatgaat ttgggatcgt cggttttgta caatatgttg ccggcatagt 3780

acgcagcttc ttctagttca attacaccat tttttagcag caccggatta acataacttt 3840

ccaaaatgtt gtacgaaccg ttaaacaaaa acagttcacc tcccttttct atactattgt 3900

ctgcgagcag ttgtttgttg ttaaaaataa cagccattgt aatgagacgc acaaactaat 3960

atcacaaact ggaaatgtct atcaatatat agttgctgat atcatggaga taattaaaat 4020

gataaccatc tcgcaaataa ataagtattt tactgttttc gtaacagttt tgtaataaaa 4080

aaacctataa atattccgga ttattcatac cgtcccacca tcgggcgcgg atcagatctg 4140

cagcggccgc gggaattcga tccgccatga cgtatccaag gaggcgttac cgcagaagaa 4200

gacaccgccc ccgcagccat cttggccaga tcctccgccg ccgcccctgg ctcgtccacc 4260

cccgccaccg ctaccgttgg agaaggaaaa atggcatctt caacacccgc ctctcccgca 4320

ccttcggata tactgtcaag gctaccacag tcacaacgcc ctcctgggcg gtggacatga 4380

tgagatttaa tattgacgac tttgttcccc cgggaggggg gaccaacaaa atctctatac 4440

cctttgaata ctacagaata agaaaggtta aggttgaatt ctggccctgc tcccccatca 4500

cccagggtga taggggagtg ggctccactg ctgttattct agatgataac tttgtaacaa 4560

aggccacagc cctaacctat gacccatatg taaactactc ctcccgccat acaatccccc 4620

aacccttctc ctaccactcc cgttacttca cacccaaacc tgttcttgac tccactattg 4680

attacttcca accaaataac aaaaggaatc agctttggct gaggctacaa acctctagaa 4740

atgtggacca cgtaggcctc ggcactgcgt tcgaaaacag taaatacgac caggactaca 4800

atatccgtgt aaccatgtat gtacaattca gagaatttaa tcttaaagac cccccacttg 4860

aaccctaaga attctatcac tagtgaattc gcggccgccg gccgctccag aattctagaa 4920

ggtacccggg atcctttcct gggacccggc aagaaccaaa aactcactct cttcaaggaa 4980

atccgtaatg ttaaacccga cacgatgaag cttgtcgttg gatggaaagg aaaagagttc 5040

tacagggaaa cttggacccg cttcatggaa gacagcttcc ccattgttaa cgaccaagaa 5100

gtgatggatg ttttccttgt tgtcaacatg cgtcccacta gacccaaccg ttgttacaaa 5160

ttcctggccc aacacgctct gcgttgcgac cccgactatg tacctcatga cgtgattagg 5220

atcgtcgagc cttcatgggt gggcagcaac aacgagtacc gcatcagcct ggctaagaag 5280

ggcggcggct gcccaataat gaaccttcac tctgagtaca ccaactcgtt cgaacagttc 5340

atcgatcgtg tcatctggga gaacttctac aagcccatcg tttacatcgg taccgactct 5400

gctgaagagg aggaaattct ccttgaagtt tccctggtgt tcaaagtaaa ggagtttgca 5460

ccagacgcac ctctgttcac tggtccggcg tattaaaaca cgatacattg ttattagtac 5520

atttattaag cgctagattc tgtgcgttgt tgatttacag acaattgttg tacgtatttt 5580

aataattcat taaatttata atctttaggg tggtatgtta gagcgaaaat caaatgattt 5640

tcagcgtctt tatatctgaa tttaaatatt aaatcctcaa tagatttgta aaataggttt 5700

cgattagttt caaacaaggg ttgtttttcc gaaccgatgg ctggactatc taatggattt 5760

tcgctcaacg ccacaaaact tgccaaatct tgtagcagca atctagcttt gtcgatattc 5820

gtttgtgttt tgttttgtaa taaaggttcg acgtcgttca aaatattatg cgcttttgta 5880

tttctttcat cactgtcgtt agtgtacaat tgactcgacg taaacacgtt aaataaagct 5940

tggacatatt taacatcggg cgtgttagct ttattaggcc gattatcgtc gtcgtcccaa 6000

ccctcgtcgt tagaagttgc ttccgaagac gattttgcca tagccacacg acgcctatta 6060

attgtgtcgg ctaacacgtc cgcgatcaaa tttgtagttg agctttttgg aattatttct 6120

gattgcgggc gtttttgggc gggtttcaat ctaactgtgc ccgattttaa ttcagacaac 6180

acgttagaaa gcgatggtgc aggcggtggt aacatttcag acggcaaatc tactaatggc 6240

ggcggtggtg gagctgatga taaatctacc atcggtggag gcgcaggcgg ggctggcggc 6300

ggaggcggag gcggaggtgg tggcggtgat gcagacggcg gtttaggctc aaatgtctct 6360

ttaggcaaca cagtcggcac ctcaactatt gtactggttt cgggcgccgt ttttggtttg 6420

accggtctga gacgagtgcg atttttttcg tttctaatag cttccaacaa ttgttgtctg 6480

tcgtctaaag gtgcagcggg ttgaggttcc gtcggcattg gtggagcggg cggcaattca 6540

gacatcgatg gtggtggtgg tggtggaggc gctggaatgt taggcacggg agaaggtggt 6600

ggcggcggtg ccgccggtat aatttgttct ggtttagttt gttcgcgcac gattgtgggc 6660

accggcgcag gcgccgctgg ctgcacaacg gaaggtcgtc tgcttcgagg cagcgcttgg 6720

ggtggtggca attcaatatt ataattggaa tacaaatcgt aaaaatctgc tataagcatt 6780

gtaatttcgc tatcgtttac cgtgccgata tttaacaacc gctcaatgta agcaattgta 6840

ttgtaaagag attgtctcaa gctcgccgca cgccgataac aagccttttc atttttacta 6900

cagcattgta gtggcgagac acttcgctgt cgtcgacgta catgtatgct ttgttgtcaa 6960

aaacgtcgtt ggcaagcttt aaaatattta aaagaacatc tctgttcagc accactgtgt 7020

tgtcgtaaat gttgtttttg ataatttgcg cttccgcagt atcgacacgt tcaaaaaatt 7080

gatgcgcatc aattttgttg ttcctattat tgaataaata agattgtaca gattcatatc 7140

tacgattcgt catggccacc acaaatgcta cgctgcaaac gctggtacaa ttttacgaaa 7200

actgcaaaaa cgtcaaaact cggtataaaa taatcaacgg gcgctttggc aaaatatcta 7260

ttttatcgca caagcccact agcaaattgt atttgcagaa aacaatttcg gcgcacaatt 7320

ttaacgctga cgaaataaaa gttcaccagt taatgagcga ccacccaaat tttataaaaa 7380

tctattttaa tcacggttcc atcaacaacc aagtgatcgt gatggactac attgactgtc 7440

ccgatttatt tgaaacacta caaattaaag gcgagctttc gtaccaactt gttagcaata 7500

ttattagaca gctgtgtgaa gcgctcaacg atttgcacaa gcacaatttc atacacaacg 7560

acataaaact cgaaaatgtc ttatatttcg aagcacttga tcgcgtgtat gtttgcgatt 7620

acggattgtg caaacacgaa aactcactta gcgtgcacga cggcacgttg gagtatttta 7680

gtccggaaaa aattcgacac acaactatgc acgtttcgtt tgactggtac gcggcgtgtt 7740

aacatacaag ttgctaacgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc 7800

gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta 7860

atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa 7920

cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat 7980

tgggcgctct tccgcttcct cgctcactga ctcgctgcgc tcggtcgttc ggctgcggcg 8040

agcggtatca gctcactcaa aggcggtaat acggttatcc acagaatcag gggataacgc 8100

aggaaagaac atgtgagcaa aaggccagca aaaggccagg aaccgtaaaa aggccgcgtt 8160

gctggcgttt ttccataggc tccgcccccc tgacgagcat cacaaaaatc gacgctcaag 8220

tcagaggtgg cgaaacccga caggactata aagataccag gcgtttcccc ctggaagctc 8280

cctcgtgcgc tctcctgttc cgaccctgcc gcttaccgga tacctgtccg cctttctccc 8340

ttcgggaagc gtggcgcttt ctcatagctc acgctgtagg tatctcagtt cggtgtaggt 8400

cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc gctgcgcctt 8460

atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc cactggcagc 8520

agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag agttcttgaa 8580

gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg ctctgctgaa 8640

gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa ccaccgctgg 8700

tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag gatctcaaga 8760

agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact cacgttaagg 8820

gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa attaaaaatg 8880

aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt accaatgctt 8940

aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag ttgcctgact 9000

ccccgtcgtg tagataacta cgatacggga gggcttacca tctggcccca gtgctgcaat 9060

gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc agccagccgg 9120

aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt ctattaattg 9180

ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg ttgttgccat 9240

tgctacaggc atcgtggtgt cacgctcgtc gtttggtatg gcttcattca gctccggttc 9300

ccaacgatca aggcgagtta catgatcccc catgttgtgc aaaaaagcgg ttagctcctt 9360

cggtcctccg atcgttgtca gaagtaagtt ggccgcagtg ttatcactca tggttatggc 9420

agcactgcat aattctctta ctgtcatgcc atccgtaaga tgcttttctg tgactggtga 9480

gtactcaacc aagtcattct gagaatagtg tatgcggcga ccgagttgct cttgcccggc 9540

gtcaatacgg gataataccg cgccacatag cagaacttta aaagtgctca tcattggaaa 9600

acgttcttcg gggcgaaaac tctcaaggat cttaccgctg ttgagatcca gttcgatgta 9660

acccactcgt gcacccaact gatcttcagc atcttttact ttcaccagcg tttctgggtg 9720

agcaaaaaca ggaaggcaaa atgccgcaaa aaagggaata agggcgacac ggaaatgttg 9780

aatactcata ctcttccttt ttcaatatta ttgaagcatt tatcagggtt attgtctcat 9840

gagcggatac atatttgaat gtatttagaa aaataaacaa ataggggttc cgcgcacatt 9900

tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa 9960

aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct 10020

ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag 10080

acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc 10140

ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg 10200

cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga 10260

agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc 10320

aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc 10380

cagtgcc 10387

<210>9

<211>20

<212>PRT

<213>猪圆环病毒

<400>9

Ser Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His His Pro Pro Ser

1 5 10 15

His Leu Gly Gln

20

<210>10

<211>19

<212>PRT

<213>猪圆环病毒

<400>10

Pro Arg His His Tyr Arg Pro Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr

1 5 10 15

Thr Leu Ser

<210>11

<211>233

<212>PRT

<213>人工的

<220>

<223>猪第二型圆环病毒之氨基酸序列，开放阅读框2

<400>11

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg

1 5 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro

20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Arg Thr

50 55 60

Pro Ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val

65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg Ile Lys Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr

100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr

130 135 140

Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr

145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn

180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Ile Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe

210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro

225 230

Claims

1.PCV2抗原或含PCV2抗原的免疫原性组合物的制药用途，所述药物是用于预防及治疗动物的猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或任何与PRDC相关的临床迹象的药物。

2.权利要求1的用途，所述药物以治疗有效量施用需要此治疗之动物。

3.权利要求1或2的用途，其中与PRDC相关的临床迹象选自由咳嗽及呼吸困难、生长缓慢、饲料效率降低、昏睡、厌食和/或在肥育中期至后期死亡率显著增加组成的组。

4.权利要求3的用途，其中该咳嗽及呼吸困难是难以用抗生素疗法治愈的咳嗽及呼吸困难。

5.权利要求1-4之一的用途，其中该PRDC与PCV2感染相关。

6.权利要求5的用途，其中该PRDC由PCV2造成。

7.权利要求6的用途，其中该PRDC进一步与下列病原体的感染相关和/或由下列病原体的感染造成：PRRSV、猪肺炎支原体(Mycoplasmahyopneumoniae)、支气管败血性博德特氏菌(Bordetella bronchiseptica)、猪流感病毒(Swine influenza virus)、胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacilluspleuropneumoniae)、猪鼻支原体(Mycoplasma hyorhinis)、猪链球菌(Streptococcus suis)和/或多杀巴斯德氏菌(Pasteurella multocida)。

8.权利要求1-7之一的用途，其中该动物属于PCV2阳性的畜群。

9.权利要求1-8之一的用途，其中该动物属于PCV2及一或多种选自下组的其它病原体阳性的畜群：PRRSV、猪肺炎支原体、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌。

10.权利要求1-9之一的用途，其中该动物属于PCV2阳性农场的动物。

11.权利要求1-10之一的用途，其中该动物属于PCV2及一或多种选自下组的其它病原体阳性的农场：PRRSV、猪肺炎支原体、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌。

12.权利要求1-11之一的用途，其中该PCV2抗原是与PCV2的ORF-2具有至少80％同源性的多肽。

13.权利要求1-12之一的用途，其中该PCV-2抗原是由重组杆状病毒表达的PCV2 ORF-2。

14.权利要求1-13之一的用途，其中该PCV2抗原为

CircoFLEX^TM。

15.权利要求1-14之一的用途，其中该动物为猪。

16.预防及治疗动物之猪呼吸道疾病综合征(PRDC)和/或与PRDC相关之任何临床迹象的方法，包括对需要此种治疗的动物施用治疗有效量的PCV2抗原或含PCV2抗原的免疫原性组合物。

17.权利要求16的方法，其中与PRDC相关之临床迹象系选自由咳嗽及呼吸困难、生长缓慢、饲料效率降低、昏睡、厌食和/或在肥育中期至后期死亡率显著增加组成的组。

18.权利要求17的方法，其中该咳嗽及呼吸困难是难以用抗生素疗法治愈的咳嗽及呼吸困。

19.权利要求16至18之一的方法，其中该PRDC与PCV2感染相关。

20.权利要求19的方法，其中该PRDC由PCV2造成。

21.权利要求20的方法，其中该PRDC进一步与下列病原体的感染相关和/或由下列病原体的感染造成：PRRSV、猪肺炎支原体、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌。

22.权利要求16至21之一的方法，其中该动物属于PCV2阳性的畜群。

23.权利要求16至22之一的方法，其中该动物属于PCV2及一或多种选自下组的其它病原体阳性的畜群：PRRSV、猪肺炎支原体、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌。

24.权利要求16至23之一的方法，其中该动物属于PCV2阳性的农场。

25.权利要求16至24之一的方法，其中该动物属于PCV2及一或多种选自下组的其它病原体阳性的农场：PRRSV、猪肺炎支原体、支气管败血性博德特氏菌、猪流感病毒、猪鼻支原体、猪链球菌和/或多杀巴斯德氏菌。

26.权利要求16至25之一的方法，其中该PCV2抗原是与PCV2 ORF-2具有至少80％同源性的多肽。

27.权利要求16至26之一的方法，其中该PCV-2抗原是由重组杆状病毒表达的PCV2 ORF-2。

28.权利要求16至27之一的方法，其中该PCV2抗原为

CircoFLEX^TM。

29.权利要求16至28之一的方法，其中该动物为猪。