TW200848073A - Prophylaxis and treatment of PRDC - Google Patents

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Knut Elbers
Marion Kixmoeller
Francois-Xavier Orveillon
Von Richthofen Isabelle Freiin
Axel Lischewski
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Boehringer Ingelheim Vetmed
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Description

200848073 九、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於包含豬2型環狀病毒（PCV2)抗原之免疫原 性組合物之用途，其係用於預防及治療動物、尤其豬之豬 呼吸道疾病綜合症（PRDC)。 - 本申請案包含紙本及電腦可讀形式的序列表，其教示及 内容併於本文以供參考。該序列表與併於W006/072065者 相同。 〇 【先前技術】 豬2型環狀病毒（PCV2)為小型（直徑為17 nm-22 nm)二十 面體無包膜DNA病毒，其含有單股環形基因組。PCV2與 •豬1型環狀病毒（PCV1)共有大約80%之序列一致性。然 _ 而，與通常為非致病性之PCV1不同，豬感染PCV2近來已 與多種疾病症候群（其共同稱作豬環狀病毒疾病（PCVD)(亦 稱作豬環狀病毒相關疾病（PCVAD)))相關（Allan等人， 2006, IPVS Congress) 〇通常認為離乳後多系統消耗性症候 lj 群（Postweaning Multisystemic Wasting Syndrome ; PMWS)
為PCVD之主要臨床表現（Harding等人，1997，Swine Health Prod; 5: 201-203 ; Kennedy等人，2000，J Comp 一 Pathol; 122: 9-24)。PMWS 侵襲介於 5-18 週齡之豬。PMWS ^ 之臨床特徵在於消痩、皮膚蒼白、生長遲滯、呼吸窘迫、 腹濱、黃疸及黃膽。在一些受感染之豬中，將顯而易見所 有症狀之組合，而其他受感染之豬將僅具有該等症狀中之 一或兩者（Muirhead，2002，Vet. Rec.; 150:456)。在屍檢期 間，顯微鏡可見及肉眼可見之病灶亦出現於多個組織及器 127047.doc 200848073 官上，其中淋巴器官為最常見之病灶部位（Allan及Ellis， 2000; J Vet. Diagn. Invest.，12:3-14)。已觀測到 PCV2核酸 或抗原之量與顯微鏡可見淋巴病灶嚴重性之間的較強相關 性。感染PCV2之豬之死亡率可達80%。 目前對PCV2牽涉於除PMWS之外之豬疾病中之程度尚不 • 甚瞭解（Chae，Veterinary J·，2005; 169: 326-336)。存在若 % 干種在文獻中報導之潛在相關病狀，其包括豬呼吸道疾病 綜合症（PRDC)、豬皮膚病及腎病症候群（PDNS)、繁殖障 ί ’ 礙、肉芽腫性腸炎及潛在先天性震顫（CT-AII)及週產期心 肌炎（Chae，Veterinary J·，2005; 169: 326-336)。其中，由於 PRDC之一般高流行性、高發病率（在感染農場為30%-70%) ’ 及死亡率（在感染農場為4%-6%)，認為其在歐洲具有最大 經濟影響（Kim等人，Veterinary J.，2003; 166: 251-256)。 罹患PRDC之豬之肺炎係歸因於諸如PRRSV、豬流感病 毒（Swine influenza virus ; SIV)、緒肺炎黴漿菌 {Mycoplasma 以）、豬胸膜肺炎放線桿菌 〇 (Actinobacillus pleuropneumoniae) 3s. tB Λτ # # 菌（尸之病毒性與細菌性病原體之組 合。儘管病因學涉及多種病原體且在各農場之間不同，但 • PRRSV及豬肺炎黴漿菌為自展現PRDC之PCV2陽性豬分離 • 到之兩種最常見病原體（Kim等人，Veterinary J·，2003; 166: 251-25 6)。仍未知PCV2是否在PRDC之病因或PRDC之 臨床徵象之表現、嚴重性或延長中起任何作用。 與其他病毒性病原體相比，在罹患PRDC之豬之肺病灶 中一致診斷出PCV2。前瞻性研究已證明由共同感染PCV2 127047.doc 200848073 及PRRSV產生之肺炎及通常系統性疾病比與單獨感染任一 病原體相關之疾病更嚴重。因此可假定在PCV2與其他病 原體之間存在明顯協同效應，其已在該領域中之呼吸道疾 病病例中觀測到（Ellis等人，Veterinary Microbiol.，2004; 98: 159-163)。然而，仍未知PCV2(若存在於罹患PRDC之 豬中）是否對豬之PRDC之臨床徵象具有任何影響。由於在 肥育結束時具有高達100%血清反應陽性之PCV2動物普遍 存在，類似地PCV2可能對PRDC之疾病表現完全無影響， 但僅為不相關共感染病原體。 儘管PMWS通常侵襲幼豬（通常介於5與12週齡之間），但 PRDC主要可見於生長至肥育豬（通常約為16至22週齡）中。 發病率在30%-70%範圍内，其中平均死亡率為4%-6%(Kim 等人，Veterinary J·，2003; 166: 251-256)。PRDC之臨床徵 象為難以用抗生素療法治癒之長期且異常嚴重之咳嗷及呼 吸困難、生長緩慢、飼料效率降低、嗜眠、厭食及在肥育 中期至後期死亡率顯著增加。 顯微鏡可見病灶PRDC之特點為具有支氣管周及細支氣 管周纖維化之支氣管性間質性肺炎。巨噬細胞之浸潤顯著 增厚肺泡隔（Chae，Veterinary J·，2005; 169: 326-336)。 基於DNA疫苗之治療PCV2感染之方法描述於美國專利 第6,703,023號中。在WO 03/049703中描述肝嵌合疫苗之 製造，該肝嵌合疫苗包含病原性PCV2病毒株之免疫原性 基因置換PCV-1骨架之基因的PCV-1骨架。WO 99/18214已 提供若干種PCV2病毒株及用於製備滅活PVC2疫苗之程 127047.doc 200848073 序。然而，未曾報導功效資料。在WO 06/072065中已報導 有效的基於ORF-2之次單位疫苗。該等疫苗中之任一者意 欲用於大於3週齡之豬之疫苗接種/治療。任何該等疫苗均 未描述用於免疫預防或治療罹患PRDC之豬、尤其羅患 PRDC之PCV2陽性豬。 此外，未描述該等疫苗賦予對抗PCV2感染之保護免疫 ^ 性或降低、減輕已具有抗PCV2抗體、較佳具有母體抗pc2 ^ 抗體之豬中與其相關之任何臨床症狀的嚴重性或治癒與其 相關之任何臨床症狀。 【發明内容】 PRDC之特徵在於多種臨床徵象，其包括難以用抗生素 療法治癒之長期且異常嚴重之咳嗷及呼吸困難、生長緩 慢、飼料效率降低、嗜眠、厭食及在肥育中期至後期死亡 率顯著增加。彼等臨床徵象與大量各種病原體有關。迄今 為止尚未知在PRDC中是否涉及？(：¥2及（存在時）]?(：¥2在 1. PRDC中所涉及之程度。已意外發現在各種病原體中， PCV2亦在PRDC之臨床徵象之表現、嚴重性及延長中起重 要作用。因此其中，PCV2為豬PRDC之病原體中的一種。 一般而言，一種病原體對如PRDC之多病因疾病（等於多 因素疾病）之影響不可預測。病原體可無影響，但亦轉 移、抑制、替代、覆蓋或加強其他病原體對多因素疾病 (如PRDC)之臨床徵象之表現、嚴重性及延長的影響。舉例 而曰，若存在至少一種其他病原體，則多因素疾病（如 )之種病原體之減少或消除可對彼疾病之臨床徵兆 127047.doc 200848073 無影響，但亦可顯著減少彼疾病之臨床症狀，即使在任何 其他病原體存在下亦如此。所涉及之病原體之數目愈多， 則僅一種病原體之減少或消除對疾病之表現持續時間、嚴 重性或延長之正面影響的期望愈低。如今已意外發現藉由 用PCV2抗原免疫預防或治療受威脅或受感染動物可減輕 或降低豬之PRDC臨床徵象之表現、嚴重性及延長。詳言 、 之，在感染PCV2以及已知造成豬之PRDC或與其相關之病 广 原體（諸如PRRSV、豬肺炎黴漿菌、支氣管敗血性博德氏 桿菌、豬流感病毒、豬鼻黴漿 菌及/或出血敗血性巴斯德桿菌）之 豬中，PRDC之臨床徵象或與其相關之臨床徵象之嚴重性 及延長可強烈減輕及降低。換言之，用PCV2抗原來免疫 預防及治療罹患PRDC之豬對豬之整體健康、肥育期間之 體重增加及豬肥育中期至晚期之死亡率具有正面影響，尤 其因為已知該等因素（整體健康、體重增加、死亡率）受 I， pRRSv、豬肺炎黴漿菌、支氣管敗血性博德氏桿菌、豬流 感病毒、豬鼻黴裂菌及/或出血敗血性巴斯德桿菌負面影 響。 * 因此，根據一態樣，本發明提供一種免疫預防及治療動 一 物之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相關之任何 臨床徵象之方法，其包含向需要此治療之動物投與治療有 效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步 驟。 與PRDC相關之臨床徵象係選自由咳漱及呼吸困難、生 127047.doc -10- 200848073 長緩慢、飼料效率降低、嗜眠、厭食及/或在肥育中期至 後期死亡率顯著增加組成之群。因此根據另一態樣，本發 明係關於一種免疫預防及治療動物之咳嗷及呼吸困難、生 長緩慢、飼料效率降低、嗜眠、厭食及/或與PRDC相關之 死亡率顯著增加的方法，其包含向需要此治療之動物投與 治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合 ’ 物的步驟。較佳地，該咳嗽及呼吸困難係難以用抗生素療 法治癒。
C 如本文中所用之衡语’’抗原’’係指引起宿主之免疫反應之 胺基酸序列。如本文中所用，抗原包括任何PCV2蛋白之 全長序列、其類似物或其免疫原性片段。術語，，免疫原性 片段”係指包括一或多個抗原決定基且由此引起宿主之免 疫反應之蛋白質片段。可使用此項技術中熟知之任何數目 之抗原決定基定位技術來鑑別該等片段。例如參見Epit〇pe
Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology，第 66 卷（Glenn E· Morris編，1996)Humana Press，Totowa，New
Jersey。舉例而言，可藉由（例如）同時在固體支撐物上合 成大量肽（該等肽對應於蛋白質分子之部分）且使該等肽與 抗體反應（同時該等肽仍與支撐物連接）來測定線性抗原決 - 疋基。該等技術為此項技術中所已知且描述於（例如）美國 專利第 4,708,871 號；Geysen 等人（1984)Proc. Natl. Acad· Sci· USA 81:3998-4002 ; Geysen 等人（1986)Molec.
Immunol. 23:709-715中。類似地，構形抗原決定基易於藉 由諸如以X射線晶體學及2維核磁共振來測定胺基酸之空間 127047.doc 11 200848073 構形而加以鑑別。例如參見Epitope Mapping Protocols，同 上文。 例如多抗原決定基、侧接抗原決定基及其他重組或合成 得到之抗原之合成抗原亦包括於該定義中。例如參見 Bergmann 等人（1993)Eur. J. Immunol. 23:2777-2781 ； Bergmann 等人(1996), J. Immunol. 157:3242-3249 ; Suhrbier, A. (1997), Immunol, and Cell Biol. 75:402-408 ； Gardner 等人，（1998) 12th World AIDS Conference， Geneva，Switzerland，1998年 6 月 28 日-7 月 3 日0 ’’免疫反應π意謂（但不限於）在宿主中發生針對所關注之 抗原、免疫原性組合物或疫苗之細胞及/或抗體介導之免 疫反應。通常，”免疫反應”包括（但不限於）一或多種以下 效應·特異性針對所關注之組合物或疫苗中所包括之一或 多種抗原之抗體、Β細胞、辅助Τ細胞、抑制Τ細胞及/或細 胞毒性Τ細胞的產生或活化。較佳地，宿主將顯示治療性 或保護性免疫學（記憶）反應以使得對新感染之抗性將增強 及/或疾病之臨床嚴重性降低。此保護將由PC V2感染之數 目或嚴重性的降低或一或多種與PC V2感染相關之症狀之 缺乏、病毒血症發作之延遲、病毒持續性降低、總病毒負 載量降低及/或病毒性排泄物減少來證實。 如本文中所用之術語，，免疫原性組合物，，或”疫苗”（兩種術 語係同義使用）係指含有PCV2抗原之任何醫藥組合物，該 組合物可用於預防或治療受檢者之PC V2感染相關疾病或 病狀。較佳免疫原性組合物可誘發、刺激或增強針對 127047.doc -12- 200848073 PCV2之免疫反應。因此該術語涵蓋如下所述之次單位免 疫原性組合物，以及含有全滅活或減毒及/或失活PCV2之 組合物。 因此根據另一態樣，本發明係關於一種免疫預防及治療 動物之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相關之任 何臨床徵象的方法，其包含向需要此治療之彼動物投與有 效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步 驟，其中該免疫原性組合物為次單位免疫原性組合物、含 有全滅活或減毒及/或失活PCV2之組合物。 如本文中所用之術語’’次單位免疫原性組合物”係指含有 至少一種來源於PCV2之抗原或與PCV2之抗原同源的免疫 原性多肽或抗原、而非所有抗原的組合物。此組合物大體 上不含完整PCV2。因此，”次單位免疫原性組合物”係由來 自PCV2或其重組類似物之至少部分純化或分級分離（較佳 大體上純化）之免疫原性多肽製備。次單位免疫原性組合 物可包含大體上不含來自PCV2之其他抗原或多肽或呈分 級分離形式之所關注次單位抗原。較佳免疫原性次單位組 合物包含如下所述之PCV2 ORF-2蛋白質。最佳者為免疫 原性次單位組合物，其包含WO 06/072065中提供之PCV2 抗原中之任一者，該文獻係以引用的方式全部併入本文 中〇 根據其他態樣，如本文中所用之免疫原性組合物最佳包 含由PCV2之ORF-2表現之多肽或其片段。在本文中用於製 備組合物且在本文中提供之方法中之PCV2 ORF-2DNA及 127047.doc -13- 200848073 蛋白質為PCV2分離株内高度保守之域，且進而任何PCV2 ORF-2可有效作為如本文中使用之PCV ORF-2DNA及/或多 肽的來源。較佳PCV2 ORF-2蛋白質為WO 06/072065之 SEQ ID NO: 11 之 PCV2 ORF-2蛋白質。另一較佳 PCV ORF-2多肽係以WO 06/072065之SEQ ID NO: 5形式提供。然 而，熟習此項技術者應瞭解此序列可在序列同源性方面改 變多達6%-10%且仍保持使其適用於免疫原性組合物中之 抗原特徵。免疫學組合物之抗原特徵可（例如）由如由WO 06/072065之實例4提供之激發實驗評估。此外，與如WO 06/072065中提供之SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4之聚核苷 酸序列編碼的PCV2 ORF-2蛋白質相比，當經修飾抗原賦 予至少70%、較佳80%、更佳90%之保護免疫性時，經修 飾抗原之抗原特徵仍得以保持。 因此根據另一態樣，本發明提供一種免疫預防及治療動 物之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相關之任何 臨床徵象之方法，其包含向需要此治療之彼動物投與有效 量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步 驟，其中該PCV2抗原為抗原PCV2 ORF-2蛋白質，與如由 WO 06/072065 中提供之 SEQ ID NO:3 或 SEQ ID NO:4 之聚 核苷酸序列編碼的PCV2 ORF-2蛋白質相比，其具有至少 70%、較佳80%、甚至更佳90%之保護免疫性。該PCV2 ORF-2 較佳具有 WO 06/072065 之 SEQ ID NO: 11 或 SEQ ID NO: 5之序列。 在一些形式中，PCV2 ORF-2蛋白質之免疫原性部分係 127047.doc -14- 200848073 用作包含PCV2抗原之免疫原性組合物中的抗原組份。如 本文中所用之術語”免疫原性部分”係指PCV2 ORF-2蛋白質 及/或聚核皆酸各自之截短形式及/或經取代形式咬片段。 較佳地’該等截短形式及/或經取代形式或片段應包含全 長ORF-2多肽之至少6個連續胺基酸。更佳地，截短形式或 經取代形式或片段應具有全長PCV ORF-2多肽之至少10 個’更佳至少15個且更佳至少19個連續胺基酸。此方面中
( 之兩個較佳序列係以WO 06/072065之SEQ ID NO: 9及SEQ ID NO: 10形式提供。應進一步瞭解該等序列可為較大片段 或截短形式之部分。 如上所述，另一較佳PCV2 ORF-2多肽為由SEQ ID N〇: 3或SEQ ID NO: 4之核苷酸序列編碼之任一多肽。然而， 熟習此項技術者應瞭解此序列可在序列同源性方面改變多 達6%-20%且仍保持使其適用於免疫原性組合物中之抗原 特徵。在一些形式中，此PVC2 〇RF-2多肽之截短或經取 C； 代形式或片段係用作組合物中之抗原組份。較佳地，該等 截短或經取代形式或片段應包含（例如）SEq ID NO: 3或 SEQ ID NO: 4之全長PCV2 〇RF_2核苷酸序列之至少18個 連績核苷酸。更佳地，該等截短或經取代形式或片段應具 有（例如）SEQ ID NO: 3 或 SEQ ID NO: 4 之全長 PCV2 ORF-2 核苷酸序列之至少30個、更佳至少45個且更佳至少57個連 續核苷酸。 如此項技術中已知之”序列一致性”係指兩個或兩個以上 多肽序列或兩個或兩個以上聚核苷酸序列（亦即參考序列 127047.doc -15- 200848073 與待與參考序列比較之給定序列）之間之關係。如由該等 序列之間的匹配所測定，序列一致性係在序列經最佳比對 以產生最高序列相似度後，藉由比較給定序列與參考序列 而測定。在此比對後，在位置-位置基礎上確定序列一致 性’例如，若在一特定位置處核苷酸或胺基酸殘基一致， 則該等序列在彼位置處” 一致”。隨後將該等位置一致性之 ' 總數除以參考序列中核苷酸或殘基之總數以得到序列一致 性百分比。可易於由已知方法來計算序列一致性，該等方 f 1 、 法包括（並不限於）以下文獻中描述之方法：computational
Molecular Biology，Lesk，Α· Ν·編，Oxford University Press，New York (1988) ; Biocomputing: Informatics and Genome Projects，Smith，D.W.編，Academic Press，New York (1993) ; Computer Analysis of Sequence Data，部分I， Griffin，A.Μ·及 Griffin，H. G.編，Humana Press，New Jersey (1994) ; Sequence Analysis in Molecular Biology， Q v〇n Heinge, G.5 Academic Press (1987) ； Sequence Analysis
Primer，Gribskov，M.及 Devereux，J·編，M· Stockton Press， New York (1991);及 Carillo，H·及 Lipman，D·，SIAM J.
Applied Math·，48: 1073 (1988)，其教示内容係以引用的方 、 式併入本文中。測定序列一致性之較佳方法經設計以得到 所測試序列之間的最大匹配。測定序列一致性之方法已在 測定給定序列之間的序列一致性之公開可用電腦程式中編 碼。該等程式之實例包括（但不限於）GCg程式套件 (Devereux，J·等人，Nucleic Acids Research，12(1):387 127047.doc -16 - 200848073 (1984))、BLASTP、BLASTN 及 FASTA(Altschul，S. F·等 人，J. Molec· Biol·，215:403-410 (1990))。BLASTX程式可 公開獲自NCBI及其他來源（BLAST Manual，Altschul, S·等 人，NCVI NLM NIH Bethesda，MD 20894, Altschul，S. F· 等人，J. Molec· Biol·，215:403-410 (1990)，其教示内容係 以引用的方式併入本文中）。該等程式使用預設空隙權重 (default gap weight)最佳比對序列以產生給定序列與參考
序列之間的最高程度之序列一致性。舉例而言，具有與參 考核普酸序列具有至少（例如）85%、較佳90%、甚至更佳 95%”序列一致性”之核苷酸序列之聚核苷酸意謂除給定聚 核苷酸序列可在參考核苷酸序列之每各1 〇〇個核苷酸中包 括至多15個、較佳至多1 〇個、甚至更佳至多5個點突變之 外，給定聚核苷酸之核苷酸序列與參考序列一致。換言 之，在具有相對於參考核苷酸序列具有至少85%、較佳 90%、甚至更佳95%—致性之核苷酸序列之聚核苷酸中， 參考序列中之至多15%、較佳iG%、甚至更佳5%之核芽酸 可缺失或經另一核苷酸取代，或可將參考序列中全部核苷 酸之至多15%、較佳1G%、甚至更佳5%之多個核㈣插入 參考序列中。參考序列之該等突變可發生在參考核 列之5·或3,末端位置處或彼等末端位置之間的任何地方， 個別地散布於參考序列中之核《之間或參考序列内之— 或多個連續群中。類似地’具有與參考胺基酸序列具有至 :(例如)85%、較佳9〇%、甚至更佳㈣序列—致性 胺基酸序列之多肽意謂除給定多肽序列可在參考核苦酸序 127047.doc 200848073 列之每各！〇〇個胺基酸中包括至多15、較佳至多1〇、甚至 更佳至多5個胺基酸變異之外，多肽之給定胺基酸序列與 參考序列一致。換言之，為獲得與參考胺基酸序列具有至 少85%、較佳90%、甚至更佳95%序列一致性之給定多肽 序列，參考序列中之至多15%、較佳至多1〇%、甚至更佳 至多5%之胺基酸殘基可缺失或經另一胺基酸取代，或可 - 將參考序列中胺基酸殘基總數之至多15%、較佳至多 ζ% 1〇乂、甚至更佳至多5%之多個胺基酸插入參考序列中。參 考序列之該等變異可發生於參考胺基酸序列之胺基末端或 羧基末端位置處或彼等末端位置之間的任何地方，個別地 散布於參考序列中之殘基之間或參考序列内之一或多個連 續群中。較佳地，不一致之殘基位置係因保守性胺基酸取 代而不同。然而，當測定序列一致性時，不包括保守性取 代作為匹配。 如本文中所用之"序列同源性"係指一種測定兩個序列之 C； 相關性的方法。為測定序列同源性’最佳比對兩個或兩個 以上序列且必要時引入以家。然而，與"序列一致性"不 同，當測定序列同源性時’將保守性胺基酸取代計為匹 配換σ之’為獲得與參考序列具有95%序列同源性之多 • R或聚核普酸，參考序列中之85%、較佳90%、甚至更佳 95%之胺基酸殘基或核芽酸須與另—胺基酸或核*酸匹配 或包3 k另⑯基酸或核苦酸之保守性取代，或可將參考 序列中玉。P胺基酉夂殘基或核普酸（不包括保守性取代）之至 多⑽、較佳至多1G%、甚至更佳至多5%之多個胺基酸或 127047.doc -18- 200848073 核苦酸插入參考序列中。同源序列較佳包含至少一段5〇 個，甚至更佳至少100個，甚至更佳至少25〇個且甚至更佳 至少500個核苷酸。 ’’保守性取代，，係指一個胺基酸殘基或核苷酸經另一個具 有類似特徵或性質（包括大小、疏水性等）之胺基酸殘基或 核苷酸取代，以使得整體功能性不顯著改變。 ’’分離’’意謂”藉由人工”自其天然狀態改變，亦即若其存 在於自然界中，則其已自原始環境改變或移出，或兩者。 舉例而言，天然存在於活有機體中之聚核苷酸或多肽係未 經”分離”，當該術語用於本文中時，與天然狀態之共存物 質分離之相同聚核苷酸或多肽係經，，分離”。 因此，根據另一態樣，本發明提供一種預防及治療動物 之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相關之任何臨 床徵象之方法，其包含向需要此治療之動物投與有效量之 PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其 中5亥PC V2 ORF-2蛋白質為上述蛋白質中之任一者。該 PCV2 ORF-2蛋白質較佳為·· i) 包含 WO 06/07065之 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO: 10或 SEQ ID NO: 11之序列的多肽； ii) 與i)之多肽至少80%同源的任何多肽， iii) 0及/或Η)之多肽之任何免疫原性部分， lv) m)之免疫原性部分，其包含包括於WO 06/072065 之 SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 127047.doc -19- 200848073 9、SEQ ID NO: 10或 SEQ ID NO: 11之序列中的至 少10個連續胺基酸， v) 由包含 WO 06/072065 之 SEQ ID NO: 3 或 SEQ ID NO: 4之序列的DNA編碼之多肽， vi) 由與v)之聚核苷酸至少80%同源之聚核苷酸編碼 的任何多肽， vii) 由v)及/或vi)之聚核苷酸編碼之多肽的任何免疫原 性部分， viii) vii)之免疫原性部分，其中編碼該免疫原性部分 之聚核苷酸包含包括於WO 06/072065之SEQ ID NO: 3或SEQ ID NO: 4之序列中的至少30個連續 核苷酸。 彼等免疫原性部分中之任一者較佳具有由WO 06/07065 之 SEQ ID NO: 3 或 SEQ ID NO: 4之序列編碼的 PCV2 ORF-2 蛋白質之免疫原性特徵。 根據另一態樣，PCV2 ORF-2蛋白質係以可有效誘發所 需免疫反應（亦即降低PRDC及/或與PRDC相關之任何臨床 症狀之發病率、減輕PRDC及/或與PRDC相關之任何臨床 症狀之嚴重性或預防或減少PRDC及/或與PRDC相關之任 何臨床症狀）之抗原包涵量提供於免疫原性組合物中。 PCV2 ORF-2蛋白質包涵量較佳為每毫升最終免疫原性組 合物至少0.2 pg抗原（pg/ml)、更佳約0.2 pg/ml至約400 pg/ml、更佳約0.3 pg/ml至約200 pg/ml、甚至更佳約0.35 pg/ml至約 100 pg/ml、更佳約 0.4 pg/ml至約 50 pg/ml、更 127047.doc -20- 200848073 佳約 0.45 pg/ml至約 30 pg/ml、更佳約 0.6 pg/ml至約 15 pg /ml、甚至更佳約〇·75 pg/ml至約8 pg/ml、甚至更佳約1·〇 gg/ml至約 6 pg/ml、更佳約 1.3 pg/ml至約 3·0 pg/ml、甚至 更佳約1.4 pg/ml至約2·5 pg/ml、甚至更佳約1.5 pg/ml至約 2.0 pg/ml且最佳約 1.6 pg/ml。 根據另一態樣，PCV ORF-2抗原包涵量為每劑量最終抗 原組合物至少0.2微克如上所述之PCV2 ORF-2蛋白質（微克/ 劑量）、更佳約0.2微克/劑量至約400微克/劑量、更佳約〇.3 微克/劑量至約200微克/劑量、甚至更佳約〇_35微克/劑量 至約100微克/劑量、更佳約0.4微克/劑量至約50微克/劑 量、更佳約0·45微克/劑量至約30微克/劑量、更佳約〇·6微 克/劑量至約15微克/劑量、甚至更佳約0.75微克/劑量至約 8微克/劑量、甚至更佳約1.0微克/劑量至約6微克/劑量、 更佳約1.3微克/劑量至約3.0微克/劑量、甚至更佳約1.4微 克/劑量至約2.5微克/劑量、甚至更佳約1.5微克/劑量至約 2.0微克/劑量且最佳約1.6微克/劑量。 可以包括PCV2 ORF2之分離及純化、標準蛋白質合成及 重組方法之任何方式獲得用於本發明之免疫原性組合物中 之PCV2 ORF-2多肽。用於獲得PCV2 ORF-2多肽之較佳方 法提供於WO 06/072065中，其教示及内容係以引用的方式 全部併入本文中。簡言之，用含有PCV2 ORF-2 DNA編碼 序列之重組病毒載體感染易感細胞，由重組病毒表現 PCV2 ORF-2多肽且藉由過渡自上清液回收所表現之pcV2 ORF-2多肽且由任何習知方法、較佳使用二元伸乙亞胺使 127047.doc -21 - 200848073 其失活，隨後將其中和以終止失活過程。 如本文中所用之免疫原性組合物亦係指包含以下各物之 組合物：i)較佳具有上述濃度之上述PCV2 ORF-2蛋白質中 之任一者，及ii)表現該PCV2 ORF-2蛋白質之病毒載體、 較佳重組桿狀病毒之至少一部分。此外，免疫原性組合物 ‘可包含：i)較佳具有上述濃度之上述PCV2 ORF-2蛋白質中 之任一者，ii)表現該PCV2 ORF-2蛋白質之病毒載體、較 佳重組桿狀病毒之至少一部分，及i i i) 一部分細胞培養物 r.' ' 上清液。 因此，根據另一態樣，本發明提供一種免疫預防及治療 動物之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相關之任 何臨床徵象之方法，其包含向需要此治療之彼動物投與有 效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步 驟，其中該PCV2抗原為重組PCV2 ORF-2、較佳為桿狀病 毒表現之PCV2 ORF-2。彼等重組或桿狀病毒表現PCV2 ORF-2較佳具有如上所述之序列。 如本文中所用之免疫原性組合物亦係指包含以下各物之 組合物：i)較佳具有上述濃度之上述PCV2 ORF-2蛋白質中 • 之任一者，ii)表現該PCV2 ORF-2蛋白質之病毒載體、較 . 佳重組桿狀病毒之至少一部分，及iii) 一部分細胞培養 物；其中約90%之組份具有小於1 μιη之大小。 如本文中所用之免疫原性組合物亦係指包含以下各物之 組合物：i)較佳具有上述濃度之上述PCV2 ORF-2蛋白質中 之任一者，ii)表現該PCV2 ORF-2蛋白質之病毒載體之至 127047.doc -22- 200848073 少一部分，iii) 一部分細胞培養物，iv)及使重組病毒載體 失活之失活劑，較佳為BEI，其中約90%之組份i)至組份 Ui)具有小於1 μπι之大小。BEI較佳以可有效使桿狀病毒失 活之濃度存在，較佳為2 mM至約8 mM ΒΕΙ、較佳約5 mM ΒΕΙ之量。 如本文中所用之免疫原性組合物亦係指包含以下各物之 組合物：0較佳具有上述濃度之上述PCV2 ORF_2蛋白質中 之任一者’ ii)表現該PCV2 ORF-2蛋白質之病毒載體之至 少一部分’ iii) 一部分細胞培養物，iv)使重組病毒載體失 活之失活劑，較佳為BEI，及v)終止由失活劑所介導之失 活之中和劑，其中約90%之組份i)至組份iii)具有小於i μιη 之大小。較佳地，若失活劑為ΒΕΙ，則該組合物包含與βει 等量之硫代硫酸鈉。 將多肽併入可投與對PCV2感染敏感之動物之組合物 中。在較佳形式中，組合物亦可包括熟習此項技術者已知 之其他組份（亦參見 Remington，s Pharmaceuticai sciences (1990)。第 18版，Mack Publ·，Easton)。另外，該組合物可 包括或多種被醫學上可接受之載劑。如本文中所用，” 獸醫學上可接受之載劑”包括任何及所有溶劑、分散介 質、塗料、佐劑、穩定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細菌劑及 抗真菌劑、等張劑、吸收延遲劑及其類似載劑。在一較佳 κ施例中，免疫原性組合物包含較佳具有上述濃度之如由 此提供之PCV2 0RF-2蛋白質，其係與佐劑（較佳Carb〇p〇i) 及生理鹽水混合。 127047.doc -23- 200848073 热習此項技術者應瞭解本文中所用之組合物可併有已知 可注射、生理學上可接受之無菌溶液。為製備用於非經腸 注射或輸液之即用溶液，現成可用諸如鹽水或相應血漿蛋 白夤浴液之等張水溶液。另外，本發明之免疫原性組合物 • 及疫苗組合物可包括稀釋劑、等張劑、穩定劑或佐劑。稀 釋劑可包括水、鹽水、右旋糖、乙醇、甘油及其類似物。 等張抝尤其可包括氯化鈉、右旋糖、甘露糖醇、山梨糖醇 及乳糖铋疋劑尤其包括白蛋白及乙二胺四乙酸之鹼金屬 1 鹽。 如本文中所用之”佐劑”可包括氫氧化鋁及磷酸鋁；皂 素例如 Quil A、qs-21 (Cambridge Biotech Inc·，Cambridge MA) GPI-Oioo (Qalenica Pharmaceuticals, Inc.5 Birmingham, AL: ’油包水乳液；水包油乳液；水/油/水乳液。乳液尤 ’、土於幸工液體石堞油（EuroPean Pharmacopea類型）；由 稀烴、尤其異丁烯或癸稀之低聚合產生之類異戊二稀油， 〇 烷油或角裳烯油；含有直鏈烷基之酸或醇之醋， ^特疋κ植物油、油酸乙酯、丙二醇二气辛酸酯，癸酸 酉旨）、甘油三辛酸癸酸或丙二醇二油酸_ ;支㈣ ‘ ㈣或醇之醋，尤其異硬脂酸酯。該油係與乳化劑組合使 ‘ 帛以形成乳液。乳化劑較佳為非離子型界面活性劑，尤其 視情況經乙氧基化之脫水山梨糖醇酉旨、二縮甘露醇酉旨（例 w甘露糖醇油酸_)、乙二醇_、聚甘油_、丙二醇 - 咬知異硬脂酸酯、蓖麻油酸酯或羥基硬脂酸 醋，及聚氧化丙烯-聚氧化乙稀共聚物嵌段體，尤其泊洛 127047.doc -24- 200848073 尼克（Pluronic)產品，尤其為L121。參見Hunter等人，The
Theory and Practical Application of Adjuvants(Stewart-Tull，D. E. S·編）· JohnWiley and Sons, NY，第 51_94 頁 (1995)及 Todd等人，Vaccine 15:564-570 (1997)。 舉例而言，有可能使用'’Vaccine Design，The Subunit and Adjuvant Approach’’，M. Powell 及 M. Newman 編， Plenum Press，1995之第147頁所述之SPT乳液，及此同一 本著作之第183頁所述之乳液MF59。 佐劑之另一實例為選自丙烯酸或甲基丙烯酸之聚合物及 順丁烯二酸酐及烯基衍生物之共聚物的化合物。有利佐劑 化合物為尤其與糖或多元醇之聚烯基醚交聯之丙烯酸或曱 基丙烯酸之聚合物。該等化合物稱為術語卡波姆 (carbomer)(Phameuropa，第 8 卷，第 2期，1996 年 6 月）。熟 習此項技術者亦可參看美國專利第2,909,462號’其描述與 具有至少3個羥基、較佳不超過8個羥基之多羥基化合物交 聯的該等丙烯酸聚合物，其中至少三個羥基之氫原子經具 有至少2個碳原子之不飽和脂族基團置換。較佳基團為含 有2至4個碳原子之基團，例如乙烯基、烯丙基及其他烯系 不飽和基團。該等不飽和基團可自身含有諸如甲基之其他 取代基。以名稱Carbopol(BF Goodrich，Ohio，USA)鎖售之 產品尤其適合。其與烯丙基蔗糠或烯丙基異戊四醇交聯。 其中，可提及 Carbopol 974P、Carbopol 934P 及Carbopol 97 IP。最佳使用較佳每劑量約500 pg至約5 mg之量、甚至 更佳每劑量約750 pg至約2.5 mg之量且最佳每劑量約1 mg 127047.doc -25- 200848073 之量的Carbopo卜尤其使用Carbopol 971P。 其他適合佐劑尤其包括（但不限於）RIBI佐劑系統（Ribi
Inc.)、嵌段共聚物（CytRx，Atlanta GA)、SAF-M(Chiron， Emeryville CA)、單磷醯基脂質A、安夫利定（Avridine)脂 質-胺佐劑、來自大腸桿菌（E.coli)之熱不穩定腸毒素（重組 或其他）、霍亂毒素、IMS 1314或胞壁醯二肽。 較佳添加每劑量約1〇〇 至約1〇 mg之量之佐劑。甚至 更佳添加每劑量約1 〇〇 μg至約1 〇 mg之量之佐劑。甚至更 佳添加每劑量約500 pg至約5 mg之量之佐劑。甚至更佳添 加每劑量約750 pg至約2.5 mg之量之佐劑。最佳添加每劑 量約1 mg之量之佐劑。 另外，組合物可包括一或多種醫藥上可接受之載劑。如 本文中所用，”醫藥上可接受之載劑”包括任何及所有溶 劑、分散介質、塗料、穩定劑、稀釋劑、防腐劑、抗細菌 劑及抗真菌劑、等張劑、吸收延遲劑及其類似物。由此提 供之組合物最佳含有自活體外培養細胞之上清液回收的 PCV2 ORF-2蛋白質，其中該等細胞係經含有PCV2 〇RF-2 DNA且表現PCV2 ORF-2蛋白質之重組病毒載體感染，且 其中該細胞培養物係經約2 mM至約8 mM BEI、較佳約5 mM BEI處理以使病毒載體失活，且用相等濃度之中和劑 (較佳硫代硫酸鈉溶液）處理至最終濃度為約2 mM至約8 mM、較佳約5 mM。 本發明亦係關於免疫原性組合物用於免疫預防或治療 PRDC或減少與prdc相關之任何臨床徵象的用途，該免疫 127047.doc -26- 200848073 原性組合物包含·· i)較佳具有上述濃度之上述PCv2 〇RF_2 蛋白質中之任一者，ii)表現該PCV2 ORF-2蛋白質之病毒 載體之至少一部分，Ui)一部分細胞培養物，iv)使重組病 毒載體失活之失活劑，較佳為BEI，及幻終止由失活劑所 介導之失活之中和劑，較佳為與BEI等量之硫代硫酸鈉； 及vi)適當佐劑，較佳為上述量之Carb〇p〇1 971 ;其中約 90%之組份i)至組份出）具有小於！ μηι之大小。根據另一態 樣’此免疫原性組合物進一步包含呈生理學上可接受之濃 度的醫藥學上可接受之鹽、較佳磷酸鹽。較佳將該免疫原 性組合物之pH值調節至生理ρΗ值，意謂介於約6·5與7.5之 間。 如本文中所用之免疫原性組合物亦係指一種組合物，其 每一毫升包含：1)至少1.6 pg上述PCV2 ORF-2蛋白質；ii) 表現該PCV2 ORF-2蛋白質之桿狀病毒之至少一部分；iu) 4为細胞培養物，iv)約2 mM至8 mM ΒΕΙ ; v)與ΒΕΙ等量 之硫代硫酸鈉；及vi)約1 mg Carbopol 971 ;及vii)生理學 上可接受之濃度之磷酸鹽；其中約9〇。/。之組份丨）至組份iH) 具有小於1 μηι之大小且將該免疫原性組合物之pH值調節 至約6.5至7.5。 免疫原性組合物可進一步包括一或多種其他免疫調節 劑，諸如介白素、干擾素或其他細胞激素。免疫原性組合 物亦可包括建它黴素（Gentamicin)及硫柳汞（Merthi〇late)。 儘管熟練技術者可易於確定適用於本發明情況下之佐劑及 添加劑之量及濃度，但本發明涵蓋包含約5〇吨至約2〇〇〇 127047.doc -27- 200848073 pg佐劑之組合物且較佳每毫升劑量疫苗組合物包含約25 〇 gg佐劑。因此，如本文中所用之免疫原性組合物亦係指包 含約1 pg/ml至約60 pg/ml抗生素且更佳小於約3〇叫/…抗 生素之組合物。 如本文中所用之免疫原性組合物亦係指包含以下各物之 組合物：i)較佳具有上述濃度之上述PCV2 0RF-2蛋白質中 之任一者，ii)表現該PCV2 0RF-2蛋白質之病毒載體之至 少一部分，iii) 一部分細胞培養物，iv)使重組病毒載體失 活之失活劑，較佳為BEI，及v)終止由失活劑所介導之失 活之中和劑，較佳為與BEI等量之硫代硫酸鈉；Vi)適當佐 劑，較佳為上述量之Carbopol 971 ; vii)醫藥學上可接受之 濃度之鹽水缓衝液，較佳為磷酸鹽，及viii)抗微生物活性 劑；其中約90%之組份i)至組份iii)具有小於1 μπι之大小。 如本文中所用之免疫原性組合物亦係指Ingelvac® CircoFLEX™ (Boehringer Ingelheim Vetmedica Inc，St Joseph，MO，USA)、CircoVac® (Merial SAS，Lyon， France)、Porcilis PCV(Intervet Inc.，Millsbor。，DE，USA) 或 Suvaxyn PCV-2 One Dose® (Fort Dodge Animal Health， Kansas City，KA，USA)。因此，本發明亦提供一種免疫預 防及治療動物之豬呼吸道疾病综合症（PRDC)及/或與PRDC 相關之任何臨床徵象的方法，其包含向需要此治療之動物 投與治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性 組合物的步驟，其中該包含PCV2抗原之免疫原性組合物 為 Ingelvac® CircoFLEXTM、CircoVac®、Porcilis PCV及 / 127047.doc -28 - 200848073 或 Suvaxyn PCV-2 One Dose®，其較佳為 Ingelvac® CircoFLEXTM。 如上所述，PCV2已經鑑別為PRDC之一種相關病原體。 大多數罹患PRDC之豬對PCV2呈陽性（例如Kim等人， Veterinary Journal (2003) 166: 251-256)。用 PCV2抗原來 治療豬使得PRDC之呼吸道症狀減少（參見實例3)。因此根 據另一態樣，本發明提供一種免疫預防及治療動物之豬呼 吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相關之任何臨床徵象 的方法，其包含向需要此治療之動物投與治療有效量之 PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其 中該PRDC或與PRDC相關之該等臨床徵象係與PCV2相關 或由PC V2造成。此外，本發明亦提供一種免疫預防及治 療動物之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相關之 任何臨床徵象的方法，其包含向需要此治療之動物投與治 療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物 的步驟，其中該PRDC或與PRDC相關之該等臨床徵象係與 PCV2及PRRSV、豬胸膜肺炎放線桿菌、豬肺炎黴漿菌、 支氣管敗血性博德氏桿菌、豬流感病毒、豬鼻黴漿菌、豬 鏈球菌（Streptococcus suis)及/或出血敗血性巴斯德桿菌相 關或由其造成。 因為PCV2為PRDC之一種病原體，所以對PCV2呈陽性之 畜群比不含PCV2之畜群具有更高的患上PRDC或患上更嚴 重持續時間之具有嚴重臨床症狀之PRDC的風險。如本文 中所用之術語”對PCV2呈陽性之畜群”意謂畜群動物之至少 127047.doc -29- 200848073 1%、較佳10%、更佳30%、甚至更佳50%、最佳70%感染 有PC V2或在任何時間變為感染有PCV2。此未必意謂該畜 群之任何動物均出現已知由PCV2造成之臨床症狀（諸如 PMWS或PRDC)。因此根據另一態樣，本發明亦提供一種 免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或 與PRDC相關之任何臨床徵象的方法，其包含向需要此治 療之動物投與治療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之 免疫原性組合物的步驟，其中該動物屬於對PCV2呈陽性 之畜群。PRDC及/或與PRDC相關之任何臨床徵象較佳係 由PCV2造成。 因為在共感染PRDC之其他致病性病原體之動物中， PRDC及PRDC之臨床症狀亦可減輕或減少，所以本發明亦 提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合症 (PRDC)及/或與PRDC相關之任何臨床徵象的方法，其包含 向需要此治療之動物投與治療有效量之PCV2抗原或包含 PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該動物屬於對 PCV2及一或多種選自由PRRSV、豬肺炎黴漿菌、豬胸膜 肺炎放線桿菌、支氣管敗金性博德氏桿菌、豬流感病毒、 豬鼻黴漿菌、豬鏈球菌及/或出血敗血性巴斯德桿菌組成 之群之其他病原體呈陽性的畜群。PRDC及/或與PRDC相 關之任何臨床徵象較佳係由PCV2及至少一種其他PRDC致 病性病原體造成。如本文中所用之術語’’對PCV2及一或多 種選自由PRRSV、豬肺炎黴漿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、 支氣管敗血性博德氏桿菌、豬流感病毒、豬鼻黴漿菌、豬 127047.doc -30- 200848073 鏈球菌及/或出血敗血性巴斯德桿菌組成之群之其他病原 體呈陽性的畜群”意謂畜群動物之至少10%、較佳30%、更 佳50%、甚至更佳70%感染有PCV2及至少一種下文列出之 其他病原體或在任何時間變為感染有PCV2及至少一種下 文列出之其他病原體感染。此未必意謂該畜群之任何動物 均出現已知由PCV2及至少一種上文列出之病原體造成之 臨床症狀（例如PRDC)。PRDC及/或與PRDC相關之任何臨 床徵象較佳至少由PCV2造成。 PRDC並非僅侵襲確定數目之動物，其通常侵襲畜群之 所有動物（整個畜群）。換言之，若農場中至少一隻動物發 生PRDC，則PRDC之病原體持續存在於彼農場之牲畜中。 因此根據另一態樣，本發明亦提供一種免疫預防及治療動 物之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相關之任何 臨床徵象的方法，其包含向需要此治療之動物投與治療有 效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步 驟，其中該動物屬於對PCV2呈陽性之畜群。PRDC及/或與 PRDC相關之任何臨床徵象較佳係由PCV2造成。如本文中 所用之術語”對PC V2呈陽性之畜群”意謂畜群動物之至少 1%、較佳10%、更佳30%、甚至更佳50%、最佳70%感染 有PC V2或在任何時間變為感染有PC V2。此未必意謂該農 場之任何動物均出現已知由PC V2造成之臨床症狀（諸如 PMWS或PRDC)。PRDC及/或與PRDC相關之任何臨床徵象 較佳係由PCV2造成。 因為在共感染PRDC之其他致病性病原體之動物中， 127047.doc -31 - 200848073 PRDC及PRDC之臨床症狀亦可減輕或減少，所以本發明亦 提供一種免疫預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合症 (PRDC)及/或與PRDC相關之任何臨床徵象的方法，其包含 向需要此治療之動物投與治療有效量之PCV2抗原或包含 PCV2抗原之免疫原性組合物的步驟，其中該動物屬於對 PCV2及一或多種選自由PRRSV、豬肺炎黴漿菌、豬胸膜 肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德氏桿菌、猿流感病毒、 豬鼻黴漿菌、豬鏈球菌及/或出血敗血性巴斯德桿菌組成 之群之其他病原體呈陽性的農場。PRDC及/或與PRDC相 關之任何臨床徵象較佳係由PCV2及至少一種其他PRDC致 病性病原體造成。如本文中所用之術語’’對PCV2及一或多 種選自由PRRSV、豬肺炎黴漿菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、 支氣管敗血性博德氏桿菌、豬流感病毒、豬鼻黴漿菌、豬 鏈球菌及/或出血敗血性巴斯德桿菌組成之群之其他病原 體呈陽性的畜群”意謂畜群動物之至少10%、較佳30%、更 佳50%、甚至更佳70%感染有PCV2及至少一種下文列出之 其他病原體或在任何時間變為感染有PCV2及至少一種下 文列出之其他病原體。此未必意謂該畜群之任何動物均出 現已知由PCV2及至少一種上文列出之病原體造成之臨床 症狀（例如PRDC)。 母源免疫性已顯示可賦予一定程度的對抗PC V2感染及 與PCV2感染相關之臨床疾病之保護。此保護已顯示為效 價依賴性：較高效價通常具保護性，而較低效價不具保護 性（McKeown等人，2005; Clin. Diagn. Lab. Immunol.; 12: 127047.doc -32- 200848073 1347-135 1)。斷乳動物之平均抗體半衰期已估算為19.0 天，在群體内PCV2被動抗體衰減窗相對較寬（Opriessnig等 人，2004, J. Swine Health Prod. 12:186-191)。母源抗體之 存在不僅可賦予一定程度的對抗病毒感染之保護（然而其 不可預測），而且已知亦可能削弱免疫作用之功效。已驚 奇地發現抗PCV2抗體（尤其多至1:20480之抗PCV2抗體效 價）之存在不影響PCV2治療之功效。因此，根據另一態 樣，本發明亦提供一種預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜 合症（PRDC)及/或與PRDC相關之任何臨床徵象的方法，其 包含向具有抗PCV2抗體之需要此治療之動物投與治療有 效量的PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物的步 驟，較佳其中該動物具有達1:100、較佳大於1:100、甚至 更佳大於1:250、甚至更佳大於1:500、甚至更佳1:640、甚 至更佳大於1:750、最佳大於1·· 1000之可偵測抗PCV2抗體 效價。較佳地，該抗PCV2抗體效價在特異性抗PCV2免疫 檢定中、較佳在如實例2中所述之檢定中可偵測且可定 量。 偵測及定量抗PCV2抗體之方法在此項技術中熟知。舉 例而言，PCV2抗體之偵測及定量可由Magar等人，2000, Can. J. Vet Res. ; 64: 184-186 或 Magar 等人，2000，J· Comp. Pathol.; 123: 258-269中所述之間接免疫螢光法進 行。定量抗PCV2抗體之其他檢定描述於Opdessnig等人， 2006，美國豬獸醫協會第37屆年會（37th Annual Meeting of the American Association of Swine Veterinarians)中 〇 此 127047.doc -33- 200848073 外’實例2亦描述一種熟習此項技術者可使用之間接免疫 螢光檢定。在結果有爭議及有任何疑問之情況下，本文所 提及之抗PCV2效價係指由/可由實例2中所述之檢定估算出 之抗PCV2效價。 根據另一更通用態樣，本發明提供一種免疫預防年幼動 物中較佳與PCV2相關或由PCV2造成之PRDC，或減少由 • PRDC造成或與PRDC相關之臨床症狀的方法，其包含向需 要此治療之彼年幼動物投與有效量之PC V2抗原的步驟。 如本文中所用之術語，，年幼動物”係指1至22天齡之動 物。術語年幼動物較佳意謂1至20天齡之動物。術語年幼 動物更佳係指1至15天齡、甚至更佳丨天齡至14天齡、甚至 更佳1至12天齡、甚至更佳1至1〇天齡、甚至更佳1至8天 齡、甚至更佳1至7天齡、甚至更佳丨至6天齡、甚至更佳i 至5天齡、甚至更佳丨至4天齡、甚至更佳丨至3天齡、甚至 更佳1或2天齡之動物，最佳係指1天齡之動物。因此根據 〇 另一態樣，本發明提供一種免疫預防年幼動物中較佳與 PCV2相關或由PCV2造成之PRDC，或減少由pRDc造成或 與PRDC相關之臨床症狀的方法，其包含向需要此治療之1 ‘ 至22天齡、較佳1至2〇天齡、更佳1至15天齡、甚至更佳j • 至14天齡、甚至更佳1至12天齡、甚至更佳天齡、甚 至更佳1至8天齡、甚至更佳丨至7天齡、甚至更佳1至6天 齡、甚至更佳1至5天齡、甚至更佳丨至4天齡、甚至更佳工 至3天齡、甚至更佳丨或2天齡、最佳丨天齡之動物投與有效 里之PCV2抗原的步驟。舉例而言，有證據證明在Μ至u 127047.doc -34 - 200848073 天齡時進行疫苗接種/治療展示高疫苗接種功效。此外， 在12至1 8天齡時進行疫苗接種/治療亦已展示可極有效減 /與PRDC相關或由pRDC造成之臨床症狀、降低總病毒負 載量、縮減病毒血症之持續時間、延遲病毒血症之發作、 體重增加。 由於PCV2在野外普遍存在，所以大多數年幼仔豬關於 PC V2呈血α %性。因此根據另一態樣，本發明提供一種 較佳在疫苗接種當天免疫預防具有抗PCV2抗體之年幼動 物中較佳與PCV2相關或由pCV2造成之pRDC，或減少由 PRDC造成或與prdc相關之臨床症狀的方法，其包含向需 要此治療之1至22天齡、較佳1至2〇天齡、更佳i至丨5天 齡、甚至更佳1至14天齡、甚至更佳丨至12天齡、甚至更佳 1至10天齡、甚至更佳！至8天齡、甚至更佳天齡、甚 至更佳1至6天齡、甚至更佳1至5天齡、甚至更佳1至*天 齡、甚至更佳1至3天齡、甚至更佳丨或2天齡、最佳丨天齡 〇 之動物投與有效量之PCV2抗原的步驟。在疫苗接種/治療 當天，該等年幼動物較佳具有在疫苗接種/治療當天高達 1:100、較佳大於1:100、甚至更佳大於1:25〇、甚至更佳大 於1:500、甚至更佳1:64〇、甚至更佳大於l75〇、最佳大於 . 1:1〇〇〇之可偵測抗PCV2抗體效價。 如上所述，用PCV2抗原對罹患prdc之動物進行疫苗接 種/治療使得與未經疫苗接種之對照動物相比病毒血症階 段縮短。與相同物種之未經疫苗接種之對照動物相比，平 均縮短時間為15.4天。因此，根據另一態樣，本發明亦提 127047.doc -35- 200848073 供-種治療或免疫預防動物中較佳與⑽相關或由PCV2 Ο Ο 造成之PRDC，或減MpRDC造成或與⑽C相關之臨床 症狀的方法，其包含向需要此治療之彼動物投與有效量之 PCV2抗原的步驟，其中與相同物種之未經治療對照组之 動物相比，治療或免疫預防使得病毒血症階段縮短5天或5 天以上、較佳6天或6天以上、甚至更佳7天或7天以上、甚 至更佳8天或8天以上、甚至更佳9天、甚至更㈣天、甚 至更佳12天、甚至更佳14天、最佳多於15天。 -般而言，對罹患PRDC之豬進行疫苗接種使得體重增 加損失減小、臨床呼吸道徵象（諸如咳嗽及呼吸困難）減 少、病毒血症持續時間較短、病毒血症較早結束及病毒負 載量較低。因此，根據另一態樣，本發明提供一種治療或 免疫預防動物中較佳與PCV2相關或由PCV2造成之pRDC， 或減少與PRDC相關或由PRDC造成之臨床症狀的方法，其 包έ向舄要此治療之動物投與有效量之PC V2抗原的步 驟’其中該治療或免疫預防使得與相同物種之未經治療對 照組之動物相比疫苗功效參數得以改良，該等疫苗功效參 數係選自由體重增加損失減小、臨床呼吸道徵象（諸如咳 漱及呼吸困難）減少、病毒血症持續時間較短、病毒血症 較早結束、較低病毒負載量或其組合組成之群。 如本文中所用之術語，，有效量”意謂（但不限於）在該有效 劑量之PCV2抗原所投與之動物中引起或能夠引起免疫反 應的抗原量。 有效量視疫苗成份及投藥時程而定。通常，當在組合疫 127047.doc -36- 200848073 苗中使用失活病毒或經修飾活病毒製劑時，疫苗含有每劑 量約102 G至約l〇9 G TCID5〇、較佳每劑量約1〇3.〇至約1〇8.〇 TCIDso、更佳每劑量約1〇4·0至約i〇8.〇 TCID50之量。詳言 之’當在疫苗中使用經修飾活PCV2時，待投與易感動物 之推薦劑量較佳為每劑量約1 〇3』TCID5G(組織培養物感染 劑量50%終點）至每劑量約i〇6.G TCIDw且更佳為每劑量約 • 1〇4·0 TCID5〇至每劑量約1〇5.0 TCID50。一般而言，當使用 (、 經純化抗原時，抗原之量將介於0.2微克與5000微克之 間，且介於102·0與1〇9.0 TCID5〇之間、較佳介於1〇3.〇與1〇6.〇 TCID5〇之間、更佳介於1 04 0與io5.0tcid5〇之間。 次單位疫苗通常係以每劑量至少〇·2 抗原、較佳每劑 量約〇·2 至約400 、更佳每劑量約〇·3叫至約2〇〇叫、 甚至更佳母劑篁約〇 · 3 5 μ g至約1 〇 〇 μ g、更佳每劑量約〇 · 4 μ§至約50 Kg、更佳每劑量約0.45 pg至約30 pg、更佳每劑 蓋約0.6 pg至約16 pg、甚至更佳每劑量約〇·75叫至約8 〇 叫、甚至更佳每劑量約1·0 至約6 Mg、更佳每劑量約1.3 μ g至約3 · 0 μ g之抗原包涵量投與。 出人意料地發現前述免疫原性組合物之免疫預防用途可 • 有效減少動物中較佳至少由PCV2造成之PRDC造成或與其 • 相關的臨床症狀。此外，本文中所述之抗原組合物降低總 %狀病毒負載量，其包括較遲發作、較短持續時間、病毒 血症較早結束及病毒負載量降低及其在罹患PRDC之動物 中之免疫抑制性影響’且進而產生較高程度之一般疾病抵 抗性及降低之PRDC發病率。 127047.doc -37- 200848073 根據本發明之組合物可經皮内、氣管内或陰道内施用。 省、、且&物較佳可經肌肉内或鼻内施用，最佳經肌肉内施 用。在動物體内，可證實經由靜脈内或藉由直接注射入靶 組織中來施用上述醫藥組合物為有利的。就全身性施用而 吕，靜脈内、血管内、肌肉内、鼻内、動脈内、腹膜内、 經口或鞘内途徑較佳。可經皮下、皮内、皮膚内、心臟 内小葉内、骨髓内、肺内或直接在待治療組織（結缔組 織、骨組織、肌肉組織、神經組織、上皮組織）中或其附 近實現更局部施用。視治療之所需持續時間及有效性而 定，可例如在每日基礎上一次或若干次（亦間歇地）歷時若 干天、數週或數月且以不同劑量來投與根據本發明之組合 物。 較佳地，至少一個劑量之如上所述之免疫原性組合物係 經肌肉内投與有需要之受檢者。根據另一態樣，如本文中 所述之PCV2抗原或包含任何此PCV2抗原之免疫原性組合 物係裝入瓶中且以每劑量一（1)mL之量投與。因此，根據 另一態樣，本發明亦提供一種包含如本文中所述之pcV_2 抗原的1 ml免疫原性組合物，其係用於治療或免疫預防動 物中較佳由PCV2造成之豬呼吸道疾病綜合症（pRDC)&/4 與其相關的任何臨床徵象，其包含向需要此治療之彼動物 投與有效量之PCV2抗原的步驟。 根據另一態樣，向有需要之受檢者給予至少一個劑量之 如上所述之免疫原性組合物的至少一次進一步投藥，其中 該第二或任何進一步投藥係在初始或任何先前投藥後給予 127047.doc -38- 200848073 至少14天。免疫原性組合物較佳與免疫刺激物一起投與。 該免疫刺激物較佳給予至少兩次。較佳地，在免疫刺激物 之第一次投藥與第二次或任何進一步投藥之間為至少3 天、更佳至少5天、甚至更佳至少7天。較佳地，在初始投 與本文中提供之免疫原性組合物後給予免疫刺激物至少1〇 天、較佳15天、甚至更佳20天、甚至更佳至少22天。較佳 免疫刺激物為（例如）較佳用不完全佛氏佐劑（Freund，s adjuvant)(KLH/ICFA)乳化之匙孔螺血氰蛋白（keyh〇le limpet hemocyanin ; KLH)。然而，由此應瞭解亦可使用熟 習此項技術者已知之任何其他免疫刺激物。如本文中所用 之術語”免疫刺激物π意謂較佳在未起始或增強特異性免疫 反應（例如對抗特定病原體之免疫反應）之情況下，可觸發 免疫反應之任何藥劑或組合物。進一步指示投與適合劑量 之免疫刺激物。 本發明亦係關於PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性 組合物用於製備藥物之用途，其中該藥物係用於免疫預防 及治療動物之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相 關之任何臨床徵象。PRDC或與PRDC相關之臨床徵象較佳 係至少由PCV2、更佳以及一或多種其他病原體造成，該 等病原體係選自由PRRSV、豬肺炎黴漿菌、豬胸膜肺炎放 線桿菌、支氣管敗血性博德氏桿菌、猿流感病毒、豬鼻黴 滚囷、豬鏈球菌及/或出血敗金性巴斯德桿菌組成之群。 更佳地，PCV2抗原為重組抗原、較佳pCv2 ORF-2、甚至 更佳 Ingelvac® CircoFLEXTM。 127047.doc -39- 200848073 如本文中所用之”動物π意謂豬類（swine)、緒（pig)或仔豬 (piglet)。因此，根據另一態樣，本發明提供一種免疫預防 及治療豬之豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)及/或與PRDC相關 之任何臨床徵象的方法，其包含向需要此治療之豬投與治 療有效量之PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物 的步驟。較佳地，PRDC係至少由PCV2、較佳以及至少一 種已知造成PRDC之其他病原體（例如PRRSV、豬肺炎黴漿 菌、豬胸膜肺炎放線桿菌、支氣管敗血性博德氏桿菌、豬 流感病毒、豬鼻黴浆菌、豬鏈球菌及/或出血敗血性巴斯 德桿菌）造成。PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合 物較佳為前述任一者，PCV2抗原最佳為Ingelvac⑧ CircoFLEXTM。 【實施方式】 以下實例闡述根據本發明之較佳材料及程序。儘管在實 施或測試本發明中可使用與本文中所述類似或等效之任何 方法及材料，但現在描述較佳方法、裝置及材料。然而， 應瞭解該等實例僅以說明之方式提供，且不應認為其中任 何實例限制本發明之整體範疇。 實例1 製備PCV2 ORF-2抗原 在恆定攪拌下將來自液氮儲存之初始SF+細胞培養物在 無菌旋轉燒瓶中之懸浮液中於Excell 420培養基（JRH Biosciences, Inc.，Lenexa，KS)中培養。將該等培養物在具 有25 mL至1 50 mL Excell 420無血清培養基之100 mL至250 127047.doc -40- 200848073 mL旋轉燒瓶中培養。當細胞增殖至每毫升1 · 0- 8 · 0 χ 106個細 胞之細胞密度時，將其以每毫升0·5-1·5χ106個細胞之塗鋪 密度分至新容器中。隨後在25°C-29°C下，將擴展培養物於 尺寸達36公升之旋轉燒瓶中或達3 00公升之不鏽鋼生物反 應器中培養2-7天之時間。 在接種後，將該等燒瓶在27°C下培育4小時。隨後，用 含有PCV2 0RF-2基因（SEQ ID NO: 4)之重組桿狀病毒接種 各燒瓶。含有PCV2 ORF-2基因之重組桿狀病毒係如WO 06/072065中所述產生。在經桿狀病毒接種後，隨後將燒 瓶在27 士 2°C下培育7天且在此期間亦在100 rpm下攪拌。 燒瓶使用通風蓋以允許空氣流動。 在培育後，將所得上清液收集、過濾以移除細胞碎片且 失活。藉由使其溫度達到37 士 2°C來使上清液失活且將二 元伸乙亞胺（BEI)添加至上清液中至最終濃度為5 mM。隨 後將樣品連續攪拌72小時至96小時。添加獲得最終最小濃 度為5 mM之1.0 Μ硫代硫酸鈉溶液以中和任何殘餘BEI。 在失活後，用磷酸鹽緩衝劑緩衝PCV2 ORF-2且添加 Carpορο 1至約每劑量0 · 5 mg至2.5 mg。最終劑量包含約16 pg PCV2 ORF-2抗原。 實例2 抗PCV-2免疫檢定 將 WO 02/07721 中所述之 PK15(例如 ATCC CCL-33)或 VIDO R1細胞接種於96孔培養盤上（每孔約20.000至60.000 個細胞）。當單層約65°/。至85%長滿時，用PCV2分離株感 127047.doc -41- 200848073 染細胞。將感染細胞培育48小時。移除培養基且用PBS將 孔洗務兩次。棄去洗料衝液且在約嘗將細胞用冷 50/50甲醇/丙酮固定液（約1〇〇微升/孔）處理約15分鐘。棄去 固定液且將培養盤風乾。在PBS中製備豬血清樣品之連續 稀釋液，將其添加至培養盤中且在36 5±rc下培育以使抗 體在存在時於血清樣品中結合約丨小時。另外，同時進行 抗PCV2陽性及陰性對照樣品（陽性對照樣品及陰性對照樣 ο υ 品）之連續稀釋。隨後用PBS將培養盤洗滌三次◊棄去
PBS。隨後將培養盤用以1:1〇〇稀釋於pBS 諸賊接合物染色且一c下培育叫、：業二 偵測與感染細胞結合之抗體。在培育完成後，自培育箱移 除微量培養盤，棄去接合物且用PBS將培養盤洗滌兩次。 使用UV顯微鏡讀取培養盤且個別孔報導為陽性或陰性。 使用陽性對照樣品及陰性對照樣品來監控測試系統。若對 照物在預期範圍内，則測試結果關於測試方法參數為可接 受的。使用展示特異性IFA反應性之最高稀釋度及每稀釋 度呈陽性之孔數目來計算血清抗體效價，或使用適當 Reed-Muench式來計算50%終點。 實例3 PCV2 ORF-2 (Ingelvac® CircoFLEXTM)在治療 prdc 中之 功效 目的 此研究之目的為證實Ingelvac® CircoFLEX在控制PCV2 相關PRDC中之功效。 127047.doc -42- 200848073 研究執行 此研究中包括屬於三個連續週組（各包含約500隻動物） 之1542隻習知豬。將研究動物藉由體重及窩分配分區且隨 機分配至一個疫苗接種組（n=769)及一個對照組（n=773)。 -愈1 :在研究第0天，藉由含有作為活性物質之PCV2 ' ORF-2蛋白質（其中PR為1(每劑量1 ml))及作為佐劑之 - Carbopol® 之 Ingelvac® CircoFLEX的單次給藥對約20 天齡之豬進行肌肉内疫苗接種。 r\ k -愈2 :對照組接受1 ml對照物品，其含有不含PCV2 ORF-2蛋白質之細胞培養物上清液及作為佐劑之 Carbopol® 〇 -,叙3 :未經治療之豬。 在肥育結束時（研究第22週）終止研究。 所記錄參數 所記錄參數如下： Λ -個別體重（所有動物） -’發育不良’之頻率（所有動物） -臨床徵象（所有動物） • -死亡率（所有動物） -血清中之PCV2病毒血症：病毒血症之發作、結束、持 續時間、病毒負載量（研究動物之17%) -屍檢（若可能，每一隻死亡或安樂死動物） 良場之疾病情沉 根據飼養及肥育農場之病史，動物自肥育中期開始經歷 127047.doc -43- 200848073 與豬呼吸道疾病綜合症（PRDC)相關之呼吸道症狀。該等症 狀伴隨在肥育期間體重增加降低（ADWG 750-780 g)及死亡 率增加（5.5-6.6%)。認為此時牽涉於PrdC中之病原體為 PCV2、PRRSV、出血敗血性巴斯德桿菌、支氣管敗血性 博德氏桿菌及（有時）SIV。對於此研究之過程而言，另外 發現豬肺炎黴漿菌及豬鼻黴漿菌牵涉於此疾病綜合症中。 有趣的是，此研究之結果證明在PCV2病毒血症發作之 前，PRRSV與豬肺炎黴漿菌兩者之感染均存在約4-6週。 然而，在整個研究過程中死亡動物之數目及在PCV2病毒 血症發作前後呼吸道症狀之頻率揭示動物保持未受該兩種 感染性病原體感染。 結果 艘重、體重增加、平均每日體重增加 在研究啟始時兩個治療組之體重相當。在研究第17週及 第22週，疫苗接種組之體重顯著高於安慰劑治療組之體重 (分別為 ρ=〇·〇〇〇7 及 Ρ<0·0001)。 自研究啟始至研究第22週，疫苗接種動物比經安慰劑治 療之動物多增重2.8 kg。此對應於自研究啟始至研究第17 週在疫苗接種動物中ADWG高13 g/d及至在研究第22週疫 苗接種動物中ADWG高18 g/d。對於整個肥育期（研究第7_ 22週）而言，ADWG因此可自經安慰劑治療之動物中之777 g/d(相當於過去之750-780 g/d ADWG)增加至疫苗接種動物 中之803 g/d(表1及圖1)。 127047.doc -44- 200848073 表1 ··體重、體重增加及ADWG之比較（所有三個'兔組之彙 集資料) 研究週數 安慰劑治療組 (LS平均值） 疫苗接種組 (LS平均值） 差值 (IVP-CP) P值υ 活體重 0 6.45 kg 6.59 kg 0.14 kg 0.1289 ns 7 25.79 kg 26.18 kg 0.39 kg 0.3955 ns 12 50.63 kg 51.01 kg 0.38 kg 0.9564 ns 17 78.29 kg 80.22 kg 1.93 kg 0.0007 *** 22 106.55 kg 109.77 kg 3.22 kg <0.0001 *** 體重 增加 0-17 71.97 kg 73.51kg 1.54 kg 0.0007*** 0-22 100.22 kg 103.02 kg 2.80 kg <0.0001 *** ADWG 0-17 603 g/d 616 g/d 13 g/d 0.0007 *** 0-22 649 g/d 667 g/d 18 g/d <0.0001 *** 7-22 777 g/d 803 g/d 26 g/d <0.0001 _ 1)關於各組之間比較之t測試之p值，ns :不顯著，***顯著，pSO.OOl 金液中之病毒血症 疫苗接種動物展示病毒金症之發作略遲（晚1.5天）、病毒 血症之結束顯著較早（ρ<〇·0001)、病毒血症之持續時間顯 著較短（ρ<〇.0001)、每隻動物之陽性取樣天數顯著較低 (ρ<0.0001)及病毒負載量之顯著總體性減少（ρ<0·0001)。在
研究第17週時觀測到最高比例之病毒血症動物，其中在安 慰劑組中為75%病毒血症動物且在疫苗接種組中為28%病 毒血症動物。 127047.doc 45- 200848073 表2 :血液中病毒血症之比較（所有三個氮組之彙集資料) 研究週數 安慰劑治療組 (平均值） 疫苗接種組 (平均值） 差值 (CP-IVP) ρ值2) 病毒血症發作 104.4 天 105.9 天 -1.5 天 0.3244 ns 病毒血症結束 138.7 天 123.3 天 15.4 天 <0.0001 氺氺氺 病毒血症持續時間 34.3 天 17.4 天 16·9 天 <0.0001 氺氺氺 陽性取樣天數 4.3天 1.4天 2.9天 <0.0001 *氺氺 平均和gE^log 10) 22.7 7.1 15.6 <0.0001 氺*氺 ugE :每毫升之基因 組等效物 2)p值(關於各組之間比較之WilcoxonMann-whitney測試），ns :不顯著， f、 ***顯著，pSO.OOl 金液中病毒血症與體重之相關性 圖2說明與在各別稱重時間點時兩個治療組之所有動物 之活體重（CP-IVP)的差異相比，在整個研究過程中兩個治 療組之樣品動物之病毒負載量。在將體重差異曲線與表示 病毒負載量之條柱進行比較時，所觀測到之在病毒血症發 作（研究第14-16週）後出現之兩個治療組之間的體重差異 (研究第17週及第22週）變得明顯。儘管病毒負載量在研究 第17週出現峰值後降低，但各組之間之體重差異進一步增 加直至肥育結束。該等資料一起證明在研究第17週及第22 週在疫苗接種組中所觀測到之較高體重增加發展與病毒血 症之發作、持續時間及程度之間的相關性。
Speannan等級係數之計算證實在研究第17週及第22週在 經安慰劑治療之動物中病毒血症與體重增加發展差異之間 的統計學顯著相關性的存在。經安慰劑治療之動物之低體 重與病毒血症之早發作、長持續時間及高病毒負載量相 127047.doc -46- 200848073 關。對於疫苗接種動物而言，未發現此相關性，其指示疫 苗接種動物之較高體重為病毒血症延遲發作及較短持續時 間以及血液中較低病毒負載量的結果。 發育不良頻率 在各別稱重時間點中之任一者時，可觀測到疫苗接種組 與安慰劑治療組之間無π發育不良”頻率之顯著差異。在 PCV2病毒血症發作後（研究第14-16週），在兩個治療組中” 發育不良”之頻率通常較低（2·2%-3·9%)。 表3 : ”發育不良”頻率之比較（所有三個通組之彙集資料) 病毒血症發作截 病毒血症發作後 研究週數 0 7 12 17 22 CP 17.08% 11.16% 5.02% 3.57% 2.97% IVP 17.17% 11.03% 5.32% 3.99% 2.23% P 1.0000 0.6845 0.8147 0.6830 0.4082 Ρ :各組之間比較之t測試之ρ值；ρ>0.05，無顯著性 臨床徵象 在病毒血症發作前，主要臨床徵象為跛行、咳嗷及腹瀉 (在8%-12%之動物中）。其在兩個治療組中以相等頻率出 現。在對死亡動物進行屍檢且隨後進行微生物學檢驗後， 豬鏈球菌經鑑別為跛行之可能感染性病原體，副豬嗜血桿 菌（Haemophilus parasuis)及支氣管敗血性博德氏桿菌經鑑 別為咳漱之可能感染性病原體且溶血性大腸桿菌經鑑別為 腹瀉之可能原因。 在病毒血症發作後，在兩個治療組之動物中所觀測到之 主要臨床症狀為咳嗷及跋行。對於其他感染性病原體之血 清學週期性分析及在屍檢後之微生物學研究揭示PCV2病 127047.doc -47- 200848073 . 毒血症伴隨有（在前）PRRSV及豬肺炎黴漿菌感染。該等感 染性病原體與PCV2一起形成㈣匸之部分’認為其為在病 毋灰症發作後咳漱動物頻率增加之原因。與經安慰劑治療 之動物相比，在疫苗接種動物中咳漱及呼吸困難之頻率分 . 別=12.2%及17·5%。然而，該等發現結果不具有任何統 计學意義。在病毒血症發作後與病毒血症發作前之時間相 * Λ之跛行頻率增加最可能係由慢性形式之豬鏈球g關節炎 () 或關節裝置虛弱造成且以相同方式影響兩個治療組 (P=〇.8321)。類似地，在兩個治療組之間在病毒血症發作 後其他臨床發現結果（腹瀉、皮膚異常、行為）之頻率幾乎 相等。 死亡率 在病毒血症發作前，兩個治療組中死亡率相當（疫苗接 種動物· 5.20%，經安慰劑治療之動物：5· 17%)。在病毒 血症發作後，經安慰劑治療之動物具有比疫苗接種動物顯 I) 著較高之死亡率（疫苗接種動物：1.51%，經安慰劑治療之 動物：3.68%，p = 〇.0127)。與經安慰劑治療之動物相比， 疫苗接種動物之死亡率降低59%。 * 結論 ^ 已於在肥育後期展示PRDC之典型症狀之農場進行研 究。在第17週齡至第19週齡時，豬產生呼吸道症狀、死亡 率增加且體重增加損失。在血清學及微生物學篩檢後， PCV2、PRRSV、豬肺炎黴漿菌、豬鼻黴漿菌及出血敗血 性巴斯德桿菌經鑑別為牵涉於此疾病综合症中之可能病原 127047.doc -48- 200848073 關於疫苗接種組注意到 與經安慰劑治療之對照組相比 以下統計學顯著性發現結果： -體重增加損失降低 -死亡率降低 〉’症之持續時間縮短且病毒血症較早結束 -病毒負載量降低 …
_咳嗷及呼吸困難減少 如所預期，關於"發育不良"頻率未觀測到統計學顯著差 ”因為發月不良，，之出現並非PRDC之典型發現結果。 總之’该等發現允許以下結論： 1.已在肥育中期至後期感染PRDC之畜群中進行研究。 PCV2明顯牽涉於此疾病综合症中’因為僅在病毒血症 發作後觀測到啤吸道症狀、體重增加損失及死亡率增 加0 2.用Ingelvac® Circ〇FLEXTM對動物進行疫苗接種可降低 或甚至防止與PC V2相關PRDC相關之臨床相關參數。 【圖式簡單說明】 圖1為每週組之體重增加差異。 圖2為在研究過程中體重差異（IVP_cp)及平均病毒負載 量（log 10)之發展。 127047.doc -49-

Claims (1)

  1. 200848073 十、申請專利範圍： 1. 一種PCV2抗原或包含PCV2抗原之免疫原性組合物之用 途，其係用於製備供預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜 合症（PRDC)及/或與PRDC相關之任何臨床徵象的藥物。 2. 如請求項1之用途，其中該藥物係以治療有效量投與需 '要此治療之動物。 3. 如請求項1或2之用途，其中與PRDC相關之臨床徵象係 選自由咳嗽及呼吸困難、生長緩慢、飼料效率降低、嗜 f 目民、厭食及/或在肥育中期至後期死亡率顯著增加組成之 群。 4. 如請求項3之用途，其中該咳嗽及呼吸困難係難以用抗 生素療法治癒。 5. 如請求項1或2之用途，其中該PRDC與PCV2感染相關。 6. 如請求項5之用途，其中該PRDC係由PCV2造成。 7. 如請求項6之用途，其中該PRDC進一步與PRRSV、豬肺 炎黴漿菌⑽/ae)、支氣管敗血性 博德氏桿菌（万化"a bronchiseptica)、錄氣感^病毒 (Swine influenza virus)、豬胸膜肺炎放線桿菌 , (Actinobacillus pleuropneumoniae)、 豬鼻黴漿菌 {Mycoplasma hyorhinis)、豬鏈球菌suis) 及/或出血敗血性巴斯德桿菌 相關及/或由其造成。 8. 如請求項1或2之用途，其中該動物屬於PCV2陽性之畜 群。 127047.doc 200848073 9·如請求項1或2之用途，其中該動物屬於PCV2及一或多種 選自由PRRSV、豬肺炎黴漿菌、支氣管敗血性博德氏桿 菌、豬流感病毒、緒鼻黴漿:菌、豬鏈球菌及/或出血敗血 性巴斯德桿菌組成之群之其他病原體陽性的畜群。 10·如請求項1或2之用途，其中該動物屬於PCV2陽性之農 場。 Π.如請求項1或2之用途，其中該動物屬於PCV2及一或多種 選自由PRRSV、豬肺炎黴漿菌、支氣管敗血性博德氏桿 菌、豬流感病毒、豬鼻黴漿菌、豬鏈球菌及/或出血敗血 性巴斯德桿菌組成之群之其他病原體陽性的農場。 12.如請求項1或2之用途，其中該PCV2抗原為一種與ρ(：ν2 之ORF-2具有至少80%同源性之多肽。 13·如請求項1或2之用途，其中該PCV_2抗原為一種重組桿 狀病毒表現之PCV2之ORF-2。 14·如請求項1或2之用途，其中該PCV2抗原為lngeivac® CircoFLEXTM 〇 15·如請求項1或2之用途，其中該動物為豬。 16. —種用於預防及治療動物之豬呼吸道疾病綜合症（pRDC) 及/或與PRDC相關之任何臨床徵象的醫藥組合物，其包 含治療有效量之PCV2抗原或免疫原性有效量之pcv2抗 原。 17·如請求項16之醫藥組合物，其中與PrdC相關之臨床徵 象係選自由咳嗷及呼吸困難、生長緩慢、飼料效率降 低、嗜眠、厭食及/或在肥育中期至後期死亡率顯著增加 127047.doc 200848073 組成之群。 18·如明求項17之醫藥組合物，其中該咳嗽及呼吸困難係難 以用抗生素療法治癒。 19·如請求項16至18中任一項之醫藥組合物，其中該pRDC 與PCV2感染相關。 2〇·如睛求項19之醫藥組合物，其中該PRDC係由PCV2造 成。 21.如請求項2〇之醫藥組合物，其中該pRDc進一步與 PRRSV、豬肺炎黴漿菌、支氣管敗血性博德氏桿菌、豬 流感病毒、豬胸膜肺炎放線桿菌、豬鼻黴漿菌、豬鏈球 菌及/或出血敗血性巴斯德桿菌感染相關及/或由其造 22·如請求項16至18中任一項之醫藥組合物，其中該動物屬 於PC V2陽性之畜群。 23·如睛求項16至1 8中任一項之醫藥組合物，其中該動物屬 於PCV2及一或多種選自由PrrsV、豬肺炎黴漿菌、支氣 管敗血性博德氏桿菌、豬流感病毒、豬鼻黴漿菌、豬鏈 球菌及/或出血敗血性巴斯德桿菌組成之群之其他病原體 陽性的畜群。 24. 如請求項16至18中任一項之醫藥組合物，其中該動物屬 於PCV2陽性之農場。 25. 如請求項16至18中任一項之醫藥組合物，其中該動物屬 於PCV2及一或多種選自由PrrsV、豬肺炎黴漿菌、支氣 管敗血性博德氏桿菌、褚流感病毒、諸鼻彳致聚滅、褚鍵 127047.doc 200848073 球菌及/或出血敗血性巴斯德桿菌組成之群之其他病原體 陽性的農場。 26. 如請求項16至18中任一項之醫藥組合物，其中該PCV2抗 原為一種與PCV2之ORF-2具有至少80%同源性之多肽。 27. 如請求項16至18中任一項之醫藥組合物，其中該PCV-2 抗原為一種重組桿狀病毒表現之PCV2之ORF-2。 28. 如請求項16至18中任一項之醫藥組合物，其中該PCV2抗 原為 Ingelvac® CircoFLEXTM。 29. 如請求項16至18中任一項之醫藥組合物，其中該動物為 豬0 127047.doc
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Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7833707B2 (en) 2004-12-30 2010-11-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2
UA95602C2 (ru) 2004-12-30 2011-08-25 Берингер Ингельхейм Ветмедика, Инк. Иммуногенная композиция цвс2 и способы приготовления такой композиции
US8834891B2 (en) 2005-03-14 2014-09-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis
DK2371383T3 (en) 2005-12-29 2015-11-30 Boehringer Ingelheim Vetmed Use of a PCV2 immunogenic composition for reduction of clinical symptoms in pigs
HUE054868T2 (hu) 2005-12-29 2021-10-28 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Multivalens PVC2 immunogén készítmények és eljárások ezek elõállítására
WO2008064299A2 (en) * 2006-11-22 2008-05-29 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of reducing porcine circovirus-associated disease outbreaks
US20100129397A1 (en) * 2006-12-11 2010-05-27 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections
RU2520087C2 (ru) * 2006-12-15 2014-06-20 Бёрингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. Лечение свиней с помощью антигена pcv2
EP1941903A1 (en) * 2007-01-03 2008-07-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prophylaxis and treatment of PRDC
EP1958644A1 (en) 2007-02-13 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prevention and treatment of sub-clinical pcvd
US20090017064A1 (en) * 2007-07-10 2009-01-15 Wyeth Methods and Compositions for Immunizing Pigs Against Porcine Circovirus
US7829274B2 (en) 2007-09-04 2010-11-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen
US20090317423A1 (en) 2008-01-23 2009-12-24 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Pcv2 mycoplasma hyopneumoniae immunogenic compositions and methods of producing such compositions
WO2009103037A1 (en) * 2008-02-15 2009-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods and compositions for reducing the impact of enteric diseases
US8444989B1 (en) 2008-04-18 2013-05-21 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物
TWI442935B (zh) * 2010-12-22 2014-07-01 Sbc Virbac Ltd 豬第二型環狀病毒（Ｐｏｒｃｉｎｅ Ｃｉｒｃｏｖｉｒｕｓ Ｔｙｐｅ ２）、含彼之免疫組合物、檢測套組及其應用
ES2734374T3 (es) 2013-03-01 2019-12-05 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Cuantificación de composiciones de vacuna
CN104043118A (zh) * 2013-03-11 2014-09-17 普莱柯生物工程股份有限公司 猪prrsv、猪肺炎支原体和pvc-2抗原在制备疫苗中的应用
WO2015026912A1 (en) * 2013-08-23 2015-02-26 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine circovirus type 2 (pcv2) subunit vaccine
EA035265B1 (ru) 2013-10-02 2020-05-21 Бёрингер Ингельхайм Энимал Хелс Ю-Эс-Эй Инк. Вариант белка opc2 pcv2 и содержащие его вирусоподобные частицы
CN104313184B (zh) * 2014-10-27 2016-08-17 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心 APP、M.hyo、PCV-2及PRRSV多重PCR检测用引物、试剂盒和检测方法
MX2017014414A (es) 2015-05-14 2018-03-16 Merial Inc Metodo para la produccion de circovirus porcino y vacunas pcv2.
JP7162072B2 (ja) 2018-03-26 2022-10-27 ベーリンガー インゲルハイム アニマル ヘルス ユーエスエイ インコーポレイテッド 免疫原性組成物を製造する方法
RU2684902C1 (ru) * 2018-05-07 2019-04-16 Вера Игоревна Хачко Способ лечения и профилактики стрептококковой инфекции поросят и свиней, осложненной желудочно-кишечными и респираторными заболеваниями

Family Cites Families (105)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2909462A (en) 1955-12-08 1959-10-20 Bristol Myers Co Acrylic acid polymer laxative compositions
JPS60500673A (ja) 1983-03-08 1985-05-09 コモンウエルス　セラム　ラボラトリ−ズ　コミツシヨン 抗原活性を有するアミノ酸配列
EP0283085B1 (en) 1987-03-17 1992-11-11 Akzo N.V. Adjuvant mixture
US5069901A (en) 1988-02-03 1991-12-03 Jones Elaine V Preparation of a recombinant subunit vaccine against pseudorabies infection
DK0454735T3 (da) 1989-01-23 1996-10-07 Auspharm Int Ltd Vaccine sammensætning
US5155037A (en) 1989-08-04 1992-10-13 The Texas A&M University System Insect signal sequences useful to improve the efficiency of processing and secretion of foreign genes in insect systems
US5202430A (en) 1990-01-16 1993-04-13 University Of Tennessee Transmissible gastroenteritis virus genes
EP0597852B2 (en) 1990-05-29 2005-08-10 Wyeth Holdings Corporation Swine pneumonia vaccine and method for the preparation thereof
US5565205A (en) 1990-08-16 1996-10-15 Solvay Animal Health, Inc. Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof
GB9023111D0 (en) 1990-10-24 1990-12-05 Wellcome Found Expression system
ES2150419T3 (es) 1990-11-01 2000-12-01 Univ Iowa State Res Found Inc Procedimiento de atenuacion bacteriana y vacuna.
KR0138092B1 (ko) 1991-08-26 1998-04-30 제임스 씨. 데세사레 미확인(Mystery) 돼지 질병 관련 바이러스제
US6042830A (en) 1992-08-05 2000-03-28 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Viral agent associated with mystery swine disease
US5580557A (en) 1991-10-09 1996-12-03 Iowa State University Research Foundation, Inc. Live, avirulent salmonella choleraesuis vaccine used for inducing an immune response in animals
JPH05227997A (ja) * 1991-12-27 1993-09-07 Aisin Seiki Co Ltd アントラセン誘導体ホスフェートによる核酸及び蛋白質の検定方法
US5338543A (en) 1992-02-27 1994-08-16 Ambico, Inc. Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine
WO1995030434A1 (en) 1994-05-06 1995-11-16 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods based on the role of neurotrophin 3 in female reproduction
DE69535520T2 (de) 1994-05-10 2008-02-07 Wyeth Abgeänderter, verbesserter BRSV Lebend- Impfstoff
US5885823A (en) 1995-06-05 1999-03-23 Nobl Laboratories, Inc. Lawsonia intracellularis cultivation, anti-Lawsonia intracellularis vaccines and diagnostic agents
WO1998006855A1 (en) 1996-08-16 1998-02-19 The Texas A & M University System Compositions and methods for delivery of nucleic acids to hepatocytes
ATE199022T1 (de) 1996-10-09 2001-02-15 Akzo Nobel Nv Europäische vakzinstämme des fortplanzungs- atmungs-syndromsvirus des sweins (prrsv)
US6517843B1 (en) * 1999-08-31 2003-02-11 Merial Reduction of porcine circovirus-2 viral load with inactivated PCV-2
US7211379B2 (en) 1997-10-03 2007-05-01 Merial Sas Prevention of myocarditis, abortion and intrauterine infection associated with porcine circovirus-2
US6391314B1 (en) 1997-10-03 2002-05-21 Merial Porcine circoviruses vaccines diagnostic reagents
US20060029617A1 (en) 1997-10-03 2006-02-09 Charreyre Catherine E Porcine circovirus and Helicobacter combination vaccines and methods of use
UA78180C2 (uk) 1997-10-03 2007-03-15 Меріаль Кільцевий вірус свині типу ii, вакцини та діагностичні реагенти
US7192594B2 (en) 1997-10-03 2007-03-20 Merial Limited Postweaning multisystemic wasting syndrome and porcine circovirus from pigs
FR2781159B1 (fr) 1998-07-06 2000-10-06 Merial Sas Vaccin circovirus et parvovirus porcin
US20040062775A1 (en) * 1997-12-05 2004-04-01 Agence Francaise De Securite Sanitaire Des Aliments Circovirus sequences associated with piglet weight loss disease (PWD)
FR2772047B1 (fr) 1997-12-05 2004-04-09 Ct Nat D Etudes Veterinaires E Sequence genomique et polypeptides de circovirus associe a la maladie de l'amaigrissement du porcelet (map), applications au diagnostic et a la prevention et/ou au traitement de l'infection
DK2363488T3 (en) 1997-12-11 2014-11-24 Merial Sas Postweaning multisystemic wasting syndrome virus from pigs
WO1999045956A1 (en) 1998-03-13 1999-09-16 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Vaccines against circovirus infections
US6294176B1 (en) 1998-07-10 2001-09-25 Schering-Plough Veterinary Corp. Recombinant raccoonpox virus and uses thereof as a vaccine in mammalian and avian species
WO2000031275A1 (fr) 1998-11-19 2000-06-02 Azwell Inc. Phosphatase de recombinaison d'acide lysophosphatidique
FR2789695B1 (fr) * 1999-02-11 2003-03-07 Merial Sas Vecteurs et vaccins viraux a base d'adenovirus porcins recombines et replicatifs
US6943152B1 (en) 1999-06-10 2005-09-13 Merial DNA vaccine-PCV
US6497883B1 (en) 1999-06-10 2002-12-24 Merial Porcine circovirus recombinant poxvirus vaccine
GB9921146D0 (en) 1999-09-07 1999-11-10 Smithkline Beecham Biolog Novel composition
GB9921147D0 (en) 1999-09-07 1999-11-10 Smithkline Beecham Biolog Novel composition
WO2001017556A1 (fr) 1999-09-07 2001-03-15 Shionogi & Co., Ltd. Préparations vaccinales administrables par les muqueuses
US6656478B1 (en) 1999-11-12 2003-12-02 Samuel D. Charles Cross-protective salmonella vaccines
DE60038048T2 (de) 1999-12-21 2009-07-09 Merial Mindestens ein cryptosporidium parvum-antigen und mindestens ein antigen eines anderen darmkrankheitserregers enthaltende zusammensetzungen und impfstoffe
US6808900B2 (en) 2000-06-15 2004-10-26 Manitoba, University Of Cryptosporidium parvum antigens, antibodies thereto and diagnostic and therapeutic compositions thereof
EP1290016A2 (en) 2000-06-15 2003-03-12 Purdue Research Foundation Vaccine for congenital tremors in pigs
HUP0302068A3 (en) 2000-07-20 2005-05-30 Lauras As Use of cox-2 inhibitors for treating or preventing immunodeficiency and pharmaceutical compositions containing them
MY129765A (en) 2000-12-19 2007-04-30 Wyeth Corp Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine
US7018638B2 (en) 2000-12-19 2006-03-28 Wyeth Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine
JP2002247979A (ja) 2001-02-23 2002-09-03 Nippon Biologicals Inc マレック病ワクチンおよびその製造方法
ES2324466T3 (es) 2001-03-27 2009-08-07 University Of Saskatchewan Metodos para cultivar circovirus.
US20030096377A1 (en) 2001-06-28 2003-05-22 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Differential PCR-RFLP assay for detecting and distinguishing between nonpathogenic PCV-1 and pathogenic PCV-2
ATE412426T2 (de) 2001-07-02 2008-11-15 Pfizer Prod Inc Vakzination in einer dosis mit i mycoplasma hyopneumoniae /i
US7361352B2 (en) 2001-08-15 2008-04-22 Acambis, Inc. Influenza immunogen and vaccine
US7279166B2 (en) 2001-12-12 2007-10-09 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Chimeric infectious DNA clones, chimeric porcine circoviruses and uses thereof
US7276353B2 (en) 2001-12-12 2007-10-02 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Chimeric infectious DNA clones, chimeric porcine circoviruses and uses thereof
US6841364B2 (en) 2002-01-22 2005-01-11 Protatek International, Inc. Infectious cDNA clones of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and expression vectors thereof
US20040063188A1 (en) 2002-02-14 2004-04-01 Novavax, Inc. Kit for treating gastrointestinal tract
US20030199581A1 (en) 2002-03-13 2003-10-23 Seligson Allen L. Boswellin compositions enhanced with 3-beta-acetyl-11-keto-beta-boswellic acid ("AKBA") industrial manufacture and uses
US20030215455A1 (en) 2002-05-14 2003-11-20 Bailey Reynolds Vaccine stabilizer and method of use
US7223207B1 (en) 2002-09-13 2007-05-29 Simon Basyuk Exercise and massage device
AU2002951692A0 (en) 2002-09-23 2002-10-17 Vital Biotech (Hong Kong) Limited Improvements in or relating to vaccines
US7408636B2 (en) 2002-10-31 2008-08-05 Chemimage Corporation Method and apparatus for dark field chemical imaging
UA84284C2 (ru) 2003-02-03 2008-10-10 Сирибас Байолоджикалз, Инк. Способы лечения, профилактики и диагностики инфекции helicobacter cerdo
US7563449B2 (en) 2003-04-21 2009-07-21 Pfizer Inc, Methods for reducing cattle reproductive diseases
CN1458167A (zh) 2003-06-02 2003-11-26 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 截短表达的猪圆环病毒ⅱ型衣壳蛋白抗原及其应用
US7335361B2 (en) 2003-06-09 2008-02-26 Animal Technology Institute Taiwan Fusion antigen used as vaccine
MXPA06000942A (es) 2003-07-24 2006-03-30 Merial Ltd Nuevas formulaciones de vacunas.
ES2333334T5 (es) 2003-07-25 2018-08-06 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Lawsonia intracellularis de origen europeo y vacunas, agentes de diagnóstico y métodos de uso de la misma
FR2861731B1 (fr) * 2003-10-30 2006-02-24 Centre Nat Rech Scient Nouvelle proteine de fixation du phosphate, compositions pharmaceutiques la contenant et ses utilisations
WO2005112995A1 (en) * 2004-04-26 2005-12-01 Choongang Vaccine Laboratory Co., Ltd. Inactivated mixed vaccine for porcine respiratory disease and the method of manufacturing thereof
CN1579553A (zh) 2004-05-18 2005-02-16 浙江大学 Ii型猪圆环病毒核酸疫苗的制备方法及其应用
KR100478845B1 (ko) 2004-06-22 2005-03-24 채찬희 돼지 이유자돈 전신성 소모성 증후군 예방 및 치료용 생물학적 조성물
KR20070052273A (ko) 2004-06-30 2007-05-21 아이디 바이오메디컬 코포레이션 오브 퀘벡 코로나바이러스 감염의 치료를 위한 백신 조성물
US7700285B1 (en) 2005-12-29 2010-04-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. PCV2 immunogenic compositions and methods of producing such compositions
US7833707B2 (en) * 2004-12-30 2010-11-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of overexpression and recovery of porcine circovirus type 2 ORF2
KR20070096019A (ko) 2005-01-13 2007-10-01 베링거잉겔하임베트메디카게엠베하 향상된 ｐｒｒｓ 백신
US7300785B2 (en) 2005-02-03 2007-11-27 Universiteit Ghent Culturing circular ssDNA viruses for the production of vaccines
US8834891B2 (en) 2005-03-14 2014-09-16 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Immunogenic compositions comprising Lawsonia intracellularis
PT1869471T (pt) 2005-04-13 2016-08-16 Merial Inc Ensaio para a produção de circovírus suíno
US7691368B2 (en) 2005-04-15 2010-04-06 Merial Limited Vaccine formulations
BRPI0615862A2 (pt) 2005-09-09 2011-05-31 Intervet Int Bv vacina contra pcv-2, e, método para a manufatura de uma vacina
HUE054868T2 (hu) 2005-12-29 2021-10-28 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Multivalens PVC2 immunogén készítmények és eljárások ezek elõállítására
DK2371383T3 (en) * 2005-12-29 2015-11-30 Boehringer Ingelheim Vetmed Use of a PCV2 immunogenic composition for reduction of clinical symptoms in pigs
WO2008064299A2 (en) 2006-11-22 2008-05-29 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods of reducing porcine circovirus-associated disease outbreaks
US20100129397A1 (en) 2006-12-11 2010-05-27 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Effective method of treatment of porcine circovirus and lawsonia intracellularis infections
RU2520087C2 (ru) * 2006-12-15 2014-06-20 Бёрингер Ингельхайм Ветмедика, Инк. Лечение свиней с помощью антигена pcv2
EP1941903A1 (en) * 2007-01-03 2008-07-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prophylaxis and treatment of PRDC
EP1958644A1 (en) 2007-02-13 2008-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prevention and treatment of sub-clinical pcvd
GB0712160D0 (en) 2007-06-22 2007-08-01 Univ Ghent Methods and compositions in the treatment of procine circoviral infection
US20090017064A1 (en) 2007-07-10 2009-01-15 Wyeth Methods and Compositions for Immunizing Pigs Against Porcine Circovirus
US7829274B2 (en) * 2007-09-04 2010-11-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Reduction of concomitant infections in pigs by the use of PCV2 antigen
US20090317423A1 (en) 2008-01-23 2009-12-24 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Pcv2 mycoplasma hyopneumoniae immunogenic compositions and methods of producing such compositions
WO2009103037A1 (en) 2008-02-15 2009-08-20 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Methods and compositions for reducing the impact of enteric diseases
US8444989B1 (en) 2008-04-18 2013-05-21 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs
US20100150959A1 (en) 2008-12-15 2010-06-17 Vectogen Pty Ltd. PCV 2-Based Methods and Compositions for the Treatment of Pigs
TWI627281B (zh) 2009-09-02 2018-06-21 百靈佳殷格翰家畜藥品公司 降低ｐｃｖ－２組合物殺病毒活性之方法及具有改良免疫原性之ｐｃｖ－２組合物
US20110150770A1 (en) 2009-12-18 2011-06-23 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Multivalent vaccine against porcine teschovirus and other disease causing organisms in swine
PL2547770T3 (pl) 2010-03-16 2020-06-29 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Szczepionka zawierająca żywy atenuowany chimeryczny cirkowirus świń
WO2012033911A2 (en) 2010-09-08 2012-03-15 The Johns Hopkins University Polyionic papilloma virus-like particle (vlp) vaccines
CN103122352B (zh) 2012-09-27 2015-02-11 华中农业大学 一种猪圆环病毒2型重组杆状病毒及制备方法和应用
ES2734374T3 (es) 2013-03-01 2019-12-05 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Cuantificación de composiciones de vacuna
EP2991676A1 (en) 2013-04-30 2016-03-09 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Orf2 protein of pcv2 subtype a (pcv2a) for use in cross-protection
WO2014187822A1 (en) 2013-05-22 2014-11-27 Boehringer Ingelheim Espana, S.A. Method for the reduction of pcv-2 in a herd of swine
WO2015026912A1 (en) 2013-08-23 2015-02-26 Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. Porcine circovirus type 2 (pcv2) subunit vaccine
EA035265B1 (ru) 2013-10-02 2020-05-21 Бёрингер Ингельхайм Энимал Хелс Ю-Эс-Эй Инк. Вариант белка opc2 pcv2 и содержащие его вирусоподобные частицы
CN107531760A (zh) 2015-03-30 2018-01-02 勃林格殷格翰动物保健公司 Pcv2 orf2载体平台

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US7914992B2 (en) 2011-03-29
RU2009129600A (ru) 2011-02-10

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