CN101762417B - 一种用于植物激素前处理的分散液液微萃取法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种用于植物激素前处理的分散液液微萃取法,即将DLLME用于植物激素前处理的方法,处理步骤包括:加样、混合萃取剂和分散剂、振荡形成乳浊体系、离心分离、吸取有机相直接进行HPLC分析。本发明的方法富集能力高,操作简单,有机溶剂用量少和萃取时间短,集采样、萃取和浓缩于一体的同时,避免了固相微萃取中可能存在的交叉污染的问题,是一种简单、快速、成本低、高效且环境友好的样品前处理新技术,在痕量分析领域具有广泛的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于分析化学领域,更具体涉及一种用于植物激素前处理的分散液液微萃取方法。
背景技术
植物激素是指一些在植物体内合成,对生长发育能产生显著作用的微量有机物。生长素(Auxin)是最早发现的一种植物激素,能调控植物体的伸长生长、顶端优势、果实发育等多种生理过程。建立植物生长素的灵敏、快速、准确的分析方法,对于阐明生长素在植物生长过程中的作用和功能是非常重要的。然而,植物体内激素含量低(通常在0.1-50ng/g鲜重范围内),并存在许多植物激素类似物和次级代谢物,给植物激素的鉴别和定量带来困难。因此,寻找有效、快速的前处理方法一直是植物激素检测的瓶颈和研究热点。
植物激素检测的前处理,目前多采用传统的液液萃取(liquid-liquid extraction,LLE)法和固相萃取(solid-phase extraction,SPE)法。其中,LLE法操作繁琐、耗时、使用大量高毒有机溶剂,成本高,回收率较低,且不易实现自动化。SPE技术以高效、可靠以及溶剂用量少等优势逐渐取代了经典的LLE技术,成为植物激素分析的主流前处理方法。然而,SPE仍存在商品柱价格昂贵,过柱时间长等不足。2007年,固相微萃取法(solid-phase microextraction,SPME)首次被用于植物激素的预处理,此方法集采样、萃取、浓缩于一体,具有简单、快速、环境友好等特点,但SPME存在萃取头昂贵,使用寿命短,易交叉污染等局限性。因此,发展高效、稳定、低成本且环境友好的样品前处理新技术仍是亟待解决的问题。
分散液液微萃取(Dispersive Liquid-liquid Microextraction,DLLME)于2006年首次提出,是一种新型的样品预处理技术。DLLME结合了LLE和SPME的特点,所需有机溶剂少,操作单快速,集萃取、纯化、浓缩于一体,回收率高,富集效果好。目前,DLLME已能与多种仪器如气相色谱、气相色谱-质谱、液相色谱、液相色谱-质谱、原子吸收光谱等联用,成功用于水样、土壤、尿样和水果中不同物质的测定,分析对象涉及农药残留、临床药物、痕量金属等。将DLLME用于植物激素的前处理,具有富集能力高,操作简单,有机溶剂用量少和萃取时间短等优点,是一种简单可靠、环境友好的样品预处理技术。
发明内容
本发明的目的是提供一种植物激素的前处理新方法,用于净化和富集样品,该方法富集能力高,操作简单,有机溶剂用量少和萃取时间短。
本发明用于植物激素前处理的分散液液微萃取方法,处理步骤包括:
1)首先在10mL带塞的尖底离心管中,加入5.0mL待测样品溶液和0.375g NaCl,所述待测样品溶液的pH为4.0;
2)预先将50.0μL萃取剂三氯甲烷和1.0mL分散剂丙酮混匀;
3)用2.0mL注射器吸取步骤(2)的混合液,迅速注射入步骤(1)装有待测样品溶液和0.375g NaCl的尖底离心管中,轻轻振荡,形成乳浊体系;
4)将离心试管以4500r/min离心3min;
5)用微量液相进样针吸取离心管底部的有机相直接进行HPLC分析。
本发明的显著优点是:
本方法能够有效地对植物样品进行净化、浓缩,减少植物基质对检测信号的干扰;
本方法富集效果好,处理后的样品用高效液相色谱-荧光检测法分离测定,待测物质的检测限降低了两个数量级;
此方法未经过柱,减少了样品中待测物的损失;
植物样品中的IAA不稳定,易分解,本方法操作时间短,有利于减少IAA的分解;
此方法消耗有机溶剂少,是一种环境友好的前处理技术;
该方法装置简单,成本低;
该方法可与气相色谱、液相色谱和原子吸收分光光谱等仪器联用,适用范围广;
该方法无交叉污染问题。
附图说明
图1是结合本发明的DLLME装置的流程图。其中,1、2.0mL注射器,2、具塞尖形离心试管,3、微量液相进样针;(A)将萃取剂和分散剂混合后注入样品溶液;(B)萃取剂迅速被分散成细小液滴,形成乳浊体系;(C)经离心分离,有机相沉积于具塞尖形离心管底部;(D)用微量进样针吸取离心管底部有机相进行仪器分析。
具体实施方式
本发明采用的DLLME(分散液液微萃取)装置包括:具塞尖形离心试管、2.0mL注射器和微量液相进样针。
处理步骤包括:
1)首先在10mL带塞的尖底离心管中,加入5.0mL待测样品溶液和0.375g NaCl,所述待测样品溶液的pH为4.0;
2)预先将50.0μL萃取剂三氯甲烷和1.0mL分散剂丙酮混匀;
3)用2.0mL注射器吸取步骤(2)的混合液,迅速注射入步骤(1)装有待测样品溶液和0.375g NaCl的尖底离心管中,轻轻振荡,形成乳浊体系;振荡时间为0.1-1min,平衡时间极短是该新型前处理方法的显著优点。
4)将离心试管以4500r/min离心3min;
5)用微量液相进样针吸取离心管底部的有机相直接进行HPLC分析。采用微量液相进样针吸取离心管底部的有机相,便于计算吸取有机相的体积。
尖底离心管为具塞尖底离心试管;具塞可避免振荡和离心过程中液体损失,尖底结构便于吸取底部液体。
待测样品溶液制备为:所述待测样品溶液制备为:准确称取待测植物鲜样0.5g,用液氮快速研磨成粉末,用3mL含有1mmol/L抗氧化剂2.6-二叔丁基对甲酚BHT的体积浓度为80%甲醇水溶液在4℃浸提过夜;低温离心,收集上清液,残渣用1mL含有1mmol/L抗氧化剂2.6-二叔丁基对甲酚BHT的体积浓度为80%再浸提一小时,合并两次上清液,稀释5倍后,得到待测样品溶液。
实施例
利用本发明测定小球藻中的吲哚乙酸(IAA)含量。
准确称取该待测植物鲜样0.5g,用液氮快速研磨成粉末,用3mL含有1mmol/L抗氧化剂2.6-二叔丁基对甲酚BHT的体积浓度为80%甲醇水溶液在4℃浸提过夜;低温离心,收集上清液,残渣用1mL含有1mmol/L抗氧化剂2.6-二叔丁基对甲酚BHT的体积浓度为80%再浸提一小时,合并两次上清液,稀释5倍后,得到待测样品溶液。
在10mL带塞的尖底离心试管中,加入5.0mL样品溶液(pH 4.0)和0.375g NaCl,将50.0μL氯仿和1.0mL丙酮混匀,用注射器迅速将混合液注入样品溶液中,轻轻地振荡0.1-1min,形成乳浊液体系。以4500r/min离心3 min,用微量液相进样针吸取离心管底部有机相直接进样分析。
色谱条件:以乙腈/水为流动相(50∶50,v/v%),采用C18色谱柱(5μm,150mm×4.6mm,Agilent)为分离通道,设置流速1.0mL/min,柱温35℃,进样量5μL,荧光波长Ex/Em 230/360nm。
本发明中DLLME用于植物生长素的预处理,得到了较好的净化和富集。检测限与未萃取富集前相比,降低了两个数量级。该方法操作简单,稳定性好,重现性高,成功用于测定小球藻中的IAA含量。日间精密度的RSDs(n=7)分别为0.17-0.94%(保留时间),2.52-5.42%(峰面积);日内精密度的RSDs(n=5)均小于0.86%(保留时间)和5.63%(峰面积)。测得小球藻中IAA含量为37.0ng/g FW(鲜重)。进行不同浓度的加标回收率实验,回收率介于94.7-116.0%,RSD小于1.2%。本方法具有较好的发展前景,可进一步用于其他植物激素的前处理。
Claims (3)
1. 一种用于植物激素前处理的分散液液微萃取方法,其特征在于:处理步骤包括:
1) 首先在10 mL带塞的尖底离心管中,加入5.0 mL的待测样品溶液和0.375 g NaCl,所述待测样品溶液的pH 为4.0;
2)预先将50.0 μL萃取剂三氯甲烷和1.0 mL分散剂丙酮混匀;
3)用2.0 mL注射器吸取步骤2)的混合液,迅速注射入步骤1)装有待测样品溶液和0.375 g NaCl的尖底离心管中,轻轻振荡,形成乳浊体系;
4)将离心试管以4500 r/min离心3 min;
5)用微量液相进样针吸取离心管底部的有机相直接进行HPLC分析。
2. 根据权利要求1所述的一种用于植物激素前处理的分散液液微萃取方法,其特征在于:所述的尖底离心管为具塞尖底离心管。
3.根据权利要求1所述的一种用于植物激素前处理的分散液液微萃取方法,其特征在于:所述步骤2)轻轻振荡时间为0.1-1 min。
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CN102564836A (zh) * | 2010-12-12 | 2012-07-11 | 复旦大学 | 一种分析原料药中残留有机溶剂的方法 |
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1362020A (zh) * | 2001-12-27 | 2002-08-07 | 海南英得利生物技术开发有限公司 | 印楝提取物生产工艺 |
US6905031B1 (en) * | 1999-09-13 | 2005-06-14 | The Regents Of The University Of California | Solid phase microextraction device using aerogel |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6905031B1 (en) * | 1999-09-13 | 2005-06-14 | The Regents Of The University Of California | Solid phase microextraction device using aerogel |
CN1362020A (zh) * | 2001-12-27 | 2002-08-07 | 海南英得利生物技术开发有限公司 | 印楝提取物生产工艺 |
CN1663662A (zh) * | 2004-12-24 | 2005-09-07 | 清华大学 | 一种悬滴式液液微萃取方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
张彦杰等.《分散液液微萃取快速测定中药中4种呋喃香豆素化合物》.《分析化学研究简报》.2009,第37卷(第12期),1805-1809. * |
赵晓菊等.《固相萃取富集2高效液相色谱法测定长春花中的3种内源激素》.《色谱》.2006,第24卷(第5期),534. * |
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