CN102590372A - 一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法 - Google Patents
一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102590372A CN102590372A CN2012100176315A CN201210017631A CN102590372A CN 102590372 A CN102590372 A CN 102590372A CN 2012100176315 A CN2012100176315 A CN 2012100176315A CN 201210017631 A CN201210017631 A CN 201210017631A CN 102590372 A CN102590372 A CN 102590372A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- acid
- flue
- phenolic acid
- cured tobacco
- phenolic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明公开了一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法。包括波长选择、色谱条件选择、标准工作液制作、工作曲线绘制、样品前处理和样品测定，最后以不同酚酸种类保留时间定性，定量采用峰面积外标法，得到烤烟根系分泌物中酚酸的种类和含量。本发明填补了烤烟根系分泌物中酚酸物质种类和含量检测空白。该方法可同时检测5种酚酸，操作简单，检测速度快，重现性好，准确度高。使用常规检测设备，无需配置专门仪器，由一人即可独立完成。
Description
技术领域
本发明属于农业生产技术领域，具体涉及一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法。
背景技术
酚酸是植物典型的根系分泌物质，也是植物最重要的化感物质之一，其对植物生长发育和根系微生态具有重要的修饰限制作用。植物根系分泌物中一般包含5种酚酸：对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸。大量研究表明，根系分泌物中酚酸类物质能抑制其他植物的生长及根系活动，造成一种克生现象，同时酚酸的积累可对作物的连作产生自毒作用从而造成连作障碍。烤烟是典型的忌连作作物，烤烟连作会造成烤烟产质量下降、病虫害加重、土壤环境恶化等不利影响。因此研究烤烟根系分泌物中化感物质特别是酚酸类物质的种类和含量，对深入研究烤烟连作障碍机理和生物防治具有重要意义。
现有根系分泌物酚酸的检测技术主要有高效液相色谱、气相色谱、液-质和气-质联用等，其中高效液相色谱法具有不受试样挥发性和热稳定性限制，应用范围广，可选择流动相较多等特点，较适宜于根系分泌物中有机酸的分析。采用反相色谱法分析根系分泌物酚酸已在水稻、大豆和番茄等作物上得到应用，但分析手段存在差异，主要原因是作物种类不同而导致根系分泌物提取方法和检测手段存在差异。目前，对烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的检测尚未见有成功的报道。因此，制定一种烤烟根系分泌物中酚酸类物质的分析方法对较好开展烤烟根系研究具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种操作简便、准确性高、重现性好的检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法。
本发明的目的通过以下技术方案予以实现。
一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法，包括以下步骤：
1、波长选择：选择280nm作为对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸的检测波长；
2、色谱选择：采用甲醇和乙酸水溶液体系，甲醇浓度为体积百分数30％，乙酸浓度为体积百分数0.2％，进样量为10μL，流速为1.0mL/mim，检测时间30min；
3、标准工作液制作：分别称取对羟基苯甲酸、香草酸、香豆酸、丁香酸、阿魏酸各0.1000g，用5mL甲醇溶解并用超纯水定容至1000mL，制成质量浓度为100μg/mL的酚酸混合储备液，将混合储备液分别稀释5倍、10倍、20倍、40倍和100倍作为标准工作液；
4、对各酚酸标准工作液浓度与其相应峰面积进行回归，并计算线性回归方程、线性范围、回收率、标准偏差、检测限和工作曲线；
5、样品前处理：采用水培法收集根系分泌物，体积为500mL，用二氯甲烷100mL萃取3次，收集有机相并用旋转蒸发仪浓缩至干，超纯水溶解定容至2mL，过0.45μm有机相滤膜，备用；
6、样品测定：采用自动进样器进样，以不同酚酸种类保留时间定性，定量采用峰面积外标法，得到烤烟根系分泌物中酚酸的种类和含量。
步骤(6)中所述的不同酚酸种类保留时间具体为：对羟基苯甲酸，10.839min；香草酸，12.624min；丁香酸，13.688min；香豆酸，24.955min；阿魏酸，28.970min。
同现有技术相比，本发明具有以下优点：
1、本发明填补了烤烟根系分泌物中酚酸物质种类和含量检测空白。烤烟根系分泌物研究尚属起步阶段，目前并无与烤烟根系分泌物质相关的检测技术，本发明首创利用高效液相色谱法对烤烟根系分泌物中酚酸类物质的定性和定量检测，为今后开展烤烟根系分泌物研究提供了可靠保证。
2、本发明可同时检测5种酚酸，操作简单，检测速度快，重现性好，准确度高。
3、检测成本较低，所需高效液相色谱仪和旋转蒸发仪等仪器均为实验室常用检测设备，无需配置专门仪器即可完成。
4、操作方法简单易行，可由一人独立完成且对操作人员无特殊技术要求。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地说明，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1
实施例中根系分泌物样品均系烤烟根系分泌物。
1、分别称取对羟基苯甲酸、香草酸、香豆酸、丁香酸、阿魏酸各0.1000g，用5mL甲醇溶解并用超纯水定容至1000mL，制成质量浓度为100μg/mL的酚酸混合储备液，将混合储备液分别稀释5倍、10倍、20倍、40倍和100倍作为标准工作液。
2、对各种酚酸标准工作液浓度与其相应峰面积进行回归，回归方程、线性范围及检出限见表1。
表1各种酚酸的回归分析和检出限
Table 1 Regression analysis and detection limit of the five phenolic acids
注(Note)：检出限按3倍信噪比计算(S/N＝3)。The detection limit by three times to the ratio of signal noise(S/N＝3).
3、加标回收率：将已知酚酸浓度的样品中加入标准品混合溶液，重复6次，计算回收率和相对标准偏差(见下表)。
表2各种酚酸加标回收率测定(n＝6)
Table 2 Recovery of the five phenolic acids
| 酚酸Phenolics | 回收率(％) | RSD(％) |
| 对羟基苯甲ρ-hydrobenzoic acid | 101.6386 | 1.1056 |
| 香草酸Vanillic acid | 91.0359 | 1.0618 |
| 丁香酸Syringic acid | 94.5658 | 1.8320 |
| 香豆酸Coumaric acid | 96.1359 | 0.8751 |
| 阿魏酸Ferulic acid | 97.8420 | 1.5321 |
4、样品测定：先将收集的根系分泌物原液用分液漏斗进行萃取，萃取剂为二氯甲烷，萃取3次，每次100mL，收集有机相；再用旋转蒸发仪将收集的有机相浓缩至干，再用2mL超纯水洗瓶并收集作为根系分泌物样品，并按步骤2进行样品酚酸物质检测，下表3是4个样品的检测结果。
表3样品中酚酸种类和含量测定(μg/mL)
Table 3 Content and species of five phenolic acids in samples
| 酚酸Phenolics | 样品Sample 1 | 样品Sample 2 | 样品Sample 3 | 样品Sample 4 |
| 对羟基苯甲ρ-hydrobenzoic acid | 0.9421 | 0.9714 | 6.6504 | 2.3967 |
| 香草酸Vanillic acid | 0.7201 | - | - | - |
| 丁香酸Syringic acid | - | 0.7857 | 0.0532 | 0.5877 |
| 香豆酸Coumaric acid | 0.2872 | - | - | - |
| 阿魏酸Ferulic acid | - | - | - | - |
注(Note)：表中数据为3次重复平均值，“-”表示未检测到。Dates are means of three replicates-indicate no detected
结果分析：由上述结果可知本法建立的检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法具有工作曲线线性良好、检出限低、回收率和精密度较高、样品处理简单易行、检出酚酸种类多、分析时间短等特点，适用于烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的检测和研究工作。
Claims (2)
1.一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法，包括以下步骤：
(1)波长选择：选择280nm作为对羟基苯甲酸、香草酸、丁香酸、香豆酸和阿魏酸的检测波长；
(2)色谱选择：采用甲醇和乙酸水溶液体系，甲醇浓度为体积百分数30％，乙酸浓度为体积百分数0.2％，进样量为10μL，流速为1.0mL/mim，检测时间30min；
(3)标准工作液制作：分别称取对羟基苯甲酸、香草酸、香豆酸、丁香酸、阿魏酸各0.1000g，用5mL甲醇溶解并用超纯水定容至1000mL，制成质量浓度为100μg/mL的酚酸混合储备液，将混合储备液分别稀释5倍、10倍、20倍、40倍和100倍作为标准工作液；
(4)对各酚酸标准工作液浓度与其相应峰面积进行回归，并计算线性回归方程、线性范围、回收率、标准偏差、检测限和工作曲线；
(5)样品前处理：采用水培法收集根系分泌物，体积为500mL，用二氯甲烷100mL萃取3次，收集有机相并用旋转蒸发仪浓缩至干，超纯水溶解定容至2mL，过0.45μm有机相滤膜，备用；
(6)样品测定：采用自动进样器进样，以不同酚酸种类保留时间定性，定量采用峰面积外标法，得到烤烟根系分泌物中酚酸的种类和含量。
2.根据权利要求1所述的检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法，其特征在于：步骤(6)中所述的不同酚酸种类保留时间具体为：对羟基苯甲酸，10.839min；香草酸，12.624min；丁香酸，13.688min；香豆酸，24.955min；阿魏酸，28.970min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012100176315A CN102590372A (zh) | 2012-01-19 | 2012-01-19 | 一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2012100176315A CN102590372A (zh) | 2012-01-19 | 2012-01-19 | 一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102590372A true CN102590372A (zh) | 2012-07-18 |
Family
ID=46479304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2012100176315A Pending CN102590372A (zh) | 2012-01-19 | 2012-01-19 | 一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102590372A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102749399A (zh) * | 2012-07-24 | 2012-10-24 | 贵州省烟草科学研究所 | 测定烟草中咖啡酸含量的方法 |
| CN104458948A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-25 | 江苏省农业科学院 | 一种秸秆酚酸类化合物的检测方法 |
| CN109781872A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-05-21 | 湖北省烟草科学研究院 | 植烟土壤中化感物质的提取方法及检测方法 |
| CN109828044A (zh) * | 2019-02-21 | 2019-05-31 | 安徽古井贡酒股份有限公司 | 一种超高效合相色谱串接QDa同时快速检测酒类产品中8种酚酸类物质的方法 |
-
2012
- 2012-01-19 CN CN2012100176315A patent/CN102590372A/zh active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102749399A (zh) * | 2012-07-24 | 2012-10-24 | 贵州省烟草科学研究所 | 测定烟草中咖啡酸含量的方法 |
| CN104458948A (zh) * | 2014-12-05 | 2015-03-25 | 江苏省农业科学院 | 一种秸秆酚酸类化合物的检测方法 |
| CN109781872A (zh) * | 2018-12-25 | 2019-05-21 | 湖北省烟草科学研究院 | 植烟土壤中化感物质的提取方法及检测方法 |
| CN109828044A (zh) * | 2019-02-21 | 2019-05-31 | 安徽古井贡酒股份有限公司 | 一种超高效合相色谱串接QDa同时快速检测酒类产品中8种酚酸类物质的方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103913529B (zh) | 同时测定土壤中有机磷类及拟除虫菊酯类农药残留量的分析方法 | |
| CN102735768B (zh) | 一种畜禽粪便中雌激素及其结合体的共检测方法 | |
| CN104897843B (zh) | 一种茶树嫩芽内源激素含量的测定方法 | |
| CN103926362B (zh) | 一种土壤中拟除虫菊酯类农药的定量检测方法 | |
| CN103926347B (zh) | 一种土壤中有机磷类农药的定量检测方法 | |
| CN104020246A (zh) | 同时检测大气中多种挥发性痕量羰基化合物的方法 | |
| CN103913528A (zh) | 一种茶鲜叶中拟除虫菊酯类农药的定量检测方法 | |
| CN102590372A (zh) | 一种检测烤烟根系分泌物中酚酸种类和含量的方法 | |
| CN101526509A (zh) | 调味品中防腐剂含量的快速测定方法 | |
| CN104215705B (zh) | 一种检测粮食中有机氯农药残留量的方法 | |
| CN102590371A (zh) | 一种检测烤烟根系分泌物中有机酸种类和含量的方法 | |
| CN101696964A (zh) | 氟喹诺酮类抗生素的固相萃取与hplc-荧光检测方法 | |
| CN102081078A (zh) | 动物性食品中四种氟喹诺酮类药物残留量的测定方法 | |
| CN104502477A (zh) | 一种三氯乙醛废硫酸中有机物的分析方法 | |
| CN104764827A (zh) | 一种番茄植株顶芽内源激素含量的测定方法 | |
| CN103913538A (zh) | 一种茶鲜叶中有机磷类农药的定量检测方法 | |
| CN102507757A (zh) | 一种高效液相色谱法测定条斑紫菜中抗坏血酸含量的方法 | |
| CN104597164A (zh) | 检测桉树林地土壤酚酸种类与含量的方法 | |
| CN101581707B (zh) | 一种同时检测食醋中乙偶姻和川芎嗪的方法 | |
| Cheng et al. | A new method for simultaneous determination of 14 phenolic acids in agricultural soils by multiwavelength HPLC-PDA analysis | |
| CN106596740A (zh) | 一种采用气相色谱法测定大蒜中二甲戊灵的残留量的方法 | |
| CN107607652A (zh) | 一种测定金花葵花硫含量的方法 | |
| CN111579684B (zh) | 一种胶囊剂的囊材中辣椒总碱的含量测定方法 | |
| CN104833760A (zh) | 高效液相色谱法测定设施番茄土壤低分子量有机酸的方法 | |
| CA2727891A1 (en) | Method for measuring total content of natural brassinosteroids using chromatography apparatus |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: INSPECTION + QUANRANTINE TECH CENTER, YUNNAN ENTRY Free format text: FORMER OWNER: INSPECTION + QUANRANTINE TECH CENTER, YUNNAN ENTRY AND EXIT INSPECTION + QUARANT Effective date: 20130121 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20130121 Address after: 650201 Yunnan Agricultural University, Kunming, Yunnan, Kunming Applicant after: Yunnan Agricultural University Applicant after: Inspection & Quanrantine Tech Center, Yunnan Entry and Exit Inspection & Quarant Applicant after: YUNNAN TOBACCO COMPANY LIJIANG COMPANY Address before: 650201 Yunnan Agricultural University, Kunming, Yunnan, Kunming Applicant before: Yunnan Agricultural University Applicant before: Inspection & Quanrantine Tech Center, Yunnan Entry and Exit Inspection & Quarant |
|
| C12 | Rejection of a patent application after its publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20120718 |