CN101703469B - 甲磺酸达氟沙星脂质体的制备方法及其产品 - Google Patents
甲磺酸达氟沙星脂质体的制备方法及其产品 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101703469B CN101703469B CN2009102238526A CN200910223852A CN101703469B CN 101703469 B CN101703469 B CN 101703469B CN 2009102238526 A CN2009102238526 A CN 2009102238526A CN 200910223852 A CN200910223852 A CN 200910223852A CN 101703469 B CN101703469 B CN 101703469B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- liposome
- preparation
- danofloxacin mesylate
- danofloxacin
- mesylate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明提供了甲磺酸达氟沙星脂质体制备方法及其产品。其制备方法包括以下步骤:(1)采用硫酸铵梯度法制备空白脂质体;(2)向空白脂质体中加入甲磺酸达氟沙星药液,水浴孵化,过滤,滤液采用冻结融解法反复冻融,即得甲磺酸达氟沙星脂质体。本发明制备的脂质体成品为乳白色半透明混悬液,电镜下观察为球状或近球状小囊泡,形态规整,分散性好,粒度分布均匀;脂质体包封率在90%以上,稳定性良好;药代动力学特征和药效学优于常规剂型,具有缓释、长效和高度肺靶向的特点。
Description
技术领域
本发明涉及的是一种兽用药品的制备方法,尤其涉及甲磺酸达氟沙星肺靶向脂质体的制备方法及其产品,属于兽用药品领域。
背景技术
脂质体系指将药物包封于类脂双分子层内形成的微型囊泡,又称为类脂小球或液晶微囊,属于微粒给药体系。其主要成分是磷脂(如磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酸)、磷脂酰丝氨酸等。脂质体作为一种新型的药物靶向制剂,以其包裹药物后,可以改善药物理化性质,增强药物对靶组织的指向性和滞留性,提高药物在局部组织的分布,减少药物用量和治疗成本,降低药物对正常细胞的毒性和提高生物利用度等。60年代末,Rahman等人首先将脂质体作为药物载体应用。经过30多年的研究,由Nexstar公司生产的Ambisome于1989年在爱尔兰投放市场,从而使脂质体技术作为一种新技术进入了医药历史的舞台。由于生物技术药物涵盖面不断拓宽,脂质体作为生物技术药物载体,其应用范围也越来越广。随着社会的发展,人们对环保意识逐渐增强,对畜禽用药的要求也愈来愈高。要求是高效、低残留等。现在人们比较注重研制药物新制剂,因为不可能一味的要求研究新药。随着脂质体在医药领域的应用,它对兽药领域的影响也将越来越广泛。目前,兽用脂质体制剂的研究主要以抗寄生虫、抗病毒、抗感染、微量元素、营养药物为主,已研制成功的或正在研制的兽用脂质体制剂如碘醚柳胺脂质体定向剂、诺贝脂质体注射液、H7亚型禽流感保护性抗原血凝素(HA)基因重组质粒pSVH7脂质体、用CABA/DOPE脂质体包裹新城疫病毒血凝素神经氨酸酶(HN)基因的真核表达质粒pcHNM、猪生长激素脂质体、半胱胺脂质体等。然而,在现有报道的有关兽用脂质体制剂的资料中,研究内容涉及制备工艺、体内外稳定性、药效学研究及临床观察、药物代谢动力学等研究不是很深入,有待进一步加深。
甲磺酸达氟沙星是喹诺酮类化合物第三代产品-氟喹诺酮类药物的一种,是动物专用品种。90年代初由美国辉瑞公司研制开发,于1990年在墨西哥等国家上市,我国于1998年开始应用该药品。该药抗菌谱广,对革兰氏阳性菌、阴性菌、某些厌氧菌、支原体及某些耐药菌株都有较强的抗菌作用,对金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、肺炎球菌、嗜肺性军团菌、支原体敏感,对梭状芽孢杆菌、魏氏梭菌、破伤风杆菌、拟杆菌属也敏感,对三甲苄氨嘧啶/磺胺药耐药的细菌,对庆大霉素耐药的绿脓杆菌,耐甲氧苯青霉素的金黄色葡萄球菌及耐泰乐菌素或泰妙灵的支原体均有效果。尤其是对呼吸道主要致病菌的抗菌效果明显优于其他抗菌药物,是治疗畜禽呼吸系统感染性疾病的理想药物。达氟沙星较其他第三代喹诺酮类药物不良反应轻微,但还具有一定的神经毒性、肝毒性和肾毒性,同时存在价格昂贵、生产工艺复杂等问题。目前,临床上常用的制剂有甲磺酸达氟沙星粉剂、溶液剂、注射液等。
发明内容
本发明的目的在于提供一种甲磺酸达氟沙星脂质体的制备方法,由该制备方法所制备得到的甲磺酸达氟沙星脂质体具有肺靶向性强、疗效高、药效长,且能够缓和毒性等特点,为畜禽肺部感染的防治提供一种更为理想的新制剂。
本发明的目的还在于提供一种由硫酸铵梯度法与冻结融解法相结合制备甲磺酸达氟沙星脂质体的方法。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的:
一种甲磺酸达氟沙星脂质体的制备方法,包括以下步骤:(1)采用硫酸铵梯度法制备空白脂质体;(2)向空白脂质体中加入甲磺酸达氟沙星药液,水浴孵化,过滤,滤液采用冻结融解法反复冻融,即得甲磺酸达氟沙星脂质体。
上述制备方法中,优选的,步骤(1)中所述的空白脂质体包括以下步骤制备得到:将蛋黄卵磷脂(EPC)与胆固醇(CH)混合并加入硬脂酰胺(SA)充分混合均匀,用无水乙醚溶解后经旋转减压蒸发,除去乙醚,得均匀半透明的磷脂膜;真空干燥后加入硫酸铵溶液洗脱,得到空白脂质体;
其中,为了提高空白脂质体的包封率,优选的,将蛋黄卵磷脂(EPC)与胆固醇(CH)按照重量比为3∶2的比例进行混合,所制备得到的空白脂质体具有最优的包封率;加入硬脂酰胺的目的是调节脂质体电荷,本发明人通过大量的试验发现,当所加入硬脂酰胺用量达到蛋黄卵磷脂(EPC)和胆固醇总重量的2.6%时,就可达到调节脂质体电荷目的,从成本和效率方面综合考虑,因此,本发明优选硬脂酰胺其用量为蛋黄卵磷脂(EPC)和胆固醇总重量的2.6%。
此外,在步骤(1)还可以把所得的空白脂质体通过3μm微孔滤膜整粒,并用150mmol/L NaCl溶液室温下透析3次,每次24h。
同样为了提高脂质体的包封率,步骤(2)中,当甲磺酸达氟沙星药液和空白脂质体的重量比例为2∶5时,可显著提高药物脂质体的包封率;此外,当水浴孵化的孵化温度为35℃,孵化时间为15min,也可有效提高药物脂质体的包封率。
经试验证明,脂质体经三次冻结融解后达到稳定状态,脂质体的粒径和包封率平均高达94.42%,相对标准偏差为1.93%。
本发明产品应用脂质体作为甲磺酸达氟沙星载体,通过控制脂质体粒径及改变脂质体膜成分来提高脂质体的肺组织靶向性,从而制备一种靶向性强、疗效高、药效长,且能够缓和毒性的新型药物制剂,为畜禽肺部感染的防治提供一种更为理想新制剂。本发明的甲磺酸达氟沙星脂质体为乳白色半透明混悬液,电镜下观察为球状或近球状小囊泡,形态规整,分散性好,粒度分布均匀;脂质体包封率在90%以上,稳定性良好。
经实验证明本发明甲磺酸达氟沙星脂质体具有如下特点:
1.本发明的产品是由脂质体作为载体制备的一种新型药物制剂,具有肺靶向性强、疗效高、药效长,且能够缓和毒性等特点。
2.本发明的产品通过5种制备方法比较,确定其最佳制备方法为硫酸铵梯度法与冻结融解法相结合。
3.本发明的产品形态规整,分散性好,粒度分布均匀,包封率高,稳定性好。
4.体内药动学特征优秀,在血浆、肝、肺中的分布明显提高,肾中的分布降低;具有明显的肺部靶向性,且在肺部有一定的缓慢释放。
5.本发明的产品与甲磺酸达氟沙星普通剂型相比,能更好的抑制细菌的生长,并对动物呼吸道疾病能够发挥更好的治疗效果,减少气囊的损伤率,降低毒副作用。
附图说明
图1透射电镜下所观察到的本发明甲磺酸达氟沙星脂质体的外部形态。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步描述本发明,本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的,并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是,在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换,但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1本发明甲磺酸达氟沙星脂质体的制备
将重量比为3∶2的蛋黄卵磷脂(EPC)与胆固醇(CH)及为两者重量的2.6%的硬脂酰胺(SA)充分混合均匀,用无水乙醚溶解后经旋转减压蒸发,除去乙醚,得均匀半透明的磷脂膜,真空干燥24h后加入250mmo/L硫酸铵溶液洗脱,所得空白脂质体通过3μm微孔滤膜整粒,并用150mmol/L NaCl溶液室温下透析3次,每次24h;取透析后的空白脂质体,加入10mg/mL甲磺酸达氟沙星药液,药脂比为2∶5,用100mmol/L NaOH溶液调节pH值,然后置于35℃水浴孵化15min,用PBS溶液定量后采用冻结融解法,将该混悬液用3μm微孔滤膜过滤,滤液于-20℃冷冻25min,然后于35℃下放置10min,再冷冻,如此反复3次,即得甲磺酸达氟沙星脂质体。
本实施例所制备的脂质体的粒径和包封率平均高达94.42%。所制备的脂质体形态规整,分散性好,粒径分布均匀。室温下放置3~4个月内颜色不发生变化也不变混浊,包封率没有明显下降,
实施例2本发明甲磺酸达氟沙星脂质体的制备
将重量比为4∶3的蛋黄卵磷脂(EPC)与胆固醇(CH)及为两者重量的2.8%的硬脂酰胺(SA)充分混合均匀,用无水乙醚溶解后经旋转减压蒸发,除去乙醚,得均匀半透明的磷脂膜,真空干燥32h后加入280mmo/L硫酸铵溶液洗脱,所得空白脂质体通过3μm微孔滤膜整粒,并用150mmol/L NaCl溶液室温下透析3次,每次32h;取透析后的空白脂质体,加入10mg/mL甲磺酸达氟沙星药液,药脂比为2∶6,用100mmol/L NaOH溶液调节pH值,然后置于37℃水浴孵化12min,用PBS溶液定量后采用冻结融解法,将该混悬液用3μm微孔滤膜过滤,滤液于-20℃冷冻25min,然后于35℃下放置10min,再冷冻,如此反复4次,即得甲磺酸达氟沙星脂质体。
本实施例所制备的脂质体的粒径和包封率平均为84.65%。所制备的脂质体形态较为规整,分散性较好,粒径分布较均匀。室温下放置2个月后颜色有所变化,包封率有所下降。
实施例3本发明甲磺酸达氟沙星脂质体的制备
将重量比为3∶2.5的蛋黄卵磷脂(EPC)与胆固醇(CH)及为两者重量的3.0%的硬脂酰胺(SA)充分混合均匀,用无水乙醚溶解后经旋转减压蒸发,除去乙醚,得均匀半透明的磷脂膜,真空干燥24h后加入200mmo/L硫酸铵溶液洗脱,所得空白脂质体通过3μm微孔滤膜整粒,并用150mmol/L NaCl溶液室温下透析3次,每次24h;取透析后的空白脂质体,加入10mg/mL甲磺酸达氟沙星药液,药脂比为2∶3,用100mmol/L NaOH溶液调节pH值,然后置于35℃水浴孵化15min,用PBS溶液定量后采用冻结融解法,将该混悬液用3μm微孔滤膜过滤,滤液于-20℃冷冻25min,然后于35℃下放置10min,再冷冻,如此反复3次,即得甲磺酸达氟沙星脂质体。
本实施例所制备的脂质体的粒径和包封率平均为83.78%。所制备的脂质体形态较为规整,分散性较好,粒径分布较均匀。室温下放置2个月后颜色发生变化并变混浊,包封率有所下降。
试验例1本发明甲磺酸达氟沙星脂质体制备方法的各工艺参数的优化筛选试验
甲磺酸达氟沙星为水溶性药物,为提高其包封率,在已建立的众多脂质体制备方法中,筛选出薄膜分散法、二次乳化法、硫酸铵梯度法、逆向蒸发法和乙醚注入法五种方法同时结合冻结融解法制备甲磺酸达氟沙星脂质体。以脂质体的包封率En作为指标,比较不同方法的优劣,确定最佳制备方法。
处方设计及优化选择:在单因素考察的基础上,进一步考察脂质体制备过程中影响脂质体质量的诸多因素。以脂质体包封率为考察指标,选取影响脂质体成囊的3个主要因素(药脂比、卵磷脂和胆固醇用量比、硫酸铵溶液浓度),采用L9(34)正交试验优化制备工艺。
硬脂酰胺(SA)用量的考察:正电荷脂质体具有肺靶向性,添加SA可以改变脂质体表面的荷电性,使脂质体带正电,但SA对肺部具有强烈的刺激性,为了减少其用量,本试验考察了当SA用量分别为类脂质量的0.6%、1.0%、1.4%、1.8%、2.2%、2.6%、3.0%、3.4%时对脂质体电荷的调节,以确定SA的最佳用量。
脂质体制备工艺:
(1)空白脂质体的制备将EPC、CH及SA按处方比例混和,无水乙醚溶解,得到类脂溶液。将其置于茄形烧瓶中,加入数粒直径为3~4mm的玻璃珠,减压蒸发,除去有机溶剂,得到一层均匀半透明的磷脂膜,于真空干燥箱内真空干燥24h。然后加入硫酸铵溶液以洗脱磷脂膜。所得空白脂质体通过3μm的微孔滤膜整粒。整粒后的脂质体取5mL装入透析袋中,用150mmol/LNaCl溶液室温下透析,每次使用透析介质(20~25倍体积)80~100mL,共透析3次,约24h。透析的目的是为了除去脂质体外部的硫酸铵,使脂质体膜内外形成硫酸根离子的梯度(即脂质体内部为高浓度的硫酸根,脂质体膜外为低浓度的硫酸根)。
(2)载药工艺取透析后的空白脂质体,加入10mg/mL甲磺酸达氟沙星药液适量,用100mmol/L的NaOH溶液调节pH值,然后置于水浴孵化(脂质体混悬液与药液混合并轻摇孵育),用PBS溶液定容即得。
(3)冻结融解法将脂质体混悬液用3μm微孔滤膜过滤,滤液于室温下置-20℃冰箱冷冻25min,然后取出,于35℃下放置10min,再放入冰箱中冷冻,如此反复数次,即得所需脂质体,4℃冰箱保存备用。
(4)包封率的验证采用最佳工艺制备甲磺酸达氟沙星脂质体,作重复性试验,测定包封率,以验证方法的可行性。
试验结果为本试验制备的甲磺酸达氟沙星脂质体成品为乳白色半透明混悬液。利用硫酸铵梯度法制备的脂质体包封率高于其他方法。由正交试验分析结果可知,包封率的影响因素大小为:卵磷脂和胆固醇用量比>硫酸铵溶液浓度>药脂比。其中因素B、C即卵磷脂和胆固醇用量比和硫酸铵溶液浓度对包封率的影响具有显著性意义。最佳制备条件为:卵磷脂和胆固醇用量比为3∶2,药脂比为2∶5,硫酸铵浓度为250mmol/L,孵化温度为35℃,孵化时间为15min。硬脂酰胺用量达到类脂用量的2.6%时,可满足调节脂质体电荷的目的,因此确定其用量为类脂质量的2.6%。经试验证明,脂质体经三次冻结融解后达到稳定状态,脂质体的粒径和包封率平均高达94.42%,相对标准偏差为1.93%,表明此试验方法可行,制得的脂质体较为理想。
试验例2本发明甲磺酸达氟沙星脂质体产品的质量控制考察
形态观察:将脂质体混悬液适当稀释后,用乙酸双氧铀(浓度为0.2%~0.5%,pH4~5.5)负染,以1∶10的体积混合,然后将有支持膜的铜网浸入,数秒钟后取出,用滤纸吸去多余的液体,自然干燥30min,于透射电镜下观察其形态。由图1透射电镜照片可见,制备的脂质体为球状或近球状小囊泡,形态规整,分散性好,粒径分布均匀。
粒径分布和ζ电位测定:用粒度分析仪测定粒子的平均粒径主要集中在3~7μm,少数在1~3μm,只有极少数在10μm以上;用Zeta电位测定仪测得甲磺酸达氟沙星脂质体的ζ电位值为+(15.92±1.49)mV(n=5)。
pH测定:取脂质体混悬液适量,透析除去游离药物和SA,对透析后的脂质体以pH计测定其pH值为6.02±0.09(n=5)。
脂质体初步稳定性研究:结果表明,加温可破坏脂质体膜结构,使药物浓度降低,包封率下降,渗漏率提高;4℃下放置的脂质体6个月后外观、性状、包封率等指标基本上无变化,无分解产物;室温下放置的脂质体在3~4个月后颜色就发生变化并开始变混浊,包封率下降,6个月后其中一批样品还出现了絮状物;4℃下脂质体放置6个月,粒径基本上变化不大,而室温下脂质体放置3个月即开始发生明显的变化,脂质体的粒径普遍增大。
试验例3本发明甲磺酸达氟沙星脂质体在蛋雏鸡体内的血浆药代动力学特征及生物利用度研究
260只28日龄试验鸡随机进行分组:健康对照组20只,甲磺酸达氟沙星药液静注给药组和内服给药组、甲磺酸达氟沙星脂质体(本发明实施例1-3所制备)静注给药组和内服给药组四组,每组60只。给药前1~2min按编号依次取出,以5mg/kgb.w剂量翼静脉注入给药。内服给药采用胃管投服,给药后,用注射器抽取2mL纯化水与2mL空气一并注入,使药液全部进入嗉囊中。分别于给药后0.167、0.333、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、9、12、24h各剖杀5只鸡,取中段血5mL,置于加有肝素钠溶液的离心管中,轻轻混匀,离心,分离血浆,采用HPLC法测定血药浓度,MCPKP药动学软件分析药动学参数。
结果表明,达氟沙星溶液和达氟沙星脂质体两种剂型静注给药的药时数据均符合无吸收二室开放模型,主要药动学参数分别为T1/2α0.3496h、0.3518h;T1/2β6.4114h、8.1932h;AUC3.7997、5.0660mg/L·h;CLβ1.7232、1.1317L/kg·h。两种剂型内服给药的药时数据均符合一级吸收一室开放模型,主要药动学参数分别为T1/2Kα0.3017h、0.5244h;T1/2K 4.4792h、5.0217h;AUC 3.2844、4.6106mg/L·h;Cmax0.4838、1.0548μg/mL;Tp 1.2873h、1.9362h;生物利用度分别为86.44%、91.01%。可见这两种剂型的静注与内服给药的体内药动学特征不同。达氟沙星脂质体具有在雏鸡体内分布广、作用时间长等特点。以0.015μg/mL计算,给药后24h,达氟沙星脂质体静注和内服两种途径体内有效浓度维持时间分别为34.76h和35.11h,均大于溶液组,说明药物制成脂质体后具有缓释作用,从血中清除的速率较慢,血药浓度维持时间延长,可达到长效作用的目的。其中静注给药体内有效浓度维持时间小于内服给药,与溶液组基本一致。脂质体组静注和内服两种途径所测的AUC分别为5.0660、4.6106mg/L·h,分别高于溶液组的AUC,即3.7997、3.2844mg/L·h,也说明达氟沙星脂质体具有体内消除较慢的特点,能够发挥其长效作用。另据静注和口服给药的药时曲线下面积计算出雏鸡内服达氟沙星脂质体的生物利用度F2为91.01%,高于达氟沙星溶液(F1为86.44%),说明达氟沙星脂质体在体内生物利用度较高。
试验例4本发明甲磺酸达氟沙星脂质体内服给药在蛋雏鸡体内的组织药代动力学特征及肺靶向性研究
本发明比较甲磺酸达氟沙星溶液和脂质体混悬液经口服后在健康蛋雏鸡组织内的代谢特征。将140只28日龄试验鸡(体重215~230g)随机分成健康对照组20只,甲磺酸达氟沙星溶液组、甲磺酸达氟沙星脂质体组(本发明实施例1-3所制备),每组60只。以5mg/kg·b.w剂量采用内服给药途径给予健康蛋雏鸡甲磺酸达氟沙星溶液和脂质体混悬液,于给药后0.167、0.333、0.5、0.75、1、1.5、2、4、6、9、12、24h各剖杀5只鸡,取血液、肝脏、肾脏、肺脏和肌肉样品。采用反相HPLC色谱内标法测定各组织中达氟沙星浓度。应用MCPKP分析软件处理血浆药物浓度-时间数据,比较两种剂型的组织药动学参数。以药时曲线下面积(AUC)、血药浓度(C)为定量指标,通过相对摄取率(re)、靶向效率(te)和峰浓度比(Ce)三个参数来衡量脂质体的组织靶向性。
经药动学软件分析表明:按5mg/kg·b.w剂量胃管投药后,达氟沙星溶液在肝脏、肾脏、肺脏的经时过程符合一级吸收三项指数方程,在肌肉中的经时过程符合一级吸收二项指数方程。达氟沙星脂质体在肝脏、肾脏的经时过程符合一级吸收三项指数方程,在肺脏、肌肉中的经时过程符合一级吸收二项指数方程。药代动力学参数见表1,各种组织靶向性评价指标见表2。
表1雏鸡单剂量内服两种剂型达氟沙星的组织动力学参数比较(n=5)
表2两种剂型主要药物动力学参数比较
注:脂质体制剂与普通溶液组比较,**p<0.01,*p<0.05
由此可见,经相同剂量口服给药后,达氟沙星脂质体制剂与普通药物溶液相比,药物在肝脏、肺脏的药时曲线下面积(AUC)显著增加(P<0.01),相对摄取率re为1.63,表明脂质体制剂可明显提高药物在这些组织中的分布;而在肾脏的药时曲线下面积(AUC)显著降低(P<0.05),肌肉的药时曲线下面积则无明显变化,表明脂质体制剂在主要脏器组织中的分布有明显的选择性,其中肝脏、肺脏的靶向效率te值增加,峰浓度比Ce>1,表明脂质体制剂在肝脏、肺脏中的靶向性明显,同时也降低了肾脏中最高药物浓度,表明其改变药物分布的效果较为明显,同时表明达氟沙星脂质体在雏鸡肺部有一定的缓慢释放作用。
与溶液组相比,达氟沙星脂质体组在肝组织中的分布相对较高,药物浓度变化差异极其显著(P<0.01),这是因为肝组织中富含网状内皮细胞,脂质体混悬液中小粒径粒子一般被肝组织中的巨噬细胞摄取,使脂质体进入机体后在肝中的摄取量显著高于溶液组。肾和肌肉组织中的分布相对较低,其中肾组织中药物浓度变化差异显著(P<0.05),肌肉组织中药物浓度变化不显著,表明脂质体制剂在降低肾毒性方面发挥了一定的作用。
试验例5本发明甲磺酸达氟沙星脂质体对鸡毒支原体的体外抑制作用及对实验性鸡毒支原体感染的治疗效果
(1)本发明产品对鸡毒支原体的体外抑制作用
采用试管二倍稀释法研究甲磺酸达氟沙星脂质体(本发明实施例1-3所制备)抗鸡毒支原体活性。试验前将该口服液稀释成128mg/L浓度,过滤除菌后备用,取24h能在FM-4培养基中达到对数生长高峰的鸡毒支原体培养物经104倍稀释后作为本试验用的菌液。取14只试管,各管中最终药液浓度依次为:128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.06、0.03、0.015mg/L,在各管中依次加入稀释后的菌液0.5ml。每次试验重复3次,并设药液的空白对照、培养物对照和培养基对照。试管加胶塞37℃培养,待对照管菌液颜色从红变到黄(pH7.7变到6.8以下),对照培养基不发生颜色变化时,记下发生颜色变化的管数。结果显示,当培养液中达氟沙星脂质体制剂的药物浓度达到0.04mg/L时,便可有效抑制鸡毒支原体的生长,对照药物达氟沙星原粉的MIC值为0.06mg/L,可见达氟沙星脂质体较其原粉能更好地抑制鸡毒支原体的生长。
(2)本发明甲磺酸达氟沙星脂质体对实验性鸡毒支原体感染的治疗效果
通过滴鼻、点眼及气囊注射方式对180只22日龄健康雏鸡进行人工感染鸡毒支原体(MG),即将鸡毒支原体MG S6冻干菌经3次传代,生长浊度达107CCU/mL即成接种鸡毒支原体液。除健康对照组外,其余各组鸡每羽左右胸气囊(倒数第2肋间)各注射鸡毒支原体培养液0.5mL 配合滴鼻点眼0.5mL)。操作时用左手握住试验鸡背部及颈部,右手持注射器吸取MG S6培养液,缓慢地将其滴入鸡的鼻孔内,保持垂直体位几分钟,利用鸡自然吸气式的动作,将菌液吸入气道至肺部,同样方法进行点眼。试验分为脂质体(本发明实施例1-3所制备)高、中、低剂量组、原粉对照组、感染对照组(感染不给药)和健康对照组(不感染不给药),每组30只,雌雄兼备。采用MG分离培养和支原体初步鉴定方法(L-型细菌检验、菌体形态观察、菌落着色、胆固醇需要试验、四氮唑还原试验、分解葡萄糖和精氨酸试验、生长抑制试验、鸡红细胞吸附试验)确证鸡毒支原体阳性感染病例。采用混饮给药方式对发病鸡进行治疗试验。除正常对照组和模型组外,其余各组均进行饮水给药治疗。达氟沙星脂质体高、中、低剂量组饮水给药的浓度分别为100、50和25mg/L,对照药物达氟沙星原粉组饮水给药的浓度为50mg/L。各组鸡每天早、晚各换水一次,每次换水前禁水2h,连续给药5d,停药后观察15d。每次用药前观察临床症状并对死鸡进行剖检,观察气囊、气管及肺的变化,并作病原分离,以证明确系死于鸡毒支原体感染,在感染后的第8天(停药后的第3天)从各组中取1~2只活鸡剖杀,观察气囊病变;感染后的第20天将存活下来的所有鸡称重,计算平均重量,及增重情况;每组随机抽取5只采血分离血清作血清平板凝集反应,检测鸡体内的鸡毒支原体抗体;最后将所有鸡剖杀,观察气囊病变,以每侧1~4分四个等级给气囊评分,比较各组鸡气囊损伤程度。
结果表明:当饮水中药物浓度为100、50、25mg/L时,连用5d,达氟沙星脂质体对感染鸡有明显的疗效,能显著降低血清抗体反应阳性率。在感染后的第8天(停药后的第3天),气囊损伤减少率分别为100.0%、84.6%、62.4%,达氟沙星原粉对照组为84.6%;感染后20天脂质体高、中、低剂量组气囊损伤减少率分别达87.3%、83.1%、63.8%,达氟沙星原粉对照组为63.8%。达氟沙星脂质体高、中、低剂量组和原粉对照组对感染鸡的治愈率分别为85.7%、82.1%、67.8%、75.0%,有效率分别为92.9%、89.3%、78.6%、85.7%,增重率分别为107.1%、105.4%、61.8%、83.1%。可见本发明产品与甲磺酸达氟沙星普通剂型相比,对动物呼吸道疾病能够发挥更好的治疗效果,减少气囊的损伤率,降低毒副作用,可获得较高的经济效益和社会效益,具有广阔的市场应用前景。
试验例6本发明甲磺酸达氟沙星脂质体的临床疗效学试验
在哈尔滨、齐齐哈尔、佳木斯、双鸭山等地区10个养鸡场进行了临床扩群治疗试验和推广应用,结果表明,本发明甲磺酸达氟沙星脂质体对急慢性呼吸道病具有显著的治疗效果,获得了较高的经济效益和社会效益,受到了养殖户的好评和欢迎,具有广阔的市场应用前景。
Claims (3)
1.一种甲磺酸达氟沙星脂质体的制备方法,包括以下步骤:(1)采用硫酸铵梯度法制备空白脂质体,包括以下步骤制备得到:将蛋黄卵磷脂与胆固醇按照3∶2的重量比例进行混合,并加入重量为蛋黄卵磷脂和胆固醇总重量的2.6%的硬脂酰胺充分混合均匀,用无水乙醚溶解后经旋转减压蒸发,除去乙醚,得均匀半透明的磷脂膜;真空干燥后加入硫酸铵溶液洗脱,得到空白脂质体;把所得的空白脂质体通过3μm微孔滤膜整粒,并用150mmol/L NaCl溶液室温下透析3次,每次24h;(2)向空白脂质体中加入甲磺酸达氟沙星药液,甲磺酸达氟沙星药液和空白脂质体的重量比例为2∶5;水浴孵化,孵化温度为35℃,孵化时间为15min;过滤,滤液采用冻结融解法反复冻融,即得甲磺酸达氟沙星脂质体。
2.权利要求1制备方法所制备得到的甲磺酸达氟沙星脂质体。
3.按照权利要求2所述的甲磺酸达氟沙星脂质体在制备治疗畜禽呼吸系统感染性疾病药物中的用途。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2009102238526A CN101703469B (zh) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | 甲磺酸达氟沙星脂质体的制备方法及其产品 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2009102238526A CN101703469B (zh) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | 甲磺酸达氟沙星脂质体的制备方法及其产品 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN101703469A CN101703469A (zh) | 2010-05-12 |
CN101703469B true CN101703469B (zh) | 2011-10-19 |
Family
ID=42373766
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN2009102238526A Expired - Fee Related CN101703469B (zh) | 2009-11-24 | 2009-11-24 | 甲磺酸达氟沙星脂质体的制备方法及其产品 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN101703469B (zh) |
Families Citing this family (8)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101912363A (zh) * | 2010-07-29 | 2010-12-15 | 蔡海德 | 溶解超滤-喷雾干燥-分子分散包衣-水化制粒-冷冻干燥生产脂质体组合药物 |
CN102552160B (zh) * | 2010-12-24 | 2013-07-17 | 华中农业大学 | 兽用甲磺酸达氟沙星缓释微球制剂及其制备方法与应用 |
CN102302472B (zh) * | 2011-09-08 | 2012-08-01 | 河南迪冉生物科技有限公司 | 恩诺沙星微囊及其制备方法 |
CN102309450B (zh) * | 2011-09-14 | 2012-11-21 | 海南美大制药有限公司 | 一种盐酸多西环素脂质体注射剂 |
CN102600078B (zh) * | 2012-01-06 | 2015-02-04 | 郑州后羿制药有限公司 | 一种恩诺沙星脂质体的制备方法 |
CN102600075A (zh) * | 2012-04-19 | 2012-07-25 | 烟台海研制药有限公司 | 一种甲磺酸达氟沙星混悬液及制备方法 |
CN110060784B (zh) * | 2019-06-05 | 2022-11-08 | 华中农业大学 | 鸡毒支原体对达氟沙星的耐药判定标准试验方法 |
CN115368369A (zh) * | 2022-08-16 | 2022-11-22 | 浙江国邦药业有限公司 | 一种甲磺酸达氟沙星脱甲基杂质的合成方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005018323A1 (en) * | 2003-08-22 | 2005-03-03 | Innozen, Inc. | Edible films for administration of medicaments to animals |
CN101411689A (zh) * | 2008-11-28 | 2009-04-22 | 湖北省猪用兽药工程技术研究中心 | 畜禽用甲磺酸达氟沙星微球制剂及其制备方法 |
CN101444485A (zh) * | 2008-12-25 | 2009-06-03 | 中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所 | 吉西他滨脂质体及其制备方法 |
-
2009
- 2009-11-24 CN CN2009102238526A patent/CN101703469B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005018323A1 (en) * | 2003-08-22 | 2005-03-03 | Innozen, Inc. | Edible films for administration of medicaments to animals |
CN101411689A (zh) * | 2008-11-28 | 2009-04-22 | 湖北省猪用兽药工程技术研究中心 | 畜禽用甲磺酸达氟沙星微球制剂及其制备方法 |
CN101444485A (zh) * | 2008-12-25 | 2009-06-03 | 中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所 | 吉西他滨脂质体及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
柳颖等.甲磺酸单诺沙星脂质体包封率的测定.《东北农业大学学报》.2008,第39卷(第5期),98-100. * |
王绍宁等.硫酸铵梯度法制备盐酸环丙沙星脂质体的影响因素.《沈阳药科大学学报》.2003,第20卷(第2期),93-96. * |
郑佳昳等.脂质体主动载药及其研究进展.《国外医学药学分册》.2005,第32卷(第4期),271-274. * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN101703469A (zh) | 2010-05-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN101703469B (zh) | 甲磺酸达氟沙星脂质体的制备方法及其产品 | |
CN107812197B (zh) | 一种炎症靶向的中性粒细胞递药系统及其应用 | |
CN106137967B (zh) | 靶向脑胶质瘤的双重修饰脂质体给药系统的制备和应用 | |
JP3007627B2 (ja) | 天然化学物質六酸化四砒素の新規の抗腫瘍治療剤としての用途及びその薬学的組成物 | |
KR20090014300A (ko) | 20 (R)Ginsenoside Rg3 약용조합물 수성솔루션과 준비방법 | |
CN102580111B (zh) | 槲皮素羟丙基β-环糊精包和物脂质体及其制备方法和用途 | |
CN101396346A (zh) | 紫杉醇脂质复合物 | |
CN106267248A (zh) | 一种载叶酸修饰介孔二氧化硅纳米粒的脂质超声微泡及其制备方法 | |
CN103720658B (zh) | 肝素修饰的阿霉素脂质体制剂及其制备方法 | |
CN101983632A (zh) | 一种复方替米考星纳米乳抗菌药物及其制备方法 | |
CN102397237B (zh) | 一种替米考星胶束制剂及其制备方法 | |
CN110478331B (zh) | 一种载药细菌外膜囊泡及其制备方法和应用 | |
CN105456200B (zh) | 一种提高难溶性药物口服生物利用度的纳米粒微球的制备方法及应用 | |
CN108143719B (zh) | 一种携载多肽的纳米脂质体及其制备方法和应用 | |
CN103494780B (zh) | 一种注射用加米霉素组合物冻干粉及制备方法 | |
CN103191424A (zh) | 一种提高畜禽免疫功能的黄芪多糖纳米脂质体及其制备方法 | |
CN102525909B (zh) | 盐酸戊乙奎醚注射液的制备方法 | |
CN106943349B (zh) | 一种泰地罗新混悬注射液及其制备方法 | |
CN104274391B (zh) | 一种含利福昔明的药物制剂 | |
CN107669637A (zh) | 一种注射用蒿甲醚脂质体及其制备方法和应用 | |
CN104173288B (zh) | 一种克拉霉素离子对脂质体注射液及其制备方法 | |
CN101766569B (zh) | 一种长效抗菌药物油乳剂及其制备方法 | |
CN102973508A (zh) | 一种复方黄芪多糖脂质体长效注射液及其制备方法 | |
CN103690556B (zh) | 一种羟基喜树碱长循环脂质体 | |
CN108324688B (zh) | 苯甲酸利扎曲普坦原位凝胶鼻喷剂 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C14 | Grant of patent or utility model | ||
GR01 | Patent grant | ||
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20111019 Termination date: 20181124 |
|
CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |