CN102600075A - 一种甲磺酸达氟沙星混悬液及制备方法 - Google Patents

Abstract

一种甲磺酸达氟沙星混悬液及其制备方法，其组分包括甲磺酸达氟沙星粉、助悬剂单硬脂酸铝、分散剂卵磷脂、润湿乳化剂吐温-80、抗氧化剂2，6-二叔丁基对甲酚和叔丁基羟基茴香醚。本发明还提供了混悬液的制备方法，将单硬脂酸铝溶于油，过筛，加入卵磷脂、吐温-80、抗氧化剂2，6-二叔丁基对甲酚和叔丁基羟基茴香醚后，置于分散机分散，而后转移至胶体磨中循环，取出即得甲磺酸达氟沙星混悬液。其性状为淡黄色、稍粘稠混悬液。本发明甲磺酸达氟沙星混悬液能够缓慢释放药物有效成分，提高药物的生物利用度，增强药物疗效，一次用药能维持有效血药浓度时间可达60h以上，该制剂的生产不需要特殊溶媒，成本低，生产工艺简单，易于产业化。

Description

一种甲磺酸达氟沙星混悬液及制备方法

技术领域：

本发明属于兽用药物组合物制备技术领域，具体涉一种治疗畜禽呼吸道疾病的甲磺酸达氟沙星混悬液及制备方法。

背景技术：

达氟沙星又称单诺沙星，是抗菌作用较强的氟喹诺酮类药物之一，其水溶性好(172-205g/L)，可多种途径给药，吸收迅速，生物利用度高，在动物肺组织中药物浓度较高，对呼吸道主要致病菌的抗菌效果好，是治疗畜禽呼吸系统感染性疾病的理想药物。

达氟沙星的化学结构式如下所示

上述结构式显示的为甲磺酸达氟沙星(Danof loxacin Mesylate，DFM)，它是继恩诺沙星(Enrof loxacin)之后研制的第三代动物专用氟喹诺酮类药物，具有抗菌谱广和抗菌力强等特点。

目前市场上销售的达氟沙星剂型主要为甲磺酸达氟沙星可溶性粉，在治疗鸡由敏感细菌引起的感染疾病时，以5mg/kg体重剂量每隔24h内服一次，连续用3-5d(张秀英等，2001；Raymond J)。甲磺酸达氟沙星注射液(药物浓度通常为1.25％，2.5％)等普通剂型均为常规水剂，药物浓度低，治疗某些动物的疾病时，药效持续时间短，常需多次给药，在治疗猪或牛的呼吸系统疾病时，通常为肌注或皮注剂量为1.25mg/kg体重，连续给药3-5d(Raymond J)，故存在注射次数多的缺点，而且会给动物带来应激反应。随着集约化饲养程度的提高，临床用药逐渐变成了一项较为繁忙的工作，浪费大量的财力和体力。因此，研制高效长效药物成为目前临床预防和治疗疾病的迫切需要。

混悬液为长效剂型，可满足在疗效、物理和化学稳定性、持久性和外观方面的要求。注射用油混悬液为长效注射液的一种，结合了长效制剂和注射给药方式二者的优点，降低血药浓度的波动，使药效较长时间维持在一个稳定的浓度范围内。其给药方式为皮下、肌内注射，能达到长效缓慢释放的目的。作用于动物可减少给药次数，减少劳动力，节约成本。目前临床上应用的混悬液有头孢塞呋混悬液(WO9841207)，长效土霉素，阿莫西林和克拉维酸混悬液(WO0003695)，硫酸头孢喹肟注射液(中华人民共和国农业部公告第670(661)公告)等等，显示出了混悬液在临床上的巨大优势。

甲磺酸达氟沙星混悬液的制备工艺简单，采用分散法，将药物颗粒分散在溶媒中，目前制备混悬液所常用的乳化法，需加入大量的乳化剂及其他辅料以形成乳化体系，大量乳化剂的加入会或多或少影响主药成分作用的发挥。

迄今为止尚未见到有关治疗畜禽呼吸道疾病的甲磺酸达氟沙星混悬液及制备方法的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种治疗畜禽呼吸道疾病的甲磺酸达氟沙星混悬液及制备方法。所述的甲磺酸达氟沙星混悬液具有药效持续时间长、用药次数少、成本低和给药方便等突出优点，以解决目前甲磺酸达氟沙星混悬液由于加入大量的乳化剂和辅料而造成的药效难以发挥的问题。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种治疗畜禽呼吸道疾病的甲磺酸达氟沙星混悬液，以重量份计的组分吸配比为：甲磺酸达氟沙星1-10份、助悬剂0.5-3份、分散剂0.02-0.5份、润湿乳化剂0.02-0.4份，抗氧化剂2，6-二叔丁基对甲酚和叔丁基羟基茴香醚各0.004份，补充生物相容性油类至100ml。

其中：

所述的助悬剂为单硬脂酸铝；

所述的分散剂为大豆卵磷脂；

所述的润湿乳化剂为吐温-80；

所述的生物相容性油类为注射用大豆油或棉籽油。

作为优选方案之一是其中所述的甲磺酸达氟沙星为2-8份。

作为优选方案之二是其中所述的甲磺酸达氟沙星为3-5份。

作为优选方案之三是其中所述的甲磺酸达氟沙星为5份。

按照上述发明内容给出的配方，本发明提供了一种甲磺酸达氟沙星混悬剂的制备方法，它包括以下的步骤：

(1)将0.5-3份的助悬剂加入到100ml生物相容性油类中，加热搅拌直至所述的助悬剂全部溶解，静置冷却过4号药筛，得到滤液A；

(2)将1-10份的甲磺酸达氟沙星置于烧杯中，加入分散剂0.02-0.5份、润湿乳化剂0.02-0.5份，抗氧化剂2，6-二叔丁基对甲酚和叔丁基羟基茴香醚各0.004份，搅拌均匀得混合液B；

(3)向步骤(2)的混合液B中加入10-20ml滤液A，将其置于分散机中边分散边加入剩余的滤液A，使其总体积至100ml，其中，所述的分散速度为8000-13000r/min，分散时间为8-20min，得混合物C；

(4)将步骤(3)的混合液C转移到胶体磨中使其进一步分散，分散时间为2-10min，得到所述的甲磺酸达氟沙星混悬液。

本发明与现有技术相比的有益效果

本发明采用分散法，把单硬脂酸铝作为助悬剂剂加入到注射用的油中，增加油的粘稠性，在药物颗粒周围形成油层，延缓药物颗粒的释放也可以防止药物颗粒的沉降。而添加卵磷脂，使药物能更好更均匀的分散在油中，添加Span-80，减少药物和油之间的表面张力，增加药物颗粒与油的接触利用分散机及胶体磨的机械化作用，将药物颗粒更细更均匀的分散在溶媒中。该工艺制备的混悬液具有提高生物利用度，延缓药物在机体内的释放，增强药物的稳定性，增强药物的疗效，工艺简单等优点。

具体实施方式：

实施例1：制备100ml质量体积比为5％甲磺酸达氟沙星混悬液

该混悬液的实际添加量如下：

制备步骤：

(1)取2g单硬脂酸铝，加入到100ml注射用大豆油中，边加热边搅拌至单硬酸铝完全溶解，静置冷却过4号药筛，得到滤液A；

(2)把上述质量的甲磺酸达氟沙星原料粉置于烧杯中，加入50mg

卵磷脂、150mg吐温-80、4mg抗氧化剂2，6-二叔丁基对甲酚和4mg叔丁基羟基茴香醚及10ml步骤所得的滤液A，搅拌均匀得到混合物B；

(3)将步骤(2)得到的混合物B置于分散机中边分散边加入剩余的90ml滤液A；使其总体积至100ml，其中，所述的分散速度为8000r/min，分散时间为20min，得混合物C；

(4)分散完毕后，将步骤(3)中的混合物C转移至胶体磨循环2min；

(5)将从胶体磨中取出的液体，灌装，密封，即为甲磺酸达氟沙星混悬液。

(6)对上述混悬液进行质量检查，发现为乳黄色、稍粘稠的混悬性液体，长期静置后会有分层，上层为黄色液体，下层为乳白色混悬物，剧烈振摇后为均匀的乳黄色混悬液，药液pH值为4.0-5.0。甲磺酸达氟沙星的相对标示量为99.57％，高温及光照后外观性状无明显改变，含量变化在0.2％以内。沉降体积比为0.9以上，静置数天或数月，剧烈振摇后能重新分散。

实施例2：制备100ml 1％甲磺酸达氟沙星混悬液

该混悬液的实际添加量如下：

按实施例1的制备步骤制备混悬液。其中步骤(2)中加入的滤液A为20ml；步骤(3)中所述的分散速度为13000r/min，分散时间为8min；

对上述混悬液进行质量检查，发现为乳黄色、稍粘稠的混悬性液体，长期静置后会有分层，上层为黄色液体，下层为乳白色混悬物，剧烈振摇后为均匀的乳黄色混悬液，药液pH值为4.0-5.0。甲磺酸达氟沙星的相对标示量为99.46％，高温及光照后外观性状无明显改变，含量变化在0.2％以内。沉降体积比为0.9以上，静置数天或数月，剧烈振摇后能重新分散

实施例3：制备100ml 2.5％甲磺酸达氟沙星混悬液

按实施例1的制备步骤制备混悬液。对上述混悬液进行质量检查，发现为乳黄色、稍粘稠的混悬性液体，长期静置后会有分层，上层为黄色液体，下层为乳白色混悬物，剧烈振摇后为均匀的乳黄色混悬液，药液pH值为4.0-5.0。甲磺酸达氟沙星的相对标示量为99.39％，高温及光照试验过程中外观性状无明显改变，含量变化在0.2％以内。沉降体积比为0.9以上，静置数天或数月，剧烈振摇后能重新分散。

实施例4：制备100ml 10％甲磺酸达氟沙星混悬液

按实施例1的制备步骤制备混悬液。对上述混悬液进行质量检查，发现为乳黄色、稍粘稠的混悬性液体，长期静置后会有分层，上层为黄色液体，下层为乳白色混悬物，剧烈振摇后为均匀的乳黄色混悬液，药液pH值为4.0-5.0。甲磺酸达氟沙星的相对标示量为99.21％，高温试验过程中，颜色略有加深，含量变化在0.2％以内，光照试验过程中外观性状无明显改变，含量变化在0.1％以内。沉降体积比为0.9以上，静置数天或数月，剧烈振摇后能重新分散。

实施例5和6和实施例1和4相似，但以棉籽油代替大豆油。

实施例7：(应用实施例)5％甲磺酸达氟沙星混悬液生物利用度

将8头体重15±1kg的健康长白猪(购自武汉华中农业大学试验猪场)，按照2×2交叉试验设计随机分为A、B两组(如表1所示)，每组4头。按照常规方式饲养，饲料中未添加任何药物。猪颈部肌肉注射5％甲磺酸达氟沙星混悬液和2.5％甲磺酸达氟沙星注射液，剂量为2.5mg/kg体重。

表1生物利用度实验中交叉试验设计安排

分别于给药后不同时间点采取血样2ml，放入装有肝素钠的离心管中，3000r/min离心10min，制备血浆。血浆采用含0.2％冰乙酸的乙腈提取，高效液相色谱检测血液中药物浓度，Winnolin 5.2计算药动学参数，DFM注射液和DFM混悬液，肌注给药后在猪体内呈一级吸收二室模型，模型参数拟合公式为：C＝Ae^-αt+Be^-βt-Ce^-kat。血药浓度测定结果见表2，药动学参数见表3。

表28头猪肌肉注射甲磺酸达氟沙星注射液和混悬液后不同时间点的平均血药浓度

表3猪肌肉注射DFM混悬液和DFM注射液主要药动学参数

表由3可见，猪肌肉注射甲磺酸达氟沙星混悬液后，t_1/2Ka＝0.21h、T_max＝1.16h，与普通注射液相比(t_1/1Ka＝0.09h、T_max＝0.57h)差异不显著，说明该混悬液具有很好的速释作用，与普通注射液一样能很快达到峰浓度。猪肌肉注射甲磺酸达氟沙星混悬液的t_1/2β比肌肉注射甲磺酸达氟沙星普通注射液的t_1/2β延长了22个小时，具有差异极显著差异(P＜0.01)，说明甲磺酸达氟沙星混悬液在猪体内的消除速度明显减慢，有效血药浓度维持时间明显延长。甲磺酸达氟沙星混悬液的药时曲线下面积AUC和生物利用度分别为6.1mg·h·L-1和114.2％，而普通注射液的AUC为5.2mg·h·L-1，表明甲磺酸达氟沙星制成混悬液后吸收程度明显升高，生物利用度得到明显改善。拟合的猪肌肉注射甲磺酸达氟沙星混悬液的理论方程为：C＝0.29e^-0.23t+0.17e^-0.023t-0.46e^-3.6t。

本发明的甲磺酸达氟沙星混悬液在混悬液中被油包裹大部分以晶体形式存在，能够缓慢释放药物有效成分，延缓药物吸收，维持机体长时间的有效血药浓度，可显著延长疗效。以血液中甲磺酸达氟沙星对支原体肺炎球菌浓度0.05μg/mL为最小有效浓度。根据公式C＝0.29e^-0.23t+0.17e^-0.023t-0.46e^-3.6t，计算得出5％的甲磺酸达氟沙星混悬液能维持有效血药浓度60h以上。

根据多计量给药公式：

X₀＝V·C_∞min(1-e^-kτ)/e^-kτ

其中τ为给药间隔，C_∞min为稳态时最小血药浓度，V为表观分布容积，K为消除速度率常数，X₀为给药剂量。

用Winnolin 5.2药动学软件，模拟多次给药条件，计算得出给药间隔τ为100.8h，给药剂量为5mg/kg体重。

本发明的给药方法为：将该药物组合物肌肉注射到猪体内，按剂量为5mg/kg体重给药，每96h给药一次。

实施例8：5％甲磺酸达氟沙星混悬液在猪体内的残留消除研究

试验设计20头健康杜长大去势公猪(30±3kg)，常规饲养观察7天后于颈部肌肉注射自制甲磺酸达氟沙星混悬液5mg/kg，注射一次，并标记注射部位。并于最后一次给药后0d(12h)，3d，7d，21d，42d，每组随机屠宰4头，分离背最长肌、肝脏、肾驻、注射部位及皮脂，10000r/min匀浆3min后-20℃保存。

组织样品处理称取5g左右匀浆后的组织(肌肉、肝脏、肾脏、皮脂)，加入10mL pH为7.0的PBS液，旋涡，置8000rpm转速下离心10min，取上清至另一试管，重复提取一次。合并两次上清，加入20mL正己烷，旋涡，置10000rpm转速下离心10min，取上清，重复萃取一次，合并两次上清。将上清通过已活化好的HLB柱，待上清全部从柱子里流出，用3mL(甲醇和水1∶4)淋洗，然后用2mL甲醇洗脱，收集洗脱液。至50℃条件下水浴蒸干，用流动相水相定容至0.5mL。过0.22um水系膜，进HPLC检测，记录色谱图。组织浓度测定结果见表4。

表420头猪肌肉注射甲磺酸达氟沙星混悬液后组织残留浓度原始数据

ND为药物浓度低于检测方法定量限。

根据欧盟(EC)规定的最高残留限量：在猪组织中肝脏、肾脏、肌肉、皮脂分别为200、200、100、50μg/kg。给猪肌肉注射甲磺酸达氟沙星混悬液，停药后21d，可食性组织中药物浓度高于药物的最大残留限量(MRL)，停药42d后，除注射部位外，其他可食性组织中的药物浓度接近或是低于检测限，所有可食性组织中药物的浓度均低于该药物的安全浓度。

将不同时间点浓度取对数后求得甲磺酸达氟沙星混悬液在肝脏、肾驻、肌肉、皮脂中的消除半衰期分别为179.07h、109.57h、118.36h、70.70h。甲磺酸达氟沙星是按一级动力学过程从猪体内消除的，即在消除后期服从指数消除C_i＝C₀e^-Ket，各组织的消除方程见表5。

表5健康猪肌肉注射DFM混悬液后可食组织中药物消除动力学方程及半衰期

可以根据消除后期测定的组织药物浓度及规定的MRL，计算各组织药物浓度降至规定水平(MRL)所需要的时间(WDT)。根据欧盟(EC)规定的最高残留限量：在猪组织中肝脏、肾脏、肌肉、皮脂分别为200、200、100、50μg/kg。通过WDT公式计算(MRL＝C₀e^-k(WDT))，可知各组织的理论WDT为：肌肉17.85d，肾脏14.24d，肝脏27.43d，皮脂16.00d。通常将残留限量高、消除最慢的组织看成是残留分析的靶组织，所以肝脏为残留靶组织，则理论休药期为28d。

本发明仅列举了5％甲磺酸达氟沙星混悬液的生物利用度和给药后在体内残留的研究，其它浓度的甲磺酸达氟沙星混悬液的制作方法与药理作用与之相同，因此本领域技术人员可以不加创造的想象到其它浓度的甲磺酸达氟沙星混悬液也能具有类似的药效。

由于制剂中甲磺酸达氟沙星的含量高，所以还能降低用药成本，减少用药次数，并为临床给药带来许多方便。因此本发明的混悬液不仅注射量少，且具有良好的治疗效果，是治疗畜禽呼吸道疾病的一种理想新剂型。

Claims (5)

1.一种治疗畜禽呼吸道疾病的甲磺酸达氟沙星混悬液，其特征在于所述的混悬液以重量份计的组分及配比为：甲磺酸达氟沙星1-10份、助悬剂0.5-3份、分散剂0.02-0.5份、润湿乳化剂0.02-0.4份，抗氧化剂2，6-二叔丁基对甲酚和叔丁基羟基茴香醚各0.004份，补充生物相容性油类至100ml；

所述的助悬剂为单硬脂酸铝；

所述的分散剂为大豆卵磷脂；

所述的润湿乳化剂为吐温-80；

所述的生物相容性油类为注射用大豆油或棉籽油。

2.根据权利要求1所述的混悬液，其特征在于所述的甲磺酸达氟沙星为2-8份。

3.根据权利要求1所述的混悬液，其特征在于所述的甲磺酸达氟沙星为3-5份。

4.根据权利要求1所述的混悬液，其特征在于所述的甲磺酸达氟沙星为5份。

5.一种权利要求1所述的甲磺酸达氟沙星混悬剂的制备方法，其特征在于它包括以下的步骤：

(1)将0.5-3份的助悬剂加入到100ml生物相容性油类中，加热搅拌直至所述的助悬剂全部溶解，静置冷却过4号药筛，得到滤液A；

(2)将1-10份的甲磺酸达氟沙星置于烧杯中，加入分散剂0.02-0.5份、润湿乳化剂0.02-0.5份，抗氧化剂2，6-二叔丁基对甲酚和叔丁基羟基茴香醚各0.004份，搅拌均匀得混合液B；

(3)向步骤(2)的混合液B中加入10-20ml滤液A，将其置于分散机中边分散加加入剩余的滤液A，使其总体积至100ml，其中，所述的分散速度为8000-13000r/min，分散时间为8-20min，得混合物C；

(4)将步骤(3)的混合液C转移到胶体磨中使其进一步分散，分散时间为2-10min，得到所述的甲磺酸达氟沙星混悬液。