CN104771360B - 一种蒿甲醚纳米乳药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蒿甲醚纳米乳药物组合物，所述的药物组合物是由以下重量百分比的原料组成：油酸乙酯1.8‑8.5％、OP乳化剂11.5‑29％、1,2‑丙二醇8‑16％、超纯水49‑75％、蒿甲醚2.5‑15.5％。本发明的药物组合物的纳米乳体系具有较高的载药量，粘度低，放置稳定。该药物组合物有效地克服了传统片剂的肝脏首过效应，给药方便，注射无刺激，无过敏现象。临床药效试验表明，与市售蒿甲醚注射剂相比用药量降低，有效作用期延长，提高了原蒿甲醚的杀虫作用，对公共卫生和食品安全有积极意义。小鼠的急性毒性实验表明，该纳米乳无明显毒副作用，是一种安全、可靠、高效的纳米级抗血液原虫药物。

Description

一种蒿甲醚纳米乳药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及兽药技术领域，尤其涉及一种蒿甲醚纳米乳药物组合物及其制备方法。

背景技术

蒿甲醚为青蒿素的衍生物，为白色结晶或结晶性粉末；无臭；味微苦。在丙酮或三氯甲烷中极易溶解，在乙醇或乙酸乙酯中易溶，在水中几乎不溶。对疟原虫红内期有强大且快速的杀灭作用，能迅速控制临床发作及症状。由于蒿甲醚的抗疟活性较青蒿素大10-20倍，近年来在兽医临床应用广泛，同时，兽医临床用于治疗牛、羊焦虫病疗效显著，但国内无兽用专用的蒿甲醚制剂。

由于蒿甲醚在水中溶解性很差，难以有效地被输送至病变部位及细胞内。蒿甲醚传统片剂不能克服肝脏的首过效应；而蒿甲醚注射液给药量较大，报道有使用后发生过敏的现象，且遇冷会有凝固现象，保存稳定性差，使用时需微温溶解，使用不方便，为人用处方药，无兽药标准。

发明内容

本发明提供了一种蒿甲醚纳米乳药物组合物及其制备方法。旨在通过该发明将蒿甲醚制成纳米乳，提高原蒿甲醚的治疗效果，同时也解决蒿甲醚水溶性差，保存稳定性差等缺点，为兽医临床提供新型的抗寄生虫药物制剂，起到对动物血液原虫病的治疗作用。

本发明采用如下技术方案：

本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物是由以下重量百分比的原料组成：油酸乙酯1.8-8.5％、OP乳化剂11.5-29％、PEG-4005-16％、超纯水49-75％、蒿甲醚2.5-15.5％。

优选是由以下重量百分比的原料组成：油酸乙酯4.5％、OP乳化剂21.5％、PEG-4006.5％、超纯水56.5％、蒿甲醚11％。

本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物的制备方法的具体步骤如下：

(1)按配比称取油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、蒿甲醚和超纯水；

(2)在30℃～40℃条件下，将称取的油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、蒿甲醚置于恒温磁力搅拌器上，以300～400rpm搅拌混匀，至药物完全溶于体系中，体系澄清；

(3)向混合物中滴加超纯水，同时搅拌；体系粘稠度逐渐变稀薄，流动相强，形成的纳米乳液澄清、透明，即得到本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物。

本发明的积极效果如下：

本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物的纳米乳体系具有较高的载药量(可高达11％以上，可根据临床实际需求用注射用水按任意比率稀释)，放置稳定。本发明属于纳米级药物，粘度低，流动性好，外观澄清透明，乳液滴粒径平均为21.56nm，分散度良好，热力学稳定性好，贮存稳定性好，在强光、高温、高湿和加速试验中不分层不浑浊，久置也不分层、不浑浊，且不霉变不变色，保质期时间长。本发明通过HPLC进行含量检测，重现性好，含量稳定，满足临床用药要求，检测方法简单、可靠、易行。市售蒿甲醚注射液遇冷会有凝固现象，使用时需微温溶解。本发明蒿甲醚纳米乳遇冷无凝固现象，有较高的稳定性，使用方便。

该蒿甲醚纳米乳药物组合物有效地克服了传统片剂的肝脏首过效应，给药方便，注射无刺激，无过敏现象。临床药效试验表明，与市售蒿甲醚注射剂相比用药量降低，有效作用期延长，提高了原蒿甲醚的杀虫作用，对公共卫生和食品安全有积极意义。小鼠的急性毒性实验表明，该纳米乳无明显毒副作用，是一种安全、可靠、高效的纳米级抗血液原虫药物。

附图说明

图1是本发明制备的蒿甲醚纳米乳药物组合物的扫描电镜图。

图2是本发明制备的蒿甲醚纳米乳药物组合物的粒径分布图(25℃)。

具体实施方式

下面的实施例是对本发明的进一步详细描述。

实施例1

本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物是由以下重量百分比的原料组成：油酸乙酯3.8％、OP乳化剂26％、PEG-4007.5％、超纯水49.2％、蒿甲醚13.5％。

本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物的制备方法的具体步骤如下：

(1)按配比称取油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、蒿甲醚和超纯水；

(2)在30℃～40℃条件下，将油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、蒿甲醚置于恒温磁力搅拌器上，以300～400rpm搅拌混匀，至药物完全溶于体系中，体系澄清；

(3)向混合物中滴加超纯水，同时搅拌；体系粘稠度逐渐变稀薄，流动相强，形成的纳米乳液澄清、透明，即得到本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物。

实施例2

本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物是由以下重量百分比的原料组成：油酸乙酯1.8％、OP乳化剂17.2％、PEG-4005.5％、超纯水73％、蒿甲醚2.5％。

本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物的制备方法的具体步骤如下：

(1)按配比称取油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、蒿甲醚和超纯水；

(2)在30℃～40℃条件下，将油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、蒿甲醚置于恒温磁力搅拌器上，以300～400rpm搅拌混匀，至药物完全溶于体系中，体系澄清；

(3)向混合物中滴加超纯水，同时搅拌；体系粘稠度逐渐变稀薄，流动相强，形成的纳米乳液澄清、透明，即得到本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物。

实施例3

本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物是由以下重量百分比的原料组成：油酸乙酯4.5％、OP乳化剂21.5％、PEG-4006.5％、超纯水56.5％、蒿甲醚11％。

本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物的制备方法的具体步骤如下：

(1)按配比称取油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、蒿甲醚和超纯水；

(2)在30℃～40℃条件下，将油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、蒿甲醚置于恒温磁力搅拌器上，以300～400rpm搅拌混匀，至药物完全溶于体系中，体系澄清；

(3)向混合物中滴加超纯水，同时搅拌；体系粘稠度逐渐变稀薄，流动相强，形成的纳米乳液澄清、透明，即得到本发明的蒿甲醚纳米乳药物组合物。

将本发明制备的蒿甲醚纳米乳药物组合物进行如下测定：

一、物理表征：

本发明通过激光扫描电镜及激光粒度分析仪检测，8％蒿甲醚纳米乳外观呈淡黄色澄清透明液体，乳滴分布均匀，无破乳或团聚等现象；纳米乳粒径分布较窄，基本呈正态分布，平均粒径为21.56nm。见图1和图2。

二、含量测定：

将制备好的蒿甲醚纳米乳用HPLC法进行含量测定，采用Waters2695/2489高效液相色谱-紫外检测器；ODS色谱柱(4.6×100mm，5um)；流动相为乙腈∶水(65∶35)；柱温为25℃；检测波长216nm；进样量10ul。

对照品溶液制备：精密称取蒿甲醚对照品5mg，置50mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，配成100μg/mL的蒿甲醚对照品储备液，精密吸取蒿甲醚对照品储备液10mL，8mL，6mL，4mL，2mL，1mL，100μL分别置于10mL容量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，配置成浓度分别为100μg/mL，80μg/mL，60μg/mL，40μg/mL，20μg/mL，10μg/mL系列的蒿甲醚对照品溶液。

供试品溶液制备：精密称取样品适量，置于50mL容量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.22μm)滤过，即得。

标准曲线与线性范围：分别取上述对照品溶液10μl进样测定。以峰面积Y对浓度C进行线性回归，得回归方程：Y＝2461C-101.21，R²＝0.9999。结果表明，蒿甲醚在0.1～100μg/mL浓度范围内有良好的线性关系。

含量测定：精密量取已知含量的蒿甲醚纳米乳0.1mL，置100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，超声混合均匀，静置10min，过滤，取续滤液用0.22μm微孔滤膜滤过，进样10μl，记录色谱图。结果，其含量为标示量的99.2～99.6％，RSD小于1.2％。

三、稳定性实验：

1影响因素试验

按照规定要求，影响因素试验取一批样品进行试验。本试验样品批号为20130501。

1.1强光试验

将样品20130501模拟上市包装，放置在光橱中，于照度4500±LX条件下放置10天分别于第5、第10天取样，观察其在光照条件下的颜色、澄清度、含量等的变化。并与第0天的结果作比较，结果见表1。

表1 蒿甲醚纳米乳强光照稳定性试验结果

从表中数据可以看出，蒿甲醚纳米乳在强光照条件下外观色泽无变化，含量稳定。

1.2高温试验

将样品20130501模拟上市包装，分别贮存于40℃、60℃，10天内定期取样，检测样品的含量并考察其他检查项。

表2 40℃高温稳定性试验结果

表3 60℃高温稳定性试验结果

从表中数据可以看出，蒿甲醚纳米乳经过40℃和60℃高热试验，10天所有的样品含量均在99％以上，样品的澄明度及外观色泽均无明显变化，说明蒿甲醚纳米乳受温度的影响小，体系稳定。

1.3高湿度试验

将样品20130501模拟上市包装，置于在25±1℃和75±5％(RH)条件下保存3个月，试验开始及1、2、3月取样，检测样品的含量并考察其他检查项。

表4 高湿度试验结果

3个月的高湿度试验表明，蒿甲醚纳米乳的外观色泽、澄明度及含量均未发生明显变化，说明该样品在高湿度条件下稳定性良好。

2长期试验

批号为20130501，20130502，20130503的三批样品模拟上市包装，加盖密封，于30±2℃、RH35±5％的条件下放置，分别于0、3、6、9、12、18个月取样分析，并与0天的结果进行比较，结果见表。

考察结果表明，样品外观色泽、澄明度及含量均无明显变化。由稳定性考察的结果可知，蒿甲醚纳米乳稳定性较好。

表5 试验结果

四、急性毒性试验：

小鼠急性毒性试验：

昆明种小鼠50只，雌雄各半，标准体重18-22g。购于兰州大学。将小鼠按体重随机分为5组，每组各10只，雌雄各半。给药方式：灌胃给药。对照组小鼠灌服生理盐水5g/kg体重；试验组分为4组，分别灌服蒿甲醚纳米乳0.5g/kg.BW、1g/kg.BW、3g/kg.BW、5g/kg.BW。给药1次，连续观察7天。观察小鼠精神、行为、饮食情况，并进行记录。

表6 蒿甲醚纳米乳对小鼠口服急性毒性试验

试验结果：4个试验组连续观察7天，结果各组试验小鼠无任何死亡。期间，小鼠精神、饮水、采食均正常。试验结果表明，蒿甲醚纳米乳对小鼠的口服最大耐受量即LD₀值＞5g/kg.BW，则其半数致死量LD₅₀值一定大于5g/kg.BW，根据毒理学药物分级标准，属于实际无毒。由此可见，蒿甲醚纳米乳安全范围大，临床使用安全可靠。

大鼠急性毒性试验：

Wister系大白鼠50只，雌雄各半，标准体重200-250g。购于兰州大学。将大鼠按体重随机分为5组，每组各10只，雌雄各半。给药方式：灌胃给药。对照组大鼠灌服生理盐水5g/kg.BW；试验组分为4组，分别灌服蒿甲醚纳米乳0.5g/kg.BW、1g/kg.BW、3g/kg.BW、5g/kg.BW。给药1次，连续观察7天。观察大鼠精神、行为、饮水、采食情况，并进行记录。

表7 蒿甲醚纳米乳对大鼠口服急性毒性试验数据统计

试验结果：4个试验组连续观察7天，结果各组大鼠试验结束时，无任何死亡。期间，大鼠精神、饮水、采食均正常。试验结果表明，蒿甲醚纳米乳对大鼠的口服最大耐受量即LD₀值＞5g/kg.BW，则其半数致死量LD₅₀值一定大于5g/kg.BW，根据毒理学药物分级标准，蒿甲醚纳米乳为实际无毒。由此可见，蒿甲醚纳米乳安全范围大，临床使用安全可靠。另外，安全性实验表明蒿甲醚纳米乳注射无刺激性，且无过敏现象。

五、临床疗效观察试验：

进行牛焦虫病防治试验

试验材料：

选本发明药物蒿甲醚纳米乳(中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所农业部新兽药工程重点开放实验室制备，含量10％)，蒿甲醚注射液(8％/支，购自昆明制药集团股份有限公司)

试验方法：

选择已感染患病且年龄、体重接近的牛120头作为试验病例。将患病牛按试验点分组，每个试验点选40只牛，随机分为4组(三个试验组和一个对照组)。试验组给予低、中、高三个剂量蒿甲醚纳米乳，0.5mg/kg.BW、1mg/kg.BW和2mg/kg.BW，肌肉注射，隔天1次，连用2次。蒿甲醚注射液对照组以2mg/kg.BW，肌肉注射，每天1次，连用3天。治疗后以用药次数、治愈时间、治愈率等指标进行疗效综合评估，详见表6。

表8 蒿甲醚纳米乳和蒿甲醚注射液治疗牛焦虫病试验结果

经过对使用蒿甲醚纳米乳和蒿甲醚注射液治疗牛焦虫病结果比较分析(见表8)，按相同剂量2mg/kg.BW给药，蒿甲醚纳米乳较蒿甲醚注射液治愈率提高10％，差异非常显著(P＜0.01)，药物的生物利用度大大提高，给药后无过敏现象，治愈时间短，维持有效血药浓度时间延长，低剂量纳米乳治愈率高于市售注射液高剂量，且用药次数减少，降低了给药后动物发生过敏及不良反应的风险。

Claims (3)

1.一种蒿甲醚纳米乳注射液，其特征在于：所述的注射液是由以下重量百分比的原料组成：油酸乙酯1.8-8.5％、OP乳化剂 11.5-29％、PEG-400 5-16％、超纯水49-75％、蒿甲醚2.5-15.5％。

2.如权利要求1所述的蒿甲醚纳米乳注射液，其特征在于：所述的注射液各原料的质量百分比为：油酸乙酯4.5%、OP乳化剂 21.5%、PEG-400 6.5%、超纯水56.5%、蒿甲醚11％。

3.一种制备如权利要求1或2所述的蒿甲醚纳米乳注射液的方法，其特征在于：所述方法的具体步骤如下：

(1)按配比称取油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、超纯水和蒿甲醚；

(2)在30℃～40℃条件下，将油酸乙酯、OP乳化剂、PEG-400、蒿甲醚置于恒温磁力搅拌器上，以300～400rpm搅拌混匀，搅拌至药 物完全溶于体系中，体系澄清；

(3)向混合物中滴加超纯水，同时搅拌；体系粘稠度逐渐变稀薄，流动性强，形成的纳米乳液澄清、透明，即得到蒿甲醚纳米乳注射液。