CN101700229B - 静脉注射用前列地尔长循环脂微球制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及静脉注射用前列地尔长循环脂微球的配方和制备。本发明的制剂包括：(1)前列地尔药物，(2)植物油(药物稀释溶解油)，(3)作为乳剂表面活性剂，(4)作为乳剂制剂稳定剂、乳化剂、粒径控制剂、和增加脂微球在血液中半衰期的聚乙二醇磷脂衍生物，(5)作为乳剂制剂稳定剂、乳化剂的油酸或油酸盐，(6)抗氧化剂(7)作为控制阳离子浓度的络合物，(甘油)。

Description

静脉注射用前列地尔长循环脂微球制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于药物制剂领域，涉及一种供静脉注射用前列地尔的脂微球制剂及其制备方法。

技术背景

前列地尔(前列腺素E1，PGE1)是前列腺素的一种，具有扩张血管、抑制血小板聚集、抑制胃酸分泌及刺激肠道和子宫平滑肌、肝肾功能保护作用，抑制胰腺外分泌，抗脂质氧化作用，刺激胰岛素分泌等作用。临床主要应用于：1)治疗慢性动脉闭塞症(血栓闭塞性脉管炎、闭塞性动脉硬化症等)引起的四肢溃疡及微小血管循环障碍引起的四肢静息疼痛，改善心脑脏器微循环障碍。2)治疗进行性全身硬化症、卡普兰综合症、糖尿病引起的皮肤溃疡。3)恢复振颤病引起的末梢血流障碍伴随的自觉症状，及末梢循环、神经、运动功能障碍的恢复。4)动脉导管依赖性先天性心脏病，用以缓解低氧血症，保持导管血流以待时机手术治疗。5)改善经上肠系膜动脉性门静脉造影功能。

过去临床上应用前列地尔通常采用大剂量长时间给药，这样使PGE1的药理作用遍及全身，产生红肿、全身发热等副作用。PGE1可激活5-HT，使常规制剂使用时注射部位伴有难以忍受的疼痛。因此，开发前列地尔的新型制剂，以延长作用时间，提高生物利用度，降低毒副作用，提高病患的适应性，势在必行。目前，国内外现有的前列地尔的制剂主要有前列地尔注射液、乳膏、冻干粉针、脂肪乳微球等。其中前列地尔的注射用制剂主要以冻干粉针和普通脂微球为主，冻干粉针包括普通的冻干粉针和环糊精包合的冻干粉针剂。

脂微球(LIPID MICROSPHERE)和其它先进的递药技术是近年来发展较快的药物新剂型，具有很高的临床和经济价值。脂微球是以植物油(主要成分为脂肪酸甘油三酯)、磷脂乳化剂、等渗剂和注射用水制成的稳定的水包油型(O/W)乳剂，可供静脉注射，能完全被机体代谢和利用。脂微球的安全性能好，对静脉无刺激，是临床治疗中广泛使用的肠外营养剂。它不但可以为患者快速提供高能量，还与氨基酸、维生素、电解质等治疗性输液有很好的兼容性，可以同时配合使用。脂微球的粒径小且分布均匀，稳定性好，具有一定的靶向性，作为药物载体能解决油状药物和脂溶性药物的制剂难题，明显降低药物的毒副作用，减少药物的刺激性，提高药物的生物利用度，已经成为提高药物疗效的重要制剂研究方向。

聚乙二醇是水溶性、无生物活性、无毒、柔软的线性高分子。通过聚乙二醇修饰脂微球可以非常好的解决脂微球药物制剂易从体循环中被肝、脾巨噬细胞迅速清除的缺点，可以使脂微球药物制剂在血液中保留较长时间，增加了药物的被动靶向功能。虽然有关聚乙二醇延长脂微球在血液中存留时间的作用机理仍然不是完全清楚，但是基本上可以认为主要是三种作用：其一，聚乙二醇在脂微球表面形成有效的高分子隔离带，其空间位阻阻断或延缓了血中的脂蛋白或血蛋白与脂微球的相互作用，这种相互作用被认为会引起磷脂交换、脂微球泄露、脂微球磷脂膜的破坏和溶解；其二，高分子隔离带隔断了脂微球与细胞的直接相互作用；其三，聚乙二醇隔离带阻断或延缓了血浆蛋白在脂微球表面的吸附，有效阻止了其表面的调理作用，降低MPS对脂微球的亲和力，从而达到延长脂微球在血液中的存留时间的效果。由于聚乙二醇价廉易得、可以大规模生产、分子量易于控制、良好的物理化学性质，同时可以事先将其制备成聚乙二醇-的衍生物，制剂的工艺相对简单等优点，使得用他修饰的脂微球具有实用性。

通过临床实验，现有技术制备的前列地尔药物的治疗效果不是很令患者满意，所以我们经过长时间的研究，发明了一种治疗效果好，且解决了现有技术存在问题的前列地尔制剂。

本发明研制的新型脂微球前列地尔制剂，是以脂微球为药物载体、以聚乙二醇衍生物为长效支持剂的新型静脉注射用长循环前列地尔制剂。在兼顾前列地尔脂微球注射液的已有的临床优势的基础上，同时因聚乙二醇衍生物的构象屏障使前列地尔发挥持久有效作用的优势。

发明内容

本发明的目的在于提供一种前列地尔长循环脂微球制剂。

本发明的制剂包括：(1)前列地尔，(2)植物油(药物稀释溶解油)，(3)作为乳剂表面活性剂的磷脂，(4)作为乳剂制剂稳定剂、乳化剂、粒径控制剂、和增加脂微球在血液中半衰期的聚乙二醇磷脂或其衍生物，(5)作为乳剂制剂稳定剂、乳化剂的油酸或油酸盐，(6)抗氧化剂(7)作为控制阳离子浓度的络合剂，(8)甘油，(9)水。

本发明制剂各组分的重量百分比如下：

前列地尔                                0.0001％-0.1％

植物油                                  5％-30％

磷脂                                    0.3％-4％

聚乙二醇磷脂或其衍生物                  0.01％-5％

油酸或油酸盐                            0-0.6％

抗氧化剂                                0-1％

作为控制阳离子浓度的络合剂              0-1％

甘油                                    1-3％

余量为注射用水。

其中，具体成分如下：

(1)前列地尔选自：前列地尔或者其衍生物；

(2)植物油可以是但不限于，大豆油、棕榈油、当归油、沙棘油、莪术油、川芎油、薏米仁油、红花油、花椒油、大蒜油；

(3)磷脂选自：蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、氢化蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、人工合成磷脂；

(4)聚乙二醇磷脂或其衍生物，选自：聚乙二醇-脑磷脂或其衍生物、聚乙二醇-胆固醇或其衍生物、聚乙二醇-二-脂肪酸甘油酯或其衍生物、聚乙二醇-脂肪酸酯或其衍生物、聚乙二醇-脂肪胺或其衍生物、聚乙二醇-脂肪醇或其衍生物、以及含有脂溶性高分子片段的聚乙二醇磷脂衍生物；

(5)油酸或油酸盐，选自：油酸、油酸钾盐、油酸钠盐；

(6)抗氧化剂：维生素E；

(7)控制阳离子浓度的络合剂，选自：EDTA或其它离子络合剂：

优选的本发明的制剂的重量百分比如下：

前列地尔                              0.0001％-0.1％

植物油                                5％-30％

磷脂                                  0.3％-4％

聚乙二醇磷脂或其衍生物                0.01％-5％

油酸或油酸盐                          0-0.6％

抗氧化剂                              0-1％

作为控制阳离子浓度的络合剂            0-1％

甘油                                  1-3％

余量为注射用水。

进一步优选的本发明的制剂的重量百分比如下：

前列地尔                               0.0001％-0.1％

植物油                                 5％-30％

磷脂                                   0.3％-4％

油酸或油酸盐                           0-0.6％

聚乙二醇-磷脂或其衍生物                0.01％-5％

维生素E                                0-1％

EDTA-2Na                            0-1％

甘油                                2.2％

余量为注射用水。

其他最优的本发明的制剂在实施例中。

本发明的药物制剂为注射剂。

本发明的另一个目的在于提供本发明的前列地尔长循环脂微球制剂的制备方法。

制备过程具体如下：

取前列地尔，植物油，磷脂，聚乙二醇磷脂或其衍生物，在氮气保护的条件下，加热，搅拌溶解；另取注射用水，加入甘油，油酸钠；在氮气保护的条件下，含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml；高压均质机均质，过滤，分装，通入氮气，密封。

优选的制备过程如下：

取前列地尔，大豆油，加入卵磷脂、维生素E、聚乙二醇-磷脂，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油与油酸钠。在氮气保护的条件下，含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在80nm-150nm，调节pH5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

其他最优选的制备方法在实施例中。

本发明最优选的配方是筛选得到的，筛选过程如下：

以脂微球粒径及包封率为指标进行工艺条件优化，对前列地尔长循环脂微球制剂配方中各种辅料的用量范围进行了验证。在通过临床实验比较静脉注射的刺激性，并对前列地尔药理药效进行分析后，最终确定最佳药物浓度为5mg/L。最优选的各辅料用量使脂微球的包封率达到最佳，形成了稳定的药物制剂。

本发明的静脉注射用前列地尔长循环脂微球，其脂微球制剂的平均粒径小于180nm，最好处于50-150nm。其制剂工艺的终端灭菌温度必须保证Fo＞12。

本发明还提供了本发明制剂的检测方法。

本发明的检测方法，包括对本发明制剂进行前列地尔含量、制剂pH值、脂微球粒度分布，游离脂肪酸、过氧化值、细菌内毒素、无菌等指标的检验。特别是对前列地尔的含量进行测定。

前列地尔含量测定方法如下：

色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.0067mol/L磷酸盐缓冲液(pH为6.3)(取磷酸二氢钾9.07g，加水使溶解，制成1000ml，另取无水磷酸氢二钠9.46g，加水使溶解，制成1000ml，将后者加到前者中，直至pH为6.3，取此液100ml加水至1000ml，摇匀，即得)-乙腈(3∶1)为流动相；流速为每分钟1ml；柱后反应液为1mol/L氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管(φ0.5mm×10m)；柱温60℃；检测波长278nm。前列地尔与内标物的分离度应符合要求。

内标溶液的制备 取β-萘酚约25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，量取5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为溶液(1)。取溶液(1)5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为内标溶液。

对照品溶液的制备 取前列地尔对照品(在五氧化二磷减压干燥器中，室温干燥4小时)约5mg，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇10ml溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml与溶液(1)5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。(配制后2小时内使用)

供试品溶液的制备 精密量取本发明实施例1的样品适量(相当于前列地尔2.5μg)，置20ml棕色具塞试管中，加四氢呋喃2.5ml，混匀，加磷酸溶液(1→1000)15ml，混匀，通过预处理柱[填充物为十八烷基硅烷键合硅胶，粒径为70μm，φ10mm×9mm聚丙烯管(SEP-PAK C18柱，Waters)。使用前用甲醇10ml、水10ml冲洗]，试管用10ml水冲洗并通过预处理柱。再用甲醇7ml洗脱，洗脱液全部移入10ml棕色蒸馏瓶中，于50℃减压蒸馏10分钟，蒸干溶剂，残渣用内标溶液1.0ml溶解，摇匀，即得。(配制后2小时内使用)

测定法 精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算。

通过以下实验进一步说明本发明制剂的有益效果：

前列地尔长循环脂微球对大鼠心肌损伤的保护作用

1材料和方法

1.1药品和试剂

前列地尔注射液，规格2ml:10μg，北京泰德制药有限公司出品，前列地尔长循环脂微球注射液，西安力邦制药有限公司，本发明实施例1制备的注射液。盐酸异丙肾上腺素，上海禾丰制药有限公司出品，丙二醛(MDA)、谷胱甘肽、过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒均购自南京建成生物工程有限公司。

1.2动物

SD大鼠，体重(250±25)g，由第四军医大学实验动物中心提供。

1.4实验分组及给药方案

我们将实验动物进行分组：正常对照组、急性心肌梗塞模型组、前列地尔脂肪乳治疗组、前列地尔聚乙二醇脂微球治疗组。急性心肌梗塞模型通过尾静脉注射盐酸异丙肾上腺素80mg·kg^-1制备。不同前列地尔制剂的给药剂量分别为50μg·kg^-1，前列地尔脂肪乳组和前列地尔聚乙二醇脂微球组在预处理给药后20min静脉注射盐酸异丙肾上腺素80mg·kg^-1制造急性心肌梗塞模型，正常对照组尾静脉注射等容积的生理盐水。

1.5心脏组织生化指标测定

预处理12h后，处死大鼠，取出心脏，冰生理盐水清洗后滤纸吸干水分，称重，加入2倍重量的冰生理盐水，匀浆，制备成10％心肌组织匀浆标本待用。再将部分10％心肌组织匀浆加冰生理盐水制备1％匀浆。用生化试剂盒分别测定心肌匀浆MDA含量、GSH-Px活性、总-SOD(T-SOD)和锰-SOD(Mn-SOD)活性，各项指标测定均按照试剂盒说明书进行操作。

1.6统计学分析

采用SPSS11.10系统软件自动处理，结果均以x±s表示，组间差异，采用单因素方差分析。

2结果

2.1前列地尔聚乙二醇脂微球预处理对急性心肌梗塞模型大鼠MDA、GSH-Px的影响

检测结果见表1，模型组与正常对照组相比大鼠心肌MDA含量显著升高(P＜0.01)。采用前列地尔脂肪乳和前列地尔聚乙二醇脂微球分别对实验大鼠进行预处理后，MDA含量均低于模型组(P＜0.05)，且前列地尔聚乙二醇脂微球组的MDA值比普通市售脂肪乳注射液组显著降低。GSH-Px水平的测定结果显示，模型组与正常对照组相比GSH-Px水平显著降低，经前列地尔预处理后，不同前列地尔制剂组的GSH-Px水平与模型组相比显著升高，与普通制剂组相比前列地尔聚乙二醇脂微球组升高的趋势更为显著。(P＜0.05)

表1前列地尔聚乙二醇脂微球预处理对急性心肌梗塞模型大鼠心肌MDA、GSH-Px的影响(x±s)

^aP＜0.01 vs模型对照；^bP＜0.05 vs前列地尔脂肪乳组.

2.2前列地尔聚乙二醇脂微球预处理对急性心肌梗塞模型大鼠T-SOD和Mn-SOD的影响

模型组与正常对照组相比大鼠心肌T-SOD和Mn-SOD含量显著升高(P＜0.01)。经前列地尔预处理后，各保护组的T-SOD和Mn-SOD含量均低于模型组(P＜0.01)。经前列地尔聚乙二醇脂微球预处理后的T-SOD和Mn-SOD含量较普通前列地尔制剂的含量显著降低(P＜0.05)。结果见表2。

表2前列地尔聚乙二醇脂微球预处理对急性心肌梗塞模型大鼠心肌T-SOD和Mn-SOD的影响(x±s)

^aP＜0.05 vs模型对照；^bP＜0.05 vs前列地尔脂肪乳组.

通过采用前列地尔聚乙二醇脂微球对动物模型进行预处理后，发现其可显著减少大鼠心肌梗塞后MDA的生成，同时使GSH-Px活性维持在较高水平，产生对抗过氧化反应导致的GSH-Px活性降低的作用，减轻心肌过氧化损伤程度，保护心肌的正常功能。

在与普通前列地尔制剂的对比研究中，发现其药效作用显著提升。表明前列地尔聚乙二醇脂微球递药系统增加了前列地尔对心梗模型大鼠心肌的保护作用，提高了药效。另外，受体内自由基水平的影响，自由基产生可刺激SOD的合成，在测定SOD活性的实验中，SOD活性与MDA含量成正相关，自由基增多可刺激SOD的合成，前列地尔聚乙二醇脂微球预适应显著降低试验大鼠心肌SOD上升幅度，这一结果也间接的表明，该制剂可减轻氧自由基引起的心肌细胞不可逆的损害，同时在与普通前列地尔制剂对比中我们也观察到其具有更强的药效活性，该结果也进一步证明了这种新型递药系统可增强前列地尔对实验大鼠的心肌保护作用。

本发明的前列地尔长循环脂微球制剂具有扩张血管、抑制血小板聚集、抑制胃酸分泌、抑制胰腺外分泌、抗脂质氧化及刺激胰岛素分泌，早期心肌保护作用，其能缩小模型大鼠心肌梗塞面积，提高心肌抗氧化损伤能力的作用。

本发明的制剂与现有技术相比，具有治疗效果好，稳定性好，副作用少，保质期长，见效快，价格便宜，适合大规模生产等特点。

附图说明：

图1采用激光散射粒径仪测定的脂微球的粒经和粒径分布

具体实施方式：

通过以下实施例进一步说明本发明，但不作为本发明的限制。

实施例1最优选的本发明前列地尔脂微球制剂

前列地尔                    5.0mg

大豆油(注射用)              100.0g

卵磷脂(注射用)              18.0g

油酸钠                      2.4g

聚乙二醇-磷脂               20.0g

维生素E(注射用)             5.0g

甘油                        22.1g

注射用水                    加至1000ml

取前列地尔，大豆油，加入卵磷脂、维生素E、聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油与油酸钠。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在80nm-150nm，调节pH5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例2最高前列地尔含量的长循环前列地尔脂微球药物制剂(仅以大豆油作为实施例)

处方：

前列地尔                   1.0g

大豆油(注射用)             100.0g

卵磷脂(注射用)             18.0g

油酸钠                     2.4g

聚乙二醇-磷脂              20.0g

维生素E(注射用)            5.0g

甘油                       22.1g

注射用水                   加至1000ml

取前列地尔1.0g，大豆油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在80nm-150nm，调节pH5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

一、对聚乙二醇-磷脂用量范围的考察

实例3最低聚乙二醇-磷脂含量的长循环前列地尔脂微球药物制剂(仅以大豆油作为实施例)

处方：

前列地尔                        5.0mg

大豆油(注射用)                  100.0g

卵磷脂(注射用)                  18.0g

油酸钠                          2.4g

聚乙二醇-磷脂                   2.0g

维生素E(注射用)                 5.0g

甘油                            22.1g

注射用水                        加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大豆油100.0g、加入18.0g卵磷脂、2.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在100nm-180nm，调节pH5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例4最高聚乙二醇-磷脂含量的长循环脂微球药物制剂

处方：

前列地尔                      5.0mg

大豆油(注射用)                100.0g

卵磷脂(注射用)              18.0g

油酸钠                      2.4g

聚乙二醇-磷脂               50.0g

维生素E(注射用)             5.0g

甘油                        22.1g

注射用水                    加至1000ml

取前列地尔5.0mg，大豆油100.0g，加入18.0g卵磷脂、50g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在60nm-120nm，调节pH5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

二、对稀释油用量范围的考察

实例5最低含量动植物油、液态油状药物或作为药物溶剂的油溶液制备的长循环脂微球药物制剂(仅以大豆油作为实施例)

处方：

前列地尔                        5.0mg

大豆油(注射用)                  50.0g

卵磷脂(注射用)                  18.0g

油酸钠                          2.4g

聚乙二醇-磷脂                   20.0g

维生素E(注射用)                 5.0g

甘油                            22.1g

注射用水                        加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大豆油50.0g、加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g、。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例6最高含量动植物油、液态油状药物或作为药物溶剂的油溶液制备的长循环脂微球药物制剂(仅以大豆油作为实施例)

处方：

前列地尔                        5.0mg

大豆油(注射用)                  300.0g

卵磷脂(注射用)                  18.0g

油酸钠                          2.4g

聚乙二醇-磷脂                   20.0g

维生素E(注射用)                 5.0g

甘油                            22.1g

注射用水                        加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大豆油300.0g、加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

三、对主要乳化剂磷脂用量范围的考察

实例7最低配比含量磷脂制备的长循环脂微球药物制剂(仅以卵磷脂E80作为实施例)

处方：

前列地尔                  5.0mg

大豆油(注射用)            100.0g

卵磷脂(注射用)            3.0g

油酸钠                  2.4g

聚乙二醇-磷脂           20.0g

维生素E(注射用)         5.0g

甘油                    22.1g

注射用水                加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大豆油100.0g、加入3.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g、油酸钠2.4g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例8最高配比磷脂含量制备的长循环脂微球药物制剂(仅以卵磷脂E80作为实施例)

处方：

前列地尔                     5.0mg

大豆油(注射用)               100.0g

卵磷脂(注射用)               40.0g

油酸钠                       2.4g

聚乙二醇-磷脂                20.0g

维生素E(注射用)              5.0g

甘油                         22.1g

注射用水                     加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大豆油100.0g，加入40.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g、。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

四、对助乳化剂油酸或油酸钠用量的考察

实例9不加入油酸钠制备的长循环脂微球药物制剂

处方：

前列地尔                   5.0mg

大豆油(注射用)             100.0g

卵磷脂(注射用)             18.0g

聚乙二醇-磷脂              20.0g

维生素E(注射用)            5.0g

甘油                       22.1g

注射用水                   加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大豆油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 7.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例10最高配比油酸钠含量制备的长循环脂微球药物制剂

处方：

前列地尔                    5.0mg

大豆油(注射用)              100.0g

卵磷脂(注射用)              18.0g

油酸钠                      6.0g

聚乙二醇-磷脂               20.0g

维生素E(注射用)             5.0g

甘油                        22.1g

注射用水                    加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大豆油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠6.0g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

五、制剂中维生素E用量考察

实例11不加入维生素E制备的长循环脂微球药物制剂

处方：

前列地尔                     5.0mg

大豆油(注射用)               100.0g

卵磷脂(注射用)               18.0g

油酸钠                       2.4g

聚乙二醇-磷脂                20.0g

甘油                         22.1g

注射用水                     加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大豆油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g、。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例12最高配比维生素E含量制备的长循环脂微球药物制剂

处方：

前列地尔                  5.0mg

大豆油(注射用)            100.0g

卵磷脂(注射用)            18.0g

油酸钠                    2.4g

聚乙二醇-磷脂                20.0g

维生素E(注射用)              10g

甘油                         22.1g

注射用水                     加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大豆油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入10g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

六、不同动植物油作为稀释油制备的长循环脂微球前列地尔制剂的实例考察(选用六种植物油为例)

实例13莪术油作为稀释油

处方：

前列地尔                      5.0mg

莪术油(注射用)                100.0g

卵磷脂(注射用)                18.0g

油酸钠                        2.4g

聚乙二醇-磷脂                 20.0g

维生素E(注射用)               5.0g

甘油                          22.1g

注射用水                      加至1000ml

取前列地尔5.0mg、莪术油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与2.4g油酸钠。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例14薏米仁油作为稀释油

处方：

前列地尔                    5.0mg

薏米仁油(注射用)            100.0g

卵磷脂(注射用)              18.0g

油酸钠                      2.4g

聚乙二醇-磷脂               20.0g

维生素E(注射用)             5.0g

甘油                        22.1g

注射用水                    加至1000ml

取前列地尔5.0mg、薏米仁油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例15大蒜油作为稀释油

处方：

前列地尔                     5.0mg

大蒜油(注射用)               100.0g

卵磷脂(注射用)               18.0g

油酸钠                       2.4g

聚乙二醇-磷脂                20.0g

维生素E(注射用)              5.0g

甘油                         22.1g

注射用水                     加至1000ml

取前列地尔5.0mg、大蒜油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例16红花油作为稀释油

处方：

前列地尔                    5.0mg

红花油(注射用)              100.0g

卵磷脂(注射用)              18.0g

油酸钠                      2.4g

聚乙二醇-磷脂               20.0g

维生素E(注射用)             5.0g

甘油                        22.1g

注射用水                    加至1000ml

取前列地尔5.0mg、红花油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油的与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例17花椒油作为稀释油

处方：

前列地尔                  5.0mg

花椒油(注射用)            100.0g

卵磷脂(注射用)            18.0g

油酸钠                    2.4g

聚乙二醇-磷脂             20.0g

维生素E(注射用)         5.0g

甘油                    22.1g

注射用水                加至1000ml

取前列地尔5.0mg、花椒油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.0g与油酸钠2.4g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例18川芎油作为稀释油

处方：

前列地尔                    5.0mg

川芎油(注射用)              100.0g

卵磷脂(注射用)              18.0g

油酸钠                      2.4g

聚乙二醇-磷脂               20.0g

维生素E(注射用)             5.0g

甘油                        22.1g

注射用水                    加至1000ml

取前列地尔5.0mg、川芎油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠2.4g。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

实例19最低前列地尔含量的长循环前列地尔脂微球药物制剂(仅以大豆油作为实施例)

处方：

前列地尔                    0.1mg

大豆油(注射用)              100.0g

卵磷脂(注射用)              18.0g

油酸钠                      2.4g

聚乙二醇-磷脂               20.0g

维生素E(注射用)             5.0g

甘油                        22.1g

注射用水                    加至1000ml

取前列地尔0.1mg，大豆油100.0g，加入18.0g卵磷脂、5.0g维生素E、20.0g聚乙二醇-磷脂(PEG-DSPE)，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，溶解混匀。另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与2.4g油酸钠。在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml。高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在80nm-150nm，调节pH5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封。115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

Claims (5)

1.一种前列地尔长循环脂微球制剂，其特征在于，由以下组分加工制成：

取前列地尔，大豆油，加入卵磷脂、维生素E、聚乙二醇-磷脂，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，溶解混匀，另取注射用水800ml，加入甘油与油酸钠，在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml，高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在80nm-150nm，调节pH5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封，115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

2.一种前列地尔长循环脂微球制剂，其特征在于，由以下组分加工制成：

取前列地尔5.0mg，大豆油100.0g，加入18.0g卵磷脂、50g聚乙二醇-磷脂，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀，另取注射用水800ml，加入甘油22.1g，在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml，高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在60nm-120nm，调节pH5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封，115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

3.一种前列地尔长循环脂微球制剂，其特征在于，由以下组分加工制成：

取前列地尔5.0mg、大豆油100.0g，加入18.0g卵磷脂、20.0g聚乙二醇-磷脂，在氮气保护的条件下，加热至75℃，搅拌约10min使得添加的各种类脂化合物充分溶解，然后加入5.0g维生素E，溶解混匀，另取注射用水800ml，加入甘油22.1g与油酸钠6.0g，在氮气保护的条件下，将含有药物的油溶液在剪切搅拌条件下加入甘油与油酸钠的水溶液中，制成初乳，并调节总量至1000ml，高压均质机均质5-8次，均质压力大约为100MPa，至粒径范围在150nm-300nm，调节pH 5.0-8.0，过滤，分装，通入氮气，密封，115℃旋转灭菌30min，灯检合格后，包装，在25℃以下贮藏。

4.权利要求1所述的前列地尔长循环脂微球制剂的检测方法，其特征在于，

前列地尔含量测定方法如下

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.0067mol/L磷酸盐缓冲液-乙腈＝3∶1为流动相；流速为每分钟1ml；柱后反应液为1mol/L氢氧化钾溶液，柱后反应管为聚四氟乙烯管；柱温60℃；检测波长278nm，前列地尔与内标物的分离度应符合要求，

内标溶液的制备：取β-萘酚25mg，精密称定，置50ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，量取5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为溶液(1)，取溶液(1)5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为内标溶液，

对照品溶液的制备：取前列地尔对照品5mg，精密称定，置50ml棕色量瓶中，加无水乙醇10ml溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml与溶液(1)5ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液，

供试品溶液的制备：精密量取本品适量，置20ml棕色具塞试管中，加四氢呋喃2.5ml，混匀，加磷酸溶液1→1000，15ml，混匀，通过预处理柱[填充物为十八烷基硅烷键合硅胶，粒径为70μm，φ10mm×9mm聚丙烯管，使用前用甲醇10ml、水10ml冲洗，试管用10ml水冲洗并通过预处理柱，再用甲醇7ml洗脱，洗脱液全部移入10ml棕色蒸馏瓶中，于50℃减压蒸馏10分钟，蒸干溶剂，残渣用内标溶液1.0ml溶解，摇匀，即得，

测定法精密量取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按内标法以峰面积计算。

5.权利要求1所述的前列地尔长循环脂微球制剂，其脂微球制剂的平均粒径小于180nm，其制剂工艺的终端灭菌温度必须保证Fo＞12。

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