CN101416963A - 注射用尼莫地平冻干亚微乳剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种注射尼莫地平冻干载药脂肪乳及其制备方法。采用有效剂量的尼莫地平加入辅料后，通过乳化剂、助乳化剂、冻干保护剂的作用，被包裹于油相和磷脂膜相中，制成水性分散体。称取处方量的尼莫地平，乳化剂，助乳化剂和注射用油在水浴中搅拌溶解后，加入注射用水，等渗调节剂等充分混合乳化，调节溶液的pH值，补加注射用水至规定体积，经高压乳匀机循环乳匀数遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、充氮分装，即得到尼莫地平亚微乳注射液，进一步向其中加入冻干保护剂，经真空冷冻干燥后，制成冻干亚微乳剂。使用前用生理盐水，葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液进行稀释，即可迅速回复成亚微乳剂。本发明的特点是通过将尼莫地平亚微乳剂进一步冷冻干燥的工艺，显著提高了尼莫地平的稳定性和疗效，大大降低了毒副作用，特别值得关注的是，冷冻干燥法对亚微乳起到了很好的保护作用，避免了药物的渗漏，对于建立尼莫地平亚微乳载药系统的稳定剂型及其长期保存开辟了新的前景。本发明提供的冻干亚微乳剂的制备方法，制备工艺简单，不含有机溶剂，提高了患者的顺应性；并且成本低廉，适合工业化大生产。

Description

注射用尼莫地平冻干亚微乳剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体地说是一种供注射用的包含尼莫地平的冻干亚微乳剂及其制备方法。

背景技术

尼莫地平(nimodipine)系1，4—二氢吡啶类钙通道阻滞剂。实验证明，尼莫地平主要阻断中枢神经系统内细胞膜的钙通道，有效地调节细胞内钙的水平，降低红细胞脆性及血液黏滞度，抑制血小板聚集，抗血栓形成，在适宜剂量下选择性扩张脑血管，几乎不影响外周血管，常用于预防和治疗因蛛网膜下腔出血引起的或脑血管痉挛造成的脑组织缺血性损害。尼莫地平作为选择性扩张脑血管作用较强的钙拮抗剂，被认为是治疗脑血管痉挛和脑缺血性疾患很有希望的药物。尼莫地平是一种脂溶性药物，具有极强的疏水性，给静脉注射制剂的研制带来了极大的技术难题，目前国内外上市的尼莫地平注射液中加入乙醇、聚乙二醇400等有机溶剂助溶，然后使用中心静脉插管及输液泵实施治疗。除中心静脉插管及输液泵的价格昂贵，使患者的治疗成本和医护人员工作量大幅增加外，采用二路插管方式输液对输注速度也不易控制，而且制剂中的乙醇、聚乙二醇等有机溶剂对血管还有较强的刺激性，注入血管时易引起注射部位疼痛，降低了患者使用的顺应性。并且该注射液在贮藏过程中，长时间暴露于低温，药物容易析出，较难重新溶解；尼莫地平原料本身对光敏感，药物在液体中比固体更容易光解。为解决上述问题，国内外药学工作者进行了大量的实验研究。专利号ZL02155645.8和ZL 20030110369.X公开了一种含有尼莫地平的冻干注射剂配方，采用磷脂、环糊精及其衍生物或表面活性剂，助溶剂等以增加尼莫地平的溶解度和稳定性，但制备工艺较为复杂，最终产品质量难以控制，并且环糊精有较大的过敏反应和溶血现象，具有潜在毒性，限制了其制剂的广泛使用；专利号ZL 03153170.9公开了一种尼莫地平的注射用药物组合物，以丙二醇和吐温类表面活性剂提高尼莫地平在水中的溶解度；公开号CN 101045054A公开了尼莫地平纳米混悬剂冻干组合物，同样采用乙醇、丙酮或丙二醇等有机溶剂增加尼莫地平的溶解度，以上两种药物在临床使用时只能与其他输液一起，通过二路插管形式给药，不能直接加在输液中，以免发生沉淀析出，因而使用极不方便。为提高尼莫地平制剂的稳定性和用药的顺应性，我们选择亚微乳作为紫杉醇的载药系统并进行了全面的研究。亚微乳作为药物的胶体性载体，其主要优点是毒性小、安全性高、高压乳匀法易于大生产，可作为水溶性或脂溶性药物的载体，能够提高药物的稳定性，也可作为缓释给药系统，具有一定的靶向作用。亚微乳是以植物油或动物油为主要成分，加乳化剂、助乳化剂与注射用水，通过高压乳匀机乳匀形成，经高压灭菌，可供静脉注射。且由于油相对药物的溶解性较好，从而极大地提高药物在微乳中的溶解度。其中的植物油可经机体代谢而完全利用，20％静脉注射脂肪亚微乳含有相当于10倍体积的5％葡萄糖的热量。此外，本发明还进一步采用冷冻干燥法将尼莫地平亚微乳制剂制成块状固体或固体粉末，该方法提高了亚微乳的稳定性，避免药物的渗漏，有利于制剂的贮存，运输和销售。冷冻干燥过程中由于二糖的存在，有利于降低脂质的相转变温度。这样，干膜脂质在室温下为液晶相，避免了相分离的发生，且在复溶过程中不会发生相转变和双分子层的泄漏。因此，将亚微乳制成冻干制品，既保持了乳剂的形态特征，保证药物稳定的包裹于亚微乳油相内核中，又增加了产品的安全性和稳定性，为临床应用提供了可靠的保障。

发明内容

本发明的目的在于向临床提供一种供注射用的安全性高，疗效显著，性质稳定，毒副作用小，制备工艺简单并且适合工业化生产的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。采用有效剂量的尼莫地平加入辅料后，通过乳化剂、助乳化剂、冻干保护剂的作用，被包裹于油相和磷脂膜相中，制成水性分散体。称取处方量的尼莫地平，乳化剂，助乳化剂和注射用油在水浴中搅拌溶解后，加入注射用水，等渗调节剂等充分混合乳化，调节溶液的pH值，补加注射用水至规定体积，经高压乳匀机循环乳匀数遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、充氮分装、灭菌，即得到尼莫地平亚微乳注射液，进一步向其中加入冻干保护剂，经真空冷冻干燥后，制成冻干亚微乳剂。使用前用生理盐水，葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液进行稀释，即可迅速回复成亚微乳剂。本发明克服了现有制剂的缺陷和不足，提供一种不含有机溶剂的制剂，从根本上消除了有机溶媒的缺点，不会有药物析出，减少了医护人员的工作量，消除了医护人员和病人的心理负担，提高了患者的顺应性。本发明的另一目的是提供了尼莫地平冻干亚微乳剂的制备方法，该方法均采用常规的工艺设备，可工业大规模高效率生产。通过将尼莫地平亚微乳剂进一步冷冻干燥的工艺，显著提高了尼莫地平的稳定性和疗效，大大降低了毒副作用。本制剂通过冷冻干燥以块状固体或固体粉末形式保存，方便了制剂的贮存，运输和销售。特别值得关注的是，在冷冻干燥过程中，保护剂形成一种具有极高粘度的“玻璃化”状态，它包围在乳滴的周围，抑制了乳滴的运动和聚集。此外，亚微乳冻干失水过程中，保护剂二糖分子中的羟基能在失水部位与之连接，形成一种新的保护膜，使微乳在物理状态上与有水存在时相似，从而保持了亚微乳的完整结构，避免了药物的渗漏。

本发明的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，各组分按重量百分比组成为：

尼莫地平：0.01～2.0％

注射用油：5～30％

乳化剂：0.2～15％

助乳化剂：0.05～15.0％

抗氧剂：0.01～1.0％

等渗调节剂：0～10％

pH调节剂：适量调节pH3.0～8.0

冻干保护剂：1～30％

注射用水：适量

本发明所述的注射用油为碳链长度C6～C24的植物油，动物油以及甘油三酯类，包括红花油，橄榄油，玉米油，沙棘油，亚麻子油，花生油，茶油，葵花籽油，薏仁油，月见草油，鱼油，维生素E琥珀酸酯，维生素E醋酸酯，辛酸/癸酸甘油酯，米格列醇(Miglyol 812)，油酸乙酯，油酸，亚油酸乙酯，月桂酸异丙酯，肉豆蔻酸异丙酯，丁酸乙酯，乳酸乙酯等中的一种或几种混合物。

本发明所述的乳化剂为天然大豆卵磷脂，天然蛋黄卵磷脂，氢化大豆磷脂，氢化蛋黄磷脂，天然磷脂酰胆碱或半合成磷脂酰胆碱及其衍生物，泊洛沙姆188，182，407，908，聚氧乙烯脂肪酸酯类，聚氧乙烯脂肪醇醚类，胆酸或去氧胆酸及其钠盐，甘胆酸钠，牛磺胆酸钠，去氧牛磺胆酸钠，胆固醇等中的一种或一种以上组合物。

本发明所述的助乳化剂为C14～C18的游离脂肪酸，包括油酸及其盐，亚油酸及其盐，亚麻油酸，硬脂酸及其盐，胆酸，去氧胆酸或其盐等中的一种或一种以上组合物。

本发明所述的抗氧剂为亚硫酸盐类，抗坏血酸，没食子酸丙酯，抗坏血酸棕榈酸酯，叔丁基对羟基茴香醚(BHA)，二叔丁基对甲酚(BHT)，维生素E，惰性气体，EDTA及其盐类等中的一种或一种以上组合物。

本发明所述的等渗调节剂为甘油、葡萄糖、氯化钠、山梨醇、木糖醇中的一种或一种以上组合物。

本发明所述的pH调节剂为氢氧化钠、磷酸钠、柠檬酸钠、盐酸、醋酸、磷酸、柠檬酸中的一种或一种以上组合物，pH范围为3.0～8.0。

本发明所述的冻干保护剂为蔗糖，乳糖，麦芽糖，葡萄糖，海藻糖，棉籽糖，果糖，己糖，山梨醇，木糖醇，甘露醇，氨基酸等中的一种或一种以上组合物。

本发明所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，可通过以下方法制备：

方法一：(1)称取处方量的尼莫地平，注射用油，乳化剂，助乳化剂，抗氧剂，40～85℃水浴中搅拌溶解，形成油相；(2)将等渗调节剂溶解在适量注射用水，加热搅拌至40～85℃，形成水相。(3)将油水两相混合，经高速剪切机剪切制成初乳；调解溶液的pH值，补加注射用水至规定体积；(4)经高压乳匀机循环乳匀熟遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌，充氮分装，灭菌，得到粒径范围在100～500nm，pH值为4.0～8.0的尼莫地平亚微乳注射液。(5)在制备好的尼莫地平亚微乳注射液中加入适量冻干保护剂，通过真空冷冻干燥方法得到注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

方法二：(1)称取处方量的尼莫地平，注射用油，40～85℃水浴中搅拌溶解，形成油相；(2)将乳化剂，助乳化剂，等渗调节剂，抗氧剂溶解在适量注射用水，加热搅拌至40～85℃，形成水相。(3)将油水两相混合，经高速剪切机剪切制成初乳；调节溶液的pH值，补加注射用水至规定体积；(4)经高压乳匀机循环乳匀数遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、充氮分装、灭菌，得到粒径范围在100～500nm，pH值为4.0～8.0的尼莫地平亚微乳注射液；(5)在制备好的尼莫地平亚微乳注射液中加入适量冻干保护剂，通过真空冷冻干燥方法得到注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

本发明所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于所述的粒径范围为100nm～500nm，zeta电位的绝对值为10～60mV。

本发明所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于破乳离心后分离出油相、水相和磷脂膜相，其中油相中药物含量按重量百分比计算为40％～92％，水相中药物含量按重量百分比为0.1％～1.2％，磷脂膜相中药物含量按重量百分比为9％～60％。

本发明所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于所述的尼莫地平的包封率在85％以上，满足临床使用的药物包封率要求。

本发明所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于使用前可用生理盐水，5％葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液进行稀释，在100秒钟内即可溶解，并且粒径和包封率没有明显变化。

本发明所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于与溶液配伍后，在48小时内稳定，未见药物晶体析出。

本发明所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于具有缓慢释药特性，可增大单次给药剂量，减少临床给药次数。制剂中不含有机溶媒，临床应用无致敏及变态反应，无需使用特殊输液装置，提高了临床应用的顺应性。

本发明提供一种新的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，由于选用了合适的注射用油及乳化剂等组分以及合适的制备方法，该产品载药量大，包封率高；该亚微乳剂进一步采用冷冻干燥法制成粉针剂，提高了制剂的稳定性，保持了亚微乳的完整结构，避免了现有乳剂储存期短，药物易渗漏的缺点；该冻干亚微乳剂在临用前用生理性溶液配伍后即可迅速溶解，乳剂的形态和类型保持不变，粒径和包封率没有明显变化，在48小时内稳定，未见药物晶体析出；该制剂不含有机溶剂，从根本上消除了有机溶媒的缺点，不会有药物析出，减少了医护人员的工作量，消除了医护人员和病人的心理负担，提高了患者的顺应性；该制剂还具有一定的靶向性，提高了药物的生物利用度和治疗指数；该制剂制备工艺简单易行，成本低廉，适于大量制备和工业化生产。

附图说明

图1是冻干前后亚微乳形态示意图，其中I为冻干前，II为冻干后，III为真空冷冻干燥；A油相载药(43.89％～90.11％)，B为磷脂膜载药(9.71％～55.92％)，C为水相载药(0.14％～1.05％)；1为尼莫地平，2为乳化剂，3为助乳化剂，4为油，5为水，6为冻干保护剂。

图2是实施例1粒径分布图，A：冻干前，B：冻干后

图3是实施例2粒径分布图，A：冻干前，B：冻干后

图4是实施例3粒径分布图，A：冻干前，B：冻干后

图5是实施例4显微镜下形态观察图，A：冻干前，B：冻干后，C：与生理盐水配伍6h

图6是实施例4透射电镜下形态观察图，A：冻干前，B：冻干后，C：与生理盐水配伍6h

图7是实施例4配伍稳定性粒径分布图，A为配伍后0h，B为配伍后8h

图8是实施例4～6体外释放曲线图

图9是大鼠尾静脉注射尼莫地平冻干亚微乳(7.0mg/kg)后不同时刻各组织药物浓度柱形图

图10是大鼠尾静脉注射市售尼莫地平注射液(7.0mg/kg)后不同时刻各组织药物浓度柱形图

具体实施方式

实施例1：

(1)在氮气保护下，称取尼莫地平1.0g，蛋黄磷脂12g，注射用中链油66.67g，亚油酸2g，α-生育酚1g，置于70℃水浴中搅拌溶解，作为油相；(2)称取甘油18g，加入到适量注射用水中，70℃水浴溶解，作为水相。(3)在搅拌下将水相滴入油相中，经高速剪切机剪切制成初乳，用0.5mol/L磷酸调pH为5.0，补加注射用水至1000mL；经750bar高压乳匀机循环乳匀7遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、灭菌，得到尼莫地平亚微乳注射液。(4)在上述尼莫地平亚微乳剂中加入20％海藻糖，在-85℃预冻7h后，真空冷冻干燥64h，即得注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

实施例2：

(1)在氮气保护下，称取尼莫地平1.3g，蛋黄磷脂6g，红花油60g，油酸2g，α-生育酚1g，置于65℃水浴中搅拌溶解，作为油相；(2)称取山梨醇20g，泊洛沙姆2.5g，葡萄糖50g加入到适量注射用水中，65℃水浴溶解，作为水相。(3)在搅拌下将水相滴入油相中，经高速剪切机剪切制成初乳，用0.2％柠檬酸调pH为4.5，补加注射用水至1000mL；经1000bar高压乳匀机循环乳匀6遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、灭菌，得到尼莫地平亚微乳注射液。(4)在上述尼莫地平亚微乳剂中加入15％蔗糖，在-80℃预冻8h后，真空冷冻干燥72h，即得注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

实施例3：

(1)在氮气保护下，称取尼莫地平2.5g，大豆油60g，大豆磷脂3.0g，置于75℃水浴中搅拌溶解，作为油相；(2)称取油酸钠1.5g，泊洛沙姆12g，亚硫酸钠5.0g，甘油20g加入到适量注射用水中，75℃水浴溶解，作为水相。(3)在搅拌下将水相滴入油相中，经高速剪切机剪切制成初乳，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH为7.0，补加注射用水至1000mL；经700bar高压乳匀机循环乳匀8遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、灭菌，得到尼莫地平亚微乳注射液。(4)在上述尼莫地平亚微乳剂中加入10％乳糖和10％海藻糖，在-70℃预冻8h后，真空冷冻干燥72h，即得注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

实施例4：

(1)在氮气保护下，称取尼莫地平4.5g，大豆磷脂12g，注射用中链油/大豆油(1：1)70g，硬脂酸1.0g，置于60℃水浴中搅拌溶解，作为油相；(2)称取抗坏血酸2.0g，泊洛沙姆3.0g，甘油80g加入到注射用水中，60℃水浴溶解，作为水相。(3)在搅拌下将水相滴入油相中，经高速剪切机剪切制成初乳，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH为7.0，补加注射用水至1000mL；经750bar高压乳匀机循环乳匀7遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、灭菌，得到尼莫地平亚微乳注射液。(4)在上述尼莫地平亚微乳剂中加入15％蔗糖，在-65℃预冻10h后，真空冷冻干燥72h，即得注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

实施例5：

(1)在氮气保护下，称取尼莫地平3.0g，橄榄油100g，蛋黄磷脂45g，置于75℃水浴中搅拌溶解，作为油相；(2)称取油酸钠2.0g，亚硫酸钠2.0g，甘油60g加入到注射用水中，75℃水浴溶解，作为水相。(3)在搅拌下将水相滴入油相中，经高速剪切机剪切制成初乳，用0.1mol/LNaOH溶液调节pH为7.0，补加注射用水至1000mL；经700bar高压乳匀机循环乳匀8遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、灭菌，得到尼莫地平亚微乳注射液。(4)在上述尼莫地平亚微乳剂中加入12％甘露醇，在-55℃预冻12h，真空冷冻干燥80h，即得注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

实施例6：

(1)在氮气保护下，称取尼莫地平4.5g，花生油160g，氢化大豆磷脂60g，硬脂酸3g，EDTA1.0g，置于75℃水浴中搅拌溶解，作为油相：(2)称取泊洛沙姆20g，葡萄糖50g，加入到注射用水中，75℃水浴溶解，作为水相。(3)在搅拌下将水相滴入油相中，经高速剪切机剪切制成初乳，用0.5％柠檬酸钠调pH为6.0，补加注射用水至1000mL；经900bar高压乳匀机循环乳匀6遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、灭菌，得到尼莫地平亚微乳注射液。(4)在上述尼莫地平亚微乳剂中加入20％葡萄糖，在-55℃预冻12h后，真空冷冻干燥74h，即得注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

实施例7：

粒径测定取实施例1～3中尼莫地平亚微乳注射液及冻干后加水复溶样品各0.1ml，加纯化水(预先用孔径为0.22μm的滤膜过滤)稀释至5000倍，混匀，作为供试液，用动态激光散射粒径测定法测定。冻干前后粒径结果见表1所示，粒径图见图2～4所示，

表1 尼莫地平亚微乳冻干前后粒径变化情况

实施例8：尼莫地平显微镜下形态观察

取实施例4中尼莫地平亚微乳注射液，冻干复溶样品及与生理盐水配伍样品适量，用少量水稀释后，至油镜下观察乳剂形态，从结果中看，乳剂呈球型，大小均匀，冻干前后及配伍6h样品的粒径没有明显变化，并且未观察到药物晶体析出。结果见图5所示。

实施例9：尼莫地平透射电镜下形态观察

取实施例4中尼莫地平亚微乳注射液，冻干复溶样品及与生理盐水配伍样品适量，用1％的磷钨酸溶液(pH4.4)负染，于透射电镜下观察。结果表明，亚微乳呈球型，大小均匀，冻干前后及配伍6h样品的粒径没有明显变化，测得亚微乳平均粒径约为180nm，约93％的乳滴粒径在150～250nm范围内，表明分布范围较窄，粒径较均匀。电镜照片如图6所示。

实施例10：含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2005版二部附录VD)

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-乙腈-水(35：38：27)为流动相，检测波长为235nm。理论塔板数按尼莫地平峰面积计算一般不低于8000，尼莫地平与相邻杂质峰的分离度应符合要求。

精密量取实施例1～3尼莫地平亚微乳冻干前后样品适量，加异丙醇-甲醇(1：1，v/v)溶解，破乳，使溶液含主药50μg/ml，摇匀，精密量取20μl注入色谱仪记录色谱图；另取尼莫地平对照品适量，精密称定，用流动相溶解并定容稀释制成每1ml中约含50μg/ml的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。结果见表2所示。

实施例11：相分布及包封率的测定

取实施例1～3尼莫地平亚微乳冻干前后样品3mL，加入氯化钠使溶液饱和后，在酒精灯上直火加热，然后离心分离出油相、水相和油水界面膜相。精密吸取油相适量，加甲醇定容至刻度制成一定浓度的油相供试品溶液，作为油相含量测定溶液，分别直接吸取水相溶液及油相供试品溶液20μl注入液相色谱仪，照含量测定条件，以外标法分别计算药品总量、油相和水相中药物的含量，油水界面膜相中的量以公式为：药物在油水界面膜相中的量＝总药量—(水相中的药物+油相中的药物)计算即可得到。计算尼莫地平在三相中的分布。包封率＝(总药量-水相中的药物)×100％/总药量，结果表明药物主要集中在油相和油水界面膜相中，在水相中含量极少，证明本品可将尼莫地平包裹于油相和油水界面膜相中，减少了主药与环境中光和热接触的几率，可以提高尼莫地平的化学稳定性，减轻刺激性。提高患者的顺应性。具体测定结果见表2所示。

表2 尼莫地平亚微乳冻干前后含量、相分布、包封率测定试验结果

实施例12：配伍稳定性试验

取实施例4中尼莫地平冻干亚微乳剂，用生理盐水稀释至临床给药浓度，分别于0h和放置8h后测得粒径大小为204.6nm和212.5nm，包封率为91.3％和89.7％，粒径如图7所示。

实施例13：释放度试验

取实施例4～6注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，测定其体外释放曲线。采用反相动态透析法，以0.5％十二烷基硫酸钠溶液200mL为释放介质，转速50r·min^-1，温度(37±0.5)℃。将7个大小一致，装有2mL释放介质的透析袋(截留分子量12000～14000)，浸入释放介质中，平衡12h。分别于0.5，1.0，2.0，6.0，12.0，24.0，48.0h各取出一个透析袋，吸取袋内适量溶液，同时补入等量同温释放介质，样品过滤后进样。结果表明，在释放条件下，三批制剂的释放显示了不同程度的缓释作用，随着处方中油和乳化剂用量增多，缓释作用加强，释放曲线如图8所示。

实施例14：

刺激性试验：注射用尼莫地平冻干亚微乳剂用生理盐水或5％葡萄糖溶液配伍稀释后对兔耳缘静脉注射8.0mg/kg的剂量，未见明显刺激性。

过敏试验：注射用尼莫地平冻干亚微乳剂用生理盐水或5％葡萄糖溶液配伍稀释后给豚鼠0.4ml/只(0.4mg/kg)皮下注射致敏，攻击剂量为0.4ml/只(7.2mg/kg)，结果为阴性。

溶血试验：在装有注射用紫杉醇冻干微乳剂用生理盐水或5％葡萄糖溶液配伍稀释后2.5mL的试管中加入浓度为2％家兔红血球混悬液2.5mL，结果无溶血作用。

实施例15：体内药动学试验：

健康Wistar雄性大鼠30只，体重180～230g，随机分成2组，每组15只。给药前禁食12h，自由饮水。按7.0mg/kg剂量经大鼠尾静脉分别注射尼莫地平冻干亚微乳剂和市售尼莫地平注射液，于给药后0.017、0.083、0.17、0.33、0.67、1、1.5、2、3、4h经大鼠眼后静脉丛取静脉血0.5mL，置肝素化试管中，10000rpm离心10min，分离血浆，测定血浆中药物浓度。对注射用尼莫地平冻干亚微乳剂和尼莫地平注射液(市售)得到的药动学参数进行配对t检验，结果表明各主要药动学参数没有显著性差异(P>0.05)，但是注射用尼莫地平冻干亚微乳的消除半衰期大于市售制剂的2倍左右。这说明将尼莫地平制成亚微乳剂型可以增长半衰期，延长其作用时间。药动学参数见表3所示。

表3 药代动力学参数表

实施例16：组织分布试验

健康Wistar大鼠20只，雌雄各半，随机分成2组，每组10只，雌雄各5只，给药前禁食12h，自由饮水。以7.0mg/kg的剂量分别尾静脉注射给予尼莫地平冻干亚微乳剂和市售尼莫地平注射液，分别于给药后0.25h、1h、4h断头取血后，立即解剖采集心、肝、脾、肺、肾、脑组织及血浆0.4mL。组织采集后，立即用生理盐水清洗，称量1g(不足1g的组织，称量0.5g)，加入3倍量的甲醇，用超细匀浆机研磨，4000rpm离心5min，取各组织上清液及血浆200μL，处理后进样，测定血药浓度。不同时刻各组织中药物浓度如图9和图10所示。将得到的各组织的药物浓度进行配对t检验，结果表明，在0.25h时，各组织间的药物浓度没有显著性差异(P<0.05)；1h时，心、肝、脑和血浆中，自制冻干亚微乳剂的组织药物浓度明显高于市售制剂(P>0.05)，说明将尼莫地平制成亚微乳剂型后，可以显著提高其在组织中的作用时间，尤其是对作用与心脑血管疾病的药物更具临床价值。4h时，自制亚微乳剂的肝组织中的药物浓度仍明显高于市售剂型，但是其药物浓度仅为0.25h的不足10％，说明尼莫地平虽然在肝脏中作用时间较长，但仍没有蓄积。

Claims (10)

1.本发明的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，各组分按重量百分比组成为：

尼莫地平：0.01～2.0％

注射用油：5～30％

乳化剂：0.2～15％

助乳化剂：0.05～15.0％

抗氧剂：0.01～1.0％

等渗调节剂：0～10％

pH调节剂：适量调节pH3.0～8.0

冻干保护剂：1～30％

注射用水：适量。

2.根据权力要求1所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于所述的注射用油为碳链长度为C6～C24的植物油，动物油以及甘油二酯类，包括红花油，橄榄油，玉米油，沙棘油，亚麻子油，花生油，茶油，葵花籽油，薏仁油，月见草油，鱼油，维生素E琥珀酸酯，维生素E醋酸酯，辛酸/癸酸甘油酯，米格列醇(Miglyol 812)，油酸乙酯，油酸，亚油酸乙酯，月桂酸异丙酯，肉豆蔻酸异丙酯，丁酸乙酯，乳酸乙酯等中的一种或几种混合物；乳化剂选自天然大豆卵磷脂，天然蛋黄卵磷脂，氢化大豆磷脂，氢化蛋黄磷脂，天然磷脂酰胆碱或半合成磷脂酰胆碱及其衍生物，泊洛沙姆188，182，407，908，聚氧乙烯脂肪酸酯类，聚氧乙烯脂肪醇醚类，胆酸或去氧胆酸及其钠盐，甘胆酸钠，牛磺胆酸钠，去氧牛磺胆酸钠，胆固醇等中的一种或一种以上组合物；助乳化剂选自C14～C18的游离脂肪酸，包括油酸及其盐，亚油酸及其盐，亚麻油酸，硬脂酸及其盐，胆酸，去氧胆酸或其盐等中的一种或一种以上组合物；抗氧剂选自亚硫酸盐类，抗坏血酸，没食子酸丙酯，抗坏血酸棕榈酸酯，叔丁基对羟基茴香醚(BHA)，二叔丁基对甲酚(BHT)，维生素E，惰性气体，EDTA及其盐类等中的一种或一种以上组合物；等渗调节剂选自甘油、葡萄糖、氯化钠、山梨醇、木糖醇中的一种或一种以上组合物；pH调节剂选自氢氧化钠、磷酸钠、柠檬酸钠、盐酸、醋酸、磷酸、柠檬酸中的一种或一种以上组合物，pH范围为3.0～8.0；冻干保护剂选自蔗糖，乳糖，麦芽糖，葡萄糖，海藻糖，棉籽糖，果糖，己糖，山梨醇，木糖醇，甘露醇，氨基酸等中的一种或一种以上组合物。

3.根据权力要求1所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂的制备方法，其特征包括如下操作，均在充氮条件下执行。(1)称取处方量的尼莫地平，注射用油，乳化剂，助乳化剂，抗氧剂，40～85℃水浴中搅拌溶解，形成油相；(2)将等渗调节剂溶解在适量注射用水，加热搅拌至40～85℃，形成水相。(3)将油水两相混合，经高速剪切机剪切制成初乳；调解溶液的pH值，补加注射用水至规定体积；(4)经高压乳匀机循环乳匀熟遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌，充氮分装，灭菌，得到粒径范围在100～500nm，pH值为4.0～8.0的尼莫地平亚微乳注射液。(5)在制备好的尼莫地平亚微乳注射液中加入适量冻干保护剂，通过真空冷冻干燥方法得到注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

4.根据权力要求1所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂制备方法，其特征包括如下操作，均在充氮条件下执行。(1)称取处方量的尼莫地平，注射用油，50～85℃水浴中搅拌溶解，形成油相；(2)将乳化剂，助乳化剂，等渗调节剂，抗氧剂溶解在适量注射用水，加热搅拌至50～85℃，形成水相。(3)将油水两相混合，经高速剪切机剪切制成初乳；调节溶液的pII值，补加注射用水至规定体积；(4)经高压乳匀机循环乳匀数遍，达到规定粒度，经0.22μm滤膜过滤除菌、充氮分装、灭菌，得到粒径范围在100～500nm，pH值为4.0～8.0的尼莫地平亚微乳注射液；(5)在制备好的尼莫地平亚微乳注射液中加入适量冻干保护剂，通过真空冷冻干燥方法得到注射用尼莫地平冻干亚微乳剂。

5.根据权力要求1所述的尼莫地平亚微乳注射液，其特征在于所述的粒径范围为100nm～500nm，zeta电位的绝对值为10～60mV。

6.根据权利要求1所述的尼莫地平亚微乳注射液，其特征在于破乳离心后分离出油相、水相和磷脂膜相，其中油相中药物含量按重量百分比计算为40％～92％，水相中药物含量按重量百分比为0.1％～1.2％，磷脂膜相中药物含量按重量百分比为9％～60％。

7.根据权利要求1所述的尼莫地平亚微乳注射液，其特征在于所述的尼莫地平的包封率在85％以上，满足临床使用的药物包封率要求。

8.根据权利要求1所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于使用前可用生理盐水，5％葡萄糖溶液或林格溶液等生理相容性溶液进行稀释，在100秒钟内即可溶解，并且粒径和包封率没有明显变化。

9.根据权利要求1所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于与溶液配伍后，在48小时内稳定，未见药物晶体析出。

10.根据权利要求1所述的注射用尼莫地平冻干亚微乳剂，其特征在于具有缓慢释药特性，可增大单次给药剂量，减少临床给药次数。制剂中不含有机溶媒，临床应用无致敏及变态反应，无需使用特殊输液装置，提高了临床应用的顺应性。

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