CN101658528A - 玉米须多糖在制备治疗高血脂症的药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及玉米须多糖在制备治疗高血脂症的药物中的应用,属于医药领域,尤其是指玉米须多糖的新药物用途。玉米须多糖在制备治疗高血脂症或糖尿病伴高血脂症的药物中的应用。本发明的有益效果是:玉米须多糖为纯天然药物,在降低血糖的同时,还能够降低血脂,说明其降血糖机制不是单一环节,而是多方面、多靶点综合作用的结果,将其作为防治糖尿病及其并发症的药物开发具有重要的现实意义。增加植物资源的新用途;带动区域经济的发展。
Description
技术领域
本发明属于医药领域,尤其是指玉米须多糖的新药物用途。
背景技术
玉米须多糖的药理作用
1、调节免疫功能的作用
鲁彦等研究表明,玉米须多糖具有调节免疫功能的作用,多种多糖具有刺激巨噬细胞、B细胞、T细胞、自然杀伤细胞,增强其活性的作用;同时促进巨噬细胞分泌IL1、TNF、T淋巴细胞产生IL2;激活白细胞产生干扰素,调节抗体和补体生成等。郑鸿雁、闵伟红等也通过试验得出玉米须中具有免疫调节作用的成分为多糖。汤鲁宏等经过系统的筛选从玉米须中分离提取了具有免疫增强作用的生物活性成分。运用离子交换、分级沉淀、Sephrose柱层析等手段对成分进行了进一步的分离和纯化。初步的结构研究表明为多糖类化合物。Namba在小鼠被动皮肤过敏性反应试验中,证实玉米须提取物中分离出的糖蛋白于二硝基酚卵清蛋白(DVA)抗原对IgE的形成有抑制作用,说明此蛋白对I型过敏性疾病有效。鲁彦等研究玉米须水煎剂及其粗多糖对环磷酰胺所致免疫功能低下小鼠胸腺指数及胸腺DNA含量的影响,结果显示能提高免疫功能低下小鼠的胸腺指数及胸腺DNA含量;两者对小鼠胸腺指数及胸腺DNA含量的提高作用无差别。
2、抗肿瘤作用
吕冬霞等将玉米须多糖以不同浓度和时间作用于肝癌SMMC-7721细胞,采用MTT比色法观察细胞毒性,结果显示,玉米须多糖对SMMC-7721细胞的生长抑制具有剂量和时间依赖性,且凋亡细胞形态改变,说明玉米须多糖能抑制肝癌SMMC-7721细胞的增殖,诱导肝癌细胞凋亡。范晓艳等也将玉米须多糖以不同浓度和时间作用于肝癌SMMC-7721细胞,采用免疫组化法检测Caspase-3和p53的表达;分别观察制片后的Caspase-3和p53表达,发现经玉米须多糖(20~80mg/L)作用于SMMC-7721细胞,随着作用时间和剂量的增加,Caspase-3及p53的表达增高,表明玉米须多糖能诱导肝癌SMMC-7721细胞凋亡。
3、保肝作用
昌友权等研究了玉米须多糖对CCL4肝损伤小鼠的保护作用,表明玉米须多糖可增加肝脏GSH含量,提高GST活性;具有淬灭自由基、抗氧化、抑制肿瘤及护肝的作用;玉米须多糖对CYP450具有选择性抑制作用,阻止CCL4在肝微粒体内的代谢活化。
4、降糖作用
刘娟等研究了玉米须多糖对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠血糖的影响,发现玉米须多糖能够降低糖尿病小鼠血糖,促进肝糖元合成,加快糖异生;对糖尿病小鼠糖代谢器官损伤有修复作用。同时发现玉米须多糖对正常小鼠也有一定降糖作用。
5、利尿作用
窦传斌等采用代谢笼法和滤纸法测大、小鼠的排尿量及尿中Na+、K+、Cl-的含量;采用甘油致大鼠肾衰竭模型观察玉米须多糖对肾衰竭大鼠排尿的影响,发现玉米须多糖可明显增加大、小鼠的排尿量,增加尿液中K+、Cl-的含量,增加肾衰竭大鼠的排尿量,提示玉米须多糖具有明显的利尿作用。
6、解热作用
杜娟采用干酵母和2,4-二硝基苯酚致大鼠发热的模型观察玉米须多糖对大鼠发热的影响,发现玉米须多糖对大鼠干酵母混悬液致热和2,4-二硝基苯酚致热均有明显的解热作用,作用强度呈剂量依赖性。
7、利胆作用
杜娟采用胆管引流法分别收集并计量给药后0.5,1,1.5,2,2.5h后的胆汁量来观察玉米须多糖对肝脏分泌胆汁的影响,发现对大鼠胆囊分泌有明显的促进作用;采用测定小鼠胆囊重量的方法观察玉米须多糖对胆囊的影响,发现玉米须多糖能减轻胆囊重量,并推测其可能有加速小鼠胆囊收缩排空的作用。
8、延长胃排空时间和降低体重
杜娟等以黑色炭末为指示剂,以正常小鼠小肠炭末推进百分率、小鼠首次排黑便时间和数量为指标,观察玉米须多糖对小鼠肠运动的影响;以甲基橙为指示剂,以甲基橙残留率为指标,观察玉米须多糖对小鼠胃排空的影响;以美蓝为指示剂,以胃排空时间、肠内容物移动速度为指标,观察玉米须多糖对大鼠胃肠运动的影响,发现玉米须多糖能延长胃排空时间。杜娟等报道玉米须多糖具有降低动物体重的作用,并指出其可能的机制是增加血浆胆囊收缩素(CCK)含量,使胃排空时间延长,食欲降低,肠蠕动加速,排便数量增加有关。
玉米须水提取物有降血脂作用
Miura T报道玉米须水提物能够明显降低正常小鼠和实验小鼠血中胆固醇含量。对正常小鼠血中甘油三酯能够显著降低。对实验小鼠血中甘油三酯含量未影响。结果提示,玉米须水提物降胆固醇作用是由于阻止胆固醇在肝脏合成。
王大为观察玉米花丝饮品(CFB)对高脂血症鼠的降血脂作用,予末次给药16h除空白对照组外,所有各组小鼠每只均腹腔注射75%蛋黄生理盐水溶液0.5mL,并且开始饥饿;末次给药后1h测定血清TCHO及TG含量,取肝脏测MDA含量。结果:与模型组比较,CFB 7.00mL.kg-1组大鼠血清TCHO和TG含量有明显降低趋势(P<0.001),CFB各剂量组大鼠肝组织MDA含量明显降低(P<0.001,P<0.001,P<0.05),并呈现出一定的量效关系。与四氧嘧啶模型组比较,CFB 10.0mL.kg-1组小鼠血清TCHO和TG含量有明显降低趋势(P<0.01),CFB各剂量组小鼠肝脏组织MDA水平明显降低(P<0.001,P<0.001,P<0.05),并呈现出一定的量效关系。与蛋黄性模型组比较,CFB 10.0mL.kg-1组小鼠血清TCHO含量有明显降低趋势(P<0.01),CFB 10.0和5.0mL.kg-1组小鼠血清TG含量有明显降低趋势(P<0.01,P<0.05),CFB 10.0和5.0mL.kg-1组小鼠肝脏组织MDA水平明显降低(P<0.001,P<0.01)。
在降低TCHO和TG含量及小鼠肝脏MDA水平方面CFB 7.0mL.kg-1组优于康立舒胶囊组,CFB10.0mL.kg-1组优于排毒清脂胶囊组。结论:CFB对高脂血症鼠有明显的降血脂作用。
急性毒性
玉米须多糖小鼠急性毒性毒性太低,无法测得LD50;最大耐受量为45g/kg。
发明内容
本发明提供一种玉米须多糖在制备治疗高血脂症的药物中的应用,目的在于提供一种新型的降血脂药物,满足人们对该类药物的需要。
玉米须多糖在制备治疗高血脂症的药物中的应用
玉米须多糖在制备治疗糖尿病伴高血脂症的药物中的应用。
本发明玉米须多糖可采取常规方法或文献中记载的方法获得,优选为包括下列步骤:
①备料:选取无虫蛀、无霉变、新鲜的青玉米须为原料,洗净、干燥、粉碎,过40目筛,待用;
②脱脂:玉米须粉料加入95%乙醇,浸泡过夜,以除去脂溶性杂质,真空过滤,滤饼再用相同浓度乙醇处理一次,待用;回收乙醇;
③水提:将脱脂后的药材分料投入浸提器中,加入10~20倍量的的去离子水,搅拌,浸泡24h后,于80~90℃加热30min,提取3次,合并提取清液,待用;
④浓缩:把浸提清夜投入真空旋转蒸发仪中浓缩,减压、低温浓缩至料液原体积1/5,得浓缩液,待用;
⑤脱色:把浓缩液投入脱色釜中,在搅拌下加入浓度为20~30%的双氧水,混合均匀,加热,脱色时间2h,加热温度50℃,趁热过滤,得脱色液,加热回去残留双氧水,待用;
⑥醇析:把脱色液投入醇析釜中,加入适量的95%乙醇,使料液中乙醇浓度为70%~75%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑦除杂:把玉米须多糖加适量去离子水或蒸馏水溶解,加木瓜蛋白酶,酶底比1.0%、pH值5.5、体系在水浴中水解1.5h,温度为40℃,反应完后沸水浴灭酶10min;离心,除沉淀,待用;
⑧透析:把玉米须多糖澄清液装入透析袋中,用去离子水或蒸馏水透析48h,以去除无机盐、低分子量杂质,透析处理后,取出透析内液,待用;
⑨醇析:把脱透析液投入醇析釜中,加入95%乙醇、使料液中乙醇浓度为75%~85%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑩干燥:把玉米须多糖沉析物至真空干燥箱中,干燥,过100目筛,得玉米须多糖。
所得干燥物用α-萘酚、茚三酮鉴定为多糖、用苯酚硫酸法进行含量测定。每克玉米须纯化多糖(含量40~50%以上)相当于玉米须80~100g。
本发明药物可以采用中药制剂的常规方法制备成任何常规内服制剂、注射剂。
本发明专利的有益效果是:
1、多糖的提取方法很多,但在提取过程中都有蛋白质伴随产生。传统的除蛋白方法有机溶剂的消耗量大,多糖损失严重,并存在废液处理等问题。应用蛋白酶除多糖中的杂蛋白是一种反应温和,操作相对简单且对多糖活性影响较小的方法,使多糖的纯化过程高效、安全。
2、玉米须多糖为纯天然药物,在降低血糖的同时,还能够降低血脂,说明其降血糖机制不是单一环节,而是多方面、多靶点综合作用的结果,将其作为防治糖尿病及其并发症的药物开发具有重要的现实意义。
3、增加植物资源的新用途 玉米须现阶段作为废弃物被白白扔掉,作为药用资源对其研究亦甚少,属未开发利用品种。将玉米须总多糖开发成糖尿病伴有高血脂的降糖制剂是对中草药资源的有效利用。
4、带动区域经济的发展 吉林省是玉米的主产区之一,可年产玉米须90万吨,现阶段还未进行有效的利用,由于降糖降脂药物临床需求量较大,必将带动区域产业经济的发展。
本发明制成的药物降血脂作用显著。服用剂量可以根据服用方式,病人的年龄和体重及病情严重程度和其它类似的因素而改变,口服量为:1.5~30g/日·人,每日分一~三次服用。
具体实施方式
下面通过药效学实验进一步验证本发明。
(一)玉米须多糖对单纯高血脂大鼠降血脂作用
1材料与仪器
1.1动物
Wistar大鼠,雄性,体重120~160g(吉林大学实验动物中心提供合格证号:医动字第10-5112)。
1.2实验仪器
1.DY89-I型电动玻璃匀浆机 宁波新芝科器研究所
2.LG16-W低温高速离心机 北京医用离心机厂
3.LDZ5-2型普通离心机 北京医用离心机厂
4.754型紫外分光光度计 山东高密彩虹分析仪器厂
5.DR-HW-1电热恒温水温箱 北京西城区医疗器械厂
6.YKH-II型液体快速混合器 江西医疗器械厂
7.LBY-N6A自清洗旋转式粘度计 北京普利生
8.GAMMA matic II型Γ计数器 瑞士KONTRON公司
1.3主要试剂与药品
1.玉米须多糖 按本发明实施例2方法所得。
2.胆固醇 上海新兴化工研究所 批号:090108
3.胆酸钠 德国SIGMA产品 批号:081009
4.丙硫氧嘧啶片 上海复星朝辉药业 批号:090715
5.洛伐他汀(胶囊) 江苏大洋制药 批号:090101
6.6-Keto-PGF1α药盒 解放军总院科技放免所 批号:090128
7.TXB2放免药盒 解放军总院科技放免所 批号:091021
8.戊巴比妥钠 中国上海 批号:080612
2.实验方法
2.1高脂血症模型的复制方法
2.1.1高脂饲料的配方
1%胆固醇、0.2%丙硫氧嘧啶、0.5%胆酸钠、2%猪油、5%黄豆、0.5%蛋清、0.5%鱼粉、2%蛋黄粉、88.3%基础饲料
2.1.2给食方法
高脂饮食组于给药前15天开始,每晚6~7时给予高脂饲料,每只鼠平均20g,白天补充足量的普通饲料。第16天起,按照组别给予药物,同时按上述方法给予高脂饲料,继续饲养21天。
2.2动物分组、给药方法
Wistar雄性大白鼠72只,体重120~160g,随机分成6组,每组12只。其中1组为空白对照组,其余为高脂饮食组,分别给予普通饲料和高脂饲料15天,第15天采血测血脂,再按血脂水平将高脂饮食组随机分为5组。
1.空白对照组 普通饲料 蒸馏水10ml/kg/d
2.模型对照组 高脂饲料 蒸馏水10ml/kg/d
3.小剂量组 高脂饲料 玉米须多糖0.5g/kg/d
4.中剂量组 高脂饲料 玉米须多糖1g/kg/d
5.大剂量组 高脂饲料 玉米须多糖2g/kg/d
6.阳性对照组 高脂饲料 洛伐他汀30mg/kg/d
每天上午8:00~9:00灌胃给药1次,共21天。杀鼠前一晚,动物禁食不禁水。杀鼠当日上午,将动物用3%戊巴比妥钠30mg/kg腹腔麻醉,腹主动脉采血,并取肝脏。
2.3血样与组织样的采集与制备
(1)腹主动脉采血2ml,静置分离血清,测定TC、TG、HDL、LDL。
(2)腹主动脉采血1ml用1%肝素抗凝测定全血粘度。
(3)腹主动脉采血1.5ml用EDTA·2Na抗凝3000r/min离心10min分离血浆,用放免法测定PGI2和TXA2。
(4)取部分肝脏,置12%甲醛溶液中固定,病理切片观察肝组织中脂肪沉积情况。
2.4观测指标及测定方法
(1)测定血清TG、HDL-c、LDL-c、TC,计算动脉硬化指数(AI)。用酶学法测定分析TC、TG等的原理是:通过特殊氧化酶使底物生成过氧化氢,然后经过过氧化酶使它们结合成生色团。因生色团生成量可用比色法进行测定,所以产生的颜色与分析物的量成正比例。据此先绘已知分析物量的标准曲线,然后进行待测分析物的测定。测定TG、HDL-c、LDL-c、TC后,通过TC及HDL-c计算AI,AI=(TC-HDL-c)/HDL-c。
(2)全血粘度测定:取经1%肝素抗凝的全血1ml,加入EBY-N6A自清洗旋转式粘度计测定全血低切(10/S)、中切(80/S)、高切(160/S)粘度。
(3)PGI2及TXA2的测定:取用EDTA·Na2抗凝分离出的血浆,根据解放军总医院科技开发中心放免所提供的6-Keto-PGF1α及TXB2放免盒说明书用放免法测定6-Keto-PGF1α(代表PGI2)及TXB2(代表TXA2)的含量。
(4)取1/2肝脏置12%甲醛液中固定,进行病理观察。
2.5统计方法
实验数据以均值±标准差(X±S)表示,采用组间差异比较的差异性t检验进行统计分析。
2.6实验结果
2.6.1玉米须多糖对实验性高脂血症大鼠血脂代谢的影响
与空白对照组比较,模型对照组可见血清TC、TG、LDL-c及AI含量明显升高(p<0.001),HDL-c含量明显下降(p<0.01),表明大鼠高脂血症模型复制成功。与模型对照组相比,玉米须多糖中剂量组和大剂量组可明显降低血清TC、TG、LDL-c及AI(p<0.05或p<0.01),升高HDL-c(p<0.05或p<0.01),见表1、2
表1.玉米须多糖对高血脂大鼠血脂TG、TC和LDL-c的影响(x±s,n=10)
与模型组比*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,
表2.玉米须多糖对高血脂大鼠动脉硬化指数的影响(x±s,n=10)
与模型组比*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001
2.6.2玉米须多糖对实验性高脂血症大鼠PGI2、TXB2及PGI2/TXA2的影响
与模型对照组相比,玉米须多糖中剂量组和大剂量组可明显升高血清PGI2、含量,(p<0.05或p<0.01),降低TXB2的含量(p<0.05或p<0.01),提高PGI2/TXA2的的比值。见表3。
表3.玉米须多糖对高血脂大鼠PGI2、TXB2及PGI2/TXA2的影响(x±s,n=10)
与模型组比*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001,
2.6.3玉米须多糖对高血脂大鼠血粘度的影响
高脂对照组与正常对照组比较,全血低切、中切及高切粘度均明显增加(P<0.05),表明高脂血症大鼠伴有血液流变学的改变。与高脂对照组比较,中剂量组和大剂量组明显降低高脂血症大鼠全血低、中、高切粘度(P<0.05或P<0.01)。小剂量组能明显降低高脂血症大鼠全血低切粘度(P<0.05),见表4。
表4.玉米须多糖对高血脂大鼠血粘度的影响(x±s,n=10)
与模型组比*p<0.05,**p<0.01,
2.6.4玉米须多糖对实验性高脂血症大鼠肝脏的保护作用
对各组大鼠肝脏进行病理观察,结果如下:
(1)空白对照组:肝小叶结构清楚,肝细胞围绕小叶中央静脉呈放射状,汇管区见少许淋巴细胞。个别动物汇管区炎细胞浸润明显,肝小叶偶见坏死灶及炎细胞浸润,有的肝细胞内淤血。
(2)模型对照组:肝细胞可见灶状分布的肝细胞变性、坏死区。肝细胞呈明显的水样变性及脂变。坏死区炎细胞浸润明显,并见出血及纤维蛋白的渗出
(3)小剂量组:肝小叶中央区肝细胞脂变明显,部分肝细胞胞浆疏松化。炎细胞浸润灶,多数肝细胞变性及坏死明显
(4)中剂量组:肝小叶近中央区肝细胞脂变,亦见肝细胞胞浆呈现疏松化。部分动物肝脏可见有明显炎细胞浸润及坏死灶。
(5)大剂量组:仅少数动物肝细胞脂变明显,并见胞浆疏松化及炎细胞浸润。多数动物肝细胞脂变程度轻,炎症反应不甚明显。个别动物肝脏内有坏死灶。
(6)阳性药组:部分肝细胞表现为弥漫脂肪变性及胞浆疏松化,并见肝细胞灶状坏死及炎细胞浸润。
通过形态学观察,可见给ACE药物组肝细胞脂变程度有所减轻,且有随剂量的增大而作用效果更明显的趋势。由此可见,ACE可降低大鼠肝脂肪蓄积,对减轻和防止肝脏的脂肪性具有一定作用。
(二)玉米须多糖对糖尿病伴高血脂小鼠作用
1实验材料
1.1动物
昆明小鼠100只,雌雄各半,体重18~22g,由长春高新医学动物研究中心提供,生产许可证号:SCXK-(吉)2003-0004。实验前适应性饲养至少7d,所有动物均自由取食和饮水。
1.2试剂
格列吡嗪(扬子江药业有限公司,批号:20070712)临用时用0.5%CMC配成0.03%混悬液;四氧嘧啶(sigma公司,批号:A7413)临用时用生理盐水配成0.4%的溶液;正丁醇(北京化工厂,化学纯,批号:20080214);乙醇(吉林市龙潭试剂厂,医药用,批号:20080407);蒽酮(国药集团化学试剂有限公司,批号:20071127);硫脲(沈阳试剂厂,批号:930208)。
1.3供试药物
玉米须,2007年10月在吉林省吉林市郊区采集,经吉林大学药学院王广树教授鉴定为玉蜀黍玉米(Zea mays L)甜粘1号的干燥花柱和柱头。
玉米须多糖制备:同前。
临用前用去离子水配成2g(干膏)/100mL的溶液,置冰箱内贮藏,临用前摇匀。
1.4仪器
血糖仪 长沙三诺生物传感技术有限公司,三诺SXT-1型;血糖试纸 20080210;分析天平 上海精密科学仪器有限公司 FA2004N;紫外分光光度法 山东高密彩虹分析仪器有限公司 752N;Olympus显微镜BX51。
2方法与结果
2.1实验方法
2.1.1建立小鼠高血糖模型
本实验采用以尾静脉注射四氧嘧啶的方法造小鼠高血糖模型。造模前,小鼠常规饲养3d后,测量小鼠空腹血糖值,即为小鼠给药前血糖值;禁食不禁水12h后,以给药体积为20mL/kg尾静脉注射(iv)0.4%的四氧嘧啶生理盐水溶液,即:80mg/kg。造模后常规饲养72h,尾静脉取血,测定造模后小鼠的血糖值(测量前禁食不禁水12h)。选择血糖值高于11.1mmol/L的小鼠为高血糖模型小鼠。
2.1.2分组给药
取70只造模成功的小鼠,根据血糖值和体重随机分组,即:模型组、阳性药组、玉米须纯化多糖低、中、高剂量组,每组10只,另随机取10只小鼠(未造模)作为空白组,给药方案如表5:
表5给药方案
以上各组均灌胃(ig)给药,给药体积为20mL/kg,每天一次,连续给药30d。
2.1.3相关指标的测定
给药第10d、20d时,尾静脉取血,测定药后1h空腹血糖值,即为给药第10d、20d给药后空腹血糖值;末次药后1h尾静脉取血,测定空腹血糖值,即为给药第30d的药后空腹血糖值;摘眼球取血,离心取血清,测定血清中CHO、TG含量(在吉化总医院用半自动生化分析仪测定)。
2.2实验结果
以下所有结果均采用Excel进行组间差异性t检验,结果以均值±标准差(x±s)表示。
2.2.1玉米须多糖对小鼠血糖的影响
与空白组比较,模型组第0d、10d、20d和30d的血糖均显著升高(P<0.05),表明小鼠高血糖模型成功;与模型组比较,阳性药组第20d和30d血糖值降低(P<0.05),纯化多糖中剂量组和大剂量组第30d血糖值降低(P<0.05),结果见表6。
表6玉米须多糖对小鼠血糖的影响(x±s,n=10)
与空白组比较,*P<0.05;与模型组比较,#P<0.05
2.2.2玉米须多糖对小鼠血清胆固醇和甘油三酯的影响
与空白组比较,模型组小鼠血TG水平显著升高(P<0.05),表明高血糖小鼠伴有明显血脂异常;与模型组比较,纯化多糖大剂量组高血糖小鼠血中CHO和TG水平显著降低(P<0.05),结果见表7。
表7玉米须多糖对小鼠胆固醇和甘油三酯的影响(x±s,n=10)
与空白组比较,*P<0.05;与模型组比较,#P<0.05
实施例1
本发明的制备方法:
①备料:选取无虫蛀、无霉变、新鲜的青玉米须为原料,洗净、干燥、粉碎,过40目筛,待用;
②脱脂:玉米须粉料加入95%乙醇,浸泡过夜,以除去脂溶性杂质,真空过滤,滤饼再用相同浓度乙醇处理一次,待用;回收乙醇;
③水提:将脱脂后的药材分料投入浸提器中,加入10倍量的的去离子水,搅拌,浸泡24h后,于80℃加热30min,提取3次,合并提取清液,待用;
④浓缩:把浸提清夜投入真空旋转蒸发仪中浓缩,减压、低温浓缩至料液原体积1/5,得浓缩液,待用;
⑤脱色:把浓缩液投入脱色釜中,在搅拌下加入浓度为20%的双氧水,混合均匀,加热,脱色时间2h,加热温度50℃,趁热过滤,得脱色液,加热回去残留双氧水,待用;
⑥醇析:把脱色液投入醇析釜中,加入适量的95%乙醇,使料液中乙醇浓度为70%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑦除杂:把玉米须多糖加适量去离子水或蒸馏水溶解,加木瓜蛋白酶,酶底比1.0%、pH值5.5、体系在水浴中水解1.5h,温度为40℃,反应完后沸水浴灭酶10min;离心,除沉淀,待用;
⑧透析:把玉米须多糖澄清液装入透析袋中,用去离子水或蒸馏水透析48h,以去除无机盐、低分子量杂质,透析处理后,取出透析内液,待用;
⑨醇析:把脱透析液投入醇析釜中,加入95%乙醇、使料液中乙醇浓度为75%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑩干燥:把玉米须多糖沉析物至真空干燥箱中,干燥,过100目筛,得玉米须多糖。
实施例2 本发明的制备方法:
①备料:选取无虫蛀、无霉变、新鲜的青玉米须为原料,洗净、干燥、粉碎,过40目筛,待用;
②脱脂:玉米须粉料加入95%乙醇,浸泡过夜,以除去脂溶性杂质,真空过滤,滤饼再用相同浓度乙醇处理一次,待用;回收乙醇;
③水提:将脱脂后的药材分料投入浸提器中,加入15倍量的的去离子水,搅拌,浸泡24h后,于85℃加热30min,提取3次,合并提取清液,待用;
④浓缩:把浸提清夜投入真空旋转蒸发仪中浓缩,减压、低温浓缩至料液原体积1/5,得浓缩液,待用;
⑤脱色:把浓缩液投入脱色釜中,在搅拌下加入浓度为25%的双氧水,混合均匀,加热,脱色时间2h,加热温度50℃,趁热过滤,得脱色液,加热回去残留双氧水,待用;
⑥醇析:把脱色液投入醇析釜中,加入适量的95%乙醇,使料液中乙醇浓度为72%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑦除杂:把玉米须多糖加适量去离子水或蒸馏水溶解,加木瓜蛋白酶,酶底比1.0%、pH值5.5、体系在水浴中水解1.5h,温度为40℃,反应完后沸水浴灭酶10min;离心,除沉淀,待用;
⑧透析:把玉米须多糖澄清液装入透析袋中,用去离子水或蒸馏水透析48h,以去除无机盐、低分子量杂质,透析处理后,取出透析内液,待用;
⑨醇析:把脱透析液投入醇析釜中,加入95%乙醇、使料液中乙醇浓度为80%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑩干燥:把玉米须多糖沉析物至真空干燥箱中,干燥,过100目筛,得玉米须多糖。
实施例3本发明的制备方法:
①备料:选取无虫蛀、无霉变、新鲜的青玉米须为原料,洗净、干燥、粉碎,过40目筛,待用;
②脱脂:玉米须粉料加入95%乙醇,浸泡过夜,以除去脂溶性杂质,真空过滤,滤饼再用相同浓度乙醇处理一次,待用;回收乙醇;
③水提:将脱脂后的药材分料投入浸提器中,加入20倍量的的去离子水,搅拌,浸泡24h后,于90℃加热30min,提取3次,合并提取清液,待用;
④浓缩:把浸提清夜投入真空旋转蒸发仪中浓缩,减压、低温浓缩至料液原体积1/5,得浓缩液,待用;
⑤脱色:把浓缩液投入脱色釜中,在搅拌下加入浓度为30%的双氧水,混合均匀,加热,脱色时间2h,加热温度50℃,趁热过滤,得脱色液,加热回去残留双氧水,待用;
⑥醇析:把脱色液投入醇析釜中,加入适量的95%乙醇,使料液中乙醇浓度为75%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑦除杂:把玉米须多糖加适量去离子水或蒸馏水溶解,加木瓜蛋白酶,酶底比1.0%、pH值5.5、体系在水浴中水解1.5h,温度为40℃,反应完后沸水浴灭酶10min;离心,除沉淀,待用;
⑧透析:把玉米须多糖澄清液装入透析袋中,用去离子水或蒸馏水透析48h,以去除无机盐、低分子量杂质,透析处理后,取出透析内液,待用;
⑨醇析:把脱透析液投入醇析釜中,加入95%乙醇、使料液中乙醇浓度为85%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑩干燥:把玉米须多糖沉析物至真空干燥箱中,干燥,过100目筛,得玉米须多糖。
所得干燥物用α-萘酚、茚三酮鉴定为多糖、用苯酚硫酸法进行含量测定。每克玉米须纯化多糖(含量40~50%以上)相当于玉米须80~100g。
实施例4本发明胶囊剂的制备
玉米须多糖10.0g,药用淀粉240g,二者充分混合,装胶囊,制成1000粒胶囊,每粒重0.25g,含玉米须多糖10mg。
Claims (3)
1、玉米须多糖在制备治疗高血脂症的药物中的应用。
2、玉米须多糖在制备治疗糖尿病伴高血脂症的药物中的应用。
3、如权利要求1或2所述的药物中应用,其特征在于玉米须多糖的制备方法包括下列步骤:
①备料:选取无虫蛀、无霉变、新鲜的青玉米须为原料,洗净、干燥、粉碎,过40目筛,待用;
②脱脂:玉米须粉料加入95%乙醇,浸泡过夜,以除去脂溶性杂质,真空过滤,滤饼再用相同浓度乙醇处理一次,待用;回收乙醇;
③水提:将脱脂后的药材分料投入浸提器中,加入10~20倍量的的去离子水,搅拌,浸泡24h后,于80~90℃加热30min,提取3次,合并提取清液,待用;
④浓缩:把浸提清夜投入真空旋转蒸发仪中浓缩,减压、低温浓缩至料液原体积1/5,得浓缩液,待用;
⑤脱色:把浓缩液投入脱色釜中,在搅拌下加入浓度为20~30%的双氧水,混合均匀,加热,脱色时间2h,加热温度50℃,趁热过滤,得脱色液,加热回去残留双氧水,待用;
⑥醇析:把脱色液投入醇析釜中,加入适量的95%乙醇,使料液中乙醇浓度为70%~75%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑦除杂:把玉米须多糖加适量去离子水或蒸馏水溶解,加木瓜蛋白酶,酶底比1.0%、pH值5.5、体系在水浴中水解1.5h,温度为40℃,反应完后沸水浴灭酶10min;离心,除沉淀,待用;
⑧透析:把玉米须多糖澄清液装入透析袋中,用去离子水或蒸馏水透析48h,以去除无机盐、低分子量杂质,透析处理后,取出透析内液,待用;
⑨醇析:把脱透析液投入醇析釜中,加入95%乙醇、使料液中乙醇浓度为75%~85%(V/V),搅拌、混合均匀,静止于冰箱中,醇析过夜,离心分离,收集液相回收乙醇,得沉析物为玉米须多糖,待用;
⑩干燥:把玉米须多糖沉析物至真空干燥箱中,干燥,过100目筛,得玉米须多糖。
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