CN109985086B - 青钱柳叶速溶粉及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开一种青钱柳叶速溶粉，该速溶粉为青钱柳叶经热水浸提后，提取液进行过滤、浓缩、离心、杀菌，得药液，药液经冷冻干燥或喷雾干燥，得到的速溶粉。该青钱柳叶速溶粉具有粉体细腻，易溶于水，冷溶性好，茶汤澄清透明，没有茶渣及青臭味，冲饮携带方便，降血糖作用明显等优点。本发明还公开了该速溶粉的制备方法，该制备方法具有生产效率高，成本低，可操作性强，适合工业化大生产，在制备过程中极大程度上保留了青钱柳叶的降血糖、降血脂等功效成分，同时去除其本身的一些不良气味等优点。

Description

青钱柳叶速溶粉及其制备方法
技术领域
本发明属于食品、保健食品、药品领域，具体涉及一种青钱柳叶速溶粉的制备方法。
背景技术
随着人们生活水平的不断提高以及饮食结构的变化，糖尿病患者逐年增多，糖尿病已经成为继心血管疾病和肿瘤后威胁人类的“第三号杀手”，预防和治疗糖尿病已成为全球性的问题。目前临床上有不少疗效较好的药物用于治疗糖尿病，但因对人体的副作用较大，且某些药物不能有效控制各类并发症的发生，故不能作为长期应用的首选。而传统中医药在治疗糖尿病时具有显著改善临床症状与体征，不良反应少且轻等优势。因此，中药治疗糖尿病引起了人们越来越多的关注。
青钱柳Cyclocarya paliurus(Batal.)Iljinsk.系胡桃科(Juglaruiaceae)青钱柳属植物，广泛分布于江苏、江西、安徽、广西、浙江、湖南、贵州、福建、台湾、四川、湖北、云南和湖北等地，多生于海拔420-2500米的山区、溪谷、林缘、林内或石灰岩土地《中国植物志》。据《中国中药资源志要》记载，青钱柳叶具有清热消渴解毒、生津解暑止渴、消炎止痛消肿、补肾等防病治病功效。长期以来，民间用其叶片泡茶饮用历史悠久，味道甘甜，被誉为“甜茶”、“神药”。有药理实验表明，青钱柳叶煎剂68.0g/L(相当于4300mg/kg)及以下剂量对大鼠未见明显母体毒性作用和胚胎毒性作用，无致畸作用，可见其安全性极高，国家卫计委于2013 年10月30日将青钱柳叶批准为新食品原料。
速溶茶粉是以茶叶为原料，通过现代新技术、方法将茶叶中的有效成分提取、加工制备而得植物提取物。其保留了传统茶叶中具有能够进入茶汤的营养成分和风味物质、具有茶对人体的一切功效，同时还具有饮用方便、水溶性好、无需去渣，相对体积或重量小、便于携带，易保存运输、不含有害物质等特点，符合现代快节奏生活的需要，因而越来越受到消费者的青睐。由于青钱柳叶具有缓解疲劳、降脂、增强免疫力、抗衰老、降压、抗菌、抗肿瘤等功效，目前市面上已有不少以青钱柳叶等多种茶叶或中药材作为原料加工制备而成的保健速溶茶粉，其原料提取方法多以沸水煎煮或者辅以加压、加入复合酶酶解、超声等方法辅助提取，存在生产成本高、效率低，青钱柳叶中的有效成分在一定程度上被破坏，从而难以保证其功效以及产品冷溶性不良，茶汤易混浊和沉淀，青臭味大让人难以接受等问题。
以上背景技术内容的公开仅用于辅助理解本发明的发明构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。
发明内容
本发明的目的在于提供青钱柳叶速溶粉及其制备方法，以解决以上现有技术中存在的不足。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：
.一种青钱柳叶速溶粉，该速溶粉为青钱柳叶经50-70℃热水浸提后，提取液进行过滤、浓缩、离心、杀菌，得药液，药液经冷冻干燥或喷雾干燥，得到的速溶粉。
一种以上所述的青钱柳叶速溶粉的制备方法，包括以下步骤：
R1.将青钱柳叶进行除杂，清洗后，干燥；
R2.干燥后的青钱柳叶加水，加热至50-70℃浸提，得到浸提液；
R3.将浸提液通过陶瓷膜进行微滤，得滤液；
R4.将滤液通过组合膜浓缩，得第一次浓缩液；
R5.将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，取上清液，进行第二次浓缩，得第二次浓缩液；
R6.将第二次浓缩液送至缓冲罐内，杀菌；
R7.杀菌后，冷冻干燥或喷雾干燥，分装，即得。
进一步的，以上所述的青钱柳叶速溶粉的制备方法：
所述步骤R1中干燥的温度为50-80℃；
所述步骤R2中浸提步骤料液比为1:8-1:14，浸提时间为1-3h；
所述步骤R3中过滤压力为0.5-2.5MPa，过滤温度为35-55℃；
所述步骤R4中浓缩压力为12-17MPa，浓缩温度为26-39℃，所得第一次浓缩液含固量为0.7-2.8％；
所述步骤R5中离心转速为14000rpm/min，离心时间为30min；所述第二次浓缩压力为 13-17MPa，浓缩温度为19-36℃，所得第二次浓缩液含固量为0.9-4.2％；
所述步骤R6中杀菌温度为85-100℃，杀菌时间为30-60min；
所述步骤R7中冷冻干燥温度为(-35)-(-55)℃，真空度为50-100Pa，干燥时间为36-60h；喷雾干燥进风温度为230-250℃，进样速率为30-90rpm/min，鼓风频率为20-60Hz。
以上所述的用于辅助降血糖的青钱柳速溶粉的应用，所述速溶粉在制备防治糖尿病的食品、保健食品及药品方面的应用。
本发明的有益效果在于：
1、本发明提供的青钱柳叶速溶粉具有粉体细腻，易溶于水，4-80℃冷热溶解性好，茶汤澄清透明，有淡淡的清香味，没有茶渣及青臭味，口感爽滑、微甜，冲饮携带方便，药效学实验表明降血糖作用明显，还有降血脂等作用。青钱柳叶为国家批准的新食品原料，本发明利用现代先进的制剂工艺技术，提取青钱柳叶中的活性成分，制备成具有降血糖、降血脂、降血压作用的速溶制剂，绿色营养健康，具有广泛的市场需求前景。
2、本发明提供的青钱柳叶速溶粉的制备方法，没有糊精、可溶性淀粉等任何辅料添加，所得产品流动性好，无结块，易分装，所制得产品为高品质的速溶茶。可直接加冷水、凉水、温水或热水冲饮，也可加入牛奶或其他果汁饮料中混合饮用，混合后易溶解，没有沉淀现象。
3、本发明提供的青钱柳叶速溶粉的制备方法，具有生产效率高，成本低，可操作性强，适合工业化大生产等优点，而且在制备过程中极大程度上保留了青钱柳叶的降血糖、降血脂等功效成分，同时去除其本身的一些不良气味。
附图说明
图1本发明各组小鼠治疗前和治疗后FBG值的比较
图2本发明青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠糖耐量的影响
图3本发明青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠T-CHO、TG和LDL-C的影响
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述，但不限制本发明的保护范围和应用范围。
一、工艺研究
1.仪器与试药
(1)仪器Waters e2695高效液相色谱仪(沃特世科技(上海)有限公司)；BS224S电子天平(北京赛多利斯系统仪器有限公司)；SHB-B95型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；101-2型电热鼓风干燥箱(北京科伟永兴仪器有限公司)；TGL-16G高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；UPC-II-10T超纯水器(四川优普超纯科技有限公司)；KQ5200B型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HHS型电热恒温水浴锅(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)。
(2)试药异槲皮苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号：111809-201403)；甲醇(色谱纯，美国Fisher公司；磷酸(分析纯，成都市科龙化工试剂厂，批号：20161202)；青钱柳叶购自广西玉林药市，由广西中医药大学宁小清高级实验师鉴定。
2.考察指标及方法
(1)异槲皮苷含量测定
①色谱条件与系统适应性
色谱柱：ODS-3(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇为流动相A，以0.2％磷酸为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；检测波长为360nm；进样量：20μl，理论板数按异槲皮苷计算应不低于3000。
表1流动相梯度洗脱表
Figure BDA0002013039500000041
②溶液的制备
对照品溶液的制备：取异槲皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含235.60μg 的溶液，摇匀，即得。
(2)干膏率的测定
精密吸取提取液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105℃干燥至恒重，移置干燥器中冷却30min，迅速精密称定重量，计算干膏率。
Figure BDA0002013039500000042
(3)感官评价考察：室温下，初步考察色泽、风味、口感等感官指标。
3.实验方法与结果
(1)提取方式考察
取青钱柳叶4份，每份约50g，精密称定，加水500ml提取，分别采用煎煮、加热回流、浸提(30℃)、浸提(60℃)方式，分别提取两次，每次1h，滤过，合并滤液，定容至 1000ml，摇匀，按照上述方法分别考察每份样品中异槲皮苷含量、干膏率及感官评价。结果见表2。
表2提取方式考察结果表
Figure BDA0002013039500000051
从表中数据分析，煎煮、加热回流方式提取，干膏率均很高，但溶解性、感官评价考察不好。浸提方式提取，感官评价考察结果较好：溶液澄清；无不良气味；微甜；但温度对异槲皮苷含量、干膏率的影响较大，综合考虑，选择浸提方式，进一步考察相关参数。
(2)浸提温度考察
取青钱柳叶5份，每份约50g，精密称定，加水500ml浸提，浸提温度分别为：40℃、50℃、70℃、80℃、90℃，分别提取两次，每次1h，滤过，合并滤液，定容至1000ml，摇匀，按照上述方法分别考察每份样品中异槲皮苷含量、干膏率及感官评价。结果见表3。
表3浸提温度考察结果表
Figure BDA0002013039500000052
从表中数据分析，随着温度升高，干膏率呈增长趋势，异槲皮苷含量先增后降；另外随着温度升高，但溶解性、感官评价考察不好，出现溶液混浊、有青臭味、微苦涩等，推测高温提取出其他成分或化学成分发生相互反应。综合考虑，选择50-70℃浸提方式，进一步考察相关参数。
(3)加水倍量的考察
取青钱柳叶7份，每份约50g，精密称定，分别加入6倍、7倍、8倍、10倍、12倍、14倍、16倍量水，分别60℃浸提两次，每次1h，滤过，合并滤液，定容至1600ml，摇匀，按照上述方法分别考察每份样品中异槲皮苷含量、干膏率及感官评价。结果见表4。
表4加水倍量考察结果
Figure BDA0002013039500000061
从表中数据分析，随着加水倍量的增大，异槲皮苷含量和干膏率都相应升高后稍降低，综合考虑能耗成本，加水倍量考察范围确定为8-12倍。
(4)提取时间的考察
取青钱柳叶5份，每份约50g，精密称定，分别加入10倍量水，浸提两次，每次浸提时间分别为0.5h、1.0h、2h、3h、4h，滤过，合并滤液，定容至1000ml，摇匀，按照上述方法分别考察每份样品中异槲皮苷含量、干膏率及感官评价。结果见表5。
表5提取时间考察结果
Figure BDA0002013039500000062
从表中数据可以看出，随着提取时间的增加，异槲皮苷含量先增后降，干膏率随时间增长而增加，其中提取2h异槲皮苷含量最高，提取3h和4h异槲皮苷含量有所下降，提取4h出现“溶液轻微浑浊；有青臭味；微苦涩”现象，综合考虑选择1-3h作为提取时间的考察范围。
(5)正交试验法优选青钱柳叶的最佳提取工艺
①正交设计
根据初步考察实验结果，综合实际生产情况，运用L9(34)正交设计试验的方法，以加水倍量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)为考察因素，以异槲皮苷含量、干膏率为检测指标，来优化提取工艺条件，提取方法为60℃浸提，另对提取液进行感官评价考察。正交因素水平表及实验安排表见表6、表7，方差分析结果见表8。
表6提取工艺正交试验因素水平表
Figure BDA0002013039500000071
表7提取工艺正交试验结果表
Figure BDA0002013039500000072
表8提取工艺方差分析结果表
Figure BDA0002013039500000081
F0.05(2,2)＝19.000
以异槲皮苷含量为评价指标，由表7中极差R值大小显示，各因素作用主次为C>B>A；方差分析结果表明：A、B、C三个因素的影响均对青钱柳叶提取效果有显著性意义(P<0.05)，以为A3B1C2为佳；以干膏率为评价指标，由表7中极差R值大小显示，各因素作用主次为 C>B>A；方差分析结果表明：B和C因素的影响对青钱柳叶提取效果有显著性意义(P<0.05)，A因素对青钱柳叶提取效果无显著性意义(P>0.05)，以为A2B2C3为佳。各提取液进行感官评价考察结果为：溶液澄清；无不良气味；微甜。
②验证试验
由于优选工艺A3B1C2未包括在9次实验中，需对其进行试验，并与优选工艺A2B2C3进行比较。结果见表9。
表9最佳提取工艺验证试验结果表
Figure BDA0002013039500000082
各提取液进行感官评价考察结果为：溶液澄清；无不良气味；微甜。由表9可见，以异槲皮苷含量为评价指标，A3B1C2>A2B2C3，以干膏率为评价指标，A2B2C3>A3B1C2，考虑到异槲皮苷含量为本次正交试验的重点，且从减少能耗、提高浓缩效率以及更符合大生产的需要等方面综合考虑，故确定A3B1C2为青钱柳叶的最佳提取工艺，即加水倍量为12倍，提取两次，每次提取1h。
(6)浓缩工艺考察
取A3B1C2提取液，滤过后，滤液分别采用常压浓缩、减压浓缩(60℃)、组合膜浓缩(浓缩压力为15MPa，浓缩温度为30℃，膜孔径200nm)方式，得浸膏。以异槲皮苷含量及感官评价来考察浓缩工艺，实验结果见表10。
表10浓缩工艺的实验研究结果表
Figure BDA0002013039500000091
实验结果表明，减压浓缩和常压浓缩有效成份均有较大损失，且出现“溶液浑浊；有青臭味”现象，感官评价不好，组合膜浓缩方式能最大限度的保留有效成分且所得产品的性状、感官评价较好，故建议选用组合膜浓缩方式进行浓缩。
综上所述，青钱柳叶的提取方式与传统工艺不同，长时间及高温的提取、浓缩，会导致有效成分异槲皮苷等含量下降，同时对产品的溶解、气味、口感产生较大的影响，导致溶解性及感官评价不合格。除上述工艺考察外，本发明还对提取前青钱柳叶的干燥温度、过滤及除杂方式、组合膜浓缩的具体参数、杀菌及干燥方式等进行考察。
二、青钱柳叶速溶粉的制备方法
实施例1
一种青钱柳叶速溶粉的制备方法，包括以下步骤：
R1.将青钱柳叶进行除杂，清洗后，于50℃烘干；
R2.干燥后的青钱柳叶进行搅拌浸提，投叶量为100kg，加水800kg(料液比为1:8)，加热至50℃浸提3次，每次浸提时间为1h，用滤布进行初滤，合并，得到浸提液；
R3.将浸提液通过膜孔径200μm的陶瓷膜过滤中式设备进行微虑，过滤压力为0.5MPa，过滤温度为35℃；
R4.将滤液通过膜孔径200nm的组合膜浓缩中式设备浓缩，浓缩压力为12MPa，浓缩温度为26℃，所得第一次浓缩液含固量为0.7％；
R5.将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，离心转速为14000rpm/min，离心时间为30min，取上清液，进行第二次浓缩，第二次浓缩压力为13MPa，浓缩温度为19℃，所得第二次浓缩液含固量为0.9％；
R6.将第二次浓缩液送至缓冲罐内杀菌，杀菌温度为85℃，杀菌时间为60min；
R7.杀菌后，冷冻干燥，所述冷冻干燥：温度为-35℃、真空度为50Pa、干燥时间为60h 分装，即得。
实施例2
一种青钱柳叶速溶粉的制备方法，包括以下步骤：
R1.将青钱柳叶进行除杂，清洗后，于80℃烘干；
R2.干燥后的青钱柳叶进行搅拌浸提，投叶量为100kg，加水1400kg(料液比为1:14)，加热至70℃浸提1次，浸提时间为3h，用滤布进行初滤，合并，得到浸提液；
R3.将浸提液通过膜孔径200μm的陶瓷膜过滤中式设备进行微虑，过滤压力为2.5MPa，过滤温度为55℃；
R4.将滤液通过膜孔径200nm的组合膜浓缩中式设备浓缩，浓缩压力为17MPa，浓缩温度为39℃，所得第一次浓缩液含固量为2.8％；
R5.将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，离心转速为14000rpm/min，离心时间为30min，取上清液，进行第二次浓缩，第二次浓缩压力为17MPa，浓缩温度为36℃，所得第二次浓缩液含固量为4.2％；
R6.将第二次浓缩液送至缓冲罐内杀菌，杀菌温度为100℃，杀菌时间为30min；
R7.杀菌后，喷雾干燥，所述喷雾干燥：进风温度为240℃、进样速率为60rpm/min、鼓风频率为40Hz，分装，即得。
实施例3
一种青钱柳叶速溶粉的制备方法，包括以下步骤：
R1.将青钱柳叶进行除杂，清洗后，于60℃烘干；
R2.干燥后的青钱柳叶进行搅拌浸提，投叶量为100kg，加水1200kg(料液比为1:12)，加热至60℃浸提2次，每次浸提时间为1h，用滤布进行初滤，合并，得到浸提液；
R3.将浸提液通过膜孔径200μm的陶瓷膜过滤中式设备进行微虑，过滤压力为1.0MPa，过滤温度为40℃；
R4.将滤液通过膜孔径200nm的组合膜浓缩中式设备浓缩，浓缩压力为14MPa，浓缩温度为30℃，所得第一次浓缩液含固量为1.5％；
R5.将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，离心转速为14000rpm/min，离心时间为30min，取上清液，进行第二次浓缩，第二次浓缩压力为15MPa，浓缩温度为25℃，所得第二次浓缩液含固量为2.1％；
R6.将第二次浓缩液送至缓冲罐内杀菌，杀菌温度为90℃，杀菌时间为45min；
R7.杀菌后，冷冻干燥，所述冷冻干燥：温度为-40℃、真空度为70Pa、干燥时间为45h，分装，即得。
实施例4
一种青钱柳叶速溶粉的制备方法，包括以下步骤：
R1.将青钱柳叶进行除杂，清洗后，于70℃烘干；
R2.干燥后的青钱柳叶进行搅拌浸提，投叶量为100kg，加水1000kg(料液比为1:10)，加热至65℃浸提2次，每次浸提时间为2h，用滤布进行初滤，合并，得到浸提液；
R3.将浸提液通过膜孔径200μm的陶瓷膜过滤中式设备进行微虑，过滤压力为2.0MPa，过滤温度为45℃；
R4.将滤液通过膜孔径200nm的组合膜浓缩中式设备浓缩，浓缩压力为15MPa，浓缩温度为35℃，所得第一次浓缩液含固量为2.4％；
R5.将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，离心转速为14000rpm/min，离心时间为30min，取上清液，进行第二次浓缩，第二次浓缩压力为16MPa，浓缩温度为30℃，所得第二次浓缩液含固量为3.2％；
R6.将第二次浓缩液送至缓冲罐内杀菌，杀菌温度为95℃，杀菌时间为35min；
R7.杀菌后，冷冻干燥，所述冷冻干燥：温度为-55℃，真空度为100Pa，干燥时间为36h；分装，即得。
实施例5
一种青钱柳叶速溶粉的制备方法，包括以下步骤：
R1.将青钱柳叶进行除杂，清洗后，于70℃烘干；
R2.干燥后的青钱柳叶进行搅拌浸提，投叶量为100kg，加水1200kg(料液比为1:12)，加热至60℃浸提3次，每次浸提时间为2h，用滤布进行初滤，合并，得到浸提液；
R3.将浸提液通过膜孔径200μm的陶瓷膜过滤中式设备进行微虑，过滤压力为2.4MPa，过滤温度为51℃；
R4.将滤液通过膜孔径200nm的组合膜浓缩中式设备浓缩，浓缩压力为13MPa，浓缩温度为37℃，所得第一次浓缩液含固量为2.6％；
R5.将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，离心转速为14000rpm/min，离心时间为30min，取上清液，进行第二次浓缩，第二次浓缩压力为13MPa，浓缩温度为33℃，所得第二次浓缩液含固量为3.8％；
R6.将第二次浓缩液送至缓冲罐内杀菌，杀菌温度为88℃，杀菌时间为40min；
R7.杀菌后，喷雾干燥，所述喷雾干燥：进风温度为250℃、进样速率为90rpm/min、鼓风频率为60Hz，分装，即得。
实施例6
一种青钱柳叶速溶粉的制备方法，包括以下步骤：
R1.将青钱柳叶进行除杂，清洗后，晾干；
R2.晾干后的青钱柳叶进行搅拌浸提，投叶量为100kg，加水1000kg(料液比为1:10)，加热至40℃浸提2次，每次浸提时间为2h，用滤布进行初滤，合并，得到浸提液；
R3.将浸提液通过膜孔径200μm的陶瓷膜过滤中式设备进行微虑，过滤压力为1.5MPa，过滤温度为50℃；
R4.将滤液通过膜孔径200nm的组合膜浓缩中式设备浓缩，浓缩压力为13MPa，浓缩温度为30℃，所得第一次浓缩液含固量为1.8％；
R5.将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，离心转速为14000rpm/min，离心时间为30min，取上清液，进行第二次浓缩，第二次浓缩压力为15MPa，浓缩温度为22℃，所得第二次浓缩液含固量为3.0％；
R6.将第二次浓缩液送至缓冲罐内杀菌，杀菌温度为90℃，杀菌时间为55min；
R7.杀菌后，冷冻干燥，所述冷冻干燥：温度为-35℃、真空度为60Pa、干燥时间为50h，分装，即得。
实施例7
一种青钱柳叶速溶粉的制备方法，包括以下步骤：
R1.将青钱柳叶进行除杂，清洗后，于60℃烘干；
R2.干燥后的青钱柳叶进行搅拌浸提，投叶量为100kg，加水1000kg(料液比为1:10)，加热至80℃浸提1次，浸提时间为1h，用滤布进行初滤，合并，得到浸提液；
R3.将浸提液通过膜孔径200μm的陶瓷膜过滤中式设备进行微虑，过滤压力为1.5MPa，过滤温度为50℃；
R4.将滤液通过膜孔径200nm的组合膜浓缩中式设备浓缩，浓缩压力为13MPa，浓缩温度为30℃，所得第一次浓缩液含固量为1.8％；
R5.将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，离心转速为14000rpm/min，离心时间为30min，取上清液，进行第二次浓缩，第二次浓缩压力为15MPa，浓缩温度为22℃，所得第二次浓缩液含固量为3.0％；
R6.将第二次浓缩液送至缓冲罐内杀菌，杀菌温度为90℃，杀菌时间为55min；
R7.杀菌后，喷雾干燥，所述喷雾干燥：进风温度为230℃、进样速率为30rpm/min、鼓风频率为20Hz，分装，即得。
三、本发明实施例产品的感官评价、溶化性考察及含量测定
(一)样品
取本发明实施例1-7的样品，分别进行感官评价及溶化性考察及含量测定。
(二)实验方法及实验结果：
1、实验方法
1.1感官评价考察：分别取实施例1-7的青钱柳速溶粉适量加水使溶解，考察各实施例产品的色泽、风味、口感等感官指标。
1.2溶化性考察：分别取实施例1-7青钱柳速溶粉适量，考察各实施例产品在热(70～ 80℃)、温(40～50℃)、凉(10～20℃)、冷(4～10℃)等不同温度下的水中溶解状况；以及实施例3、实施例4青钱柳速溶粉溶液中，加入牛奶、苹果汁后的溶解状况。
1.3含量测定：利用高效液相色谱法测定各实施例产品中的异槲皮苷含量，其中色谱条件为：色谱柱：ODS-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2％磷酸(0→14min，45:55； 14→20min，54:46；20→30min，60:40；30→38min，45:55)；流速：1.0ml/min；检测波长：360nm；进样量：20μl，理论塔板数大于3000。
2、实验结果：感官评价、溶化性考察及含量测定结果见表11。
表11感官评价、溶化性考察及含量测定结果
Figure BDA0002013039500000131
由表11结果可知，本发明实施例1-6的产品的各项感官评价指标、溶化性均较好，含量测定结果除实施例6外，也均较高；实施例7产品各项感官评价指标、溶化性稍差，含量测定结果偏低，说明提取温度高，成分发生变化，有不良气味物质产生，影响了感官指标中的风味、溶化性。在实施例3、实施例4青钱柳速溶粉溶液中，加入牛奶、苹果汁后，热、温、凉、冷、溶解性均较好(4-80℃)，没有沉淀结块现象，加入牛奶、苹果汁后更有风味及丰富营养。以上结果表明，本发明方法制备的实施例1-6产品的各项感官评价指标、溶化性及含量测定结果均较好，并且能极大限度的保留青钱柳叶中的功效成分。
四、药效学实验研究
糖尿病是临床常见多发的内分泌代谢性疾病，其致病因素多种多样，也是现研究的热门课题。民间常用青钱柳叶常用于泡服，具有清热解毒，降脂消渴，健脾化湿，滋阴补肾等功效。本部分通过建立2型糖尿病模型(T2DM)，给予自制的青钱柳叶速溶粉，通过检测的血糖、血脂等水平的变化，初步评价该制剂改善糖尿病症状的情况。
1仪器与试药
1.1实验仪器：SQP型电子分析天平(德国赛多利斯茵泰科公司)；BCD-279西门子冰箱 (博西华家用电器有限公司)；Infinite M200PRO全波长酶标仪(瑞士TECAN公司)；Fresco17 冷冻高速离心机(美国Thermo Fisher公司)；安易型血糖仪及配套试纸(三诺生物传感股份有限公司)
1.2实验试剂：四氧嘧啶(美国Sigma公司，批号：BCBR9198V)；甘油三酯(TG)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号：20180120)；总胆固醇(T-CHO)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号：20180122)；低密度脂蛋白胆固(LDL-C)测试盒(南京建成生物工程研究所，批号：20180119)。
1.3实验动物：SPF级昆明小鼠，体重18-22g，雌雄各半，由湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物许可证号为SCXK(湘)2016-0002。
1.4受试药物：本发明实施例3样品；市售盐酸二甲双胍片，规格500mg/片。
2实验方法
2.1四氧嘧啶注射液的配制：用生理盐水配制四氧嘧啶注射液，避光保存于4℃以下的冰浴中，现配现用，于30min内用完。
2.2给药溶液的配制：将青钱柳叶速溶粉和市售盐酸二甲双胍片粉末，按照各组的给药方法，分别用蒸馏水配制成悬浊液，用时摇匀给小鼠服用。
2.3动物模型建立方法：选取SPF清洁级、体重18-22g的小鼠96只，雌雄各半，自由摄食、饮水，适应环境3天后，随机分成空白组(16只)和造模组(80只)。造模组小鼠禁食不禁水12h，称取每只小鼠的体重，并根据小鼠的体重给予腹腔注射四氧嘧啶注射液，剂量为150mg/kg，3天后再给予同样剂量四氧嘧啶造模，正常组注射等体积的生理盐水。喂养 7天后，禁食不禁水12h，尾静脉采血测定血糖值，空腹血糖值≥11.1mmol/L即可视为造模成功。期间，观察并详细记录小鼠造模前后的体重变化、饮食饮水量变化、尿量和大便。
2.4动物分组：根据造模情况将造模成功的80只2型糖尿病小鼠按照血糖值随机分成：模型组，盐酸二甲双胍片阳性组0.3g/kg，实施例3高剂量组0.8g/kg、中剂量组0.4g/kg、低剂量组0.2g/kg，与空白组共6组，每组16只，雌雄各8只，分笼饲养，各给药组小鼠在造模成功后开始灌胃处理。
2.5给药方法：正常组和模型组给予相应等体积生理盐水，阳性对照组给予市售盐酸二甲双胍片；高、中、低剂量组分别给予高、中、低剂量本发明实施例3样品。每日1次，2 周测一次血糖，连续给药4周。
2.6测定方法：小鼠连续给药4周后，禁食不禁水12h，测定空腹血糖(FastingBlood Glucose，FBG)，称重，每只小鼠按剂量2.5g/kg葡萄糖灌胃后在相应的时间进行尾静脉取血测定糖耐量，之后采用摘取眼球的方法取血，静置3h，于3500r/min下冷冻离心15min吸取上层血清，测定低密度脂蛋白胆固醇(Low Density Lipoprotein Cholesterol，LDL-C)、甘油三酯(Triglyceride，TG)、总胆固醇(Total Cholesterol，T-CHO)的含量，评价本发明青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病的治疗作用。
2.7指标检测与方法
2.7.1动物一般状态：各给药组在造模成功后每天观察小鼠毛色、活动、精神状态、进食饮水、排泄等情况，记录小鼠每周体重，监测其体重变化情况，并详细记录。
2.7.2空腹血糖(FBG)的检测：小鼠禁食不禁水12h后，尾静脉采血，用三诺安易型血糖仪及配套试纸测定。
2.7.3血清TG、T-CHO、LDL-C的检测
将所有小鼠的血清进行分离，样品用全波长酶标仪测定血清中TG、T-CHO、LDL-C的含量。
2.7.4糖耐量的检测：灌胃4周后，对各组小鼠禁食不禁水12h，采用尾静脉取血测得的血糖值作为0h的血糖值，给予葡萄糖灌胃后0.5h、1.0h、2.0h和3.0h，分别尾静脉取血作为0.5h、1.0h、2.0h和3.0h的血糖值。观察各给药组与正常组及模型组在各时间点上血糖浓度的变化。
2.7.5统计学处理：实验所得数据均采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析、方差齐性检验，组间的比较采用LDS法比较分析，计量资料用均数±标准差
Figure BDA0002013039500000151
表示，P＜0.05表示有显著性差异，P＜0.01表示有极显著性差异，有统计学意义。
3实验结果及分析
3.1一般观察结果
正常组的小鼠在整个实验过程中，均健康成长，毛发光泽，动作敏捷，精神状态良好，饮食量和饮水量没有太大变化，体重增加较平稳，其尿量和排便均正常，没有死亡现象。
在造模期间，造模组小鼠精神萎靡，行动迟缓，毛发粗糙、无光泽、凌乱；食量与饮水量增多，尿量增加，粪呈稀溏状，体重比正常小鼠明显降低，呈现出典型的“三多一少”特征。
治疗期间，模型组由于没有给予药物治疗，该组小鼠均有动作反应迟钝，体重减轻且消瘦，精神萎靡，毛发松散无光泽，饮食量、饮水量和尿量明显增加，实验后期模型组小鼠进食量、进水量和尿量均多于各给药组，有死亡现象。各给药组在持续给药处理后，各组小鼠体重无明显变化，精神状态有所改善，多饮、多食、多尿、消瘦的症状有所减轻，毛色松散无光泽现象有所好转，但与正常组相比小鼠的毛色、精神状态和活动状态等相差较大，与模型组相比，精神状态、活动状态和毛色均有好转。
3.2青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠FBG的影响
由表12、图1结果可知，治疗前，与正常组相比，模型组及各给药组的FBG值均明显升高，有显著性差异(P<0.01)，说明2型糖尿病模型造模成功。治疗后，与模型组相比，各给药组的FBG值均有降低的趋势；与治疗前相比，各给药组的FBG值均有不同程度下降的趋势，其中阳性组、实施例3高剂量组和中剂量组的血糖值下降程度较多，差异有统计学意义(P<0.01)。由此可见，本发明青钱柳叶速溶粉能有效降低血糖。
表12各组小鼠治疗前和治疗后FBG值的比较(
Figure BDA0002013039500000161
mmol/L)
Figure BDA0002013039500000162
注：VS正常组，**P<0.01；VS模型组，##P<0.01；VS治疗前，◇P<0.05
3.3青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠糖耐量的影响
由图2结果可知，正常组小鼠给予葡萄糖后0.5h时血糖值达到了顶峰，给予葡萄糖后2h 时血糖值已基本回到给予葡萄糖前水平。模型组小鼠在给予葡萄糖0.5h时达到血糖值顶峰，之后血糖处于较高的血糖值。阳性组和本发明实施例3高剂量组、中剂量组和低剂量组小鼠均在给予葡萄糖0.5h时达到血糖值顶峰，在给予葡萄糖后3h时小鼠的血糖值基本接近给予葡萄糖前的血糖值。由此可见，本发明青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠糖耐量的改善效果明显。
3.4青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠T-CHO、TG和LDL-C的影响
由表13、图2结果可知，与正常组相比，模型组的T-CHO、TG和LDL-C值均显著升高(P<0.01)，说明有小鼠有脂代谢异常现象。与模型组相比，阳性组和本发明实施例3高剂量、本发明实施例3中剂量组均能显著地降低2型糖尿病小鼠血清中T-CHO值，差异有统计学意义(P<0.05)，各给药组也能显著性降低TG和LDL-C的含量，差异有统计学意义(P<0.05)。由此可见，本发明青钱柳叶速溶粉能降低2型糖尿病小鼠T-CHO、TG和LDL-C的含量，具有调节脂代谢作用。
表13青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠T-CHO、TG和LDL-C的影响(
Figure BDA0002013039500000171
mmol/L)
Figure BDA0002013039500000172
注：VS正常组，**P<0.01，*P<0.05；VS模型组，##P<0.01，#P<0.05
4小结与讨论
4.1青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠糖代谢的影响
小鼠体内血糖的调节能力和对葡萄糖的耐受力，也是评估药物降血糖作用效果的一个重要指标。健康小鼠体内的血糖调节能力很强，从青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠糖耐量实验结果看，正常组在给予葡萄糖2h后小鼠血糖值已完全恢复到正常血糖值。各组在给予葡萄糖0.5h时均达到血糖值的最高峰，模型组的血糖值最高，在给予葡萄糖0.5h后各组血糖值均有下降趋势，3h时血糖值均接近0h的血糖值，并且阳性组、青钱柳叶高剂量组和中剂量组降血糖作用效果较明显。由此可见青钱柳叶速溶粉具有降血糖作用，能显著改善小鼠对血糖调节能力。
实验中2型糖尿病造模成功后，除正常组外各组小鼠的血糖值均有明显的升高，且均大于11.1mmol/L，说明小鼠2型糖尿病模型造模成功，可用于后期青钱柳叶速溶粉降血糖的药效学研究。通过4周的给药治疗，与模型组相比，各给药组小鼠体内的血糖值均有明显下降 (P<0.05)，但阳性组、青钱柳叶速溶粉高剂量组和中剂量组降血糖效果更好。
4.2青钱柳叶速溶粉对2型糖尿病小鼠脂代谢的影响
糖尿病常伴有糖代谢紊乱、激素分泌失调和脂代谢紊乱等症状，因此糖尿病患者常带有血脂异常，血脂异常与高血糖有共存的情况下，会增重糖尿病的病情。其典型的表现为：TG 升高，LDL-C升高，高密度脂蛋白胆固醇降低，高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、餐后血脂和过多的残粒堆积。TG升高是2型糖尿病中最常见的血脂异常。TG升高的原因主要是包括乳糜微粒、极低密度脂蛋白(Very Low Density Lipoprotein，VLDL)、中密度脂蛋白(Intermediate Density Lipoprotein，IDL)及残粒蛋白等含有甘油三酯的脂蛋白在血中堆积。血胰岛素水平下降，既可导致甘油三酯水平増高，又可引起高密度脂蛋白减少，同时在高血糖状态下，低密度脂蛋白与受体的结合力下降，促进了低密度脂蛋白水平的升高。研究发现青钱柳三萜成分、乙醇提取物、不同极性的提取物有抗高血脂作用，降脂机制可能与下调肠道相关脂蛋白载脂蛋白B48有关，从而降低胆固醇生物合成。因此本部分选取TG、T-CHO、LDL-C作为影响 2型糖尿病小鼠脂代谢的指标。
由实验结果可知，与正常组相比，2型糖尿病模型组小鼠血清中TG、T-CHO和LDL-C水平等方面均显著性上升(P<0.01)，表现出血脂异常的特点。给药4周后，与模型组相比，各给药组TG值均有所降低：阳性组TG值水平下降，与模型组存在显著性差异(P<0.01)，而青钱柳叶速溶粉高、中、低剂量组TG值均较模型组显著降低(P<0.05)。各给药组的LDL-C，与模型组相比LDL-C值均有降低，差异有显著性(P<0.05)。以上结果表明，青钱柳叶速溶粉可在调节脂代谢紊乱。
四、本发明实施例对糖尿病小鼠的影响
在药效学实验研究的基础上，对本发明实施例1-7的产品对糖尿病小鼠的影响进行了比较试验，主要对比了各实施例产品对小鼠空腹血糖的影响。
1材料与试剂
1.1实验仪器：同药效学实验研究。
1.2实验试剂：同药效学实验研究。
1.3实验动物：同药效学实验研究。
1.4受试药物：本发明实施例1-7产品；市售盐酸二甲双胍降糖片，规格500mg/片。
2实验方法
2.1STZ注射液的配制：同药效学实验研究。
2.2给药溶液的配制：将实施例1-7产品和市售盐酸二甲双胍片粉末，按照各组的给药方法，分别用蒸馏水配制成悬浊液，用时摇匀给小鼠服用。
2.3动物模型建立方法：同药效学实验研究。
2.4动物分组：选取SPF级、体重18～20g的小鼠110只，雌雄各半，随机分成空白组(10只)和造模组(100只)，根据造模情况按照血糖分布将造模组按照血糖随机分成：模型组、盐酸二甲双胍片对照组、实施例1-7产品高剂量组。共11组，分笼饲养。
2.5给药方法：正常组及模型组给予相应等体积0.9％生理盐水，阳性对照组给予市售盐酸二甲双胍片；实施例1-7各高剂量组分别给予高剂量各实施例产品。每日1次，2周测一次血糖，连续给药4周。
2.6测定方法：小鼠连续给药4周后，禁食不禁水12h，测定空腹血糖(FBG)值。
2.7指标检测与方法
2.7.1动物一般状态：每天观察小鼠其毛色、活动、精神、饮食、饮水、排泄等情况，每周称量小鼠体重一次，监测其体重变化情况，并详细记录。
2.7.2空腹血糖(FBG)的检测：小鼠连续给药4周后，小鼠禁食不禁水12h后，尾静脉采血，用三诺安易型血糖仪及配套试纸测定。
2.7.3统计学处理：实验所得数据均采用SPSS 18.0软件进行单因素方差分析、方差齐性检验，组间的比较采用LDS法比较分析，计量资料用均数±标准差
Figure BDA0002013039500000191
表示，P＜0.05表示有显著性差异，P＜0.01表示有极显著性差异，有统计学意义。
3实验结果及分析
3.1一般观察结果：造模期间，模型组小鼠行动迟缓，毛发粗糙、凌乱；食量与饮水量增多，尿量增加，粪呈稀溏状，体重比正常小鼠明显降低，呈现出典型的“三多一少”特征，说明造模成功，正常组小鼠的一般情况良好。治疗期间，各个给药组其体重无明显变化，多饮、多食、多尿、消瘦的症状有所减轻，但与正常组相比仍较突出，与模型组相比，精神状态、活动度和毛色亦都有所好转。
3.2各实施例产品对FBG的影响
试验结果见表14。
表14各组小鼠治疗前和治疗后FBG值的比较(
Figure BDA0002013039500000201
mmol/L)
Figure BDA0002013039500000202
注：VS正常组，**P<0.01；VS模型组，##P<0.01；VS治疗前，◇P<0.05
由表14结果可知，治疗前，与正常组相比，模型组及各给药组的FBG值均明显升高，有显著性差异(P<0.01)，说明2型糖尿病模型造模成功。治疗后，与模型组相比，各给药组的FBG值均有降低的趋势；与治疗前相比，各给药组的FBG值均有不同程度下降的趋势，其中阳性对照组、青钱柳叶速溶粉实施例1、2、3、4、5、6高剂量组的血糖值下降程度较多，差异有统计学意义(P<0.01)。与治疗前相比，实施例1-7各高剂量组的FBG值均有不同程度下降的趋势，其中实施例1-5高剂量组的FBG值下降程度相当，实施例6高剂量组FBG值下降程度次之，实施例7高剂量组FBG值下降程度最小。由此可见，不同制备工艺得到的速溶粉对小鼠空腹血糖的影响具有差异。
以上内容是结合具体的/优选的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，其还可以对这些已描述的实施例做出若干替代或变型，而这些替代或变型方式都应当视为属于本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种青钱柳叶速溶粉，其特征在于，该速溶粉为青钱柳叶经50-70℃热水浸提后，提取液进行过滤、浓缩、离心、杀菌，得药液，药液经冷冻干燥或喷雾干燥，得到的速溶粉；
所述浸提步骤料液比为1:8-1:14，浸提时间为1-3h；
所述过滤步骤为：通过膜孔径200μm的陶瓷膜进行微滤，过滤压力为0.5-2.5 MPa，过滤温度为35-55℃，得滤液；
所述浓缩分两次，第一次浓缩步骤为：将滤液通过膜孔径200nm的组合膜浓缩，浓缩压力为12-17 MPa，浓缩温度为26-39℃，所得第一次浓缩液含固量为0.7-2.8%，得第一次浓缩液；
所述离心步骤为：将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，离心转速为14000 rpm/min，离心时间为30min，得上清液；
所述第二次浓缩步骤为：取上清液，进行第二次浓缩，浓缩压力为13-17 MPa，浓缩温度为19-36℃，所得第二次浓缩液含固量为0.9-4.2%。
2.一种如权利要求1所述的青钱柳叶速溶粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
R1.将青钱柳叶进行除杂，清洗后，干燥，干燥的温度为50-80℃；
R2.干燥后的青钱柳叶加水，加热至50-70℃浸提，浸提料液比为1:8-1:14，浸提时间为1-3h，得到浸提液；
R3.将浸提液通过膜孔径200μm的陶瓷膜进行微滤，过滤压力为0.5-2.5 MPa，过滤温度为35-55℃，得滤液；
R4.将滤液通过膜孔径200nm的组合膜浓缩，浓缩压力为12-17 MPa，浓缩温度为26-39℃，所得第一次浓缩液含固量为0.7-2.8%，得第一次浓缩液；
R5.将第一次浓缩液放入高速管式离心机，离心，离心转速为14000 rpm/min，离心时间为30min，取上清液，进行第二次浓缩，浓缩压力为13-17 MPa，浓缩温度为19-36℃，所得第二次浓缩液含固量为0.9-4.2%，得第二次浓缩液；
R6.将第二次浓缩液送至缓冲罐内，杀菌；
R7.杀菌后，冷冻干燥或喷雾干燥，分装，即得。
3.根据权利要求2所述的青钱柳叶速溶粉的制备方法，其特征在于：所述步骤R6中杀菌温度为85-100℃，杀菌时间为30-60min。
4.根据权利要求2所述的青钱柳叶速溶粉的制备方法，其特征在于：所述步骤R7中冷冻干燥温度为（-35）-（-55）℃，真空度为50-100Pa，干燥时间为36-60h；喷雾干燥进风温度为230-250℃，进样速率为30-90rpm/min，鼓风频率为20-60Hz。
5.如权利要求1所述的制备用于辅助降血糖的青钱柳叶速溶粉的应用，其特征在于，所述速溶粉在制备辅助治疗糖尿病的食品、保健食品及药品方面的应用。
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