CN101654709A - 利用sts引物鉴定人参品种的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于人参品种鉴定的STS(序列标签位点，Sequence Tagged Site)引物对，包含上述引物对的用于鉴定人参品种的试剂盒，以及利用上述引物对鉴定人参品种的方法。所述用于人参品种鉴定的STS引物对包含选自SEQ ID NO：1至8所示的4对引物对中的一个以上的引物对。根据本发明，利用4种STS核酸标记因子可以确切地区分人参的5个品种，因此所述核酸标记因子可以作为标记物应用于以品种的知识产权保护为目的的品种确认。

Description

利用STS引物鉴定人参品种的方法

技术领域

本发明涉及一种利用序列标签位点(Sequence Tagged Site，STS)引物鉴定人参品种的方法，更详细地，本发明涉及用于鉴定天丰、连丰、高丰、金丰和仙丰5个人参品种的STS核酸标记因子的开发，还涉及基于人参的碱基序列信息来制备STS引物、而后使用这些引物分析品种间的显性遗传从而明确区分各人参品种的方法。

背景技术

已报道的世界人参属的植物有约12种以上，其中人参(Panax ginseng C.A.Meyer(Oriental ginseng))、西洋参(P.quinquefolium L.(American ginseng))和三七(P.notoginseng(Burkill)F.H.Chen(Sanchi))这3种主要作为中药材来使用。人参在韩国、中国、日本、俄罗斯等地种植，西洋参在美国、加拿大、中国等地种植，三七主要在中国种植，很早以前人参就被用于预防和治疗各种疾病，最近随着人参的抗氧化作用、抗疲劳、抗癌等多种功能不断被报道，人参的种植不仅存在于人参的主产地亚洲和北美洲，而且在欧洲和大洋洲也在种植人参。

在韩国，人参的种植主要依靠地域传统品种紫茎人参，但是KT&G(旧韩国人参烟草研究院)开发了体形优秀、数量或者人参皂苷含量高、抗病虫害的天丰、连丰、高丰、金丰、仙丰等人参品种，并且这些人参的种植以最先的农户为中心呈扩大的趋势。这些被开发的品种可以由育种专家根据地上部分的形态特征(果实颜色、茎的颜色、出芽期等)来区别，但是不可能区分作为主要利用部位的根，因此可能会引起由外国产原参及制品冒充国产人参而导致的流通市场混乱、以及由人参种植时品种间混杂而导致的纯度下降等国内外深刻的社会问题。

最近在国外，对于国家主要关心作物(黄瓜、西红柿、油菜、小麦等)，以品种区分、稳定性检测及品种保护为目的，正在开发核酸标记因子；在韩国也在稻子等主要作物、辣椒等蔬菜作物、菌类、牛等各种领域里进行着关于核酸标记因子开发的研究；但是目前为止，韩国仅将依靠分子技术的蘑菇的显性遗传认定为品种审查的法定程序DUS(distinctness，uniformity，stability)(区别性、一致性、稳定性)测试的特性项目。

作为鉴定人参品种的手段，在DNA水平上进行了开发标记物的研究，主要利用随机扩增多态性DNA(random amplified polymorphic DNA，RAPD)、简单序列重复间区(inter simple sequence repeat，ISSR)、内转录间隔区(internal transcribed spacer，ITS)等的任意的引物试图区分在韩国培育的品种，但是这些技术在品种间区分上显示出了局限性。

本发明人报道的文献[In & Kim et al(2005)，Genetic relationships ofPanax species by RAPD and IS SR analyses，Korean Journal of Medicinal CropScience，13，249-253]中，虽然也以人参品种天丰、连丰、高丰、仙丰、金丰和国内外收集品种紫茎人参、黄果人参、mimaki(みまき)、石柱参、竹节参(P.japonicus)、西洋参为对象，利用RAPD和ISSR技术分析了它们之间的遗传关系及显性遗传，但是利用这些技术区分人参品种很困难。这些技术是利用任意引物，实验结果的重现性低，即使能寻找到种间多态性，也在遗传信息的获得上有缺陷，因此不适合用于需要保证区别性、一致性和稳定性的品种鉴定。

另一文献[Yang et al(2001)，Comparison of ITS and 5.8S rDNA sequencesamong varieties and cultivars in Panax ginseng，Journal of Photoscience，8，55-60]中，比较分析了人参品种天丰、连丰和收集品种紫茎人参、青茎人参、黄果人参的ITS和5.8S rDNA碱基序列，黄果人参显示了区别于其它品种的单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphidm)。另外，本发明人的文献[Kim & Bang et al(2007)，Molecular authentication of ginseng cultivars bycomparison of internal transcribed spacer and 5.8S rDNA sequences，PlantBiotechnology Report，1，163-167]中报道了，经能识别人参品种天丰、连丰、高丰、仙丰、金丰和国内外收集品种紫茎人参、黄果人参、mimaki()、石柱参、竹节参、西洋参的ITS和5.8S rDNA碱基序列的单核苷酸多态性部位的限制性内切酶Taq I处理后，比较分析它们的显性遗传，只有高丰和金丰能区分于其它人参品种及国内外收集品种。

但是，仅用这些方法的缺点是难以明确区分开发的人参品种。

韩国特许登录第10-0215084号公开了根据RAPD标记的人参产地的鉴定方法以及此方法中使用的引物，韩国特许公开第2004-0034331号公开了利用单核苷酸多态性来鉴定山参和种植人参的方法，韩国特许登录第10-0610312号公开了人参的种间基因鉴定试剂盒，但是这些方法中使用的引物对与本发明的引物对不同。

发明内容

本发明的目的是为了解决利用任意引物的RAPD、ISSR技术和分析碱基序列保守的rDNA区域的ITS技术所具有的区别性和一致性不好的问题，以人参标准品种(连丰)的DNA为对象，利用基因克隆和转化方法构建基因组DNA文库，选取特定克隆；并以这些克隆为对象进行碱基序列分析，再以这些遗传信息为基础制备STS引物；以不同品种人参的样品为模板，用所述引物进行PCR，结合琼脂糖凝胶电泳显示的遗传模式来区分包括天丰在内的5个主要人参品种，从而提供稳定性和一致性高的品种鉴定系统。

为了实现上述目的，本发明提供用于人参品种鉴定的STS(序列标签位点，Sequence Tagged Site)引物对，该引物对包含选自SEQ ID NO：1至8所示的4对引物的一个以上的引物对。

并且，本发明提供包含上述引物对的用于鉴定人参品种的试剂盒。

并且，本发明提供利用上述引物对来鉴定人参品种的方法。

根据本发明，可以利用开发的4种STS引物对将天丰、连丰、高丰、金丰、仙丰5个人参品种通过它们的显性遗传而明确区分，因此所述STS引物对能够作为用以确认品种的核酸标记因子来应用，此种应用将非常有助于国内优秀品种开发者和普及者行使对外知识产权。而且，本发明的方法可以作为基础技术用于整顿由种植人参时混种和制造加工品时外国产原参冒充国产等引起的流通市场混乱，并且利用本发明的方法可以在培育人参时提高品种的遗传稳定性(纯度)、防止品种混杂，因此本发明的方法也可以应用于向农户普及高纯度种子的工作中。

附图说明

图1是利用STS引物KGY+0130A，以天丰、连丰、高丰、金丰、和仙丰5个人参品种为对象进行PCR，在琼脂糖凝胶上确认品种间多态性的电泳图。泳道M：1Kbp+100bp DNA梯状分子量标记(Elpis Biotech)，泳道1：天丰(Chunpoong)，泳道2：连丰(Yunpoong)，泳道3：高丰(Gopoong)，泳道4：金丰(Kumpoong)，泳道5：仙丰(Sunpoong)。

图2是利用STS引物KGY+0183A，以天丰、连丰、高丰、金丰、和仙丰5个人参品种为对象进行PCR，在琼脂糖凝胶上确认品种间多态性的电泳图。泳道M：1Kbp+100bp DNA梯状分子量标记(Elpis Biotech)，泳道1：天丰(Chunpoong)，泳道2：连丰(Yunpoong)，泳道3：高丰(Gopoong)，泳道4：金丰(Kumpoong)，泳道5：仙丰(Sunpoong)。

图3是利用STS引物KGY+0110A，以天丰、连丰、高丰、金丰、和仙丰5个人参品种为对象进行PCR，然后用限制性内切酶Hinf I处理PCR产物，在琼脂糖凝胶上确认品种间多态性的电泳图。泳道M：1Kbp+100bp DNA梯状分子量标记(Elpis Biotech)，泳道1：天丰(Chunpoong)，泳道2：连丰(Yunpoong)，泳道3：高丰(Gopoong)，泳道4：金丰(Kumpoong)，泳道5：仙丰(Sunpoong)。

图4是利用STS引物KGY-0074，以天丰、连丰、高丰、金丰、和仙丰5个人参品种为对象进行PCR，然后用限制性内切酶Hinf I处理PCR产物，在琼脂糖凝胶上确认品种间多态性的电泳图。泳道M：1Kbp+100bp DNA梯状分子量标记(Elpis Biotech)，泳道1：天丰(Chunpoong)，泳道2：连丰(Yunpoong)，泳道3：高丰(Gopoong)，泳道4：金丰(Kumpoong)，泳道5：仙丰(Sunpoong)。

图5是判断在图1至4中确认的等位基因的差异，从而综合表示5个品种的显性遗传的图。

具体实施方式

为了达到本发明的目的，本发明提供用于人参品种鉴定的STS(序列标签位点，Sequence Tagged Site)寡核苷酸引物对，该寡核苷酸引物对包含选自SEQ ID NO：1至8所示的4对引物的一个以上的引物对。。

上述寡核苷酸引物对可以分别是由SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示的序列内的16个以上、17个以上、18个以上、19个以上、20个以上的连续核苷酸的片段组成的寡核苷酸。

并且，上述寡核苷酸引物对可以分别是由SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示的序列内的16个以上、17个以上、18个以上、19个以上的连续核苷酸的片段组成的寡核苷酸。

并且，上述寡核苷酸引物对可以分别是由SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示的序列内的16个以上、17个以上、18个以上、19个以上的连续核苷酸的片段组成的寡核苷酸。

并且，上述寡核苷酸引物对可以分别是由SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8所示的序列内的16个以上、17个以上、18个以上、19个以上、20个以上、21个以上的连续核苷酸的片段组成的寡核苷酸。

根据本发明的一个实施例的寡核苷酸引物对是用于人参品种鉴定的STS(序列标签位点)引物对，该引物对选自由SEQ ID NO：1和2所示的寡核苷酸引物对、SEQ ID NO：3和4所示的寡核苷酸引物对、SEQ ID NO：5和6所示的寡核苷酸引物对、及SEQ ID NO：7和8所示的寡核苷酸引物对组成的组中。

根据本发明的一个实施例的寡核苷酸引物对是用于人参品种鉴定的STS引物对，该引物对优选包括SEQ ID NO：为1和2所示的寡核苷酸引物对、SEQ ID NO：为3和4所示的寡核苷酸引物对、SEQ ID NO：为5和6所示的寡核苷酸引物对、以及SEQ ID NO：为7和8所示的寡核苷酸引物对。

如果同时利用4个引物对就可以较容易和正确地辨别人参品种。

上述人参品种可以为天丰(Chunpoong)、连丰(Yunpoong)、高丰(Gopoong)、金丰(Kumpoong)、仙丰(Sunpoong)。本发明的用于人参品种鉴定的STS引物对可以来源于人参(Panax ginseng C.A.Meyer)。

本发明的引物对以标准品种(连丰)为对象，利用基因克隆方法构建基因组(Genomic)DNA文库，选取特定克隆，并以这些克隆为对象进行碱基序列分析，再以这些遗传信息为基础制备STS引物。如上所述，构建了所谓“活性基因组区域富集的半基因组DNA文库(active genome region-enrichedsemi-genomic DNA library)”，通过该过程选取了特定大小(0.6～1.3kb)的克隆，基于分析克隆的碱基序列得到的遗传信息制备了多种STS引物。

本发明首次公开了根据上述方法提供的STS引物。

利用制备的引物以不同品种人参的样品为模板进行PCR，然后观察在琼脂糖凝胶电泳上显示的遗传多态性，由此选出了显示品种间多态性的2种STS引物对(KGY+0130A，KGY+0183A)。而且以上述PCR产物为对象，经6种限制性内切酶处理来确认品种间多态性，由此利用另外2种STS引物对(KGY+0110A，KGY-0074)观察到了品种间多态性。

如上所述，利用根据本发明的4种STS核酸标记因子就能明确地区分出迄今为止无法区分的韩国的5个人参品种，因此本发明的方法可作为品种鉴定的基础技术来应用。

本发明中，“引物”指与需要复制的核酸链互补的单链寡核苷酸序列，引物可以作为合成延伸产物的起始点。上述引物的长度和序列应该能起始延伸产物的合成。引物的具体长度和序列不仅依赖于所要互补的DNA或RNA标记的复杂度(complexity)，还依赖于温度和离子强度等引物使用条件。

本说明书中，作为引物使用的寡核苷酸还可以包含核苷酸类似物(analogue)，例如硫代磷酸酯(phosphorothioate)、烷基硫代磷酸酯或者肽核酸(peptide nucleic acid)，或者包含嵌入剂(intercalating agent)。

为了达到本发明的另一个目的，本发明提供用于鉴定人参品种的试剂盒，该试剂盒包含根据本发明的一个以上的寡核苷酸引物对和进行扩增反应的试剂。上述人参品种可以是天丰(Chunpoong)、连丰(Yunpoong)、高丰(Gopoong)、金丰(Kumpoong)、仙丰(Sunpoong)。

本发明的试剂盒中，用于进行上述扩增反应的试剂可以包括DNA聚合酶、dNTPs、缓冲溶液等。并且，本发明的试剂盒可以进一步包含记载最佳反应条件的使用说明书。

为了达到本发明的另一目的，本发明提供一种鉴定人参品种的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

从人参样品中分离基因组DNA；

以上述分离的基因组DNA为模板，利用本发明的寡核苷酸引物对进行扩增反应以扩增标记序列；以及

检测上述扩增的产物。

本发明的人参品种鉴定方法更具体地涉及天丰等5个主要人参品种的鉴定方法，其特征在于，该方法包括以标准品种(连丰)为对象，利用基因克隆方法构建基因组(Genomic)DNA文库，选取特定克隆，并分析这些克隆的碱基序列，再以这些遗传信息为基础制备STS引物的步骤；

使用制备的引物以不同品种人参的DNA样品为模板进行PCR，将产物在琼脂糖凝胶上进行电泳后分析种间遗传多态性的步骤；

使用制备的引物以不同品种人参的DNA样品为模板进行PCR，并将产物在琼脂糖凝胶上进行电泳，然后在用多态性条带(monomorphic band)确认的情况下，经AluI等共6个限制性内切酶处理，酶切产物在琼脂糖凝胶上进行电泳以分析种间遗传多态性的步骤；以及

从上述遗传分析步骤的结果综合判断种间等位基因来鉴别5个人参品种的步骤。

本发明的方法包括从人参样品中分离基因组DNA的步骤。从上述样品中分离基因组DNA的方法可以利用本领域公知的方法，例如，可以利用CTAB方法，也可以利用Wizard Prep试剂盒(Promega公司)。以上述分离的基因组DNA为模板，可以将根据本发明的一实施例的一个以上的寡核苷酸引物对用作引物进行扩增反应，来扩增标记序列。扩增标记核酸的方法有聚合酶链式反应(PCR)、连接酶链式反应(ligase chain reaction)、基于核酸序列的扩增(nucleic acid sequence-based amplification)、基于转录的扩增系统(transcription-based amplification system)、链置换扩增(strand displacementamplification)、或者通过Qβ复制酶(replicase)进行的扩增、或者本领域公知的扩增核酸分子的任意的其他适当的方法。其中，PCR是指利用聚合酶通过与标记核酸特异性结合的引物对来扩增标记核酸的方法。这样的PCR方法在本领域内众所周知，也可以使用商购的试剂盒。

本发明的方法中，上述人参品种可以为天丰(Chunpoong)、连丰(Yunpoong)、高丰(Gopoong)、金丰(Kumpoong)、仙丰(Sunpoong)。

本发明的方法中，上述扩增的标记序列可以用可检测的标记物来标记。在一个实施例中，上述标记物可以是具有荧光、磷光或者放射性的物质，但是不限于此。优选上述标记物为Cy-5或者Cy-3。进行PCR扩增标记序列时，在引物的5’-端标记Cy-5或者Cy-3，扩增产物就能够被可检测的荧光标记物标记。并且也可以利用放射性物质进行标记，在进行PCR时将P³²或者S³⁵等放射性同位素添加到PCR反应液中，在合成产物的时候放射性同位素就会混入扩增产物中使扩增产物标记上放射性。为了扩增标记序列，利用如上所述的一个以上的寡核苷酸引物对。

本发明的方法包括检测上述扩增产物的步骤。上述扩增产物可以通过DNA芯片、凝胶电泳、放射性检测、荧光检测或者磷光检测等方法进行检测，但是不限于此。凝胶电泳可以作为一种检测扩增产物的方法。进行凝胶电泳时，可以根据扩增产物的大小而使用琼脂糖凝胶或者丙烯酰胺凝胶电泳。对于荧光检测方法，如果进行PCR时在引物的5’-端标记Cy-5或者Cy-3，扩增产物就能够被可检测的荧光标记物标记，这样被标记的扩增产物可以利用荧光检测器进行测定。并且，对于放射性检测方法，在进行PCR时将P³²或者S³⁵等放射性同位素添加到PCR反应液中标记扩增产物后，可以利用放射性检测器(例如盖格计数器(Geiger counter)或者液体闪烁计数器(liquidscintillation counter))来检测扩增产物的放射性。

以下，通过实施例详细说明本发明。但是，下述实施例只是举例说明本发明，而不是限制本发明的内容。

实施例

实施例1

将从农村振兴厅作物科学院人参药草研究所的人参圃场种植的标准品种连风的嫩叶中提取的DNA(1μg)用对甲基化不敏感的限制性内切酶SpeI切割。将切割产物进行琼脂糖凝胶电泳，利用PCR产物回收试剂盒(Qiagen)回收DNA后，与准备好的pGEM_7zf(Promega)连接。将连接的混合物通过电穿孔转化到具备野生型Mcr A和BC基因的大肠杆菌(Stratagene)中，构建了所谓“活性基因组区域富集的半基因组DNA文库(active genomeregion-enriched semi-genomic DNA library)”，由此得到了共2,039个克隆。

实施例2

委托Solgent(

)株式会社对得到的克隆进行碱基序列分析。以分析的碱基序列为基础合成STS引物，上述得到的克隆大小为0.6kb～1.3kb，共343个克隆，由此制备了共262对STS引物对。

实施例3

为了观察人参品种间多态性而进行的PCR反应的混合物(50μl)的组成如下：人参的基因组DNA 20ng、各引物0.4μM、dNTPs 250μM、10×PCR反应缓冲溶液(75mM Tris-HCl(pH 9.0)、2.5mM MgCl₂、15mM(NH₄)₂SO₄、BSA 100μg/ml)、0.5单位DNA聚合酶、剩余为蒸馏水。为了有效利用合成的STS引物对，并抑制非特异性扩增产物的过度出现，在55～65℃的退火温度范围内进行PCR后测定了合理的引物Tm值。结果确定PCR反应条件为：使模板DNA在95℃预变性5分钟；然后，在95℃变性30秒、在65℃退火30秒、以及在72℃延伸1分钟，反复进行共40个循环；最后，在72℃延伸5分钟，得到特异性扩增产物。

利用制备的STS引物以天丰、连丰、高丰、金丰和仙丰5个人参品种的DNA为模板进行PCR后，通过琼脂糖凝胶电泳确认品种间多态性。另外，如果进行PCR后观察到了多态性DNA条带，那么为了确认多态性，经AluI等共6个限制性内切酶处理后进行电泳，通过100bp大小的分子量标记来确定切割产物的大小，并记录，使用限制性内切酶之前预先指定扩增产物中的“靶条带(target band)”。只有切割产物的大小之和与该靶条带完全一致时，才进行分析，从而与缺乏重现性的切割次要条带(minor band)而显示的多态性加以区分。

实验结果，选取了能够鉴定5个人参品种的4个STS引物对(KGY+0130A、KGY+0183A、KGY+0110A、KGY-0074)，其中2个引物对(KGY+0130A、KGY+0183A)进行PCR后再进行琼脂糖凝胶电泳，结果经确认观察到了品种间多态性，其余2个引物对(KGY+0110A、KGY-0074)，在用Hinf I限制性内切酶处理PCR产物的多态性条带(monomorphic band)时显示了多态性。

由图1可知，利用KGY+0130A引物进行PCR时，在约370bp大小处有天丰、高丰、金丰的DNA扩增产物，将此表示为显性遗传A，在约320bp大小处有连丰和仙丰的DNA扩增产物，将此表示为另一显性遗传B，显示了多态性。

在图2中，利用KGY+0183A引物进行PCR时，在约250bp大小处有天丰的DNA扩增产物，将此表示为显性遗传A，在约280bp大小处有连丰和仙丰的DNA扩增产物，将此表示为显性遗传B，在约220bp大小处有高丰的DNA扩增产物，将此表示为显性遗传C，在约300bp大小处有金丰的DNA扩增产物，将此表示为显性遗传D，显示了多态性。

此外，在图3中，用Hinf I限制性内切酶处理PCR产物时，由于天丰和高丰具有Hinf I限制性内切酶识别位点，因此观察到420bp和80bp大小的被切割的两个DNA条带，表示为显性遗传A，由于连丰、金丰、仙丰中没有该限制性内切酶的识别位点，因此观察到了500bp大小的DNA条带，将此表示为显性遗传B，显示了多态性。

在图4中，用Hinf I限制性内切酶处理PCR产物时，由于天丰和仙丰没有Hinf I限制性内切酶识别位点，因此观察到90bp大小的DNA条带，表示为显性遗传A，由于连丰、高丰、金丰中具有该限制性内切酶的识别位点，因此观察到了50bp和40bp大小的被切割的两个DNA条带，表示为显性遗传B，显示了多态性。

综合上述内容如图5表示，天丰的显性遗传为AAAA、连丰的显性遗传为BBBB、高丰的显性遗传为ACAB、金丰的显性遗传为ADBB、仙丰的显性遗传为BBBA，显示了多态性。，关于此4种选取的引物的碱基序列和Tm值的信息在表1中记载，结论为通过利用共4种STS引物对得到的显性遗传，能够确切区分天丰等5个人参品种。

表1.本发明的STS引物对

^aF：正向引物，^bR：反向引物

产业实用性

2007年韩国的人参种植面积为17,831公顷，生产量为21,819吨，其中新品种约为1,000公顷，以小面积种植，其原因是2002年登记了人参新品种天丰，增殖率为10倍，与其他作物相比很低。但是，最近随着与传统品种相比新品种的优秀性得到证明，目前新品种的种植面积逐渐增加，预计将来新品种的种植面积会进一步扩大。

人参新品种是通过从传统品种紫茎人参和黄果人参的抽样对象中选拔培育而成的，遗传上类似度高，不容易区分，同时通过一贯的识别方法不可能区别新品种，因此目前情况是鉴定技术达不到实用化。

为了解决这些问题而开发的4种用于鉴定人参品种的STS核酸标记因子，由于实验结果的重现性和稳定性高，能明确区分天丰等5个人参新品种，并且本发明的方法是利用PCR和琼脂糖凝胶电泳可以简单地区别品种间遗传的方法，因此本发明的技术转让也容易。这样的鉴定技术能够马上应用于以人参为主要作物进行研究的各个农业技术院及农业技术中心，因此可以应用于在农户中构筑保障纯度的人参新品种的早期普及体系。另外，在产业上，本发明在鉴定红参等原料的正确性的用途方面也有充分的市场性，因此认为本发明还可以作为基础技术应用于建立由消费者对制品的信赖增加所引起的流通市场秩序。

序列表

<110>韩国农村振兴厅

<120>利用STS引物鉴定人参品种的方法

<130>I11415KRO

<150>KR10-2008-0080459

<151>2008-08-18

<160>8

<170>KopatentIn 1.71

<210>1

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>正向引物

<400>1

ggaaagcgtt cagctcttac g                                                    21

<210>2

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>反向引物

<400>2

taaatgctgt caagcccaga g                                                    21

<210>3

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>正向引物

<400>3

gaattgaccc tttgcctttg                                                      20

<210>4

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>反向引物

<400>4

aaagcctacg ttagcgcatc                                                      20

<210>5

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>正向引物

<400>5

agtcccaacg gaatttcatc                                                      20

<210>6

<211>20

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>反向引物

<400>6

gttttccgct tatgttgcag                                                      20

<210>7

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>正向引物

<400>7

gcgaatttca cagaattaga cg                                                   22

<210>8

<211>22

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>反向引物

<400>8

acaggtctcg aaacaattga ag                                                   22

Claims (9)

1.一种用于人参品种鉴定的序列标签位点引物对，其特征在于，该引物对选自由SEQ ID NO：1和2所示的寡核苷酸引物对、SEQ ID NO：3和4所示的寡核苷酸引物对、SEQ ID NO：5和6所示的寡核苷酸引物对、以及SEQID NO：7和8所示的寡核苷酸引物对所组成的组中。

2.根据权利要求1所述的用于人参品种鉴定的序列标签位点引物对，其中，该引物对包括SEQ ID NO：1和2所示的寡核苷酸引物对、SEQ ID NO：3和4所示的寡核苷酸引物对、SEQ ID NO：5和6所示的寡核苷酸引物对以及SEQ ID NO：7和8所示的寡核苷酸引物对。

3.根据权利要求1所述的用于人参品种鉴定的序列标签位点引物对，其中，所述人参品种为天丰、连丰、高丰、金丰、或仙丰。

4.根据权利要求1所述的用于人参品种鉴定的序列标签位点引物对，其中，该引物对来源于人参(Panax ginseng C.A.Meyer)。

5.一种用于鉴定人参品种的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括权利要求1-4的任意一项中所述的寡核苷酸引物对中的一个以上的引物对，以及用于进行扩增反应的试剂。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其中，所述人参品种为天丰、连丰、高丰、金丰、或仙丰。

7.一种鉴定人参品种的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

从人参样品中分离基因组DNA；

以所述分离的基因组DNA为模板，利用权利要求1-4的任意一项中所述的寡核苷酸引物对进行扩增反应，以扩增标记序列；以及

检测所述扩增的产物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中，所述人参品种为天丰、连丰、高丰、金丰、或仙丰。

9.根据权利要求7所述的方法，其中，通过DNA芯片、凝胶电泳、放射性检测、荧光检测、或者磷光检测来进行所述扩增的产物的检测。

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