CN101622232A

CN101622232A - 6-氧代-6,7-二氢-5h-二苯并[b,d]氮杂䓬-7-基衍生物

Info

Publication number: CN101622232A
Application number: CN200880006496A
Authority: CN
Inventors: A·弗洛尔; R·雅各布-劳特恩; W·沃斯特尔
Original assignee: Setters
Current assignee: Setters
Priority date: 2007-02-02
Filing date: 2008-01-23
Publication date: 2010-01-06
Also published as: IL199973A0; BRPI0807341A2; US20080188463A1; US7544679B2; TW200846005A; WO2008092786A1; AR065129A1; AU2008209861A1; MX2009007864A; PE20081662A1; CL2008000254A1; CA2676160A1; KR20090104916A; EP2109604A1; AU2008209861B2; KR101150574B1; JP2010517954A

Abstract

本发明涉及作为γ－分泌酶抑制剂的式I的6－氧代－6，7－二氢－5H－二苯并[b，d]氮杂䓬－7－基衍生物，其中R¹、R²和R³如本文所定义，其可用于治疗阿尔茨海默病或常见癌症(包括但不限于宫颈癌和乳腺癌)和造血系统的恶性肿瘤。

Description

6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[B，D]氮杂-7-基衍生物

本发明涉及式I的6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基衍生物以及其适宜药用的光学纯的差向异构体或其混合物

其中

R¹是氢或被卤素取代的低级烷基；

R²是低级烷基；

R³是被卤素取代的低级烷基、-(CH₂)_n-环烷基或-(CH₂)_n-苯基，其中苯基环是未被取代的或者被卤素取代；

n是0、1或2。

本文所用的术语“低级烷基”表示含有1至7个碳原子的饱和直链或支链烷基，例如，甲基、乙基、丙基、异丙基、正-丁基、异-丁基、2-丁基、叔-丁基等。优选的低级烷基是具有1-4个碳原子的低级烷基。

术语“被卤素取代的低级烷基”表示其中至少一个氢原子被卤素代替的上面所定义的烷基，例如CF₃、CHF₂、CH₂F、CH₂CF₃、CH₂CH₂F、CH₂CF₂CF₃、CH₂CF₂CH₃、CH₂CH₂CF₂CF₃、CH₂CH₂CF₃、CH₂CH₂CH₂CF₃和下文实施例的化合物所例举的那些被卤素取代的低级烷基。

术语“环烷基”表示含有3至6个碳原子的芳族碳环，例如环丙基、环戊基或环己基。优选的环烷基是环丙基。

已经发现，通式I的化合物是γ-分泌酶(secretase)抑制剂，它们可用于治疗阿尔茨海默病或常见癌症(包括但不限于宫颈癌和乳腺癌)和造血系统的恶性肿瘤。用在药物中的式I化合物的优点在于与WO 2005/023772中所公开的化合物相比，其具有增强的γ-分泌酶抑制作用以及良好的热力学溶解度。

阿尔茨海默病(AD)是晚年阶段的痴呆的最常见原因。AD的病理学特征在于细胞外斑块和细胞内神经原纤维缠结形式的淀粉状蛋白脑内沉积。淀粉样蛋白斑主要包含淀粉样肽(Abeta肽)，该肽通过一系列蛋白酶剪切步骤而由β-淀粉样前体蛋白(APP)生成。已经确定了APP的几种形式，其中最丰富的是695、751和770个氨基酸长度的蛋白。它们均通过差别剪接由单基因产生。Abeta肽衍生自APP的相同区域，但是N-和C-末端不同，主要类别具有40和42个氨基酸长度。

Abeta肽是通过被称为β-和γ-分泌酶的2种蛋白水解酶的相继作用由APP产生的。β-分泌酶首先在就位于跨膜区域(TM)外面的APP细胞外区域中进行裂解，产生含有TM-和胞质(cytoplasmatic)区域(CTFβ)的APP的C-末端片段。CTFβ是γ-分泌酶的底物，γ-分泌酶在TM内的几个毗邻位置进行裂解，产生Aβ肽和胞质片段。大多数Abeta肽均具有40个氨基酸长度(Aβ40)，小部分种类在其C-末端携带两个另外的氨基酸。后者被认为是致病性更强的淀粉样肽。

β-分泌酶是一种典型的天冬氨酰蛋白酶。γ-分泌酶是一种由几种蛋白组成的蛋白水解活性，还未完全了解其确切组成。但是，早老素是该活性的重要组分并且可以代表一组新的非典型的天冬氨酰蛋白酶，这些非典型的天冬氨酰蛋白酶在它们的底物的TM内进行裂解并且本身是多起源的膜蛋白。γ-分泌酶的另一些重要成分可能是nicastrin以及aph1和pen-2基因的产物。已经证明了的γ-分泌酶的底物是APP和Notch受体家族的蛋白，但是，γ-分泌酶具有宽松的底物专属性，可以进一步裂解与APP和Notch不相关的膜蛋白。

Abeta肽的产生绝对需要γ-分泌酶活性。已经用遗传手段(即除去早老素基因)和低分子量抑制化合物证明了这一点。由于根据AD的淀粉状蛋白假说，Abeta的产生和沉积是所述疾病的根本原因，所以认为γ-分泌酶的选择性的、有效的抑制剂将可用于预防和治疗AD。

因此，本发明将的化合物可通过阻断γ-分泌酶活性和减少或防止各种淀粉状蛋白源性(amyloidogenic)Abeta肽形成而用于治疗AD。

有许多文献描述了关于γ-分泌酶抑制的现有知识，例如下列出版物：

Nature Reviews/Neuroscience，第3卷，2002年4月/281，

Biochemical Society Transactions(2002)，第30卷第4部分，

Current Topics in Medicinal Chemistry，2002，2，371-383，

Current Medicinal Chemistry，2002，第9卷，第11期，1087-1106，

Drug Development Research，56，211-227，2002，

Drug Discovery Today，第6卷，第9期，2001年5月，459-462，

FEBS Letters，483，(2000)，6-10，

Science，第297卷，353-356，2002年7月，和

Journal of Medicinal Chemistry，第44卷，第13期，2001，2039-2060。

本发明的主题有式I化合物本身、式I化合物或其适宜药用的光学纯的差向异构体或混合物在制备用于治疗与γ-分泌酶抑制有关的疾病的药剂中的用途、它们的制备、以本发明的化合物为基础的药剂及其制备、以及式I化合物在控制或预防阿尔茨海默病或癌症中的用途。

本发明的另一个主题是式I化合物的所有形式的光学纯的差向异构体或其混合物。

优选的式I化合物是其中R¹是氢且R³是被卤素取代的低级烷基的那些化合物，例如下列化合物：

(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，

(R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，

(S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，

(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，

(S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，

(R)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺，

(R/S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺，

(R)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺或

(S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺。

优选的式I化合物还有其中R¹是被卤素取代的低级烷基且R³是被卤素取代的低级烷基的那些化合物，例如下列化合物：

(R)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，或

(S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺。

本发明式I化合物以及其可药用的盐可以用本领域中已知的方法来制备，例如可以用下面所述的方法来制备，该方法包括

a)将式II的化合物

与式III的化合物反应，

得到式I的化合物，

其中的取代基具有上述含义，或者，

b)将式IV的化合物

与式NH₂R³的胺反应，得到式I的化合物，

其中的取代基具有上述含义，

和，

如果需要的话，将式I化合物的差向异构形式的混合物(R/S)转化成差向异构体(R)和差向异构体(S)。

在下文和实施例1-14中可以找到详细描述。式II化合物的起始材料是已知化合物，式III的胺可以如流程图2中所述的那样来制备。

流程图1

使式II的化合物和式III的化合物在溶剂如四氢呋喃中的溶液在室温下与1-羟基-苯并三唑水合物、二异丙基乙基胺和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基-碳二亚胺盐酸盐反应。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，用硅胶色谱处理，用乙酸乙酯/庚烷洗脱，得到式I的化合物。

流程图2

R⁴＝低级烷基

式III化合物的制备

向式V的丙二酸二烷基丙基酯和碳酸铯在二甲基甲酰胺中的混悬液中用空气鼓泡。在约10-20℃下，加入水，在室温下继续搅拌约3小时。然后除去二甲基甲酰胺。加入水，用乙醚萃取，得到式VI的单烷基酯。

将式VI的单烷基酯溶解于四氢呋喃中并冷却至0℃。加入1-羟基-苯并三唑水合物、二异丙基乙基胺和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基-碳二亚胺盐酸盐，在室温下继续搅拌约4天。然后加入盐酸水溶液。在萃取和纯化后，得到式VII的化合物。

通过以常规方式在Chiralpak AD上进行色谱处理(用异丙醇/庚烷10/90洗脱)将获得的式VII化合物的差向异构形式的混合物分离成差向异构体R和S。

式III的酸可以如下制备：

将氢氧化锂在水中的溶液与位于四氢呋喃中的式VII化合物(前一步首先洗脱下来的对映体)一起在室温下搅拌过夜。首先用水/乙醚萃取，然后用盐酸水溶液/乙酸乙酯萃取，得到所需的式III的酸。

式I化合物的制备

将式II的7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和式VI的化合物在四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入1-羟基-苯并三唑水合物、二异丙基乙基胺和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续在室温下搅拌过夜。在通过蒸馏除去溶剂和进行色谱处理后，得到式VIII的化合物。

然后，将位于四氢呋喃中的所获得的式VIII化合物和位于水中的氢氧化锂的混合物在室温下搅拌过夜。蒸发掉溶剂，将残余物萃取到式V的酸中。

然后，将式V化合物和相应的胺在四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入1-羟基-苯并三唑水合物、二异丙基乙基胺和N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂并在硅胶上进行色谱处理，得到所需的式I的化合物。

本发明的化合物具有两个立体中心。它们可以以差向异构形式的混合物形式存在。一个总是S-差向异构体，另一个可以是R、S或RS差向异构体。可以在合成的早期阶段用本身已知的方法分离成所需的差向异构形式，或者优选地在后期阶段通过用色谱法对非对映异构产物进行分离来分离成所需的差向异构形式。

用下文所给出的试验对所述化合物进行研究。

γ-分泌酶试验的描述

在测量γ-分泌酶活性对适宜底物的蛋白酶剪切的试验中对供试化合物的活性进行评估。这些试验可以是细胞试验，其中例如将γ-分泌酶的底物融合在其胞质区域，得到一种转录因子。将细胞转染这种融合基因和报道基因例如荧火虫荧光素酶，所述转录因子增加其表达。γ-分泌酶对融合底物的裂解将导致报道基因的表达，可以用适宜的试验对其进行监测。还可以用无细胞体外试验对γ-分泌酶活性进行测定，在该试验中，例如将含有γ-分泌酶复合物的细胞裂解物与适宜的APP-衍生的底物(其被裂解为Abeta肽)一起孵育。可以用特异性ELISA试验测定所产生的肽的量。神经元来源的细胞系分泌Abeta肽，可以用特异性ELISA试验对其进行测量。用抑制γ-分泌酶的化合物进行处理，导致所分泌的Abeta减少，从而为抑制作用提供了一种量度。

γ-分泌酶活性体外试验使用作为γ-分泌酶源的HEK293膜部分和重组APP底物。后者由与6xHistidin尾部(为了纯化，其在可调节表达载体例如pEt15中在大肠杆菌中表达)融合的人APP的C-末端的100个氨基酸组成。这种重组蛋白与被截短的APP片段相对应，该片段在细胞外区域的γ-分泌酶裂解后产生并且构成γ-分泌酶底物。Li YM等人，PNAS 97(11)，6138-6143(2000)对试验原理进行了描述。将Hek293细胞机械破碎，通过差速离心将微粒体部分分离出来。将膜在洗涤剂(0.25％CHAPSO)中溶解并与APP底物一起孵育。用所述(Brockhaus M等人，Neuroreport 9(7)，1481-1486(1998)的ELISA试验对由该底物的γ-分泌酶裂解所产生的Abeta肽进行检测。

优选的化合物表现出＜700(nM)的IC₅₀。在下面的列表中描述了γ-分泌酶抑制作用的数据：

实施例号	体外IC₅₀(nM)	实施例号	体外IC₅₀(nM)
实施例号	体外IC₅₀(nM)	实施例号	体外IC₅₀(nM)	1a(R/S)	4	7a(R/S)	6
1b(R)	2	7b(R)	4	1a(R/S)	4	7a(R/S)	6
1b(R)	2	7b(R)	4	1c(S)	3	7c(S)	5
2a(R/S)	10	8d(R/S)	15	1c(S)	3	7c(S)	5
2a(R/S)	10	8d(R/S)	15	2b(R)	38	9(R/S)	630
2c(S)	5	10(R/S)	41	2b(R)	38	9(R/S)	630
2c(S)	5	10(R/S)	41	3a(R)	260	11a(R/S)	136
3b(S)	11	11b(R)	13	3a(R)	260	11a(R/S)	136
3b(S)	11	11b(R)	13	4a(R/S)	89	12a(R/S)	11
4b(S)	8	12b(R)	3.5	4a(R/S)	89	12a(R/S)	11
4b(S)	8	12b(R)	3.5	5c(R/S)	110	13a(R)	480
6a(R/S)	15	13b(S)	5	5c(R/S)	110	13a(R)	480
6a(R/S)	15	13b(S)	5	6g(R或S)	118	14(R/S)	30
6h(S或R)	50			6g(R或S)	118	14(R/S)	30

此外，还在THESA试验中测试了本发明的化合物的热力学溶解度。

THESA试验：

将大约2mg每种化合物在室温(22.5±1℃)下过量加入到50mM磷酸盐缓冲液中。将各样品放置在微量分析管中，将其超声1h并搅动2h。将所有混悬液放置过夜。第二天，用pH计测量所有样品的pH，用Micronic滤板(MSGVN2250)对样品进行过滤以便将固体物质与溶液分开。然后用HPLC对所有溶液进行分析。用位于DMSO中的不同浓度的化合物建立校准线。由该回归方程来确定化合物的溶解度。

从下表可以看出，与WO2005/023772的化合物相比，本发明的化合物具有更好的溶解度或活性。

式I的化合物可用作药物，例如以药物制剂的形式用作药物。所述药物制剂可以被口服施用，例如以片剂、包衣片剂、糖锭剂(dragee)、硬和软明胶胶囊剂、溶液剂、乳剂或混悬剂的形式口服施用。但是也可以直肠(例如以栓剂的形式)、胃肠外(例如以注射溶液的形式)施用。

可以使用用于制备药物制剂的药学上惰性的无机或有机载体对式I化合物进行加工。乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石粉、硬脂酸或其盐等可以用作例如片剂、包衣片剂、糖锭剂和硬明胶胶囊剂的这类载体。用于软明胶胶囊剂的适宜载体例如有植物油、蜡、脂肪、半固体和液体多元醇等。然而，根据活性物质的性质，在软明胶胶囊剂的情况下通常不需要载体。用于制备溶液剂和糖浆剂的适宜载体例如有水、多元醇、甘油、植物油等。用于栓剂的适宜载体例如有天然或硬化油、蜡、脂肪、半液体或液体多元醇等。

此外，药物制剂可含有防腐剂、增溶剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、矫味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲剂、遮蔽剂或抗氧化剂。它们也可含有其它有治疗价值的物质。

含有式I化合物或其可药用盐和治疗上惰性的载体的药剂也是本发明的主题，其制备方法同样是本发明的主题，所述制备方法包括将一种或多种式I化合物和/或可药用的酸加成盐以及如果需要的话一种或多种其它有治疗价值的物质与一种或多种治疗上惰性的载体一起制成盖仑施用形式。

根据本发明，式I的化合物可用于控制或预防以γ-分泌酶抑制为基础的疾病，如阿尔茨海默病或癌症。

剂量可以在宽范围内变化，并且当然将与各特定情况中的个体需求相适应。在口服施用的情况下，用于成人的剂量可以是每天约0.01mg至约1000mg通式I的化合物或相应量的其可药用的盐。该日剂量可以以单剂量形式或者以多个分剂量的形式施用，此外，当适合时，也可以超过所述上限。

片剂(湿法制粒)

制备操作

1.将项目1、2、3和4混合，用纯化水制粒。

2.在50℃下干燥颗粒。

3.使颗粒通过适宜的研磨设备。

4.加入项目5并混合3分钟；在适宜的压片机上进行压制。

胶囊剂

制备操作

1.将项目1、2和3在适宜的混合器中混合30分钟。

2.加入项目4和5并混合3分钟。

3.填充到适宜的胶囊中。

实施例1

(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺和

(R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺和

(S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺

a)(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂 -7- 基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺

将101mg(0.45mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和119mg(0.45mmol)(RS)-2-羟基-2-甲基-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙酰胺酸在15ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入61.8mg(0.45mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、157μl(0.90mmol)二异丙基乙基胺和87.6mg(0.45mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。在室温下继续搅拌过夜。将混合物倾倒到冰/水上并加入1N盐酸水溶液直至其pH＝1。用乙醚萃取，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，在硅胶上进行色谱处理，用乙酸乙酯/环己烷1/1洗脱，得到86.1mg(41％)(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，为白色固体，MS(m/e)：472.1(M+H)⁺。

b)(R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺和

c)(S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂 -7- 基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺

通过使用YMC Pack SIL的制备型HPLC对124mg(0.27mmol)差向异构的(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺混合物进行分离，用庚烷/乙醇/异丙醇/乙腈混合物洗脱，得到11mg(R或S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，差向异构体A(第一个被洗脱下来)，MS(m/e)：469.9(M-H)^-，和19mg(S或R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-N′-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，差向异构体B(第二个被洗脱下来)，MS(m/e)：472.1(M+H)⁺。

实施例2

(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺和

(R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺和

(S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺

a)(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺

将210mg(0.94mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和215mg(0.94mmol)(RS)-2-羟基-2-甲基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙酰胺酸在50ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入129mg(0.94mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、327μl(1.87mmol)二异丙基乙基胺和183mg(0.94mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。在室温下继续搅拌过夜。将混合物倾倒到冰/水上，加入1N盐酸水溶液直至其pH＝1。首先用乙醚萃取，然后用乙酸乙酯萃取，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤，在硅胶上进行色谱处理，用乙酸乙酯/庚烷2/1洗脱，得到150mg(41％)(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，为白色固体，MS(m/e)：436.1(M+H)⁺。

b)(R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺和

c)(S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺

通过使用Chiralpak AD的制备型HPLC对150mg(mmol)差向异构的(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺混合物进行分离，用乙醇/庚烷20/80洗脱，得到60mg(R或S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，差向异构体A(第一个被洗脱下来)，MS(m/e)：436.1(M+H)⁺，和75mg(S或R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，差向异构体B(第二个被洗脱下来)，MS(m/e)：436.1(M+H)⁺。

实施例3

(R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺和

(S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺

a)(R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺

将70.0mg(0.31mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和73.9mg(0.34mmol)(R)-2-羟基-2-甲基-N-(2，2，2-三氟-乙基)-丙酰胺酸在6ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入46.4mg(0.34mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、117μl(0.69mmol)二异丙基乙基胺和65.8mg(0.34mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌16小时。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度100/0至25/75)，得到101mg(77％)(R)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺，MS(m/e)：422.0(M+H)⁺。

b)(S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺

将70.0mg(0.31mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和73.9mg(0.34mmol)(S)-2-羟基-2-甲基-N-(2，2，2-三氟-乙基)-丙酰胺酸在6ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入46.4mg(0.34mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、117μl(0.69mmol)二异丙基乙基胺和65.8mg(0.34mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌16小时。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度100/0至25/75)，得到104mg(79％)(S)-2-羟基-2-甲基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

实施例4

(R/S)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺和

(R)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺和

(S)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺

a)(R/S)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺

将250mg(1.12mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和256mg(1.12mmol)(RS)-2-羟基-2-(2，2，2-三氟-乙基氨基甲酰基)-丁酸在24ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入174mg(0.94mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、390μl(2.23mmol)二异丙基乙基胺和218mg(1.12mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。在室温下继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用乙酸乙酯/庚烷2/8洗脱，得到330mg(68％)(R/S)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺，为无色油状物，MS(m/e)：436.1(M+H)⁺。

b)(R)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂 -7- 基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺和

c)(S)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂 -7- 基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺

通过使用Chiralpak AD的制备型HPLC对310mg(mmol)差向异构的(R/S)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺混合物进行分离，用异丙醇/庚烷15/85洗脱，得到120mg(R或S)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺，差向异构体A(第一个被洗脱下来)，MS(m/e)：436.1(M+H)⁺，和120mg(S或R)-2-乙基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-N’-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺，差向异构体B(第二个被洗脱下来)，MS(m/e)：436.1(M+H)⁺。

实施例5

(R/S)-N-环丙基甲基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-2-丙基-丙二酰胺

a)(R/S)-2-羟基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸乙酯

将500mg(2mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和466mg(2mmol)(RS)-2-羟基-2-丙基-丙二酸单乙酯在40ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入331mg(2mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、830μl(5mmol)二异丙基乙基胺和470mg(2mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。在室温下继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度90/10至50/50)，得到630mg(71％)(R/S)-2-羟基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸乙酯，为无色泡沫，MS(m/e)：397.3(M+H)⁺。

b)(R/S)-2-羟基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸

将600mg(2mmol)位于8ml四氢呋喃中的(R/S)-2-羟基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基氨基甲酰基)-戊酸乙酯和70.0mg(2mmol)位于4ml水中的氢氧化锂的混合物在室温下搅拌过夜。蒸发掉溶剂，用乙酸乙酯在pH 1下萃取残余物，得到450mg(81％)(R/S)-2-羟基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸，MS(m/e)：367.1(M-H)^-。

c)(R/S)-N-环丙基甲基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2-丙基-丙二酰胺

将70.0mg(0.19mmol)2-羟基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸和14.9mg(0.21mmol)环丙烷甲基胺在3ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入28.2mg(0.21mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、71μl(0.42mmol)二异丙基乙基胺和40.1mg(0.21mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度90∶10至50∶50)，得到50.0mg(62％)(R/S)-N-环丙基甲基-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2-丙基-丙二酰胺：MS(m/e)：422.4(M+H)⁺。

实施例6

(R/S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2-丙基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺

和(R)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2-丙基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺和

(S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2-丙基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺

a)(R/S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2-丙基 -N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺

-7-基氨基甲酰基)-戊酸和31.3mg(0.21mmol)3，3，3-三氟丙基胺盐酸盐在3ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入28.2mg(0.21mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、103μl(0.61mmol)二异丙基乙基胺和40.1mg(0.21mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度90∶10至50∶50)，得到50.0mg(57％)(R/S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-2-丙基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺：MS(m/e)：464.0(M+H)⁺。

b)2-羟基-2-丙基-丙二酸单乙酯

在室温下，向15.0g(72.7mmol)丙二酸二乙基丙基酯和47.6g(145mmol)碳酸铯在120ml二甲基甲酰胺中的混悬液中用空气鼓泡1小时。在10-20℃下，加入150ml水并在室温下继续搅拌3小时。然后通过在35℃浴温下真空蒸馏除去大部分二甲基甲酰胺。加入1l水并用乙醚萃取，得到11.7g 2-羟基-2-丙基-丙二酸单乙酯，MS(m/e)：189.1(M-H)^-。

c)2-羟基-2-(3，3，3-三氟丙基氨基甲酰基)戊酸乙酯

将量为4.03g(～21mmol)2-羟基-2-丙基-丙二酸单乙酯溶解于200ml四氢呋喃中并冷却至0℃。加入2.92g(21.2mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、12.9ml(74.1mmol)二异丙基乙基胺和4.14g(21.2mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐，在室温下继续搅拌4天。加入45ml 2N盐酸水溶液。用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，在硅胶上进行色谱处理，用乙酸乙酯/环己烷3/1洗脱，得到4.60g(76％)2-羟基-2-(3，3，3-三氟丙基氨基甲酰基)戊酸乙酯，为黄色油状物，MS(m/e)：286.1(M+H)⁺。

d)(R和S)-2-羟基-2-(3，3，3-三氟丙基氨基甲酰基)戊酸乙酯

通过使用Chiralpak AD的色谱法将外消旋的2-羟基-2-(3，3，3-三氟丙基氨基甲酰基)戊酸乙酯分离成对映体，用异丙醇/庚烷10/90洗脱，得到0.96g(21％)(R或S)-2-羟基-2-(3，3，3三氟丙基氨基甲酰基)戊酸乙酯(第一个被洗脱下来的对映体)，MS(m/e)：286.1(M+H)⁺，和1.09g(24％)(S或R)-2-羟基-2-(3，3，3-三氟丙基氨基甲酰基)戊酸乙酯(第二个被洗脱下来的对映体)，MS(m/e)：286.4(M+H)⁺。

e)(R或S)-2-羟基-2-(3，3，3-三氟-丙基氨基甲酰基)-戊酸，实体A

将131mg(3.09mmol)氢氧化锂在8ml水中的溶液与880mg(3.09mmol)位于18ml四氢呋喃中的(R或S)-2-羟基-2-(3，3，3三氟丙基氨基甲酰基)戊酸乙酯(前一步第一个被洗脱下来的对映体)一起在室温下搅拌过夜。首先用水/乙醚萃取，然后用1N盐酸水溶液/乙酸乙酯萃取，得到744mg(93％)(R或S)-2-羟基-2-(3，3，3-三氟-丙基氨基甲酰基)-戊酸，实体A，MS(m/e)：256.1(M-H)^-。

f)(S或R)-2-羟基-2-(3，3，3-三氟-丙基氨基甲酰基)-戊酸，实体B

将158mg(3.72mmol)氢氧化锂在8.5ml水中的溶液与1.06g(3.72mmol)(S或R)-2-羟基-2-(3，3，3三氟丙基氨基甲酰基)戊酸乙酯(步骤c)第二个被洗脱下来的对映体)一起在室温下搅拌过夜。首先用水/乙醚萃取，然后用1N盐酸水溶液/乙酸乙酯萃取，得到870mg(91％)(S或R)-2-羟基-2-(3，3，3-三氟-丙基氨基甲酰基)-戊酸，实体B，MS(m/e)：256.1(M-H)^-。

g)(R或S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂 -7-基)-2-丙基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，实体A

将135mg(0.60mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和154mg(0.60mmol)(R或S)-2-羟基-2-(3，3，3-三氟-丙基氨基甲酰基)-戊酸，实体A在10ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入93.8mg(0.60mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、210μl(1.20mmol)二异丙基乙基胺和117mg(0.60mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用乙酸乙酯/庚烷洗脱(梯度10∶90至100∶0)，得到218mg(78％)(R或S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2-丙基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，实体A：MS(m/e)：462.0(M-H)^-。

h)(S或R)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2- 丙基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，实体B

将135mg(0.60mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和154mg(0.60mmol)(S或R)-2-羟基-2-(3，3，3-三氟-丙基氨基甲酰基)-戊酸，实体B在10ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入93.8mg(0.60mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、210μl(1.20mmol)二异丙基乙基胺和117mg(0.60mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用乙酸乙酯/庚烷洗脱(梯度10∶90至100∶0)，得到221mg(80％)(S或R)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-2-丙基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，实体B：MS(m/e)：462.0(M-H)^-。

实施例7

(R/S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺

和(R)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺和

(S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺

a)(R/S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺

-7-基氨基甲酰基)-戊酸和31.2mg(0.21mmol)2，2，3，3，3-五氟丙基胺在3ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入28.2mg(0.21mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、72μl(0.42mmol)二异丙基乙基胺和40.1mg(0.21mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度90∶10至50∶50)，得到60.0mg(63％)(R/S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺：MS(m/e)：500.4(M+H)⁺。

b)(R)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺和

c)(S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺

通过使用Chiralpak AD的制备型HPLC对500mg(1.0mmol)差向异构的(R/S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺混合物进行分离，用庚烷/乙醇90∶10洗脱，得到115mg(22％)(R或S)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺，差向异构体A(第一个被洗脱下来)，MS(m/e)：500.4(M+H)⁺，和95mg(19％)(S或R)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-2-丙基-丙二酰胺，差向异构体B(第二个被洗脱下来)，MS(m/e)：500.4(M+H)⁺。

实施例8

(R/S)-2-羟基-2-异丁基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺

a)(R/S)-2-羟基-2-异丁基-丙二酸单甲酯

在室温下，向0.5g(3mmol)(2-甲基丙基)丙二酸二甲酯和1.73g(5mmol)碳酸铯在7ml二甲基甲酰胺中的混悬液中用空气鼓泡1小时。在室温下继续搅拌24小时。加入25ml水，用乙醚萃取混合物。用1N盐酸水溶液酸化至pH＝1并用乙酸乙酯萃取，得到0.42g(83％)(R/S)-2-羟基-2-异丁基-丙二酸单甲酯，MS(m/e)：189.4(M-H)^-。

b)(R/S)-2-羟基-4-甲基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸甲酯

将350mg(1.56mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂-6-酮和327mg(1.72mmol)(R/S)-2-羟基-2-异丁基-丙二酸单甲酯在30ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入232mg(1.72mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、584μl(3.43mmol)二异丙基乙基胺和329mg(192mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。在室温下继续搅拌过夜。用水/乙酸乙酯萃取，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度90/10至50/50)，得到470mg(76％)(R/S)-2-羟基-4-甲基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸甲酯，为无色泡沫，MS(m/e)：397.3(M+H)⁺。

c)(R/S)-2-羟基-4-甲基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂 -7-基氨基甲酰基)-戊酸

将430mg(1.09mmol)位于6ml四氢呋喃中的(R/S)-2-羟基-4-甲基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸甲酯和50.1mg(1.19mmol)位于3ml中的氢氧化锂单水合物的混合物在室温下搅拌过夜。蒸发掉溶剂，在pH 1下用乙酸乙酯对残余物进行萃取，得到390mg(94％)(R/S)-2-羟基-4-甲基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基氨基甲酰基)-戊酸，MS(m/e)：381.0(M-H)^-。

d)(R/S)-2-羟基-2-异丁基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7- 基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺

将50.0mg(0.13mmol)2-羟基-4-甲基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸和39.0mg(0.26mmol)2，2，3，3，3-五氟丙基胺在1.5ml二甲基甲酰胺中的溶液冷却至0℃，加入20μl(0.14mmol)三乙胺和54.5mg(0.14mmol)六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓(HBTU)。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度19∶1至1∶1)，得到45.0mg(67％)(R/S)-2-羟基-2-异丁基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺：MS(m/e)：514.5(M+H)⁺。

实施例9

(R/S)-N-环丙基甲基-2-羟基-2-异丁基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-丙二酰胺

-7-基氨基甲酰基)-戊酸和18.6mg(0.26mmol)环丙烷甲基胺在1.5ml二甲基甲酰胺中的溶液冷却至0℃，加入20μl(0.14mmol)三乙胺和54.5mg(0.14mmol)六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲输(HBTU)。在室温下继续搅拌过周末。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度19∶1至1∶1)，得到10.0mg(18％)(R/S)-N-环丙基甲基-2-羟基-2-异丁基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-丙二酰胺，MS(m/e)：436.1(M+H)⁺。

实施例10

(R/S)-N-(3，5-二氟-苄基)-2-羟基-2-异丁基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-丙二酰胺

-7-基氨基甲酰基)-戊酸和37.4mg(0.26mmol)3，5-二氟苄基胺在1.5ml二甲基甲酰胺中的溶液冷却至0℃，加入20μl(0.14mmol)三乙胺和54.5mg(0.14mmol)六氟磷酸O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓(HBTU)。在室温下继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度19∶1至1∶1)，得到10.0mg(15％)(R/S)-N-(3，5-二氟-苄基)-2-羟基-2-异丁基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-丙二酰胺，MS(m/e)：508.5(M+H)⁺。

实施例11

(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，和

-7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺和

-7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺

a)(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂 -7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺

将200mg(0.65mmol)(S)-7-氨基-5-(2，2，2-三氟-乙基)-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和150mg(0.65mmol)(RS)-2-羟基-2-甲基-N-(3，3，3-三氟-丙基)-丙酰胺酸在7ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入102mg(0.65mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、228μl(1.31mmol)二异丙基乙基胺和128mg(0.65mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。在室温下继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用乙酸乙酯/庚烷洗脱(梯度1/4至4/1)，得到220mg(65％)(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，为白色固体，MS(m/e)：518.2(M+H)⁺。

b)(R)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，和

c)(S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并 [b，d]氮杂

-7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，

通过使用Chiralpak AD的制备型HPLC对200mg差向异构的(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺混合物进行分离，用异丙醇/庚烷15/85洗脱，得到90mg(R或S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，差向异构体A(第一个被洗脱下来)，MS(m/e)：518.5(M+H)⁺，和90mg(S或R)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(3，3，3-三氟-丙基)-丙二酰胺，差向异构体B(第二个被洗脱下来)，MS(m/e)：518.5(M+H)⁺。

实施例12

-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，和

-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺和

-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺

a)(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂 -7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺

使144mg(0.47mmol)(S)-7-氨基-5-(2，2，2-三氟-乙基)-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和125mg(0.47mmol)(RS)-2-羟基-2-甲基-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙酰胺酸在21ml四氢呋喃中的溶液在室温下与73.6mg(0.47mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、165μl(0.94mmol)二异丙基乙基胺和92.1mg(0.47mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐反应。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用乙酸乙酯/庚烷洗脱(梯度15/85至40/60)，得到207mg(79％)(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，为白色固体，MS(m/e)：554.3(M+H)⁺。

-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺和

-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺

通过使用Chiralcel OD的制备型HPLC对差向异构的(R/S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺混合物进行分离，用异丙醇/庚烷10/90洗脱，得到40mg(R或S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，差向异构体A(第一个被洗脱下来)，MS(m/e)：554.3(M+H)⁺，和40mg(S或R)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基]-N-(2，2，3，3，3-五氟-丙基)-丙二酰胺，差向异构体B(第二个被洗脱下来)，MS(m/e)：554.3(M+H)⁺。

实施例13

(R)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂-7-基]-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺和

-7-基]-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺

a)(R)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺和

将75.0mg(0.25mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和52.7mg(0.25mmol)(R)-2-羟基-2-甲基-N-(2，2，2-三氟-乙基)-丙酰胺酸在7ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入33.8mg(0.25mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、86μl(0.49mmol)二异丙基乙基胺和47.9mg(0.25mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌16小时。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度10/90至40/60)，得到37mg(30％)(R)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺，MS(m/e)：504.4(M+H)⁺。

b)(S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基]-N′-(2，2，2-三氟-乙基)-丙二酰胺

将75.0mg(0.25mmol)(S)-7-氨基-5H，7H-二苯并[b，d]氮杂

-6-酮和52.7mg(0.25mmol)(S)-2-羟基-2-甲基-N-(2，2，2-三氟-乙基)-丙酰胺酸在7ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入33.8mg(0.25mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、86μl(0.49mmol)二异丙基乙基胺和47.9mg(0.25mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度10/90至40/60)，得到38mg(31％)(S)-2-羟基-2-甲基-N-[(S)-6-氧代-5-(2，2，2-三氟-乙基)-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

实施例14

(R/S)-N-(2，2-二氟-丙基)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2-丙基-丙二酰胺

将50.0mg(0.14mmol)2-羟基-2-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基氨基甲酰基)-戊酸和14.2mg(0.15mmol)2，2-二氟丙基胺在2.5ml四氢呋喃中的溶液冷却至0℃，加入20.2mg(0.15mmol)1-羟基-苯并三唑水合物、39μl(0.3mmol)二异丙基乙基胺和28.6mg(0.15mmol)N-(3-二甲基氨基丙基)-N’-乙基-碳二亚胺盐酸盐。继续搅拌过夜。通过蒸馏除去溶剂，在硅胶上进行色谱处理，用庚烷/乙酸乙酯洗脱(梯度90∶10至50∶50)，得到30.0mg(50％)(R/S)-N-(2，2-二氟-丙基)-2-羟基-N-((S)-6-氧代-6，7-二氢-5H-二苯并[b，d]氮杂

-7-基)-2-丙基-丙二酰胺：MS(m/e)：446.1(M+H)⁺。