CN101553574B - 制备视黄酯的方法 - Google Patents

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Abstract

经由化学酶方法，在酶存在下，由短链视黄酯与适当长链酸或酯制备视黄醇的长链酯。使用各种不同添加剂提高了所需酯的产率并且促进了其纯化。

Description

制备视黄酯的方法
发明领域
本发明涉及通过化学酶方法，在酶存在下，由短链视黄酯与合适的长链酸或酯制备视黄醇的长链酯。
发明背景
很久以来，视黄醇(维生素A)和视黄酯已经被加到化妆品组合物中以提供局部有益效果。视黄醇自身是不稳定的，并且在过量使用时具有毒性。然而，长链视黄酯是优选的，因为它们更稳定。
长链视黄酯的传统化学制备包括将视黄醇与长链酸、酰氯或酯反应，或者通过短链视黄酯与长链脂肪酸酯的酯基转移而制得。这些方法使用苛刻的试剂或高温，由于视黄醇或视黄酯对这些类型的反应条件是不稳定的，所以这可引起困难。
已经有几篇关于长链视黄酯的化学酶合成的报道。很多这些合成使用昂贵并且不稳定的视黄醇作为原料(O′Connor等人，Aust.J.Chem.1992，45，641；Maugard，等人，J.Mol.Catal.B：Enzymatic 2000，8，275；Maugard et.al.，Biotechnol.Prog.2000，16，358；Maugard等人，Biotechnol.Prog.2002，18，424.)。与视黄醇相比，视黄酯例如乙酸视黄酯要稳定得多，并且价格也显著降低，有几篇报道已经使用这种材料作为生物催化制备长链视黄酯的原料。未审查的日本专利申请(JP62-248495，1987)在有机溶剂中使用维生素A乙酸酯和脂肪酸，所述有机溶剂含有用O-甲氧基聚乙二醇修饰的脂肪酶，以制备长链视黄酯。虽然获得了所需产物的合理产率，但是为了成功，该方法需要对脂肪酶进行单独修饰。不需要该修饰的方法将是更期望的。国际专利申请WO 2004/044212 A1详细描述了由视黄醇或视黄酯和动物或植物来源的脂肪或油在不含溶剂的条件下生物催化合成长链视黄酯。遗憾的是，该方法使用高温，并且生成所需产物的转化率仅为中等(17-44％)，这使得分离变复杂。因此，由易于获得的前体制备长链视黄酯的温和方法是值得关注的。
发明概述
本发明的第一个实施方案涉及制备视黄酯的方法。该方法包括将式2的短链视黄酯：
Figure G2007800375157D00021
与长链酸或长链酯在有机溶剂和酶存在下反应，以形成视黄酯。R4选自氢、C1-C4烷基和C2-C4烯基。
另一个实施方案涉及制备由通式1代表的长链视黄酯化合物的方法：
Figure G2007800375157D00022
根据该实施方案的方法包括将短链视黄酯与长链酸或长链酯在有机溶剂和酶存在下，并且任选在至少一种分子筛和/或至少一种离子交换树脂存在下反应，以形成视黄酯。R选自以下基团中的至少一个：C4-C24烷基、C4-C24烯基、C5-C24二烯基、C6-C24三烯基、C8-C24四烯基、C3-C8环烷基、C6-C20碳环芳基、C4-C20杂芳基及其混合物，其中所述杂芳基包括硫、氮和氧中的至少一个。
发明详述
本发明涉及制备由通式1代表的长链视黄酯化合物的方法：
Figure G2007800375157D00031
其中
R选自取代和未取代的，支链和直链，饱和、不饱和和多不饱和的C4-C20烷基，取代和未取代的C3-C8环烷基，取代和未取代的C6-C20碳环芳基，取代和未取代的C4-C20杂芳基及其混合物，其中所述杂芳基包括硫、氮和氧中的至少一个；
优选的化合物是由结构1代表的化合物，其中R选自取代和未取代的、支链和直链饱和的C4-C24烷基，取代和未取代的、支链和直链C4-C24烯基，取代和未取代的、支链和直链C4-C24二烯基，取代和未取代的、支链和直链C6-C24三烯基，和取代和未取代的、支链和直链C8-C24四烯基或其混合物。
可由R代表的烷基、烯基、二烯基、三烯基和四烯基可以是直链或支链的含有最高达约24个碳原子的脂族烃基，并且可以被取代，例如被1-3个选自下列的基团取代：C1-C6-烷氧基、氰基、C2-C6-烷氧基羰基、C2-C6-烷酰基氧基、羟基、芳基、杂芳基、巯基、硫醚、二硫化物和卤素。术语“C1-C6-烷氧基”、“C2-C6-烷氧基羰基”和“C2-C6-烷酰基氧基”是用于指分别对应于结构-OR2、-CO2R2和-OCOR2的基团，其中R2是C1-C6-烷基或取代的C1-C6-烷基。术语“C3-C8-环烷基”是用于指具有3-8个碳原子的饱和碳环烃基。
R可代表的芳基可包括苯基、萘基或蒽基，以及被1-3个选自下列的取代基取代的苯基、萘基或蒽基：C1-C6-烷基、取代的C1-C6-烷基、C6-C10芳基、取代的C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基、卤素、羧基、氰基、C1-C6-烷酰基氧基、C1-C6-烷硫基、C1-C6-烷基磺酰基、三氟甲基、羟基、C2-C6-烷氧基羰基、C2-C6-烷酰基氨基和-O-R3、S-R3、-SO2-R3、-NHSO2R3和-NHCO2R3，其中R3是苯基、萘基，或者被1-3个选自下列的取代基取代的苯基或萘基：C1-C6-烷基、C6-C10芳基、C1-C6-烷氧基和卤素。
杂芳基包括5-或6-元芳环，其含有1-3个选自氧、硫和氮的杂原子。这样的杂芳基的实例包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、噻唑基、异噻唑基、噁唑基、异噁唑基、三唑基、噻二唑基、噁二唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、苯并噁唑基、苯并噻唑基、苯并咪唑基、吲哚基等。杂芳基可以被取代，例如被最高达3个基团取代，所述基团是例如C1-C6-烷基、C1-C6-烷氧基、取代的C1-C6-烷基、卤素、C1-C6-烷硫基、芳基、芳硫基、芳氧基、C2-C6-烷氧基羰基和C2-C6-烷酰基氨。杂芳基还可以被稠合环系例如苯并或萘并残基取代，所述稠合环系可以是未取代的或者是被取代的，例如被最高达3个在前一句子中提出的基团取代。术语“卤素”是用于指氟、氯、溴和碘。
优选的本发明化合物是式1化合物，其中R-CO是亚油酰基、硬脂酰基、亚麻酰基、共轭的亚油酰基、棕榈酰基、油酰基、花生酰基、肉豆蔻酰基、月桂酰基、棕榈油酰基、硫辛酰基、4-苯基丁酰基、环己基乙酰基、苯基乙酰基、N-Boc 3-吲哚丁酰基和庚二酰基或其混合物。
本发明的第二个实施方案包括将短链视黄酯2：
Figure G2007800375157D00041
与长链酸或长链酯在有机溶剂和酶存在下，并且任选在至少一种分子筛和/或至少一种离子交换树脂存在下反应，以形成所需视黄酯1。
短链视黄酯的取代基R4选自氢、C1-C4取代或未取代的烷基和C2-C4烯基。C1-C4烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基等。C2-C4烯基的实例包括乙烯基、1-丙烯基、1-异丙烯基、1-丁烯基等。优选的取代基R4包括甲基和乙基，甲基是最优选的。短链视黄酯可以以纯净形式使用，或者在吸收剂例如植物油存在下使用，其中稀释剂的百分比可以为0-90％。
该方法是在选自下列的惰性溶剂存在下进行：环状或非环状醚溶剂，例如乙醚、二异丙基醚、叔丁基甲基醚或四氢呋喃，芳烃例如苯、甲苯或二甲苯，脂族或环脂族饱和或不饱和烃例如己烷、庚烷、环己烷或苧烯，卤代烃例如二氯甲烷、二氯乙烷、二溴乙烷、四氯乙烯或氯苯，极性非质子溶剂例如乙腈、二甲基甲酰胺或二甲亚砜，或其混合物。优选的溶剂是甲苯、苧烯和乙腈。该方法可以在约-100℃至溶剂沸点的温度下，优选约0-60℃，最优选20-50℃的温度下进行。基于2，长链酸或长链酯的量可以为0.85至20当量，并且优选为1至10当量。用于本发明方法的酶选自蛋白酶、脂肪酶、磷脂酶或酯酶。优选的酶是脂肪酶。这些脂肪酶可以呈全细胞、分离的天然酶或固定在载体上的形式。这些脂肪酶的实例包括但不限于Lipase PS(得自假单胞菌属(Pseudomonas sp)物种)、Lipase PS-C(得自假单胞菌属物种，固定在陶瓷上)、Lipase PS-D(得自假单胞菌属物种，固定在硅藻土上)、Lipoprime 50T、Lipozyme TL IM或Novozyme 435(得自南极假丝酵母(Candida antarctica)，固定在丙烯酸树脂上)。
本发明方法可以任选在选自分子筛或离子交换树脂的各种添加剂存在下进行。特别优选的是弱碱性离子交换树脂，因为与没有离子交换树脂的相同反应相比，这些材料意料不到地提高了2转化成1的转化率。这些树脂的实例是AmberliteR或AmberlystR弱碱性树脂，例如Amberlite IRA-95、Amberlite IRA-94和Amberlyst A-21，虽然似乎任何弱碱性树脂都是可接受的。
本发明方法的产物可以使用本领域技术人员已知的方法例如萃取、过滤或结晶来分离。如果需要的话，可以使用本领域技术人员已知的方法例如萃取、色谱法、蒸馏或结晶来纯化产物1。
实施例
通过以下实施例来进一步举例说明本发明提供的新方法。
实施例1：
使用1当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物搅拌，并且在50℃加热1小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明49.8％转化成亚油酸视黄酯，含有39.8％乙酸视黄酯和10.4％视黄醇。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，甲醇洗脱剂，在350nm检测)：tR 4.77分钟(亚油酸视黄酯)；tR 2.32分钟(乙酸视黄酯)；tR 2.08分钟(视黄醇)。
实施例2：
在亲有机物质的分子筛存在下用1当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中，并且加到100mg亲有机物质的分子筛中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg of Novozyme 435。将该反应混合物搅拌并且在50℃加热1小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明53.2％转化成了亚油酸视黄酯，含有14.4％乙酸视黄酯和32.4％视黄醇。
实施例3：
在Amberlite IRA-95存在下使用1当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中，并且加到50mg干燥的Amberlite IRA-95中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg of Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌2小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明72.3％转化成了亚油酸视黄酯，含有16.3％乙酸视黄酯和11.3％视黄醇。再搅拌2天，没有获得任何进一步的改变。
实施例4：
使用1当量亚油酸制备亚油酸视黄酯in the presence of Amberlyst A-21
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中，并且加到50mg干燥的Amberlyst A-21中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌2小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明71.7％转化成了亚油酸视黄酯，含有17.7％乙酸视黄酯和10.6％视黄醇。再搅拌2天，没有获得任何进一步的改变。
实施例5：
使用2当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸(56mg；2.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌2小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明63.4％转化成了亚油酸视黄酯，含有30.5％乙酸视黄酯和4.8％视黄醇。
实施例6：
在Amberlyst A-21存在下使用2当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯，并且加到50mg干燥的Amberlyst A-21.亚油酸(56mg；2.0当量)然后加入120mgNovozyme 435.将该反应混合物在室温搅拌2小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明79.0％转化成了亚油酸视黄酯，含有14.1％乙酸视黄酯和6.9％视黄醇。搅拌过夜没有获得任何进一步改变。
实施例7：
在植物油中使用2当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(52％在植物油中的混合物，63mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸(56mg；2.0当量)，然后加入120mgNovozyme 435。将该反应混合物搅拌并且在50℃加热1小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明71.7％转化成了亚油酸视黄酯，含有18.0％乙酸视黄酯和10.2％视黄醇。
实施例8：
使用5当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸(140mg；2.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌2小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明78.7％转化成了亚油酸视黄酯，含有17.6％乙酸视黄酯和3.7％视黄醇。
实施例9：
在Amberlyst A-21存在下使用5当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中，并且加到50mg干燥的Amberlyst A-21中。加入亚油酸(140mg；5.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌2小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明87.4％转化成了亚油酸视黄酯，含有9.2％乙酸视黄酯和3.4％视黄醇。搅拌过夜没有获得任何进一步改变。
实施例10：
在植物油中使用5当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(52％在植物油中的混合物，63mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸(140mg；5.0当量)，然后加入120mgNovozyme 435。将该反应混合物搅拌，并且在50℃加热1小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明83.0％转化成了亚油酸视黄酯，含有10.9％乙酸视黄酯和6.2％视黄醇。
实施例11：
在乙腈中使用2当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
在超声下将乙酸视黄酯(500mg；1.52mmol)溶解在3.5mL乙腈中。加入亚油酸(850mg；3.04mmol；2.0当量)，然后加入120mg Novozyme435。将该反应混合物在室温搅拌19小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明28.7％转化成了亚油酸视黄酯，含有70.8％乙酸视黄酯和0.5％视黄醇。
实施例12：
在Amberlyst A-21存在下在乙腈中使用2当量亚油酸制备亚油酸视黄 酯
在超声下将乙酸视黄酯(500mg；1.52mmol)溶解在3.5mL乙腈中。加入干燥的Amberlyst A-21(0.25g)。加入亚油酸(850mg；3.04mmol；2.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌19小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明58.5％转化成了亚油酸视黄酯，含有40.0％乙酸视黄酯和1.6％视黄醇。
实施例13：
在苧烯中使用2当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(500mg；1.52mmol)和亚油酸(850mg；3.04mmol；2.0当量)溶解在3.5mL苧烯中，加入Novozyme 435(120mg)，并且将该反应混合物在室温搅拌23小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明65.8％转化成了亚油酸视黄酯，含有32.3％乙酸视黄酯和1.9％视黄醇。
实施例14：
在Amberlyst A-21存在下在苧烯中使用2当量亚油酸制备亚油酸视黄 酯
将乙酸视黄酯(500mg；1.52mmol)和亚油酸(850mg；3.04mmol；2.0当量)溶解在3.5mL苧烯中。加入干燥的Amberlyst A-21(0.25g)和Novozyme 435(120mg)，并且将该反应混合物在室温搅拌23小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明90.3％转化成了亚油酸视黄酯，含有8.5％乙酸视黄酯和1.2％视黄醇。
实施例15：
使用2当量亚油酸制备亚油酸视黄酯并且分离产物
将乙酸视黄酯(4.11g；12.5mmol)和亚油酸(7.01g；25.0mmol；2.0当量)溶解在35mL甲苯中。加入Novozyme 435(1.0g)和干燥的Amberlyst A-21(2.1g)，并且将该反应混合物抽空并且将该反应混合物抽空，并且用氮气填充10次。将该反应混合物在黑暗中于室温搅拌5.5小时，这时HPLC分析表明90.3％转化成了亚油酸视黄酯(9.1％乙酸视黄酯和0.6％视黄醇)。将该反应混合物过滤并浓缩，然后与庚烷浓缩两次(每次10mL)。将残余物溶解在庚烷(50mL)中，并且用2×80mL的10％碳酸钾水溶液和甲醇的1∶1混合物洗涤。将有机层进一步用饱和碳酸氢钠(10mL)、水(30mL)和甲醇(40mL)的混合物洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩，获得了5.14g(75％)黄色油状物。将一部分该材料(4.00g)溶解在40mL庚烷中，并且用20mL甲醇洗涤。将庚烷层浓缩，获得了3.77g(71％总产率)亚油酸视黄酯。分析该产物表明90.9％亚油酸视黄酯(HPLC面积百分比)，0.26wt％亚油酸和0.06wt％视黄醇。将初始含水萃取液(使用10％碳酸钾水溶液和甲醇的1∶1混合物)用25mL 3M HCl酸化至pH 1。将所得混合物用20mL庚烷萃取。将有机溶液用硫酸钠干燥并浓缩，获得了3.91g(56％初始装料)回收的亚油酸，其适用于再使用。
实施例16：
使用1当量亚油酸甲酯制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸甲酯(30mg；1.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌过夜，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明49.3％转化成了亚油酸视黄酯，含有36.9％乙酸视黄酯和13.8％视黄醇。
实施例17：
采用Lipase PS用1当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Lipase PS(Amano)。将该反应混合物在室温搅拌45小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明1.4％转化成了亚油酸视黄酯，含有97.5％乙酸视黄酯和1.1％视黄醇。
实施例18：
采用Lipase PS在Amberlyst A-21存在下用1当量亚油酸制备亚油酸视 黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中，并且加到50mg干燥的Amberlyst A-21中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Lipase PS(Amano)。将该反应混合物在室温搅拌45小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明10.0％转化成了亚油酸视黄酯，含有87.3％乙酸视黄酯和2.7％视黄醇。
实施例19：
采用Lipase PS-C用1当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Lipase PS-C(Amano)。将该反应混合物在室温搅拌45小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明46.1％转化成了亚油酸视黄酯，含有48.7％乙酸视黄酯和5.2％视黄醇。
实施例20：
采用Lipase PS-C在Amberlyst A-21存在下使用1当量亚油酸制备亚油 酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中，并且加到50mg干燥的Amberlyst A-21中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Lipase PS-C(Amano)。将该反应混合物在室温搅拌45小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明68.8％转化成了亚油酸视黄酯，含有23.6％乙酸视黄酯和7.6％视黄醇。
实施例21：
采用Libase PS-D用1当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Lipase PS-D(Amano)。将该反应混合物在室温搅拌45小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明35.4％转化成了亚油酸视黄酯，含有63.4％乙酸视黄酯和1.2％视黄醇。
实施例22：
采用Lipase PS在Amberlyst A-2存在下使用1当量亚油酸制备亚油酸 视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中，并且加到50mg干燥的Amberlyst A-21中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Lipase PS-D(Amano)。将该反应混合物在室温搅拌45小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明69.2％转化成了亚油酸视黄酯，含有25.8％乙酸视黄酯和5.0％视黄醇。
实施例23：
采用Lipozyme TI IM使用1当量亚油酸制备亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Lipozyme TI IM(Novozyme)。将该反应混合物在室温搅拌45小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明2.0％转化成了亚油酸视黄酯，含有94.9％乙酸视黄酯和3.2％视黄醇。
实施例24：
采用Lipozyme TI IM在Amberlyst A-21存在下使用1当量亚油酸制备 亚油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)溶解在5mL甲苯中，并且加到50mg干燥的Amberlyst A-21中。加入亚油酸(28mg；1.0当量)，然后加入120mg Lipozyme TI IM(Novozyme)。将该反应混合物在室温搅拌45小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明14.6％转化成了亚油酸视黄酯，含有84.7％乙酸视黄酯和0.7％视黄醇。
实施例25：
半分批制备亚油酸视黄酯
在500mL烧瓶内，将乙酸视黄酯(22.0g；80％在油中的混合物；53.6mmol)和亚油酸(Pamolyn 200；15.0g；53.6mmol；1.0当量)溶解在160mL甲苯中。经由蠕动泵将烧瓶中的浸管连接到含有6.0gNovozyme 435的柱上，所述柱按顺序连接在含有6.0g干燥的AmberlystA-21的第二个柱上。从第二个柱伸出的管返回最初的烧瓶内。泵开始(流速6mL/分钟)经由这两个柱递送反应混合物到反应器内。6小时后，转化已经达到了71％，停止该泵，并且通过以下操作来再生Amberlyst树脂：移去柱，并且将内含物用100mL 10％三乙胺在甲苯中的混合物(用100mL甲苯雕镂)洗涤。装配装置，并且再开始启动泵。又过了3小时后，转化已经达到了75％，并且停止该泵。将反应器(80mL)的大约50％内含物取出，并且将11.0g 80％乙酸视黄酯和7.5g亚油酸在80mL甲苯中的混合物加到反应器中以用作第一反应物补充。如上所述将Amberlyst树脂再生，再装配装置，并且开始启动泵。9小时后，已经达到了73.6％转化率，并且停止泵。将反应器(80mL)的大约50％内含物取出，并且将11.0g 80％乙酸视黄酯和7.5g亚油酸在80mL甲苯中的混合物加到反应器中以用作第二次补充。如上所述将Amberlyst树脂再生，再装配装置，并且开始启动泵。12小时后，已经达到了75.0％转化率，并且停止反应。
实施例26：
在Amberlyst A-21存在下用Pamolyn 380共轭亚油酸制备视黄醇的共轭 亚油酸酯(视黄基-CLA)
将乙酸视黄酯(1.00g；3.04mmol)溶解在8.5mL甲苯中，并且加入Pamolyn 380共轭亚油酸(1.71g；6.09mmol；2.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435和0.5g干燥的Amberlyst A-21。将该反应混合物在室温搅拌15小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明87.2％转化成了视黄基-CLA，含有10.9％乙酸视黄酯和2.0％视黄醇。将该反应混合物过滤并浓缩，然后与庚烷浓缩两次(每次10mL)。将残余物溶解在庚烷(15mL)中，并且用2×20mL的10％碳酸钾水溶液和甲醇的1∶1混合物洗涤。将有机层用饱和碳酸氢钠(2.5mL)、水(7.5mL)和甲醇(10mL)的混合物进一步洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩，获得了1.34g(80％)黄色油状物。分析该产物表明90.5％视黄基-CLA(HPLC面积百分比)、0.4wt％共轭亚油酸和0.13％视黄醇。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，甲醇洗脱剂，在350nm检测)：tR 4.39、4.88、5.65、6.06分钟(视黄基-CLA异构体)；tR 2.32分钟(乙酸视黄酯)；tR 2.08分钟(视黄醇)。
实施例27：
在Amberlyst A-21存在下用Tonalin FFA共轭亚油酸制备视黄醇的共轭 亚油酸酯(视黄基-CLA)
将乙酸视黄酯(1.00g；3.04mmol)溶解在8.5mL甲苯中，并且加入Tonalin FFA共轭亚油酸(1.71g；6.09mmol；2.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435和0.5g干燥的Amberlyst A-21。将该反应混合物在室温搅拌15小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明88.6％转化成了视黄基-CLA，含有9.7％乙酸视黄酯和1.7％视黄醇。将该反应混合物过滤并浓缩，然后与庚烷浓缩两次(每次10mL)。将残余物溶解在庚烷(15mL)中，并且用2×20mL的10％碳酸钾水溶液和甲醇的1∶1混合物洗涤。将有机层用饱和碳酸氢钠(2.5mL)、水(7.5mL)和甲醇(10mL)的混合物进一步洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩，获得了1.29g(77％)黄色油状物。分析该产物表明92.8％视黄基-CLA(HPLC面积百分比)，0.8wt％共轭亚油酸和0.1％视黄醇。
实施例28：
在Amberlyst A-21存在下制备棕榈酸视黄酯
将乙酸视黄酯(1.00g；3.04mmol)溶解在8.5mL甲苯中，并且加入棕榈酸(1.56g；6.09mmol；2.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435和0.5g干燥的Amberlyst A-21。将该反应混合物在室温搅拌15小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明89.2％转化成了棕榈酸视黄酯，含有9.1％乙酸视黄酯和1.7％视黄醇。将该反应混合物过滤并浓缩，然后与庚烷浓缩两次(每次10mL)。将残余物溶解在庚烷(15mL)中，并且用2×20mL的10％碳酸钾水溶液和甲醇的1∶1混合物洗涤。将有机层用饱和碳酸氢钠(2.5mL)、水(7.5mL)和甲醇(10mL)的混合物进一步洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩，获得了1.25g(78％)黄色油状物。分析该产物表明91.2％棕榈酸视黄酯(HPLC面积百分比)、0.4wt％棕榈酸和0.2％视黄醇。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，甲醇洗脱剂，在350nm检测)：tR 5.52分钟(棕榈酸视黄酯)；tR 2.32分钟(乙酸视黄酯)；tR 2.08分钟(视黄醇)。
实施例29：
在Amberlyst A-21存在下制备油酸视黄酯
将乙酸视黄酯(1.00g；3.04mmol)和干燥的Amberlyst A-21(0.5g)与8.5mL甲苯合并。加入油酸(1.72g；6.09mmol；2.0当量)，然后加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌15小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明89.2％转化成了油酸视黄酯，含有9.0％乙酸视黄酯和1.9％视黄醇。将该反应混合物过滤并浓缩，然后与庚烷浓缩两次(每次10mL)。将残余物溶解在庚烷(15mL)中，并且用2×20mL的10％碳酸钾水溶液和甲醇的1∶1混合物洗涤。将有机层用饱和碳酸氢钠(2.5mL)、水(7.5mL)和甲醇(10mL)的混合物进一步洗涤，干燥(硫酸钠)并浓缩，获得了1.16g(69％)黄色油状物。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，甲醇洗脱剂，在350nm检测)：tR 5.65分钟(油酸视黄酯)；tR 2.32分钟(乙酸视黄酯)；tR 2.08分钟(视黄醇)。
实施例30：
在Amberlyst A-21存在下制备硫辛酸视黄酯
将乙酸视黄酯(1.00g；3.04mmol)和硫辛酸(1.26g；6.09mmol；2.0当量)与干燥的Amberlyst A-21(0.5g)合并。加入甲苯(3.5mL)，将该混合物超声，并且加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌21小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明85.3％转化成了硫辛酸视黄酯，含有12.8％乙酸视黄酯和1.9％视黄醇。将该反应混合物过滤并浓缩，把残余物溶解在1∶1乙酸乙酯∶庚烷(20mL)中。将该溶液用10mL 10％碳酸钾水溶液洗涤，然后用10mL饱和碳酸氢钠(5mL)和水(5mL)的混合物洗涤。将有机溶液干燥(硫酸钠)并浓缩，获得了1.06g(71％)黄色油状物。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，甲醇洗脱剂，在350nm检测)：tR 2.68分钟(硫辛酸视黄酯)；tR 2.32分钟(乙酸视黄酯)；tR 2.08分钟(视黄醇)。
实施例31：
在Amberlyst A-21存在下制备4-苯基丁酸视黄酯
将乙酸视黄酯(250mg；0.76mmol)和4-苯基丁酸(125mg；0.76mmol；1.0当量)与干燥的Amberlyst A-21(125mg)合并。加入甲苯(2.5mL)，并且加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌21小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明67.8％转化成了4-苯基丁酸视黄酯，含有24.3％乙酸视黄酯和7.8％视黄醇。
不采用Amberlyst A-21的相应反应获得了50.4％的转化。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，甲醇洗脱剂，在350nm检测)：tR 2.56分钟(4-苯基丁酸视黄酯)；tR 2.32分钟(乙酸视黄酯)；tR 2.08分钟(视黄醇)。
实施例32：
在Amberlyst A-21存在下制备环己基乙酸视黄酯
将乙酸视黄酯(500mg；1.52mmol)和环己基乙酸(216mg；1.52mmol；1.0当量)与干燥的Amberlyst A-21(0.25g)合并。加入甲苯(3.5mL)，并且加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌18小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明64.6％转化成了环己基乙酸视黄酯，含有33.5％乙酸视黄酯和1.8％视黄醇。
不采用Amberlyst A-21的相应反应获得了44.2％的转化。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，用80∶20甲醇∶水(0.1％TFA)洗脱15分钟，经由10分钟梯度变至100％甲醇，在100％甲醇保持5分钟，在350nm检测)：tR 26.1分钟(环己基乙酸视黄酯)；tR 21.1分钟(乙酸视黄酯)；tR 11.8分钟(视黄醇)。
实施例33：
在Amberlyst A-21存在下制备苯基乙酸视黄酯
将乙酸视黄酯(500mg；1.52mmol)和苯基乙酸(207mg；1.52mmol；1.0当量)与干燥的Amberlyst A-21(0.25g)合并。加入甲苯(3.5mL)，并且加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌19小时，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明58.5％转化成了苯基乙酸视黄酯，含有40.0％乙酸视黄酯和1.6％视黄醇。
不采用Amberlyst A-21的相应反应获得了28.7％的转化。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，甲醇洗脱剂，在350nm检测)：tR 4.67分钟(苯基乙酸视黄酯)；tR 2.32分钟(乙酸视黄酯)；tR 2.08分钟(视黄醇)。
实施例34：
制备N-Boc 3-吲哚丁酸视黄酯
将乙酸视黄酯(33mg；0.10mmol)和N-Boc吲哚-3-丁酸(31mg；0.10mmol；1.0当量)合并。加入甲苯(3.5mL)，并加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在50℃搅拌4天，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明50.6％转化成了N-Boc 3-吲哚丁酸视黄酯，含有44.8％乙酸视黄酯和4.6％视黄醇。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，用80∶20甲醇∶水(0.1％TFA)洗脱15分钟，经由10分钟梯度变至100％甲醇，在100％甲醇保持5分钟，在350nm检测)：tR 26.7分钟(N-Boc 3-吲哚丁酸视黄酯)；tR 21.1分钟(乙酸视黄酯)；tR 11.8分钟(视黄醇)。
实施例35：
制备庚二酸视黄酯
将乙酸视黄酯(500mg；1.52mmol)和庚二酸(488mg；3.04mmol；2.0当量)合并。加入甲苯(5.0mL)，并且加入120mg Novozyme 435。将该反应混合物在室温搅拌2天，然后取出样本，并且通过HPLC分析，结果表明36.5％转化成了庚二酸视黄酯和二-庚二酸视黄酯的混合物，含有61.8％乙酸视黄酯和1.8％视黄醇。
HPLC(4.6×150mm Zorbax SB-C8柱[Agilent]，3.5μ厚度，用80∶20甲醇∶水(0.1％TFA)洗脱15分钟，经由10分钟梯度变至100％甲醇，在100％甲醇保持5分钟，在350nm检测)：tR 20.3，29.0分钟(庚二酸视黄酯和二庚二酸视黄酯)；tR 21.1分钟(乙酸视黄酯)；tR 11.8分钟(视黄醇)。
已经用其优选的实施方案详细描述了本发明，但是应当理解，可以在本发明实质和范围内进行各种变型和修饰。

Claims (6)

1.制备式1的长链视黄酯的方法，
Figure FSB00000966410400011
所述方法包括将式2的短链视黄酯：
Figure FSB00000966410400012
与长链酸或长链酯在有机溶剂和脂肪酶存在下反应，以形成长链视黄酯，
其中R-CO是亚油酰基、共轭的亚油酰基、棕榈酰基、油酰基、硫辛酰基、4-苯基丁酰基、环己基乙酰基、苯基乙酰基或其混合物；
其中R4选自氢和C1-C4烷基；
其中所述脂肪酶是全细胞、分离的天然酶或固定在载体上，以及所述方法是在碱性离子交换树脂存在下进行。
2.权利要求1的方法，其中所述C1-C4烷基包括以下基团中的至少一个：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和仲丁基。
3.权利要求1的方法，其中R4是甲基或乙基。
4.权利要求1的方法，其中所述方法是在-100℃至有机溶剂沸点的温度下进行。
5.权利要求1的方法，其中基于所述短链视黄酯的量，长链酸或长链酯以0.85至20当量的量存在。
6.权利要求1的方法，其中所述方法是在至少一种分子筛和离子交换树脂存在下进行。
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