CN101528248A - 抗微生物肽 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及以下通式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽：(Xaa1)M－(Xaa2)O－Xaa3－(Xaa4)P－(Xaa5)Q－(Xaa6)M－(Xaa7)R－(Xaa8)S。

Description

抗微生物肽
本发明涉及具有抗微生物活性和内毒素中和活性的多肽和脂多肽的新家族。这些新化合物还可与常规的抗生素或抗内毒素剂一起在联合疗法中使用。另外，本发明公开了制备和使用这些新化合物的方法。
能抵抗市售抗生素的致病细菌的日益出现，促使人们对开发作为抗细菌药物的肽的兴趣持续增长。的确，现今有很大一部分医院感染(高达70％)是因抗生素抗性细菌所致。除了药物抗性问题外，革兰氏阴性细菌感染的抗生素治疗还会造成内毒素的释放，引起败血性休克，这代表了抗微生物疗法的又一个问题。感染性休克是重症监护病房中的死亡率的主要原因。革兰氏阴性细菌特别地在其外膜中含有脂多糖(LPS)，LPS已知是这一的应答的最强引发物(elicitor)。此外，目前用于革兰氏阴性感染的抗生素可杀灭细菌，但抗生素的给予并不能中和从垂死细菌的外膜释放的LPS。LPS的这一释放可实际上增加肺损伤，导致败血综合征。因此，具有抗微生物特性和能中和所释放的内毒素的药剂，对于治疗细菌感染会具有极高的价值。
由于细菌已进化成能对大多数的现有抗生素呈现多重抗性，新的一类化合物更有可能使细菌抗性的快速出现减至最低。自然界告诉我们，哺乳动物先天免疫的效应分子能提供抗击大批病原微生物的第一道防线。具体的说，宿主防卫肽被认为是多功能效应分子，代表了据以克服抗微生物药剂抗性的治疗药物的开发的新来源。许多常规的抗生素损害或杀灭细菌要一段时间，而大多数抗微生物肽几乎是即刻杀灭，即在几分钟时间内杀灭。有多种抗微生物肽还能阻断LPS与其受体(如LBP、CD14和MD-2/TLR4)的相互作用，导致巨噬细胞的激活被抑制，这一特点可降低LPS毒性。
乳铁蛋白是具有抗微生物和LPS结合活性的铁结合性内源糖蛋白，见于哺乳动物的外分泌中和见于在炎症反应过程中的嗜中性粒细胞的颗粒中。乳铁蛋白显示多功能特性，包括抗细菌特性、抗真菌特性、抗病毒特性、抗肿瘤特性、抗炎特性和免疫调节特性。乳铁蛋白及其衍生物已知具有中和细菌内毒素(LPS)的能力，因此能保护生物体免于败血症的有害作用。因此，许多关于乳铁蛋白的体外抗微生物和抗炎活性的报告，认为它在宿主抵御感染和过度炎症中具有重要作用。人乳铁蛋白的体外和体内蛋白水解消化产生出被称为乳铁蛋白肽(lactoferricin)的肽片段，该片段相比于完整乳铁蛋白具有增强的抗微生物活性。乳铁蛋白肽的多种更短的合成衍生物显示出抗革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌的抗微生物活性，能特异性结合LPS(etal.，J.Peptide Res.57：127-139(2001))。虽然许多宿主防卫肽作为新的候选抗微生物药剂都很有潜力，但人乳铁蛋白及其衍生物是独特的，因为它们具有多功能活性，且它们由于来源于人，不太可能会引起不良生理效应。
富含肉豆蔻酰基化丙氨酸的C激酶底物(MARCKS)和MARCKS相关蛋白质是许多细胞类型中的主要蛋白激酶C底物。发现MARCKS的转录受到响应细菌LPS的巨噬细胞和小胶质细胞激活的显著上调。MARCKS上的LPS结合模体(LPS-binding motif)与用组合文库方法鉴定到的强效抗微生物六肽(hexapeptide)非常相似。由于MARCKS天然受到N末端肉豆蔻酰基化(myristoylation)修饰，可以预期的是，将亲脂基团插入到较短的MARCKS衍生物中可导致产生强的抗微生物活性和/或LPS结合。
对于脂肽(lipopeptide，例如多粘菌素(polymyxin)、八肽菌素(octapeptin)和达托霉素(daptomycin))，已描述了其疏水性特别是烷基或酰基链的存在与其抗微生物活性的相关性。此外，多粘菌素对LPS分子的亲和力高，能通过破坏带负电荷的头基团(head group)来使外膜透化，该破坏是通过将二价阳离子从它们在LPS上的结合位点置换下来而进行的。乳铁蛋白肽B的九聚物核心肽的N末端的酰基化，导致了抗微生物活性的提高。最近已从土壤样本分离出长链N-酰基氨基酸抗生素。脂多胺(lipopolyamine)(DOSPER、DOSPA和DOGS，均含有C17烷基链)据报道也能显示抗内毒素活性，该活性是通过隔离LPS从而阻断会导致促炎介体(proinflammatory mediator)的产生的下游细胞激活事件而显示的。这些脂多胺当在患有绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)引起的入侵性革兰氏阴性菌血症的中性白细胞缺乏大鼠中单独试验时显得无效，但当与ceftazimidine这种抗生素组合给予时，这一组合与单独的ceftazimidine相比显著地提高了存活率。
正在进行的新递送系统的开发预期可提高肽在传染病治疗领域中抗感染疾病的潜力。例如，由于最近开发出嵌合肽策略，将肽递送到大脑组织现在是可能做到的(Bickel et al.，Adv.Drug Deliv.Rev.46：247-279(2001))。一个成功案例——行全肺切除术后用多粘菌素B固定化的纤维处理和进行连续血液透析过滤——据报道消除了肺结核患者中的败血症(“败血性休克”)的致发因素(Takahashi et al.，Ann.Thorac.Cardiovasc.Surg.9：319-322(2003))。类似地，为增强肽药物口服给予后的生物利用度，正在开发多种策略。这些策略包括微粒药物递送如纳米颗粒、微胶囊、脂质体或乳液，黏膜黏附递送和渗透促进剂的使用(Kompella et al.，Adv.Drug Deliv.Rev.46：211-245(2001))。
Japelj B.等(J Biol Chem.280(17)(2005)：16955-61)报道了衍自乳铁蛋白的包含氨基酸序列FQWQRNIRKVR-NH2的内毒素中和肽(LF11)。在这些研究的过程中，测定了负责LPS结合的LF11的氨基酸残基。
与Japelj B.等相似，在 J.等(Biochem J.385(2005)：135-43)也分析了与C12烷基链偶联的乳铁蛋白衍生肽LF11与LPS的相互作用。
在Farnaud S.等(FEMS Microbiol Lett.238(1)(2004)：221-6)中，公开了衍自牛和人乳铁蛋白的抗微生物肽。这篇科学文章的作者研究了这些肽与LPS的结合。
US 2003/0022821 A1涉及包含7-25个氨基酸残基的修饰乳铁蛋白肽，其中所述氨基酸残基有三个或更多个是阳离子型残基。US2003/0022821 A1所述的肽还包含大体积和亲脂性氨基酸残基。
Chen PW等(Am J Vet Res.64(9)(2003)：1088-92)报道了具有高含量的亲脂性和阳离子型氨基酸残基的乳铁蛋白类似物。
本发明的一个目标是提供显示抗微生物特性和内毒素中和特性的肽。
因此，本发明涉及下式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽：
(Xaa1)M-(Xaa2)O-Xaa3-(Xaa4)P-(Xaa5)Q-(Xaa6)M-(Xaa7)R-(Xaa8)S，其中
Xaa1为疏水性氨基酸，优选选自苯丙氨酸(Phe)、丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)和缬氨酸(Val)，
Xaa2为碱性氨基酸，优选选自精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)，
Xaa3为疏水性氨基酸，优选色氨酸(Trp)，
Xaa4选自丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)、脯氨酸(Pro)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)和缬氨酸(Val)，
Xaa5选自异亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tyr)，
Xaa6选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)，
Xaa7为疏水性氨基酸，优选选自异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)、缬氨酸(Val)和亮氨酸(Leu)，和
Xaa8选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、异亮氨酸(Ile)和丝氨酸(Ser)，且其中
O为0，
M为1或2，
P为2或3，
Q和R为1，和
S为1、2、3或4。
本发明涉及显示抗微生物活性或内毒素中和活性的分离肽、多肽和脂肽。这些分子显示出抗各种病原体(包括细菌、病毒、真菌等)的广谱活性。活性化合物的开发是基于用新肽化合物进行的SAR分析、生物物理学、微生物学、免疫学和结构方面的实验。
本发明提供具有抗微生物活性和/或抗内毒素活性的肽和脂肽。本文所用的术语“氨基酸”指天然的氨基酸和它们的衍生物。另外，也可使用一种或多种氨基酸的模拟物，它们又称肽模拟物或模拟肽。本文所用的术语“模拟物”指具有某氨基酸的相同或类似功能特性的氨基酸或氨基酸类似物。肽模拟物或模拟肽是这样的有机分子，它保持着与相应的肽中存在的肽链药效团(pharmacophore group)类似的肽链药效团。如上所述的非天然氨基酸或者模拟肽对氨基酸的置换，基于对侧链官能性的修饰，能增强单个肽的总体活性或其他特性。例如，对所例示的肽的这些类型的修饰，能增强肽对酶降解的稳定性或者提高生物活性或降低免疫原性。
本领域技术人员能容易地合成出本发明的肽和脂肽。制备合成的肽的标准程序是本领域公知的。本发明的肽可通过诸如α-氨基基团的t-BOC或FMOC保护之类的常用方法进行合成。该两种方法都涉及逐步合成，即从肽的羧基末端开始在每一步骤加入单个氨基酸(See，Coligan et al.，Current Protocols in Immunology，Wiley Interscience，1991，Unit 9)。本发明的肽还可通过本领域公知的固相肽合成方法进行合成。(Merrifield，J.Am.Chem.Soc.，85：2149，1963)，及Stewart和Young，Solid Phase Peptides Synthesis，Pierce，Rockford，Ill.(1984))。肽可用含有0.1-1.0mMol胺/g聚合物的(苯乙烯-二乙烯基苯)共聚物进行合成。化学合成完成时，可用液体HF-10％茴香醚在0℃下处理约0.25-1小时，使肽脱保护和从聚合物上切割下来。蒸发掉试剂后，用1％乙酸溶液从聚合物萃取出肽，然后进行冻干得到粗物质。这一粗物质通常可通过诸如用5％乙酸作为溶剂进行的Sephadex G-15凝胶过滤、高压液相色谱等的技术来进行纯化。柱子的适当流分的冻干会产生出均一的肽或肽衍生物，它们然后可通过诸如以下的标准技术进行鉴定：氨基酸分析、薄层层析、高效液相色谱、紫外吸收胱谱、摩尔旋光度、溶解度，并通过固相Edman降解进行评估(参见例如Protein Purification，M.P.Deutscher，ed.Methods in Enzymology，Vol 182，Academic Press，1990)。使用FMOC固相合成方法进行的自动合成可用自动肽合成仪来完成(Model 432A，Applied Biosystems，Inc.)。
本发明的肽/多肽还可用融合蛋白微生物方法来合成，其中阴离子型载体肽与阳离子型肽融合。用以进行具有抗微生物活性的阳离子型肽的这种微生物生产(such microbial production)的方法在US 5,593,866中提供。
由此产生的本发明肽可通过蛋白质化学领域公知的蛋白质分离/纯化方法进行纯化。更具体的说，可以一提的方法例如有萃取，重结晶，用硫酸铵、硫酸钠等进行的盐析，离心，透析，超滤，吸附层析，离子交换层析，疏水层析，正相层析，反相层析，凝胶过滤方法，凝胶渗透层析，亲和层析，电泳，逆流分配等以及这些方法的组合。最有效的是反相高效液相色谱方法。
本发明的肽可通过加入酸而形成盐。酸的实例包括无机酸(如三氟乙酸、盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸和硫酸)或有机羧酸(如乙酸、丙酸、马来酸、琥珀酸、苹果酸、柠檬酸、酒石酸和水杨酸)，酸性糖类如葡糖醛酸、半乳糖醛酸、葡糖酸、抗坏血酸等，酸性多糖如透明质酸、硫酸软骨素、海藻酸，或者有机磺酸(如甲磺酸和对甲苯磺酸)等等。这些盐中，优选的是药物可接受的盐。
本发明的肽可与碱性物质形成盐。这种盐的实例包括例如选自以下的药物可接受盐：与无机碱所成的盐如碱金属盐(钠盐、锂盐、钾盐等)、碱土金属盐、铵盐等，或者与有机碱所成的盐如二乙醇胺盐、环己胺盐等。
本文所用的术语“氨基酸”意指L-氨基酸。但是，D-氨基酸也可用来制备本发明的肽。
本文所用的“肽”包含2-50个氨基酸残基。“多肽”和“蛋白质”包含超过50个氨基酸残基。
本文所用的“抗微生物(的)”指本发明的肽和多肽的生物活性，意指该肽/多肽具有杀灭微生物、破坏微生物繁殖或另外使微生物不能生长的能力，其最小抑制浓度(“MIC”，按照美国临床和实验室标准协会(Clinical和Laboratory Standards Institute，CLSI，以前称NCCLS)小于32μM，优选小于16μM。根据本发明要抑制的微生物包括细菌、真菌、酵母等。测定抗微生物多肽的MIC的程序是本领域技术人员熟知的，在例如以下文献中有描述：Powell等(Molecular Plant-MicrobeInteractions，8：792-794(1995))，Wu和Hancock(J.Biol Chem.274：29-35(1999))及Lorian V.(“Antimicrobials in laboratory Medicine”，1996 4th ed.pp.330-396，Williams and Wilkins，Baltimore，Md)。MIC测定可以确定出肽的抑制微生物繁殖和生长的最低浓度。出于本发明目的，认为某多肽如果具有针对本文所用某微生物的前述MIC，则它是抗微生物多肽。
本发明的肽的“内毒素中和”活性和/或结合活性，可用例如巨噬细胞系在体外测定中进行试验(Gough et al.(1996)Infect.Immun.64：4922-4927)。
本发明的肽还显示抗真菌活性。对几种真菌显示出这一活性，例如对新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)。
上述的式优选包含选自以下的氨基酸序列：FWQRIRKVR(SEQID No.1)、FWQRRIRKVRR(SEQ ID No.2)、FWQRKIRKVRK(SEQID No.3)、FWQRNIRIRR(SEQ ID No.4)、FWQRNIRKVR(SEQ ID No.5)、FWQRNIRVR(SEQ ID No.6)、FWQRNIRKVRR(SEQ ID No.7)、FWQRNIRKVKK(SEQ ID No.8)、FWQRNIRKVRRR(SEQ ID No.9)、FWQRNIRKVKKK(SEQ ID No.10)、FWQRNIRKVRRRR(SEQ ID No.11)、FWQRNIRKVRRRI(SEQ ID No.12)、FWQRNIRKVKKKK(SEQID No.13)、FWQRNIRKVKKKI(SEQ ID No.14)、FWQRNIRKIR(SEQID No.15)、FWQRNIRKLR(SEQ ID No.16)、FWQRNIRKWR(SEQ IDNo.17)、FWQRNWRKVR(SEQ ID No.18)、FWQRNFRKVR(SEQ IDNo.19)、FWQRNYRKVR(SEQ ID No.20)、FWQRNIRKVS(SEQ IDNo.21)、FWQRRIRIRR(SEQ ID No.22)、FWQRPIRKVR(SEQ ID No.23)、FWQRRIRKWR(SEQ ID No.24)、FWQRRIRRWRR(SEQ ID No.25)、FWPRNIRKVR(SEQ ID No.26)、FWARNIRKVR(SEQ ID No.27)、FWIRNIRKVR(SEQ ID No.28)、FWLRNIRKVR(SEQ ID No.29)、FWVRNIRKVR(SEQ ID No.30)、FWQRNIFKVR(SEQ ID No.31)、FWQRNIYKVR(SEQ ID No.32)、FAWQRNIRKVR(SEQ ID No.33)、FLWQRNIRKVR(SEQ ID No.3 5)和FVWQRNIRKVR(SEQ ID No.36)。
在本发明中，氨基酸序列中的小写字母意指这些具体的氨基酸残基为D-构型而不是L-构型(大写字母)。
本发明的另一个方面涉及下式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽：
(Xaa1)M-(Xaa2)O-Xaa3-(Xaa4)P-(Xaa5)Q-(Xaa6)M-(Xaa7)R-(Xaa8)S，其中
Xaa1为疏水性氨基酸，优选选自苯丙氨酸(Phe)和异亮氨酸(Ile)，
Xaa2为碱性氨基酸，优选选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)，
Xaa3为疏水性氨基酸，优选色氨酸(Trp)，
Xaa4选自甘氨酸(Gly)、天冬酰胺(Asn)、异亮氨酸(Ile)和苯丙氨酸(Phe)，
Xaa5为异亮氨酸(Ile)或色氨酸(Trp)，
Xaa6为精氨酸(Arg)或赖氨酸(Lys)，
Xaa7为疏水性氨基酸，优选选自异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)和缬氨酸(Val)，和
Xaa8为精氨酸(Arg)，且其中
O为0，
M为1或2，
R为0或1，
P为1、2或3，
Q为1，和
S为0、1或2。
上述的式优选包含选自以下的氨基酸序列：FWRIRKWR(SEQ IDNo.37)、FWRIRKVR(SEQ ID No.38)、FWRWRR(SEQ ID No.39)、FWRRWRR(SEQ ID No.40)、FWRRWIRR(SEQ ID No.41)、FWRGWRIRR(SEQ ID No.42)、FWRRFWRR(SEQ ID No.43)、FWRWRWR(SEQ ID No.44)、FWRIWRWR(SEQ ID No.45)、FWRIWRIWR(SEQ ID No.46)、FWRNIRKWR(SEQ ID No.47)和FWRRRIRIRR(SEQ ID No.48)。
本发明的另一个方面涉及下式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽：
(Xaa1)M-(Xaa2)O-Xaa3-(Xaa4)P-(Xaa5)Q-(Xaa6)M-(Xaa7)R-(Xaa8)S，其中
Xaa1为疏水性氨基酸，优选选自脯氨酸(Pro)和苯丙氨酸(Phe)，
Xaa2为碱性氨基酸，优选选自精氨酸(Arg)，赖氨酸(Lys)，
Xaa3为疏水性氨基酸，优选色氨酸(Trp)，
Xaa4选自丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、谷氨酰胺(Gln)、赖氨酸(Lys)、色氨酸(Trp)和异亮氨酸(Ile)，
Xaa5选自异亮氨酸(Ile)和色氨酸(Trp)，
Xaa6选自精氨酸(Arg)和天冬氨酸(Asp)，
Xaa7为疏水性氨基酸，优选选自异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)、缬氨酸(Val)和亮氨酸(Leu)，和
Xaa8选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、异亮氨酸(Ile)、丝氨酸(Ser)和天冬氨酸(Asp)，且其中
O和Q为0，
M为0、1、2或3，
R为1或2，
P为1、2或3，和
S为1、2或3。
上述的式优选包含选自以下的氨基酸序列：PFWRWRIWR(SEQID No.50)、PFWRIRIRR(SEQ ID No.51)、PFWRQRIRR(SEQ ID No.52)、PFWRARIRR(SEQ ID No.53)、PFWRKRIRR(SEQ ID No.54)、PFWRKRLRR(SEQ ID No.55)、PFWRKRWRR(SEQ ID No.56)、PFWRRRIRR(SEQ ID No.57)、PFWRRRWRR(SEQ ID No.58)、PFWRIRIRRD(SEQ ID No.59)、PFFWRIRIRR(SEQ ID No.60)、PWRIRIRR(SEQ ID No.61)、PFWRRQIRR(SEQ ID No.81)、PFWRKKLKR(SEQ ID No.82)、PWRRIRR(SEQ ID No.83)、PWRRKIRR(SEQ ID No.84)和PFWRRIRIRR(SEQ ID No.85)。
本发明的又一个方面涉及下式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽：
(Xaa1)M-(Xaa2)O-Xaa3-(Xaa4)P-(Xaa5)Q-(Xaa6)M-(Xaa7)R-(Xaa8)S，其中
Xaa1为疏水性氨基酸，优选选自脯氨酸(Pro)和苯丙氨酸(Phe)，
Xaa2为碱性氨基酸，优选精氨酸(Arg)，
Xaa3为疏水性氨基酸，优选色氨酸(Trp)，
Xaa4选自丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)和赖氨酸(Lys)，
Xaa5选自异亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Trp)，
Xaa6选自谷氨酰胺(Gln)、精氨酸(Arg)和天冬酰胺(Asn)，
Xaa7为疏水性氨基酸，优选选自异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)和苯丙氨酸(Phe)，和
Xaa8为精氨酸(Arg)，且其中
M为0、1、2或3，
O为0或1，
P为1、2或3，
Q为1或2，和
R和S为0、1或2。
上述的式优选包含选自以下的氨基酸序列：FWRNIRIRR(SEQ IDNo.72)、FWQRIRIRR(SEQ ID No.73)、FWRWRIWR(SEQ ID No.74)、FWRIRIRR(SEQ ID No.75)、FWRNIRIWRR(SEQ ID No.76)和FwRNIRIRR(SEQ ID No.77)。
本发明的另一个方面涉及这样的式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽，该式包含选自以下的氨基酸序列：RFWQRNIRKVRR(SEQ ID No.62)、RFWQRNIRKYR(SEQ ID No.63)、PFWQRNIRKWR(SEQ ID No.64)、RFRWQRNIRKYRR(SEQ IDNo.65)、RWKRINRQWF(SEQ ID No.66)、KRFCFKK(SEQ ID No.67)、KRFSFKKC(SEQ ID No.68)、KRWSWKK(SEQ ID No.69)、FRFSFKK(SEQ ID No.70)、RRFWFRR(SEQ ID No.71)、RFWQRNIRIRR(SEQ ID No.78)、RWQRNIRIRR(SEQ ID No.79)和RRWFWRR(SEQ ID No.86)。
本发明的另一个方面涉及式FIWQRNIRKVR(SEQ ID No.34)、FIWRWRWR(SEQ ID No.49)和RRIRINRQWF(SEQ ID No.80)所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽。
本发明的肽的N末端和/或C末端可具有修饰，如酰基化(乙酰化)、酰胺化、酯化、还原、氧化、(共价)接头结合(linker binding)、肽键、二硫键等。肽还可例如通过碳水化合物、接头分子、脂质等作进一步修饰。
本发明的肽的C末端优选包含(consists preferably of)选自羧基、酰胺基的基团，特别是包含(consisting of)N-甲基酰胺基、酯、醚或酮，优选包含1-20个碳原子，更优选1-10个碳原子。
根据本发明的一个优选实施方案，使酰基与肽的N末端或C末端结合。
为了增加本发明的肽的疏水性，从而增加肽与例如细胞的疏水部分(例如细胞膜)的相互作用，肽优选用酰基基团进行修饰。
要与本发明的肽结合的酰基基团，优选是选自C2-C20的饱和和不饱和的直链和支链酰基链、苄基衍生物和F-moc的疏水链。
酰基基团优选选自十二碳酰基基团、癸酰基基团、辛酰基基团、己酰基基团、2-甲基己酰基基团、2-乙基己酰基基团、2-丙基戊酰基基团、2-丁基辛酰基基团、2，2-二甲基丁酰基基团、2-甲基戊酰基基团、3-甲基戊酰基基团、4-甲基戊酰基基团、6-甲基辛酰基基团、苄基基团和二环己基乙酰基基团。
本发明的特别优选的经修饰或未经修饰的肽可参见表1。
表1：本发明的肽
  SEQ IDNO. 肽代号 C-末端修饰 氨基酸序列
  1   F  W Q R   I  R K V R        -NH2
  2   P15   F  W Q R R I  R K V R R      -NH2
  3   P2-1   F  W Q R K I  R K V R K      -NH2
  4   VS1-13   F  W Q R N I  R   I R R      -NH2
  5   F  W Q R N I  R K V R        -NH2
  6   F  W Q R N I  R   V R        -NH2
  7   F  W Q R N I  R K V R R      -NH2
  8   F  W Q R N I  R K V K K      -NH2
  9   F  W Q R N I  R K V R R R    -NH2
  10   F  W Q R N I  R K V K K K    -NH2
  11   F  W Q R N I  R K V R R R R  -NH2
  12   P1-12   F  W Q R N I  R K V R R R I  -NH2
  13   F  W Q R N I  R K V K K K K  -NH2
  14   F  W Q R N I  R K V K K K I  -NH2
  15   F  W Q R N I  R K I R        -NH2
  16   F  W Q R N I  R K L R        -NH2
  SEQ IDNO. 肽代号 C-末端修饰 氨基酸序列
  17   VS1-15   F  W Q R N I R K W R        -NH2
  18   F  W Q R N W R K V R        -NH2
  19   F  W Q R N F R K V R        -NH2
  20   P1-39   F  W Q R N Y R K V R        -NH2
  21   F  W Q R N I R K V S        -NH2
  22   F  W Q R R I R   I R R      -NH2
  23   F  W Q R P I R K V R        -NH2
  24   VS1-17   F  W Q R R I R K W R        -NH2
  25   VS1-18   F  W Q R R I R R W R R      -NH2
  26   F W P R N I R K V R         -NH2
  27   F  W A R N I R K V R        -NH2
  28   F  W I R N I R K V R        -NH2
  29   F  W L R N I R K V R        -NH2
  30   F  W V R N I R K V R        -NH2
  31   F  W Q R N I F K V R        -NH2
  32   P41   F  W Q R N I Y K V R        -NH2
  33   F  A W Q R N I R K V R      -NH2
  34   F  I W Q R N I R K V R      -NH2
  35   F  L W Q R N I R K V R      -NH2
  36   F  V W Q R N I R K V R      -NH2
  37   VS1-21   F W    R     I R K   W R    -NH2
  38   F W    R     I R K   V R    -NH2
  39   F W    R     W         R R  -NH2
  40   P2-24   F W    R R   W         R R  -NH2
  41   P2-25   F W    R R W I         R R  -NH2
  42   P2-26   F W    R   G W R     I R R  -NH2
  43   P2-27   F W    R R F W R       R    -NH2
  44   P2-28   F W    R     W R     W R    -NH2
  45   P2-29   F W    R   I W R     W R    -NH2
  46   P2-31   F W    R   I W R   I W R    -NH2
  47   VS1-20   F W    R   N I R K   W R    -NH2
  48   F W    R R R I   R I   R R  -NH2
  49   P2-32   F I W  R     W   R   W R    -NH2
  50   P F    W R   W   R I W R    -NH2
51   P2-33VS1-22 P F    W R   I   R I   R R  -NH2
  52   VS1-25   P F    W R   Q   R I   R R  -NH2
  SEQ IDNO. 肽代号 C-末端修饰 氨基酸序列
  53   VS1-27   P F    W R    A    R I    R R   -NH2
  54   VS1-28   P F    W R K       R I    R R   -NH2
  55   VS1-29   P F    W R K       R L    R R   -NH2
  56   VS1-31   P F    W R K       R W    R R   -NH2
  57   VS1-32   P F    W R R       R I    R R   -NH2
  58   VS1-33   P F    W R R       R W    R R   -NH2
  59   VS1-23   P F    W R    I    R I    R R D -NH2
  60   VS1-24   P F  F W R    I    R I    R R   -NH2
  61   VS1-34   P      W R    I    R I    R R   -NH2
  62   R F    W Q R  N I  R K V R R    -NH2
  63   R F    W Q R  N I  R K Y R      -NH2
  64   VS1-19   P F    W Q R  N I  R K W R      -NH2
  65   P22   R F  R W Q R  N I  R K Y R R    -NH2
  66   VS1-16   R      W K R  I N    R Q W F    -NH2
  67   P60   K R F  C F K  K                 -NH2
  68   K R F  S F K  K c               -NH2
  69   P1-63   K R W  S W K  K                 -NH2
  70   F R F  S F K  K                 -NH2
  71   P2-55   R R F  W F R  R                 -NH2
  72   P2-10   F W    R N  I  R I R R          -NH2
  73   P2-13   F  W Q R    I  R I R R          -NH2
  74   P2-30   F W     R    W R I W     R      -NH2
  75   P2-15   F W     R    I R I    R  R      -NH2
  75   VF50   环   F W     R    I R I    R  R      -NH2
  76   P2-16   F W     R N  I R I  W R  R      -NH2
  77   P2-11   F w     R N  I R I    R  R      -NH2
  78   P2-18   R F W Q R N  I R I    R  R      -NH2
  79   P2-19   R   W Q R N  I R I    R  R      -NH2
  80   VS1-14   R R I R I N R Q W F-NH2
  81   VS1-26   P F W R R Q I R R-NH2
  82   VS1-30   P F W R K K L K R-NH2
  83   VS1-35   P W R R I R R-NH2
  84   P W R R K I R R-NH2
  SEQ IDNO. 肽代号 C-末端修饰 氨基酸序列
  VS1-36
  85   VS1-37   P F W R R R I R I R R-NH2
  86   VS1-39   R R W F W R R-OH
  4   Fmoc-   F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
  72   Fmoc-   F  W   R N I  R I  R  R    -NH2
  73   Fmoc-   F  W Q R   I  R I  R  R    -NH2
  4   月桂基-   F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
  4   癸酰基-   F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
  4   辛酰基-   F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
  4   己酰基-   F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
4   2-甲基己酰基- F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
4   2-乙基己酰基- F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
4   2-丙基戊酰基- F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
4   2-丁基辛酰基- F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
4   2，2-二甲基酰基- F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
4   2-甲基戊酰基- F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
4   3-甲基戊酰基- F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
4   4-甲基戊酰基- F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
4 P2-51   6-甲基辛酰基- F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
  4   苄基-   F  W Q R N I  R I  R  R    -NH2
  17   VS1-40   辛酰基   F  W Q R N I  R K  W  R    -NH2
17 VS1-41   2-乙基己酰基 F  W Q R N I  R K  W  R    -NH2
17 VS1-42   2，2-二甲基酰基 F  W Q R N I  R K  W  R    -NH2
  SEQ IDNo. 肽代号 C-末端修饰 氨基酸序列
17 VS1-43   6-甲基辛酰基 F  W Q R N I  R K W R    -NH2
17 VS1-44   二环己基-乙酰基 F  W Q R N I  R K W R    -NH2
  66   VS1-45   辛酰基   R  W K R I N  R Q W F    -NH2
66 VS1-46   2-乙基己酰基 R  W K R I N  R Q W F    -NH2
66 VS1-47   2，2-二甲基酰基 R  W K R I N  R Q W F    -NH2
66 VS1-48   6-甲基辛酰基 R  W K R I N  R Q W F    -NH2
66 VS1-49   二环己基-乙酰基 R  W K R I N  R Q W F    -NH2
  51   VS1-50   辛酰基   P  F W R I  R I  R R     -NH2
51 VS1-51   2-乙基己酰基 P  F W R I  R I  R R     -NH2
51 VS1-52   2，2-二甲基酰基 P  F W R I  R I  R R     -NH2
51 VS1-53   6-甲基辛酰基 P  F W R I  R I  R R     -NH2
51 VS1-54   二环己基-乙酰基 P  F W R I  R I  R R     -NH2
  75   VS1-55   辛酰基   F W R  I  R I  R  R      -NH2
75 VS1-56   2-乙基己酰基 F W R  I  R I  R  R      -NH2
75 VS1-57   2，2-二甲基酰基 F W R  I  R I  R  R      -NH2
75 VS1-58   6-甲基辛酰基 F W R  I  R I  R  R      -NH2
75 VS1-59   二环己基-乙酰基 F W R  I  R I  R  R      -NH2
  43   VS1-60   辛酰基   F W R  R  F W  R  R      -NH2
  SEQ IDNo. 肽代号 C-末端修饰 氨基酸序列
43 VS1-61   2-乙基己酰基 F W R  R F W R  R    -NH2
43 VS1-62   2，2-二甲基酰基 F W R  R F W R  R    -NH2
43 VS1-63   6-甲基辛酰基 F W R  R F W R  R    -NH2
43 VS1-64   二环己基-乙酰基 F W R  R F W R  R    -NH2
本发明的另一个方面涉及包含本发明的肽的多肽。
本发明的肽还可以是多肽的一部分，条件是包含所述肽的(非天然)多肽显示相同的抗微生物活性和/或内毒素中和活性。但是，该融合多肽可显示出比该肽更低或甚至更高的活性。
还可将本发明的各个肽互相连接/融合以形成新的肽或多肽。同样，可将本发明的肽用作重复单元，以获得具有2、3、4、5、10或20个重复单元的肽或多肽。
本发明的另一个方面涉及包含本发明的肽或多肽的药物组合物。
这种组合物可用来治疗和/或预防例如微生物感染或败血性休克。最后，本发明涉及将本发明的多肽或脂肽与其他抗微生物药剂或抗败血症药剂在药物可接受载体或惰性物质中一起共给予，以改进所述其他抗微生物药剂或抗败血症药剂的功效的方法。
根据本发明的一个优选实施方案，组合物还包含至少一种另外的抗微生物药剂或抗败血症药剂。
为了获得具有更好的抗微生物作用和/或内毒素中和作用的药物组合物，加入了显示与本发明的肽类似的特性的另外药物。当然还可以加入其活性不同于本发明的肽的药物。这些物质可帮助提高生物利用度，例如提高肽的稳定性或增强肽的递送。
可与本发明的肽进行组合的具体的药物的实例包括氨基糖苷(例如托普霉素)、青霉素(例如哌拉西林)、头孢菌素(例如头孢他啶)、氟喹诺酮(例如环丙沙星)、碳青霉烯类(例如亚胺培南)、四环素和大环内酯(例如红霉素和克拉霉素)。组合物还可加入抗生素供进行组合疗法或协同疗法。所给予的适当抗生素通常要取决于微生物的易感性(susceptibility)，例如细菌是革兰氏阴性细菌还是革兰氏阳性细菌，对此本领域技术人员是容易分清的。除了以上所列抗生素外，典型的抗生素包括氨基糖苷(阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、奈替米星、托普霉素、链霉素、阿奇霉素、克拉霉素、红霉素(依托红霉素/琥乙红霉素/葡庚糖酸红霉素/乳糖酸红霉素/硬脂酸红霉素)、β-内酰胺如青霉素(例如青霉素G、青霉素V、甲氧西林、萘夫西林、苯唑西林、氯唑西林、二氯唑西林、氨苄青霉素、阿莫西林、替卡西林、羧苄西林、美洛西林、阿洛西林和哌拉西林)或者头孢菌素(例如头孢噻吩、头孢唑林、头孢克洛、头孢孟多、头孢西丁、头孢呋辛、头孢尼西、cefinetazole、头孢替坦、头孢丙烯、氯碳头孢、头孢他美、头孢哌酮、头孢噻肟、头孢唑肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢吡肟、头孢克肟、头孢泊肟和头孢磺啶)。其他类别的抗生素例如包括碳青霉烯类(例如亚胺培南)、单环-内酰胺类(例如氨曲南)、喹诺酮类(例如氟罗沙星、萘啶酸、诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星、依诺沙星、洛美沙星和西诺沙星)、四环素类(例如多西环素、米诺环素、四环素)和糖肽类(例如万古霉素、替考拉宁)。其他的抗生素包括氯霉素、克林霉素、甲氧苄啶、磺胺甲噁唑、硝基呋喃、利福平和莫匹罗星。
本发明的组合物可优选还包含药物可接受赋形剂。
本发明的药物组合物可单独由本发明的肽组成，或者可以为包含本发明的肽和药物可接受载体的组合物的形式。可使用的药物可接受载体没有特别限制，包括可用于医疗领域的赋形剂、粘合剂、润滑剂、着色剂、崩解剂、缓冲剂、等渗剂、防腐剂、麻醉剂等。而且，它可以与另一抗微生物药品如溶菌酶、抗生素等组合使用。
本发明的组合物可用于治疗例如身体外部的受微生物感染的部分，或者用于治疗身体内部的微生物感染，因此根据治疗目的，适当的给药方法可选自注射(皮下、皮内、静脉内、腹膜内等)、滴眼、滴注、经皮给予、口服给予、吸入等。
同样，可根据给药方法适当选择剂型，如可注射制剂(溶液剂、混悬剂、乳剂、使用时进行溶解的固体剂等)、片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、液体剂、脂质体包埋剂(liposome inclusion)、软膏剂、凝胶剂、外用散剂、喷雾剂、吸入散剂、滴眼剂、眼用软膏剂、栓剂、阴道栓剂(pessary)等，因此可配制本发明的抗微生物药品。
本发明的另一个方面涉及本发明的肽或多肽作为抗微生物药剂或作为内毒素中和药物的用途。
本文所公开的肽显示出抗微生物活性和/或内毒素中和活性。因此，这些肽可适合作为抗微生物药剂或作为内毒素中和药物应用。
本发明的另一个方面涉及本发明的肽或多肽用于制备用以治疗或预防由微生物优选由细菌引起的感染或优选由内毒素引起的败血症或败血性休克的药物的用途。
由于其生物特性，本发明的肽适合在药物中应用。
根据本发明的一个优选的实施方案，该药物可优选还包含至少一种另外的抗微生物药剂或抗败血症药剂。
该药物此外还优选包含药物可接受赋形剂。
本发明的另一个方面涉及抑制至少一种微生物的生长的方法，所述方法包括使所述微生物与有效量的本发明的肽或多肽接触的步骤。
本发明的肽和多肽可用来抑制微生物的生长。这个作用可通过使所述分子与要抑制的微生物接触来实现。
本文所用的术语抑制微生物的生长的“治疗有效量”或“有效量”，指足以降低受试者对LPS的应答和减少败血症的症状的肽量。术语“治疗有效(的)”因此包括这样的肽量，该量足以使临床上显著的TNF血浆水平升高得到防止，优选得到降低达至少50％，更优选达90％。肽的给予的剂量范围是大得足够产生所需的作用的剂量范围。一般来说，剂量要随患者的年龄、身体状况、性别和感染如上所述的细菌或其他微生物的程度而变，可由本领域技术人员进行确定。在任何禁忌征候情形中，剂量可由医师个体进行调整。在任何情形中，治疗的有效性可通过检测患者中的LPS和TNF的水平来确定。血清LPS和TNF水平的下降应与患者的康复相关。
根据本发明的一个优选的实施方案，所述微生物是革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。
本文所公开的肽和多肽对细菌特别有效。因此，优选的要进行接触的微生物，优选是肠杆菌科，特别是大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌属中的细菌(Salmonella spp.)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)或克雷伯氏菌属中的细菌(Klebsiella spp.)；优选是假单胞菌科，特别是绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)；优选是产碱菌科，特别是支气管败血波氏杆菌(Bordetellabronchiseptica)或百日咳波氏杆菌(Bordetella pertussis)；优选是布鲁氏菌科，特别是流产布鲁氏菌(Brucella abortus)；优选是莫拉氏菌科，特别是鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumanii)；优选是黄单胞菌科，特别是嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)；巴斯德氏菌科，特别是流感嗜血杆菌(Haemophilus Influenzae)；优选是奈瑟氏菌科，特别是脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)；优选是葡萄球菌科，特别是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)；优选是肠球菌科，特别是粪肠球菌(Enterococcus faecalis)；优选是链球菌科，特别是无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)；和优选是衣原体科，特别是肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)。
如果所述微生物显示多药耐药性的话，尤其适合使用本发明的肽。
多药耐药性(即微生物对多种药物特别是抗生素的抗性)是临床实践中的主要问题之一。因此，提供出新的可影响微生物的生长的药剂是重要的。
本发明的另一个方面涉及通过给予有效量的本发明肽或多肽或药物组合物，来中和微生物的细菌成分、优选细胞壁成分、更优选脂多糖的生物活性的方法。
本发明的肽和多肽显示内毒素中和活性。因此，这些物质可应用来结合细菌成分，特别是细胞壁成分，从而结合其生物活性。
本发明的又一个方面涉及通过给予有效量的本发明肽或多肽或药物组合物，来中和微生物的细菌成分、优选细胞壁成分、更优选脂多糖的生物活性，或者治疗遭受微生物感染或败血性休克的哺乳动物特别是人个体的方法。
治疗和预防有效量优选为约0.5mg/kg至约100mg/kg体重，更优选约1mg/kg至约20mg/kg，最优选约2mg/kg至约10mg/kg。对于皮肤应用，所述化合物可以以高得足够快速杀灭目标微生物的浓度(至少是MIC的10-100倍或者是100-1000g/ml)给予。对于腹膜内应用，治疗范围优选为约7.5mg/kg至约75mg/kg。在与常规抗生素共给予的情况中，治疗有效量减少10-100倍。
本发明的另一个方面涉及制备具有N末端脯氨酸残基的本发明肽的方法，所述方法包括以下步骤：
-提供包含编码这样的融合多肽或蛋白质的核酸分子的宿主细胞，该融合多肽或蛋白质包含具有N末端脯氨酸残基的本发明肽，其中所述肽C末端融合于具有C末端天冬氨酸的所述多肽或蛋白质，
-表达和分离所述融合多肽或蛋白质，
-使分离的融合多肽或蛋白质经受0.5-4之间的pH值(Skribanek Z.et al.，J.Pept.Sci.8：398-406(2002))。
在降低pH值的过程中，优选地使该多肽或蛋白质在例如90mMHCl中85℃下温育1小时。所得的肽优选通过反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行纯化，并任选通过质谱分析进行鉴定和表征。
本发明的另一个方面涉及从样品吸附和除去或灭活细菌或细菌成分的方法，所述方法包括使所述样品与固定化的本发明肽接触的步骤。
可将本发明的抗微生物药剂和内毒素中和/结合药剂应用到合适材料的表面或者与合适材料混合，以产生抗微生物材料。这种抗微生物材料可以以珠粒、薄膜、板材、单纤丝、非织造织物、海绵状物、布料、针织物、短纤维、管子、中空纤维等的各种形式使用。更具体的说，它可用于人工器官、导管、外科手术用缝合线(连接纤维)、透析膜等以及卫生用品、抗微生物滤器等。
所述装置或植入物可用作包含固定化到不溶性载体的本发明肽的内毒素清除剂。本发明的内毒素清除剂是基于本发明肽的高内毒素可结合性在吸附和除去内毒素方面的应用。
对使本发明肽固定化的不溶性载体的形状没有特别限制，可以举出多种形式，例如膜(滤器型、中空型、管子型、平板膜型等)、颗粒、乳胶、芯片、粉末和微量培养板等形式。
对不溶性载体的材料也没有特别限制，可以举出多种材料，例如聚苯乙烯材料、聚丙烯材料、聚酰胺材料、纤维素材料、琼脂糖材料、聚丙烯酰胺材料、葡聚糖材料和乙烯基聚合物材料。
对将本发明肽固定化到不溶性载体上的方法也没有特别限制，本发明肽的固定化可通过采用被用作固定化酶的制备方法的一般方法来实现，如物理吸附方法、离子键方法、共价键方法和包埋方法。
例如，对于由聚苯乙烯材料或聚丙烯材料制成的不溶性载体，可将本发明肽进行物理固定化。又例如，由聚酰胺材料、纤维素材料、琼脂糖材料、聚丙烯酰胺材料、葡聚糖材料或乙烯基聚合物材料制成的不溶性载体，可将本发明肽进行化学固定化。对于化学固定化(结合)方法，可以举出例如：重氮化方法，其中重氮偶联是利用不溶性载体中的芳族氨基基团来进行；CNBr方法，其中肽键是通过用CNBr活化不溶性载体中的羟基基团来形成；酰基叠氮方法，其中肽键是用不溶性载体的肼衍生物来形成；烷基化方法，其中肽用不溶性载体中的反应性官能团如卤素进行烷基化；交联方法，其中能与游离氨基基团反应的交联剂如戊二醛将不溶性载体和肽中的游离氨基基团交联在一起；碳二亚胺方法；环氧活化方法；和其中键是采用上述方法之一通过间隔基(spacer)来形成的方法。根据用来键合本发明肽的不溶性载体的类型，可从这些已知方法中选择出适当的方法。
使固定化有本发明肽的不溶性载体与需要从中除去内毒素的溶液进行接触，以形成溶液中的内毒素与固定化有本发明肽的不溶性载体的复合物，然后将这样形成的复合物除去，从而可将溶液中的内毒素除去。
对使固定化有本发明肽的不溶性载体与需要从中除去内毒素的溶液进行接触的方法没有特别限制，可使用已知的固-液接触方法。例如，可使用以下方法来获得去除了内毒素或类似物质的溶液：使溶液在滤器形状的或中空纤维形状的不溶性载体中通过或者从平板膜形状的不溶性载体上通过的方法，使溶液从装有粒状不溶性载体的柱子中通过的方法，将溶液装入微量培养板形状的孔中并让溶液静止一定时间后将溶液分离的方法，将溶液加到任何形状的不溶性载体上并振动或静止一定时间后进行常规固-液分离(过滤、离心、抽吸、倾析等)的方法。
对需要从中除去内毒素的溶液没有特别限制，其实例包括在药物生产车间、医疗设备等中使用的溶液、更具体的说透析液、胃肠外注射液(parenteral fluid)、血液、药品、超纯水等，但不限于这些。
本发明的一个方面是抗微生物化合物，即能抑制、防止或破坏微生物如细菌、真菌等的生长或增殖的化合物。这些化合物是本文给出的通式所示的肽或脂肽。
本发明的另一个方面是通过应用本文给出的通式所示的肽或脂肽，将细菌成分(优选来自细胞壁，如内毒素)的生物活性中和掉，来治疗内毒素血症的方法。
以下实施例和附图是给本领域普通技术人员作为指导来提供，并不意在以任何方式限制所提出权利要求的本发明的范围。
图1显示所选的肽(见肽代号)和多粘菌素(PMB)对图中所示两个大肠杆菌(E.Coli)株和宋内氏志贺菌(Shigella sonnei)的最小抑制浓度(MIC)和最小杀细菌浓度(MBC)。
图2显示在加入确定量的所选肽时，新生霉素的最小抑制浓度的降低。
图3显示所选的肽、多粘菌素B九肽(PMBN)和非透化肽(P3)的透化作用，该透化作用是通过由于N-苯基萘胺(NPN)分配入大肠杆菌细胞外膜中所致的荧光强度增加来测量的。图右侧的图例所列的物质的顺序对应于图中各曲线在其终点的顺序。
图4显示在所选的肽的存在下，对LPS刺激的单核细胞TNF-α分泌的中和作用。
图5显示在不同抗生素、多粘菌素B(PMB)和所选的肽(见肽代号)存在下，TNF-α的释放情况。
图6显示含有N-酰基链的肽的溶血活性。图中标出了加到2.5％人红细胞的肽量。
图7显示重组肽的切割产物的HPLC分离的色谱图。保留时间为8.175分钟的流分含有该肽。
实施例：
实施例1：肽和脂肽合成
肽是按照标准的Fmoc合成方案通过同步多重肽合成来进行合成的(Houghten，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82：5131-5135(1985))。每种肽所用的树脂分装在聚丙烯网状袋(mesh packet)中，这使得可以在共同的反应容器中进行所有的共同合成步骤(即洗涤、脱保护和中和步骤)，而所需的偶联步骤通过用单独的适当氨基酸溶液处理每个袋来进行。亲脂性酸以与偶联受保护的氨基酸时所用的策略类似的策略与N末端发生结合。赖氨酸和色氨酸的侧链用tBoc基团保护，精氨酸的侧链用五甲基苯并呋喃-5-磺酰基基团保护，半胱氨酸、谷氨酰胺和天冬酰胺的侧链用三苯甲基保护，天冬氨酸、谷氨酸、酪氨酸、丝氨酸和苏氨酸的侧链用叔丁基保护。最终切割是通过用三氟乙酸处理来进行(Fields et a1.，Int.J.Peptide Prot.Res.35：161-214(1990))。各肽的身份(identity)和纯度通过与液相色谱系统(Finnigan LCQ)联用的质谱分析和使用Beckman System Gold HPLC的分析型反相高效液相色谱(RP-HPLC)来测定。肽和脂肽用带有Foxy流分收集器的WatersMilliprep 300制备型HPLC，通过制备型RP-HPLC进行纯化。用乙酸(达95％)或乙腈(达50％)溶液使脂肽增溶以进行纯化。
实施例2：抗微生物测定
试验了每种肽和脂肽对以下一系列细菌的最小抑制浓度(MIC)：大肠杆菌(Escherichia coli)ATCC 25922、大肠杆菌DC2、产酸克雷伯氏杆菌(Klebsiella oxytoca)ATCC 8724、鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumanii)CUN 10817-0 1、绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)CUN4158-02、嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)CUN 3998-00、流产布鲁氏菌(Brucella abortus)9.49per-、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)KIM pYV-、大肠杆菌CUN 2709-04、大肠杆菌CUN1786-04、宋内氏志贺菌(Shigella sonnei)ATCC 25931、明尼苏达沙门氏菌(Salmonella minnesota)HL63(S)、明尼苏达沙门氏菌R60 HL100(Ra)、明尼苏达沙门氏菌R7 HL44(Rd1)、明尼苏达沙门氏菌R595HL111 (Re)、Bordetella bronquiseptica CUN 11844-99、Bordetellabronquiseptica RB50、流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae)CUN6277-04、脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)CUN 6395-04、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)ATCC 29212、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)ATCC 25923、无乳链球菌(Streptococcusagalactiae) CUN 4783-03、粪肠球菌ATCC 51299、金黄色葡萄球菌CUN 3792-99、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)ATCC12228、表皮葡萄球菌CUN 5-93、肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)ATCC 49619。
将新近生长的细菌培养物接种和稀释在Mueller Hinton(MH)肉汤中，达1-5x105CFU/ml的近似最终测定浓度。细菌悬浮液的活菌计数，是通过将培养物用MH肉汤稀释并将100μl的适当10倍稀释液接种到MH琼脂平板上来测定。在37℃下温育过夜后的MIC，是按照美国临床实验室标准化委员会(National Committee for ClinicalLaboratory Standard，NCCLS)的指导方针，通过肉汤微稀释方法在96孔组织培养板中进行测定。因此，将100μl细菌悬浮液与100μl肽或脂肽溶液在96孔平底板中的MH肉汤中混合，37℃下温育过夜。在温育之前和之后，测量每个孔的620nm吸光度。所有的肽和脂肽都从250μg/ml开始作系列两倍稀释，各稀释液进行两次重复试验。将肽的活性与MH肉汤中的细胞(0％抑制)和单独MH肉汤(100％抑制)进行比较。MIC定义为在时间0和过夜温育之间OD没有变化时的肽或脂肽最低浓度。在每个测定中使用市售的抗生素作为标准对照。
最小杀细菌浓度(MBC)定义为杀灭99.9％的起始接种物的抗微生物药剂最低浓度，按CLSI/NCCLS的推荐进行测定。简单的说，从没有检测到生长的那些孔获取100μl悬浮液，接种在MH板上。将板在37℃下温育24小时(图1)。
实施例3：与常规抗生素的协同活性
革兰氏阴性细菌的外膜起到阻挡疏水性化合物的透性障的作用。为测量肽的透化活性，使用了两种方法。这两种测定法都基于这一点：被肽透化的膜能让疏水性物质(NPN)进入脂质双层，让新生霉素到达其内部靶标(DNA促旋酶)。由于绿脓杆菌(P.aeruginosa)4158-02(CUN)固有的较低渗透性，这些试验是在这种细菌上进行。
新生霉素-肽协同性测定：
肽的透化活性，是根据已公布的棋盘滴定方法(checkerboardtitration method)(Lorian V.Antimicrobials in laboratory Medicine”，19964th ed.pp.330-396，Williams和Wilkins，Baltimore，Md)，通过将每种肽-新生霉素组合的MIC与单独新生霉素的MIC进行比较来测量。为比较各肽的透化活性，测定了以下两个指标：(i)分数抑制浓度(fractionalinhibitory concentration，FIC)指标按以下方程式计算：FIC指标＝(组合中试验的新生霉素的MIC)/(单独新生霉素的MIC)+(组合中的肽的MIC)/(单独肽的MIC)。如果FIC指标≤0.5，则相互作用定义为有协同性；(b)MIC-Drop定义为新生霉素在给定的肽不存在下和存在下的MIC的比例。一个组合当其MIC-Drop≥4时认为具有协同性(图2)。
荧光测定：
荧光实验是按Loh和他的合作者的描述(1984.Antimicrob.AgentsChemother.26：546-551)进行，但有一些改动。简单的说，使细菌在LB肉汤中生长至对数期，用5mM HEPES缓冲液(pH 7.2)洗涤，用0.1％的葡萄糖重悬于相同缓冲液中，至最终的600nm波长处的吸光度为0.5。荧光是在荧光计(LS-50，Perkin-Elmer)中用350nm激发波长和420nm发射波长于37℃下测量。将NPN以10μM的最终浓度加到悬浮液中，随后将肽以50μg/ml的最终浓度加入(图3)。
实施例4：对LPS刺激的单核细胞TNF-α分泌的中和作用
乳铁蛋白肽衍生的肽对LPS诱导的人单核细胞激活的抑制，是用来自肠道沙门氏菌(Salmonella enterica)的粗糙型突变株R60(Serovarminnesota)的LPS Ra进行测量。将该脂多糖与各个肽(空心柱条，0.1μg/ml；实心柱条，1μg/ml)在37℃下温育30分钟，加到来自健康供体的刚分离细胞(最终浓度：1ng/ml LPS)。将单独LPS诱导的细胞培养物上清液中TNF-α量用作未处理对照(图4)。
实施例5：对被杀灭细菌对免疫细胞的刺激的中和作用
细菌能被不同的抗生素杀灭，这些不同的抗生素靶向细菌存活所必需的不同分子。当革兰氏阴性细菌被杀灭时，所释放的LPS能刺激细胞因子如TNF-α或其他促炎介体的产生。按以下方式对已确立的(well-established)通过不同细胞靶标起作用的抗微生物药剂与本发明的化合物进行比较：使细菌(大肠杆菌株0:111)在LB培养基中生长至600nm吸光度为0.4，在具添加葡萄糖RPMI培养基中稀释2500倍。加入不同浓度的抗生素或本发明肽并温育过夜。将80μl的细胞悬浮液加到含有105个MonoMac6细胞的100μl中，15小时后，用ELISA试验测定TNF-α向培养基的释放。结果清楚表明，杀灭细菌细胞的氯霉素、青霉素和利福平导致了单核细胞受到高度刺激，而肽VS1-22和VS1-53显著地抑制了TNF-α的释放，与毒性脂肽多粘菌素B相似(图5)。
实施例6：体内测定
测定肽的抗内毒素活性的急性内毒素血症小鼠模型
小鼠能显著抵抗LPS介导的败血性休克。但是，小鼠对内毒素的敏感性可通过共注射LPS和半乳糖胺来加强。给各有16-18只20-25g重量的雌性ICR-CD1小鼠的几个实验组腹膜内注射200μl的含有0,3μg大肠杆菌LPS和18mg半乳糖胺的无热原盐水。之前的实验得以确定出，这一组合在注射后48小时对90％的小鼠致死(LD90)。小鼠在这个攻击(challenge)后立即在腹部不同部位接受第二次腹膜内注射，注射液是在150μl的10％DMF无热原盐水中溶解有150μg的肽。在所有的实验中，有一组小鼠不进行处理，而另一组则接受150μg的多粘菌素B。每日监测小鼠的死亡率，直到攻击后168小时为止。在我们的实验条件下，多粘菌素B没有赋予显著的针对内毒素休克的保护作用。
测定肽的抗内毒素活性的兔模型
在兔子(在对LPS活性的敏感性方面与人类非常接近的动物模型)中试验了脂质A所诱导的导致出血性皮肤坏死(经典的Shwartzmann反应)的促炎细胞因子活性的原理，并将它与对脂质A所诱导的导致凝血的LAL酶促级联激活的抑制进行比较。因此，在新西兰白兔的削了毛的背部区域，单独注射明尼苏达沙门氏菌(S.minnesota)Re595脂质A或者将该脂质A与肽1∶100(w/w)(5μg于0.2ml盐水缓冲液中；途径同上)一起注射。注射后72-96小时，观察兔子皮肤是存在开放性坏死(open necrosis)还是该坏死被抑制。多粘菌素B(PmB)用作对照。
表4：来自不同权利要求的显示“体外”与“体内”试验分析之间的正相关性的肽
SEQ IDNO.(修饰) 肽代号   终点LAL活性1肽：LPSRe595100∶1(w/w)   兔中的局部Shwartzmann反应2肽：LPS  Re595100∶1(w/w)
  25   VS1-18   阴性   阴性
  17   VS1-15   阴性   阴性
  17(2，2-DMB3)   VS1-42   阴性   阴性
  51   VS1-22   阴性   阴性
  51(2，2-DMB)   VS1-52   阴性   阴性
  75(环)   VF-50 阴性 阴性
  77   P2-11   阴性   阴性
  78   P2-19   阴性   阴性
  79   P2-18   阴性   阴性
  12   P1-12   阴性   阴性
  20   P1-39   阴性   阴性
  69   P1-63   阴性   阴性
  -   PmB   阴性   阴性
1鲎试验(凝胶凝结)灵敏度0,125EU.ml对应于10pg/ml的LPS S.MinnesotaRe595；结果是用在不同日期制备的储备溶液，通过LAL测定法，进行最少6个试验，每个试验重复进行三次而获得的。
2结果是在不同时间的实验中，将选定的肽在最少3只兔子中进行最少3次皮肤注射而获得的。
32，2-DMB...2，2-二甲基丁酰基
实施例7：对哺乳动物细胞毒性的试验
肽对获自肝素化人血液的红细胞的溶血活性，由37℃温育1小时后血红蛋白的释放来测定。血红蛋白的总释放(在414nm处测量的吸光度)通过加入Triton X-100(0.5％最终浓度)来实现。图6中显示了酰化的肽在高于其MIC的浓度下(5-50倍，取决于肽和细菌种类)的数据。
此外，选出显示最高膜透化活性的肽，通过台盼蓝染料排斥试验评估它们对人Hela细胞的毒性(Mishell，B.B.，和S.M.Shiigi.1980Selected methods in cellular immunology.Freeman和Co.，San Francisco.14-17)。当在100μg/ml下试验时，所有的肽(n＝16)没有显示出对细胞排斥染料的能力的作用或所显示出的该作用微不足道。
实施例8：表达的肽的纯化
为纯化重组蛋白质，将得自1升培养液的细菌细胞沉淀重悬于20ml裂解缓冲液(10mM Tris pH＝8.0，1mM EDTA，0.1％DOC)中，通过超声处理进行分散。将所得混合物在4℃下12,000rpm离心15分钟，以使可溶性上清液与含有包涵体(inclusion body)的不溶性沉淀部分相分离。将含有KSI-P2-33融合蛋白的不溶性包涵体部分，用20ml的含有10mM Tris pH＝8.0，1mM EDTA和0.1％DOC的洗涤缓冲液洗涤两次，用10mM Tris pH＝8.0，1mM EDTA和2M尿素洗涤两次，用20mM Tris pH＝8.0洗涤三次。将不溶性包涵体溶于10ml的6M胍-HCl中并离心，将可溶性上清液对2升去离子水进行透析，导致KSI-P2-33的沉淀。将融合蛋白(10mg)溶于10ml的90mM HCl中，所得混合物在85℃下混合2小时，以使融合蛋白与肽之间的天冬氨酰-脯氨酰键裂解。将酸性裂解所释放的肽通过HPLC进行纯化：将反应混合物干燥，溶于去离子水中，注射到C5 RP-HPLC柱(Sephasil)上，用5％乙腈、5mM HCl至95％乙腈、5mM HCl的梯度进行洗脱。肽峰(图7)通过280nm处的紫外吸光度进行检测。肽的身份通过质谱进行确定。
实施例9：用固定化肽进行的抗微生物测定
使用磷酸缓冲盐水pH＝7.5，使肽P2-32(500μg)与氰尿酰氯活化的磁性颗粒(10mg)(Chemicell，Product number 1314)共价连接。将所得悬浮液在摇动器上室温下混合2小时后，加入封闭缓冲液(PBS pH＝7.5和2％乙醇胺)，将悬浮液在摇动器上室温下混合30分钟。将颗粒物用PBS洗涤两次。将固定化的肽对大肠杆菌(菌株0:111)进行试验，该菌株在LB培养基中生长至600nm吸光度达0.4，并在LB培养基中稀释2500倍。加入不同浓度的固定化有肽的磁性颗粒，温育过夜。结果是50、25和10mg/ml浓度的固定化磁性颗粒防止了细菌生长。
表5：
  固定化磁性颗粒的加入量(mg)   大肠杆菌LB稀释液的体积(μl)   细菌生长
  5   100   被抑制
  2,5   100   被抑制
  1   100   被抑制
  0,5   100   不被抑制
  0,25   100   不被抑制
实施例10：抗真菌活性
将新型隐球菌(C.neoformans)ATCC 32045培养物在4℃下保持在酵母培养基(YM；Difco Laboratories，Detroit，Mich.)琼脂平板上。在测定前，使培养物在琼脂平板上生长并在26℃下温育72小时。然后从这些新长出的真菌培养物中挑取两个菌落接种在5ml的2X YM肉汤中，旋涡，在2X YM肉汤中稀释10倍，达1×105-5×105CFU/ml的近似最终测定浓度。在96孔组织培养板中，将真菌2X YM肉汤悬浮液加到以1mg/ml至1μg/ml的浓度分配的肽，这些浓度是在无菌水中进行系列两倍稀释得到的。然后将板在26℃下温育72小时。每个试验样品所观察到的真菌相对生长百分数，是用Titertek MultiskanPlus仪器通过620nm光密度(OD620)进行测定。MIC定义为导致2％生长的试验样品最低浓度，IC50定义为导致50％生长抑制的试验样品浓度。IC50用S型曲线拟合软件程序(Graphpad Prism；ISI Software，SanDiego，CA)来计算。所选的肽获得的结果在表6中显示。
  肽代号   SEQ ID No.   C-末端修饰   平均IC50(μg/ml) MIC(μg/ml)
  VS1-13   4   FWQRNIRIRR-NH2   8   32
VS1-14   80(SEQ IDNo.4反向(retro)) RRIRINRQWF-NH2 12 32
  VS1-15   17   FWQRNIRKWR-NH2   5   16
  VS1-16   66   RWKRINRQWF-NH2   13   32
  VS1-17   24   FWQRRIRKWR-NH2   5   32
  VS1-18   25   FWQRRIRRWRR-NH2   7   32
  VS1-19   64   PFWQRNIRKWR-NH2   3   8
  VS1-20   47   FWRNIRKWR-NH2   4   16
  VS1-21   37   FWRIRKWR-NH2   4   16
  VS1-22   51   PFWRIRIRR-NH2   2   8
  VS1-23   59   PFWRIRIRRD-NH2   4   8
  VS1-24   60   PFFWRIRIRR-NH2   3   8
  VS1-25   52   PFWRQRIRR-NH2   6   32
  VS1-26   81   PFWRRQIRR-NH2   6   32
  VS1-27   53   PFWRARIRR-NH2   8   32
  VS1-28   54   PFWRKRIRR-NH2   8   32
  VS1-29   55   PFWRKRLRR-NH2   9   32
  VS1-30   82   PFWRKKLKR-NH2   10   32
  VS1-31   56   PFWRKRWRR-NH2   8   32
  VS1-32   57   PFWRRRIRR-NH2   9   32
  VS1-33   58   PFWRRRWRR-NH2   9   32
  VS1-34   61   PWRIRIRR-NH2   2   8
  VS1-35   83   PWRRIRR-NH2   12   32
  VS1-36   84   PWRRKIRR-NH2   11   62
  肽代号   SEQ ID No.   C-末端修饰 平均IC50(μg/ml) MIC(μg/ml)
  VS1-37   85   PFWRRRIRIRR-NH2   9   32
  VS1-39   86   RRWFWRR-OH   6   32
  VS1-40   17   辛酰基   FWQRNIRKWR-NH2   2   8
  VS1-41   17   2-乙基己酰基   FWQRNIRKWR-NH2   4   8
  VS1-42   17   2，2-二甲基酰基   FWQRNIRKWR-NH2   6   16
  VS1-43   17   6-甲基辛酰基   FWQRNIRKWR-NH2   6   16
VS1-44 17   二环己基乙酰基 FWQRNIRKWR-NH2 4 16
  VS1-45   66   辛酰基   RWKRINRQWF-NH2   2   4
  VS1-46   66   2-乙基己酰基   RWKRINRQWF-NH2   4   8
  VS1-47   66   2，2-二甲基酰基   RWKRINRQWF-NH2   8   16
  VS1-48   66   6-甲基辛酰基   RWKRINRQWF-NH2   2   8
  VS1-50   51   辛酰基   PFWRIRIRR-NH2   6   16
  VS1-51   51   2-乙基己酰基   PFWRIRIRR-NH2   3   8
  VS1-52   51   2，2-二甲基酰基   PFWRIRIRR-NH2   2   4
VS1-53   51 6-甲基辛酰基 PFWRIRIRR-NH2 6 16
  VS1-55   75   辛酰基   FWRIRIRR-NH2   4   16
  VS1-56   75   2-乙基己酰基   FWRIRIRR-NH2   3   16
  VS1-57   75   2，2-二甲基酰基   FWRIRIRR-NH2   2   4
  VS1-58   75   6-甲基辛酰基   FWRIRIRR-NH2   6   16
  VS1-60   43   辛酰基   FWRRFWRR-NH2   10   32
  VS1-61   43   2-乙基己酰基   FWRRFWRR-NH2   6   16
  VS1-62   43   2，2-二甲基酰基   FWRRFWRR-NH2   4   16
  VS1-63   43   6-甲基辛酰基   FWRRFWRR-NH2   11   62
  VS1-49 66   二环己基乙酰基 RWKRINRQWF-NH2 2 4
  VS1-54 51   二环己基乙酰基 PFWRIRIRR-NH2 3 8
  肽代号   SEQ ID No.   C-末端修饰   平均IC50(μg/ml) MIC(μg/ml)
  VS1-59 75   (二环-)己基乙酰基 FWRIRIRR-NH2 14 62
  VS1-64 43   (二环-)己基乙酰基 FWRRFWRR-NH2 6 32
  VF50   75   环   FWRIRIFRR-NH2   2   8
序列表
<110>Osterreichische Akademie der Wissenschaften
     Austria Wirtschaftsservice Gesellschaft mit beschrakter Haftung
<120>Antimicrobial Peptides
<130>R 50272
<150>AT A1165/2006
<151>2006 07 10
<160>86
<170>PatentIn version 3.3
<210>1
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>1
Phe Trp Gln Arg Ile Arg Lys Val Arg
1               5
<210>2
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>2
Phe Trp Gln Arg Arg Ile Arg Lys Val Arg Arg
1               5                   10
<210>3
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>3
Phe Trp Gln Arg Lys Ile Arg Lys Val Arg Lys
1               5                   10
<210>4
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>4
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Ile Arg Arg
1               5                   10
<210>5
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>5
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>6
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>6
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1               5
<210>7
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<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>7
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg Arg
1               5                       10
<210>8
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>8
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Lys Lys
1               5                   10
<210>9
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<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>9
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg Arg Arg
1               5                   10
<210>10
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>10
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Lys Lys Lys
1               5                   10
<210>11
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>11
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg Arg Arg Arg
1               5                   10
<210>12
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>12
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg Arg Arg Ile
1               5                   10
<210>13
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>13
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Lys Lys Lys Lys
1               5                   10
<210>14
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>14
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Lys Lys Lys Ile
1               5                   10
<210>15
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>15
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Ile Arg
1               5                   10
<210>16
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>16
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Leu Arg
1               5                   10
<210>17
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>17
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Trp Arg
1               5                   10
<210>18
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>18
Phe Trp Gln Arg Asn Trp Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>19
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>19
Phe Trp Gln Arg Asn Phe Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>20
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>20
Phe Trp Gln Arg Asn Tyr Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>21
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>21
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Ser
1               5                   10
<210>22
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>22
Phe Trp Gln Arg Arg Ile Arg Ile Arg Arg
1               5                   10
<210>23
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>23
Phe Trp Gln Arg Pro Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>24
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>24
Phe Trp Gln Arg Arg Ile Arg Lys Trp Arg
1               5                   10
<210>25
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>25
Phe Trp Gln Arg Arg Ile Arg Arg Trp Arg Arg
1               5                   10
<210>26
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>26
Phe Trp Pro Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>27
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>27
Phe Trp Ala Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>28
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>28
Phe Trp Ile Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>29
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>29
Phe Trp Leu Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>30
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>30
Phe Trp Val Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>31
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>31
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Phe Lys Val Arg
1               5                   10
<210>32
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>32
Phe Trp Gln Arg Asn Ile Tyr Lys Val Arg
1               5                   10
<210>33
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>33
Phe Ala Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>34
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>34
Phe Ile Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>35
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>35
Phe Leu Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>36
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>36
Phe Val Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg
1               5                   10
<210>37
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>37
Phe Trp Arg Ile Arg Lys Trp Arg
1               5
<210>38
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>38
Phe Trp Arg Ile Arg Lys Val Arg
1               5
<210>39
<211>6
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>39
Phe Trp Arg Trp Arg Arg
1               5
<210>40
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>40
Phe Trp Arg Arg Trp Arg Arg
1               5
<210>41
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>41
Phe Trp Arg Arg Trp Ile Arg Arg
1               5
<210>42
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>42
Phe Trp Arg Gly Trp Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>43
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>43
Phe Trp Arg Arg Phe Trp Arg Arg
1               5
<210>44
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>44
Phe Trp Arg Trp Arg Trp Arg
1               5
<210>45
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>45
Phe Trp Arg Ile Trp Arg Trp Arg
1               5
<210>46
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>46
Phe Trp Arg Ile Trp Arg Ile Trp Arg
1               5
<210>47
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>47
Phe Trp Arg Asn Ile Arg Lys Trp Arg
1               5
<210>48
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>48
Phe Trp Arg Arg Arg Ile Arg Ile Arg Arg
1               5                   10
<210>49
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>49
Phe Ile Trp Arg Trp Arg Trp Arg
1               5
<210>50
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>50
Pro Phe Trp Arg Trp Arg Ile Trp Arg
1               5
<210>51
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>51
Pro Phe Trp Arg Ile Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>52
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>52
Pro Phe Trp Arg Gln Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>53
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>53
Pro Phe Trp Arg Ala Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>54
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>54
Pro Phe Trp Arg Lys Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>55
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>55
Pro Phe Trp Arg Lys Arg Leu Arg Arg
1               5
<210>56
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>56
Pro Phe Trp Arg Lys Arg Trp Arg Arg
1               5
<210>57
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>57
Pro Phe Trp Arg Arg Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>58
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>58
Pro Phe Trp Arg Arg Arg Trp Arg Arg
1               5
<210>59
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>59
Pro Phe Trp Arg Ile Arg Ile Arg Arg Asp
1               5                   10
<210>60
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>60
Pro Phe Phe Trp Arg Ile Arg Ile Arg Arg
1               5                   10
<210>61
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>61
Pro Trp Arg Ile Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>62
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>62
Arg Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Val Arg Arg
1               5                   10
<210>63
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>63
Arg Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Tyr Arg
1               5                   10
<210>64
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>64
Pro Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Trp Arg
1               5                   10
<210>65
<211>13
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>65
Arg Phe Arg Trp Gln Arg Asn Ile Arg Lys Tyr Arg Arg
1                   5               10
<210>66
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>66
Arg Trp Lys Arg Ile Asn Arg Gln Trp Phe
1               5                   10
<210>67
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>67
Lys Arg Phe Cys Phe Lys Lys
1               5
<210>68
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>68
Lys Arg Phe Ser Phe Lys Lys Cys
1               5
<210>69
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>69
Lys Arg Trp Ser Trp Lys Lys
1               5
<210>70
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>70
Phe Arg Phe Ser Phe Lys Lys
1               5
<210>71
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>71
Arg Arg Phe Trp Phe Arg Arg
1               5
<210>72
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>72
Phe Trp Arg Asn Ile Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>73
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>73
Phe Trp Gln Arg Ile Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>74
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>74
Phe Trp Arg Trp Arg Ile Trp Arg
1               5
<210>75
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>75
Phe Trp Arg Ile Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>76
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>76
Phe Trp Arg Asn Ile Arg Ile Trp Arg Arg
1               5                   10
<210>77
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>77
Phe Trp Arg Asn Ile Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>78
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>78
Arg Phe Trp Gln Arg Asn Ile Arg Ile Arg Arg
1               5                   10
<210>79
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>79
Arg Trp Gln Arg Asn Ile Arg Ile Arg Arg
1               5                   10
<210>80
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>80
Arg Arg Ile Arg Ile Asn Arg Gln Trp Phe
1               5                   10
<210>81
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>81
Pro Phe Trp Arg Arg Gln Ile Arg Arg
1               5
<210>82
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>82
Pro Phe Trp Arg Lys Lys Leu Lys Arg
1               5
<210>83
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>83
Pro Trp Arg Arg Ile Arg Arg
1               5
<210>84
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>84
Pro Trp Arg Arg Lys Ile Arg Arg
1               5
<210>85
<211>11
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>85
Pro Phe Trp Arg Arg Arg Ile Arg Ile Arg Arg
1               5                   10
<210>86
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>显示出抗微生物和/或内毒素中和活性的肽
<400>86
Arg Arg Trp Phe Trp Arg Arg
1               5

Claims (30)

1.下式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽：
(Xaa1)M-(Xaa2)O-Xaa3-(Xaa4)P-(Xaa5)Q-(Xaa6)M-(Xaa7)R-(Xaa8)S，其中
Xaa1为疏水性氨基酸，优选选自苯丙氨酸(Phe)、丙氨酸(Ala)、亮氨酸(Leu)和缬氨酸(Val)，
Xaa2为碱性氨基酸，优选选自精氨酸(Arg)和赖氨酸(Lys)，
Xaa3为疏水性氨基酸，优选色氨酸(Trp)，
Xaa4选自丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)、脯氨酸(Pro)、异亮氨酸(Ile)、亮氨酸(Leu)和缬氨酸(Val)，
Xaa5选自异亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和酪氨酸(Tyr)，
Xaa6选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)，
Xaa7为疏水性氨基酸，优选选自异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)、缬氨酸(Val)和亮氨酸(Leu)，和
Xaa8选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、异亮氨酸(Ile)和丝氨酸(Ser)，且其中
O为0，
M为1或2，
P为2或3，
Q和R为1，和
S为1、2、3或4。
2.权利要求1的肽，其特征在于所述的式包含选自以下的氨基酸序列：FWQRIRKVR(SEQ ID No.1)、FWQRRIRKVRR(SEQ ID No.2)、FWQRKIRKVRK(SEQ ID No.3)、FWQRNIRIRR(SEQ ID No.4)、FWQRNIRKVR(SEQ ID No.5)、FWQRNIRVR(SEQ ID No.6)、FWQRNIRKVRR(SEQ ID No.7)、FWQRNIRKVKK(SEQ ID No.8)、FWQRNIRKVRRR(SEQ ID No.9)、FWQRNIRKVKKK(SEQ ID No.10)、FWQRNIRKVRRRR(SEQ ID No.11)、FWQRNIRKVRRRI(SEQID No.12)、FWQRNIRKVKKK(SEQ ID No.13)、FWQRNIRKVKKKI(SEQ ID No.14)、FWQRNIRKIR(SEQ ID No.15)、FWQRNIRKLR(SEQ ID No.16)、FWQRNIRKWR(SEQ ID No.17)、FWQRNWRKVR(SEQ ID No.18)、FWQRNFRKVR(SEQ ID No.19)、FWQRNYRKVR(SEQ ID No.20)、FWQRNIRKVS(SEQ ID No.21)、FWQRRIRIRR(SEQ ID No.22)、FWQRPIRKVR(SEQ ID No.23)、FWQRRIRKWR(SEQ ID No.24)、FWQRRIRRWRR(SEQ ID No.25)、FWPRNIRKVR(SEQ ID No.26)、FWARNIRKVR(SEQ ID No.27)、FWIRNIRKVR(SEQ ID No.28)、FWLRNIRKVR(SEQ ID No.29)、FWVRNIRKVR(SEQ ID No.30)、FWQRNIFKVR(SEQ ID No.31)、FWQRNIYKVR(SEQ ID No.32)、FAWQRNIRKVR(SEQ ID No.33)、FLWQRNIRKVR(SEQ ID No.35)和FVWQRNIRKVR(SEQ ID No.36)。
3.下式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽：
(Xaa1)M-(Xaa2)O-Xaa3-(Xaa4)P-(Xaa5)Q-(Xaa6)M-(Xaa7)R-(Xaa8)S，其中
Xaa1为疏水性氨基酸，优选选自苯丙氨酸(Phe)和异亮氨酸(Ile)，
Xaa2为碱性氨基酸，优选选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)，
Xaa3为疏水性氨基酸，优选色氨酸(Trp)，
Xaa4选自甘氨酸(Gly)、天冬酰胺(Asn)、异亮氨酸(Ile)和苯丙氨酸(Phe)，
Xaa5为异亮氨酸(Ile)或色氨酸(Trp)，
Xaa6为精氨酸(Arg)或赖氨酸(Lys)，
Xaa7为疏水性氨基酸，优选选自异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)和缬氨酸(Val)，和
Xaa8为精氨酸(Arg)，且其中
O为0，
M为1或2，
R为0或1，
P为1、2或3，
Q为1，和
S为0、1或2。
4.权利要求3的肽，其特征在于所述的式包含选自以下的氨基酸序列：FWRIRKWR(SEQ ID No.37)、FWRIRKVR(SEQ ID No.38)、FWRWRR(SEQ ID No.39)、FWRRWRR(SEQ ID No.40)、FWRRWIRR(SEQ ID No.41)、FWRGWRIRR(SEQ ID No.42)、FWRRFWRR(SEQ ID No.43)、FWRWRWR(SEQ ID No.44)、FWRIWRWR(SEQ ID No.45)、FWRIWRIWR(SEQ ID No.46)、FWRNIRKWR(SEQ ID No.47)和FWRRRIRIRR(SEQ ID No.48)。
5.下式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽：
(Xaa1)M-(Xaa2)O-Xaa3-(Xaa4)P-(Xaa5)Q-(Xaa6)M-(Xaa7)R-(Xaa8)S，其中
Xaa1为疏水性氨基酸，优选选自脯氨酸(Pro)和苯丙氨酸(Phe)，
Xaa2为碱性氨基酸，优选选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)，
Xaa3为疏水性氨基酸，优选色氨酸(Trp)，
Xaa4选自丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、谷氨酰胺(Gln)、赖氨酸(Lys)、色氨酸(Trp)和异亮氨酸(Ile)，
Xaa5选自异亮氨酸(Ile)和色氨酸(Trp)，
Xaa6选自精氨酸(Arg)和天冬氨酸(Asp)，
Xaa7为疏水性氨基酸，优选选自异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)、苯丙氨酸(Phe)、缬氨酸(Val)和亮氨酸(Leu)，和
Xaa8选自精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)、异亮氨酸(Ile)、丝氨酸(Ser)和天冬氨酸(Asp)，且其中
O和Q为0，
M为0、1、2或3，
R为1或2，
P为1、2或3，和
S为1、2或3。
6.权利要求5的肽，其特征在于所述的式包含选自以下的氨基酸序列：PFWRWRIWR(SEQ ID No.50)、PFWRIRIRR(SEQ ID No.51)、PFWRQRIRR(SEQ ID No.52)、PFWRARIRR(SEQ ID No.53)、PFWRKRIRR(SEQ ID No.54)、PFWRKRLRR(SEQ ID No.55)、PFWRKRWRR(SEQ ID No.56)、PFWRRRIRR(SEQ ID No.57)、PFWRRRWRR(SEQ ID No.58)、PFWRIRIRRD(SEQ ID No.59)、PFFWRIRIRR(SEQ ID No.60)、PWRIRIRR(SEQ ID No.61)、PFWRRQIRR(SEQ ID No.81)、PFWRKKLKR(SEQ ID No.82)、PWRRIRR(SEQ ID No.83)、PWRRKIRR(SEQ ID No.84)和PFWRRIRIRR(SEQ ID No.85)。
7.下式所示的具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽：
(Xaa1)M-(Xaa2)O-Xaa3-(Xaa4)P-(Xaa5)Q-(Xaa6)M-(Xaa7)R-(Xaa8)S，其中
Xaa1为疏水性氨基酸，优选选自脯氨酸(Pro)和苯丙氨酸(Phe)，
Xaa2为碱性氨基酸，优选精氨酸(Arg)，
Xaa3为疏水性氨基酸，优选色氨酸(Trp)，
Xaa4选自丙氨酸(Ala)、精氨酸(Arg)、谷氨酰胺(Gln)、天冬酰胺(Asn)和赖氨酸(Lys)，
Xaa5选自异亮氨酸(Ile)、苯丙氨酸(Phe)和色氨酸(Trp)，
Xaa6选自谷氨酰胺(Gln)、精氨酸(Arg)和天冬酰胺(Asn)，
Xaa7为疏水性氨基酸，优选选自异亮氨酸(Ile)、色氨酸(Trp)和苯丙氨酸(Phe)，和
Xaa8为精氨酸(Arg)，且其中
M为0、1、2或3，
O为0或1，
P为1、2或3，
Q为1或2，和
R和S为0、1或2。
8.权利要求7的肽，其特征在于所述的式包含选自以下的氨基酸序列：FWRNIRIRR(SEQ ID No.72)、FWQRIRIRR(SEQ ID No.73)、FWRWRIWR(SEQ ID No.74)、FWRIRIRR(SEQ ID No.75)、FWRNIRIWRR(SEQ ID No.76)和FwRNIRIRR(SEQ ID No.77)。
9.一种具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽，所述肽的式中包含选自以下的氨基酸序列：62)、RFWQRNIRKYR(SEQ ID No.63)、PFWQRNIRKWR(SEQ ID No.64)、RFRWQRNIRKYRR(SEQ ID No.65)、RWKRINRQWF(SEQ ID No.66)、KRFCFKK(SEQ ID No.67)、KRFSFKKC(SEQ ID No.68)、KRWSWKK(SEQ ID No.69)、FRFSFKK(SEQ ID No.70)、RRFWFRR(SEQ ID No.71)、RFWQRNIRIRR(SEQID No.78)、RWQRNIRIRR(SEQ ID No.79)和RRWFWRR(SEQ ID No.86)。
10.一种具有抗微生物活性或内毒素中和活性的肽，所述肽具有以下所示的式：FIWQRNIRKVR(SEQ ID No.34)、FIWRWRWR(SEQID No.49)和RRIRINRQWF(SEQ ID No.80)。
11.权利要求1-10中任一项的肽，其特征在于其C末端优选包含选自N-甲基酰胺基基团或羧基基团的基团，或者选自酰胺基团、酯、醚或酮的基团，优选包含1-120个碳原子，更优选1-10个碳原子，特别是包含N-甲基酰胺基基团。
12.权利要求1-11中任一项的肽，其特征在于酰基基团与肽的N末端或C末端结合。
13.权利要求12的肽，其特征在于所述酰基基团是选自C2-C20的饱和和不饱和的直链和支链酰基链、苄基衍生物和F-moc的疏水链。
14.权利要求12或13的肽，其特征在于所述酰基基团选自十二碳酰基基团、癸酰基基团、辛酰基基团、己酰基基团、2-甲基己酰基基团、2-乙基己酰基基团、2-丙基戊酰基基团、2-丁基辛酰基基团、2，2-二甲基丁酰基基团、2-甲基戊酰基基团、3-甲基戊酰基基团、4-甲基戊酰基基团、6-甲基辛酰基基团、苄基基团和二环己基乙酰基基团。
15.一种包含权利要求1-14中任一项的肽的多肽。
16.一种包含权利要求1-15中任一项的肽或多肽的药物组合物。
17.权利要求16的组合物，所述组合物包含至少一种另外的抗微生物药剂或抗败血症药剂。
18.权利要求16或17的组合物，所述组合物还包含药物可接受的赋形剂。
19.权利要求1-15中任一项的肽或多肽作为抗微生物药剂、作为内毒素中和药剂或作为抗真菌药剂的用途。
20.权利要求1-15中任一项的肽或多肽用于制备用以治疗或预防由微生物优选由细菌和/或真菌引起的感染或优选由内毒素引起的败血症或败血性休克的药物的用途。
21.权利要求20的用途，其特征在于所述药物还包含至少一种另外的抗微生物药剂或抗败血症药剂。
22.权利要求20或21的用途，其特征在于所述药物还包含药物可接受的赋形剂。
23.一种抑制至少一种微生物的生长的方法，所述方法包括使所述微生物与有效量的权利要求1-15中任一项的肽或多肽接触的步骤。
24.权利要求23的方法，其特征在于所述微生物是革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌。
25.权利要求23或24的方法，其特征在于所述要进行接触的微生物，优选是肠杆菌科，特别是大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌属中的细菌(Salmonella spp.)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、小肠结肠炎耶尔森氏菌(Yersinia enterocolitica)或克雷伯氏菌属中的细菌(Klebsiella spp.)；优选是假单胞菌科，特别是绿脓杆菌(Pseudomonasaeruginosa)；优选是产碱菌科，特别是支气管败血波氏杆菌(Bordetellabronchiseptica)或百目咳波氏杆菌(Bordetella pertussis)；优选是布鲁氏菌科，特别是流产布鲁氏菌(Brucella abortus)；优选是莫拉氏菌科，特别是鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumanii)；优选是黄单胞菌科，特别是嗜麦芽窄食单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)；巴斯德氏菌科，特别是流感嗜血杆菌(Haemophilus Influenzae)；优选是奈瑟氏菌科，特别是脑膜炎奈瑟氏菌(Neisseria meningitidis)；优选是葡萄球菌科，特别是金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)或表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)；优选是肠球菌科，特别是粪肠球菌(Enterococcus faecalis)；优选是链球菌科，特别是无乳链球菌(Streptococcus agalactiae)；和优选是衣原体科，特别是肺炎衣原体(Chlamydia pneumoniae)。
26.权利要求23-25中任一项的方法，其特征在于所述微生物显示多药耐药性。
27.一种通过给予有效量的权利要求1-15中任一项的肽或多肽或者权利要求16或18的药物组合物，来中和微生物的细菌成分、优选细胞壁成分、更优选脂多糖的生物活性的方法。
28.一种通过给予有效量的权利要求1-15中任一项的肽或多肽或者权利要求16或18的药物组合物，来中和微生物的细菌成分、优选细胞壁成分、更优选脂多糖的生物活性，或者治疗遭受微生物感染或败血性休克的哺乳动物特别是人个体的方法。
29.一种制备具有N末端脯氨酸残基的权利要求1-14中任一项的肽的方法，所述方法包括以下步骤：
-提供包含编码这样的融合多肽或蛋白质的核酸分子的宿主细胞，该融合多肽或蛋白质包含具有N末端脯氨酸残基的权利要求1-14中任一项的肽，其中所述肽C末端融合于具有C末端天冬氨酸的所述多肽或蛋白质，
-表达和分离所述融合多肽或蛋白质，
-使分离的融合多肽或蛋白质经受0.5-4之间的pH值。
30.一种从样品吸附和除去或灭活细菌或细菌成分的方法，所述方法包括使所述样品与固定化的权利要求1-14中任一项的肽接触的步骤。
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Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103547296A (zh) * 2011-03-11 2014-01-29 非营利性组织佛兰芒综合大学生物技术研究所 用于抑制和检测蛋白质的分子和方法
CN104245721A (zh) * 2012-03-07 2014-12-24 罗伯特·博世医学研究有限责任公司 抗微生物肽
CN104583395A (zh) * 2012-07-06 2015-04-29 昆塔麦特利斯株式会社 用于捕获和释放微生物的微结构体
WO2015161820A1 (zh) * 2014-04-24 2015-10-29 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 两亲性合成抗菌肽、其药物组合物及其用途
CN108367042A (zh) * 2015-06-05 2018-08-03 加州大学洛杉矶分校医疗中心洛杉矶生物医学研究所 抗微生物融合肽
CN110606871A (zh) * 2019-09-20 2019-12-24 湖南生达生物科技有限公司 一种小分子多肽rk12及其应用
WO2022037681A1 (zh) * 2020-08-21 2022-02-24 中国科学院微生物研究所 抗微生物肽及其应用

Families Citing this family (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2020005326A (es) 2008-08-15 2022-03-03 Ironwood Pharmaceuticals Inc Formulaciones que contienen linaclotida para administracion oral.
WO2010027404A2 (en) * 2008-09-04 2010-03-11 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Stable solid formulation of therapeutic polypeptides suitable for oral administration
WO2010080819A1 (en) 2009-01-06 2010-07-15 C3 Jian, Inc. Targeted antimicrobial moieties
WO2010096695A1 (en) * 2009-02-20 2010-08-26 Modular Genetics, Inc. Antimicrobial compositions and uses thereof
MX2012001660A (es) 2009-08-06 2012-03-26 Ironwood Pharmaceuticals Inc Formulaciones que contienen linaclotida para adminstracion oral.
GB0919194D0 (en) * 2009-11-02 2009-12-16 Lytix Biopharma As Compounds
WO2011103311A2 (en) 2010-02-17 2011-08-25 Ironwood Pharmaceuticals, Inc Treatments for gastrointestinal disorders
JP2011178674A (ja) * 2010-02-26 2011-09-15 Tokai Univ 抗菌剤
US20140005128A1 (en) 2010-08-11 2014-01-02 Forest Laboratories Holdings Limited Treatments of gastrointestinal disorders
EP2481751A1 (en) * 2011-01-26 2012-08-01 PharmaSurgics in Sweden AB Human lactoferrin derived peptides
EP2776055B1 (en) 2011-08-17 2016-12-14 Ironwood Pharmaceuticals, Inc. Treatments for gastrointestinal disorders
EP2679236A1 (de) 2012-06-29 2014-01-01 Zentrum für biomedizinische Technologie der Donau- Universität Krems Dosierungsanleitung für endotoxinbindende Lipopeptide
US9196843B2 (en) * 2012-07-17 2015-11-24 Ricoh Company, Ltd. Fullerene derivative, and method of preparing the same
EP2754450A1 (en) * 2013-01-11 2014-07-16 Österreichische Akademie der Wissenschaften Lactoferricin derived peptides
JP6079439B2 (ja) * 2013-05-29 2017-02-15 株式会社島津製作所 タンパク質又はペプチドの分析方法及び分析装置
CA2953446A1 (en) * 2014-06-26 2015-12-30 The Rockefeller University Acinetobacter lysins
RU2584089C1 (ru) * 2015-06-15 2016-05-20 Государственное Бюджетное Образовательное Учреждение Высшего Профессионального Образования "Саратовский Государственный Медицинский Университет Имени В.И. Разумовского" Министерства Здравоохранения Российской Федерации Способ снижения летального эффекта бактериального липополисахарида in vitro
KR101855170B1 (ko) * 2015-11-18 2018-05-08 (주)노바셀테크놀로지 신규 항균 펩타이드 및 그의 용도
RU2702661C1 (ru) * 2019-05-24 2019-10-09 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова Российской академии наук (ИБХ РАН) Пептид, проявляющий антибактериальные и противоопухолевые свойства

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE69220397T2 (de) * 1991-03-13 1997-10-02 Morinaga Milk Industry Co Ltd Antimikrobielles Peptid und antimikrobieller Wirkstoff
EP0510912B1 (en) * 1991-04-24 1998-01-07 Morinaga Milk Industry Co., Ltd. Antimicrobial peptide and antimicrobial agent
US5593866A (en) 1992-08-21 1997-01-14 The University Of British Columbia Cationic peptides and method for production
US5830860A (en) * 1994-03-24 1998-11-03 Regents Of The University Of Minnesota Peptides with bactericidal activity and endotoxin neutralizing activity for gram negative bacteria and methods for their use
SE9804614A0 (en) * 1998-07-06 2000-01-07 A+ Science Invest Ab New peptides and use thereof
JP3273314B2 (ja) * 1998-08-12 2002-04-08 独立行政法人農業生物資源研究所 抗菌ペプチド及びこれを有効成分とする抗菌剤
US6476189B1 (en) * 1998-08-12 2002-11-05 National Institute Of Agrobiological Sciences Antibacterial peptides and antibacterial agents containing such peptides as an effective ingredient
GB9818938D0 (en) 1998-08-28 1998-10-21 Alpharma As Bioactive peptides
CA2386028A1 (en) 1999-09-30 2001-04-05 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Human tumor-associated lak-4p related polynucleotides and polypeptides and their uses
DE60025026T2 (de) 1999-11-11 2006-08-03 Am-Pharma B.V. Antimikrobielle Wirkung des ersten kationischen Clusters des menschlichen Lactoferrins
GB0005703D0 (en) * 2000-03-09 2000-05-03 Alpharma As Compounds
US6492328B2 (en) * 2000-06-28 2002-12-10 The University Of Iowa Research Foundation Novispirins: antimicrobial peptides
EP1421108A2 (en) * 2001-08-24 2004-05-26 Micrologix Biotech, Inc. Antimicrobial and anti-inflammatory peptides
US20030194445A1 (en) * 2001-11-12 2003-10-16 Kuhner Carla H. Compositions and methods of use of peptides in combination with biocides and/or germicides
US20040072990A1 (en) * 2002-09-20 2004-04-15 Shiou-Ru Tzeng Antimicrobial peptides with reduced hemolysis and methods of their use
EP1628675A4 (en) * 2003-05-20 2008-05-07 Univ Virginia ANTIGENS TARGETED BY PATHOGENIC T LYMPHOCYTES PREDOMINANT IN DIABETES TYPE 1 AND USES THEREOF
EP1756147A2 (en) * 2004-06-01 2007-02-28 Innogenetics N.V. Peptides for inducing a ctl and/or htl response to hepatitis c virus
US20080207522A1 (en) * 2004-11-12 2008-08-28 Hancock Robert E W Antimicrobial Peptides

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103547296A (zh) * 2011-03-11 2014-01-29 非营利性组织佛兰芒综合大学生物技术研究所 用于抑制和检测蛋白质的分子和方法
CN104245721A (zh) * 2012-03-07 2014-12-24 罗伯特·博世医学研究有限责任公司 抗微生物肽
CN104583395A (zh) * 2012-07-06 2015-04-29 昆塔麦特利斯株式会社 用于捕获和释放微生物的微结构体
CN104583395B (zh) * 2012-07-06 2019-01-29 昆塔麦特利斯株式会社 用于捕获和释放微生物的微结构体
WO2015161820A1 (zh) * 2014-04-24 2015-10-29 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所 两亲性合成抗菌肽、其药物组合物及其用途
CN108367042A (zh) * 2015-06-05 2018-08-03 加州大学洛杉矶分校医疗中心洛杉矶生物医学研究所 抗微生物融合肽
CN108367042B (zh) * 2015-06-05 2022-03-01 加州大学洛杉矶分校医疗中心洛杉矶生物医学研究所 抗微生物融合肽
CN110606871A (zh) * 2019-09-20 2019-12-24 湖南生达生物科技有限公司 一种小分子多肽rk12及其应用
CN110606871B (zh) * 2019-09-20 2022-10-21 佩德生物科技(南通)有限公司 一种小分子多肽rk12及其应用
WO2022037681A1 (zh) * 2020-08-21 2022-02-24 中国科学院微生物研究所 抗微生物肽及其应用

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