CN101512321B - 用于探测水中的活浮游生物细胞的方法和装置 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于探测水中的或从水中取出的活浮游生物细胞和/或微生物的方法和装置,尤其是压舱水、水域、污水,或游泳和洗浴设备中的水。所述方法的特征在于如下步骤:通过形成测量空间中的最大荧光(Fm)与最小荧光(Fo)之间的差值,或通过探测(尤其是通过测量)测量空间中荧光感应曲线的动态形状的一部分或全部,来计算变量荧光(Fv);以及根据变量荧光(Fv)来计算测量空间中参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的数量。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于探测水中的/来自水的活(即有生命的)浮游生物细胞和/或微生物的方法和装置,尤其是探测水面的活浮游生物细胞和/或微生物,例如,池塘、河流、小溪、湖泊和拦蓄河流、淡水和微咸水、船只压舱水、深海水、地下水和滴流水、处理水、工业用水、冷却水和循环水、废水、洗澡水和游泳池水,培养水以及培养基或生产用水。
背景技术
在天然水的利用过程中,为了使水可用于各种用途以及保持处理限度和排放限度,水处理过程中的一个重要目标是清除浮游生物和/或微生物。例如,一个常见的问题涉及:水面浮游生物群的生长和过滤系统方面的突破,以及饮用水分配网络的出现。当处理不充分时,会发生因浮游生物自身引起的问题,例如,水变色、气味和毒素以及水中其他有害细菌进而利用浮游生物作为营养源来进行繁殖。同时,浮游生物物种暴露在和/或夹带在外来物种的群落生境中是不利的,因为这会导致生态平衡的变化。
因此,有必要探测水中的活浮游生物细胞,尤其是作为在线监测和控制方法的一部分,专门用于控制对水中的活浮游生物细胞和/或微生物进行清除和/或消毒的处理方法。
然而,现今已知的方法不能在合理的时限内可靠地得出结果,尤其当细胞尺寸小于或等于0.1mm并且需要确定细胞计数时,尤其当存在多个不同物种并且存在任何组合物时更是如此。因此,尽管已知的生物量繁殖方法非常灵敏,但它还是非常地费时,因为需要几天或甚至数周的时间来确定生物量。该方法的另一缺点是仍然无法得知原始细胞计数。因此,该方法不适于在线监测。
另外,还已知被动式(passive)荧光测定法能用来确定水样品中的浮游生物细胞的生物量。该方法的一个缺点是无法提供关于活浮游生物细胞或死浮游生物细胞的任何信息,原因是无法将这两者区分开。
所谓的主动式(active)荧光测定法用于确定光合作用系统的量子效率,该方法可仅针对活细胞。该方法的一个缺点是其不允许量化浮游生物细胞。
发明内容
本发明的目的是创造一种用于探测水中的/来自水的活浮游生物细胞和/或微生物的方法和装置,使得能够不费力地并且在尽可能短的时间量内确定水样品中的活浮游生物细胞和/或微生物的数量,并且尤其允许对水进行在线监测。
该目的是通过本发明的方法以及装置来实现。
本发明用于探测水中的或来自水的活浮游生物细胞和/或微生物的方法包括如下步骤:
·通过在含有待测水和/或待测微生物的测量空间内(无论其几何形状如何),形成最小荧光Fo与最大荧光Fm之间的差值,或者通过在含有待测水和/或待测微生物的测量空间内(无论其几何形状如何),确定荧光感应曲线的动态特性,来计算变量荧光Fv;尤其是,测量荧光感应曲线随时间的特性并且通过计算荧光感应曲线的时间积分或通过内插荧光感应曲线来计算最大荧光Fm;以及
·作为变量荧光Fv的函数计算测量空间内参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的数量。
作为另一选择,本发明的另一方法包括如下步骤:
·测量因光输入而引起的测量空间(11)内的放热;以及
·作为放热的函数计算测量空间(11)内一个参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的数量。
最小荧光Fo是指来自活细胞和死细胞两者的荧光,而最大荧光Fm对应于至少几乎所有原初电子受体都已被还原的荧光,并且变量荧光Fv对应于最大荧光Fm与最小荧光Fo之间的差值,各自都基于测量空间中的待测水和/或待测微生物。
为了确定水中的生物物质,可通过荧光计来探测荧光。可区分开两种状态-最小荧光Fo(暗状态)与在光输入情况下的最大荧光Fm,尤其是该输入的光是预定波长的光。惊奇地发现,最大荧光Fm与最小荧光Fo之间的差值(即,变量荧光Fv)是测量空间中和/或水和/或微生物的测试量中活浮游生物细胞和/或微生物的数量的度量,这是因为变量荧光Fv与活浮游生物细胞的数量显示出某种关联。
测量空间中和/或水和/或微生物的测试量中一个参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的数量可通过如下方式来计算:测量最小荧光Fo(没有照射),测量最大荧光Fm(有照射)以及通过形成(Fm-Fo)的差值来计算变量荧光Fv。
本发明的用于探测水中的/来自水的活浮游生物细胞和/或微生物的装置提供有至少一个荧光计,用于确定测试空间中的一定量的水和/或一定量的微生物的最小荧光Fo和最大荧光Fm,从而该荧光计具有至少一个光源和至少一个探测器。另外,设置有一个分析单元,通过该分析单元来确定变量荧光Fv,并且可作为由此确定的变量荧光Fv的函数计算测试体积中参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的数量。
作为另一选择,或除了通过形成最大荧光Fm与最小荧光Fo的差值来计算变量荧光Fv之外,还可利用本发明的方法和本发明的装置来确定测量空间中荧光感应曲线的动态特性,尤其是通过部分地或完全地确定荧光感应曲线随时间的特性,以及通过使用数学模型进行内插来获得缺少的信息。
荧光的强度与测量空间中和/或水中的/来自水的测试量中参考物种的细胞数量成正比,即,该关系遵循一条直线,其中比例线的斜率进而是个别细胞尺寸的度量。
“测试空间”可以是填满待测水(即,水样品)的测试体积,但也可以是过滤一定量待测水的隔膜过滤器,并且由此在细胞层位于隔膜过滤器表面上并且没有水的情况下测量最小荧光Fo和最大荧光Fm。
惊奇地发现,可基于计算变量荧光Fv以及基于测量由于光输入
(即,测量空间中细胞的短时曝光)而引起的活细胞放热来确定活细胞的数量。
因此,变量荧光Fv和所放出的热同样都是测量体积中活细胞数量的度量,即,这两个变量彼此等效,尤其是因为活细胞在短暂曝光之后会放出热和荧光,所以可将测量空间中参考物种的活细胞数量计算为变量荧光的函数以及(作为另一选择或另外地)计算为放热的函数。
因此,有利的情形是,实施线性校准来确定变量荧光Fv与测量空间中参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物数量之间的关系,尤其是细胞尺寸的最小长度大于0.8μm的参考物种。尤其是,在为确定荧光Fo、Fm进行测量之前,实施一次或多次线性校准是有利的。
该参考物种以及细胞尺寸的最小长度大于0.8μm的细胞可通过已知的显微镜方法来确定和/或确认,即,参考物种是预先选定的。
基于该线性校准,现可根据由此确定的变量荧光Fv值来计算细胞计数。
优选地,尤其通过体积比较来计算细胞尺寸不同于参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的等效数量。浮游生物细胞的细胞含量通常与这些细胞的体积成比例。基于这种关联性,可在细胞尺寸不同于参考物种的细胞尺寸时计算活浮游生物细胞和/或微生物的等效数量。
优选地对散射光进行确定,尤其是在确定最小荧光Fo和/或最大荧光Fm之前确定散射光。可在实施该测量之前直接确定散射光,尤其是在确定最小荧光Fo和/或总荧光Fm之前50μs至100μs,尤其是80μs确定散射光。该测量探测可能存在的任何散射光或并非由活细胞发出的任何其他形式的光。
该最小荧光Fo优选地是通过形成测试体积内最小荧光的数个单独测量的平均值来确定的。优选地,以间隔为20ms至100ms来实施数个单独测量。
作为另一选择或另外地,可通过根据最大荧光Fm的数个单独测量形成平均值来确定最大荧光Fm;尤其是,以间隔为20ms至100ms来实施数个单独测量。
通过形成最小荧光Fo和/或最大荧光Fm的平均值,可提高测量的精度。由于数个单独测量可以按照非常短的时间次序来实施,所以这不会在该方法的应用中导致任何相关时滞,尤其该方法是作为用于监测水质的装置的在线监测的一部分。
有利的情形是使用最小荧光Fo的平均值和/或最大荧光Fm的平均值来计算变量荧光Fv。可以以此方式来提高品质和精度。
优选地,通过使用至少一个脉动光源PL和/或至少连续的光源KL的荧光计来实施最小荧光Fo和最大荧光Fm的确定,尤其是使用LED作为光源PL和KL。
优选地是使用脉动光来确定最小荧光Fo,尤其是该脉动光是波长为420nm的光。
可优选地通过使用波长长于700nm的光源(尤其是使用LED作为光源)来加速达到确定最小荧光Fo的状态。
优选地是通过使用至少一个脉动光源PL来确定最小荧光Fo,尤其是脉动光源PL的光脉冲具有20ms至100ms的间隔。
优选地是通过使用连续光来确定最大荧光Fm,尤其是具有波长为660nm的连续光。
有利的情形是使用至少一个脉动光源PL以及至少一个连续光源KL来确定荧光,尤其是脉动光源PL的光脉冲具有20ms至100ms的间隔。
作为连续监测的一部分,该方法(即,该方法的各个步骤)可按预定次数进行重复。这使得可对待测水实施连续监测并确保待测水的品质,并且使得该方法可实施为在线监测的一部分。尤其是通过监测预定限值可自动地触发警报。
有利的情形是,在连续监测过程中,从水源和/或水流中反复取出测试体积或测试量,该过程的步骤各自应用于每个测试体积一次或多次,并且将活浮游生物细胞和/或微生物的各次计算数量传输至监测和/或控制单元。尤其是可将由此确认的数据(即,测量空间中活浮游生物细胞和/或微生物的计算数量)发送至控制/监测装置,利用该控制/监测装置对水中的细胞的清除和/或水的消毒进行控制和/或监测。
因此,可作为活浮游生物细胞和/或微生物的计算数量的函数和/或作为活浮游生物细胞和/或微生物的计算等效数量的函数,来控制用于清除和/或消毒水中的/来自水的活浮游生物细胞和/或微生物的处理方法。
优选地,以易失性或永久性方式来存储至少活浮游生物细胞和/或微生物的计算数量,尤其是出于资料记录的目的。
有利的情形是,监测水中的活浮游生物细胞和/或微生物的计算数量是否超过预定限值,尤其是当超过限值时触发警报。
本发明的用于探测水中的/来自水的活浮游生物和/或微生物的装置具有尤其是由试管形成的测量空间,特别是由玻璃或塑料制成的试管。
该测试空间优选地具有入口和/或出口。尤其是,测试空间可嵌入在待测水的连续或循环输送流中,即,经由入口和出口整合在输送路线中。
该装置优选地具有至少一个脉动光源和/或至少一个连续光源,尤其是,LED被用作光源。
优选地布置多个光源,尤其是至少一个脉动光的光源,特别是波长约为420nm的蓝光,且尤其是至少一个连续光的光源,特别是波长约为660nm的红光,以及尤其是波长大于700nm的光源。
用于从水清除细胞和/或对水进行消毒的设备优选地连接在该装置的上游和/或下游。
优选地,至少一个可控阀设置在测试空间的入口和/或出口上。这使得该装置可与连续的输送过程相关联,使得在通过荧光计进行测量的时期,可通过该可控阀中断待测水的输送。
用于输送水的输送泵装置是有利的。
优选地设置有控制单元,通过该控制单元可控制分析单元、和/或一个或多个阀、和/或输送泵,和/或清除和/或消毒设备。
有利的情形是设置有存储单元,通过该存储单元可以按易失性或永久性方式存储至少所确定的变量荧光Fv和/或活浮游生物细胞和/或微生物的计算数量。
这允许对资料记录进行检验。
附图说明
现将基于附图更加详细地解释本发明,其中:
图1显示荧光感应曲线的实例;
图2显示用于探测水中的活浮游生物细胞和/或微生物的装置的示例性实施例的图示;
图3显示变量荧光Fv与测量体积中每毫升的活细胞数量之间的关系。
具体实施方式
图1显示随时间绘制的测量荧光感应曲线1。最小荧光Fo的级别是在引入如下状态时达到的:根据暗状态或通过使用波长大于700nm的光的光源,实际上所有原初电子受体仍被氧化。通过在时间点T1处激活间断或连续光源,来激活光化学反应,从而导致原初电子受体被还原。当至少几乎所有原初电子受体都被还原时,荧光级别到达最大荧光Fm。在时间点T1处打开光源之后时间上的荧光感应曲线1表明:从最小荧光Fo到最大荧光Fm的荧光增大不是突然发生的,而是在动态过程中连续地增大,这应该归因于活浮游生物细胞的特性。
此外,图1中也显示了在时间点T2处关闭光源之后的荧光感应曲线1的下降。
变量荧光Fv与测量空间11内的活细胞数量成比例,变量荧光Fv对应于最大荧光Fm减去最小荧光Fo的差值。基于变量荧光Fv与得到的作为校准过程一部分的某种预定参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物数量之间的关系,因此可作为变量荧光Fv的函数计算参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物数量。
作为基于变量荧光Fv(最大荧光Fm与最小荧光Fo之差)来计算活浮游生物细胞数量的替代方案,可在数学模型的帮助下根据荧光感应曲线1的动态特性来确定活浮游生物细胞和/或微生物的数量。
图2显示用于探测水中的/来自水的活浮游生物细胞和/或微生物的装置的示例性实施例的图示。
该装置具有荧光计10以及分析、监测和控制单元20。
荧光计10的测试空间11由带有两个平行玻璃表面12和13的试管形成。
荧光计10具有呈三类LED形式的光源14,一类发出波长大于700nm的光的光源、一类脉动光源和一类连续光源。另外,荧光计10具有探测器15。光源14由控制单元20来控制(即,打开和关闭)。通过探测器15,可探测存在于试管中的待测的一定量的水的荧光的荧光感应曲线,即,尤其是当光源14关闭时探测最小荧光Fo,且当光源14打开时探测最大荧光Fm并且将该信息传输至控制单元20以进一步分析。
荧光计10与连续的或间断的输送过程相关联,并且具有入口16和出口17。
借助于控制单元20,通过如下方式分析在数据线18上从荧光计10传输的荧光测量值:通过形成最大荧光Fm与最小荧光Fo之间的差值,来计算变量荧光Fv;然后,通过前述测量和存储的校准线,根据该计算的变量荧光,来计算试管中的水内参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物数量。
另外,控制单元20监测这些结果何时超过预定、存储的限值,使得当超过限值时在数据线21上发送警报。
控制单元20经由数据线22连接至存储单元,通过该存储单元可存储即将计算出的活浮游生物细胞和/或微生物的数量。
该装置与连续输送流相关联,并且因此允许对待测水进行连续的在线监测。
该监测设备连接在清除和/或消毒单元(此处未显示)的上游和/或下游,并且其从控制单元20接收控制命令。
图3显示变量荧光Fv与测量体积中每毫升的活细胞数量之间的关系。
国际海事组织(International Maritime Organization)给出了微生物某些尺寸等级的限值作为船上压舱水处理系统的排放标准。浮游生物决定了≥10μm至<50μm的尺寸范围。关于该标准,规定了每毫升最小长度活浮游生物<10的排放限制。
迄今为止,唯一可行的监测方式是在岸上进行枯燥的显微镜计数。然而,由于压舱水直接排放到环境中,所以实时在线的监测是有必要的。
在根据图3的实例中,将尺寸为10μm的海生绿藻-亚心形扁藻(Tetraselmis suecica)用作该方法的参考微生物。
图3显示Fv信号,该Fv信号是作为显微镜数出的压舱水处理系统流入物和流出物中活的扁藻细胞计数的函数,该压舱水处理系统由机械预先分离以及随后的消毒处理组成。
如图3显示,通常所使用的定性效率(对应于Fv/Fm=(Fm-Fo)/Fm)与活细胞计数没有任何关联。
然而,由本发明的方法确定并且进一步使用的Fv信号与活细胞计数甚至在非常大的细胞计数范围内都有着明确的线性相关性(R2=0.98)。
该关于活生物量的信号与活细胞计数的转换是基于体积关系。
还可基于三次方根计算细胞尺寸不同于参考物种的等效细胞计数。该比例线的斜率是个别细胞尺寸的度量。该关系显示在如下表格中:
三次平方根相关性的优点是,尺寸小于10μm的活浮游生物细胞即便在数量较大时也几乎根本不会对信号产生任何的影响,而尺寸大于10μm的活浮游生物细胞即便在每毫升小于10的较低细胞计数时也会导致显著信号。因此,确保能可靠地监测该限值。
Claims (43)
1.一种用于探测水中和/或来自水的活浮游生物细胞和/或微生物的方法,该方法的特征在于如下步骤:
·通过形成测量空间(11)中的最大荧光(Fm)与最小荧光(Fo)之间的差值来计算变量荧光(Fv),其中,当至少几乎所有原初电子受体都被还原时,荧光级别到达最大荧光(Fm),而最小荧光(Fo)的级别是在引入其中根据暗状态或通过使用波长大于700nm的光的光源,实际上所有原初电子受体仍被氧化的状态时达到的;以及
·作为所述变量荧光(Fv)的函数基于线性校准来计算所述测量空间(11)中参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的数量。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述水是压舱水、水域、废水或游泳池或洗浴设施中的水。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,实施线性校准来确定所述变量荧光(Fv)与所述测量空间(11)中参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的数量之间的关系。
4.根据权利要求3所述的方法,其中,所述参考物种是细胞尺寸的最小长度大于0.8μm的参考物种。
5.根据权利要求3所述的方法,其中,所述线性校准在确定所述最小荧光和所述最大荧光(Fo,Fm)之前被实施一次或多次。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,计算细胞尺寸不同于所述参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的等效数量。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,通过体积对比来计算细胞尺寸不同于所述参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的等效数量。
8.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,确定散射光。
9.根据权利要求8所述的方法,其中,得到所述散射光是在确定所述最小荧光(Fo)和/或所述最大荧光(Fm)之前50μs至100μs。
10.根据权利要求8或9所述的方法,其中,得到所述散射光是在确定所述最小荧光(Fo)和/或所述最大荧光(Fm)之前80μs。
11.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,通过根据所述最小荧光(Fo)的多次单独测量形成平均值来确定所述最小荧光(Fo)。
12.根据权利要求11所述的方法,其中,以间隔为20ms至100ms来实施数次单独测量。
13.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,通过形成所述最大荧光(Fm)的数次单独测量的平均值来确定所述最大荧光(Fm)。
14.根据权利要求13所述的方法,其中,以间隔为20ms至100ms来实施数次单独测量。
15.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,使用所述最小荧光(Fo)的平均值和/或所述最大荧光(Fm)的平均值来计算所述变量荧光(Fv)。
16.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,通过荧光计来确定荧光值(Fo,Fm),所述荧光计使用至少一个脉动光源(PL)和/或至少一个连续光源(KL)。
17.根据权利要求16所述的方法,其中,所述脉动光源和连续光源(PL,KL)是LED。
18.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,通过使用脉动光来确定所述荧光。
19.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,通过使用至少一个脉动光源(PL)和/或至少一个波长长于700nm的光源来确定所述最小荧光(Fo)。
20.根据权利要求19所述的方法,其中,所述脉动光源(PL)的光脉冲具有20ms至100ms的间隔。
21.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,通过使用连续光来确定所述最大荧光(Fm)。
22.根据权利要求21所述的方法,其中,所述连续光是波长为660nm的光。
23.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,通过使用至少一个脉动光源(PL)以及至少一个连续光源(KL)来确定所述最大荧光(Fm)。
24.根据权利要求23所述的方法,其中,所述脉动光源(PL)的光脉冲具有20ms至200ms的间隔。
25.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,以预定次数重复所述方法的步骤。
26.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在连续监测过程中,从水源和/或水流反复地取出测试体积,并且将所述方法的步骤各自应用于每个测试体积一次或数次,并且确定监测和/或控制单元的活浮游生物细胞和/或微生物的计算数量。
27.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,作为活浮游生物细胞和/或微生物的计算数量的函数和/或作为活浮游生物细胞和/或微生物的计算等效数量的函数,来控制用于清除和/或消毒水中的所述活浮游生物细胞和/或微生物的处理方法。
28.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,以易失性或永久性方式存储水中的活浮游生物细胞和/或微生物的计算数量,和/或以易失性或永久性方式存储由此确定的所述荧光值(Fo,Fm,Fv)。
29.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,监测水中的活浮游生物细胞和/或微生物的所述计算数量是否超过预定限值。
30.根据权利要求29所述的方法,其中,在超过所述预定限值时发出警报。
31.一种用于探测水中和/或来自水的活浮游生物细胞和/或微生物的装置,其具有至少一个用于确定测试空间(11)内的最小荧光(Fo)和最大荧光(Fm)的荧光计(10),其中所述荧光计(10)具有至少一个光源(14)和至少一个探测器(15),所述装置的特征在于设置有分析器单元,通过所述分析器单元来确定变量荧光(Fv),并且能作为由此确定的所述变量荧光(Fv)的函数基于线性校准计算所述测试空间(11)中参考物种的活浮游生物细胞和/或微生物的数量,其中,设置有控制单元(20),通过所述控制单元(20)能控制清除和/或消毒设备,其中,通过形成测量空间(11)中的最大荧光(Fm)与最小荧光(Fo)之间的差值来确定变量荧光(Fv),其中,当至少几乎所有原初电子受体都被还原时,荧光级别到达最大荧光(Fm),而最小荧光(Fo)的级别是在引入其中根据暗状态或通过使用波长大于700nm的光的光源,实际上所有原初电子受体仍被氧化的状态时达到的。
32.根据权利要求31所述的装置,其特征在于,所述测试空间(11)由试管形成。
33.根据权利要求32所述的装置,其中,所述试管是由玻璃或塑料制成。
34.根据权利要求31所述的装置,其特征在于,所述测试空间(11)具有入口(16)和/或出口(17)。
35.根据权利要求31或32所述的装置,其特征在于,其具有至少一个脉动光源和/或至少一个连续光源。
36.根据权利要求35所述的装置,其中,使用LED作为所述脉动光源和连续光源。
37.根据权利要求31所述的装置,其特征在于设置有数个光源。
38.根据权利要求37所述的装置,其中,所述数个光源中,至少一个光源是脉动光,和/或至少一个光源是连续光,和/或是波长大于700nm的光源。
39.根据权利要求31所述的装置,其特征在于,在所述装置的上游或下游设置有清除和/或消毒设备。
40.根据权利要求34所述的装置,其特征在于,在所述测试空间(11)的入口(16)和/或出口(17)上设置有至少一个可控阀。
41.根据权利要求31所述的装置,其特征在于,设置有用于输送水的输送泵。
42.根据权利要求31所述的装置,其特征在于,设置有控制单元(20),通过所述控制单元(20)能控制所述分析器单元、和/或一个或多个阀、和/或输送泵。
43.根据权利要求31所述的装置,其特征在于存储单元,通过所述存储单元能按易失性或永久性方式存储所测量的荧光值(Fo,Fm),和/或由此确定的所述变量荧光(Fv),和/或活浮游生物细胞和/或微生物的计算数量。
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