KR101037960B1 - 파래의 포자 방출을 이용하여 독성을 진단하기 위한 키트 및 방법 - Google Patents

파래의 포자 방출을 이용하여 독성을 진단하기 위한 키트 및 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 파래의 포자 방출을 이용하여 독성을 진단하기 위한 키트 및 방법에 관한 것이다. 본 발명은 파래의 포자 방출을 이용하여 독성을 진단하기 위한 키트로서, 동전 모양으로 준비된 파래를 담은 캡슐형 바이오웨어, 샘플의 부피를 측정하는 소형 실린더, 파래 생육 조건을 조절하기 위한 인공 염(salt), 파래의 색상 변화 면적 측정을 위한 눈금형 필름 또는 돋보기, 및 표준 독성 용액을 포함하는 키트(kit)를 제공한다. 또한, 본 발명은 파래를 이용하여 독성을 진단하는 방법으로서, 파래의 포자 방출이 진행될 때 나타나는 색상(백색)에 기초하여 독성을 진단하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.

Description

파래의 포자 방출을 이용하여 독성을 진단하기 위한 키트 및 방법{A KIT AND A METHOD FOR EVALUATING TOXICITY USING SPORE RELEASE BY THE GREEN ALGA ULVA}
본 발명은 파래의 포자 방출을 이용하여 독성을 진단하기 위한 키트 및 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 파래의 포자 방출을 이용하여 독성을 진단하기 위한 키트로서, 동전 모양으로 준비된 파래를 담은 캡슐형 바이오웨어, 샘플의 부피를 측정하는 소형 실린더, 파래 생육 조건을 조절하기 위한 인공 염(salt), 파래의 색상 변화 면적 측정을 위한 눈금형 필름 또는 돋보기, 및 표준 독성 용액을 포함하는 키트(kit)에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 파래를 이용하여 독성을 진단하는 방법으로서, 파래의 포자 방출이 진행될 때 나타나는 색상(백색)에 기초하여 독성을 진단하는 것을 특징으로 하는 방법에 관한 것이다.
산업의 고도화에 따라 다양한 수체에 포함된 독성 물질 및 유해 물질도 증가하여 예전에는 없던 피해가 발생하고 있다. 즉, 토양 오염, 수질 오염 등과 같은 환경 오염으로 인하여 생태계가 점차로 파괴되어 인간의 생활 환경에도 많은 영향을 끼치고 있다. 이에 따라 전세계에서 범국가적인 차원에서 환경과 관련된 규제를 한층 강화하여 수질 오염 등과 같은 환경 오염을 줄이고자 노력하고 있다. 그러나, 관련 법규가 산업화로 인한 공장 등의 증가 속도를 따라가지 못하는 실정이다. 따 라서, 관련 법규에 따라 수질 오염 등과 같은 환경 오염을 간단히 검사하는 방법이 지속적으로 연구되고 있으나, 만족할만한 결과는 나오지 못했다.
생태 독성 평가 방법 가운데 생물검정법(bioassay)이 가장 보편적으로 이용되고 있는데, 이 방법은 생물을 유해 물질에 노출시켜 사망, 성장, 부화, 수정 등의 생물학적 반응 요소를 측정하여 그 독성을 평가하는 방법이다. 예컨대, 유해 물질을 수용액 상태로 하여 생물에 노출시킬 때 생물이 사망하거나 성장이 대조구(유해 물질을 첨가하지 않은 실험구)와 비교하여 큰 차이를 보일 경우 그 물질이 유해하다고 판정하는 것이다.
이와 같은 방법은 기존의 화학적 분석에 의한 개별 물질의 농도 측정에 의한 독성 평가(고가의 분석 장비와 고도로 숙련된 분석 요원이 필요하며, 분석 시간이 길며, 유입 독성 물질의 성분을 알 수 없는 경우에는 분석하기 어렵고, 샘플을 장거리로 이동시킬 경우에는 샘플 내 반응으로 성분 및 농도 변화가 유발될 우려가 있다는 문제점이 있음)보다는 좀 더 합리적이고 기능적인 측면을 고려했다는 점에서 보다 현실적인 독성 평가 방법이다. 이 방법에 따라 반수 치사 농도(LC50), 반수 유효 농도(EC50) 등을 산정하고, 이 수치의 비교에 따라 환경의 상대적 품질 및 물질의 독성을 비교·평가하는 것이다.
생물검정법에 이용되는 생물은 종(種)의 유용성, 독성 물질에 대한 민감도 및 반응의 일관성, 환경 요인에 대한 내성 및 생태적 중요성 등을 고려하여 선정된다.
어류, 무척추 동물 또는 원생 동물을 이용하는 방법은 측정자의 전문성과 고가의 기기가 요구되며, 독성 물질에 따라 민감도에 차이가 많으며, 특히 실험 생물을 배양하는 기반 기술을 갖추지 않은 경우에는 생물의 사멸에 따른 대처 방안이 묘연하다는 문제점이 있다.
현재 미국, 유럽 등에서 주로 이용되는 생물은 윤충류, 지각류, 어류, 저서성 단각류 및 발광 미생물 등이다. 그러나, 이 방법 또한 검정에 이용된 일부 특정 생물에 대한 환경 평가로서 단편적 평가가 될 수 있으며, 지구상의 모든 생물이 생태 독성 평가에 이용될 수 있다.
생물을 이용하여 수질 독성을 진단하는 방법은 이화학적 기기를 사용한 방법에 의한 결과 내용에 내포된 여러 가지 단점을 보완하기 위해 개발되는 것임에도 불구하고, 국제적으로 ISO, OECD에 지금까지 등록된 생태 독성 평가 기법들은 절차의 복잡성, 샘플 확보의 불안정성, 낮은 민감성, 사용 생물 분포 지역의 제약성, 고비용성, 시험 생물의 지속적인 배양과 공급 및 유지 관리의 어려움 등으로 인하여 보다 개선된 기법의 출현이 절대적으로 요구되고 있는 상황이다.
미국의 Azu Enviromental사, 독일의 LemnaTech사, 벨기에의 MicroBiotest사 등에서 시판하고 있는 종래의 수질 독성 진단 키트들은 고가일 뿐만 아니라, 전문적인 지식 없이는 작동하기 어렵고 사용 절차가 까다롭다는 단점이 있다.
한편, 파래(특히, 구멍갈파래)는 서식 환경이 다양하고, 샘플 확보 및 배양이 용이하다는 것에 착안하여, 본 발명자들은 파래를 이용하여 수질 독성을 평가하는 방법을 세계 최초로 창출해 낸 바 있다(한국 등록특허 제653,100호 참조). 파래 와 같은 해조류는 엽체에서 생식 세포가 형성된 후 수중으로 방출되어 일정 기간 동안 플랑크톤으로 생활하다가 적당한 기질에 부착하여 다시 엽체로 성장하는데, 이 과정에서 해수의 독성 정도가 생식 세포의 형성과 방출되는 비율(생식율)에 반비례한다는 원리를 이용하여, 해수(海水)에 유입되는 유해 물질의 독성을 간편하고 경제적으로 평가할 수 있는 길을 열어 놓았다. 이 방법은 미국이나 유럽에서 상용화되고 있는 발광 박테리아, 윤충류 등을 이용한 독성 평가 방법에 비하여 약 2배 이상의 민감도를 나타내어 소량의 독성 물질만 있어도 민감하게 반응하도록 한다.
그러나, 생식 진행 과정에서 파래의 엽체는 1차적으로 진한 갈색(dark-olive)으로 변 E다가 최종적으로는 백색으로 변하는데 전문가가 아닌 경우에는 1차 색상 변화를 구분하는데 어려움이 있을 뿐만 아니라, 생식이 진행되어도 생식 세포가 방출되지 않는 경우가 있을 수 있다는 문제가 있다. 더욱이, 파래의 생식이 진행될 때 나타나는 갈색과 백색을 육안과 이미지 분석으로 진단하는 것이므로 관찰자의 주관이 가미되어 정확한 판정에 다소 어려움이 있다. 즉, 같은 관찰 결과임에도 관찰자에 따라 서로 다른 독성도 판정을 할 우려가 있다.
이에 본 발명자들은 예의 연구한 끝에 파래의 포자 방출이 진행될 때 나타나는 색상(백색)에 중점을 두어 독성을 진단하기 위한 키트 및 방법에 관한 기술을 개발하게 되었다.
기술적 과제
본 발명은 측정 종말점(endpoin)이 명확하여 전문가는 물론 일반인도 용이하게 이용할 수 있고, 24-웰 평판 배양기에 약 2.5ml의 평가 용액을 사용함으로써 실험군 반복수를 증대시켜 실험의 객관성을 높임과 동시에 각 실험군 당 투입되는 평가 용액의 양도 대폭 줄이는 효과를 얻을 수 있으며, 파래의 엽체를 16등분하여 측정값의 정확도를 높일 수 있고, 파래의 생식률을 이용하는 방법에 비하여 독성 진단(평가) 기간을 약 24시간 이상 단축시킬 수 있는 것을 특징으로 하는, 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한, 본 발명은 간단하고 절차가 복잡하지 않으며 민감도와 분별성 및 정밀성이 우수하여 전문가는 물론 일반인도 용이하게 이용할 수 있는 것을 특징으로 하는, 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단용 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.
기술적 해결방법
본 발명은 파래의 포자 방출을 이용하여 수질 독성을 진단하기 위한 키트로서, 동전 모양으로 준비된 파래를 담은 캡슐형 바이오웨어; 수체 샘플의 부피를 측정하는 소형 실린더; 파래 생육 조건을 조절하기 위한 인공 염(salt); 파래의 색상 변화 면적 측정을 위한 눈금형 필름 또는 돋보기; 및 표준 독성 용액을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트(kit)를 제공한다.
상기 키트에는 플라스틱 핀셋, 독성 진단 수행용 장갑, 잎(엽체)의 색상 변화 참고도, 키트 사용법에 관한 CD, 전문가용 통계 분석에 관한 CD 등도 포함되어 있다.
파래는 오염되지 않은 환경에서는 생식이 신속하게 진행되어 잎이라 불리는 엽체의 색상 변화가 나타나는데, 처음에 연한 녹색을 띤 엽체가 생식이 시작되면서 진한 갈색(dark olive)으로 변화고 최종적으로 백색으로 바뀐다. 그러나, 오염되거나 또는 독성원이 함유된 수질에서는 생식력이 떨어져 그 색상 변화의 정도가 떨어진다. 이러한 원리에 근거하여 동전 모양으로 준비된 파래 잎을 독성원에 노출시킨 후에 잎(엽체)를 직접 육안 관찰하거나 또는 카메라로 이미지를 캡처하고, 여기에 눈금 돋보기를 이용하여 백색으로 색상 변화를 나타낸 엽체의 면적을 측정하여, 독성원이 포함되지 않은 대조군에서 나타난 백색 엽체의 면적과 비교하여 독성원의 독성 정도를 표시한다.
본 발명에 따른 파래의 포자 방출을 이용하여 수질 독성을 진단하기 위한 키트의 테스트 원리는 다음과 같다: 24-웰 평판 배양기의 준비 → 표준 독성 용액(바람직하게는, 구리 용액)을 반수희석법(100％, 50％, 25％, 12.5％, 6.25％)으로 넣기 → 16등분된 동전 모양의 파래 잎 넣기 → 24-웰 평판 배양기에서 96시간 동안 배양하기 → 잎이 백색으로 변한 면적 계산하기 → 프로그램을 이용한 데이터 산출 및 분석.
독성원과 염(salt)이 함께 내포된 수체가 담긴 24-웰 평판 배양기 내에 파래 잎을 넣고, 30-200 μmol 광자/m2·s의 광자 조사량(photon irradiance), 7-9의 pH, 25-35‰의 염도(salinity) 및 15∼20℃의 온도 조건하에서 96시간 동안 24-웰 평판기에서 배양한 후, 육안 관찰하면서 눈금형의 측정 필름 또는 돋보기를 사용해서 잎의 전체 면적을 기준으로 백색으로 색상이 변한 면적을 측정하거나, 또는 카메라 등으로 이미지를 캡처한 후 저장해 두었다가 나중에 돋보기를 사용하여 잎의 전체 면적을 기준으로 백색으로 색상이 변한 면적을 측정할 수 있다.
독성 진단을 위한 계산은 다음과 같다:
[1-(A-B/A)]×100(％)
A: 대조군(독성원이 없는 상태)에서의 백색으로 변한 잎의 면적
B: 실험군(독성원이 내포된 상태)에서의 백색으로 변한 잎의 면적.
또한, 본 발명은 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단 방법으로서, (a) 표준 독성 용액이 내포된 수체가 담긴 24-웰 평판 배양기 내에 16등분된 동전 모양의 파래 잎을 넣는 단계; (b) 30-200 μmol 광자/m2·s의 광자 조사량(photon irradiance), 7-9의 pH, 25-35‰의 염도(salinity) 및 15∼20℃의 온도 조건하에서 96시간 동안 24-웰 평판기에서 배양하는 단계; (c) 포자 방출이 진행될 때 눈금형의 측정 필름 또는 돋보기를 사용해서 잎의 전체 면적을 기준으로 백색으로 색상이 변한 면적을 측정하는 단계; 및 (d) 프로그램을 이용한 데이터 산출 및 분석에 의해 독성을 판정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법을 제공한다.
본 발명의 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단 방법에 적용될 수 있는 대상 수체는 해수, 하천, 호수, 폐수, 방류수, 오수, 슬러지 용출수, 토양 용출수, 퇴적토 용출수 등이다.
본 발명의 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단 방법을 통해 진단 가능한 유해 독성(오염) 물질로는 구리(Cu), 카드뮴(Cd), 납(Pb), 아연(Zn) 등을 비롯한 중금속류, 휘발성 유기 화합물(VOC)류, 다환 방향족 탄화수소(PAH)류, 폴리클로로비페닐(PCB)류, TBTO[비스(트리-n-부틸주석) 옥사이드] 등을 들 수 있다.
표준 독성 용액은 반수희석법(100％, 50％, 25％, 12.5％, 6.25％)으로 넣으며, 표준 독성 용액은 예컨대 구리 용액(CAS No. 7440-50-8, Cu standard solution)인 것이 바람직하다.
동전 모양의 파래 잎(엽체)은 30-200 μmol 광자/m2·s의 광자 조사량(photon irradiance), 7-9의 pH, 25-35‰의 염도(salinity) 및 15∼20℃의 온도 조건하에서 96시간 동안 24-웰 평판기에서 배양되는 것이 바람직하다.
기존에 본 발명자들이 개발한 파래를 이용한 수질 독성 평가 방법은 파래의 생식이 진행될 때 나타나는 색상(갈색과 백색)을 육안과 이미지 분석으로 측정하는 방법이었으나, 본 발명의 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단 방법은 파래의 포자 방출이 진행될 때 나타나는 색상(백색)에 중점을 두어 독성을 진단하는 방법이다. 생식 진행 과정에서 파래의 엽체는 1차적으로 진한 갈색(dark-olive)으로 변 E다가 최종적으로는 백색으로 변하는데, 기존의 방법에 따르면 전문가가 아닌 경우에는 1차 색상 변화를 구분하는데 어려움이 있을 뿐만 아니라, 생식이 진행되어도 생식 세포가 방출되지 않는 경우가 있을 수 있었는데, 본 발명의 방법에 따르면 전문가는 물론 일반인도 용이하게 측정 종말점(endpoint)을 명확히 식별할 수 있다.
또한, 기존에 본 발명자들이 개발한 파래를 이용한 수질 독성 평가 방법에서는 6-웰 평판 배양기를 사용하였고, 약 10 ml의 평가 용액이 필요하였으나, 본 발명의 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단 방법에서는 24-웰 평판 배양기와 약 2.5 ml의 평가 용액을 사용함으로써 실험군 반복수를 증대시켜 객관성을 향상시킬 수 있고, 각 실험군 당 투입되는 평가 용액의 양을 대폭 절감할 수 있다.
또한, 기존에 본 발명자들이 개발한 파래를 이용한 수질 독성 평가 방법에서는 동전 모양의 엽체를 4등분하여 생식률을 판정하였으나, 본 발명의 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단 방법에서는 엽체를 16등분한 후 포자 방출을 측정함으로써 측정치의 정확도를 높일 수 있다.
또한, 기존에 본 발명자들이 개발한 파래를 이용한 수질 독성 평가 방법에서는 실험 기간이 5일이었으나, 본 발명의 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단 방법에서는 실험 기간이 4일이므로 독성 평가 시간을 24시간 정도 단축시킬 수 있다.
유리한 효과
본 발명에 따르면, 전문가는 물론 일반인도 용이하게 저비용으로 간편하게 수질 독성을 진단 및 평가할 수 있을 뿐만 아니라, 독성 진단의 신속성 및 정확성을 확보할 수 있다.
도 1은 본 발명의 파래의 포자 방출을 이용하여 수질 독성을 진단하는 방법의 절차 흐름도이다.
도 2는 본 발명의 파래의 포자 방출을 이용하여 수질 독성을 진단하기 위한 키트의 테스트 원리를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명의 파래의 포자 방출을 이용하여 수질 독성을 진단하기 위한 키트의 구성을 보여주는 사진이다.
도 4는 본 발명의 파래의 포자 방출을 이용하여 수질 독성을 진단하기 위한 키트를 통해 얻은 결과치로 독성 유무를 판정하기 위해 사용되는 눈금형 필름 또는 돋보기의 면적 계산표를 나타낸 것이다.
발명의 실시를 위한 최선의 형태
표준 독성 용액(구리 용액)이 내포된 수체 샘플이 담긴 24-웰 평판 배양기 내에 16등분된 동전 모양의 파래 잎을 넣었다. 이 경우, 표준 독성 용액(구리 용액)은 반수희석법(100％, 50％, 25％, 12.5％, 6.25％)으로 넣었다. 이어서, 100 μmol 광자/m2·s의 광자 조사량(photon irradiance), 8.0의 pH, 35‰의 염도(salinity) 및 15℃의 온도 조건하에서 96시간 동안 24-웰 평판기에서 파래 잎을 배양하였다. 이어서, 포자 방출이 진행될 때 눈금형의 측정 필름을 사용해서 잎의 전체 면적을 기준으로 백색으로 색상이 변한 면적을 측정하였다. 이어서, 프로그램을 이용한 데이터 산출 및 분석에 의해 독성을 판정하였다.
도 4에 나타나 있는 바와 같이, T1 내지 T5는 시험 대상 샘플을 나타내며, R1 내지 R5는 시험 반복 회수를 나타낸다. 도 4에 나타나 있는 바와 같이, 백분율은 동전 모양의 파래를 관찰하기 위해 전체를 16등분하고, 각각의 면적에 백분율을 표시하여 16개 면적의 비를 관찰하고 간단하게 독성 유무를 판단할 수 있었다. 예 를 들어, 관찰 면적 수 9와 백분율 56％는 총 16개의 관찰 면적 중 9개가 백색으로 변한 면적이며, 독성도가 56％라고 판정할 수 있었다.
발명의 실시를 위한 형태
본 발명자들은 대한민국 안인(Ahnin) 근해에서 구멍갈파래(Ulva pertusa Kjellman)를 수집하고, 구멍갈파래의 잎(엽체)을 지름 6mm의 동전 모양으로 절단한 후, 1 mM KNO3 및 0.1 mM K2HPO4가 첨가된 10 ml의 인공 해수(35‰) 배지(Coralife, Energy Savers, California, USA)를 함유하는 플라스틱 셀 플레이트(plastic cell plate)에 배치시켰다. 포자 생성을 위한 최적의 환경 조건(100 μmol 광자/m2s, 12:12h L:D 광주기, 15℃, 35‰) 하에서 구멍갈파래 잎을 배양하였다. 다른 조건들을 일정하게 유지시키면서 배지에 독성물질(toxicant)들을 첨가하였다. 포자 방출에 대하여 미치는 상기 환경 조건의 영향을 평가하기 위하여, 동전 모양의 구멍갈파래 잎을 다음과 같은 것들에 노출시켰다: 5-200 μmol 광자/m2·s의 광자 조사량(photon irradiance), 4-9의 pH, 5-55‰의 염도(salinity) 및 5∼25℃의 온도. 96시간 후, 동전 모양의 엽체를 수확하고, 400배 현미경(Axioscope)과 이미지 분석 시스템(MV200, Samsung, Korea)에 의해 포자 방출의 정도를 측정하였다.
사용된 독성물질들과 표적 농도는 하기 표 1에 나타나 있다.
표 1
Figure 112009064739574-pct00001
1N HCl 또는 1M HNO3으로 산성화된 탈이온수 중의 카드뮴, 구리, 납 및 아연의 모액을 사용하여 중금속류의 독성을 시험하였다. 해수(0.01％)와 혼합된 아세톤 중에서 TBTO의 모액을 제조하고; 동일한 농도의 아세톤을 대조군에 첨가하였다. 휘발성 유기 화합물(VOC)류[아세톤, 에탄올, 포르말린 및 메탄올)의 독성을 시험하고, 배지에 수성 휘발성 유기 화합물(VOC)류를 첨가함으로써 표적 농도를 만들었다.
선형보간법(linear interpolation method)에 의해 평가된 95％의 신뢰 구간을 갖는 무영향 농도(NOEC)(대조군과 유의적인 차이가 없는 최고 농도) 및 반수 유효 농도(EC50) 등을 계산하였다.
EC50에 의해 평가된 중금속류의 독성은 Cu ＞ Cd ＞ Zn ＞ Pb의 순이었다. 한편, 휘발성 유기 화합물(VOC)류의 독성은 포르말린 ＞ 메탄올 ＞ 에탄올 ＞ 아세 톤의 순이었다. 가장 독성이 강한 포르말린의 반수 유효 농도(EC50)는 0.788 ㎕/L이었다.
본 발명의 파래의 포자 방출을 이용하여 수질 독성을 진단하기 위한 키트 및 방법에 따르면, 기술적 측면, 환경적 측면 및 산업·경제적 측면에서 다음과 같은 기대 효과를 얻을 수 있다.
기술적 측면
- 공공 수역 생태 환경의 보전 및 유지를 위한 유해가능 물질의 탐색 및 수질 개선.
- 유해 물질의 독성 예측을 통한 미래 환경 변화에 대한 대응책 마련.
- 기존의 물리화학적 인자 중심의 단편적인 환경 기준의 개선.
- 개별적인 유해 물질의 이화학적 분석에 필요한 인력 및 비용의 절감.
- 샘플 및 기술의 수입(輪入)으로 인한 경제적 손실과 국내 기술에의 관심 및 투자의 약화로 인한 기술 후진화 폐단의 종식.
- 국제적 경쟁력을 갖춘 생물 독성 평가 기법의 실용화 실현.
- 사용자 중심의 맞춤형 생물학적 독성 평가 시스템 구현.
환경적 측면
- 생태계 보호와 인류의 건강과 복지에의 기여.
- 환경친화적인 독성 진단 기법에 의한 2차 오염 위험성 차단.
- 신개념의 환경 관리 시스템의 구현.
경제·산업적 측면
- 환경 관리를 통한 국민 건강 보호 및 생태계 보전에 의한 보권 위생 및 환경 보전을 위한 비용 절감.
- 기술의 국산화에 의한 외화 절감 및 국내 기술의 비약적 발전.
- 관련 기술분야의 활성화 및 산업군 도출 유도.
- 선진화된 환경 오염 관리를 통한 친환경 제품의 생산에 의한 수출경쟁력 확보.

Claims (9)

  1. 파래의 포자 방출을 이용하여 수질 독성을 진단하기 위한 키트(kit)로서,
    동전 모양으로 준비된 파래를 담은 캡슐형 바이오웨어;
    수체 샘플의 부피를 측정하는 소형 실린더;
    파래 생육 조건을 조절하기 위한 인공 염(salt);
    파래의 색상 변화 면적 측정을 위한 눈금형 필름 또는 돋보기; 및
    표준 독성 용액을 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 파래의 잎(엽체)은 16등분되어 있는 것을 특징으로 하는 키트.
  3. 제 1 항에 있어서,
    상기 파래 생육 조건은 30-200 μmol 광자/m2·s의 광자 조사량(photon irradiance), 7-9의 pH, 25-35‰의 염도(salinity) 및 15∼20℃의 온도인 것을 특징으로 하는 키트.
  4. 제 1 항에 있어서,
    표준 독성 용액은 구리 용액인 것을 특징으로 하는 키트.
  5. 파래의 포자 방출을 이용한 수질 독성 진단 방법으로서,
    (a) 표준 독성 용액이 내포된 수체가 담긴 24-웰 평판 배양기 내에 16등분된 동전 모양의 파래 잎을 넣는 단계;
    (b) 30-200 μmol 광자/m2·s의 광자 조사량(photon irradiance), 7-9의 pH, 25-35‰의 염도(salinity) 및 15∼20℃의 온도 조건하에서 96시간 동안 24-웰 평판기에서 배양하는 단계;
    (c) 포자 방출이 진행될 때 눈금형의 측정 필름 또는 돋보기를 사용해서 잎의 전체 면적을 기준으로 백색으로 색상이 변한 면적을 측정하는 단계; 및
    (d) 프로그램을 이용한 데이터 산출 및 분석에 의해 독성을 판정하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제 5 항에 있어서,
    상기 수체는 해수, 하천, 호수, 폐수, 방류수, 오수, 슬러지 용출수, 토양 용출수, 또는 퇴적토 용출수인 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제 5 항에 있어서,
    상기 방법에 의해 진단 가능한 유해 독성(오염) 물질은 구리(Cu), 카드뮴(Cd), 납(Pb), 및 아연(Zn)을 비롯한 중금속류; 휘발성 유기 화합물(VOC)류; 다환 방향족 탄화수소(PAH)류; 폴리클로로비페닐(PCB)류; 및 TBTO[비스(트리-n-부틸주석) 옥사이드]인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제 5 항에 있어서,
    상기 표준 독성 용액은 반수희석법(100％, 50％, 25％, 12.5％, 6.25％)으로 넣는 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제 8 항에 있어서,
    상기 표준 독성 용액은 구리 용액인 것을 특징으로 하는 방법.
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