CN101500991B

CN101500991B - 硫辛酸衍生物

Info

Publication number: CN101500991B
Application number: CN2007800290553A
Authority: CN
Inventors: 托马斯·爱丁伯格
Original assignee: Omnica GmbH
Current assignee: E P C (Beijing) Plant Pharmaceutical Tech Co Ltd
Priority date: 2006-07-06
Filing date: 2007-07-03
Publication date: 2013-11-20
Anticipated expiration: 2027-07-03
Also published as: CN101500991A; JP2014111573A; WO2008075204A3; WO2008075204A2; JP5439173B2; JP2010507564A; US8278358B2; US20080058406A1

Abstract

本发明涉及具有平衡离子和分子式(Ia)所示的低聚态α硫辛酸的低聚态α硫辛酸合成物，其中n为2到50，以及其在稳定类胡萝卜素及类胡萝卜素衍生物中的应用。

Description

硫辛酸衍生物

技术领域

本发明主要涉及硫辛酸的低聚物，也涉及硫辛酸(thioctic acid)的低聚态合成物，特别是硫辛酸低聚物的氨基酸盐。

背景技术

α-硫辛酸第一次被分离得到是作为一种醋酸盐的替代因子。它微溶于水，可溶于特定的有机溶剂。在其分离后，α-硫辛酸最初被认为是一种维生素，但后来其被发现可由包括人在内的哺乳动物合成，也可由植物合成。负责全程合成的完整的酶途径仍然没有被最终阐明。个别研究显示，辛酸酯是作为8-C脂肪酸链的最直接的前体，半胱氨酸似乎是硫的来源。作为一种氨基化合物(硫辛酰胺)，其在复合酶化合物中作为一种辅助因子发挥作用，该复合酶化合物催化α-酮酸的氧化脱羧过程，诸如丙酮酸盐、α-酮戊二酸和支链取代的α-酮酸。

α-硫辛酸是一种天然存在的抗氧化剂。α-硫辛酸(LA)也被称作thioctic acid、1，2-二巯基-3-戊酸、1，2-二巯基-3颉草酸和6，8-硫辛酸。α-硫辛酸具有一个手性碳原子并存在两个对应体(R-和S-)。商店中销售的α-硫辛酸的形态是一种天然异构体(R-)和非天然异构体(S-)的合成混合物。天然形态的R-LA不象合成混合物那样稳定。一制造商，Asta Medica，销售用于糖尿病的R-LA，并通过Tris缓冲液用结晶的方式制备稳定态的R-LA，Tris缓冲液是一种通用的合成而非天然的缓冲液。

α-LA不同的对映体形式，其组合物和衍生物(包括其还原形态)，已经被用于治疗多种疾病。例如，LA已被用于治疗循环紊乱。LA和维生素已被发现可用于产生止痛、消炎、抗坏死、抗糖尿病和其它治疗效果。LA特定的烷基化衍生物被用于治疗逆转录病毒疾病。

α-硫辛酸，及其还原形态，二氢硫辛酸(DHLA)具有抗氧化特性。Lipoate(用于羧酸酯和盐的一个术语)，或其还原形态，DHLA，与活性氧物质反应，诸如超氧化物自由基、羟基自由基、次氯酸、过氧化氢自由基和纯态氧。它也通过与维生素C和谷胱甘肽相互作用保护膜，其可以依次重复利用维生素E。除了抗氧化活性，DHLA可以对铁的还原过程施以氧化强化剂作用。α-硫辛酸的服用已经显示出对许多氧化压力模型是有益的，诸如缺血再灌注损伤(IRI)、糖尿病(α-硫辛酸和DHLA均表现出对蛋白质束缚的憎水性，如白蛋白，其能够预防糖基化反应)、白内障形成、HIV活化、神经退行性变和放射损伤。此外，lipoate能够发挥蛋白质氧化还原调节剂的作用，诸如肌球素、泌乳刺激素、硫氧还蛋白和NF-κ-B转录因子的氧化还原调节剂。

Lipoate也具有其它活性。例如，DHLA已被发现在体外是一种抗炎药剂，其同时干扰NO从发炎的巨噬细胞中的释放，并保护靶细胞不受氧自由基的攻击。

硫辛酸对于个别酶而言也是一种辅酶。硫辛酸对于α-酮酸脱氢复合酶(即，丙酮酸脱氢酶复合物和α-酮戊二酸盐脱氢酶复合物)、支链α-酮酸脱氢酶复合物和氨基乙酸裂系统，是一种辅酶，在该酶系统中，主体形成一种包括硫辛酸在内的多种酶复合物，其分解在初期新陈代谢中生成的丙酮酸盐分子，以形成称为乙酰基辅酶A的稍微较小、高能量的分子。这产生了能够进入柠檬酸循环或克雷伯氏循环的一系列反应的分子，该循环完成食物变成能量的转换。本质上，硫辛酸促进基础葡萄糖传递，并对促进葡萄糖吸收的胰岛素具有一种积极作用。

在生理学的环境下，硫辛酸作为硫辛酰胺存在于至少五种蛋白质中，其中它以共价键联系于一个赖氨酰残基。这些蛋白质中的四种是α-酮酸脱氢酶复合物、丙酮酸脱氢酶复合物、支链酮酸脱氢酶复合物和α-酮戊二酸盐脱氢酶复合物。包含三个硫辛酰胺的蛋白质存在于E2酶二氢硫辛酸酰基转移酶中，其不同于每一种复合物，对于复合物的培养基来说也是特定的。一个硫辛酸残基存在蛋白质X中，其在各个复合物中是相同的。第五和硫辛酰胺残基存在于氨基乙酸裂解系统中。

最近，硫辛酸已经在不同天然来源的硫辛酰赖氨酸形态中被检测到。在植物原料的研究中，硫辛酰赖氨酸成分在菠菜中是最高的。当以重量/冻干蔬菜干重表示时，菠菜中天然存在的lipoate的分布量分别高于椰菜的3倍和番茄的5倍。较低浓度的硫辛酰赖氨酸也在豌豆、芽甘蓝和米糠中被发现。

在动物组织里，牛组织的丙酮粉末中的硫辛酰赖氨酸的分布量是按以下顺序描绘的1)肾2)心脏3)肝4)脾5)脑6)胰腺和7)肺。

可是硫辛酸具有特定的缺点。特别地，天然形态的R-硫辛酸在超过40℃时是不稳定的，因此它在某些仓库储存环境下会降解。硫辛酸也是吸湿性的。带有一种天然盐类的天然形态的硫辛酸的稳定是需要的。

因此，在某种意义上，需要一种组合物和/或一种制备α-硫辛酸组合物的方法，来克服可用原料的一个或多个确定的现有缺陷。

简要说明

本发明意外地提供了低聚态α-硫辛酸的合成物。

本发明也意外地提供了作为“游离酸”的低聚态α-硫辛酸。

α-硫辛酸的低聚态合成物以及低聚态″游离酸″均可用于稳定营养物质，例如类胡罗卜素，其在不同情况下被认为对热、氧化作用、光、或引起物质降解的其他生理应力是不稳定的。该α-硫辛酸的低聚态复合物和其低聚态游离酸可被用做组合物，从而有助于对营养物质提供一种稳定作用。

本发明中α-硫辛酸合成物(在下文中“ALAC”)的准确特性没有被最后测定，不是受限于理论，相信它们是两个或更多个硫辛酸之间由硫键结合的缩合产物，因此在两个或更多个单独的α-硫辛酸单体之间形成二硫化物。ALAC能与至少一个平衡离子结合，例如一金属盐、胺或氨基酸，以及下文描述的其它的平衡离子。

此外，不受限于理论，本发明所述的“ALAC”有可能进一步包括“聚合态”α-硫辛酸的合成物。即，由50或更多个单独的α-硫辛酸子单位间经由多重的二硫键结合的物质产生了超过50个α-硫辛酸单元的缩合物。

一方面，聚合体ALAC的数量小于10％(以重量计)，尤其是，小于1％，甚至更加地小于0.5％，在一个特定的实施例中，小于0.1％重量比。

本发明中游离的低聚α-硫辛酸(在下文中“ALFA”)的确切特性没有被最后测定，不是受限于理论，相信它们是两个或更多个硫辛酸之间由硫键结合的缩合产物，因此在两个或更多个单独的α-硫辛酸单体之间形成二硫化物。ALFA能与至少一个平衡离子结合，例如一金属盐、胺或氨基酸，以及下文描述的其它的平衡离子以形成一种ALAC。同样地，ALAC可将该平衡离子替换为一氢原子以形成ALFA。

不受限于理论，本发明所述的ALFA可能进一步包括“聚合态”α-硫辛酸的缩合产物。也就是说，超过50个α-硫辛酸单元的缩合产物由50或更多个单独的α-硫辛酸子单元经由多重二硫键结合产生。

一方面，聚合体ALFA的数量小于10％(以重量计)，尤其是，小于1％，甚至更加地小于0.5％，在一个特定的实施例中，小于0.1％重量比。

本发明所述的ALAC和ALFA可被本文所述的不同方法纯化。也就是说，在齐聚/聚合过程之后，通过洗涤该物质、重结晶、沉淀、用分子量切断超滤、渗滤等手段，合成的低聚物可通过除去硫辛酸、硫辛酸聚合物、不想要的副产品等方式被分离和纯化。

一方面，该发明涉及一种包括一种低聚态α-硫辛酸和一个或多个平衡离子的合成物的组合物。所述的合成物可以是一种盐，一种在低聚态α-硫辛酸和平衡离子之间形成的缔合体和/或一种在两个或更多个α-硫辛酸分子和至少一个平衡离子之间形成的螯合物。

另一方面，本发明提供了包括一种含有通式(I)的低聚态α-硫辛酸合成物(ALAC)的组合物：

其中每个R⁺独立地表示一个平衡离子，和

n是介于大约2到大约50之间的数值，特别地介于大约10和大约20之间，特别地介于大约4到大约6之间。

一方面，每个R+是相同的。另一个方面，R+可以是两个或更多个不同的平衡离子。

仍然在另一个实施例中，本发明提供了一种组合物，其包括一种平均分子量(Mw)介于大约412.6(n＝2)和大约10268.5(n＝50)道尔顿之间的低聚态α-硫辛酸(ALAC)合成物和一平衡离子。

另一方面，本发明提供了一种低聚态α-硫辛酸合成物，通过以下过程制备：

将碱与硫辛酸在水溶液中反应；

该溶液在高温下保持大约1到5小时；然后

通过添加非溶剂析出低聚态硫辛酸和碱平衡离子的合成物。

在一实施例中，该低聚态硫辛酸合成物通过收集析出的合成物而分离得到。

在某些方面，根据α-硫辛酸与一个或多个平衡离子的多重的子单位(齐聚过程不含杂质)，ALAC具有超过大约99％的纯度，尤其地超过大约95％，更格外地超过大约98％以及最格外地超过大约99％(以重量计)的纯度，例如，99.5％，99.9％。

用于本发明组合物的适宜的平衡离子包括，例如，碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、亚烃基二胺、单取代胺、二代取胺，或三取代胺。

一方面，平衡离子为一种氨基酸，其可以包括鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

另一方面，本发明也提供了一种包括含有通式(Ia)的游离的低聚态α-硫辛酸(ALFA)的组合物：

其中n是介于大约2到大约50之间的数值，特别地介于大约10和大约20之间，特别地介于大约4到大约6之间。

在另一个实施例中，本发明提供了一种包含低聚态游离的α-硫辛酸(ALFA)的组合物，其平均分子量(Mw)为大约412.6(n＝2)和大约10268.5(n＝50)道尔顿之间。

在另一方面，本发明提供了制备低聚态游离的α-硫辛酸的方法。

在一实施例中，该低聚态游离的硫辛酸通过收集析出的低聚物而分离得到。

在某些方面，根据α-硫辛酸的多重子单位(齐聚过程无杂质)，ALFA具有超过大约90％的纯度，格外地超过大约95％，更格外地超过大约98％，以及最格外地超过大约99％的纯度(以重量计)，例如，99.5％，99.9％。

有趣的是，本发明所述的组合物(ALAC和/或ALFA)可以进一步包括硫辛酸或α-硫辛酸的盐，其可以依次是一种氨基酸盐。适宜的氨基酸包括，例如鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

在某些方面，本发明的组合物，含有或者不含有α-硫辛酸的盐，熔点大约为165℃至大约170℃之间。

另一方面，本发明所述的组合物，含有或者不含有α-硫辛酸盐，当0.5g克该物质溶于20mL中性水时，具有大约7.5的pH值。

本发明所述的组合物可以是包括颗粒、结晶、粉末等在内的固体形态。

本发明所述的组合物也可以包括一种液体载体。

本发明所述的组合物可特别地提供α-硫辛酸的低聚物，其具有R构形、S构形、R和S构形的混合体，以致于旋光度不是外消旋的，而是小于纯R或纯S低聚物以及外消旋混合物。

本发明所述的组合物可用于药品或营养配制品。

本发明所述的组合物可进一步用于治疗炎症，作为抗氧化剂，治疗循环系统紊乱，作为止痛剂，作为抗坏死药物，治疗逆转录病毒疾病。

本发明所述的组合物也可以用于促进稳定营养物质，否则营养物质在环境条件下是不稳定的。

当披露多个实施例时，对所属领域技术人员而言，根据下列详细说明，本发明的其他实施例将仍然是显而易见的。因为是显而易见的，所以本发明在不同的显而易见的方面的修改，均不离开本发明的实质和范围。因此，详细说明在本质上将被认为是说明性的而且不是限制性的。

附图说明

图1表明在LAORN溶解于水后相对于时间的硫辛酸的释放量。

图2显示α-硫辛酸的FT-IR谱图。

图3显示LAORN的FT-IR谱图。

图4提供了LAORN的HNMR谱图(液体)。

图5显示了含有3mmol对应化合物/L的样品的以mmol/L表示的总抗氧化能力。

图6显示了LAORN的不同浓度的结果。

图7显示了不同时间过程的自氧化的相关的相互影响。

图8显示了不同时间过程的自氧化的相关的相互影响。

图9提供了还原能力的试验结果。

图10显示了当与硫辛酸和鸟氨酸的简单混合物对比时，LAORN具有强烈的协同效应。

图11显示了反应时间和温度对LAORN形成的影响。

图12显示了两试剂[LA+ORN](浓度是每个试剂浓度之和，他们的摩尔比率是1∶1)的浓度对LAORN形成的影响。

图13提供了未包覆的叶黄素-酯在人造胃液中的稳定性。

图14提供了未包覆的叶黄素-酯在人造肠液中的稳定性。

图15提供了叶黄素-酯(1％低聚的包覆的硫辛酸)在人造的胃液中的稳定性。

图16提供了未包覆的叶黄素-酯(非低聚的1％硫辛酸)在人造肠液中的稳定性。

图17提供了叶黄素-酯(3％低聚的包覆的硫辛酸)在人造的胃液中的稳定性。

图18提供了未包覆的叶黄素-酯(非低聚的3％硫辛酸)在人造肠液中的稳定性。

图19描绘了硫辛酸含量与叶黄素-酯残留比率的特性曲线。

图20描绘了硫辛酸的滴定曲线。

图21描绘了硫辛酸的滴定曲线。

详细描述

本发明意外地提供了低聚态α-硫辛酸的合成物。本发明所述的α-硫辛酸合成物(“ALAC”)的确切性质尚未被最后测定，不受限于理论，相信它们是两个或更多个硫辛酸之间通过硫键得到的的缩合产物，由此在两个或更多个单独的α-硫辛酸单元之间形成二硫化物。ALAC能与至少一个平衡离子结合，例如一金属盐、胺或氨基酸，以及下文描述的其它平衡离子。

再一次，不受限于理论，本发明所述的ALAC可能进一步包括“聚合态”α-硫辛酸的合成物。也就是说，超过大约50个α-硫辛酸单元的缩合源于一种通过50个或更多个单独的α-硫辛酸子单元间的多个二硫键结合的物质。

一方面，本发明涉及一种组合物，其包括一种由低聚态α-硫辛酸与一个或多个平衡离子构成的合成物。该合成物可以是一种盐，低聚态α-硫辛酸和平衡离子形成的缔合体，和/或两个或更多个α-硫辛酸分子与至少一个平衡离子形成的螯合物。

另一方面，本发明涉及一种以“游离酸”(ALFA)形式存在的低聚态α-硫辛酸。

另一方面，本发明涉及ALFA和一种或多种ALAC的混合物。

在另一个实施例中，所述的ALAC可以仅仅是一不完全的合成物；意思是指，该低聚物的一部分被质子化了，而另一部分与一个或多个平衡离子结合。这被下列通式II所描绘。

所述的“α-硫辛酸”和“硫辛酸”在这里可互换地被使用，并在现有技术中被称为硫辛酸(thiocticacid)、1，2-二硫戊环-3-戊酸、1，2-二硫戊环-3-缬草酸以及6，8-硫辛酸。本申请中所述的“α-硫辛酸”应该被理解为包括硫辛酸的任何异构体以及并不受限于此。

所述的″低聚态″是意指包括一种物质，其具有至少2个如α-硫辛酸的子单元，所述子单元以某种方式缩合而得到具有超过α-硫辛酸本身分子量的物质。普遍地，本发明所述的低聚物具有大约2到大约50之间的，包含在低聚态结构内部的α-硫辛酸子单元。

有趣的是，在生理学条件下，例如胃或回肠中，本发明所述的″低聚态″ALAC和ALFA将随时间发生降解。然而，已经发现在类似的环境中″聚合态″ALFA特别不容易降解。这些区别使应用本发明所述的低聚物传递营养成分，以及在其降解过程中提供硫辛酸本身的有益效果成为可能，尤其是当硫辛酸衍生物为ALAC，例如氨基酸复合物的情况下。

该所述的″聚合态α-硫辛酸″是指在分子内部具有超过50个α-硫辛酸子单元的物质。

所述的″α-硫辛酸盐″或″硫辛酸盐″意指在硫辛酸分子和碱分子之间的酸碱反应产物，这样平衡离子会连接到α-硫辛酸的羧酸部分。

所述的″游离酸″是指低聚态硫辛酸的羧酸部分，例如，被质子化的部分。

所述的″合成物″在这里被用来指平衡离子以及例如α-硫辛酸的羧酸分子之间形成的缔合体。该缔合可以是通过离子键、共价键、范德瓦尔斯作用，和/或螯合作用等。该术语是指，在所述的如羧基的离子(阴离子和阳离子)和如盐或氨基酸的平衡离子之间存在的一种物理吸引。

可接受的盐应理解为包括，当存在于母体化合物中的酸式质子，例如α-硫辛酸，被金属离子(例如，碱金属离子，碱土金属离子或铝离子)置换而形成的盐，或与有机碱(例如，乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基葡糖胺、吗啉、哌啶、二甲胺、二乙胺等等)以配位键结合而形成的盐。也包括如精氨酸盐等氨基酸盐，以及如葡糖醛酸或半乳糖醛酸等有机酸盐，(见，例如，Berge et al.，1977，J.Pharm.Sci.66：1-19)。

也包括“药剂学上可接受的盐”作为适合的平衡离子，其意指本发明化合物的相对无毒的无机和有机碱加成盐。这些盐可在所述化合物的最后分离和提纯期间现场制备得到，或通过分别使游离酸形态的纯化的化合物(ALFA)与适合的碱，例如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐、氨水或药剂学上可接受的有机伯胺、仲胺、叔胺或季胺反应制备而得到。典型的碱金属或碱土金属盐包括锂、钠、钾、钙、镁，和铝盐等等。典型的用于形成碱加成盐的有机胺包括乙胺、氢氧化四甲基铵、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌嗪等等(见，例如，S.M.Berge et al.，″Pharmaceutical Salts，″supra.)

所述的″碱金属离子″是指元素周期表中Ia族中除氢以外的元素。

适合的碱金属离子包括，例如，钠和钾离子。

所述的″碱土金属离子″是指元素周期表中2族(IIA)元素。

适合的碱土金属离子包括，例如，镁和钙。

其他的适合的离子包括，例如，铝、锌、铜或铁。

这里所述的氨基酸包括，但不限于，甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、苯基丙氨酸、酪氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、蛋氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、赖氨酸、组氨酸、鸟氨酸、羟基赖氨酸、肉碱以及其他天然存在的氨基酸及其类似物的对映体和外消旋混合物。在一实施例中，所述的氨基酸为″L″构型。

例如氨基酸类似物，诸如鸟氨酸″类似物″包括乙酰化产物、反丁烯二酸衍生物等等，及其可接受的铵和金属盐。

所述的″单取代胺″是指所述的胺的N原子上具有单一的取代基。所述的取代基可以是烷基或芳基。

适合的单取代胺包括，例如，甲胺、乙胺、苯胺等等。

所述的″二烃基取代胺″是指所述的胺的N原子上具有两个取代基。所述的取代基可以是烷基、芳基或其组合。

适合的二烃基取代胺包括，例如，二乙胺、二甲胺、二苯胺等。

所述的″三烃基取代胺″是指所述的胺的N原子上具有三个取代基。所述的取代基可以是烷基、芳基或其组合。

适合的三烷基取代胺包括，例如，三甲胺、三乙胺、三苯胺等。

所述的″亚烃基二胺″是指在碳骨架中具有二个胺的化合物。所述的胺可以是在碳骨架的末端或内部。

适合的亚烃基二胺包括，例如，乙二胺或六亚甲基四胺。

烷基可以包括含有大约20个以下碳原子的直链烷基、支链烷基和环烷基。适合的烷基可以是饱和的或非饱和的。进一步地，所述烷基也可以被一个或多个取代基在一个或多个碳原子上取代一次或多次，所述的取代基可以是C1-C6烷基、C3-C6杂环取代基、芳基、卤素、羟基、氨基、烷氧基和磺酰基。另外，所述烷基可以包含10个以下的杂原子或杂原子取代基。适合的杂原子包括氮、氧、硫和磷。

芳基可以包含10个以下的杂原子。所述芳基可被芳基或低级烷基任意取代一次或多次，其也可以与其他的芳环或环烷基环稠合。适合的芳基包括，例如，苯基、萘基、甲苯基、咪唑基、吡啶基、吡咯基、噻吩基、嘧啶基、噻唑基和呋喃基。

所述的″环″具有20个以下的原子，其中可包括一个或多个氮、氧、硫或磷原子，条件是该环可以具有一个或多个取代基，该取代基为氢、烷基、烯丙基、烯基、炔基、芳基、杂芳基、氯、碘、溴、氟、羟基、烷氧基、芳氧基、羧基、氨基、烷胺基、二烷胺基、酰胺基、甲酰胺基、氰基、氧代、硫代、烷硫基、芳硫基、酰硫基、烷基磺酸酯、芳基磺酸酯、磷酰基和磺酰基，进一步的条件是该环也可以包含一个或多个碳环形的、杂环形的、芳香基或杂环芳香基稠环。

所述的″亚烃基″为直链的、支链的或环状的，在某些实施例中是直链的或支链的二价脂肪族烃基，其在一个实施例中具有1至大约20个碳原子，在另一个实施例中具有1-12个碳原子。在另一个实施例中所述亚烃基包括较低级的亚烃基。沿着亚烃基可任意地插入一个或多个氧原子、硫原子、或被取代或未被取代的氮原子，其中氮的取代基是烷基。亚烃基包括，但不限于，亚甲基(-CH₂-)、乙烯基(-CH₂CH₂-)、丙烯基((CH₂)₃-)、亚甲二氧基(-O-CH₂-O-)和亚乙二氧基(-O-(CH₂)₂-O-)。所述的″较低级的亚烃基″指具有1-6个碳的亚烃基。在某些实施例中，亚烃基是较低级的亚烃基，包括具有1-3个碳原子的亚烃基。

所述的″重均分子量″(Mw)在现有技术中是公知的，该平均分子量可通过光散射、低角度中子散射(SANS)、X射线散射、沉积速度、碘量法、或由凝胶渗透色谱法(GPC)测定得到。低聚态ALAC和ALFA的重均分子量通常为大约412.6(n＝2)到大约10268.5(n＝50)，优选从大约412.6(n＝2)到大约3081.95(n＝15)，更优选从大约412.6(n＝2)到大约2055.3(n＝10)以及愈加优选从大约412.6(n＝2)到大约1233.98(n＝6)。

另一方面，本发明提供了包含通式(I)所示的低聚态α-硫辛酸合成物的组合物。

其中每个R⁺独立地表示一个平衡离子，并且

n为大约2到大约50的数值，优选在大约4和大约20之间，更优选在大约10到大约15之间，最优选在大约4到大约12之间的数值，例如，大约4、大约6、大约8、大约10，或大约12。

每个R⁺可以是相同的，或低聚物中的R⁺可以是不同的平衡离子。

例如，如果聚合度n是2，按照本发明所述的化合物被认为具有如下结构：

其中每个R⁺分别地为上述内容所定义。

如果聚合度n是3，按照本发明所述的化合物被认为具有如下结构：

其中每个R⁺分别地为上述内容所定义。

α-硫辛酸子单元的重复链可通过更多的单元被延长(n分别为2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、20等，直到并包括50在内)。最终的结构将取决于进一步齐聚的发生处(即硫基所在位置)。进一步地，因为分子量分布是一平均值，n值可以是一非整数，因此，全部数值(整数)部分也被预期和包括在内。

通过说明书应当理解的是，本发明所述的组合物可以作为一种分别具有不同聚合度(n)的化合物的混合物形式存在，并可以进一步包括α-硫辛酸的单体合成物或α-硫辛酸盐。

一个或多个R⁺可以被氢原子取代以提供，例如，ALFA(其中R⁺全部为氢)。

另一个实施例中，本发明提供了一种包含低聚态α-硫辛酸合成物的组合物，该合成物具有平均分子量(Mw)介于大约412.6(n＝20)到大约10268.5(n＝50)道尔顿之间的低聚态α-硫辛酸和一平衡离子(s)构成的合成物。

另一方面，本发明也提供了包含通式(Ia)所示的低聚态α-硫辛酸游离酸(ALFA)的组合物。

其中n如上所述是介于大约2到大约50之间的数值，优选介于大约10和大约20之间，更优选介于大约4到大约6之间的数值。

在另一个实施例中，本发明提供了包括低聚态α-硫辛酸游离酸(ALFA)的组合物，该ALFA具有介于大约412.6(n＝2)到大约10268.5(n＝50)道尔顿之间的平均分子量(Mw)。

另一个方面，本发明提供了包含通式(II)所示的混合的低聚态α-硫辛酸合成物的组合物。

其中n的定义如上所述；

每个R¹独立地为一氢原子或一平衡离子，且至少一个R¹是一平衡离子。

另一方面，本发明也提供了包含通式(III)所示的α-硫辛酸低聚物的组合物：

其中n的定义如上所述；

每个R²独立地为一氢原子或一平衡离子。

当全部R²是氢原子时，结果为ALFA。

本发明提供了制备一种低聚态硫辛酸合成物的方法，通过使硫辛酸与一种碱接触来形成一种混合物；在大约0℃到大约100℃之间加热该混合物；并收集该低聚态硫辛酸合成物，其中该硫辛酸的聚合度在大约2和大约50之间，例如，在大约4和大约20之间。

在某些方面，每摩尔当量的羧酸中加入1摩尔当量的碱。在其他方面，每摩尔当量的羧酸加入小于1摩尔当量的碱，藉此形成了一种″混合态″ALAC。

另一方面，本发明提供了如下过程生成的产物：

a)碱与α-硫辛酸在水溶液中反应；

b)将该溶液在高温下保温大约1到大约5小时；并且

c)通过添加一非溶剂，从水溶液中析出低聚态硫辛酸和碱平衡离子的合成物；或者将该水溶液喷雾干燥得到低聚态硫辛酸盐的合成物。

通常该齐聚反应是在大约0℃到大约100℃之间进行，优选在大约30℃到大约60℃之间进行。过量的碱可以存在于反应过程中，任何过量的未反应的碱或未化合的碱可以通过提纯去除。已经发现，在碱性条件下进行反应有利于在较低温度范围内发生齐聚反应，例如在大约30℃到大约60℃之间发生齐聚反应，并提供了较高的低聚态ALAC的收率。

意外地发现，当诸如一种氨基酸的碱和α-硫辛酸在水溶液中反应并使该溶液在高温下保持一段如上所述的时间，一种低聚态合成物便产生了。

应用于步骤a)中所述的碱通常为一种选自鸟氨酸、精氨酸和赖氨酸的氨基酸。所述的氨基酸优选为其L-构型，虽然其R-构型也是可能使用的。最优选的碱是L-鸟氨酸。

在一实施例中，如果步骤a)使用鸟氨酸，其是以水溶液的形式被应用，该水溶液具有从大约9.5到大约10.0的pH值，例如，9.6。在这一接近鸟氨酸等电点(9.6)的pH值范围内，鸟氨酸将以带有一正电荷的形式存在，由此可以与带有一个负电荷的α-硫辛酸形成盐合成物。

在一范例中，步骤a)应用的鸟氨酸水溶液可通过向含有鸟氨酸盐酸盐的溶液中添加NaOH至要求的pH值来获得。

步骤a)中所述的α-硫辛酸可以是R(+)-构型、S(-)-构型或其外消旋体。

步骤b)可以包含所述水溶液的浓缩步骤。例如，反应混合物在步骤b)的结束时可以被浓缩至去除大约50％的水。

已经发现，除了高温处理过程之外，根据本发明所述过程中的α-硫辛酸的齐聚过程在某种程度上取决于反应混合物中两种反应物的浓度之和。在一实施例中，步骤a)中水溶液里的碱，例如，诸如鸟氨酸的氨基酸，和α-硫辛酸的各自的浓度之和为大约15％到大约45％(重量/体积)，更优选为大约25％到大约35％(重量/体积)(重量/体积，mg/mL)，且氨基酸对硫辛酸的摩尔比为0.1∶1到10∶1的范围内。尽管在更高浓度下齐聚反应更为强烈，但由此带来的反应混合物的高浓度使得反应难以进行。

通常情况下，所述过程中步骤a)中的碱，例如氨基酸，和α-硫辛酸的摩尔比为大约1∶1。

在步骤b)中的反应混合物的温度为大约30℃或更高，优选为大约40℃到大约50℃。在这点上，较低的温度似乎促进齐聚，然而，30℃以下的温度是不可取的，因为反应混合物的粘度增大并使得操作更加困难，但并非不可能。

用于步骤c)中的非溶剂可以是醇，在一实施例中是乙醇溶液。

在步骤c)中用来析出ALAC的水溶液和非溶剂(例如，乙醇)溶液的混合物的含水率通常应该是12％或更低。如果溶液的含水率过高，则析出的合成物趋向于较粘，且干燥变得困难，然而，如果含水率太低，则通常需要增加非溶剂例如乙醇的用量，这会增加生产成本。在一实施例中，依据最终产品的收率和纯度，88％的乙醇终含量被认为是经济和有利的。

同α-硫辛酸相比，ALAC有很好的热稳定性，不论它是否为低聚态，以及合成物是否为盐，松散缔合的阴离子-阳离子合成物，螯合物或其它缔合体。本发明所述的ALAC具有一种意想不到高的抗氧化效果。

此外，本发明所述的ALAC似乎随时间释放相对等量的α-硫辛酸，就是说，因此，它能被用作一种具有α-硫辛酸同样效果的“控释”产品。

和α-硫辛酸相比，当口服时该ALAC不会引起α-硫辛酸导致的咽喉刺激。

本发明所述的ALAC具有良好的凝胶特性，因此可以减少乃至取消片剂制造对粘合剂的需要量。相比之下，由于其低熔点，α-硫辛酸不能被压片。

ALFA可以通过在醇中溶解硫辛酸，例如乙醇，并在大约30℃到大约60℃之间加热该溶液制备得到。当冷却时，根据醇或溶剂的选择，将在溶液中形成黄色析出物，其可以被收集、分离，如果需要还可进一步纯化。低聚的ALFA不具有水溶性，因此可用水去除任何不需要的水溶性物质。另外，可以喷雾干燥该溶液以得到ALFA，其通常具有大约3到大约4的聚合度。

同α-硫辛酸相比，ALFA具有很好的热稳定性。本发明所述的ALFA具有一种意想不到的高的抗氧化效果。

此外，本发明所述的ALFA似乎随时间释放相对等量的α-硫辛酸，就是说，因此，它能被用作一种具有α-硫辛酸同样效果的″控释″产品。

和α-硫辛酸相比，当口服时所述ALFA不会引起α-硫辛酸导致的咽喉刺激。

本发明所述的ALFA具有良好的胶凝特性，因此可以减少乃至取消对制片用粘合剂的需要量。相比之下，由于其低熔点，α-硫辛酸不能被压片。

一方面，本发明所述的ALAC和/或ALFA可与对热、光、氧及其他诸如潮湿、臭氧等环境压力不稳定的营养物质结合。所述的ALAC和/或ALFA可以包覆于所述的营养物质(比如类胡萝卜素及其衍生物，例如酯，包含例如，棕榈酸酯、柠檬酸酯、没食子酸酯、维生素E酯、硫辛酸酯)外或与营养物质充分混合以帮助稳定该物质。

所述营养成分的包覆可通过现有技术中公知的方法完成，例如通过将营养成分简单地浸入ALAC和/或ALFA溶液中，将该物质与ALAC和/或ALFA的混合物喷雾干燥，将营养成分与ALAC和/或ALFA的混合物冷冻干燥等方法。对营养物质的包覆无须完全均匀，虽然在某些情况下更优选均匀包覆。

类胡萝卜素是在自然界广泛分布的黄色、红色和橙色颜料。虽然特定的类胡萝卜素已经在不同的水果和蔬菜、鸟类羽毛、蛋黄、家禽的皮、甲壳动物和眼睛的黄斑区中得到确定，但其在金盏花花瓣、玉米和多叶蔬菜中尤其丰富。可食用的类胡萝卜素和人血清及血浆中发现的类胡萝卜素之间的相互关系表明，仅仅选定的类胡萝卜素能够成功进入人的血流发挥作用。

类胡萝卜素吸收400-500nm范围的可见光。这个物理特性赋予该颜料以黄色/红色。类胡萝卜素包含一个由异戊二烯单元组成的共轭骨架，其在分子的中心通常可反转，而显现对称性。关于双键在几何构型方面的变化，导致许多顺式和反式异构体的存在。哺乳动物不能合成类胡萝卜素，因此类胡萝卜素毫无疑问是从诸如果实、蔬菜和蛋黄的饮食来源获得。最近几年，类胡萝卜素已经被认为具有几种健康益处，其包含预防和/或保护人体免于严重的健康失调。

类胡萝卜素是非极性化合物，被分为两类，即被称为叶黄素或氧合类胡萝卜素的具有较高极性的化合物，以及如β-胡萝卜素、番茄红素等非极性的碳氢化合物胡萝卜素。这两类化合物具有至少9个共轭双键，这些双键是形成类胡萝卜素特征颜色的原因。叶黄素在其具有如羟基或酮基的极性官能团的共轭双键链的末端具有环状结构。叶黄素的范例包含黄体素、玉米黄质、辣椒红、角黄素、β-玉米黄质、虾青素等。近年来，包含黄体素和玉米黄质的叶黄素作为天然的着色剂以及由于他们在人类健康中的作用，已经吸引了在生物医学、化学和营养学领域内的科学家和研究人员的再次关注。

黄体素和玉米黄质分别表现出黄色和橙黄色。黄体素和玉米黄质在植物体内可以以游离态形式(非酯化)存在也可以作为酯存在。黄体素以游离态存在于绿叶蔬菜中，如菠菜、羽衣甘蓝和椰菜，而以酯的形态存在于果实中，如芒果、橙、番木瓜、红辣椒、藻类和黄玉米。这些来源通常含有以酯等形态存在的黄体素。黄体素也存在于人体的血液和不同组织中，尤其是在眼睛中的黄斑、晶状体和视网膜中。

因此，本发明包括不同的ALAC和ALFA包覆酯化的类胡萝卜素，也被称作是类胡萝卜素的衍生物，以及非酯化类胡萝卜素的用途。与非酯化的类胡萝卜素相缔合以得到酯化的类胡萝卜素的通用的酸包括，例如，现有技术中公知的棕榈酸、柠檬酸、没食子酸、维生素E、硫辛酸等。

金盏花(Tagetes erecta)的花瓣是酯化形态黄体素的一种丰富来源。所述酯的部分是脂肪酸。干燥的金盏花包含大约1-1.6％以重量计的类胡萝卜素，且黄体素酯含量占总类胡萝卜素的90％。在金盏花油性树脂中的叶黄素脂肪酸酯组合物主要由以酯形态存在的黄体素组成，所述酯为二棕榈酸酯、肉豆蔻酸-棕榈酸酯、棕榈酸-硬脂酸酯、二肉豆蔻酸酯和单酯。

已经发现，通过水解来自金盏花的叶黄素酯而获得的黄体素与在水果、蔬菜、人血浆及黄斑区域中发现的叶黄素相同。吸收后，人体不能辨别叶黄素的来源。因此，鉴于广泛的有效性和成本考虑，广泛种植和商业处理的原料如已经用于食品和饲料行业使用的金盏花，是一种有吸引力的黄体素来源。

本质上，黄体素酯和游离态的叶黄素是源自金盏花的重要的商业化保健品。干花部分用于获得金盏花提取物或油性树脂。通过将提取物/油性树脂皂化处理，可获得游离态的叶黄素。除去皂化中产生的脂肪酸碱金属盐，进一步精制含有黄体素和玉米黄质混合物的叶黄素。

黄体素酯以反式异构体存在于新鲜的金盏花花瓣中，但是暴露于热、光、氧、酸等条件下会催化叶黄素的几何异构形式由反式转化为顺式。作为一种保健品和食品添加剂，黄体素的反式异构体更为优选，因为相对于对应的顺式异构体，反式异构体具有更好的生物利用度和更深的黄色色泽。

优选地，类胡萝卜素是一类碳氢化合物(胡萝卜素)，其对应的氧合衍生物是叶黄素。其由相互结合的八个类异戊二烯单元构成，其中的类异戊二烯单元的排列在分子中心是反转的，因此，两个中心处的甲基处于1，6-位置关系，而其余的非末端甲基处于1，5-位置关系。所有类胡萝卜素可能形式上源于一个具有长的共轭双键主链的脂肪族C₄₀H₅₆结构(I)(化合物I)，通过(1)氢化、(2)脱氢、(3)环化或(4)氧化或这些过程的任何组合而得到。该类化合物还包括由碳骨架(I)(番茄红素)通过某种重排或降解而得到的化合物，条件是保留了两个中心处的甲基。

从天然来源已经分离出大约600种类胡萝卜素。这些类胡萝卜素已经以其通用名和半系统名被列入Key to Carotenoids(Pfander，1987)和Appendix of Carotenoids，卷1A(Kull & Pfander 1995)中，其中也包括关于其光谱学和其他特性的参考文献。许多类胡萝卜素的结构，包括立体化学结构仍然是不确定的。在结构不确定的情况下，拆分，随后通过现代光谱法(包括高分辨率核磁共振(NMR)光谱法)进行结构鉴定是必要的。大约370种天然存在的类胡萝卜素是手性的，具有一到五个不对称碳原子，大多数情况下一种类胡萝卜素在自然界仅以一种构型存在。

所有类胡萝卜素的种名是以母体名称胡萝卜素为基础的，其符合化合物2(胡萝卜素)的结构和编号。

一种特定化合物的名称是通过在母体名称胡萝卜素上增加二个希腊字母作为词头(化合物片段3)构成的。所述的希腊字母词头在化合物IIa中以字母顺序被引用。

氧合的类胡萝卜素(叶黄素)常常包含羟基、甲氧基、羧基、氧代和环氧官能团。重要的和典型的类胡萝卜素(化合物III-X)是番茄红素(γ，γ-胡萝卜素)(I)、β-胡萝卜素(β，β-胡萝卜素)(III)、α-胡萝卜素((6′R-β，ε-胡萝卜素)(IV)、β-隐黄质((3R)-β，β-胡萝卜素-3-醇)(V)、玉米黄质((3R，3′R)-β，β胡萝卜素-3，3′-二醇)(VI)、黄体素(″叶黄素″，(3R，3′R，6′R)-β，ε-胡萝卜素-3，3′-二醇)(VII)、新叶黄素((3S，5R，6R，3′S，5′R，6′S)-5′，6′-环氧-6，7-二脱氢-5，6，5′，6′-四氢-β，β-胡萝卜素-3，5，3′-三醇)(VIII)、紫黄质((3S，5R，6R，3′S，5′R，6′S)-5，6，5′，6′-二环氧-5，6，5′，6′-四氢-β，β-胡萝卜素-3，3′-二醇)(IX)、岩藻黄质((3S，5R，6S，3′S，5′R，6′R)-5，6-环氧-3，3′，5′-三羟基-6′，7′-二脱氢-5，6，7，8，5′，6′-六氢-β，β-胡萝卜素-8-酮-3′-乙酸酯)(X)、角黄素(β，β-胡萝卜素-4，4′-二酮)(XI)和虾青素((3S，3′S)-3，3′-二羟基-β，β-胡萝卜素-4，4′-二酮)(XII)。

通常地，类胡萝卜素以(全-反式)-异构体存在于自然界。一些类胡萝卜素在处理过程期间很容易地发生异构化。对于处理过程，必须记住的是，当类胡萝卜素在溶液中保存时，(顺/反)-异构化可以发生。通常地(顺式)-异构体的百分比相当地低，但是它在较高的温度下可以提高。此外，光照可促进(顺式)-异构体的形成。

在商业惯例中，由于原料缺乏选择性以及包括高温干燥在内的不适当的加工条件，很少获得食品级品质且不含顺式-黄体素异构体的叶黄素。这导致形成食品级品质的叶黄素却含有较高水平的顺式-黄体素。本发明避免了不需要的顺式-黄体素水平的增加，部分地因为处理过程中使用了相对低温。

人和动物不能合成如黄体素和玉米黄质的叶黄素，并且其来源毫无疑问来自饮食。在黄斑中存在的黄体素和玉米黄质具有特定功能，即，保护细胞和组织免受紫外线伤害和降低白内障风险。已知黄体素和玉米黄质包含黄斑颜料，并且黄体素在黄斑中会异构化为玉米黄质。

有证据表明，黄体素具有抗癌，如乳房癌、结肠癌、肺癌、皮肤癌、宫颈癌和卵巢癌的保护作用，并有希望用于治疗心血管疾病。因此，对个体而言，若将黄体素用于饮食或用作营养补充剂，可更好地维持人体健康和健康的视力。

所以，需要大量的包含高含量反式(E)-黄体素和/或玉米黄质的叶黄素结晶用作抗氧化剂，防止白内障和黄斑变性、预防肺癌药剂、用于吸收来自太阳光的有害紫外线的药剂，和光引发自由基及活性氧的猝灭剂等。

从而，本发明所述的一种或多种ALAC和/或ALFA的组合，提供了一种在典型降解条件下稳定的类胡萝卜素。本发明因此提供了一种有助于稳定类胡萝卜素，比如黄体素的方法。

本发明所述的组合物可以被加入不同的食物、饮料、点心、等等。一方面，该组合物可以在食用前，被撒在食品表面。如果被撒在食品表面，可用适合的载体如淀粉、蔗糖或乳糖帮助分散该组合物，以使其更易于撒在该食品上。

本发明所述的组合物还可以在各种预制食品中用作添加剂。由于本申请的目的，预制食品意为已加入本发明所述组合物的任何天然的、经加工的、减肥或非减肥食品。本发明所述的组合物可直接加入预制减肥食品中，包括但不限于减肥饮料、减肥食品棒和预制冷冻食品。此外，本发明所述的组合物可以被加入许多预制非减肥食品中，包括但不限于糖果、零食如薯片、预制肉食品、牛奶、奶酪、酸奶、运动食品棒、运动饮料、蛋黄酱、色拉味调料、面包及任何其他含脂肪或含油食物。正如这里使用的，所述的″食品″指适于人或动物食用的任何物质。

本发明所述的组合物可被加入各种饮料，比如果汁、奶昔、牛奶等。

优选的服用方法是口服。本发明所述的组合物可与适合的载体如淀粉、蔗糖或乳糖复配制备片剂、胶囊、溶液、糖浆和乳剂。本发明所述的片剂或胶囊可用在pH6.0-7.0的条件下溶解的肠溶衣包覆。适合的肠溶衣是邻苯二甲酸乙酸纤维素，其可在小肠中溶解，但不在胃中溶解。

本发明所述组合物的软胶囊制剂可通过现有技术中许多公知方法得到。所述制剂通常包含一种可接受的载体，例如油，或其他悬浮剂或乳化剂。

适合的可选择的载体包括但不限于，例如，源于任何来源的脂肪酸及其酯和盐，其包括但不限于，天然油或合成油、脂肪、蜡或其组合。此外，所述的脂肪酸可以源于但不限于非氢化油、部分氢化油、完全氢化油或其组合。脂肪酸(其酯和盐)非限制的示范来源包括种籽油、鱼油或水生动物油、油菜籽油、植物油、红花油、向日葵油、旱金莲种籽油、芥籽油、橄榄油、芝麻油、大豆油、玉米油、花生油、棉花籽油、米糠油、巴西棕榈果油、棕榈油、低芥籽油、棕榈仁油、羽扇豆油、椰子油、亚麻籽油、月见草油、希蒙德木油、麦芽油、牛脂、牛油、黄油、鸡油、猪油、乳脂、牛油树脂或其组合。

特定的非限制性的示范鱼油或水生动物油来源包括贝油、金枪鱼油、鲭鱼油、鲑鱼油、鲱鱼油、凤尾鱼油、青鱼油、鳟鱼油、沙丁鱼油或其组合。优选地，脂肪酸的来源是鱼油或水生动物油(DHA或EPA)、大豆油或亚麻籽油。同悬浮剂例如硅石(二氧化硅)一样，蜂蜡可以作为适合的载体单独使用或与上述确定的载体之一结合使用。

本发明所述的组合物也被认为是一种保健品。所述的″保健品″在现有技术中是公知的，用于描述在食物中发现的特定的化合物，其可以预防疾病或改善不良症状。

本发明所述的组合物可以进一步包括不同的成分，以有助于稳定，或有助于促进本发明所述的有益组合物的成分的生物利用率，或作为个人饮食的营养添加剂。适合的添加剂可以包括维生素和生物学上可接受的矿物质。非限制性的维生素范例包括维生素A、维生素B、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K和叶酸。非限制性的矿物质范例包括铁、钙、镁、钾、铜、铬、锌、钼、碘、硼、硒、锰、其衍生物或其组合。这些维生素和矿物质可不受限制地来自任何来源或其组合。非限制性的范例维生素B包括但不限于，硫胺、烟酰胺、吡哆醇、核黄素、氰钴胺素、生物素、泛酸或其组合。

可以向本发明组合物中加入各种添加剂。本发明组合物中可选择的添加剂包括但不限于透明质酸、磷脂、淀粉、糖、脂肪、抗氧化剂、氨基酸、蛋白质、调味品、着色剂、水解淀粉和它们的衍生物或其组合物。

正如这里使用的，所述的″抗氧化剂″是在现有技术中是公知的，是指能够防止或延迟化合物氧化变质的合成的或天然的物质。典型的抗氧化剂包括生育酚、类黄酮、儿茶酚、过氧化物歧化酶、卵磷脂、γ-谷维素、维生素，例如维生素A、维生素C(抗坏血酸)和β-胡萝卜素、以及天然成分，例如在迷迭香和山楂提取物中发现的鼠尾草酚、迷迭香酸和迷迭香酚，例如在葡萄籽或松树皮提取物中发现的原花青素、以及绿茶提取物。

本发明所述的包含ALAC和/或ALFA的组合物，可通过传统的混合、溶解、造粒、糖衣磨细、乳化、胶囊化、截留或冻干等方法制备得到。该组合物可以通过传统方式配制为制剂，在配制过程中使用一种或多种有利于加工ALAC和/或ALFA组合物成为制剂的，生理学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或辅助剂。

本发明所述的组合物可以采用事实上适合于任何服用方式的剂型，包括，例如口服剂、口腔含服剂、全身给药制剂、注射剂、透皮吸收制剂、直肠给药制剂、阴道给药制剂等等，或适合通过吸入或吹入给药的剂型。

全身给药制剂包括那些用于注射给药，即皮下注射、静脉注射、肌内注射、鞘内注射或腹膜内注射给药的装置，以及那些用于透皮给药、透粘膜口腔给药或肺部给药的装置。

有用的血管注射剂包括ALAC和/或ALFA组合物在水性或油性载体中形成的无菌悬浮液、溶液或乳液。该组合物还可以包含添加剂，如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。注射剂可以单位剂量的形式存在，例如，安瓿或多剂量容器，同时可以包含添加的防腐剂。

可选地，注射剂可以以粉末形式提供，并在使用之前通过一种适合的载体，包括而不限于无菌无热原水、缓冲液、葡萄糖溶液等再配制。为此目的，所述ALAC和/或ALFA组合物可通过任何公知技术如冻干法进行干燥，并且在使用前再配制。

对于透粘膜给药，在制剂中使用适合于所要透过的屏障的渗透剂。这样的渗透剂在现有技术中是已知的。

对于口服给药，本发明所述的组合物可以采取多种剂型，例如，使用药剂学上可接受的赋形剂通过传统方法制备的锭剂、片剂、或胶囊剂，所述的赋形剂可以是粘合剂(如预糊化玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填料(如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(如硬脂酸镁、滑石或硅石)；分解质(如马铃薯淀粉或羟基乙酸淀粉钠)；或润湿剂(如十二烷基硫酸钠)。所述片剂可以利用例如糖、薄膜或肠溶衣通过现有技术中公知的方法进行包覆。

用于口服的液体制剂可以采取多种剂型，例如，酏剂、溶液、糖浆或悬浮液，或其以干燥产品存在，在使用之前用水或其它适合的载体配制。这样的液体制剂可以利用药剂学上可接受的添加剂通过传统方法制备得到，所述的添加剂可以是悬浮剂(例如，葡萄糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用油脂)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)；非水载体(例如，杏仁油、油性酯、乙醇，或分馏植物油)；和防腐剂(例如，甲基或丙基对羟基苯甲酸盐或山梨酸)。所述制剂还可以适当包含缓冲盐、防腐剂、调味品、着色剂和甜味剂。

对于口服制剂，所述ALAC和/或ALFA组合物可以用公知方法适合地配制为控释剂型。

对于口腔黏膜给药，所述组合物可以采用以传统方式配制的片剂或锭剂的形式。

对于直肠和阴道给药途径，所述的ALAC和/或ALFA组合物可配制为溶液(用于保留灌肠剂)、栓剂或膏剂，其包含传统的栓剂碱，比如可可脂或其他甘油酯。

对于鼻腔给药或通过吸入或吹入给药，所述ALAC和/或ALFA组合物可以方便地以气溶胶形式从加压容器或喷雾器中喷射释放。其使用一种合适的推进剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、碳氟化合物、二氧化碳或其他的适合的气体。就加压气溶胶而言，其可通过使用阀门释放定量药物来决定剂量单位。用于吸入器或吹药器的胶囊和药盒(例如由明胶制备的胶囊和药盒)可以包含该化合物的粉末混合物和一种适合的粉末基质，例如乳糖或淀粉。

为了延长释放，所述ALAC和/或ALFA组合物可以配制为用于植入给药或肌肉注射给药的长效制剂。所述ALAC和/或ALFA组合物可以与适合的聚合态的或憎水的物质(例如，作为一种在可接受的油中形成的乳液)或离子交换树脂进行配制，或配制为微溶的衍生物，例如微溶的盐。可选地，可以使用以一种制造为吸盘或贴片的透皮传递系统，其缓慢释放用于经皮吸收的ALAC和/或ALFA组合物。为此目的，可使用渗透增强剂以促进ALAC和/或ALFA组合物的透皮渗透。适合的透皮贴片在美国专利5,407,713；美国专利5,352,456；美国专利5,332,213；美国专利5,336,168；美国专利5,290,561；美国专利5,254,346；美国专利5,164,189；美国专利5,163,899；美国专利5,088,977；美国专利5,087,240；美国专利5,008,110；和美国专利4,921,475中有所记载。

可选地，可以使用其他传递系统。脂质体和乳液是众所周知的传递载体，其可用于传递ALAC和/或ALFA组合物。也可以使用某些有机溶剂如二甲亚砜(DMSO)，虽然通常情况下其具有较高的毒性。

如果需要，所述的组合物可存在于包装物或分配器装置内，其可以包含一个或多个含有ALAC和/或ALFA组合物的单位剂量制剂。例如，该包装物可以包含金属或塑料薄片，比如泡罩包装。该包装物或分配器装置可以附有服用说明书。

软凝胶胶囊或软明胶胶囊可以通过，例如但不限于，将所述制剂在适当的载体(例如，米糠油，和/或蜂蜡)内分散形成一种高粘度混合物来制备得到。然后将这些混合物用明胶基薄膜通过软凝胶工业技术人员公知的技术和机械设备制成胶囊。然后将该形成的胶囊干燥至恒重。典型地，胶囊的重量在大约100mg至大约2500mg之间，优选地，在大约1500mg至大约1900mg之间，更优选地可以在大约1500mg至大约2000mg之间。

例如，当制备软明胶壳体时，该壳体可包括大约20％-70％的明胶，通常包括一种可塑剂以及大约5％-60％以重量计时山梨醇。所述软胶囊的填料是液体(如果需要的话，主要为载体，例如米糠油或麦胚芽油和/或蜂蜡)并且除ALAC和/或ALFA组合物以外，还可以包括一种亲水性基质。所述亲水性基质，如果存在的话，是一种具有平均分子量为大约200到1000的聚乙二醇。进一步的组分为可选的增稠剂和/或乳化剂。在一实施例中，所述亲水性基质包括具有平均分子量200至1000的聚乙二醇，5％-15％的甘油，以及5％-15％以重量计的水。该聚乙二醇还可以混有丙二醇和/或碳酸丙二酯。

在另一个实施例中，所述软凝胶胶囊是用明胶、甘油、水和各种添加剂制备得到。典型地，该明胶的百分含量(以重量计)在大约30％和大约50％重量百分数之间，优选地在大约35％和大约重量百分数之间，更优选地为大约42％重量百分数。该制剂包括大约15％-大约25％重量百分数的甘油，优选地在大约17％-大约23％重量百分数之间，更优选地是大约20％重量百分数的甘油。

所述胶囊的有代表性的剩余部分是水。其含量在大约25％到大约40％重量百分数之间变化，优选地在大约30％和大约35％重量百分数之间变化，更优选地为大约35％重量百分数。所述胶囊的剩余物含量通常在大约2％-大约10％重量百分数之间变化，其组成为调味剂、糖、着色剂或其组合，等等。在所述胶囊加工后，最终胶囊的含水率通常在大约5％-大约10％重量百分数之间，优选地在7％-大约12％重量百分数之间，更优选地在大约9％-大约10％重量百分数之间。

至于制造过程，标准软壳胶囊生产技术可用于制备该软壳产品是预料之中的。有效的生产技术的例子为涂覆加工、R.P.Scherer开创的旋转模压加工、应用Norton胶囊机床的加工技术，以及Lederle开发的Accogel机床及其加工技术。这些加工技术的每一种都是成熟技术，并且对任何一个希望制备软胶囊的人来说均能够普遍获得。

所述乳化剂可用于促进溶解软胶囊内的组分。表面活性剂、乳化剂、或泡腾剂的特定例子包括D-山梨醇、乙醇、角叉菜胶、聚羧乙烯、羧甲基纤维素钠、瓜耳豆胶、甘油、脂肪酸甘油酯、胆固醇、白蜂蜡、丁二酸二辛基磺酸钠、蔗糖脂肪酸酯、十八醇、硬脂酸、聚氧乙烯(40)硬脂酸盐、失水山梨醇倍半油酸酯、鲸蜡醇、明胶、失水山梨醇脂肪酸酯、滑石、失水山梨醇三油酸酯、石蜡、马铃薯淀粉、羟丙基纤维素、丙二醇、丙二醇脂肪酸酯、果胶、聚氧乙烯(105)聚氧丙烯(5)乙二醇、聚氧乙烯(160)聚氧丙烯(30)乙二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油40、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚氧乙烯(35)蓖麻油、聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯60、聚山梨醇酯80、聚乙二醇400、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、甲基纤维素、失水山梨醇单油酸酯、单硬脂酸甘油酯、失水山梨醇单棕榈酸酯、失水山梨醇单月桂酸酯、十二烷基二甲胺氧化物溶液、十二烷基硫酸钠、聚桂醇、干燥碳酸钠、酒石酸、氢氧化钠、精制大豆卵磷脂、大豆卵磷脂、碳酸钾、碳酸氢钠、中链甘油三酸酯、柠檬酸酐、棉籽油-大豆油混合物，和液体石蜡。

本发明也提供了已包装制剂，其包括本发明所述组合物以及该产品在适当条件下的使用说明书。典型情况下，无论其以什么形式，该已包装制剂是用于有使用需要的个体。典型情况下，其剂量要求为一天大约1到大约4次用量。

虽然本发明描述了本发明所述组合物用于治疗不同的症状的软胶囊制剂、其用途、制造和包装，但应认为其仅限于软胶囊。本发明可吸收的组合物可以以如上所述的传统的片剂、丸剂、锭剂、酏剂、乳液、硬胶囊、液体、悬浮液等剂型传递。

本发明所述ALAC和/或ALFA组合物或其组合物，通常会以一有效量使用以获得预期结果，例如以一有效量来治疗或预防与特定炎症相关的症状。该组合物可治疗性地服用以获得治疗效果或预防性地服用以获得预防效果。所述治疗效果是指根治或改善潜在的疾病，和/或根治或改善一种或多种与潜在的疾病有关的症状，以使病人报告在感觉或症状方面有改善，尽管该病人仍将可能受到潜在疾病的折磨。例如，遭受疼痛的病人服用本发明所述组合物，其带来的治疗效果不仅体现于当潜在的症状被根除或改善时，而且体现于当该病人报告与该疼痛相关的身体不适的严重程度或持续时间减少时。

对于预防性服用，该组合物可用于处于正在发展为前述症状之一的风险中的病人。

该组合物服用的剂量将依赖多种因素，包括，例如，接受治疗的特定适应症、给药方式、所期望的效果是预防性的还是治疗性的、接受治疗的适应症的严重程度以及病人的年龄和体重等等。有效剂量的确定在所属领域技术人员的能力范围之内。

所述ALAC和/或ALFA组合物的总剂量将代表性地处于0.0001mg/kg/天或0.001mg/kg/天或0.01mg/kg/天到100mg/kg/天范围之内，但是，根据其它因素中的组分活性、其生物利用率、给药方式以及上述讨论过的多种因素，其可以更高或更低。可分别调整用药剂量和间隔，以使所述化合物的血浆水平足以维持治疗性或预防性效果。例如，根据其他情况中的给药方式、被治疗的特定适应症和医嘱，所述化合物可以每周服用一次，每周服用数次(例如，每隔一天)，每日服用一次或每日服用多次。所属领域技术人员不需要非常规实验就可以优化有效局部用量。

因此，下列1-63段规定了本发明的多个方面。在一个实施例中，第一段(1)中，本发明提供了一种组合物，其包含低聚态硫辛酸和平衡离子的合成物。

2.段1所述的组合物，其所述合成物是一种盐。

3.段1所述的组合物，其所述合成物是低聚态硫辛酸和平衡离子形成的一种缔合体。

4.段3所述的组合物，其中所述缔合体为鳌合物。

5.段1所述的组合物，其中所述平衡离子为碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、亚烃基二胺、单取代胺、二取代胺、或三取代胺。

6.段1所述的组合物，其中所述平衡离子为一种氨基酸。

7.段6所述的组合物，其中所述氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

8.段1-7任一段所述的组合物，该组合物进一步包含一种硫辛酸盐。

9.段8所述的组合物，其中所述硫辛酸盐含有一种氨基酸。

10.段9所述的组合物，其中所述硫辛酸盐中的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

11.段1-10任一段所述的组合物，该组合物为固态形式。

12.段1-10任一段所述的组合物，该组合物进一步包含液态载体。

13.一种组合物，包含：

一种含有通式(I)所示的低聚态硫辛酸合成物：

其中每个R⁺独立地表示一个平衡离子，并且n为2-50之间的数值。

14.段13所述的组合物，其中所述合成物为一种盐。

15.段13所述的组合物，其中所述合成物为低聚态硫辛酸和平衡离子形成的一种缔合体。

16.段15所述的组合物，其中所述缔合体为鳌合物。

17.段13所述的组合物，其中每个R⁺独立地表示为碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、亚烃基二胺、单取代胺、二取代胺、或三取代胺。

18.段13所述的组合物，其中每个R⁺为氨基酸。

19.段18所述的组合物，其中所述氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

20.段13-19任一段所述的组合物，该组合物进一步包含一种硫辛酸盐。

21.段20所述的组合物，其中所述硫辛酸盐含有氨基酸。

22.段21所述的组合物，其中所述硫辛酸盐中的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

23.段13-22任一段所述的组合物，该组合物为固态形式。

24.段13-22任一段所述的组合物，该组合物进一步包含一种液态载体。

25.一种组合物，包含：一种重均分子量在大约412.6至大约10268.5道尔顿之间的低聚态硫辛酸与一种平衡离子的合成物。

26.段25所述的组合物，其中所述合成物为一种盐。

27.段25所述的组合物，其中所述其合成物为低聚态硫辛酸和平衡离子形成的一种缔合体。

28.段27所述的组合物，其中所述缔合体为鳌合物。

29.段25所述的组合物，其中所述平衡离子为碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、亚烃基二胺、单取代胺、二取代胺、或三取代胺。

30.段25所述的组合物，其中所述平衡离子为氨基酸。

31.段30所述的组合物，其中所述氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

32.段25-31任一段所述的组合物，该组合物进一步包含一种硫辛酸盐。

33.段32所述的组合物，其中所述硫辛酸盐含有一种氨基酸。

34.段33所述的组合物，其中所述硫辛酸盐中的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

35.段25-34任一段所述的组合物，该组合物为固态形式。

36.段25-34任一段所述的组合物，该组合物进一步包含一种液态载体。

37.一种通过下述方法制备的低聚态硫辛酸合成物：

a)碱与硫辛酸在水溶液中反应；

b)将溶液在较高温度下保持大约1-5小时；然后

c)通过加入一种非溶剂，从水溶液中析出一种硫辛酸和碱平衡离子的合成物。

38.通过段37所述方法制备的低聚态硫辛酸合成物，进一步包含步骤：

d)收集析出的合成物。

39.段37或38所述的低聚态硫辛酸合成物，其中所述反应温度在大约30℃-50℃。

40.段37-39任一段所述的低聚态硫辛酸合成物，其中所述溶液在较高温度下保持大约3小时。

41.段37-40任一段所述的低聚态硫辛酸合成物，其中所述非溶剂为醇、氯代烃、脂肪酮、脂肪醚、烷烃、芳烃或其混合物。

42.段41所述的低聚态硫辛酸合成物，其中所述非溶剂为乙腈、二氯甲烷、丙酮、2-丙醇、二乙醚、己烷、辛烷、甲苯、石油醚、四氢呋喃、辛醇、苯、二氧六环或其混合物。

43.段37-42任一段所述的低聚态硫辛酸合成物，其中所述碱为氨基酸。

44.段43所述的低聚态硫辛酸合成物，其中所述含有氨基酸的水溶液是通过向含有氨基酸盐酸盐的水溶液中加入NaOH至pH值为(I-0.4)-(I+0.4)来制得，其中所述的I为氨基酸的等电点。

45.段44所述的低聚态硫辛酸合成物，其pH值为(I-0.1)-I。

46.段37-45任一段所述的低聚态硫辛酸合成物，其水溶液具有9.5-10.0的pH值。

47.段43-46任一段所述的低聚态硫辛酸合成物，其中所述氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

48.段37-47任一段所述的低聚态硫辛酸合成物，其进一步含有硫辛酸的氨基酸盐。

49.段48所述的低聚态硫辛酸合成物，其中所述硫辛酸盐中的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸、赖氨酸或其混合物。

50.段1-49任一段所述的物质，其熔点为大约165-170℃。

51.段1-49任一段所述的物质，当0.5g该物质溶解于20mL中性水中时，其pH值为大约7.5。

52.段1-49任一段所述的物质，其中所述的硫辛酸和/或低聚态硫辛酸和/或通式(I)是R-对映体。

53.段1-49任一段所述的物质，其中所述的硫辛酸和/或低聚态硫辛酸和/或通式(I)是S-对映体。

54.段1-49任一段所述的物质，其中所述的硫辛酸和/或低聚态硫辛酸和/或通式(I)是外消旋体。

55.段6、7、9、10、18、19、20、21、30、31、32、33和段43-49中任一段所述的物质，其中所述的硫辛酸和/或低聚态硫辛酸和/或通式(I)是L-构型。

56.一种药物组合物，含有段1-11、段13-23、段25-35和段37-55中任一段所述物质和一种药剂学上可接受的载体。

57.一种组合物，含有：

通式(Ia)所示的低聚态硫辛酸：

其中n为大约2-50之间的数值。

58.一种药物组合物，含有段57所述的低聚态硫辛酸和一种药剂学上可接受的载体。

59.一种含有通式(II)所示的混合态低聚α-硫辛酸合成物的组合物：

其中，n为大约2-50之间的数值；并且每个R¹独立地为一个氢原子或平衡离子，且至少一个R¹为平衡离子。

60.一种药物组合物，含有段59所述的混合态低聚硫辛酸合成物和一种药剂学上可接受的载体。

61.一种稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，含有段1-11、段13-23、段25-35、段37-55、段57和59中任一段所述的低聚态组合物和一种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的混合物。

62.段61所述的稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，其中所述低聚态组合物包覆于类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物上。

63.一种用于稳定类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的方法，包括步骤：

将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与段1-11、段13-23、段25-35、段37-55、段57和59中任一段所述的低聚态组合物接触，以使类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物稳定。

下列实施例不意为对本发明的限制，而是为本发明提供补充信息和支持。

在下面的实施例中，将更详细地讨论以鸟氨酸作为氨基酸残基的通式I所示的低聚态化合物。该化合物将用术语″LAORN″表示。

LAORN的溶解性

LAORN在水中具有高溶解度(大于10％，质量/质量)，但在有机溶剂中不能很好的溶解。

硫辛酸和鸟氨酸之间的用量比为1∶1的实例：

根据理论计算，1分子[鸟氨酸(+)硫辛酸(-)]应该包含39％的鸟氨酸。鸟氨酸带有二个氮原子。1g上述分子的含氮量为83.4mg/g。根据Kjeldhal分析法，含氮量的测定为86.1mg/g。这为低聚态物质中1∶1的比例提供了证据。

硫辛酸的含硫五元环的消失

该硫辛酸中的含硫环在约320nm处具有一吸收谱带，其也存在于已知硫辛酸盐(例如钾盐、钠盐)的溶液中。当新的低聚态物质LAORN在水中溶解以后立即测量时，其缺乏320nm处的吸收，表明在新的低聚态物质制备期间所述的含硫环是敞开的。

α-硫辛酸的离解

当溶解于水时，LAORN显示出7.5的pH值。来自LAORN的硫辛酸的释放与时间的关系在图1中描述。

LAORN的溶解性

测试LAORN在不同溶剂中的溶解度并和α-硫辛酸的溶解度比较。结果在下表1中显示：表1：LAORN的溶解性

溶剂	LAORN	硫辛酸
			水	可溶	部分可溶
乙酰氯	部分可溶	可溶
			乙腈	不溶	可溶
二氯甲烷	不溶	可溶
			2-丙醇	不溶	可溶
丙酮	不溶	可溶
			二乙基醚	不溶	可溶
己烷	不溶	不溶
			辛烷	不溶	不溶
甲苯	不溶	-
			石油醚	不溶	-
四氢呋喃	不溶	-
			辛醇	不溶	-
苯	不溶	-
			二氧杂环乙烷	不溶	-

溶解度模型表示一种盐。最有趣地是，相对于α-硫辛酸，LAORN具有很好的溶解度(大于10％)。

傅立叶变换红外光谱(FT-IR)：

图2和3分别(固体KBr片)显示了α-硫辛酸(图2)和LAORN(图3)的FT-IR谱图。

该谱图表明LAORN中不存在α-硫辛酸。所述的二硫键桥含硫环的典型FT-IR谱带在LAORN内消失，该谱带存在于硫辛酸中(在1693cm^-1处出现)。

核磁共振谱图(NMR)：

图4提供了LAORN的¹H核磁共振谱图(CDCl₃液体)。

指示游离态的氨基酸-CH-质子的谱带在3ppm浓度下以三重态存在是可见的。这证明了氨基酸没有以化学键结合到硫辛酸残基上(没有酰胺键)。

LAORN其他的特性

当向LAORN(大于5％，质量/质量)的浓溶液中加入少量酸(不考虑酸的种类)时，橡胶状物质立即形成。当向LAORN(小于1％，质量/质量)的较稀溶液中加入少量酸(不考虑酸的种类)时，一种稳定乳状液立即形成。

因为不溶于二乙醚，LAORN可溶于水并用二乙醚萃取。在这个条件下，通过薄层色谱法没有鉴定出任何物质，所以可以排除聚合体的存在。UV/VIS光谱表明，LAORN溶于水中在320nm处没有任何吸收。当LAORN一溶解就立即测量。这证明在LAORN中不存在硫辛酸(含硫五元环)。

该产品肯定地与邻苯二醛反应，也是一种人造的硫辛酸和鸟氨酸混合物。这些观察结果提供了至少一些游离硫醇基的逸出以及游离氨基酸官能团存在的可能性。在这方面硫辛酸反应相似。

LAORN显示出与FeSO₄(褐色Fe(OH)₃)发生即时反应。

过滤得到清液，其加入酸时，不会产生任何聚合体。这些表明，LAORN可被还原，从而其聚合过程可被阻滞。

当LAORN用巯基乙醇处理时，发现硫辛酸和二氢硫辛酸的比例为1∶5。相反，硫辛酸用巯基乙醇处理产生的比例为1∶0.6。这有助于表明LAORN中分子间-S-S-键的存在。

在中性溶液中用H₂O₂处理的LAORN，通过HPLC鉴定，产生了不带有其他峰的硫辛酸。在中性溶液中用H₂O₂处理的硫辛酸产生了比硫辛酸早的一个重要清晰的峰。经证实，鸟氨酸的存在/不存在不影响这个峰，通过鸟氨酸单独处理也看不到影响。这有助于证实LAORN不同于硫辛酸。

文献中描述了硫辛酸与对应的硫代亚磺酸盐和硫代磺酸盐的氧化作用。因此，再一次排除了LAORN中硫辛酸的存在。LAORN在碱性溶液中用NaBH₄处理几乎立即产生了二氢硫辛酸100％的理论值。

LAORN的氧化能力

使用一种已制定好的测试试验，来测试LAORN的总抗氧化能力。该测试试验(Calbiochem，产品目录号码615700)测定一种特定化合物抑制自由基形成的能力。2，2′-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑啉-6-磺酸)二铵盐(ABTS)与肌红蛋白的氧化作用产生了ABTS⁺自由基被选择。该自由基的形成可以通过分析在600nm处的吸光率进行监测。在自由基清除剂没有引入的地方，自由基快速地生长。反之，如果具有自由基清除特性的化合物存在，在600nm处谱带的发展是被抑制的。该结果依照一种标有1.78mmol抗氧化剂浓度的标准品被校准。

样品制备：

纯α-硫辛酸和鸟氨酸以及(LAORN)被溶解于水并用NaOH调节pH值为7.5。测得下列浓度：

6.1mgα-硫辛酸/10mL

3.9mg鸟氨酸/10mL

6.1mg-硫辛酸+3.9mg鸟氨酸/10mL

10mg LAORN/10mL。

根据α-硫辛酸和鸟氨酸的1∶1的摩尔比选择浓度。全部4个样品因此包含3mmol的对应化合物。测试中，设置2.5、5和10毫克LAORN/10mL(相当于0.75，1.5和3mmol)用于研究剂量比例响应的判定。每个样品测试3次，结果以平均值提供。3次测定的精度高于3％。

结果

当和纯硫辛酸、鸟氨酸、硫辛酸和鸟氨酸的等克分子混合物对比时，图5显而易见LAORN的协同作用。

LAORN的效力比硫辛酸高出大约7倍，比硫辛酸和鸟氨酸混合物高出大约4.5倍。

图6显示了LAORN的不同浓度的结果。

可以发现LAORN的总抗氧化能力与剂量比例呈线性增长关系。

亚油酸自动氧化的抑制

这些试验是基于测定50℃下亚油酸加速的自动氧化的抑制进行的。结果可以表示为，当对比消极控制(没有抑制)时，自动氧化的相对感应关系。

作为一种积极控制(完全抑制)，引入了10mM丁基-羟基甲苯(BHT)/L。每个样品制备3次。

图7显示了获得下列浓度感应的时间过程：

5mM硫辛酸(“LA”)/L

5mM鸟氨酸(“ORN”)/L

5mM硫辛酸/L+5mM鸟氨酸/L和

10mM LAORN。

另外，该图显示了在1.5处的一个阈值，表明感应周期(数值以下表明保护；数值以上表明不再保护)。

积极控制显示了在50℃抑制亚油酸的自动氧化72小时。同样地，5mM硫辛酸/L在测试周期内产生了完全的保护。正如所料，消极控制在12小时的潜伏期后，产生了相当多的自动氧化。

在12小时的潜伏期后，5mM鸟氨酸/L获得的结果强烈地表明鸟氨酸对亚油酸的自动氧化没有保护作用。

鉴于10mM LAORN/L被发现产生完全保护作用，5mM硫辛酸/L和5mM鸟氨酸/L的混合物被发现是其保护性能的边界。

图8显示了获得50mM硫辛酸/L、50mM鸟氨酸/L、50mM硫辛酸/L+50mM鸟氨酸/L和100mM LAORN/L感应值的时间过程。

该积极控制显示出在50抑制亚油酸的自动氧化72小时。同样地，50mM硫辛酸/L在测试周期内产生了完全保护。正如所料，在12小时的潜伏期后，消极控制产生了相当多的自动氧化。

在24小时的潜伏期后，50mM鸟氨酸/L的结果强烈地表明鸟氨酸对亚油酸的自动氧化没有保护作用。

50mM硫辛酸/L和50mM鸟氨酸/L和100mMLAORN/L的混合物发现产生了完全保护。

方法

控制：H₂O(消极)

丁基-羟基甲苯(积极)10、50和100mg/10mL(H₂O，pH＝8.0)

样品：a)硫辛酸0.1、0.61、1、5、6.1和10mg/mL(H₂O，pH＝8.0)

b)鸟氨酸0.1、0.39、1、3.9、5和10mg/mL(H₂O，pH＝8.0)

c)硫辛酸+鸟氨酸0.1、1、5和10mg/1mL(H₂O，pH＝8.0)在每个水平比例为61/39。

d)LAORN 0.1、1、5和10mg/10mL(H₂O，pH＝8.0)

试剂：25mL 0.1M磷酸钠缓冲液，pH＝7.0

350mg亚油酸/25mL乙醇(95％)

乙醇75％

3.5％(mg/ml)盐酸

1.5g硫氰酸铵/5mL H₂O

25.0mg氯化亚铁/10mL 3.5％HCl

样品培育：

0.25mL每种样品+0.5mL缓冲液+0.5mL亚油酸溶液被转入带有密封螺旋帽的2mL塑料小瓶中。每个样品制备3次。

样品在光保护下于50℃培育。

在零时以及12、24和72小时后测试自动氧化。

测试分析：将25μL经培养的样品与1.20mL 75％乙醇、25μL硫氰酸铵和25μL氯化亚铁混合。

混合3分钟后在500nm处读吸收值。

还原能力的分析结果：

该分析基于将3价铁还原为2价铁。结果以和控制组比较的还原％表示，控制组还原5mg/mL浓度下的全部3价铁。

图9提供了还原能力分析的结果。

此外，表2总结了还原能力分析的结果。表2

图例：LA...硫辛酸，ORN...鸟氨酸，LA+ORN...硫辛酸和鸟氨酸的等克分子混合物，LAORN，Control是NaBH₄。

在进一步测试中，分别地在5mM/L浓度下分析硫辛酸和鸟氨酸。此外，测试由5mM/L硫辛酸和5mM鸟氨酸/L组成的硫辛酸和鸟氨酸混合物。最后，测试10mM/L的LAORN。如图10所示，LAORN具有一种强烈的协同效应，当和硫辛酸与鸟氨酸的简单混合物比较时。

制备方法：

例1：

16.8g(0.1mol)L-鸟氨酸-盐酸-盐溶解于160mL水中。搅拌该溶液直到L-鸟氨酸-盐酸-盐全部溶解。溶液的pH值为4.6。

将4g(0.1mol)NaOH加入上述溶液。搅拌混合物直到NaOH全部溶解。该溶液的pH值为9.6。

20.6克α-硫辛酸(0.1mol)缓缓加入上述溶液。搅拌混合物直到该α-硫辛酸全部溶解。

混合物在40℃下保持3-5小时。在这一过程的最后，溶液在减压(50℃，真空度为0.09MPa)下浓缩，直至去除50％的水。通过这样做，原料内全部可能的有机溶剂将被蒸发掉。这个过程大约为5小时。剩余溶液的体积大约为100mL，其pH值为7.5。

将1250mL乙醇(95％)注入该浓缩溶液。搅拌得到的溶液，并有白色析出物形成。该溶液含水率控制在11％以下。过滤该溶液以获得析出物。该母液通过回收乙醇能再次使用，以获得进一步产物。

析出物在大约35℃下干燥6小时。根据本发明所述，获得27克LAORN产物。

外观：浅黄色粉末

熔点：165～170℃

pH值：7.56(0.5g溶于20mL水)

反应时间、试剂浓度和温度的影响

涉及反应时间、试剂浓度和温度影响的几个试验被实施。依据反应溶液的比旋光度，测量α-硫辛酸起始原料的聚合度。通过硫辛酸的齐聚，该硫辛酸的-S-S-键断裂，其相当于在比旋光度方面的变化。比旋光度越低，按照本发明所述的齐聚化合物的形成越多。

旋光度的测定(旋光计，类型：WZZ-3，制造商：上海精密科学仪器有限公司)

0.2544g的LAORN(实施例1样品)放入25mL容量瓶并用去离子水稀释到总体积为25mL，得到最终浓度为0.1076g/100ml。)去离子水用作控制组并测定其旋光度。然后测试LAORN的含水样品，发现样品具有一特定的旋光度5.45°。

图11显示了反应时间和温度对LAORN形成的影响。

可见在较低温度下LAORN的形成较多。可是，溶液的粘度在某种程度上限制了最低温度。因此，30℃到50℃的温度被认为是最理想的。

此外，图11似乎显示在特定的反应条件下，反应3小时后，没有明显产生LAORN。

图12显示了两种反应物[LA+ORN]浓度(浓度为每个反应物浓度之和，且其摩尔比为1∶1)对LAORN形成的影响。发现浓度较高时，LAORN的形成较多。可是，再一次地，溶液的高粘度限制了最大浓度。因此，优选的浓度为25％-35％(质量/体积)。

LAORN中的硫辛酸平均聚合度通过碘量滴定法测定

测试原理

碘可以定量地氧化巯基(-SH)。过量的碘通过Na₂S₂O₃标准溶液用滴定法测量。通过测量碘的消耗量，可以测定体系内-SH基的含量，然后可计算出平均聚合度。

反应物

全部分析试剂均为分析纯级。使用去离子水。

盐酸(HCl)溶液：用36％浓盐酸和去离子水(体积比为1/1)制备。

重铬酸钾(K₂Cr₂O₇)标准溶液：在1000mL容量瓶中用去离子水烯释4903.0mg的K₂Cr₂O₇(在105℃干燥2小时)。

淀粉-碘指示剂：1g可溶性淀粉加足量的水形成糊状。该浆状物加水冲淡至100mL。

Na₂S₂O₃标准溶液

制备

24.5g Na₂S₂O₃·5H₂O和0.2g Na₂CO₃溶解于水，转移至1000mL棕色玻璃容量瓶并用水稀释至容量刻度。最终溶液混合充分。

滴定

反应方程式3Na₂S₂O₃+K₂Cr₂O₇+6HCl→2Cr(OH)SO₄+4NaCl+3S+Na₂SO₄+2KCl

1g碘化钾(KI)和5mL水被加入250mL碘量瓶中，该瓶中已加入15.00mLK₂Cr₂O₇标准溶液和5mL盐酸(体积比为11)至该烧瓶。将该烧瓶封闭，使溶液混合充分并在黑暗处静置5分钟。用Na₂S₂O₃溶液滴定该溶液至淡黄色，加入0.5mL淀粉-碘指示剂。当蓝色消失时滴定停止。记录标准溶液量，并同时用滴定法测量空白溶液。

按照下式计算Na₂S₂O₃标准溶液浓度：

c = \frac{a}{294.18} \cdot \frac{15.00}{(V_{1} - V_{2})} \cdot \frac{3}{1000}

a K₂Cr₂O₇重量，mgV₁ 用于滴定K₂Cr₂O₇溶液的Na₂S₂O₃溶液体积，mlV₂ 用于滴定空白溶液的Na₂S₂O₃溶液体积，ml

稀释

该Na₂S₂O₃溶液被稀释至使用前初始浓度的1/10。将1.27g碘和4.0g KI合并进入1000mL容量瓶并用水稀释至1000mL制备碘标准溶液。

测试方法

精确称量大约20mg样品，加入5mL DMF、5mL盐酸溶液(1/1，体积比)和10.00mL碘标准溶液。样品被密封并置于黑暗处10分钟，然后用Na₂S₂O₃溶液滴定测量。当溶液变成淡黄色，加入0.2mL淀粉-碘指示剂。继续滴定直到最终的蓝色消失。该体积记为V₄。

由于空白滴定，用10.00mL碘标准溶液、5mL盐酸溶液(1/1，体积比)制备空白样。滴定按照上述执行并记录体积V₃。

反应方程式

2Na₂S₂O₃+l₂→2Nal+Na₂S₄O₆

d = c \cdot (V_{3} - V_{4}) \cdot \frac{1}{10}

c＝Na₂S₂O₃溶液浓度，mol.L^-1

V₃用于滴定空白溶液的Na₂S₂O₃溶液的体积，ml

V₄用于滴定样品的Na₂S₂O₃溶液的体积，ml

按照下式计算平均聚合度n：

\overset{&OverBar;}{n} = \frac{M}{338.51} \cdot \frac{1}{d}

M LAORN的重量，mg

游离硫辛酸的校正

因为样品中存在一些游离(未聚合的)硫辛酸，这一部分硫辛酸在计算中需要说明。这一校正按照如下过程进行：

称量2、5、7、10、15、20mg硫辛酸标准品，定容到10mL并用HPLC、紫外检波器在220波长处分析。

按照如下数据制备校准特性曲线(参见图20)：

硫辛酸用量/mg	HPLC峰面积/mAs
		2.015.147.1110.0215.2020.14	143.2356.8497.5701.01051.41401.8

硫辛酸消耗的碘的校正

在滴定过程中，硫辛酸将渐渐开环并也将消耗一些碘。为了精确测定平均聚合度，这一点也需要在测量碘吸收中说明。

称量0.5、1、5、7、10、15、20mg硫辛酸标准品并用上述方法测量，以计算每个样品的耗碘量。结果被提供于下表和图21中：

硫辛酸用量/mg	耗碘量/mmol
		0.531.045.097.1110.0215.2020.14	0.000570.001050.004120.005730.007940.009050.00981

试验例

标准溶液制备

将K₂Cr₂O₇反应物(在105℃干燥2小时)5373.4mg加入1000mL容量瓶中并用水稀释至刻度，制备重铬酸钾(K₂Cr₂O₇)标准溶液。

将1.274g碘和4.0gKI合并入1000mL容量瓶中，并用水稀释，制备碘标准溶液。将溶液混合充分。

用水将24.5g Na₂S₂O₃·5H₂O与0.2g Na₂CO₃合并，转移至1000mL棕色玻璃容量瓶中并用水稀释至刻度，制备Na₂S₂O₃标准溶液。将溶液混合充分。通过滴定，K₂Cr₂O₇标准溶液消耗量是16.8mL。由此Na₂S₂O₃标准溶液的浓度被测定为0.0489mol/L^-1。

样品测试

根据上述试验方法，20.64mg的LAORN(来自实施例1)消耗7.3mL的Na2S2O3溶液，因此碘消耗量是0.0145mmol。因此其平均聚合度n为4.21。

结果校正

游离硫辛酸校正

样品重量为100.08mg。HPLC提供了硫辛酸的峰面积是297.9mAs，因此测定样品含有大约4.3％游离的硫辛酸。这个数量从样品重量M中扣除。

耗碘量的校正

因为用于滴定的样品是20.64mg，游离硫辛酸是0.888mg，所以耗碘量的校正值是0.0009mmol。其从耗碘量d中扣除。

在包含两个校正值后，修正的平均聚合度测定为大约4.17。

实施例(钠-硫辛酸)

0.1mol NaOH溶于160mL水中，缓慢加入20.6gα-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在α-硫辛酸全部溶解后，该混合物在40℃维持3小时。该溶液在50℃减压(真空度在-0.09兆帕)浓缩直到去除大约50％的水。

浓缩溶液中注入1250mL乙醇(95％)。所得溶液搅拌形成白色析出物。收集该析出物然后在大约35℃干燥6小时。所得析出物经测定是具有平均聚合度为大约14(测定通过上述试验方法)的钠-硫辛酸盐。

实施例(钾-硫辛酸)

0.1mol KOH溶于160mL水，缓慢加入20.6g α-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在α-硫辛酸全部溶解后，该混合物在50℃维持5小时。该溶液在50℃减压(真空度在-0.09兆帕)浓缩直到去除大约50％的水。

浓缩溶液喷雾干燥以提供具有平均聚合度为大约14(测定通过上述试验方法)的钾-硫辛酸盐。

实施例(铵-硫辛酸)

0.1mol氨水溶于160mL水，缓慢加入20.6gα-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在α-硫辛酸全部溶解后，该混合物在45℃维持5小时。该溶液在50℃减压(真空度在-0.09兆帕)浓缩直到去除大约50％的水。

浓缩溶液喷雾干燥以提供具有平均聚合度为大约11(测定通过上述试验方法)的钾-硫辛酸盐粉末。

实施例(乙二胺-硫辛酸)

0.1mol乙二胺溶于160mL水中，缓慢加入20.6gα-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在α-硫辛酸全部溶解后，该混合物在40℃维持5小时。该溶液在50℃减压(真空度在-0.09兆帕)浓缩直到去除大约50％的水。

浓缩溶液中注入1250mL乙醇(95％)。所得溶液搅拌形成白色析出物。收集该析出物然后在大约35℃干燥6小时。所得析出物经测定是具有平均聚合度为大约8(测定通过上述试验方法)的钠-硫辛酸盐。

实施例(二乙胺-硫辛酸)

0.1mol二乙胺溶于160mL水，缓慢加入20.6gα-硫辛酸(0.1摩尔)并搅拌。在α-硫辛酸全部溶解后，该混合物在50℃维持5小时。该溶液在50℃减压(真空度在-0.09兆帕)浓缩直到去除大约50％的水。

实施例(钙盐)

7.4g(0.1mol)氢氧化钙和160mL水中加入20.6g(0.1mol)硫辛酸。反应混合物中出现淡黄色析出物。该混合物在大约50℃保持大约4小时。该混合物在减压下浓缩直到去除大约50％的水。析出物经过滤，用50mL水洗涤，然后真空干燥。其聚合度大约为4(通过上述试验方法测定)。

实施例(喹啉-硫辛酸)

12.9g(0.1摩尔)喹啉和50ml水中加入20.6g(0.1摩尔)硫辛酸。反应混合物搅拌大约30分钟后在50℃真空条件下干燥大约2小时去除水。所得产物真空干燥。平均聚合度大约为4(通过上述试验方法测定)。

实施例(异喹啉-硫辛酸)

0.1mol异喹啉和50mL水中加入20.6g(0.1摩尔)硫辛酸。反应混合物搅拌大约30分钟后在50℃真空条件下干燥大约2小时去除水。所得产物真空干燥。平均聚合度大约为4(通过上述试验方法测定)。

LAORN与硫辛酸比较的CACO-2吸收试验

方法

CaCo-2细胞的培养

CaCo-2细胞是在Dulbeccos′s Modified Eagle Medium细胞培养基中培养，在37℃下5％的CO₂和95％空气构成的环境中，该培养基含有20％胎儿牛血清、1.2％非必需氨基酸、0.83mM L-谷酰胺、1.2％青霉素-链霉素和0.1％巯基乙醇。

细胞生长在75cm²培养瓶(T75)和在一星期后传代培养(每隔一天用PBS缓冲液洗涤，移除胰蛋白酶并转移至一新培养瓶)。

CaCo-2试验

为了实验，细胞以每孔3×105细胞密度接种于6孔板中，在37℃下5％的CO₂和95％空气构成的环境中生长7-8天，直到达到confluency。细胞用PBS缓冲液洗涤，用4mL含有硫辛酸(1mg/mL培养基)或LAORN(1.45mg/mL培养基)的培养基培养30和60分钟。

培养之后，细胞用PBS缓冲液洗涤并用1mL PBS缓冲液移除。细胞超声处理3次30秒，离心10分钟并丢弃颗粒。上层清液用作样品进一步分析。

对于稳定性研究，该培养基在37℃培养1小时。然后，该培养基离心处理用来进一步分析。

用于分析的样品制备

a)游离硫辛酸和二氢硫辛酸的分析

样品被提交至HPLC分析，如下所述进一步的样品制备。

b)硫辛酸和LAORN到二氢硫辛酸的还原

1mL样品(培养基或细胞)与1mL NaBH₄混合(200mg/100mL NaOH)并在60℃培养10分钟。然后加入2mL 2M盐酸并用3×2mL二乙醚萃取。混合有机相蒸发并与1mL流动相重组。

HPLC分析

柱：Hypersil ODS(250×4.6mm)

流动相：含有40％乙腈的水

流速：0.8ml/min

检测：220nm

注射体积：50μl

表3，培养基中游离LA/DHLA的检测

Bld...低于检测极限

表4，培养基中总LA/DHLA的检测

Bld...低于检测极限

如表5所示，30和60分钟后，游离LA/DHLA重新获得。意料之中的是，用硫辛酸培育之后重新获得的游离LA/DHLA的数量，显著高于用LAORN培育之后的游离LA/DHLA的数量。可是，这些结果提供了LA从LAORN中缓释的证据，因为在培养基中游离LA/DHLA是可以鉴定的。

表5，细胞中游离LA/DHLA的检测

	30min	60min	30min	60min
					LA(mg/ml)	0.49	0.54	0.24	0.31
DHLA(mg/ml)	0.14	0.33	0.04	0.03
					合计	0.63	0.87	0.28	0.34

表6提供了在用LA或LAORN培育之后，重获的总LA/DHLA结果。正如所见到的，可以发现，当与经LA培育之后的数量比较时，总LA的数量显著高于LAORN培育之后的数量。这些发现支持LAORN以低聚态吸收的概念。

表6，细胞中总LA/DHLA的检测

	30min	60min	30min	60min
					LA(mg/ml)	bld	bld	bld	bld
DHLA(mg/ml)	0.69	0.92	1.48	1.75
					合计	0.69	0.92	1.48	1.75

这些得到的结果提供了LAORN以低聚态形式被吸收的证据。根据用LAORN培养的细胞内的游离态和总LA/DHLA的比较，可以推导出，在细胞内发现的大约80％的总LA/DHLA以低聚态形式被吸收。

在选定的试验条件下，证实了用硫辛酸培育60分钟之后，细胞内可重新获得9.39％，而在相同的条件下，用LAORN培育之后重新获得了17.3％。鉴于硫辛酸存在于细胞溶液中，可以测定，与LAORN相比，在体内条件下，更少溶解LA的地方，吸收的差异甚至可能更高并更有利于LAORN。

结果：

样品中存在的LA和DHLA的数量(被认为是“游离态LA/DHLA”)与相同样品在LA和LAORN还原为DHLA后(被认为是“总LA/DHLA”)观察到的数量相比较。

如表5所示，培养基中LA和LAORN的培养，产生了不同数量的游离态LA/DHLA。这些发现支持了在测试分析条件下，LAORN保留了它的低聚态结构。

如表4所见，在还原为DHLA之后，LA和LAORN均可以几乎完全地重新获得；因此LA和LAORN在测试分析条件下被认为是稳定的。

硫辛酸涂层的聚合度

原料

硫辛酸(LA) Sigma

硫酸钠 Sigma

无水乙醇Sigma

实验

3.0g硫辛酸(14.5mmol)溶于100g无水乙醇并加入5g硫酸钠。该混合物搅拌10分钟并过滤。测定剩余物的湿重。该剩余物真空干燥并测量其干重。

干燥硫酸钠中硫辛酸含量经测定含有大约3.5％硫辛酸(重量/重量)。

例如，该硫辛酸/硫酸钠剩余物在50℃下经历1小时以干燥干燥所述包埋的硫酸钠。平均聚合度通过碘滴定法测定。下表提供了聚合度、干燥时间和温度。

结果

平均聚合度	LA/％	干燥方法
			2.21^*	3.2	室温
3.57	3.4	50℃持续0.5小时
			3.24	3.1	50℃持续1.0小时
4.15	3.5	50℃持续1.5小时

^*：大约80％的硫辛酸为游离态，非聚合形式LA/％是指基于总重量(例如，硫辛酸和硫酸钠合起来)的硫辛酸的重量百分数

讨论

测定硫酸钠表面上的硫辛酸在最小温升下的齐聚。人们注意到，增加加热循环持续时间可增大聚合度。如果涂层是在室温下干燥，平均聚合度很难测定，大部分硫辛酸继续以非齐聚硫辛酸存在。

叶黄素-酯在人造胃酸中的消化分解：

叶黄素-酯是天然存在的叶黄素衍生物。游离叶黄素可被光、温度和/或氧降解。另外，叶黄素可在口腔摄入之后的消化过程中降解。叶黄素-酯被认为在消化过程期间增加了叶黄素的稳定性。

为了进一步增加叶黄素-酯稳定性，叶黄素-酯用如上所述硫辛酸包覆，如同硫酸钠。该涂层的聚合度不可直接测定，因为大量的碘将被叶黄素酯消耗。聚合度可以通过测定叶黄素酯消耗的碘的数量，如果需要，(但是没有做)，间接计算得到。该数值然后能用于测定涂层的聚合度，但是叶黄素和碘之间的反应很复杂，所以很难在实验室中进行。因此，假设该硫酸钠″模型″提供了一个包覆类胡萝卜素物质的涂层的聚合度的合理数值。

方法

在250mL圆底烧瓶中称量10±0.5mg叶黄素-酯，加入100mL人造胃液或肠液。当悬浮液连续搅拌的同时，烧瓶在37℃下避光放置。在选定的时间点(0、40、60、80、100分钟)，叶黄素-酯被萃取进入TBME(叔丁基甲醚)(3×30mL)。如果切实可行，在用TBME萃取之前，取5mL样品用于硫辛酸的测定。在调整pH到9.0(KOH)并在56℃培育60分钟之后，通过HPLC测定硫辛酸。

合并的TBME萃取物用TBME填充至100mL，1∶25稀释并相对于溶剂在450nm处通过UV/VIS光谱测量吸光度(如果必要，样品被稀释至获得0.9000以下的吸收值)。该吸光度通过实际样品重量被折算为吸收/mg样品。

合并的TBME萃取物也被注入到HPLC-系统以定性地证实叶黄素-酯的存在，并跟踪在酯万一水解情况下推定的叶黄素的增加。

叶黄素-酯样品

1)未包覆的叶黄素-酯

2)用1％硫辛酸包覆的叶黄素-酯

3)用3％硫辛酸包覆的叶黄素-酯人造消化液的组成

HPLC

泵：洗脱HPLC-泵

柱：YMC C-30250×4.6mm

流动相：TBME/甲醇＝50/50(体积比)

流速：1mL/min

温度：：30℃

检测：450nm(UV/VIS检测器)

结果

图13和14显示了未包覆的叶黄素-酯在人造胃液或人造肠液中的稳定性。正如所见到的，未包覆的叶黄素-酯在胃消化期间是稳定的，而在肠消化100分钟内观察到20％的分解。

图15和16(非齐聚态)显示了用1％齐聚的硫辛酸包覆的叶黄素-酯在人造胃液或人造肠液中的稳定性。正如所见到的，用1％硫辛酸包覆的叶黄素-酯在胃和肠消化期间是稳定的。

结论：

未包覆的叶黄素-酯在pH＝2.0(人造胃液)发现是稳定的，因此涂层在胃酸消化期间不受影响。另一方面，使用了1％或3％硫辛酸的涂层在模拟的肠消化期间阻止降解。可看到没有浓度依赖效果。

根据硫辛酸的初步测定，该涂层在pH＝2.0是稳定的，在pH＝7.5被降解。

硫辛酸和柠檬酸在保护叶黄素中的比较

实验

1.0g柠檬酸与5g叶黄素酯加入100g无水乙醇。该混合物搅拌10分钟并过滤。测定剩余物的湿重。该剩余物真空干燥并测定干重。叶黄素酯中柠檬酸的含量经测定含有大约1％柠檬酸(重量比)。

干燥后的柠檬酸与叶黄素酯混合物升温至50℃保持24小时。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。

按照上述方法制备并干燥低聚硫辛酸包覆的叶黄素酯，不同之处在于用硫辛酸代替柠檬酸。

结果

样品名称	残基率/％
		空白样	8.8
1％柠檬酸包埋样品	90.9
		5％柠檬酸包埋样品	95.9
1.5％硫辛酸包埋样品	97.8

“空白样”是经受50℃高温24小时处理的叶黄素酯。“残基率/％”指实验之后叶黄素的含量与实验前的比值。

结论

相对于未处理的叶黄素样品(空白样)，柠檬酸包覆的叶黄素酯被发现是稳定的。

柠檬酸的保护作用小于低聚的硫辛酸涂层，特别是在考虑重量基础时。

在保护叶黄素酯中硫辛酸和多酚的比较

实验

1.0g没食子酸与5g叶黄素酯溶于100g无水乙醇。混合物搅拌10分钟并过滤。测定剩余物湿重。剩余物真空干燥并测定剩余物干重。

经测定，叶黄素酯中没食子酸含量为大约1％没食子酸(重量比)。

该没食子酸/叶黄素酯混合物然后被升温至60℃保持9小时。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。

按照上述方法制备并干燥低聚硫辛酸包覆的叶黄素酯，不同之处在于用硫辛酸代替没食子酸。

结果

样品名称	残基率/％
		空白样	-
1％没食子酸包埋样品^*	60.9
		2％白藜芦醇样品^**	62.1
3.5％硫辛酸包埋样品	95.8

^*：一种典型多酚^**：来自浆果和葡萄叶的多酚提取物“空白样”是经受60℃高温处理9小时的叶黄素酯。“残基率/％”是指实验之后叶黄素的含量与实验前的比值。

结论

低聚硫辛酸包覆的叶黄素酯是稳定的而且多酚也具有对叶黄素酯的保护作用。

硫辛酸和维生素E在保护叶黄素酯中的对比

实验

300mg叶黄素酯和30mgα-生育酚被加入灰泥，彻底磨碎并60℃下保持4小时。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。

通过彻底碾磨两种物质，然后60℃高温处理4小时，制备1％硫辛酸(基于酯的重量)包覆的叶黄素酯样品，从而提供含有叶黄素酯的低聚硫辛酸，以模拟酯的加速降解。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。

结果

样品名称	残基率/％
		空白样	24.1
1％α-生育酚样品	24.8
		10％α-生育酚样品	77.9
1％硫辛酸包埋样品	93.8
		4.7％硫辛酸包埋样品	94.5

“空白样”是经受60℃高温处理4小时的叶黄素酯。“残基率/％”是指实验之后叶黄素的含量与实验前的比值。

结论

低聚的硫辛酸和α-生育酚均可保护叶黄素酯避免降解，可是，所需的硫辛酸低聚物的数量比α-生育酚所需的数量少得多。

稳定叶黄素酯的方法

原料

叶黄素酯金盏花油脂提取物

硫辛酸Sigma

没食子酸Sigma

白藜芦醇Sigma

无水乙醇Sigma

实验

混合方法

300mg叶黄素酯和预先确定数量的硫辛酸被置于灰泥中，碾磨然后经60℃高温处理4小时。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。

包埋方法

3.0g硫辛酸(14.5mmol)与5g叶黄素酯溶于100g无水乙醇。该混合物搅拌10分钟并过滤。测定剩余物的湿重。真空干燥剩余物并测定剩余物干重。在叶黄素酯中的硫辛酸含量经测定含有大约3.5％硫辛酸(重量比)。

硫辛酸/叶黄素酯的混合物然后经60℃高温处理9小时以实现硫辛酸的齐聚。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。

结果

混合方法稳定性试验后的残基率

硫辛酸的用量/mg	硫辛酸的含量/％	残基率/％
			0	0.0	24.1
3	1.0	42.7
			15	4.8	46.5
30	9.1	79.5
			60	16.7	80.1
150	33.3	79.4
			300	50.0	82.4

“残基率/％”是指实验之后叶黄素的含量与实验前的比值，通过UV-可见光谱测量。

包埋方法稳定性试验后的残基率

样品名称	残基率/％
		空白样	-
1％没食子酸包埋样品	60.9
		2％白藜芦醇包埋样品	62.1
3.5％硫辛酸包埋样品	95.8

“残基率/％”是指实验之后叶黄素的含量与实验前的比值，通过UV-可见光谱测量。与上述硫辛酸包埋样品相同，通过用没食子酸或白藜芦醇替代硫辛酸，制备没食子酸和白藜芦醇包埋样品。

结论

人们注意到低聚硫辛酸可保护叶黄素酯，而且随着用量增加，该叶黄素酯的稳定性也增加。由于成分混合在一起，理想的硫辛酸用量为大约10％(基于叶黄素酯的总重量)。通过包埋方法，也测定了多酚和低聚硫辛酸均可以保护叶黄素酯免遭降解；可是，低聚硫辛酸对于防止降解更加有效。进一步注意到，包埋方法比将成分简单紧密混合一起更有效。值得注意的是，对于混合组分，使用相等数量的硫辛酸或其他稳定剂和相同的较长的加热时间，所述的包埋方法样品比成分混合一起的样品具有较大的残基率。

作为包覆材料的硫辛酸衍生物的聚合度

包埋方法

3.0g LAORN(8.42mmol)与5g硅胶溶于100g水。混合物搅拌10分钟并过滤。测定剩余物的湿重。真空干燥剩余物并测定剩余物干重。

包覆在硅胶上的LAORN的含量经测定发现为大约2.6％LAORN(重量比)。

平均聚合度是通过上述碘滴定法测定。按照所述的LAORN制备低聚-硫辛酸盐的其他样品。

聚合度的测定

不同的低聚-硫辛酸盐的平均聚合度通过上述碘量法测定。

结果室温下干燥

样品名称	包埋前聚合度	包埋后聚合度
			LAORN	4.21	5.14
硫辛酸铵	10.86	11.65
			硫辛酸钠	14.17	14.56

在5℃下干燥

样品名称	包埋前聚合度	包埋后聚合度
			LAORN	4.21	4.35
硫辛酸铵	10.86	11.22
			硫辛酸钠	14.17	14.01

“在5℃下干燥”是指样品在真空5℃下干燥。“室温”样品在真空室温条件下干燥。

结论

在包埋过程前后，不同的低聚-α硫辛酸盐的平均聚合度是稳定的。

稳定性实验

制备：

3.0g LAORN(8.42mmol)与5g叶黄素酯溶于100g水。混合物搅拌10分钟并过滤。测定剩余物的湿重。真空干燥固体物质然后测定剩余物干重。

平均聚合度是通过上述碘滴定法测定。低聚-硫辛酸盐的另外样品的制备与LAORN相同。

实验：

样品经50℃处理24小时。通过上述的UV-可见光分光度法测量叶黄素的含量。

实验结果：

结论：

上述包埋的叶黄素酯被发现在老化试验中是稳定的。在不同的低聚态硫辛酸合成物的测试中，其保护作用相似，人们注意到混合物的干燥温度不影响合成物保护叶黄素酯的能力。

精氨酸-硫辛酸盐的制备：

17.4g(0.1mol)精氨酸碱与720mL水在搅拌下加入20.6g(0.1mol)硫辛酸。硫辛酸缓慢溶解至形成一种澄清的黄色液体。该液体然后喷雾干燥以提供大约40g的聚合度为大约2.55-2.91的精氨酸-硫辛酸盐。

虽然本发明已经以优选实施例为基准进行了描述，但是所属技术领域的专业人员将意识到那些没有离开本发明的主旨和保护范围的在形式和细节方面的改变。所有说明书中的引用文献，包括背景在内，在这里将被完全采用。所属领域技术人员将意识到或能够确定许多，仅仅使用常规实验，等同于本发明具体描述的特定的实施例的技术方案。这样的等同方案规定为被包括在下列权利要求的范围内。

Claims

1.一种组合物，含有一种通式(I)所述的低聚态硫辛酸合成物：

其中每个R⁺独立地表示一个平衡离子，并且n为4-6之间的数值；所述的每个R⁺独立地表示为碱金属、碱土金属、铵离子、氨基酸、亚烃基二胺、单取代胺、二取代胺或三取代胺；

所述的氨基酸为鸟氨酸、精氨酸或赖氨酸；所述的单取代胺选自甲胺、乙胺、苯胺；所述的二取代胺选自二乙胺、二甲胺、二苯胺；所述的三取代胺选自三甲胺、三乙胺、三苯胺；

所述的亚烃基二胺为乙二胺。

2.根据权利要求1所述的组合物，所述的每个R⁺为一种氨基酸。

3.一种组合物，含有：通式(I a)所示的低聚态硫辛酸：

其中n为4-6之间的数值。

4.一种稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，含有权利要求1所述的组合物和一种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物。

5.一种稳定的类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物，含有权利要求3所述的组合物和一种类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物。

6.一种药物组合物，含有权利要求1所述的组合物和一种药剂学上可接受的载体。

7.一种药物组合物，含有权利要求3所述的组合物和一种药剂学上可接受的载体。

8.一种稳定类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的方法，包括步骤：将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求1所述的组合物接触，以使类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物稳定。

9.根据权利要求8所述的方法，所述的接触方法为包覆。

10.根据权利要求8所述的方法，所述的接触方法为将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求1所述的组合物均匀混合。

11.一种稳定类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物的方法，包括步骤：将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求3所述的组合物接触，以使类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物稳定。

12.根据权利要求11所述的方法，所述的接触方法为包覆。

13.根据权利要求11所述的方法，所述的接触方法为将类胡萝卜素或类胡萝卜素衍生物与权利要求3所述的组合物均匀混合。