CN101491518A

CN101491518A - 一种用于治疗肿瘤的组合物

Info

Publication number: CN101491518A
Application number: CNA2009100146337A
Authority: CN
Inventors: 厉保秋
Original assignee: Shandong University
Current assignee: Dahe Pharmaceutical Technology Shandong Co ltd
Priority date: 2009-03-03
Filing date: 2009-03-03
Publication date: 2009-07-29
Anticipated expiration: 2029-03-03
Also published as: CN101491518B

Abstract

本发明公开了一种用于治疗肿瘤的组合物，其包括以下组分：有效治疗量的T－2毒素，医学上可接受的辅料。T－2毒素的有效治疗量为0.1～20mg/Kg体重。本发明的抗肿瘤的组合物可可靠的释放药物，利用其对肿瘤组织的毒性作用起到抑制肿瘤的作用。本发明提供的四种剂型可以更好的发挥T－2毒素的治疗作用，而减小其对人体的损伤，且生物相容性良好。本发明具有效果好、安全性高等优点。

Description

一种用于治疗肿瘤的组合物

技术领域

本发明涉及一种用于治疗肿瘤的组合物。

背景技术

目前，关于肿瘤的研究已取得较大进展，已发展了多种治疗肿瘤的各种放疗、化疗等方法，但各种药物及疗法均存在局限性，很难达到根治的效果，且易出现耐药性和副作用。肿瘤死亡率仍居于各种疾病之首。据数据显示，2006年我国有300万人死于癌症，而且肿瘤发病率仍处于上升趋势，并有年轻化趋势。据资料统计在不到20年的时间里，我国肿瘤发病率上升了69％，死亡率上升了29.4％。因此，研究新的有效的肿瘤治疗药物仍是目前肿瘤治疗的主要方向。

T-2毒素，分子量为466.122，分子式为C₂₄H₃₄O₉，结构式为4β，15-二乙酰氧基-8α-(3-甲氧基酰氧基)-3α-羟基-12，13-环氧单端孢霉-9-烯，其中的氧环和双键是其活性部位，氧环打开或双键还原均可使其毒性下降。T-2毒素为白色针状结晶，熔点为151℃-152℃，难溶于水，易溶于极性有机溶剂，它在室温条件下相当稳定，放置6-7年或加热至100-120℃1小时毒性不减。T-2毒素带有酯基，用碱处理后水解成相应的醇。

T-2毒素是镰刀菌所产生的单端胞霉烯族毒素中毒性最强的一种，主要作用于细胞分裂旺盛的组织器官，如胸腺、骨髓、肝、脾、淋巴结、生殖腺及胃肠粘膜等，抑制这些器官细胞蛋白质和DNA合成。此外，还发现该毒素可引起淋巴细胞中DNA单链的断裂。T-2毒素还可作用于氧化磷酸化的多个部位而引起线粒体呼吸抑制。而肿瘤组织即具有细胞过度分裂的特点，因此，对肿瘤组织存在广泛的毒性作用。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种用于治疗肿瘤的组合物。

一种用于治疗肿瘤的组合物，包括以下组分：有效治疗量的T-2毒素，医学上可接受的辅料。

所述T-2毒素的有效治疗量为0.1～20mg/Kg体重。

所述医学上可接受的辅料为植入剂辅料，T-2毒素与植入剂辅料结合制成植入剂。

所述植入剂辅料为聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、聚苯并生、聚(L-丙交酯-co-磷酸乙酯)、聚(L-丙交酯-co-磷酸丙酯)、P-(HEMA)-胶原中的一种或任几种的任意比例的组合。

所述医学上可接受的辅料还可包括植入剂辅料和缓释调节剂，T-2毒素与植入剂辅料、缓释调节剂结合制成缓释植入剂。

所述植入剂辅料为聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、聚苯并生、聚(L-丙交酯-co-磷酸乙酯)、聚(L-丙交酯-co-磷酸丙酯)、P-(HEMA)-胶原中的一种或任几种的组合；所述缓释调节剂为木糖醇、低聚糖、甘露醇、山梨醇、透明质酸、胶原蛋白、软骨素、明胶及白蛋白中的一种或任几种的任意比例的组合。

所述医学上可接受的辅料还可包括注射剂辅料和渗透压调节剂，T-2毒素与注射剂辅料、渗透压调节剂结合制成注射剂。

所述注射剂辅料为乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇-200、聚乙二醇-300、聚乙二醇-400、聚乙二醇-600、苯甲醇、二甲基亚砜中的一种或任几种的组合；所述渗透压调节剂为葡萄糖、氯化钠、磷酸盐或枸橼酸盐中的一种或任几种的任意比例的组合。

所述医学上可接受的辅料还可为冻干制剂辅料，T-2毒素与冻干制剂辅料结合制成冻干制剂。

所述冻干制剂辅料为甘露醇、海藻糖、乳糖、透明质酸、叔丁醇、叔丁醇-水混合溶剂中的一种或任几种的任意比例的组合。

本发明的抗肿瘤的组合物可可靠的释放药物，利用其对肿瘤组织的毒性作用起到抑制肿瘤的作用。本发明提供的四种剂型可以更好的发挥T-2毒素的治疗作用，而减小其对人体的损伤，且生物相容性良好。本发明具有效果好、安全性高等优点。

具体实施方式

下面结合试验和实施例对本发明作进一步的说明：

试验1：T-2毒素植入给药的抗肿瘤作用研究

1.1小鼠S₁₈₀瘤细胞悬液制备

选取接种S₁₈₀实体瘤7-8d后生长良好的小鼠，急性处死；抽取腹水瘤细胞，用生理盐水洗涤离心2次，换用RPMI-1640培养液再洗1次；将肿瘤细胞悬液放人含10％小牛血清的RPMI-1640培养液中，稀释成1×10⁴ml^-1×10⁷ml^-1单细胞悬液，台盼蓝染色检查活细胞数，成活率95％以上即可接种。

1.2肿瘤接种

昆明小鼠40只，每只于左前肢腋窝皮下接种0.2ml S₁₈₀瘤细胞悬液，整个操作过程30min内完成；24h后随机分为4组，每组10只，雌雄各半，分笼喂养。

1.3样品制备

取10mg-20mg分子量15000-25000的聚乳酸，加一定量的有机溶剂溶解。加入T-2毒素摇匀，真空干燥除去有机溶剂，将干燥后的固体物立即成型，制成T-2毒素植入剂，射线灭菌。空白对照药物仅使用10mg分子量15000-25000的聚乳酸制备。

1.4药物治疗

实验组，瘤内注射植入T-2毒素植入剂；对照组，瘤内注射植入空白药物，每天称体重，观察小鼠生长情况.小鼠停药48h后断颈处死，剥取瘤块称量，并按下列公式计算抑瘤率：抑瘤率＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。

统计学处理计数资料采用非配对t检验，结果见表1。

表1 T-2毒素植入对小鼠移植瘤S₁₈₀生长的影响

＊＊P＜0.01

由实验结果可见，T-2毒素植入给药剂量为1.5mg/kg、2.5mg/kg对肿瘤的抑制效果较好，未导致小鼠死亡。

试验2：T-2毒素静脉注射给药的抗肿瘤作用研究

小鼠S₁₈₀瘤细胞悬液制备、肿瘤接种与试验1同，T-2毒素溶于10％乙醇生理盐水，对照组尾静脉注射0.9％生理盐水0.2ml，实验组尾静脉注射T-2毒素剂量为1.5mg/kg、2.5mg/kg。停药24h后断颈处死，剥取瘤块称量，并按下列公式计算抑瘤率：抑瘤率＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。统计学处理计数资料采用非配对t检验，结果见表2。

表2 T-2毒素静脉注射对小鼠移植瘤S₁₈₀生长的影响

＊＊P＜0.01

由实验结果可见，T-2毒素静脉注射给药剂量1.5mg/kg、2.5mg/kg对肿瘤的抑制效果较好，未导致小鼠死亡。

试验3：T-2毒素皮下注射给药的抗肿瘤作用研究

小鼠S₁₈₀瘤细胞悬液制备、肿瘤接种与试验1同，T-2毒素溶于10％乙醇生理盐水，对照组灌胃0.9％生理盐水2ml，实验组分别灌胃T-2毒素1.5mg/kg、2.0mg/kg。停药48h后断颈处死，剥取瘤块称量，并按下列公式计算抑瘤率：抑瘤率＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。统计学处理计数资料采用非配对t检验，结果见表3。

表3 T-2毒素皮下注射给药对小鼠移植瘤S₁₈₀生长的影响

＊＊P＜0.01

由实验结果可见，T-2毒素皮下注射给药剂量为1.5mg/kg、2.0mg/kg对肿瘤的抑制效果较好，未导致小鼠死亡。

试验4：T-2毒素肌肉注射给药的抗肿瘤作用研究

小鼠S₁₈₀瘤细胞悬液制备、肿瘤接种与试验1同，T-2毒素溶于10％乙醇生理盐水，对照组肌肉注射0.9％生理盐水0.1ml，实验组分别肌肉注射T-2毒素1.5mg/kg、2.0mg/kg。停药48h后断颈处死，剥取瘤块称量，并按下列公式计算抑瘤率：抑瘤率＝(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100％。统计学处理计数资料采用非配对t检验，结果见表4。

表4 T-2毒素肌肉注射给药对小鼠移植瘤S₁₈₀生长的影响

＊＊P＜0.01

由实验结果可见，T-2毒素肌肉注射给药剂量为1.5mg/kg、2.0mg/kg对肿瘤的抑制效果较好，未导致小鼠死亡。

实施例1：T-2毒素植入剂的制备

1.1胶原蛋白的制备：

将刚出生小牛处死取皮，去毛后切成小片，丙酮浸泡去脂，在100g·L^-1氯化钠溶液中浸泡后，再用0.1mol L^-1柠檬酸缓冲液(pH4.3)浸泡，冰水匀浆，乙醇沉淀蛋白，冷冻干燥后得粗品。将粗品用0.5mol·L^-1乙酸溶解，取上清液用50g·L^-1氯化钠沉淀，12 000r·min^-1离心，反复用0.5mol·L^-1乙酸溶解，50g·L^-1氯化钠溶液沉淀。用胃蛋白酶(酶∶胶原蛋白＝1∶100)处理，得到无抗原性终端肽的胶原蛋白，透析(均在低于4℃下完成)，冷冻干燥后得精制胶原蛋白。

1.2 T-2毒素植入剂的制备

取T-2毒素60mg，20g·L^-1胶原蛋白溶液20ml，甲基丙烯酸羟乙酯(HEMA)8ml，乙二醇10ml，加入60g·L^-1过硫酸铵溶液和12g·L^-1偏亚硫酸钠溶液各1.2ml，混匀，分别取1ml混合液于1.5ml塑料离心管中(均在冰浴下进行)。置于37℃恒温2h，取出即得乳白色半透明、光滑、具有弹性的凝胶状物.此即为含P-(HEMA)-胶原-T-2毒素的植入剂。

1.3体外溶出实验

采用桨法(中国药典1995年版附录66页)，转速50r·min^-1，温度(37±1)℃，溶出介质：900ml蒸馏水。定时经0.8mm微孔滤膜过滤抽取25ml(并立即补充同温同数量的蒸馏水)，加水至10ml，于270nm处测吸光度，并做空白对照。

将T-2毒素从植入剂中溶出百分数对时间平方根按Higuchi方程回归，所得释药曲线无正性偏差(释药曲线末端实际溶出速率高于拟合直线理论估计值)。所得溶出方程为：Wr/Wo＝(1.34+2.34t^1/2)/100，r＝0.998。说明T-2毒素从P-(HEMA)-胶原骨架中的释放主要依赖于药物从骨架向溶液中扩散的过程。

实施例2：T-2毒素缓释植入剂的制备

取140mg分子量15000-25000的聚乳酸，加一定量的有机溶剂溶解。加入T-2毒素60mg摇匀，真空干燥除去有机溶剂，将干燥后的固体物立即成型，射线灭菌。

实施例3：T-2毒素注射剂的制备

取T-2毒素60mg，溶于17ml1mol/L的NaOH溶液中，加入50ml丙二醇，最后加入注射用水至100ml。

实施例4：T-2毒素冻干制剂的制备

按1∶5比例将叔丁醇与葡萄糖混合，将T-2毒素迅速加入上述混合液，均匀搅拌，再加入适量活性炭，搅拌10-15分钟，过滤除去活性炭，于-20℃预冻24小时，在于-40--45℃冷冻干燥36小时，制成T-2毒素冻干制剂。

Claims

1.一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于，包括以下组分：有效治疗量的T-2毒素，医学上可接受的辅料。

2.根据权利要求1所述的一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于：所述T-2毒素的有效治疗量为0.1～20mg/Kg体重。

3.根据权利要求1所述的一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于：所述医学上可接受的辅料为植入剂辅料，T-2毒素与植入剂辅料结合制成植入剂。

4.根据权利要求3所述的一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于：所述植入剂辅料为聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、聚苯并生、聚(L-丙交酯-co-磷酸乙酯)、聚(L-丙交酯-co-磷酸丙酯)、P-(HEMA)-胶原中的一种或任几种的组合。

5.根据权利要求1所述的一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于：所述医学上可接受的辅料包括植入剂辅料和缓释调节剂，T-2毒素与植入剂辅料、缓释调节剂结合制成缓释植入剂。

6.根据权利要求5所述的一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于：所述植入剂辅料为聚乳酸、聚乙醇酸和羟基乙酸的共聚物、聚苯并生、聚(L-丙交酯-co-磷酸乙酯)、聚(L-丙交酯-co-磷酸丙酯)、P-(HEMA)-胶原中的一种或任几种的组合；所述缓释调节剂为木糖醇、低聚糖、甘露醇、山梨醇、透明质酸、胶原蛋白、软骨素、明胶及白蛋白中的一种或任几种的组合。

7.根据权利要求1所述的一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于：所述医学上可接受的辅料包括注射剂辅料和渗透压调节剂，T-2毒素与注射剂辅料、渗透压调节剂结合制成注射剂。

8.根据权利要求7所述的一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于：所述注射剂辅料为乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇-200、聚乙二醇-300、聚乙二醇-400、聚乙二醇-600、苯甲醇、二甲基亚砜中的一种或任几种的组合；所述渗透压调节剂为葡萄糖、氯化钠、磷酸盐或枸橼酸盐中的一种或任几种的组合。

9.根据权利要求1所述的一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于：所述医学上可接受的辅料为冻干制剂辅料，T-2毒素与冻干制剂辅料结合制成冻干制剂。

10.根据权利要求9所述的一种用于治疗肿瘤的组合物，其特征在于：所述冻干制剂辅料为甘露醇、海藻糖、乳糖、透明质酸、叔丁醇、叔丁醇-水混合溶剂中的一种或任几种的组合。