CN116036105A - 一种治疗淋巴水肿的药物运用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物在制备治疗淋巴水肿的组合物方面的用途，所述淋巴水肿尤其适用于TNF‑α含量低于1.5ng/mL的对象。本发明人发现参皂苷Rb1有效减轻淋巴水肿模型小鼠尾部组织的纤维脂肪厚度，改善淋巴回流功能，刺激VEGF‑C mRNA及其蛋白的表达。因此，以人参皂苷Rb1为主要有效成分制备的各种形式的药物或保健品非常适合治疗淋巴水肿。

Description

一种治疗淋巴水肿的药物运用
技术领域
本发明涉及药物领域，更具体地涉及人参皂苷Rb1在制备预防和/或治疗淋巴水肿的药物组合物或保健品组合物中的应用。
背景技术
淋巴回流是指人体组织液中的一部分进入毛细淋巴管形成淋巴液后，沿淋巴管汇集，最后经右淋巴导管和胸导管返归血液的过程。淋巴液的生成和回流的重大意义在于：回收组织液中的蛋白质，运输脂肪和其他营养物质，调节血浆与组织液间的液体平衡以及清除组织中的红细胞和其他异物等。在正常情况下，淋巴管内的淋巴缓慢而不断地向心流动。
当淋巴回流受阻时，则会产生淋巴水肿。淋巴水肿是由淋巴系统供血不足和组织液异常蓄积引起的一种慢性、进行性和不可治愈的疾病。患者因淋巴液回流受阻引起的软组织液在体表反复感染后，会导致皮下纤维结缔组织增生，脂肪硬化，降低患者的生活质量。据统计，全世界有2亿人患有淋巴水肿。其中获得性淋巴水肿是创伤、阻塞、感染、放射线损伤或淋巴系统的外科手术干预的最常见后果。四肢淋巴水肿可引起肿胀，不适和功能受损，通常并发皮肤反复感染和溃疡，具有毁容性和致残性。淋巴水肿患者由于活动障碍和肢体的畸形而经常感到社会羞辱和自卑感。目前，淋巴水肿的治疗仅包括保守的理疗和手术方法，缺乏有效的药物治疗。
淋巴管内皮细胞是构成淋巴管壁的一种经不连续纽扣状相互连接，且细胞间几乎无紧密连接的单层扁平上皮结构，可以参与调节淋巴细胞再循环、维持体内稳态和调节机体免疫反应等生理过程。淋巴水肿、炎症、感染性和免疫性疾病、纤维化及肿瘤转移等疾病的发生都与淋巴管内皮细胞的异常有关。因此保持淋巴管内皮细胞结构和功能的正常，是维持淋巴功能、保护淋巴循环的基础。VEGF-C基因治疗对因淋巴管生成缺陷或因淋巴管阻塞导致淋巴回流障碍而引起的淋巴水肿具有很好的应用前景。
综上所述，寻找安全有效的治疗药物，实现精准化用药成为治疗淋巴水肿研究亟待解决的重大问题。
发明内容
本发明的目的就是提供一种疗效确切、副作用少的促淋巴管生成的小分子化合物人参皂苷Rb1在制备预防和/或治疗淋巴水肿的组合物中的应用。
在本发明的第一方面，提供了一种人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物的用途，用于制备预防和/或治疗淋巴水肿的组合物；
Figure BDA0003326933010000021
在另一优选例中，所述淋巴水肿适用于TNF-α在体内的含量低的对象，其中所述TNF-α含量低是指TNF-α含量低于1.5ng/mL。
在另一优选例中，所述TNF-α含量低是指在体内TNF-α的含量低于1.5ng/mL，例如0.1ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/mL、0.8ng/mL、1ng/mL、1.2ng/mL、1.5ng/mL。
在另一优选例中，所述TNF-α含量低是指在体内TNF-α的含量低于10pg/mL，例如0.1pg/mL、0.2pg/mL、0.3pg/mL、0.5pg/mL、0.6pg/mL、0.8pg/mL、1pg/mL、2pg/mL、5pg/mL、8pg/mL、10pg/mL。
在另一优选例中，所述组合物不包括细胞生长因子或炎症因子，如TNF-α。
在另一优选例中，所述淋巴水肿选自下组：原发性淋巴水肿、继发性淋巴水肿。
在另一优选例中，所述继发性淋巴水肿选自下组：感染性淋巴水肿、损伤性淋巴水肿、恶性肿瘤性淋巴水肿，或其组合。
在另一优选例中，所述感染性淋巴水肿选自下组：寄生虫感染引起的淋巴水肿、真菌感染引起的淋巴水肿、细菌感染引起的淋巴水肿。
在另一优选例中，所述损伤性淋巴水肿选自下组：手术引起的淋巴水肿、放疗引起的淋巴水肿、灼伤引起的淋巴水肿。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤性淋巴水肿包括肿瘤压迫引起的淋巴水肿。
在另一优选例中，所述继发性淋巴水肿还包括全身性疾病引起的淋巴水肿、妊娠引起的淋巴水肿。
在另一优选例中，所述淋巴水肿为淋巴回流受阻导致的水肿。
在另一优选例中，所述淋巴水肿可通过VEGF-C治疗进行治疗。
在另一优选例中，所述预防和/或治疗淋巴水肿包括一个或多个选自下组的特征：
(i)降低淋巴水肿肿胀部位的纤维脂肪厚度；
(ii)改善淋巴回流功能；
(ii)促进淋巴管内皮细胞VEGF-C表达；
(iv)刺激淋巴管内皮细胞分泌释放VEGF-C；
(v)防止淋巴积液再生。
在另一优选例中，所述表达包括蛋白和/或mRNA表达。
在另一优选例中，所述组合物含有浓度≥1μM，较佳地浓度≥2μM，更佳地浓度≥5μM的人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物。
在另一优选例中，所述组合物含有0.1-99wt％，较佳地0.5-95wt％，更佳地1-90wt％的人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物。
在另一优选例中，所述组合物还包括药学上或保健品学上可接受的赋形剂和/或载体。
在另一优选例中，所述组合物的剂型选自下组：固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
在另一优选例中，所述组合物的剂型选自下组：凝胶剂、贴剂、片剂、胶囊剂、散剂、膏剂、粉剂、针剂、水剂、肠溶缓释制剂或注射剂。
在另一优选例中，所述组合物的剂型为注射剂。
在另一优选例中，所述组合物通过以下方式施用于受试者：口服、经皮注射、静脉注射、肌肉注射或肛肠给药。
在另一优选例中，所述提取物提取自三七干燥根及根茎，或三七粉。
在另一优选例中，所述提取物中，人参皂苷Rb1的含量C1≥33wt％，其中所述含量C1按提取物干重计。
在另一优选例中，所述提取物中，人参皂苷Rb1的含量C1≥35wt％，较佳地≥40wt％、50wt％、60wt％、70wt％、80wt％、90wt％、95wt％，其中所述含量C1按提取物干重计。
在另一优选例中，所述提取物中，人参皂苷Rg1的含量C2≤20wt％，较佳地≤10wt％、8wt％、5wt％、3wt％、2wt％、1wt％，其中所述含量C2按提取物干重计。
在本发明的第二方面，提供了一种用于治疗淋巴水肿的药物组合物，所述药物组合物包括：
(a)人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物；
(b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述药物组合物不包括其他细胞生长因子或炎症因子，如TNF-α。
在另一优选例中，所述药物组合物包括：
(c)细胞生长因子、炎症因子。
在另一优选例中，所述细胞生长因子选自下组：VEGF-C、VEGF-D。
在另一优选例中，所述炎症因子选自下组：TNF-α、IL-1β、IL-6、TG F-β。
在另一优选例中，所述药物组合物的剂型选自下组：固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
在另一优选例中，所述药物组合物的剂型选自下组：凝胶剂、贴剂、片剂、胶囊剂、散剂、膏剂、粉剂、针剂、水剂、肠溶缓释制剂或注射剂。
在另一优选例中，所述药物组合物的剂型为注射剂。
在另一优选例中，所述药物组合物的剂型选自下组：口服剂型、经皮注射剂型、静脉注射剂型、肌肉内注射剂型。
在另一优选例中，所述药物组合物通过以下方式施用于受试者：口服、经皮注射、静脉注射、肌肉注射或肛肠给药。
在另一优选例中，所述的注射剂的注射液中含有生理盐水、葡萄糖、稳定剂、防腐剂、悬浮剂或乳化剂的一种或多种。
在本发明的第三方面，提供了一种用于治疗淋巴水肿的保健品组合物，所述保健品组合物包括：
(a)人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物；
(b)保健品学上可接受的载体。
在本发明的第四方面，提供了一种治疗淋巴水肿的方法，包括步骤：向有此需要的对象施用安全有效量的人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物。
在另一优选例中，所述对象为TNF-α含量低的对象。
在另一优选例中，所述TNF-α含量低如本发明第一方面所述。
在另一优选例中，所述对象为哺乳动物，如人、小鼠、大鼠、仓鼠、兔、猫、狗、牛、绵羊、猴等。
在另一优选例中，人参皂苷Rb1的有效施用浓度为0.05-10μM，更佳地为0.1-5μM。
在另一优选例中，人参皂苷Rb1的有效施用剂量为1-40mg/kg，更佳地为1-20mg/kg。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了人参皂苷Rb1的结构简式。
图2显示了对照组、模型组、人参皂苷Rb1组的小鼠尾部肿胀的变化程度。
图3显示了对照组、模型组、人参皂苷Rb1组在注射ICG染料后0h和24h的荧光强度。
图4显示了人参皂苷Rb1对淋巴管内皮细胞VEGF-C表达的影响：(a)VEGF-C mRNA表达；(b)VEGF-C蛋白表达。
图5显示了人参皂苷Rg1在无TNF-α刺激和有TNF-α刺激下对VEGF-C mRNA表达的影响。
图6显示了人参皂苷Rg1在无TNF-α刺激下对VEGF-C蛋白表达的影响。
图7显示了人参皂苷Rg1在有TNF-α刺激下对VEGF-C蛋白表达的影响。
图8显示了人参皂苷Rg1在有TNF-α刺激下促进淋巴管内皮细胞的管形成(A)和迁移(B)。
具体实施方式
本发明人经过广泛而深入的研究，通过大量筛选和测试，提供了人参皂苷Rb1在治疗淋巴水肿方面的用途。本发明人首次意外地发现，与必须在TNF-α刺激下才能对淋巴管内皮细胞VEGF-C的表达有促进作用的人参皂苷Rg1不同，人参皂苷Rb1可以在无TNF-α刺激下能够减轻淋巴水肿模型小鼠尾部组织的纤维脂肪厚度，改善淋巴回流功能，刺激VEGF-CmRNA及其蛋白的表达，进而改善淋巴水肿，且安全性高，有效剂量低(20mg/kg或5μM以下)，不受TNF-α含量的影响，非常适合制备用于治疗在TNF-α含量低的对象中的淋巴水肿的组合物。在此基础上完成了本发明。
术语
除非另有定义，否则本文中所用的全部技术术语和科学术语均具有如本发明所属领域普通技术人员通常理解的相同含义。
如本文所用，在提到具体列举的数值中使用时，术语“约”意指该值可以从列举的值变动不多于1％。例如，如本文所用，表述“约100”包括99和101和之间的全部值(例如，99.1、99.2、99.3、99.4等)。
如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由…构成”、或“由…构成”。
如本文所用，术语“室温”或“常温”是指温度为4-40℃，较佳地，25±5℃。
如本文所用，术语“多个”或“多种”指2个/种或以上，如2、3、4、5或6个/种。
活性成分
本发明的活性成分为人参皂苷Rb1、或其生理学上可接受的盐。
Figure BDA0003326933010000071
根据一个实施方式，本发明技术方案提出的一种治疗淋巴水肿药物的小分子化合物，其活性成分为人参皂苷Rb1，其施用浓度为0.1-5μM。
人参皂苷Rb1是从中药三七的干燥根及根茎提取的有效成分之一，其可以减轻淋巴水肿模型小鼠尾部组织的纤维脂肪厚度，改善淋巴回流功能。
在本发明中，活性成分可以为包含人参皂苷Rb1的植物提取物形式。所述提取物可以来自三七干燥根及根茎。
优选地，所述提取物中，人参皂苷Rb1的含量C1≥1wt％、≥2wt％，较佳地≥3wt％，如≥10wt％、≥20wt％、30wt％、40wt％、50wt％、60wt％、70wt％、80wt％、85wt％、90wt％或≥95％，按提取物的干重计。
本发明中，人参皂苷Rb1的消旋体、非对映体、几何异构体、区域异构体和单独的异构体(例如，分离的对映体)均应包括在本发明范围内。当本文的活性成分具有确定的立体化学(表示为R或S，或具有虚线或楔形键指明)时，被本领域技术人员将理解那些化合物为基本上不含其他异构体(例如至少80％，90％，95％，98％，99％和至多100％不含其他异构体)。
本发明的活性成分可能含有的酸性片段，包括但不限于羟基，可能会和各种有机或无机碱形成生理学上可接受的盐。典型的碱形成的盐包括铵盐、碱金属盐如钠、锂、钾盐，碱土金属盐如钙、镁盐和有机碱形成的盐(如有机胺)，如苄星、二环已基胺、海巴胺(与N,N-二(去氢枞基)乙二胺形成的盐)、N-甲基-D-葡糖胺、N-甲基-D-葡糖酰胺、叔丁基胺，以及和氨基酸如精氨酸、赖氨酸等等形成的盐。
本发明的活性成分可以在无TNF-α刺激下治疗淋巴水肿。
如本文所用，术语“药学上、保健品上可接受的”成分是指适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)，即有合理的效益/风险比的物质。
如本文所用，术语“有效量”，是指对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。本领域的普通技术人员应该理解，所述的“有效量”可随着药物组合物或保健品组合物的形式、所用的辅料、疾病的严重程度以及与其他药物、保健物或食物联合等情况的不同而有所不同。
本发明所述的“促进”、“加速”包括加速淋巴水肿消退的速度、缩短水肿消退时间，并不必需要100％治愈。在一些实施方案中，与不存在本发明的活性成分时相比，本发明的活性成分将水肿消退速度加快了例如至少约10％、至少约30％、至少约50％、或至少约80％。
淋巴水肿
淋巴水肿是由淋巴系统供血不足和组织液异常蓄积引起的一种慢性、进行性和不可治愈的疾病。患者因淋巴液回流受阻引起的软组织液在体表反复感染后，会导致皮下纤维结缔组织增生，脂肪硬化，降低患者的生活质量。
在本发明中，对淋巴水肿的种类没有特别要求，各种类型或各个部位的淋巴水肿。例如，原发性淋巴水肿、继发性淋巴水肿。
在本发明中，患有淋巴水肿的对象主要是指TNF-α含量低的对象。
在另一优选例中，所述TNF-α含量低是指TNF-α的含量低于0.5-1.5ng/mL，例如0.5ng/mL、0.8ng/mL、1ng/mL、1.2ng/mL、1.5ng/mL。
在另一优选例中，所述TNF-α含量低是指TNF-α的含量低于10pg/mL，例如0.1pg/mL、0.2pg/mL、0.3pg/mL、0.5pg/mL、0.6pg/mL、0.8pg/mL、1pg/mL、2pg/mL、5pg/mL、8pg/mL、10pg/mL。
用途
根据一个实施方式，本发明技术方案中，提出的一种治疗淋巴水肿的小分子化合物，其有效成分为人参皂苷Rb1，浓度为0.1-5μM。人参皂苷Rb1是从中药三七的干燥根及根茎提取的有效成分之一，其可以减轻淋巴水肿模型小鼠尾部组织的纤维脂肪厚度，改善淋巴回流功能。
根据一个实施方式，本发明技术方案中，提出了基于人参皂苷Rb1作为淋巴水肿治疗药物，其有效作用浓度为0.1-5μM。
根据一个实施方式，本发明技术方案中，人参皂苷Rb1与药物学上可接受的药物辅料混合形成散剂、膏剂、粉剂、针剂、水剂或注射剂。
根据一个实施方式，作为淋巴水肿治疗药物的人参皂苷Rb1为主要有效成分制备的各种形式的组合物，可以用于预防和/或治疗上述淋巴水肿。尤其是在TNF-α含量低的患者中的淋巴水肿，且所述组合物中无需额外添加TNF-α。
在使用时可以采取皮下、静脉注射或肛肠给药；注射液的使用可以任意选用生理盐水、葡萄糖、稳定剂、防腐剂、悬浮剂或乳化剂等。
本发明进行了动物实验，将30只清洁级6-8周左右C57雌性小鼠随机分为空白对照组、模型组和人参皂苷Rb1组。采用异氟烷气体麻醉小鼠，在小鼠尾部基底的真皮上做了一个环形切口，切断真皮淋巴血管，切口边缘分开，并形成一个2-3mm的间隙，以延迟伤口闭合。于术后3d始，予20mg/kg人参皂苷Rb1进行灌胃，模型组每天以等量生理盐水灌胃，连续干预4周，分别于术后1、3、7、14、21、28、33天测量小鼠尾部肿胀程度。并与取材前进行小鼠尾部24h淋巴管回流功能的检测。经动物实验的分析结果显示，人参皂苷Rb1能减轻小鼠尾部肿胀程度，改善淋巴回流。
本发明体外研究中，不同浓度人参皂苷Rb1(0、0.1、0.5、1、2.5、5μM)分别干预淋巴管内皮细胞24h后，回收细胞提取总蛋白及mRNA，进行Q-PCR和western blot检测，检测相关VEGF-C mRNA和蛋白的表达变化。经体外细胞学实验研究发现人参皂苷Rb1可以促进VEGF-CmRNA的表达，增加其蛋白表达量，促进淋巴管生成，改善淋巴回流功能。因此，以人参皂苷Rb1为主要有效成分制备的各种形式的药物或保健品，可以用于预防和/或治疗淋巴水肿疾病。
组合物和施用方法
本发明的组合物包含人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐作为活性成分。发明的活性成分可以为包含人参皂苷Rb1的植物提取物形式。
本发明的活性成分不仅能够促进淋巴管内皮细胞生成VEGF-C，还能促进淋巴管生成，非常适合用于制备治疗淋巴水肿的组合物。
本发明的组合物包含安全有效量范围内的本发明人参皂苷Rb1或其药学上可接受的盐，以及药学上或保健品学上可接受的赋形剂或载体。
通常，本发明的组合物含有1-2000mg本发明活性成分/剂，更佳地，含有10-500mg本发明活性成分/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
“药学上或保健品学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。药学上或保健品学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如吐温
Figure BDA0003326933010000101
)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
本发明活性成分或组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)、和局部给药(水肿部位)。
用于口服施用的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性活性成分也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
用于口服施用的液体剂型包括药学上或保健品学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。
除了活性活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
用于局部施用的本发明活性成分的剂型包括凝胶剂(如可注射水凝胶)、贴剂、软膏剂、散剂、喷射剂和吸入剂。活性成分在无菌条件下与生理上可接受的载体及任何防腐剂、缓冲剂，或必要时可能需要的推进剂一起混合。
本发明活性成分可以单独施用，或者与其他治疗剂联合给药。在另一优选例中，所述组合物还包含一种或多种其他的治疗剂。优选地，所述治疗剂选自下组：地奥司明、呋塞米、安体舒通、螺内酯、苏孜阿甫，或其组合。
在某些实施方式中，本发明的活性成分在相同或分开的制剂中与作为联合治疗方案的部分的其它试剂同时使用，或与所述其它试剂依次使用。
本发明的活性成分的组合物的治疗有效剂量的一般范围将是：约1-2000mg/天、约10-约1000mg/天、约10-约500mg/天、约1-约250mg/天、约1-约100mg/天，或约10-约50mg/天。治疗有效剂量将以一个或多个剂量给予。然而，应理解，对于任何特定患者的本发明化合物的特定剂量将取决于多种因素，例如，待治疗的患者的年龄、性别、体重、一般健康状况、饮食、个体响应，给予时间、待治疗的疾病的严重性、施用的具体化合物的活性、剂型、应用模式和伴用药物。给定情况的治疗有效量能用常规实验测定，并在临床医生或医师能力和判断范围内。在任何情况中，所述活性成分或组合物将基于施用对象的个体情况以多个剂量给予并以允许递送治疗有效量的方式给予。
本发明的活性成分或组合物的施用对象的实例包括哺乳动物(例如，人、小鼠、大鼠、仓鼠、兔、猫、狗、牛、绵羊、猴等)。
本发明的主要优点包括：
a)人参皂苷Rb1可治疗TNF-α含量低的患者的淋巴水肿，从而实现该类药物的精准用药；
b)人参皂苷Rb1可减轻淋巴水肿模型小鼠尾部组织的纤维脂肪厚度，改善淋巴管回流功能；
c)人参皂苷Rb1可刺激淋巴管内皮细胞VEGF-C mRNA表达，或其蛋白的表达量。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
本发明以下实验例中，人参皂苷Rb1(结构简式如图1所示)采用市售品或按照中药领域常用提取方法从三七的干燥根及根茎中提取。
本发明以下实施例中，M为摩尔浓度，即mol/L；μM为微摩尔每升。
实施例1.尾部肿胀程度的检测
将30只清洁级6-8周龄，C57雌性小鼠随机分为对照组、模型组和人参皂苷Rb1组。采用异氟烷气体麻醉小鼠，在小鼠尾部基底的真皮上做了一个环形切口，切断真皮淋巴血管，切口边缘分开，并形成一个2-3mm的间隙，以延迟伤口闭合。术后3d始，人参皂苷Rb1组给予20mg/kg人参皂苷Rb1进行灌胃，模型组每天以等量生理盐水灌胃，连续干预4周。分别于术后1、3、7、14、21、28、33天测量小鼠尾部肿胀的体积(#p<0.05,##p<0.01,###p<0.001vs.对照组；*p<0.05,**p<0.01vs.模型组)。
结果如图2所示，可以看出人参皂苷Rb1组相比未添加人参皂苷Rb1的模型组具有显著减小的尾部肿胀程度，尤其在尾部肿胀最严重的21d，人参皂苷Rb1组比模型组小鼠的尾部肿胀减轻超过60％。
实施例2.人参皂苷Rb1对淋巴管回流功能的检测
将实施例1中的小鼠灌胃4周后，将小鼠置于麻醉机中，异氟烷麻醉后，尾部、臀部脱毛，以30号针头注射10μL的ICG(0.1μg/mL，蒸馏水溶解，避光保存)染料于小鼠尾尖部，在近红外照射下对照组可观察到强光信号，渐由尾尖部经尾部两侧淋巴管进入坐骨淋巴结。并分别拍摄注射后0h和24h的荧光强度图片(图3)。
结果如图3所示，可以看出在模型组中，尾部的荧光强度几乎没有差异，说明淋巴回流功能差，而在人参皂苷Rb1组中，荧光强度明显减弱，说明人参皂苷Rb1可以改善淋巴回流。
实施例3.人参皂苷Rb1对淋巴管内皮细胞VEGF-C表达检测
人参皂苷Rb1(0、0.1、0.5、1、2.5、5μM)预处理淋巴管内皮细胞24h。提取细胞总蛋白或mRNA，以Q-PCR或Western bolt技术，进行检测淋巴管内皮细胞VEGF-C表达情况。BCA发测定蛋白浓度，变性后经电泳、转膜、抗原抗体反应、曝光显影检测活化指标水平；逆转录mRNA，cDNA扩增，荧光实时定量技术，检测VEGF-C mRNA表达(*p<0.05,**p<0.01,***p<0.001)。
如图4所示，人参皂苷Rb1干预后淋巴管内皮细胞VEGF-C蛋白和mRNA的表达量显著升高，并随人参皂苷Rb1的浓度升高，呈现出一定的剂量依赖效应。提示人参皂苷Rb1增加VEGF-C表达，促进淋巴管的生成，从而促进淋巴管回流功能，改善淋巴水肿的程度。
对比例1.人参皂苷Rg1在TNF-α刺激下促进淋巴管内皮细胞VEGF-C mRNA的表达
在有或无TNF-α(1ng/mL)刺激下，同时用不同浓度(0，10，50，100nM)人参皂苷Rg1处理淋巴管内皮细胞24h后，提取细胞mRNA，以RT-qPCR技术，进行检测淋巴管内皮细胞VEGF-C mRNA表达情况。逆转录mRNA，cDNA扩增，荧光实时定量技术，检测VEGF-C mRNA表达，使用2﹣△△Ct法分析数据。
Rg1在无TNF-α刺激和有TNF-α刺激下VEGF-C mRNA的相对表达情况如表1和图5所示。
表1 Rg1在无TNF-α刺激和有TNF-α刺激下VEGF-C与β-肌动蛋白的相对mRNA表达
Figure BDA0003326933010000131
对比例2.人参皂苷Rg1在TNF-α刺激下促进淋巴管内皮细胞VEGF-C蛋白的表达
在有或无TNF-α(1ng/mL)刺激下同时用不同浓度(0，10，50，100nM)人参皂苷Rg1，或VEGF-c蛋白(0.34nM)处理淋巴管内皮细胞24h后，进行蛋白样品提取。再以Western bolt技术，进行检测淋巴管内皮细胞VEGF-C蛋白表达情况。BCA法测定蛋白浓度，变性后经电泳、转膜、抗原抗体反应、曝光显影检测活化指标水平。
Rg1在无TNF-α刺激(图6)和有TNF-α刺激(图7)下VEGF-C蛋白的相对β-肌动蛋白的表达情况如下表2、表3所示。
表2 Rg1在无TNF-α刺激下VEGF-C与β-肌动蛋白的相对蛋白表达
空白 Rg1 5nM Rg1 10nM Rg1 50nM Rg1 100nM
1 0.81 0.85 0.97 0.94 1.14
2 0.89 0.80 1.06 0.98 1.10
3 0.82 0.82 1.03 0.94 1.13
平均 0.84 0.82 1.02 0.95 1.12
表3 Rg1在有TNF-α刺激下VEGF-C与β-肌动蛋白的相对蛋白表达
Figure BDA0003326933010000141
实验表明，在未添加TNF-α的条件下，添加人参皂苷Rg1相比对照组，VEGF-C蛋白和mRNA的表达情况没有统计学的差异；而在TNF-α刺激下，人参皂苷Rg1+TNF-α治疗组相比仅添加TNF-α的治疗组表现出显著提升的促进VEGF-C的mRNA和蛋白表达的作用，并随人参皂苷Rg1的浓度升高，呈现出一定的剂量依赖效应。说明人参皂苷Rg1必须在TNF-α存在下才可以表现出促进VEGF-C表达的作用，在无TNF-α存在下，人参皂苷Rg1没有明显的促进作用。此外，添加TNF-α和100nM人参皂苷Rg1的效果仍不如添加0.34nM的VEGF-C。
对比例3.人参皂苷Rg1在TNF-α刺激下促进淋巴管内皮细胞的管形成和迁移
将基质胶(Gibco Life Technologies Corporation，Grand Island，NY，USA，目录号A14132-02，50μL)移液至96孔板中，并在37℃下聚合30min。将淋巴管内皮细胞以3×104个细胞/孔的密度接种到基质胶层上，然后添加TNF-α(1ng/mL)和不同浓度的Rg1(0、10、50、100nM)或VEGF-C(0.34nM)，6小时后，通过显微镜(Leica TCS-SP5，德国)分析管的形成(图8中A)。
在12孔板中培养LEC(2×105个细胞/孔)，并在24小时后用移液管将融合的单层中间划痕。并用含有TNF-α(1ng/mL)和不同浓度的Rg1(0、10、50、100nM)或VEGF-C(0.34nM)的培养基替换孔中的原培养基。观察Rg1或VEGF-C处理后24小时监测伤口闭合情况，并拍摄代表性显微照片(图8中B)。
如图8所示，在TNF-α刺激下人参皂苷Rg1表现出促进淋巴管内皮细胞生成和迁移的作用。
讨论
与必须在TNF-α刺激下才能促进淋巴管内皮细胞VEGF-C的表达的人参皂苷Rg1不同，人参皂苷Rb1可以在无TNF-α刺激下有效减轻淋巴水肿模型小鼠尾部组织的纤维脂肪厚度，改善淋巴回流功能，刺激VEGF-C mRNA及其蛋白的表达，进而改善淋巴水肿，且人参皂苷Rb1的施用浓度低(10μM以下)，因此可以实现该类药物的精准化应用。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物的用途，其特征在于，用于制备预防和/或治疗淋巴水肿的组合物；
Figure FDA0003326932000000011
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述淋巴水肿适用于TNF-α在体内的含量低的对象，其中所述TNF-α含量低是指TNF-α含量低于1.5ng/mL。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述淋巴水肿选自下组：原发性淋巴水肿、继发性淋巴水肿。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述继发性淋巴水肿选自下组：感染性淋巴水肿、损伤性淋巴水肿、恶性肿瘤性淋巴水肿，或其组合。
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述预防和/或治疗淋巴水肿包括一个或多个选自下组的特征：
(i)降低淋巴水肿肿胀部位的纤维脂肪厚度；
(ii)改善淋巴回流功能；
(ii)促进淋巴管内皮细胞VEGF-C表达；
(iv)刺激淋巴管内皮细胞分泌释放VEGF-C；
(v)防止淋巴积液再生。
6.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物含有浓度≥1μM的人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物。
7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述提取物中，人参皂苷Rb1的含量C1≥33wt％，其中所述含量C1按提取物干重计。
8.一种用于治疗淋巴水肿的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括：
(a)人参皂苷Rb1、或其药学上可接受的盐、或其提取物；
(b)药学上可接受的载体。
9.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型选自下组：凝胶剂、贴剂、片剂、胶囊剂、散剂、膏剂、粉剂、针剂、水剂、肠溶缓释制剂或注射剂。
10.如权利要求8所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型选自下组：口服剂型、经皮注射剂型、静脉注射剂型、肌肉内注射剂型。
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