CN101455690A - 治疗小儿食积的中药组合物及其制备方法和质量控制方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗小儿食积的中药组合物及其制备方法和质量控制方法。本发明药物组合物由鸡内金、六神曲、山楂、土白术等原料药为活性成份或其水提物为活性成份和药学上可接受的附加剂组成，其制备方法简便、易行，能够最大限度的保留药物中的有效成份、发挥药物疗效，质量控制方法对山楂、土白术做了薄层鉴别，药鸡内金做了含量测定，可以有效控制药品质量，保证药物疗效的稳定性。

Description

治疗小儿食积的中药组合物及其制备方法和质量控制方法

技术领域

本发明涉及一种治疗小儿食积的中药组合物，尤其是涉及一种小儿因脾胃不和引起的食积、厌食、泻痢的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属于中药技术领域。

背景技术

小儿食积、厌食主要是由于以下原因：一是饮食不当。有些家长缺乏育儿保健知识，饮食不讲科学，不重视卫生，片面强调吃些高营养的滋补食品，伤及小儿娇嫩的胃肠，造成胃肠不能正常消化、吸收，以致食欲下降，甚至滥用补品，造成小儿性早熟等疾病。也有家长认为孩子吃得越多越壮，使小儿营养过剩，造成脂肪细胞数量增多和脂肪细胞个体肥大，使多余的脂肪堆积在身体各部，再加上活动较少，使小儿形成肥胖症。孩子胖而非壮，反是百病之源。二是过于放纵，饮食不节制。有些家长由于对孩子溺爱，对孩子的各种要求百依百顺，养成孩子放纵任性的习惯，如无节制的吃零食、喝冷饮、吃瓜果等，使孩子从小养成不良的进食习惯，导致小儿脾胃不和，脾失健运，出现积滞、呕吐、泄泻、厌食等症，影响孩子的身体健康。中医认为脾胃为后天之本，气血生化之源，一旦脾胃不和，必然引起的食积胀满，饮食停滞，呕吐泄痢等症，中医治疗脾胃不和多以健脾开胃，消食化积药物为主。中医治疗小儿脾胃不和效果显著，不仅避免了西药对小儿胃肠的刺激及不良反应的出现，而且能够达到标本兼治的效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种治疗小儿食积的中药组合物；

本发明的另一目的是提供该中药组合物的制备方法；

本发明的第三个目的是提供该中药组合物的质量控制方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

本发明所述治疗小儿食积的中药组合物，它是由以下重量份原料药组成：鸡内金50～70重量份、六神曲60～80重量份。

上述治疗小儿食积的中药组合物还包括以下原料药：山楂10～20重量份、土白术20～40重量份。

本发明所述治疗小儿食积的中药组合物，其制备方法包括以下步骤：

(1)取鸡内金药材，用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后50～60℃烘干，取出，喷以60～80％乙醇，闷润20～50分钟，50～60℃左右烘干，即可；

(2)取六神曲药材，喷以50～80％乙醇闷润至表面全部润湿，常温晾干，即可；

(3)称取步骤(1)、(2)所得净选后的原料药材：鸡内金50～70重量份、六神曲60～80重量份；

(4)将步骤(3)中鸡内金粉碎至最细粉，作为活性成份I；或用水对鸡内金进行回流提取，得到水提浓缩液作为活性成份I；

(5)将步骤(3)中六神曲粉碎至最细粉，作为活性成份II；

(6)把活性成份I和活性成份II混合并加入附加剂，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂。

上述的本发明中药组合物的制备方法中，附加剂包括蔗糖30～80重量份、淀粉60～90重量份、硬脂酸镁1～3重量份中的一种或几种。

本发明中药组合物的制备方法中所述的最细粉的粒径125～150μm。

本发明所述的中药组合物片剂的制备方法，其中制粒时所用润湿剂为40％～60％乙醇。

本发明药物组合物中鸡内金健胃消食，六神曲健脾和胃、消食调中，山楂消食健胃，土白术健脾、和胃。诸药合用共奏健脾开胃，消食化积之功效。

本发明中药组合物的质量控制方法包括以下鉴别方法和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

(1)取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，加乙醚30-40ml，浸泡30-40分钟，超声处理10-20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2-4μl，分别点于同一以含4％醋酸钠制成的硅胶G薄层板上，以乙醚-丙酮(3-6：1-3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，用乙醚30-40ml，加热回流20-30分钟，放冷，滤过，滤液挥干溶剂，残渣加乙酸乙酯0.5ml，作为供试品溶液；取白术对照药材0.5g，加正己烷2-5ml，超声处理110-20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(40-60：1-5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点；

含量测定：

取本发明中药组合物相当于原药材5g，研细，取0.5g，精密称定，置10ml量瓶中，加0.060～0.070mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻度，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，加0.065mol/L的盐酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；取试管6支，其中3支分别精密加入对照品溶液1ml，另3支分别精密加入供试品溶液1ml，置37℃水浴中，保温3～7分钟，精密加入预热至37℃的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37℃水浴中反应8～12分钟。立即精密加入3～7％三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液备用。另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置37℃水浴中保温8～12分钟，再精密加入3～7％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录IV A)在260～280nm的波长处测定吸收度，计算，即得；

本发明中药组合物相当于原料药材0.5g含鸡内金以胃蛋白酶计不低于2.0IU/g。

本发明中药组合物的质量控制方法优选以下鉴别方法和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

(1)取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，加乙醚30ml，浸泡30分钟，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以含4％醋酸钠制成的硅胶G薄层板上，以乙醚-丙酮(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，用乙醚30ml，加热回流20分钟，放冷，滤过，滤液挥干溶剂，残渣加乙酸乙酯0.5ml，作为供试品溶液；取白术对照药材0.5g，加正己烷2ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(50：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点；

含量测定：

取本发明中药组合物相当于原药材5g，研细，取0.5g，精密称定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻度，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，加0.065mol/L的盐酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；取试管6支，其中3支分别精密加入对照品溶液1ml，另3支分别精密加入供试品溶液1ml，置37℃水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37℃的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37℃水浴中反应10分钟；立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液备用；另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置37℃水浴中保温10分钟，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录IV A)在275nm的波长处测定吸收度，计算，即得；

本发明中药组合物相当于原料药材0.5g含鸡内金以胃蛋白酶计不低于2.0IU/g。

本发明所提供的中药组合物的制备方法和质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到。制备方法中通过对各味药材有效成份分析，根据临床需要，制定出合适的工艺路线。鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，使得鉴别显色效果明显，而且方法经济适用、结果快速。含量测定方法中通过对供试品处理方法的筛选，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品要相比其他方法测定的产品在药理效果上表现的更为稳定，临床效果更好。

下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。

具体实施方式

试验例1、制备工艺试验研究

本发明中药组合物处方中原料药鸡内金主要含胃蛋白酶、淀粉酶、类角蛋白及谷氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、颉氨酸等17种氨基酸，六神曲主要含有有酵母菌，其他成份有挥发油、甙类、脂肪油及维生素B等，山楂提取物主要有效成份为有机酸及山楂黄铜类，白术含有苍术酮、白术内酯A和B等挥发油。其中蛋白质、氨基酸类、酶类、挥发油类物质在提取过程中极易被破坏，所以在设计制备工艺时根据各味药所含有效成份的不同，经过多次考察，最后确定在制备不同制剂时采用不同的原料药提取方法，这样不仅满足了制剂的需要，而且最大限度保留了药物中的有效成份。下面是片剂部分工艺试验的结果。

1、粉碎度考察

由于小儿服用药物一般比较困难，常采用冲服或通过咀嚼服用，而药材粉碎度对于药物的口感有很大的影响，因此应尽可能提高药材的粉碎度以保持良好的口感，但如果粉末过细，则易附着于冲头表面，造成粘冲和拉冲。为此我们做了粉碎度考察。

1.1 鸡内金细度考察 取鸡内金药材850g，粉碎，分别过4号(65目)、5号(80目)、6号(100目)筛，计算收率，结果如表1。

表1  鸡内金药材细度考察结果(n＝3)

经粉碎试验表明：粉碎度愈细，粉碎收率愈低，但口感愈好，口中的砂粒感愈小。因此选用药材粉碎过6号筛，其粒径为125～150μm。

1.2 六神曲、土白术和山楂细度考察 取六神曲1650g、土白术600g、山楂300g粉碎，分别过4号(65目)、5号(80目)、6号(100目)筛，计算收率，结果如表2。

表2 六神曲、土白术细度考察结果(n＝3)

结果表明：粉碎度愈细，粉碎收率愈低，但口感愈好，口中的砂粒感愈小。因此选用药材粉碎过6号筛，其粒径为125～150μm。

2、辅料的选择

称取鸡内金425g、六神曲825g、山楂150g、土白术300g，粉碎至粒径为125～150μm，加入辅料，混匀，制粒，干燥，整粒，再加入适量的硬脂酸镁，压片，即得。通过比较压片的难易、片剂外观、口感，选择合适的辅料及辅料用量比例，结果见下表3：

表3 辅料选择试验结果

从上表可以看出，片剂辅料选择蔗糖、淀粉，与药粉比例以5：2：3为佳，制得片剂口感及外观均较其他辅料处方好。

3、制粒工艺考察

按照上述优选工艺，称取鸡内金、六神曲、山楂、白术、蔗糖粉和淀粉，将鸡内金、六神曲、山楂、土白术粉碎，混合均匀，进行全粉末压片，结果表明，药粉的流动性较差，容易造成片重差异不合格或松片现象，同时有粘冲现象。

在本发明药物中加入了蔗糖和淀粉两种辅料，但这两种辅料的流动性和可压性均不够理想，因此考虑将药粉进行制粒以改善流动性和可压性。同时适当加入润滑剂以改善颗粒的流动性，减少颗粒与冲模之间的摩擦力，保证片剂剂量的准确、光洁。试验结果如下：

表4-1 制粒工艺考察(1)

结果表明：采用50％乙醇为润湿剂进行制粒，药粉黏性适当，制粒容易，颗粒松软，色泽均匀，故选用50％乙醇为润湿剂制粒。

按上述优选方法制粒，经过整粒，然后比较加入不同润滑剂后，颗粒的流动性及压片的难以等情况。

表4-2 制粒工艺考察(2)

结果表明：加入0.4％硬脂酸镁作为润滑剂，混合均匀，压片，经实验证明加入后可以有效地消除粘冲现象，片剂表面光洁，颗粒流动性好，剂量准确。因此选用硬脂酸镁作为润滑剂。

4、药材净选

本发明药物中部分药材为全粉碎入药，因此药材的净选工艺对于制剂的质量和品质具有十分重要的意义。

4.1 鸡内金的净选 本发明药物制剂中鸡内金采用生品入药，因鸡内金为动物类药材稚科动物家鸡的干燥沙囊内壁，在对市场上鸡内金药材的调查发现，在市场上销售的鸡内金药材，常含有部分的腐烂、变质的药材，常带有部分鸡的内脏物质和杂质，同时含有大量的微生物，如果不对鸡内金进行净选和抑菌处理是不能直接入药。文献报道：鸡内金的主要有效成分为胃蛋白酶，胃蛋白酶在干燥状态下活力比较稳定，可以100℃加热10分钟不破坏，最适pH值为1.5～2.0，溶于20％乙醇溶液中；但在碱性条件下不稳定。因此我们采用以下工艺对其进行净选：

取鸡内金药材，置挑选台上，挑选出霉变、腐烂的药材，再用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后60℃左右烘干，取出，喷以75％乙醇，闷润30分钟，60℃左右烘干，即可。

4.2 六神曲的净选 六神曲为辣蓼、青蒿、苍耳、赤小豆、苦杏仁等药加入面粉或麸皮混和后，经发酵而制成的曲剂，易染菌。研究表明曲剂以直接入药效果最好，但由于曲剂为生物发酵制品，所以含杂菌量很高，且常有霉变现象，因此入药前需要对药材进行净选。研究表明：在六神曲药材中，药材的表面含有大量的杂菌，而药材的内部中则主要含酵母菌。我们采用下列方法进行药材的处理。

先挑选出霉腐、虫蛀者，其余喷以70％乙醇闷润至表面全部润湿，室温晾干，即可。

试验例2 质量控制方法试验研究

在本发明中药组合物质量控制方法中对山楂提取物中熊果酸、土白术进行了薄层鉴别；鸡内金为君药，其有效成份含量的控制对本发明药物的疗效有显著性意义，进行了含量测定。以下是部分质量控制方法试验结果。

1、鉴别方法

(1)山楂的鉴别

供试品溶液的制备：取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，加乙醚30ml，浸泡30分钟，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

对照品溶液的制备：取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。

阴性对照品溶液的制备：按照供试品制备方法制备缺山楂的阴性对照样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各2μl，分别点于不同的薄层板上，展开。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。比较不同展开条件下，供试品溶液和对照品溶液的展开效果，结果见下表5：

表5 薄层色谱展开条件的选择

 

	条件1	条件2	条件3
				薄层板	硅胶G薄层板	4％醋酸钠制成的硅胶G薄层板	0.5％硼酸溶液制成的硅胶G薄层板
展开剂	甲苯-醋酸乙酯-甲酸(20:4:0.5)	乙醚-丙酮(4：1)	环己烷-乙酸乙酯(3：1)
				显色	喷以硫酸乙醇溶液(3→10)，在80℃加热至斑点显色清晰，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。	喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视	喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。
展开效果	供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，各斑点显色很浅，分离效果差，阴性无干扰.	供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，各斑点显色清晰，分离效果好，阴性无干扰.	供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，各斑点显色不清晰，分离效果差，重现性差。

从上表可以看出，选择展开条件2，供试品在与对照品相应位置，各斑点显色清晰，分离效果好，重现性好，阴性无干扰，符合试验要求。

(2)白术的薄层鉴别

方法一：取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，用乙醚30ml，加热回流20分钟，放冷，滤过，滤液挥干溶剂，残渣加乙酸乙醇0.5ml，作为供试品溶液。按照供试品制备方法制备缺白术的阴性对照样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。取白术对照药材0.5g，加正己烷2ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液、阴性对照品溶液及对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(50：1)为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点，阴性无干扰。

方法二：取本发明中药组合物相当于原药材10g，研细，置500ml圆底烧瓶中，加水250ml，连接挥发油测定器，自测定器上端加水至刻度，并溢流入烧瓶时为止，再加入石油醚(60～90℃)1ml，加热并保持微沸2小时，放冷，取石油醚层作为供试品溶液。按照供试品制备方法制备缺白术的阴性对照样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。另取白术对照药材1.8g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，但斑点不清晰，且该方法重现性不好。

方法三：取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，加乙酸乙酯20ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷2ml使溶解，作为供试品溶液。按照供试品制备方法制备缺白术的阴性对照样品，再按照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。另取白术对照药材0.5g，加乙酸乙酯10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各10μl，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以环己烷-甲苯-乙酸乙酯(14：3：3)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱图中，在与对照药材色谱相应的位置上，各斑点显色较浅，且该方法重现性不好。

比较以上方法，方法一的效果最好，不仅展开效果好、显色清晰，而且重现性好。

2、含量测定

鸡内金中胃蛋白酶为其有效成分和特征性成分，为了控制制剂质量，我们采用分光光度法对鸡内金中的胃蛋白酶活力进行测定。

1、仪器、试剂及试药

754型紫外—可见分光光度计上海分析仪器厂

电热恒温水温箱

美国丹法(Denver)十万分之一电子分析天平

盐酸  分析纯  批号：20030423  北京化工厂

三氯醋酸  分析纯  批号：20030215  北京化工厂

L—酪氨酸对照品  中国药品生物制品鉴定所  批号：140609—200109

牛血红蛋白  中国药品生物制品鉴定所  批号：140608—200301

2、测定方法的选择

对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的L—酪氨酸对照品适量，加0.065mol/L的盐酸溶液制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，即得。

牛血红蛋白试液的制备 取牛血红蛋白1g，置100ml量瓶中，加0.065mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备 取本发明中药组合物3份，每份相当于原药材1g，精密称定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的盐酸溶解并稀释至刻线，滤过，取滤液作为供试品溶液。

样品测定 取试管6支，其中3支各精密加入对照品溶液1ml，另3支各精密加入供试品溶液1ml，置37℃水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37℃的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37℃水浴中反应10分钟。立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液备用。另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置37℃水浴中保温10分钟，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法(附录IV A)在275nm的波长处测定吸收度，算出平均值As和A，按下式计算。

(As：对照品平均吸收度；A：供试品平均吸收度；Ws：1ml对照品溶液中含酪氨酸的量，μg；w：供试品取样量，g；n：供试品的稀释倍数。)结果见表6

表6 胃蛋白酶活力测定结果表

结果表明：3份本发明药物含量测定的RSD％为1.18％，方法具有重现性好、简单、快速的特点，故可以用于含量测定。

3、加样回收率试验

对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的L—酪氨酸对照品适量，加0.065mol/L的盐酸溶液制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液，即得。

牛血红蛋白试液的制备 取牛血红蛋白2.5g，置250ml量瓶中，加0.065mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻线，摇匀，即得。

标准溶液的制备 取鸡内金粉末约0.07g，精密称定，至10ml量瓶中，加0.065mol/L的盐酸溶解并稀释至刻线，滤过，取滤液作为标准溶液。

供试品溶液的制备 取本发明中药组合物共6份，每份约相当于原药材0.8g，精密称定，分别置10ml量瓶中，加0.065mol/L的盐酸溶解并稀释至刻线，滤过，取滤液作为供试品溶液。

测定方法

标准溶液的测定 取具塞试管3支，各管均加入血红蛋白试液5.0ml，于37℃恒温水浴中保温10min，其中1支作为空白，加5％三氯醋酸液5.0ml，混匀，所有试管均精密加入标准溶液1.0ml，立即混匀，准确反应10min，除空白试管外，其余试管再分别加入5％三氯醋酸液5.0ml，立即混匀，静置15min，分别滤过，滤液作为标准溶液。分别量取标准溶液和标准空白溶液各1.0ml，照分光光度法(附录IV A)在275nm的波长处测定吸收度，计算出标准管的平均吸收度。

供试品溶液的测定 取具塞试管11支，各管均加入血红蛋白试液5.0ml，于37℃恒温水浴中保温10min，其中1支作为空白，加5％三氯醋酸液5.0ml，混匀，所有试管均精密加入供试品溶液1.0ml，立即混匀，准确反应10min，除空白试管外，其余试管再分别加入5％三氯醋酸液5.0ml，立即混匀，静置15min，分别滤过，滤液作为供试品溶液。分别量取供试品溶液和供试品空白溶液各1.0ml，照分光光度法(附录IV A)在275nm的波长处测定吸收度，计算出供试品溶液的平均吸收度。

回收率％＝(供试品溶液平均吸收度-供试品空白对照液的平均吸收度)/(标准溶液平均吸收度-标准空白对照液的平均吸收度)×100％，结果见表7

表7 胃蛋白酶活力回收率表

(6号为供试品空白   7号为标准溶液)

结果表明：胃蛋白酶活力回收率在99.18％～102.50％之间，平均回收率为100.00％，符合规定，故本方法可行。

通过上述方法学试验研究，结果表明，采用紫外分光广度法测定本发明药物中胃蛋白酶活力，该方法具有简便、可靠、快速的特点，适合制剂的含量测定和质量评价。

试验例3 药效学试验研究

1 材料

1.1 试验药物及试剂 本发明药物I，按照实施例1制备的制剂；本发明药物II，按照实施例2制备的制剂；本发明药物III，按照实施例3制备的制剂；阳性对照药物，市售小儿健脾散；盐酸肾上腺素注射液，广州明兴制药厂生产。

1.2 动物及实验环境 SD大鼠，清洁级，体重180～220g，雌雄兼用；NIH小鼠、ICR小鼠、昆明种小鼠，清洁级，体重18～22g，雌雄兼用；新西兰兔，普通级，体重2.0～2.5kg。

2 方法和结果

2.1 兔离体肠管运动试验 兔槌击头部致死，立即取出十二指肠置台氏液中，用台氏液洗去肠腔内容物，取长约2.0cm的肠管悬挂于盛有20ml台氏液的麦氏浴管中，恒温37±0.5℃，并通入空气，用WXT-自动平衡记录仪描记运动曲线，待肠管运动基本规则后进行如下试验。本发明药物I～III、阳性对照药物分别取日用量，实验时以蒸馏水配制成混悬液，离体实验则离心后取上清液。

对十二指肠自发活动的影响：分别加入本发明药物I～III及阳性对照药物上清液各0.5ml，观察记录给药前后运动曲线的变化，以自发活动兴奋百分率表示。自发活动兴奋百分率＝(加药后5min收缩幅度-加药前收缩幅度)/加药前收缩幅度×100％。

对肾上腺素(Adr)引起十二指肠收缩抑制的对抗作用：加入1g/L的Adr溶液0.1mL，待再次进入稳定期后，分别加入本发明药物I～III及阳性对照药物上清液各0.5ml，观察记录给药前后运动曲线的变化，以对抗肾上腺素百分率表示，对抗肾上腺素百分率＝(加药后5min收缩幅度-加药前收缩幅度)/(加Adr前收缩幅度-加药前收缩幅度)×100％。见表8。

表8 对家兔离体十二指肠运动的影响(x±s)

 

组别	药物浓度(g/L)	肠管数	肠管数自发活动兴奋率(％)	对抗Adr百分率(％)
					本发明药物I	15	8	27.4±18.7*	96.6±39.6**
本发明药物II	15	8	24.6±15.7	84.7±33.5*
					本发明药物III	15	8	19.3±11.7	76.9±21.8
阳性对照药物	30	8	11.4±8.6	60.3±19.4

注：与阳性对照药物比较**P<0.01，*P<0.05。

结果表明：本发明药物与阳性对照药物对家兔离体十二指肠自发活动均有兴奋作用，对肾上腺素引起的十二指肠收缩抑制有明显的解除作用，部分肠管加药后收缩幅度大于加肾上素前的基础水平，本发明药物的作用优于阳性对照药物，其中本发明药物I的作用最显著。

2.2 对正常小鼠胃排空的作用 小鼠50只，随机分为5组。本发明药物、阳性对照药物均按日用量的20倍设计。实验前小鼠禁食12小时，分别灌服药物或蒸馏水20ml/kg，给药后2小时，每鼠灌胃0.04％酚红溶液(含1.5％羧甲基纤维素)0.2ml，20分钟后处死动物，结扎贲门和幽门后取出胃，置于30ml 0.5N NaOH溶液中，沿胃大弯剪开胃，充分洗下胃内容物，取5ml3000rpm离心10分钟，吸上清液用722型分光光度计于560nm波长测吸光度(OD值)。标准管吸取0.2ml酚红溶液直接加入30ml 0.5N NaOH溶液中测OD值，以样本OD值与标准管OD值的比值计算胃酚红残留率，以胃酚红残留率为指标评价胃排空速度。结果见下表9：

表9 对正常小鼠胃排空的影响(x±s)

 

组别	鼠数(只)	剂量(g/kg)	酚红胃残留率(％)
				空白对照	10	--	61.6±24.5
本发明药物I	10	1.5	24.8±15.6**#
				本发明药物II	10	1.5	32.3±14.3**
本发明药物III	10	1.5	37.9±13.3*
				阳性对照药物	10	3.0	41.0±17.9*

与空白对照组比较*P<0.05，**P<0.01；与阳性对照药物组比较#P<0.05。

以上结果表明，本发明药物及阳性对照药物对正常小鼠胃排空均有促进作用。其中本发明药物的作用均高于阳性对照药物，尤其本发明药物I与阳性对照药物比较有显著性差异。

2.3 对肾上腺素负荷小鼠胃排空的影响 小鼠60只分层随机分为6组，用肾上腺素制备胃排空抑制模型，同2.1所述方法进行试验，给药前禁食12小时，给药后1小时45分除正常对照组外，各组小鼠皮下注射肾上腺素0.5mg/kg，15分钟后灌胃酚红溶液，30分钟后处死动物，按上述方法分别测量胃酚红残留率。

表10 对肾上腺素负荷小鼠胃排空的影响(x±s)

 

组别鼠数(只)	剂量(g/kg)	酚红胃残留率(％)
			正常对照组	-	34.6±15.5**
肾上腺素+水	-	88.8±16.6
			肾上腺素+本发明药物I	1.5	45.2±19.8**#
肾上腺素+本发明药物II	1.5	51.5±25.6**
			肾上腺素+本发明药物III	1.5	55.4±22.6**
肾上腺素+阳性对照药物	3.0	62.8±22.9**

与肾上腺素组比较*P<0.05，**P<0.01；与阳性对照药物组比较#P<0.05。

以上结果表明，肾上腺素组胃酚红残留率显著升高，本发明药物组和阳性药物对照组胃酚红残留率则较单纯肾上腺素组明显下降，本发明药物与阳性对照药物对肾上腺素引起胃排空抑制有一定的拮抗作用，其中本发明药物组中本发明药物I的拮抗作用较阳性对照药物有显著性增强。

2.4 对大鼠胃酸、胃蛋白酶分泌的影响 大鼠55只随机分5组，本发明药物I～III及阳性对照药物均按临床成人日用量的20倍设计给药。给药体积均为10ml/100g体重，空白对照组给等体积蒸馏水。大鼠禁食不禁水24小时后在乙醚轻度麻醉下开腹结扎幽门，立即在十二指肠注入药物或蒸馏水，关腹缝合创口，送回笼中。手术后5小时处死动物，收集胃液2000rpm离心10分钟。分别测量胃液量、游离酸度、总酸度、总酸排出量、胃蛋白酶活性及胃蛋白酶排出量。胃酸采用酸碱中和滴定法，胃蛋白酶活性采用麦特氏法，结果见表11。

表11 对胃液分泌量、胃酸分泌、胃蛋白酶分泌的影响(-x±s)

 

组别	鼠数(只)	剂量(g/kg)	胃液量(ml)	游离酸(mmol/L)	总酸度(mmol/L)	总酸排出量(μmol/h)	胃蛋白酶活性(活性单位/ml)	胃蛋白酶排出(活性单位/h)
									空白对照	11	--	6.74±2.20	74.1±22.1	113.6±23.9	154.5±58.5	336.2±78.3	449.9±156.1
本发明药物I	11	1.5	9.20±2.06**	80.1±32.2	125.5±22.1	229.7±62.6**	365.2±62.1	310.1±126.7
									本发明药物II	11	1.5	6.92±1.99	82.1±18.4	117.8±17.3	165.2±62.2	342.5±70.4	329.3±112.8
本发明药物III	11	1.5	6.34±3.04	60.9±28.9	104.5±20.0	135.5±73.7	337.8±74.6	367.8±153.4
									阳性对照药物	11	3.0	4.71±1.80*	62.1±24.0	103.5±24.9	100.2±51.3*	362.5±49.6	341.3±140.2

与空白对照组比较*P<0.05，**P<0.01；与阳性对照药物组比较#P<0.05。

结果表明，本发明药物组的胃液量、总酸排出量明显增加，对胃蛋白酶排出量也有一定的促进作用。但阳性对照药物对胃液量及总酸排出量表现明显的抑制作用。本发明药物促进胃蛋白酶排除的作用优于阳性对照药物，以本发明药物I的作用最好。

2.5 对脾虚小鼠常温游泳时间的影响

选取25～28g的ICR小鼠64只，雌雄各半，先用生大黄煎液30g/kg给小鼠灌胃，每天1次，连续给9d，以造成小鼠脾虚模型。然后按下表1分组并灌胃给药，每天1次，连续7d，同期另没正常组。于末次给药30min，测定各组小鼠游泳持续时间(水温29℃、负重10％)，结果见表12。

表12 常温下对脾虚小鼠游泳时间的影响(-x±s)

 

组别	n	剂量(g/kg)	游泳时间/min
				正常组	16	--	43.8±15.4**
阴性对照组	16	--	22.7±7.5##
				阳性药物对照组	16	1.5	32.6±13.7**
本发明药物I	16	1.5	38.7±14.5**
				本发明药物II	16	1.5	35.5±11.8**
本发明药物III	16	3.0	34.6±14.7**

注：与正常组比.##P<001；与阴性对照组比.**P<0.01。

表明本发明药物及阳性对照药物均能显著延长脾虚小鼠在常温下的游泳时间，本发明药物的作用优于阳性对照药物，其中本发明药物I的作用最好。

2.6 对脾虚小鼠常压下耐缺氧存活时间的影响

按照2.5的方法造成小鼠脾虚模型。各组每天1次，连续7d。末次给药30min，按常规方法测小鼠常压缺氧时间，结果见表13。

表13 常压下对脾虚小鼠耐缺氧存活时间的影响(x±s)

 

组别	n	剂量(g/kg)	存活时间/min
				正常组	16	--	20.3±3.7**
阴性对照组	16	--	16.6±2.4##
				阳性药物对照组	16	1.5	18.4±1.9*
本发明药物I	16	1.5	20.1±3.1**※
				本发明药物II	16	1.5	19.2±2.6**
本发明药物III	16	3.0	18.7±2.1*

注：与正常组比.##P<0.01；与阴性对照组比.**P<0.01，*P<0.05；与阳性药物对照组比较※P<0.05。

以上结果表明，本发明药物及阳性对照药物均能明显延长脾虚小鼠在常压缺氧条件下的存活时间，本发明药物I的作用显著优于阳性对照药物。

从以上药效学试验可以看出，本发明药物具有良好的健脾开胃、消食化积的作用，尤其是本发明药物I，对家兔离体十二指肠运动的影响、对正常小鼠胃排空的影响、对肾上腺素负荷小鼠胃排空的影响、对大鼠胃酸、胃蛋白酶分泌的影响、常温下对脾虚小鼠游泳时间的影响及常压下对脾虚小鼠耐缺氧存活时间的影响都有非常显著的效果。

具体实施例

实施例1

取鸡内金药材，用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后50℃烘干，取出，喷以80％乙醇，闷润20分钟，50℃烘干，备用；取六神曲药材，喷以60％乙醇闷润至表面全部润湿，常温晾干，备用；按以下处方量称取经净选的原料药材：

鸡内金60g、六神曲65g、山楂15g、土白术30g

以上四味，分别粉碎至100目，加入白砂糖粉68g，淀粉102g，混匀，过筛，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，即得。

鉴别：

(1)取本品5片，研细，加乙醚30ml，浸泡30分钟，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以含4％醋酸钠制成的硅胶G薄层板上，以乙醚-丙酮(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点.

(2)取本品5片，研细，用乙醚30ml，加热回流20分钟，放冷，滤过，滤液挥干溶剂，残渣加乙酸乙酯0.5ml，作为供试品溶液。取白术对照药材0.5g，加正己烷2ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(50：1)为展开剂，置用展开剂预饱和15分钟的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点。

含量测定：

取本品10g，研细，取0.5g，精密称定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻度，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，加0.065mol/L的盐酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；取试管6支，其中3支分别精密加入对照品溶液1ml，另3支分别精密加入供试品溶液1ml，置37℃水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37℃的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37℃水浴中反应10分钟，立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液备用；另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置37℃水浴中保温10分钟，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法(附录IV A)在275nm的波长处测定吸收度，计算；本品含鸡内金以胃蛋白酶计不低于2.0IU/g。

实施例2

取鸡内金药材，用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后60℃烘干，取出，喷以75％乙醇，闷润30分钟，60℃烘干，备用；取六神曲药材，喷以70％乙醇闷润至表面全部润湿，常温晾干，备用；按以下处方量称取经净选的原料药材：

鸡内金50g、六神曲80g、山楂15g、土白术30g

以上四味，取鸡内金加8倍量水煎煮3次，第一次煎煮3小时，第二次煎煮2小时，第三次煎煮1次，合并煎液，浓缩至相对密度为1.20(50℃)，备用；将六神曲、山楂、土白术分别粉碎至100目，加入上述浸膏，混匀，减压干燥，粉碎至100目，加入白砂糖粉60g，淀粉95g，混匀，过筛，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，即得。

实施例3

取鸡内金药材，用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后60℃烘干，取出，喷以75％乙醇，闷润30分钟，60℃烘干，备用；取六神曲药材，喷以70％乙醇闷润至表面全部润湿，常温晾干，备用；按以下处方量称取经净选的原料药材：

鸡内金70g、六神曲60g

以上二味，分别粉碎至100目，加入白砂糖粉50g，淀粉75g，混匀，过筛，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，即得。

含量测定：

取本品10g，研细，取0.5g，精密称定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻度，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，加0.065mol/L的盐酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；取试管6支，其中3支分别精密加入对照品溶液1ml，另3支分别精密加入供试品溶液1ml，置37℃水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37℃的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37℃水浴中反应10分钟，立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液备用；另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置37℃水浴中保温10分钟，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法(附录IV A)在275nm的波长处测定吸收度，计算；本品含鸡内金以胃蛋白酶计不低于2.0IU/g。

实施例4

取鸡内金药材，用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后55℃烘干，取出，喷以80％乙醇，闷润25分钟，55℃烘干，备用；取六神曲药材，喷以65％乙醇闷润至表面全部润湿，常温晾干，备用；按以下处方量称取经净选的原料药材：

鸡内金70g、六神曲80g、山楂10g、土白术20g

以上四味，分别粉碎至100目，加入白砂糖粉64g，淀粉96g，混匀，过筛，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，即得。

实施例5

取鸡内金药材，用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后60℃烘干，取出，喷以75％乙醇，闷润30分钟，60℃烘干，备用；取六神曲药材，喷以70％乙醇闷润至表面全部润湿，常温晾干，备用；按以下处方量称取经净选的原料药材：

鸡内金50g、六神曲60g、山楂20g、土白术40g

以上四味，分别粉碎至100目，加入白砂糖粉68g，淀粉102g，混匀，过筛，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸镁，混匀，压制成1000片，即得。

实施例6

取鸡内金药材，用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后60℃烘干，取出，喷以75％乙醇，闷润30分钟，60℃烘干，备用；取六神曲药材，喷以70％乙醇闷润至表面全部润湿，常温晾干，备用；按以下处方量称取经净选的原料药材：

鸡内金60g、六神曲70g、山楂15g、土白术30g

以上四味，分别粉碎至100目，加入淀粉75g，混匀，过筛，用50％乙醇制粒，60℃干燥，整粒，加入0.4％硬脂酸镁，混匀，装入1000粒胶囊，即得。

实施例7

取鸡内金药材，用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后60℃烘干，取出，喷以75％乙醇，闷润30分钟，60℃烘干，备用；取六神曲药材，喷以70％乙醇闷润至表面全部润湿，常温晾干，备用；按以下处方量称取经净选的原料药材：

鸡内金60g、六神曲65g、山楂15g、土白术30g

以上四味，分别粉碎至100目，加入淀粉75g，混匀，过筛，用水泛丸，60℃干燥，即得。

Claims (8)

1、一种治疗小儿食积的中药组合物，其特征在于它是由以下重量份原料药组成：鸡内金50～70重量份、六神曲60～80重量份。

2、如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于该中药组合物还包括以下原料药：山楂10～20重量份、土白术20～40重量份。

3、如权利要求1所述的中药组合物，其制备方法包括以下步骤：

(1)取鸡内金药材，用流动水清洗，除去其余杂质及灰尘等，然后50～60℃烘干，取出，喷以60～80％乙醇，闷润20～50分钟，50～60℃烘干，即可；

(2)取六神曲药材，喷以50～80％乙醇闷润至表面全部润湿，常温晾干，即可；

(3)称取步骤(1)、(2)所得净选后的原料药材：鸡内金50～70重量份、六神曲60～80重量份；

(4)将步骤(3)中鸡内金粉碎至最细粉，作为活性成份I；或用水对鸡内金进行回流提取，得到水提浓缩液作为活性成份I；

(5)将步骤(3)中六神曲粉碎至最细粉，作为活性成份II；

(6)把活性成份I和活性成份II混合并加入附加剂，制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂。

4、如权利要求3所述的中药组合物制备方法，其中附加剂包括蔗糖30～80重量份、淀粉60～90重量份、硬脂酸镁1～3重量份中的一种或几种。

5、如权利要求3所述的中药组合物制备方法，其中最细粉其粒径为125～150μm。

6、如权利要求3所述的中药组合物片剂的制备方法，其中制粒时所用润湿剂为40％～60％乙醇。

7、如权利要求1～3任一项所述的中药组合物，其质量控制方法包括以下鉴别方法和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

(1)取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，加乙醚30-40ml，浸泡30-40分钟，超声处理10-20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2-4μl，分别点于同一以含4％醋酸钠制成的硅胶G薄层板上，以乙醚-丙酮(3-6：1-3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，用乙醚30-40ml，加热回流20-30分钟，放冷，滤过，滤液挥干溶剂，残渣加乙酸乙酯0.5ml，作为供试品溶液；取白术对照药材0.5g，加正己烷2-5ml，超声处理110-20分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-乙酸乙酯(40-60：1-5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点；

含量测定：

取本发明中药组合物相当于原药材5g，研细，取0.5g，精密称定，置10ml量瓶中，加0.060～0.070mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻度，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，加0.065mol/L的盐酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；取试管6支，其中3支分别精密加入对照品溶液1ml，另3支分别精密加入供试品溶液1ml，置37℃水浴中，保温3～7分钟，精密加入预热至37℃的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37℃水浴中反应8～12分钟，立即精密加入3～7％三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液备用；另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置37℃水浴中保温8～12分钟，再精密加入3～7％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录IVA)在260～280nm的波长处测定吸收度，计算，即得。

8、如权利要求7所述中药组合物，其质量控制方法优选以下鉴别方法和/或含量测定方法中的一种或几种：

鉴别：

(1)取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，加乙醚30ml，浸泡30分钟，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以含4％醋酸钠制成的硅胶G薄层板上，以乙醚-丙酮(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

(2)取本发明中药组合物相当于原药材2g，研细，用乙醚30ml，加热回流20分钟，放冷，滤过，滤液挥干溶剂，残渣加乙酸乙酯0.5ml，作为供试品溶液；取白术对照药材0.5g，加正己烷2ml，超声处理15分钟，滤过，滤液作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述供试品溶液及对照药材溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60~90℃)-乙酸乙酯(50：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰；供试色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，并应显有一桃红色主斑点；

含量测定：

取本发明中药组合物相当于原药材5g，研细，取0.5g，精密称定，置10ml量瓶中，加0.065mol/L的盐酸溶液溶解并稀释至刻度，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取105℃干燥至恒重的酪氨酸对照品适量，加0.065mol/L的盐酸溶液制成每1ml中含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；取试管6支，其中3支分别精密加入对照品溶液1ml，另3支分别精密加入供试品溶液1ml，置37℃水浴中，保温5分钟，精密加入预热至37℃的血红蛋白试液5ml，摇匀，并准确计时，在37℃水浴中反应10分钟，立即精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液备用；另取试管2支，各精密加入血红蛋白试液5ml，置37℃水浴中保温10分钟，再精密加入5％三氯醋酸溶液5ml，其中1支加供试品溶液1ml，另1支加上述盐酸溶液1ml，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，分别作为供试品和对照品的空白对照，照分光光度法(中国药典2005年版一部附录IVA)在275nm的波长处测定吸收度，计算，即得；

本发明中药组合物相当于原料药材0.5g含鸡内金以胃蛋白酶计不低于2.0IU/g。