CN101405384A - 细胞培养用载体 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种提高在无血清培养中的细胞增殖性并同时没有混入感染因子的危险性的细胞培养用载体。即，本发明的特征在于，其要旨在于，含有交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A)和在1分子中具有至少1个细胞粘接性最小氨基酸序列(X)的人工多肽(P)，保水量为2～50g/g。(A)优选为对内含(甲基)丙烯酸及/或(甲基)丙烯酸的碱金属盐的单体水溶液进行逆相悬浮聚合从而制得的粒子。(P)优选为在(P)的1分子中具有至少1个辅助氨基酸序列(Y)而成。(X)优选为Arg Gly Asp序列。
Description
技术领域
本发明涉及一种细胞培养用载体。更具体而言，涉及一种对无血清培养的细胞增殖性尤其有效的细胞培养用载体。
背景技术
作为细胞培养用载体，已知有具有动物来源的胶原的葡聚糖珠(Dextran Beads)(非专利文献1)、配有具有表达细胞粘接信号的最小氨基酸序列的多肽的聚苯乙烯珠(专利文献1)等。
非专利文献1：微载体细胞培养原理和技术(Microcarrier cell cultureprinciple & methods)(Pharmacia Biotech(株)，1996年10月10日发行)27～31页等
专利文献1：日本特开2003-189848号公报
发明内容
但是，所述珠(beads)的无血清培养时的细胞增殖性不充分。另外，所述葡聚糖珠由于具有动物来源成分而存在混入病毒等感染因子的危险性。即，本发明的目的在于提供一种提高在无血清培养中的细胞增殖性并同时没有混入感染因子的危险性的细胞培养用载体。
本发明的细胞培养用载体的特征在于，其要旨在于，含有交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A){以下有时简称为粒子(A)。}和在1分子中具有至少1个细胞粘接性最小氨基酸序列(X)的人工多肽(P)，保水量为2～50g/g。
另外，本发明的细胞培养用载体的制造方法的特征在于，包括：在溶媒中混合粒子(A)和在1分子中具有至少1个细胞粘接性最小氨基酸序列(X)的人工多肽(P)，从而得到细胞培养用载体的工序；细胞培养用载体的保水量为2～50g/g。
另外，本发明的有用物质的生产方法，其要旨在于，包括：使用所述的细胞培养用载体及无血清培养基，培养细胞的工序。
另外，本发明的组织或脏器的生产方法，其要旨在于，包括：使用所述的细胞培养用载体及无血清培养基，培养细胞的工序。
本发明的细胞培养用载体发挥出出色的细胞增殖性。另外，由于不含有动物来源成分，所以混入病毒等感染因子的危险性小。
利用本发明的细胞培养用载体的制造方法，可以容易地得到所述的细胞培养用载体。
利用本发明的有用物质的生产方法，由于发挥出出色的细胞增殖性，所以可以大量地得到有用物质。另外，还可以容易地得到没有混入病毒等感染因子的有用物质。
利用本发明的组织和脏器的生产方法，由于发挥出出色的细胞增殖性，所以可以容易地得到目的组织或脏器。另外，还可以容易地得到没有混入病毒等感染因子的组织或脏器。
具体实施方式
<交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A)>
作为(甲基)丙烯酸(盐)，是指丙烯酸、甲基丙烯酸、丙烯酸盐以及甲基丙烯酸盐。作为丙烯酸盐及甲基丙烯酸盐，可以使用丙烯酸或甲基丙烯酸的碱金属(锂、钾及钠等)盐、碱土类金属(镁及钙等)盐及铵盐等。其中，优选碱金属盐，进而优选钠盐、锂盐及钾盐，特别优选钠盐及锂盐，最优选钠盐。
交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A)只要以(甲基)丙烯酸盐为主要构成单元而成即可，可以共聚能够与(甲基)丙烯酸(盐)共聚的其他乙烯基单体。作为能够共聚的其他乙烯基单体，包括共聚性单体(亲水性乙烯基单体及疏水性乙烯基单体)及交联性单体等。
作为共聚性单体及交联性单体，可以使用公知的单体{日本专利特开平11-5808号公报(对应美国专利；第5998553号：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)、日本特开2001-2935号公报、日本特开2003-165883号公报、日本特开2005-247931号公报、日本特开2005-186015号公报等}。
在使用共聚性单体的情况下，基于(甲基)丙烯酸(盐)单元的重量，共聚性单体单元的含量(重量％)优选为0.001～10，进而优选为0.01～7，特别优选为0.03～5，最优选为0.05～3。从细胞增殖性的观点等出发，优选不含有共聚性单体单元。
在交联性单体中，从细胞增殖性的观点等出发，优选具有2个以上乙烯性不饱和基的交联性单体及具有2个以上反应性官能团的交联性单体，进而优选具有2个以上反应性官能团的交联性单体，特别优选聚乙烯亚胺、乙二醇二缩水甘油醚、二甘醇二缩水甘油醚、丙二醇二缩水甘油醚、甘油(二或三)缩水甘油醚，最优选乙二醇二缩水甘油醚。
在使用交联性单体的情况下，基于(甲基)丙烯酸(盐)单元的重量，交联性单体单元的含量(重量％)优选为0.001～50，进而优选为0.005～15，特别优选为0.02～5，最优选为0.1～2。如果在该范围内，则细胞增殖性进一步提高。
粒子(A)可以通过以下方法制造，即：在搅拌下，在疏水性有机溶媒中，连续地供给(甲基)丙烯酸(盐)、以及根据需要供给的能够共聚的其他乙烯基单体、聚合引发剂、链转移剂及/或接枝基材，使其进行公知的逆相悬浮聚合的方法{日本特开平11-5808号公报(对应美国专利；第5998553号：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)、日本特开2001-2935号公报、2003-165883号公报、日本特开2005-247931号公报及日本特开2005-186015号公报等}；使(甲基)丙烯酸(盐)、以及根据需要供给的能够共聚的其他乙烯基单体、聚合引发剂、链转移剂及/或接枝基材进行公知的水溶液聚合的方法{日本特开2005-075982号公报、日本特开2005-095759号公报(对应美国专利申请；US 2006/0282052A1：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)、日本特开2005-097569号公报、日本特开2005-186015号公报及日本特开2005-186016号公报等}等。
交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A)可以根据需要利用交联剂进行表面交联处理。从细胞增殖性的观点等出发，优选用表面交联剂交联处理交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子的表面附近。
作为表面交联剂，例如可以举出在日本特开昭59-189103号公报等中记载的多元缩水甘油(优选乙二醇二缩水甘油醚及甘油二缩水甘油醚等。)，在日本特开昭58-180233号公报(对应美国专利；第4666983号：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)及日本特开昭61-16903号公报(对应美国专利；第4734478号：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)等中记载的多元醇、多元胺、多元氮丙啶及多元异氰酸酯，在日本特开昭61-211305号公报(对应美国专利；第4755560号：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)及日本特开昭61-252212号公报等中记载的硅烷偶合剂，以及在日本特开昭51-136588号公报(对应美国专利；第4043952号：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)及日本特开昭61-257235号公报等中记载的多价金属等。在这些表面交联剂中，从与羧基(盐)基形成强的共价键，从而耐热性出色的观点出发，优选多元缩水甘油、多元胺以及硅烷偶合剂，进而优选多元缩水甘油及硅烷偶合剂，特别优选多元缩水甘油。
在进行表面交联处理的情况下，表面交联剂的量(重量％)根据表面交联剂的种类、使其交联的条件等不同而发生各种变化，而基于表面交联处理前的交联聚(甲基)丙烯酸(盐)的重量，优选为0.002～8，进而优选为0.01～4，特别优选为0.05～2，最优选为0.05～1。
作为进行表面交联处理的方法，可以适用以往公知的方法{例如，日本特开平11-5808号公报(对应美国专利；第5998553号：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)、日本特开2001-2935号公报、日本特开2003-165883号公报、日本特开2005-247931号公报及日本特开2005-186015号公报}。
粒子(A)根据需要进行干燥处理、粉碎处理及/或分级处理。对干燥处理的方法没有特别限定，可以使用利用50～230℃的温度的热风干燥的方法、使用加热至50～230℃的转筒式干燥器等的薄膜干燥法、(加热)真空干燥法、冻干法及利用红外线的干燥法等。对粉碎处理的方法没有特别限定，可以使用通常的装置(锤式粉碎机、冲击式粉碎机、辊式粉碎机及喷射气流式粉碎机等)进行粉碎。另外，对分级处理的方法也没有特别限定，可以使用通常的装置(干式振筛机、湿式振筛机及风力分球机等)进行分级。
粒子(A)的外形可以为球状、针状、扁平(椭圆)状(纺锤状)、薄片状、葡萄串状(grape bunch shape)、不定形粉碎状及纤维状的任意一种，但从细胞增殖性的观点等出发，优选球状及扁平(椭圆)状(纺锤状)，进而优选为球状。即，粒子(A)的形态优选为珠。
从细胞增殖性的观点等出发，用生理盐水使粒子(A)溶胀得到的溶胀粒子的体积平均粒径(μm)优选为10～2000，进而优选为25～1000，特别优选为50～500，最优选为100～300。
此外，可以对通过在25℃下，将1重量份粒子(A)在100重量份生理盐水(0.9重量％)中浸渍60分钟配制而成的溶胀粒子，按照JIS Z8825-1：2001{对应国际规格：ISO 13320-1：1999“颗粒尺寸分析-激光衍射技术-第1部分：基本原理(Particle size analysis-Laser diffractionmethods-Part1：General principles)”：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。}，利用激光式粒度分布测定装置(例如堀场制作所LA-920，分散介质：生理盐水，测定温度：25℃)，测定溶胀粒子的体积平均粒径。
从细胞增殖性的观点等出发，粒子(A)相对生理盐水的保水量(g/g)(以下为保水量)优选为2～50，进而优选为5～40，特别优选为10～30，最优选为10～25。
此外，利用下面的方法测定保水量。在已加入约100mL生理盐水的烧杯中，边搅拌边投入已干燥的交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子1.0g，预先使其溶胀，得到溶胀粒子，然后，移至用网孔为53μm的尼龙网制作的teabag(纵20cm、横10cm)，浸渍于过量的生理盐水中60分钟。接着，将每个teabag中的溶胀粒子放入离心脱水机中，以150G进行离心脱水90秒，去除剩余水。测定离心脱水后的重量(g2)，将从下式算出的值作为保水量(参考：JIS K7223-1996)。此外，干燥后的交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子通过在120℃、0.1kPa以下的条件下将未干燥粒子干燥1小时得到。
(保水量)＝(g2)-1.0
作为粒子(A)，可以容易地从市场获得，可以举出AQUAPEARL系列{San-DiaPolymer(株)}、ASNFRESH系列{三洋化成工业(株)}、AQUA KEEP系列{住友精化(株)}、ARONZAP系列(东亚合成(株))及AQUALIC系列((株)日本触媒)等。其中，优选AQUAPEARL系列及AQUA KEEP系列，进而优选AQUAPEARL系列。其中，“AQUAPEARL”、“ASNFRESH”、“AQUA KEEP”、“ARONZAP”及“AQUALIC”为日本国的注册商标(其中的几个商标在美国、中国等被商标注册成对应的英语标记。)
<人工多肽(P)>
“细胞粘接性”是指特定的最小氨基酸序列被细胞的整合素受体(integrin receptor)识别，细胞变得容易粘接基材的性质(大阪府立母子医疗中心杂志，第8卷第1号，58～66页，1992年)。
作为细胞粘接性最小氨基酸序列(X)，可以使用在“病态生理，第9卷第7号，527～535页，1990年”或“大阪府立母子医疗中心杂志，第8卷第1号，58～66页，1992年”中记载的序列等。
在这些最小氨基酸序列(X)中，优选Arg Gly Asp序列、Leu Asp Val序列、Leu Arg Glu序列、His Ala Val序列、Arg Glu Asp Val序列(1)、TyrIle Gly Ser Arg序列(2)、Pro Asp Ser Gly Arg序列(3)、Arg Tyr Val Val LeuPro Arg序列(4)、Leu Gly Thr Ile Pro Gly序列(5)、Arg Asn Ile Ala Glu IleIle Lys Asp Ile序列(6)、Ile Lys Val Ala Val序列(7)、Asp Gly Glu Ala序列(8)、Gly Val Lys Gly Asp Lys Gly Asn Pro Gly Trp Pro Gly Ala Pro序列(9)、Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Leu Arg Leu Lys Gly Asp Lys序列(10)、Tyr Lys Leu Asn Val Asn Asp Ser序列(11)、Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro ThrTyr Lys序列(12)、Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly序列(13)、Thr Trp Tyr Lys Ile Ala Phe Gln Arg Asn Arg Lys序列(14)、Arg Lys Arg LeuGln Val Gln Leu Ser Ile Arg Thr(15)及Pro His Ser Arg Asn(16)中的至少1种，从细胞粘接性的观点等出发，进而优选Arg Gly Asp序列、Tyr IleGly Ser Arg序列(2)、Ile Lys Val Ala Val序列(7)、Arg Lys Arg Leu Gln ValGln Leu Ser Ile Arg Thr(15)及Pro His Ser Arg Asn(16)中的至少1种，特别优选Arg Gly Asp序列。
在这些最小氨基酸序列(X)的两端也可以含有其他氨基酸{丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、半胱氨酸(Cys)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、脯氨酸(Pro)、色氨酸(Trp)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)及组氨酸(His)等}。
人工多肽(P)只要在1个分子中具有至少1个最小氨基酸序列(X)即可，从细胞粘接性的观点等出发，优选在1分子中具有1～50个，进而优选2～50个，更优选3～30个，特别优选4～20个，最优选5～15个。此外，也可以在1分子中含有2种以上的最小氨基酸序列(X)。
从人工多肽(P)的热稳定性提高的观点等出发，人工多肽(P)除了最小氨基酸序列(X)以外，还优选具有辅助氨基酸序列(Y)。
作为辅助氨基酸序列(Y)，可以使用最小氨基酸序列(X)以外的氨基酸序列，从人工多肽(P)的热稳定性的观点等出发，优选具有Gly及/或Ala的序列。作为辅助氨基酸序列(Y)，包括具有(Gly Ala)a序列、(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)b序列、(Gly Ala Gly Ala Gly Tyr)c序列、(GlyAla Gly Val Gly Tyr)d序列、(Gly Ala Gly Tyr Gly Val)e序列、{Asp GlyGly(Ala)f Gly Gly Ala}g序列、(Gly Val Pro Gly Val)h序列、(Gly)i序列、(Ala)j序列、(Gly Gly Ala)k序列、(Gly Val Gly Val Pro)m序列、(Gly Pro Pro)n序列、(Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly)o序列、(Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln)p序列及/或(Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro)q序列的序列等。其中，优选具有(Gly Ala)a序列、(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)b序列、(Gly Ala Gly Ala Gly Tyr)c序列、(Gly Ala Gly Val Gly Tyr)d序列、(Gly Ala Gly Tyr Gly Val)e、{Asp Gly Gly(Ala)f Gly Gly Ala}g序列、(Gly Val Pro Gly Val)h序列、(Gly Val Gly Val Pro)m序列及/或(GlyPro Pro)n序列的序列，进而优选具有(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)b序列、(Gly Val Pro Gly Val)h序列、(Gly Val Gly Val Pro)m序列及/或(GlyPro Pro)n序列的序列，特别优选具有(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)b序列的序列。
此外，a为5～100的整数，b为1～33的整数，c、d及e为2～33的整数，f为1～194的整数，g为{1}～{200/(6+f)}舍去小数点以后部分的整数，h为2～40的整数，i及j为10～200的整数，k为3～66的整数，m为2～40的整数，n为3～66的整数，o为1～22的整数，p及q为1～13的整数。
辅助氨基酸序列(Y)优选含有甘氨酸(Gly)及/或丙氨酸(Ala)。在含有甘氨酸(Gly)及丙氨酸(Ala)的情况下，它们的总含有比例(％)基于辅助氨基酸序列(Y)的全部氨基酸个数，优选为10～100，进而优选为20～95，特别优选为30～90，最优选为40～85。如果在该范围内，则热稳定性变得更好。
在含有甘氨酸(Gly)及丙氨酸(Ala)双方的情况下，它们的总含有个数比例优选为0.03～40，进而优选为0.08～13，特别优选为0.2～5。如果在该范围内，则热稳定性变得更好。
辅助氨基酸序列(Y)除了以上的例示以外，也可以含有其他氨基酸{丙氨酸(Ala)、甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、半胱氨酸(Cys)、蛋氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、酪氨酸(Tyr)、脯氨酸(Pro)、色氨酸(Trp)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)及组氨酸(His)等}。
作为具有(Gly Ala)a序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(17)～(19)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)b序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(20)～(22)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Ala Gly Ala Gly Tyr)c序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(23)～(25)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Ala Gly Val Gly Tyr)d序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(26)～(28)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Ala Gly Tyr Gly Val)e序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(29)～(31)表示的氨基酸序列等。
作为具有{Asp Gly Gly(Ala)f Gly Gly Ala}g序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(32)～(34)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Val Pro Gly Val)h序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(35)～(38)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly)i序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(39)～(41)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Ala)j序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(42)～(44)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Gly Ala)k序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(45)～(47)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Val Gly Val Pro)m序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(48)～(50)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Pro Pro)n序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(51)～(53)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly)o序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(54)～(56)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly LeuGln)p序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(57)～(59)表示的氨基酸序列等。
作为具有(Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly SerPro)q序列的辅助氨基酸序列，可以举出由序列编号(60)～(62)表示的氨基酸序列等。
在这些辅助氨基酸序列中，优选由序列番号(17)、(18)、(20)、(21)、(22)、(23)、(24)、(26)、(27)、(29)、(30)、(32)、(33)、(34)、(35)、(36)、(38)、(39)、(40)、(42)、(43)、(45)、(46)、(48)、(49)、(51)、(52)、(54)、(55)、(57)、(58)、(60)或(61)表示的氨基酸序列，进而优选由序列番号(18)、(20)、(21)、(22)、(24)、(27)、(30)、(34)、(35)、(36)、(37)、(38)、(40)、(43)、(46)、(49)、(52)、(55)、(58)或(61)表示的氨基酸序列，特别优选由序列番号(20)、(21)或(38)表示的氨基酸序列。
在含有辅助氨基酸序列(Y)的情况下，从热稳定性的观点等出发，(Y)的含有个数在1分子人工多肽(P)中优选为2～50，进而优选为3～30，特别优选为4～20，最优选为5～15。另外，人工多肽(P)也可以含有2种以上的辅助氨基酸序列(Y)。
人工多肽(P)也可以含有分支链，也可以一部分被交联，也可以含有环状结构。但是，人工多肽(P)优选不被交联，进而优选为没有被交联的直链结构，特别优选为不具有环状结构且没有被交联的直链结构。此外，直链结构也包括β结构(直链状肽被弯曲，该部分之间平行地排列，其间产生氢键的二级结构)。
从细胞粘接性及热稳定性的观点等出发，人工多肽(P)优选为最小氨基酸序列(X)与辅助氨基酸序列(Y)交替化学结合而成的结构。这种情况下，从细胞粘接性的观点等出发，最小氨基酸序列(X)与辅助氨基酸序列(Y)的重复单元(X-Y)的数目(个)优选为1～50，进而优选为2～40，特别优选为3～30，最优选为4～20。
另外，最小氨基酸序列(X)与辅助氨基酸序列(Y)的含有个数可以相同或不同。不同的情况下，优选任意一方的含有个数比另一方的含有个数少1个{这种情况下，优选辅助氨基酸序列(Y)少}。人工多肽(P)的最小氨基酸序列(X)与辅助氨基酸序列(Y)的含有个数比例(X/Y)优选为0.5～2，进而优选为0.9～1.4，特别优选为1～1.3。
另外，也可以在人工多肽(P)的末端部分(从最小氨基酸序列(X)或辅助氨基酸序列(Y)开始的肽末端)含有其他氨基酸。在含有其他氨基酸的情况下，其含有个数在每1个人工多肽(P)中，优选为1～1000个，进而优选为3～300，特别优选为10～100。
人工多肽(P)的重均分子量(以下为Mw)优选为1000～1000000，进而优选为2000～700000，特别优选为3000～400000，最优选为4000～200000。
此外，利用SDS-PAGE(SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳)法，分离测定样本{多肽等}，将泳动距离与标准物质进行比较，利用该方法等公知的方法求得人工多肽(P)的Mw(以下相同)。
优选的人工多肽(P)的一部分如以下所例示。
(1)最小氨基酸序列(X)为Arg Gly Asp序列(x1)的情况
具有13个Arg Gly Asp序列(x1)和12个(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)9序列(21)(y1)，且具有它们交替地化学结合而成的结构的Mw约为11万的多肽{“PronectinF”、Pronectin为三洋化成工业(株)的注册商标(日本及美国)。三洋化成工业(株)制<以下相同>}；具有5个(x1)和5个(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)3序列(20)(y2)，具有它们交替地化学结合而成的结构的Mw约为2万的多肽(“PronectinF2”)；具有3个(x1)和3个(Gly Val Pro Gly Val)2 Gly Gly(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)3序列(38)(y3)，具有它们交替地化学结合而成的结构的Mw约为1万的多肽(“PronectinF3”)等。
(2)最小氨基酸序列(X)为Ile Lys Val Ala Val序列(x2)的情况
将PronectinF、PronectinF2或PronectinF3的Arg Gly Asp序列(x1)变更成Ile Lys Val Ala Val序列(7)(x2)的“PronectinL”、“ProcetinL2”或“PronectinL3”等。
(3)最小氨基酸序列(X)为Tyr Ile Gly Ser Arg配列(x3)的情况
将PronectinF、PronectinF2或PronectinF3的Arg Gly Asp序列(x1)变更成Tyr Ile Gly Ser Arg配列(x3)的“PronectinY”、“ProcetinY2”或“PronectinY3”等。
另外，除了(1)～(3)的多肽以外，还可以优选使用宝酒造(株)制RetroNectin(重组人纤维结合蛋白(recombinant humanfibronectin)CH-296){作为最小氨基酸序列(X)含有Arg Gly Asp序列(x1)及Leu Asp Val序列的Mw约为6万的多肽}、同RGDS-ProteinA{作为最小氨基酸序列(X)含有Arg Gly Asp序列(x1)的Mw约为3万的多肽}{其中，这些多肽来源于天然，不含有辅助氨基酸序列(Y)。因而，热稳定性等比所述的(1)～(3)差。另外，这些多肽的氨基酸序列公开于日本特开平2-311498号公报(对应美国专利；第5198423号：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)。}。
人工多肽(P)是人工合成的，例如利用有机合成法(固相合成法、液相合成法等)及生化合成法[基因重组微生物(酵母、细菌、大肠杆菌等)]等制造。即，人工多肽(P)不含有动物来源的胶原或纤维结合蛋白等细胞粘接性蛋白质。
关于有机合成法，例如可以使用在日本生化学会编「续生化学实验讲座2，蛋白质的化学(下)」第641～694页(昭和62年5月20日；株式会社东京化学同人发行)中记载的方法等。关于生化合成法，例如可以使用日本特表平3-502935号公报(对应国际专利申请；WO 90/05177小册子：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)从能够容易地合成人工多肽(P)的点出发，优选利用基因重组微生物的生化合成法，特别优选使用基因重组大肠杆菌合成的方法。
在本发明的细胞培养用载体中，粒子(A)和人工多肽(P)通常利用化学键(离子键、氢键及/或共价键等)及/或物理吸附(利用范德华力(Van Der Waals Force)的吸附)结合。从粒子(A)与人工多肽(P)牢固地结合的点出发，优选化学键，进而优选共价键。
作为使人工多肽(P)向粒子(A)共价结合的方法，例如可以举出在“多肽合成的基础和实验，平成9年10月5日，丸善株式会社发行”中记载的方法等，具体而言，如以下的(1)～(3)。
(1)在使人工多肽(P)中的具有伯氨基或仲氨基的人工多肽与粒子(A)的羧基反应的情况下，预先使羧基与碳化二亚胺化合物反应，得到酰基异脲{R’-N＝C(OCOR)-NH-R’(-OCOR为来源于细胞培养用载体的部分)}，然后，向该酰基异脲中加入人工多肽(P)中的具有伯氨基或仲氨基的人工多肽，由此实现粒子(A)与人工多肽(P)的酰胺键。作为碳化二亚胺化合物，可以举出N，N’-双环己基碳化二亚胺及1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸盐等。
(2)在使人工多肽(P)中的具有伯氨基或仲氨基的人工多肽与粒子(A)中具有羟基的粒子(A){作为共聚单体，使用含羟基单体的共聚单体}反应的情况下，预先使粒子(A)的羟基与羰基二咪唑化合物反应，得到咪唑衍生物{R-Im，Im为咪唑啉环，R来源于粒子(A)}，然后，向该咪唑衍生物中加入人工多肽(P)中的具有伯氨基或仲氨基的人工多肽，由此实现粒子(A)与人工多肽(P)的N-C键。作为羰基二咪唑化合物，可以举出N，N’-羰基二咪唑等。
(3)在使人工多肽(P)中的具有羟基的人工多肽与粒子(A)的羧基反应的情况下，预先使粒子(A)的羧基与碳化二亚胺化合物反应，得到酰基异脲，然后，向该酰基异脲中加入人工多肽(P)中的具有羟基的人工多肽，由此实现粒子(A)与人工多肽(P)的酯键。
作为利用物理吸附、离子键及/或氢键使人工多肽(P)与粒子(A)结合的方法，可以举出在溶媒中投入人工多肽(P)和粒子(A)，混合从而制作的方法等。作为溶媒，没有特别限制，可以使用内含0.001～50重量份％(优选0.005～30重量％，进而优选0.01～10重量％)有机盐、有机酸盐、酸及/或碱的水溶液等(记载于日本特开2003-189848等)。在这些溶媒中，优选含有无机盐、酸及/或碱的水溶液以及水，进而优选含有无机盐、酸及/或碱的水溶液以及离子交换蒸馏水，特别优选含有无机盐、酸及/或碱的水溶液。
从提高细胞粘接性的观点等出发，在细胞培养用载体的每干燥重量中，人工多肽(P)的含量优选为5ng/g～500mg/g，进而优选为50ng/g～50mg/g，更优选为500ng/g～50mg/g，进而更优选为500ng/g～20mg/g，特别优选为500ng/g～5mg/g，最优选为5μg～5mg/g。
此外，在细胞培养用载体的每干燥单位重量的人工多肽(P)的含量超过500μg/g的情况下，例如利用Biuret法(日本生化学会编「生化学实验讲座1，蛋白质的化学I」第45～55页(1979年12月11日；株式会社东京化学同人发行)等求得。
另一方面，在人工多肽(P)的含量在500μg/g以下的情况下，例如利用Kjeldahl法(日本生化学会编「生化学实验讲座1，蛋白质的化学I」第45～55页(1979年12月11日；株式会社东京化学同人发行)等求得。
另外，也可以利用免疫学测定法(记载于日本特开2004-049921号公报等)测定。具体而言，(1)将人工多肽(P)的含量已知的细胞培养用载体{利用Biuret法或Kjeldahl法已知人工多肽(P)的含量的细胞培养载体}浸渍于生理盐水中，使其与在与人工多肽(P)结合的抗体上标记酶而成的抗体(以下为酶标记抗体)反应，测定该反应后的酶标记抗体的吸光度，作成标准曲线(人工多肽(P)的含量和与其相对的吸光度)。(2)同样地测定标本(人工多肽(P)的含量未知的细胞培养用载体)的吸光度。可以从在(1)中得到的标准曲线和在(2)中得到的吸光度，求得标本的人工多肽(P)的含量。干燥重量可以通过将1g测定样本放入真空干燥机中，在120℃、0.1kPa以下的条件下干燥1小时，计量得到。
为了提高细胞增殖性，本发明的细胞培养用载体也可以含有细胞增殖因子。作为细胞增殖因子，可以举出促进细胞的增殖的物质，例如成纤维细胞生长因子、转化生长因子、表皮生长因子、肝细胞增殖因子、血小板源性生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮细胞生长因子、神经生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子、骨形成因子、肝素结合表皮生长因子、神经营养因子、结缔组织生长因子、血管生长素、软骨调节素、腱调蛋白(tenomodulin)、干扰素、白介素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子、肾上腺髓质素及钠利尿肽等生理活性多肽等(例如记载于财团法人名古屋大学出版会发行“上田实编テイツシユエンジニアリング(组织工程)”(1999年))。在这些细胞增殖因子中，从可以适用的组织细胞的范围广、细胞增殖性进一步变高的观点等出发，优选成纤维细胞生长因子、转化生长因子、表皮生长因子、肝细胞增殖因子、血小板源性生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮细胞生长因子、骨形成因子、白介素及肿瘤坏死因子，进而优选成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮细胞生长因子、白介素及肿瘤坏死因子。
优选细胞增殖因子与粒子(A)结合。该结合与粒子(A)和人工多肽(P)的结合相同，可以使用化学键及/或物理吸附，优选的化学键及/或物理吸附也相同。
从提高细胞增殖性的观点等出发，在含有细胞增殖因子的情况下，其含量在细胞培养用载体的每干燥重量中，优选为10pg/g～1000μg/g，进而优选为100pg/g～100μg/g，特别优选为1000pg/g～10μg/g。
本发明的细胞培养用载体的外形状、体积平均粒径及保水量的优选范围与粒子(A)的优选范围一致。
本发明的细胞培养用载体也可以根据需要实施灭菌处理。作为灭菌方法，可以适用使用放射线、环氧乙烷气体、等离子、γ射线、乙醇、高压锅、干热等的灭菌方法。它们可以只进行1种方法，也可以组合2种以上。
作为能够与本发明的细胞培养用载体粘接的细胞(CE)，只要是细胞即可，没有限制，但由于在医药品等有用物质生产或治疗等中使用的哺乳动物来源的正常细胞、哺乳动物来源的株化细胞及昆虫细胞，如果使用本发明的细胞培养用载体则细胞增殖性高，所以更适合。
作为哺乳动物来源的正常细胞，可以举出与皮肤相关的细胞(上皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞及平滑肌细胞等)、与血管相关的细胞(血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞等)、与肌肉相关的细胞(肌肉细胞等)、与脂肪相关的细胞(脂肪细胞等)、与神经相关的细胞(神经细胞等)、与肝脏相关的细胞(肝细胞等)、与胰脏相关的细胞(胰岛细胞等)、与肾脏相关的细胞(肾上皮细胞、近端肾小管上皮细胞及肾小球系膜细胞等)、与肺·支气管相关的细胞(上皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞及平滑肌细胞等)、与眼相关的细胞(视细胞、角膜上皮细胞及角膜内皮细胞等)、与前列腺相关的细胞(上皮细胞、间质细胞及平滑肌细胞等)、与骨相关的细胞(成骨细胞、骨细胞及破骨细胞等)、与软骨相关的细胞(成软骨细胞及软骨细胞等)、与牙相关的细胞(牙周膜细胞及成骨细胞等)、与血液相关的细胞(白细胞及红细胞等)及干细胞{例如骨髓未分化间充质干细胞、骨骼肌干细胞、造血系干细胞、神经干细胞、肝干细胞(ovalcell、small hepatocyte等)、脂肪组织干细胞、胚胎干(ES)细胞、表皮干细胞、肠管干细胞、精子干细胞、胚胎生殖干(EG)细胞、胰脏干细胞(胰管上皮干细胞等)、白细胞系干细胞、淋巴细胞系干细胞、角膜系干细胞、前体细胞(脂肪前体细胞、血管内皮前体细胞、软骨前体细胞、淋巴细胞系前体细胞、NK前体细胞等)等}等。
作为哺乳动物来源的株化细胞，可以举出3T3细胞、A549细胞、AH130细胞、B95-8细胞、BHK细胞、BOSC23细胞、BS-C-1细胞、C3H10T1/2细胞、C-6细胞、CHO细胞、COS细胞、CV-1细胞、F9细胞、FL细胞、FL5-1细胞、FM3A细胞、G-361细胞、GP+E-86细胞、GP+envAm12细胞、H4-II-E细胞、HEK293细胞、HeLa细胞、HEp-2细胞、HL-60细胞、HTC细胞、HUVEC细胞、IMR-32细胞、IMR-90细胞、K562细胞、KB细胞、L细胞、L5178Y细胞、L-929细胞、MA104细胞、MDBK细胞、MDCK细胞、MIA PaCa-2细胞、N18细胞、Namalwa细胞、NG108-15细胞、NRK细胞、OC10细胞、OTT6050细胞、P388细胞、PA12细胞、PA317细胞、PC-12细胞、PER.C6细胞、PG13细胞、QGH细胞、Raji细胞、RPMI-1788细胞、SGE1细胞、Sp2/O-Ag14细胞、ST2细胞、THP-1细胞、U-937细胞、V79细胞、VERO细胞、WI-38细胞、ψ2细胞及ψCRE细胞等{细胞培养技术(日本组织培养学会编集，株式会社朝仓书店发行，1999年)}。
作为昆虫细胞，可以举出蚕细胞(BmN细胞及BoMo细胞等)、野蚕细胞、柞蚕细胞、蓖麻蚕细胞、夜蛾细胞(Sf9细胞及Sf21细胞等)、暗点灯蛾细胞、卷叶虫细胞、果蝇细胞、肉蝇细胞、白线斑蚊细胞、风蝶细胞、美洲大蠊细胞及粉纹夜蛾细胞(Tn-5细胞、HIGH FIVE细胞及MG1细胞等)等{昆虫バイオ工场(木村滋编著，株式会社工业调查会发行，2000年)。
在这些细胞中，从医药品等的有用物质生产或治疗等观点出发，优选哺乳动物来源的正常细胞及哺乳动物来源的株化细胞。那么，从治疗上有用的点出发，进而优选平滑肌细胞、肝细胞、成骨细胞、上皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞及干细胞，特别优选上皮细胞。另外，从医药品等的有用物质的生产上有用的点出发，进而优选3T3细胞、BHK细胞、CHO细胞、HEK293细胞、HeLa细胞、L-929细胞、MDCK细胞、PER.C6细胞、VERO细胞及WI-38细胞，特别优选MDCK细胞及VERO细胞。
作为在使用本发明的细胞培养用载体的细胞培养方法中使用的培养基(ME)，可以举出无血清培养基(Grace培养基、IPL-41培养基、Schneider’s培养基、Opti-PROTMSFM培养基、Opti-MEMTMI培养基、VP-SFM培养基、CD293培养基、293SFMII培养基、CD-CHO培养基、CHO-S-SFMII培养基、FreeStyleTM293培养基、CD-CHO ATGTM培养基及它们的混合培养基等)；普通的培养基(RPMI培养基、MEM培养基、Eagle’s MEM培养基、BME培养基、DME培养基、αMEM培养基、IMEM培养基、ES培养基、DM-160培养基、Fisher培养基、F12培养基、WE培养基、ASF103培养基、ASF104培养基、ASF301培养基、TC-100培养基、Sf-900II培养基、Ex-cell405培养基、Express-Five培养基、Drosophila培养基及它们的混合培养基)；及它们的混合培养基。
其中，从防止混入可能感染人的物质(来源于血清的病毒等)的观点等出发，优选无血清培养基，进而优选Opti-PROTMSFM培养基、Opti-MEMTMI培养基、VP-SFM培养基、CD293培养基、293SFMII培养基、CD-CHO培养基、CHO-S-SFMII培养基、FreeStyleTM293培养基、CD-CHO ATGTM培养基及它们的混合培养基，特别优选Opti-PROTMSFM培养基、VP-SFM培养基、CD293培养基、293SFMII培养基、FreeStyleTM293培养基及它们的混合培养基。
另外，可以在这些培养基中添加血清，但从防止混入可能感染人的物质(来源于血清的病毒等)的观点等出发，优选不添加血清。作为血清，包括人血清及动物血清(牛血清、马血清、山羊血清、棉羊血清、猪血清、兔血清、鸡血清、大鼠血清及小鼠血清等)。在添加血清的情况下，其中优选人血清、牛血清及马血清。另外，动物血清的来源可以举出成体来源的血清、幼仔来源的血清、新生仔来源的血清及胎儿来源的血清等。在添加血清的情况下，其中优选幼仔来源的血清、新生仔来源的血清及胎儿来源的血清，进而优选新生仔来源的血清及胎儿来源的血清，特别优选胎儿来源的血清。在添加血清的情况下，血清也可以进一步进行非作用化处理(补体的失活)或抗体的除去处理等。在使用血清的情况下，基于培养基的重量，血清的使用量(重量％)优选为0.1～50，进而优选为0.3～30，特别优选为1～20。
根据需要可以在培养基中含有细胞增殖因子。通过含有细胞增殖因子，可以提高细胞的增殖速度或提高细胞活性。作为细胞增殖因子，包括成纤维细胞生长因子、转化生长因子、表皮生长因子、肝细胞增殖因子、血小板源性生长因子、胰岛素样生长因子、血管内皮生长因子、神经生长因子、干细胞因子、白血病抑制因子、骨形成因子、肝素结合表皮生长因子、神经营养因子、结缔组织生长因子、血管生长素、细胞因子、白介素、肾上腺髓质素及钠利尿肽等生理活性多肽。其中，从可以适用的细胞的范围宽、可以进一步缩短治愈期间的观点出发，优选成纤维细胞生长因子、转化生长因子、胰岛素样生长因子及骨形成因子，进而优选成纤维细胞生长因子、转化生长因子及胰岛素样生长因子。在使用细胞增殖因子的情况下，细胞增殖因子的含量(重量％)因细胞增殖因子的种类而不同，基于培养基的重量，优选为10-16～10-3，进而优选为10-14～10-5，特别优选为10-12～10-7。
可以在这些培养基中进一步含有抗菌剂(两性霉素B、庆大霉素、青霉素及链霉素等)。在含有抗菌剂的情况下，其含量(重量％)根据抗菌剂的种类而不同，基于培养基的重量，优选为10-6～10，进而优选为10-5～1，特别优选为10-4～0.1。
作为在培养基中分散的细胞的浓度(个/mL)没有特别限制，每1mL培养基，优选为100～1亿，进而优选为1000～1千万，特别优选为1万～100万。细胞的个数的计数方法可以使用公知的方法，例如可以利用使用结晶紫的细胞核计数法测定{细胞培养技术(日本组织培养学会编集，株式会社朝仓书店发行，1999年)}。
另外，在培养基中投入的细胞培养用载体的干燥重量(g)可以根据培养的细胞的种类等适当地决定，每1L培养基，优选为0.005～800，进而优选为0.02～200，特别优选为0.1～40。
作为培养条件，没有特别限制，可以适用二氧化碳(CO2)浓度1～20体积％、5～45℃下1小时～100日、根据需要每1～10日更换培养基同时进行培养的条件等。优选CO2浓度3～10体积％、30～40℃、1～20日、每1～3日更换培养基同时进行培养的条件。
从细胞培养用载体剥离细胞的方法可以使用公知的方法，例如可以利用使用螯合剂(EDTA等)、非动物来源的蛋白质分解酶{植物来源的蛋白质分解酶(木瓜蛋白酶等)}、利用基因重组的合成酶(商品名：TrypLETMSelect、Invitrogen(株)制等)及/或动物来源的蛋白质分解酶(胰蛋白酶或胶原酶等)使其剥离的方法。
实施例
以下举出实施例，对本发明进一步详细说明，但本发明不仅限定于这些实施例。此外，只要没有特殊记载，份表示重量份，％表示重量％。
<实施例1>
<交联聚丙烯酸盐粒子(A1)的准备>
在具备搅拌机、单体供给管、氮气导入管、温度计、回流冷却器的反应容器中，加入624份环己烷、3.1份作为聚合分散剂的脱水山梨醇单硬脂酸酯，进行30分钟以上氮气鼓泡，赶出溶解空气，升温至75℃。
在另一个反应器中加入173份80％丙烯酸水溶液，边冷却边加入207份28％氢氧化钠水溶液进行中和。在该水溶液中添加4.52份交联性单体{乙二醇二缩水甘油醚}及0.278份聚合引发剂{过硫酸钾}、0.053份链转移剂{次亚磷酸钠}，然后，进行氮气鼓泡，赶出溶解空气，得到单体水溶液。
通过所述的聚合反应器的单体供给管，以6.5mL/分的比例，连续地向在聚合反应器内的搅拌中(搅拌速度为500rpm)的环己烷液体中，用约1小时供给得到的单体水溶液，在环己烷回流下，进行聚合。接着，利用共沸脱水，蒸去160份的水，然后取出水凝胶聚合物，进而，在120℃下干燥2小时，得到干燥交联聚丙烯酸钠盐。利用网孔为63μm的筛及53μm的筛{JIS Z 8801-1：2000(对应国际规格ISO 3310-1“Testsieves-Technical requirements and testing Part1：Test sieves of metal wirecloth(实验筛-技术需求和测试第1部分：金属丝网实验筛)”：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)}分级，得到粒径为53～63μm的粒子{交联聚丙烯酸钠盐粒子}。接着，对得到的粒子，添加7.5份的含有溶液浓度2％的乙二醇二缩水甘油醚的甲醇/离子交换水(体积比70/30)溶液，均一地混合。接着，风干甲醇，然后放入密闭容器中，在80℃下保持1小时，进行表面交联。然后，在顺风干燥机中，在120℃下，使其干燥30分钟，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A1)。
<人工多肽(P1)的准备>
按照日本特表平3-502935号公报(对应国家专利申请；WO 90/05177小册子：通过参照，将在其中公开的公开内容放入本发明中。)中的实施例记载的方法，制造具有13个Arg Gly Asp序列和12个(Gly Ala Gly AlaGly Ser)9序列(21)、且具有它们交替地化学结合而成的结构的Mw约为11万的多肽“PronectinF”，作为人工多肽(P1)。
<细胞培养用载体(C1)的配制>
在1g交联聚丙烯酸盐粒子(A1)中，加入含有0.85％氯化钠的0.02M、pH7.2的磷酸缓冲液(以下为PBS)50mL，放置30分钟，使交联聚丙烯酸盐粒子(A1)溶胀，然后用抽吸器抽吸除去多余的PBS。加入含有60mM浓度水溶性碳化二亚胺(1-乙基-3-(3-二甲胺基丙基)碳化二亚胺盐酸，(株)同仁化学研究所制)的PBS溶液40mL，用聚氟乙烯树脂制搅拌叶片搅拌，使其反应2小时。抽吸除去反应溶液，然后添加40mL的PBS，进行5次抽吸除去的清洗操作。
接着，加入含有600μg/mL浓度人工多肽(P1)的PBS溶液40mL，用聚氟乙烯树脂制搅拌叶片搅拌，使其反应2小时。抽吸除去反应溶液，然后添加40mL的PBS，进行5次抽吸除去的清洗操作，进而添加40mL的离子交换水，进行2次抽吸除去的清洗操作。
最后，加入真空干燥机中，在120℃、0.1kPa以下的条件下进行4小时干燥，得到本发明的细胞培养用载体(C1)。该载体(C1)的保水量为13g/g另外，在该载体(C1)中含有2mg/g的人工多肽(P1)。此外，人工多肽的含量使用利用Biuret法作成的标准曲线，利用免疫学测定法测定。其中，在预测含量为500μg以下的情况下，使用利用Kjeldahl法作成的标准曲线{以下相同。}。
<实施例2>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成1.81份”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A2)及细胞培养用载体(C2)。该载体(C2)的保水量为18g/g。另外，在该载体(C2)中含有4mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例3>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C3)。该载体(C3)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C3)中含有5mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例4>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.09份”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A4)及细胞培养用载体(C4)。该载体(C4)的保水量为23g/g。另外，在该载体(C4)中含有6mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例5>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P2){按照日本特表平3-502935号公报中的实施例记载的方法制造的具有5个ArgGly Asp序列(x1)和5个(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)3序列(20)(y2)、且具有它们交替地化学结合而成的结构的Mw约为2万的多肽(“PronectinF2”)}”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C5)。该载体(C5)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C5)中含有2mg/g的人工多肽(P2)。
<实施例6>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P3){按照日本特表平3-502935号公报中的实施例记载的方法制造的具有3个ArgGly Asp序列(x1)和3个(Gly Val Pro Gly Val)2 Gly Gly(Gly Ala GlyAla Gly Ser)3序列(38)(y3)、且具有它们交替地化学结合而成的结构的Mw约为1万的多肽(“PronectinF3”)}”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C6)。该载体(C6)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C6)中含有1mg/g的人工多肽(P3)。
<实施例7>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P4){具有Arg Gly Asp序列(x1)的Mw 490的多肽；Gly Arg Gly Asp Ser序列(63)，株式会社Peptide研究所制}”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C7)。该载体(C7)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C7)中含有0.1mg/g的人工多肽(P4)。
<实施例8>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到粒子(交联聚丙烯酸盐粒子)。不对该粒子进行表面交联处理，而直接作为交联聚丙烯酸盐粒子(A5)。另外，“在细胞培养用载体的配制中，代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)，使用交联聚丙烯酸盐粒子(A5)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到细胞培养用载体(C8)。该载体(C8)的保水量为22g/g。另外，在该载体(C8)中含有5mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例9>
<人工多肽(P5)的准备>
(1)人工多肽(P5A)的配制
按照“肽合成的基础和实验”第114～117页(昭和60年1月20日，丸善株式会社发行)等中记载的DCC法，制作含有约5％浓度的使人工多肽(P4)之间反应而成的交联多肽的溶液。用0.45μm的膜过滤器过滤10mL该溶液，然后使用凝胶过滤柱(商品名：Superdex30pg，Amersham BioScience(マシヤムバイオサイエンス)(株)制)，对滤液进行分级，然后得到Mw约为1000的级分{流速：1mL/分，洗脱液：PBS，以预先在相同条件下凝胶过滤而成的分子量标记品的洗脱时间为指标，分出Mw约为1000的级分。}。用离子交换水对该Mw约为1000的级分进行透析并脱盐，然后在-20℃、0.1kPa的条件下，进行24小时冻干，得到人工多肽(P5A){具有约2个Gly Arg Gly Asp Ser序列(63)。}。
(2)人工多肽(P5C)的配制
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P5A)之间反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为2000的级分”，除此以外，与人工多肽(P5A)的配制同样地进行，得到人工多肽(P5B){具有约4个Gly Arg Gly Asp Ser序列(63)。}。
接着，“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P5B)之间反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为4000的级分”，除此以外，与人工多肽(P5A)的配制同样地进行，得到人工多肽(P5C){具有约8个Gly Arg Gly Asp Ser序列(63)。}。
(3)人工多肽(P5)的配制
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P5A)与人工多肽(P5C)以1∶1摩尔反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为5000的级分”，除此以外，与人工多肽(P5A)的配制同样地进行，得到人工多肽(P5){具有约10个Gly Arg Gly Asp Ser序列(63)。}。
<细胞培养用载体(C9)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P5)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C9)。该载体(C9)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C9)中含有0.5mg/g的人工多肽(P5)。
<实施例10>
<人工多肽(P6)的准备>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P5)之间反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为10000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P6){具有约20个Gly Arg Gly Asp Ser序列(63)。}。
<细胞培养用载体(C10)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P6)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C10)。该载体(C10)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C10)中含有2mg/g的人工多肽(P6)。
<实施例11>
<人工多肽(P7)的准备>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P5)与人工多肽(P6)以摩尔比1∶1反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为15000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P7){具有约30个Gly Arg Gly AspSer序列(63)。}。
<细胞培养用载体(C11)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P7)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C11)。该载体(C11)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C11)中含有2mg/g的人工多肽(P7)。
<实施例12>
<人工多肽(P8)的准备>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P6)之间反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为20000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P8){具有约40个Gly Arg Gly Asp Ser序列(63)。}。
<细胞培养用载体(C12)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P8)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C12)。该载体(C12)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C12)中含有3mg/g的人工多肽(P8)。
<实施例13>
<人工多肽(P9)的准备>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P4)与含有GlyAla Gly Ala Gly Ser序列(64)的多肽以摩尔比1∶1反应”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P9){具有约1个Gly Arg GlyAsp Ser序列(63)和约1个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
<细胞培养用载体(C13)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P9)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C13)。该载体(C13)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C13)中含有0.2mg/g的人工多肽(P9)。
<实施例14>
<人工多肽(P10)的准备>
(1)人工多肽(P10A)的配制
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)之间反应”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P10A){具有约2个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
(2)人工多肽(P10D)的配制
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P10A)之间反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为2000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P10B){具有约4个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
接着，“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P10B)之间反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为3000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P10C){具有约8个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
接着，“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P10A)与人工多肽(P10A)以摩尔比1∶1反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为4000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P10D){具有约10个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
(3)人工多肽(P10)的配制
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P4)与人工多肽(P10D)以摩尔比1∶1反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为5000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P10){具有约1个Gly Arg Gly Asp Ser序列(63)和约10个GlyAla Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
<细胞培养用载体(C14)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P10)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C14)。该载体(C14)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C14)中含有0.3mg/g的人工多肽(P10)。
<实施例15>
<人工多肽(P11)的准备>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P10D)之间反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为8000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P11A){具有约20个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
接着，“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P4)与人工多肽(P11A)以摩尔比1∶1反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为9000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P11){具有约1个Gly Arg Gly Asp Ser序列(63)和约20个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
<细胞培养用载体(C15)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P11)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C15)。该载体(C15)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C15)中含有1mg/g的人工多肽(P11)。
<实施例16>
<人工多肽(P12)的准备>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P10D)与人工多肽(P11A)以摩尔比1∶1反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为13000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P12A){具有约30个Gly AlaGly Ala Gly Ser序列(64)。}。
接着，“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P4)与人工多肽(P12A)以摩尔比1∶1反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为13000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P12){具有约1个GlyArg Gly Asp Ser序列(63)和约30个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
<细胞培养用载体(C16)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P12)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C16)。该载体(C16)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C16)中含有2mg/g的人工多肽(P12)。
<实施例17>
<人工多肽(P13)的准备>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P11A)与人工多肽(P12A)以摩尔比1∶1反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为21000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P13A){具有约50个Gly AlaGly Ala Gly Ser序列(64)。}。
接着，“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P4)与人工多肽(P13A)以摩尔比1∶1反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为21000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P13){具有约1个GlyArg Gly Asp Ser序列(63)和约50个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
<细胞培养用载体(C17)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P13)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C17)。该载体(C17)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C17)中含有2mg/g的人工多肽(P13)。
<实施例18>
<交联聚丙烯酸盐粒子(A6)的准备>
搅拌·混合丙烯酸钠88份、丙烯酸22.85份、N，N’-亚甲基双丙烯酰胺0.2份及无离子水293、二氯三(三苯基膦)钌0.001份，同时保持在1～2℃。接着，向该混合液中流入氮，使混合液中的溶解氧浓度成为0.5ppm以下。接着，在该混合液中添加·混合1％过氧化氢水溶液0.3份、0.2％抗坏血酸水溶液0.8份及2％的2，2’-偶氮双脒基丙烷二盐酸水溶液0.8份，引发聚合。接着，在反应液达到80℃之后，通过在聚合温度80±2℃下聚合约5小时，得到含水树脂(凝胶)。利用切碎机(多孔板孔径：6mm、饭塚工业公司製12VR-400K)，在25℃下细切该含水树脂(凝胶)400份，然后用通气型带式干燥机(135℃、2.0m/秒；井上金属工业(株)制)干燥，得到干燥聚合物。用饮料搅拌器(NationalMX-X53、松下电器(株)制)粉碎该干燥聚合物，利用网孔为63μm的筛及53μm的筛(JIS Z 8801-1：2000)分级，得到粒径为53～63μm的粒子{交联聚丙烯酸钠盐粒子}”。高速搅拌(细川ミクロン制高速搅拌紊流搅拌器(turbulizer mixer，タ一ビユライザ一ミキサ一)：旋转数2000rpm)得到的粒子100份并同时边喷射喷雾边添加·混合乙二醇二缩水甘油醚的1％水/甲醇混合溶液(水/甲醇的重量比＝60/40)1份，在140℃下静置30分钟，加热交联(表面交联)，由此得到交联聚丙烯酸盐粒子(A6)。
<细胞培养用载体(C18)的配制>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)，使用交联聚丙烯酸盐粒子(A6)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到细胞培养用载体(C18)。该载体(C18)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C18)中含有10mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例19>
“将28％氢氧化钠水溶液的使用量从207份变更成110份”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A7)及细胞培养用载体(C19)。该载体(C19)的保水量为4g/g。另外，在该载体(C19)中含有0.1mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例20>
“将交联性单体“乙二醇二缩水甘油醚”的使用量从4.52份变更成6.91份”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A8)及细胞培养用载体(C20)。该载体(C20)的保水量为7g/g。另外，在该载体(C20)中含有0.5mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例21>
“将交联性单体“乙二醇二缩水甘油醚”的使用量从4.52份变更成0.0166份”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A9)及细胞培养用载体(C21)。该载体(C21)的保水量为28g/g。另外，在该载体(C21)中含有8mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例22>
“将交联性单体“乙二醇二缩水甘油醚”的使用量从4.52份变更成0.0111份”及“将含有溶液浓度2％乙二醇二缩水甘油醚的甲醇/离子交换水溶液的使用量从7.5变更成2.5”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A10)及细胞培养用载体(C22)。该载体(C220)的保水量为39g/g。另外，在该载体(C22)中含有10mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例23>
<交联聚丙烯酸盐粒子(A11)的准备>
“将交联性单体“乙二醇二缩水甘油醚”的使用量从4.52份变更成0.0111份”及“没有进行表面交联{不添加含有溶液浓度2％乙二醇二缩水甘油醚的甲醇/离子交换水溶液，没有在80℃下保持1小时}”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A11)。
<细胞培养用载体(C23)的配制>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)使用交联聚丙烯酸盐粒子(A11)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到及细胞培养用载体(C23)。该载体(C23)的保水量为48g/g。另外，在该载体(C23)中含有12mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例24>
“代替173份的80％丙烯酸水溶液而使用207份的80％甲基丙烯酸水溶液”，除此以外，与实施例18同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A12)及细胞培养用载体(C24)。该载体(C24)的保水量为20g/g。另外，在该载体(C24)中含有4mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例25>
“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14){按照日本特表平3-502935号公报中的实施例记载的方法制造的具有13个Ile Lys Val AlaVal序列(7)(x2)和12个(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)9序列(21)(y1)、且具有它们交替地化学结合而成的结构的Mw约为11万的多肽(“PronectinL”)}”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C25)。该载体(C25)的保水量为13g/g。另外，在该载体(C25)中含有1mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例26>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成1.81份”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制交联聚丙烯酸盐粒子(A2)及细胞培养用载体(C26)。该载体(C26)的保水量为18g/g。另外，在该载体(C26)中含有3mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例27>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C27)。该载体(C27)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C27)中含有5mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例28>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制交联聚丙烯酸盐粒子(A4)及细胞培养用载体(C28)。该载体(C28)的保水量为23g/g。另外，在该载体(C28)中含有5mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例29>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P15){按照日本特表平3-502935号公报中的实施例记载的方法制造的具有5个IleLys Val Ala Val序列(7)(x2)和5个(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)9序列(21)(y1)、且具有它们交替地化学结合而成的结构的Mw约为2万的多肽(“PronectinL2”)}”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C29)。该载体(C29)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C29)中含有1mg/g的人工多肽(P15)。
<实施例30>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P16){按照日本特表平3-502935号公报中的实施例记载的方法制造的具有3个IleLys Val Ala Val序列(7)(x2)和3个(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)9序列(21)(y1)、且具有它们交替地化学结合而成的结构的Mw约为1万的多肽(“PronectinL3”)}”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C30)。该载体(C30)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C30)中含有1mg/g的人工多肽(P16)。
<实施例31>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P17){具有Ile Lys Val Ala Val序列(x2)的Mw为529的多肽：Ile Lys Val Ala Val序列(7)，NEOSYSTEM公司制}”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C31)。该载体(C31)的保水量为21g/g。另外，该载体(C31)的人工多肽(P17)的含量为0.1mg/g。
<实施例32>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制交联聚丙烯酸盐粒子(A5)及细胞培养用载体(C32)。该载体(C32)的保水量为22g/g。另外，在该载体(C32)中含有6mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例33>
<人工多肽(P18)的配制>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P17)反应”，除此以外，与实施例9的“人工多肽(P5)的准备”同样地进行，得到人工多肽(P18){具有约10个Ile Lys Val Ala Val配列(7)的多肽。}。
<细胞培养用载体(C33)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P18)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C33)。该载体(C33)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C33)中含有0.3mg/g的人工多肽(P18)。
<实施例34>
<人工多肽(P19)的配制>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P18)反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为10000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P19){具有约20个Ile Lys Val Ala Val配列(7)的多肽。}。
<细胞培养用载体(C34)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P19)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C34)。该载体(C34)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C34)中含有0.7mg/g的人工多肽(P19)。
<实施例35>
<人工多肽(P20)的配制>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P18)与人工多肽(019)以摩尔比1∶1反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为15000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P20){具有约30个Ile Lys Val AlaVal配列(7)的多肽。}。
<细胞培养用载体(C35)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P20)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C35)。该载体(C35)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C35)中含有1mg/g的人工多肽(P20)。
<实施例36>
<人工多肽(P21)的配制>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P19)之间反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为20000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P21){具有约40个Ile Lys Val Ala Val配列(7)的多肽。}。
<细胞培养用载体(C36)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P21)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C36)。该载体(C36)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C36)中含有2mg/g的人工多肽(P21)。
<实施例37>
<人工多肽(P22)的配制>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P17)与含有GlyAla Gly Ala Gly Ser序列(64)的多肽以摩尔比1∶1反应”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P22){具有约1个Ile Lys ValAla Val配列(7)和约1个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)的多肽。}。
<细胞培养用载体(C37)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P22)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C37)。该载体(C37)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C37)中含有0.2mg/g的人工多肽(P22)。
<实施例38>
<人工多肽(P23)的配制>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P17)与人工多肽(P10D)以摩尔比1∶1反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为5000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，得到人工多肽(P23){具有约1个Ile Lys Val Ala Val配列(7)和约10个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)的多肽。}。
<细胞培养用载体(C38)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P23)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C38)。该载体(C38)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C38)中含有0.5mg/g的人工多肽(P23)。
<实施例39>
<人工多肽(P24)的配制>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P17)与人工多肽(P11A)以摩尔比1∶1反应”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为9000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，制作人工多肽(P24){具有约1个Ile Lys Val Ala Val配列(7)和约20个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
<细胞培养用载体(C39)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P24)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C39)。该载体(C39)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C39)中含有1mg/g的人工多肽(P24)。
<实施例40>
<人工多肽(P25)的配制>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P17)与人工多肽(P12A)以摩尔比1∶1反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为13000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，制作人工多肽(P25){具有约1个Ile Lys ValAla Val配列(7)和约30个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
<细胞培养用载体(C40)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P25)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C40)。该载体(C40)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C40)中含有1mg/g的人工多肽(P25)。
<实施例41>
<人工多肽(P26)的配制>
“代替使人工多肽(P4)之间反应，而使人工多肽(P17)与人工多肽(P13A)以摩尔比1∶1反应”、“作为凝胶过滤柱，代替使用商品名：Superdex30pg而使用商品名Superdex75pg”及“代替Mw约为1000的级分，而分出Mw约为21000的级分”，除此以外，与实施例9(1)同样地进行，制作人工多肽(P26){具有约1个Ile Lys ValAla Val配列(7)和约50个Gly Ala Gly Ala Gly Ser序列(64)。}。
<细胞培养用载体(C41)的配制>
“将聚合时的交联性单体的乙二醇二缩水甘油醚的使用量从4.52份变更成0.90份”，以及“代替人工多肽(P1)，使用人工多肽(P26)”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到交联聚丙烯酸盐粒子(A3)及细胞培养用载体(C41)。该载体(C41)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C41)中含有2mg/g的人工多肽(P26)。
<实施例42>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酸盐粒子(A6)”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C42)。该载体(C42)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C42)中含有8mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例43>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酸盐粒子(A7){实施例9}”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C43)。该载体(C43)的保水量为4g/g。另外，在该载体(C43)中含有0.1mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例44>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酸盐粒子(A8){实施例20}”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C44)。该载体(C44)的保水量为7g/g。另外，在该载体(C44)中含有0.2mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例45>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酸盐粒子(A9){实施例21}”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C45)。该载体(C45)的保水量为28g/g。另外，在该载体(C45)中含有6mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例46>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酸盐粒子(A10){实施例22}”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C46)。该载体(C46)的保水量为39g/g。另外，在该载体(C46)中含有10mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例47>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酸盐粒子(A11){实施例23}”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C47)。该载体(C47)的保水量为48g/g。另外，在该载体(C47)中含有10mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例48>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酸盐粒子(A12){实施例24}”及“代替人工多肽(P1)，而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C48)。该载体(C48)的保水量为20g/g。另外，在该载体(C48)中含有2mg/g的人工多肽(P14)。
<实施例49>
以0.1mM的浓度使水溶性碳化二亚胺{1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸，(株)同仁化学研究所制}溶解于PBS，得到喷雾液(1)。另外，将人工多肽(P1)以1μg/mL的浓度溶解于PBS，得到喷雾液(2)。
向1g交联聚丙烯酸盐粒子(A3)喷射喷雾0.4mL的喷雾液(1)，并同时在约25℃下使用调拌刀(spatula)混合·搅拌，然后，在静置下使其反应1小时，得到碳化二亚胺结合粒子。
接着，向碳化二亚胺结合粒子喷射喷雾0.4mL的喷雾液(2)，并同时在约25℃下混合·搅拌，使其反应1小时，得到人工多肽结合粒子。然后，向人工多肽结合粒子添加40mL的PBS，进行5次抽吸除去的清洗操作，进而添加40mL离子交换水，进行2次抽吸除去的清洗操作。
最后，加入到真空干燥机中，在120℃、0.1kPa以下的条件下进行4小时干燥，得到本发明的细胞培养用载体(C49)。该载体(C49)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C49)中含有5ng/g的人工多肽(P1)。
<实施例50>
“将水溶性碳化二亚胺的浓度从0.1mM变更成0.5mM”及“将人工多肽(P1)的浓度从1μg/mL变更成5μg/mL”，除此以外，与实施例49同样地进行，配制细胞培养用载体(C50)。该载体(C50)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C50)中含有50ng/g的人工多肽(P1)。
<实施例51>
“将水溶性碳化二亚胺的浓度从0.1mM变更成2mM”及“将人工多肽(P1)的浓度从1μg/mL变更成20μg/mL”，除此以外，与实施例49同样地进行，得到本发明的细胞培养用载体(C51)。该载体(C51)的保水量为21g/g。另外，在该载体(C51)中含有500ng/g的人工多肽(P1)。
<实施例52>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酸盐粒子(A3)”、“将水溶性碳化二亚胺的浓度从60mM变更成500mM”及“将人工多肽(P1)的浓度从600μg/mL变更成5mg/mL”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C52)。该载体(C52)的保水量为19g/g。另外，在该载体(C52)中含有50mg/g的人工多肽(P1)。
<实施例53>
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酸盐粒子(A3)”、“将水溶性碳化二亚胺的浓度从60mM变更成500mM”及“将人工多肽(P1)的浓度从600μg/mL变更成25mg/mL”，除此以外，与实施例1同样地进行，配制细胞培养用载体(C53)。该载体(C53)的保水量为14g/g。另外，在该载体(C53)中含有500mg/g的人工多肽(P1)。
<比较例1>
将交联聚丙烯酸盐粒子(A3)作为比较用的细胞培养用载体(C54)。该载体(C54)的保水量为21g/g。
<比较例2>
将市售的胶原结合葡聚糖珠(商品名：Cytodex3，Amersham BioScience(株)制)作为比较用的细胞培养用载体(C55)。该载体(C55)的保水量为9g/g。
<比较例3>
将日本特开2003-189848号公报的实施例1的记载作为参考，如以下地进行，得到比较用的细胞培养用载体(C56)。利用网孔为63μm的筛及53μm的筛(JIS Z 8801-1：2000)，对使苯乙烯99％、二乙烯基苯1％悬浮聚合而得到的聚苯乙烯珠进行分级，得到粒径为53～63μm的粒子。
接着，利用磷酸缓冲液(PBS)，将人工多肽(P1)的4.5M的高氯酸锂水溶液{人工多肽(P1)的浓度：1mg/mL}稀释成人工多肽(P1)的浓度成为15μg/mL，制作人工多肽(P1)溶液。
在25mL的人工多肽(P1)的溶液中加入5g在上述得到的珠，利用聚氟乙烯树脂{特氟隆(テフロン)(注册商标)}制搅拌子搅拌12小时。将得到的珠浆移至安装在振荡器上的不锈钢制大桶(vat)，喷射100℃的热风，振荡干燥24小时。用50mLPBS清洗2次得到的干燥珠，通过干燥，得到比较用的细胞培养用载体(C56)。该载体(C56)的保水量为0g/g。另外，该载体(C56)含有1mg/g的人工多肽(P1)。
<比较例4>
在具备搅拌机、单体供给管、氮气导入管、温度计、回流冷却器的反应容器中，加入624份环己烷、3.1份作为聚合分散剂的脱水山梨醇单硬脂酸酯，进行30分钟以上氮气鼓泡，赶出溶解空气，升温至75℃。在另一个反应器中加入138份丙烯酰胺及242份水。在该水溶液中添加0.0098份交联性单体{N，N’-亚甲基双丙烯酰胺}及0.278份聚合引发剂{过硫酸钾}、0.053份链转移剂{次亚磷酸钠}，然后，进行氮气鼓泡，赶出溶解空气，得到单体水溶液。
通过所述的聚合反应器的单体供给管，以6.5mL/分的比例，连续地向在聚合反应器内的搅拌中(搅拌速度为500rpm)的环己烷液体中，用约1小时供给得到的单体水溶液，在环己烷回流下，进行聚合。接着，利用共沸脱水，蒸去160份的水，然后取出水凝胶聚合物，进而，在120℃下干燥2小时，得到干燥交联聚丙烯酰胺。利用网孔为63μm的筛及53μm的筛{JIS Z 8801-1：2000}，对干燥交联聚丙烯酰胺进行分级，得到粒径为53～63μm的粒子{交联聚丙烯酰胺粒子}。
“代替交联聚丙烯酸盐粒子(A1)而使用交联聚丙烯酰胺粒子”，除此以外，与实施例1同样地进行，得到比较用的细胞培养用载体(C57)。该载体(C57)的保水量为4g/g。另外，在该载体(C57)中含有0.1mg/g的人工多肽(P1)。
<比较例5>
“代替人工多肽(P1)而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与比较例3同样地进行，得到比较用的细胞培养用载体(C58)。该载体(C58)的保水量为0g/g。另外，在该载体(C58)中含有1mg/g的人工多肽(P14)。
<比较例6>
“代替人工多肽(P1)而使用人工多肽(P14)”，除此以外，与比较例4同样地进行，得到比较用的细胞培养用载体(C59)。该载体(C59)的保水量为4g/g。另外，在该载体(C59)中含有0.1mg/g的人工多肽(P14)。
<细胞增殖性评价1>
对实施例1～24、49～53及比较例1～4的细胞培养用载体(C1)～(C24)及(C49)～(C57)，以150G，对用生理盐水溶胀的细胞培养用载体进行离心脱水90秒，去除剩余水，使产物的重量成为4g，将各载体投入工作容量为100mL的旋转式烧瓶。即，向各旋转式烧瓶中分别投入载体(C1)为0.29g、载体(C2)为0.21g、载体(C3)为0.18g、载体(C4)为0.17g、载体(C5)～(C7)为0.18g、载体(C8)为0.17g、载体(C9)～(C17)为0.18g、载体(C18)为0.18g、载体(C19)为0.80g、载体(C20)为0.50g、载体(C21)为0.14g、载体(C22)为0.10g、载体(C23)为0.08g、载体(C24)为0.19g、载体(C49)～(C51)为0.18g、载体(C52)为0.20g、载体(C53)为0.27g、载体(C54)为0.18g、载体(C55)为0.40g、载体(C56)为4g、载体(C57)为0.80g。
接着，以100mL/烧瓶的量，向各旋转式烧瓶中加入生理盐水，进行高压锅灭菌(121℃，20分钟)。在高压锅灭菌之后，用抽吸器抽吸除去生理盐水，之后，以50mL/烧瓶的量，添加在无血清培养基(商品名：VP-SFM，Invitrogen(株)制)中内含0.2％抗菌剂(商品名：PSA，カスケ一ド公司制)的无血清培养基，放置1小时，然后抽吸除去培养基，再次以100mL/烧瓶的量，添加相同的无血清培养基。将旋转式烧瓶放置于37℃、二氧化碳气体浓度5容量％的CO2孵箱中2小时，然后，将预培养的VERO细胞(大日本住友制药(株)制)接种于无血清培养基中，使细胞浓度成为20万个/mL。在37℃、二氧化碳气体浓度5容量％的CO2孵箱中，边进行30rpm的搅拌边培养7日。另外，在培养第4日、第5日及第6日更换培养基的一半。在培养第7日取样，利用使用结晶紫的细胞核计数法，计数每单位体积的细胞核数，测定培养基中的细胞浓度(万个/mL)。将这些结果与细胞培养用载体的保水量一起显示于表1。
[表1]
从表1的结果可以判断，比较例1～4的细胞培养用载体的VERO细胞全部没有增殖，与此相对，本发明的细胞培养用载体(实施例1～24及49～53)的VERO细胞很好地增殖。
<细胞增殖性评价2>
“将无血清培养基(商品名：VP-SFM，Invitrogen(株)制)变更成无血清培养基(商品名：Opti-PROTMSFM，Invitrogen(株)制)”及“将VERO细胞变更成MDCK细胞(大日本住友制药(株)制)”，除此以外，与<细胞增殖性评价1>同样地进行，测定培养基中的细胞浓度(万个/mL)。将这些结果与细胞培养用载体的保水量一起显示于表2。
[表2]
从表2的结果可以判断，本发明的细胞培养用载体(实施例1～24及49～53)与比较例1～4的细胞培养用载体相比，MDCK细胞显著地增殖。
<细胞增殖性评价3>
对实施例1～24、49～53及比较例1～4的细胞培养用载体(C1)～(C24)及(C49)～(C57)，以150G，对用生理盐水溶胀的细胞培养用载体进行离心脱水90秒，去除剩余水，使产物的重量成为0.4g，将各载体分别投入工作容量为10mL的旋转式烧瓶。即，向旋转式烧瓶中分别投入载体(C1)为0.029g、载体(C2)为0.021g、载体(C3)为0.018g、载体(C4)为0.017g、载体(C5)～(C7)为0.018g、载体(C8)为0.017g、载体(C9)～(C17)为0.018g、载体(C18)为0.018g、载体(C19)为0.080g、载体(C20)为0.050g、载体(C21)为0.014g、载体(C22)为0.010g、载体(C23)为0.008g、载体(C24)为0.019g、载体(C49)～(C51)为0.18g、载体(C52)为0.20g、载体(C53)为0.27g、载体(C54)为0.018g、载体(C55)为0.040g、载体(C56)为0.4g、载体(C57)为0.080g。
接着，以10mL/烧瓶，向各旋转式烧瓶中加入生理盐水，进行高压锅灭菌(121℃，20分钟)。在高压锅灭菌之后，用抽吸器抽吸除去生理盐水，之后，以5mL/烧瓶，添加在血清培养基{在Opti-MEMTMI培养基(Invitrogen(株)制)中含有5μg/mL牛胰岛素(Sigma Aldrich公司制)、400ng/mL氢化可的松(Sigma Aldrich公司制)、250ng/mL异丙基肾上腺素(Sigma Aldrich公司制)、10ng/mL的rhEGF(Sigma Aldrich公司制、10容量％胎牛血清(Invtrogen(株)制)及0.2重量％抗菌剂(商品名：PSA，Cascade公司制)的血清培养基}，放置1小时，然后抽吸除去培养基，再次以10mL/烧瓶，添加相同的血清培养基。将旋转式烧瓶放置于37℃、二氧化碳气体浓度5容量％的CO2孵箱中2小时，然后，将预先预培养的上皮细胞(商品名：NHEK(F)，仓敷纺织(株)制)接种于血清培养基中，使细胞浓度成为20万个/mL。在37℃、二氧化碳气体浓度5容量％的CO2孵箱中，边进行30rpm的搅拌边培养7日。另外，在培养第4日、第5日及第6日更换培养基的一半。在培养第7日取样，利用使用结晶紫的细胞核计数法，计数每单位体积的细胞核数，测定培养基中的细胞浓度(万个/mL)。将这些结果与细胞培养用载体的保水量一起显示于表3。
[表3]
从表3的结果可以判断，比较例1～4的细胞培养用载体的上皮细胞全部没有增殖，与此相对，本发明的细胞培养用载体(实施例1～24及49～53)的上皮细胞很好地增殖。
<细胞增殖性评价4>
对实施例25～48及比较例1～2和比较例5～6的细胞培养用载体(C25)～(C48)及(C54)～(C55)以及(C58)～(C59)，以150G，对用生理盐水溶胀的细胞培养用载体进行离心脱水90秒，去除剩余水，使产物的重量成为4g，将各载体投入工作容量为100mL的旋转式烧瓶。即，向旋转式烧瓶中分别投入载体(C25)为0.29g、载体(C26)为0.21g、载体(C27)为0.18g、载体(C28)为0.17g、载体(C29)～(C31)为0.18g、载体(C32)为0.17g、载体(C33)～(C41)为0.18g、载体(C42)为0.18g、载体(C43)为0.80g、载体(C44)为0.50g、载体(C45)为0.14g、载体(C46)为0.10g、载体(C47)为0.08g、载体(C48)为0.19g、载体(C54)为0.18g、载体(C55)为0.40g、载体(C58)为4g、载体(C59)为0.80g。以100mL/烧瓶，向各旋转式烧瓶中加入生理盐水，进行高压锅灭菌(121℃，20分钟)。在高压锅灭菌之后，用抽吸器抽吸除去生理盐水，之后，以50mL/烧瓶，添加PBS，放置1小时。
接着，用抽吸器抽吸除去PSB，以50mL/烧瓶，添加在MEM Dulbecco液体培养基(大日本住友制药(株)制)中加入了1容量％的胎牛血清(Invitrogen(株)制)的血清培养基，放置1小时，然后抽吸除去培养基，再次，以100mL/烧瓶，添加相同的血清培养基。将旋转式烧瓶放置于37℃、二氧化碳气体浓度5容量％的CO2孵箱中2小时，然后，将预先预培养的HT-1080细胞(大日本住友制药(株)制)接种于培养基中，使细胞浓度成为20万个/mL。在37℃、二氧化碳气体浓度5容量％的CO2孵箱中，边进行30rpm的搅拌边培养7日。另外，在培养第4日、第5日及第6日更换培养基的一半。在培养第7日取样，利用使用结晶紫的细胞核计数法，计数每单位体积的细胞核数，测定培养基中的细胞浓度(万个/mL)。将这些结果与细胞培养用载体的保水量一起显示于表4。
[表4]
从表4的结果可以判断，比较例1～2及比较例5～6的细胞培养用载体的HT-1080细胞全部没有增殖，与此相对，本发明的细胞培养用载体(实施例25～48)的HT-1080细胞很好地增殖。
产业上的可利用性
本发明的细胞培养用载体可以在无血清培养中发挥出出色的细胞增殖性，另外，由于没有混入病毒等感染因子的危险性，所以在细胞相关的研究开发、有用物质生产及治疗等中极为有用。
作为研究开发用，可以用于分化功能等的细胞功能评价用细胞的培养、动物实验(毒性试验、刺激性试验及代谢功能试验等)的替代用细胞的培养、基因或蛋白质导入用细胞的培养等。
作为有用物质生产用，可以用于细胞因子、血栓溶解剂、血液凝固因子制剂、疫苗、激素、抗生素及增殖因子等的生产用细胞的培养。其中，优选用于疫苗的生产用细胞的培养。
作为治疗用，可以用于皮肤、头盖骨、肌肉、皮肤组织、骨、软骨、血管、神经、腱、韧带、毛囊组织、粘膜组织、牙周组织、牙本质、骨髓、视网膜、浆膜、胃肠道及脂肪等组织以及肺、肝、胰及肾等脏器的细胞培养。
序列表
<110>三洋化成工业株式会社
黑川祐人
高桥一裕
<120>细胞培养用载体
<130>PCT0015SC
<150>JP2006/074009
<151>2006-03-17
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<170>PatentIn version 3.1
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<213>人类
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Arg Glu Asp Val
1
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<213>人类
<400>2
Tyr Ile Gly Ser Arg
1 5
<210>3
<211>5
<212>PRT
<213>人类
<400>3
Pro Asp Ser Gly Arg
1 5
<210>4
<211>7
<212>PRT
<213>人类
<400>4
Arg Tyr Val Val Leu Pro Arg
1 5
<210>5
<211>6
<212>PRT
<213>人类
<400>5
Leu Gly Thr Ile Pro Gly
1 5
<210>6
<211>10
<212>PRT
<213>人类
<400>6
Arg Asn Ile Ala Glu Ile Ile Lys Asp Ile
1 5 10
<210>7
<211>5
<212>PRT
<213>人类
<400>7
Ile Lys Val Ala Val
1 5
<210>8
<211>4
<212>PRT
<213>人类
<400>8
Asp Gly Glu Ala
1
<210>9
<211>15
<212>PRT
<213>人类
<400>9
Gly Val Lys Gly Asp Lys Gly Asn Pro Gly Trp Pro Gly Ala Pro
1 5 10 15
<210>10
<211>13
<212>PRT
<213>人类
<400>10
Gly Glu Phe Tyr Phe Asp Leu Arg Leu Lys Gly Asp Lys
1 5 10
<210>11
<211>8
<212>PRT
<213>人类
<400>11
Tyr Lys Leu Asn Val Asn Asp Ser
1 5
<210>12
<211>10
<212>PRT
<213>紫贻贝
<400>12
Ala Lys Pro Ser Tyr Pro Pro Thr Tyr Lys
1 5 10
<210>13
<211>12
<212>PRT
<213>人类
<400>13
Asn Arg Trp His Ser Ile Tyr Ile Thr Arg Phe Gly
1 5 10
<210>14
<211>12
<212>PRT
<213>人类
<400>14
Thr Trp Tyr Lys Ile Ala Phe Gln Arg Asn Arg Lys
1 5 10
<210>15
<211>12
<212>PRT
<213>人类
<400>15
Arg Lys Arg Leu Gln Val Gln Leu Ser Ile Arg Thr
1 5 10
<210>16
<211>5
<212>PRT
<213>人类
<400>16
Pro His Ser Arg Asn
1 5
<210>17
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>17
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
1 5 10
<210>18
<211>40
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>18
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
1 5 10 15
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
20 25 30
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
35 40
<210>19
<211>160
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>19
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
1 5 10 15
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
20 25 30
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
35 40 45
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
50 55 60
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
65 70 75 80
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
85 90 95
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
100 105 110
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
115 120 125
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
130 135 140
Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala Gly Ala
145 150 155 160
<210>20
<211>18
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>20
Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala
1 5 10 15
Gly Ser
<210>21
<211>54
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>21
Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala
1 5 10 15
Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala
20 25 30
Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser
35 40 45
Gly Ala Gly Ala Gly Ser
50
<210>22
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>22
Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala
1 5 10 15
Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala
20 25 30
Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser
35 40 45
Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala
50 55 60
Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala
65 70 75 80
Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser
85 90 95
Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala
100 105 110
Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala
115 120 125
Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser
130 135 140
Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala
145 150 155 160
Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala
165 170 175
Gly Ala Gly Ser
180
<210>23
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>23
Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr
1 5 10
<210>24
<211>54
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>24
Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala
1 5 10 15
Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala
20 25 30
Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr
35 40 45
Gly Ala Gly Ala Gly Tyr
50
<210>25
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>25
Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala
1 5 10 15
Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala
20 25 30
Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr
35 40 45
Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala
50 55 60
Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala
65 70 75 80
Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr
85 90 95
Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala
100 105 110
Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala
115 120 125
Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr
130 135 140
Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala
145 150 155 160
Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Tyr Gly Ala
165 170 175
Gly Ala Gly Tyr
180
<210>26
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>26
Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr
1 5 10
<210>27
<211>54
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>27
Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val
1 5 10 15
Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala
20 25 30
Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr
35 40 45
Gly Ala Gly Val Gly Tyr
50
<210>28
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>28
Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val
1 5 10 15
Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala
20 25 30
Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr
35 40 45
Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val
50 55 60
Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala
65 70 75 80
Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr
85 90 95
Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val
100 105 110
Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala
115 120 125
Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr
130 135 140
Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val
145 150 155 160
Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala Gly Val Gly Tyr Gly Ala
165 170 175
Gly Val Gly Tyr
180
<210>29
<211>12
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>29
Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val
1 5 10
<210>30
<211>54
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>30
Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr
1 5 10 15
Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala
20 25 30
Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val
35 40 45
Gly Ala Gly Tyr Gly Val
50
<210>31
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>31
Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr
1 5 10 15
Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala
20 25 30
Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val
35 40 45
Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr
50 55 60
Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala
65 70 75 80
Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val
85 90 95
Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr
100 105 110
Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala
115 120 125
Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val
130 135 140
Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr
145 150 155 160
Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala Gly Tyr Gly Val Gly Ala
165 170 175
Gly Tyr Gly Val
180
<210>32
<211>48
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>32
Asp Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Ala Asp Gly Gly Ala
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Ala Asp Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Ala Gly Gly Ala Asp Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Ala
35 40 45
<210>33
<211>18
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>33
Asp Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Ala
<210>34
<211>72
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>34
Asp Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly
1 5 10 15
Gly Ala Asp Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Ala Gly Gly Ala Asp Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
35 40 45
Ala Ala Ala Gly Gly Ala Asp Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
50 55 60
Ala Ala Ala Ala Ala Gly Gly Ala
65 70
<210>35
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>35
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val
1 5 10
<210>36
<211>50
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>36
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly
1 5 10 15
Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val
20 25 30
Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro
35 40 45
Gly Val
50
<210>37
<211>200
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>37
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly
1 5 10 15
Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val
20 25 30
Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro
35 40 45
Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly
50 55 60
Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val
65 70 75 80
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly
85 90 95
Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val
100 105 110
Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro
115 120 125
Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly
130 135 140
Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val
145 150 155 160
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly
165 170 175
Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val
180 185 190
Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val
195 200
<210>38
<211>30
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>38
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Gly Gly Ala Gly Ala
1 5 10 15
Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser Gly Ala Gly Ala Gly Ser
20 25 30
<210>39
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>39
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5 10
<210>40
<211>40
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>40
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
35 40
<210>41
<211>160
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>41
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
1 5 10 15
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
35 40 45
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
50 55 60
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
65 70 75 80
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
85 90 95
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
100 105 110
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
130 135 140
Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly Gly
145 150 155 160
<210>42
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>42
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
1 5 10
<210>43
<211>40
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>43
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
35 40
<210>44
<211>160
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>44
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
1 5 10 15
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
35 40 45
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
50 55 60
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
65 70 75 80
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
85 90 95
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
100 105 110
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
115 120 125
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
130 135 140
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala
145 150 155 160
<210>45
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>45
Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala
1 5
<210>46
<211>36
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>46
Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly
1 5 10 15
Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly
20 25 30
Ala Gly Gly Ala
35
<210>47
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>47
Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly
1 5 10 15
Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly
20 25 30
Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala
35 40 45
Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly
50 55 60
Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly
65 70 75 80
Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala
85 90 95
Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly
100 105 110
Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly
115 120 125
Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala
130 135 140
Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly
145 150 155 160
Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly Ala Gly Gly
165 170 175
Ala Gly Gly Ala
180
<210>48
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>48
Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro
1 5 10
<210>49
<211>50
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>49
Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly
1 5 10 15
Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val
20 25 30
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly
35 40 45
Val Pro
50
<210>50
<211>200
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>50
Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly
1 5 10 15
Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val
20 25 30
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly
35 40 45
Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val
50 55 60
Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro
65 70 75 80
Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly
85 90 95
Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val
100 105 110
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly
115 120 125
Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val
130 135 140
Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro
145 150 155 160
Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly
165 170 175
Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro Gly Val
180 185 190
Gly Val Pro Gly Val Gly Val Pro
195 200
<210>51
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>51
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro
1 5
<210>52
<211>36
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>52
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro
20 25 30
Pro Gly Pro Pro
35
<210>53
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>53
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
1 5 10 15
Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro
20 25 30
Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro
35 40 45
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
50 55 60
Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro
65 70 75 80
Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro
85 90 95
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
100 105 110
Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro
115 120 125
Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro
130 135 140
Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly
145 150 155 160
Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Pro
165 170 175
Pro Gly Pro Pro
180
<210>54
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>54
Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly
1 5
<210>55
<211>45
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>55
Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly
1 5 10 15
Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro
20 25 30
Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly
35 40 45
<210>56
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>56
Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly
1 5 10 15
Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro
20 25 30
Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln
35 40 45
Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly
50 55 60
Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro
65 70 75 80
Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala
85 90 95
Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly
100 105 110
Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala
115 120 125
Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly
130 135 140
Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly
145 150 155 160
Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly Gly Ala Gln Gly Pro
165 170 175
Ala Gly Pro Gly
180
<210>57
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>57
Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln
1 5 10 15
<210>58
<211>60
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>58
Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly
1 5 10 15
Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala
20 25 30
Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro
35 40 45
Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln
50 55 60
<210>59
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>59
Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly
1 5 10 15
Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala
20 25 30
Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro
35 40 45
Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly
50 55 60
Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Ala
65 70 75 80
Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Ala Pro
85 90 95
Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly
100 105 110
Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser
115 120 125
Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln
130 135 140
Gly Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly
145 150 155 160
Ala Pro Gly Leu Gln Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala
165 170 175
Pro Gly Leu Gln
180
<210>60
<211>15
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>60
Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro
1 5 10 15
<210>61
<211>60
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>61
Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly
1 5 10 15
Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala
20 25 30
Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro
35 40 45
Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro
50 55 60
<210>62
<211>180
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>62
Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly
1 5 10 15
Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala
20 25 30
Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro
35 40 45
Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro Gly
50 55 60
Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro Gly Thr
65 70 75 80
Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro Gly Thr Pro
85 90 95
Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly
100 105 110
Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro
115 120 125
Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln
130 135 140
Gly Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly
145 150 155 160
Leu Pro Gly Ser Pro Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu
165 170 175
Pro Gly Ser Pro
180
<210>63
<211>5
<212>PRT
<213>人类
<400>63
Gly Arg Gly Asp Ser
1 5
<210>64
<211>6
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>辅助氨基酸序列
<400>64
Gly Ala Gly Ala Gly Ser
1 5
Claims (18)
1.一种细胞培养用载体，其特征在于，
含有交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A)和在1分子中具有至少1个细胞粘接性最小氨基酸序列(X)的人工多肽(P)，
保水量为2～50g/g。
2.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
细胞培养用载体的保水量为5～40g/g。
3.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
细胞培养用载体的保水量为10～30g/g。
4.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
细胞培养用载体的外形为球形。
5.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A)为对内含(甲基)丙烯酸及/或(甲基)丙烯酸的碱金属盐的单体水溶液进行逆相悬浮聚合而制得的粒子。
6.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A)为被表面交联剂交联处理的粒子。
7.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
1分子人工多钛(P)中的细胞粘接性最小氨基酸序列(X)的个数为1～50个。
8.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
细胞粘接性最小氨基酸序列(X)为Arg Gly Asp序列。
9.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
人工多肽(P)为在1分子中还具有至少1个辅助氨基酸序列(Y)而成的人工多肽。
10.根据权利要求9所述的细胞培养用载体，其中，
1分子人工多钛(P)中的辅助氨基酸序列(Y)的个数为4～20个。
11.根据权利要求9所述的细胞培养用载体，其中，
辅助氨基酸序列(Y)为(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)b序列。
12.根据权利要求9所述的细胞培养用载体，其中，
人工多肽(P)具有细胞粘接性最小氨基酸序列(X)与辅助氨基酸序列(Y)交替化学结合而成的结构。
13.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
人工多肽(P)以化学键及/或物理吸附结合于交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A)。
14.根据权利要求1所述的细胞培养用载体，其中，
以细胞培养用载体的干燥重量为基准，人工多肽(P)的含量为500ng/g～50mg/g。
15.一种细胞培养用载体的制造方法，其特征在于，
包括：在溶媒中混合交联聚(甲基)丙烯酸(盐)粒子(A)和在1分子中具有至少1个细胞粘接性最小氨基酸序列(X)的人工多肽(P)，从而得到细胞培养用载体的工序，
其中，细胞培养用载体的保水量为2～50g/g。
16.一种有用物质的生产方法，其中，
包括：使用权利要求1所述的细胞培养用载体及无血清培养基，来培养细胞的工序。
17.根据权利要求16所述的生产方法，其中，
有用物质为细胞因子、血栓溶解剂、血液凝固因子制剂、疫苗、激素、抗生素、抗体或增殖因子。
18.一种组织或脏器的生产方法，其中，
包括：使用权利要求1所述的细胞培养用载体及无血清培养基，来培养细胞的工序。
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