CN101390871B

CN101390871B - 含有杂质人参皂苷Rd的人参皂苷Rb1

Info

Publication number: CN101390871B
Application number: CN2007101219162A
Authority: CN
Inventors: 顾群; 李志刚; 郭小鹏; 米长江; 阮爱华; 刘严; 渠守峰; 金治刚; 林治荣
Original assignee: BENCAO TIANYUAN PHARMACEUTICAL RESEARCH INST BEIJING
Current assignee: BENCAO TIANYUAN PHARMACEUTICAL RESEARCH INST BEIJING
Priority date: 2007-09-18
Filing date: 2007-09-18
Publication date: 2012-01-18
Anticipated expiration: 2027-09-18
Also published as: CN101390871A

Abstract

本发明公开了一种标准人参皂苷Rb₁有效成分，包括含量大于等于90％且小于100％的人参皂苷Rb₁和含量小于等于10％的杂质，其特征在于杂质包括人参皂苷Rd；其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.1％且小于等于10％；或者杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于8.0％；或者杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于5.0％；或者杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.6％且小于等于3.0％；或者杂质人参皂苷Rd的含量大于等于1.0％且小于等于2.0％；药理实验表明，本申请标准有效成分具有很好的药理作用，可以制备成药剂学上药物制剂。

Description

含有杂质人参皂苷Rd的人参皂苷Rb1

技术领域

本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种标准的人参皂苷Rb₁有效成分。

本发明在于提供一种标准的中药有效成分，即标准的人参皂苷Rb₁。

背景技术

中药有效成分是其发挥药效作用的物质基础，疗效物质的清晰与系统全面的质量控制是中药现代化的关键和核心，人用药物注册技术国际协调会议规定凡是大于0.1％的杂质都应进行控制，将中药的疗效物质与杂质研究清楚，才能保障其质量均一、疗效稳定、安全可控，在药物上市后，如发生不良反应或副作用时，可进行有效的追踪根源，有效杂质或协同作用杂质应该进行定量控制，无效杂质应该进行含量限定，有毒杂质或有害杂质应该进一步去除，或者含量限定到对人体无害的范围(比如小于10PPM)，因此，对中药有效成分中的杂质进行深入的研究，具有深远的意义，有助于中药现代化、有助于中药走向世界，更加有利于人类的身体健康。

人参皂苷Rb₁主要来源于五加科人参属人参、三七、西洋参、越南人参、竹节参，葫芦科绞股蓝属绞股蓝、缘果绞股蓝等植物的根、茎、叶、花蕾中；人参皂苷Rb₁具有显著且广泛的药理活性，除在心脑血管方面具有很好的药理活性外，近年来进一步研究表明：人参皂苷Rb₁能激活RNA多聚酶，促进大脑细胞和神经中枢细胞的RNA、DNA蛋白质，可修复受损大脑细胞，使大脑细胞再生，对大脑皮层细胞具有保护作用，可提高思维能力，改善记忆力，提示人参皂苷Rb₁具有促智、抗老年痴呆药物开发价值；在肠内某种厌氧菌的作用下，可产生CompandK，简称Rck，而Rck具有明显的抑癌作用，提示人参皂苷Rb₁具有抗癌药物开发价值；小鼠ig人参皂苷Rb₁，通过提高雄激素水平，激活No/cGMP通路，而显著改善小鼠性功能，提示人参皂苷Rb₁具有开发改善性功能药物价值。

人参皂苷Rb₁多采用实验室方法获得少量(mg级至g级)用于科学研究，比如制备高效液相色谱法、硅胶柱层析等方法，但无法获得批量(kg级以上)人参皂苷Rb₁用于成药开发与工业化生产，因此这是人参皂苷Rb₁至今难于成药的原因和难点。

申请号为03127664.4的专利文献“环保型人参皂苷Rb₁高获取量产业化分离”，该文献公开了可以得到含量大于95％的人参皂苷Rb₁，采用硅胶柱层析方法，该方法造价昂贵，难于工业化生产；该文献另一主要问题是没有分析检测的方法表明人参皂苷Rb₁的含量达到95％，其可信度值得怀疑；申请号为03148803.x的专利文献“人参皂苷Rb₁的制备工艺”，该文献公开了采用大孔树脂法+硅胶柱层析的方法+硅胶柱层析的方法得到人参皂苷Rb₁，同样该方法仅适用于实验室研究，难于实现工业化生产；该文献另一主要问题是得到人参皂苷Rb₁没有纯度，也没有含量测定的方法；申请号“200610093610.6”的专利文献“一种从人参叶中提取分离人参皂苷单体的方法”，该文献公开了采用大孔树脂法+硅胶柱层析的方法分离得到不同人参皂苷单体的方法，包括人参皂苷Rb₁；其主要问题还是没有纯度的要求，没有含量测定方法，并且该工艺方法还是采用了柱层析这种复杂、造价高、无法工业化生产的方法。

综上所述，在得到人参皂苷Rb₁有效成分的基础上，针对其杂质特别是含量较大的杂质进行研究，得到标准有效成分，具有深远的意义。

发明内容

基于上述原因，我们的科研人员在“含量大于90％的人参皂苷Rb₁，总杂质小于等于10％”的基础上，对人参皂苷Rb₁的有效成分又进行了深入的研究，通过创造性的劳动，确证了人参皂苷Rb₁中含量较大的杂质之一是人参皂苷Rd，进一步研究，对人参皂苷Rd进行定量控制，得到标准人参皂苷Rb₁有效成分，可以直接作为药物原料在市场销售，也可以作为药剂制备的制剂原料使用，这样，有利于中药原料的标准化，有利于中药制剂生产的标准化；同时，我们科研人员还针对人参皂苷Rb₁的提取纯化工艺进行研究：采用大孔树脂法，以总皂苷为原料，分离得到人参皂苷Rb₁粗品，再通过重结晶法，得到人参皂苷Rb₁，该工艺方法简单、可以实现工业化生产，得到的人参皂苷Rb₁成本较低，对其含量和杂质进行检测分析，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％，杂质中人参皂苷Rd含量小于等于10％，符合标准人参皂苷Rb₁有效成分的要求。

本发明通过以下技术方案实现的。

本申请在于提供一种标准的人参皂苷Rb₁，即标准的中药有效成分：将有效成分进行含量确定，对杂质进行物质确定和含量确定；本申请的标准人参皂苷Rb₁有效成分可以作为药物制剂原料药使用，在符合药物制剂要求的基础上，制备的人参皂苷Rb₁药物制剂可以用于治疗人体疾病。

本申请的标准的人参皂苷Rb₁有效成分为：

(1)一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，，其特征在于杂质包括人参皂苷Rd，杂质人参皂苷Rd含量大于0且小于等于10％。

(2)一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.1％且小于等于10％。

(3)一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于8.0％。

(4)一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于5.0％。

(5)一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.6％且小于等于3.0％。

(6)一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于1.0％且小于等于2.0％。

上述标准有效成分中人参皂苷Rd为杂质中含量较大之一，通过科学实验将其分离，再通过系列实验确定其结构。

上述标准有效成分可以由人参、三七、西洋参、越南人参、竹节参，葫芦科绞股蓝属绞股蓝、缘果绞股蓝等植物的根、茎、叶、花蕾中得到总皂苷，再经过高效液相色谱制备方法进行纯化得到，也可以由硅胶柱层析进行单体分离，高效液相色谱法控制终点得到，等等；

本申请上述标准人参皂苷Rb₁有效成分也可以由下述方法得到：

(1)取三七、人参、西洋参或绞股蓝提取得到的总皂苷；

(2)总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥；

(3)干燥物用乙醇、95％乙醇、正丁醇或甲醇溶解，滤过，滤液加入或者不加入有机溶剂，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

上述步骤(1)中的总皂苷可以直接由市场购买或根据科技文献制备；

上述步骤(3)得到的人参皂苷Rb₁可以重复步骤(3)的方法；

所述三七总皂苷可以通过市售购买，或者根据现有专利文献或科技文献制备得到(魏均娴、陈业高、曹树明，三七果梗皂甙成分的研究，中国中药杂志，1992，17(9)：611-613；杨崇仁、王国燕、伍明珠、等，三七芦头的皂甙成分，药学通报，1985，20(6)：337-338；董阿玲、郑俊华、果德安、等，从三七中分离微量成分三七皂苷的方法，中国中药杂志，2002，27(10)：793-794；欧来良、史作清、施荣富、等，强性大孔吸附树脂对三七皂苷的分离纯化研究，中草药，2003，34(10)：905-907；章观德，吸附树脂法测定三七及其制剂冠心宁总皂甙，中草药，1981，12(11)：23-25.)。

所述大孔树脂柱为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。

所述有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯中的一种或两种。

上述人参皂苷Rb₁为活性物质制备的单位剂量的药物制剂。

上述人参皂苷Rb₁为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为1mg-5000mg。

上述人参皂苷Rb₁为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为5mg-2000mg。

上述人参皂苷Rb₁在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肿瘤、衰老、记忆力减退药物中的应用。

一、检测方法

实验方法：

采用高效液相色谱法进行检测分析；

色谱柱：C₁₈反相色谱柱；

色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长203nm；理论板数按人参皂苷Rb₁计应不低于2500；以水∶乙腈体积比＝33∶67为流动相；

对照品溶液的配制：精密称取人参皂苷Rb₁对照品到容量瓶中，加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

供试品溶液的配制：精密称取或量取样品到容量瓶中加甲醇溶解摇匀，并稀释至刻度；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各，注入液相色谱仪，采用按外标法以峰面积计算，即得。

注：本申请人参皂苷Rb₁对照品是法定标准品，购买自中国药品生物制品鉴定所购买。

本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分的检测分析

取本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分，按照上述实验方法进行检测分析实验结果见表1：

表1人参皂苷Rb₁样品测定结果

实验结论：通过上述实验表明，本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分中，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于0且小于等于10％；人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.1％且小于等于10％；人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于8.0％；人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于5.0％；人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.6％且小于等于3.0％；人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于1.0％且小于等于2.0％。

二、人参皂苷Rd结构确证资料

取本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分，经过硅胶柱层析分离，结合高效液相色谱液法，将含量较大的杂质、人参皂苷Rb₁分别分离，得到杂质单体，进行结构确证，确证资料如下：

白色无定形粉末，¹MR(CD₃OD)：0.88(3H，s，H-19)0.95(6H，s，H-18，H-30)，1.09(3H，s，H-29)，1.36(3H，s，H-28)，1.64(6H，s，H-26，H-27)，4.45(1H，d，J＝7.2Hz，H-1’)，4.62(1H，d，J＝7.6Hz，H-1”’)4.69(1H，d，J＝7.6Hz，H-1”)，5.13(1H，t，J＝6.8Hz，H-24)。¹³CNMR(CD₃OD)：38.87(C-1)，25.86(C-2)，89.86(C-3)，39.18(C-4)，56.17(C-5)，17.85(C-6)，34.48(C-7)，39.62(C-8)，49.67(C-9)，36.52(C-10)，30.24(C-11)，69.85(C-12)，48.40(C-13)，51.10(C-14)，29.65(C-15)，25.86(C-16)，51.75(C-17)，14.88(C-18)，15.34(C-19)，83.55(C-20)，21.46(C-21)，35.28(C-22)，22.83(C-23)，124.46(C-24)，130.89(C-25)，24.45(C-26)，16.54(C-27)，27.01(C-28)，15.34(C-29)，15.86(C-30)，103.18(C-1’)，79.85(C-2’)76.28(C-3’)，70.23(C-4’)，76.53(C-5’)，61.47(C-6’)，103.99(C-1”)，74.94(C-2”)，77.11(C-3”)，70.53(C-4”)，76.90(C-5”)，61.17(C-6”)，96.90(C-1”’)，73.99(C-2”’)，76.90(C-3”’)，70.53(C-4”’)，76.50(C-5”’)，61.72(C-6”’)。各图谱与文献^[1]记载的人参皂苷Rd数据基本一致。根据以上分析，结合文献对照，确定该化合物为人参皂苷Rd。参考文献：[1]藤荣伟等，三七皂苷NMR研究II，波谱学杂志，2002，19(1)，25-32。

实验结论：通过上述实验表明，本申请含量较大杂质之一是人参皂苷Rd。

三、药理实验

实验1

对狗心肌缺血保护作用

实验动物：Beagle狗，体重7.5-10kg。

实验药物：本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分；市售人参皂苷Rb₁单体(中国药品生物制品鉴定所)；血塞通注射液.

实验方法：取实验狗，分为生理盐水组、血塞通注射液组、本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分组、市售人参皂苷Rb₁单体组，给药组分别在狗前肢皮下头静脉给药，给药量每次20mg/kg，生理盐水组等容不等量，每天给药1次，连续给药3天，给药第3天后用戊巴比妥钠25mg/kg静脉麻醉，气管插管，接人工呼吸机加以正压呼吸，从左侧第五肋开胸，剪开心包，暴露心脏，将心包切开缘缝于胸壁，在左冠状动脉前降支分二期结扎，并缓慢iv利多卡因8mg/kg以防结扎前可能引起的心室颤动，随后缝合心包及胸壁。心梗后24h，狗经戊巴比妥钠麻醉后处死，迅速取出心脏，切除大血管和脂肪组织，核对前降支结扎点的位置，称全心重，然后切除右心室和左右心房，留下室中隔及左心房，称得左心室重，从心尖和开始与前降支垂直方向将左心室切成2-3mm厚的肌片，浸于硝基四唑蓝溶液(NBT)中染色30min，剪下缺血区心肌组织称重，计算心肌梗塞范围，即：心梗范围＝缺血区重/左心室重×100％，结果见表4。

表4对狗心室梗塞范围的影响

注：与生理盐水组比较，^**P＜0.01；与阳性对照组血塞通注射液组比较#P＜0.05

实验2

对大鼠脑梗塞的保护作用

实验药物：本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分(符合本申请标准有效成分对杂质人参皂苷Rd的限定)；市售人参皂苷Rb₁单体(中国药品生物制品鉴定所)；血栓通注射液。

实验动物：SD大鼠，250-300g，雌雄各半。

实验方法：取大鼠，水合氯醛300mg/kgip麻醉，颈部切口，分离并结扎右侧颈总动脉，缝合肌肉皮肤后，右侧位固定，在右耳和右眼外眦连线中点切开皮肤，分离颞肌，暴露颧突及颞骨，在颧突的头端1～2mm处开一约3×3mm的骨窗，暴露大脑中动脉(MCA)，将MCA灼断，缝合切口。参考Bederson法给药，处死动物，取右大脑半球，切成5片，置于2g/LNPT中37℃温育15min染色，仔细挖取并称重未被染成兰色的白色梗塞脑组织，实验结果见表3。

表3不同药物对大鼠脑梗塞保护情况

注：与生理盐水组比较^**P＜0.01；与血栓通注射液组比较#P＜0.05

实验3

对大鼠肝肿瘤抑制的比较

实验动物：大鼠，150g-180g，雌雄不分。

实验药物：生理盐水；本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分；市售人参皂苷Rb₁单体(中国药品生物制品鉴定所)；艾迪注射液(贵州益佰制药股份有限公司)

实验方法：取大鼠分为生理盐水组、市售艾迪注射液组、本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分组、市售人参皂苷Rb₁单体组，作W₂₅₆的肝内接种，接种7天后，用戊巴比妥钠按35mg/kg的剂量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，测量肝上肿瘤表面最大径(a)和最小径(b)，按(a*b²)/2＝V(肿瘤体积)。分离胃、十二指肠动脉、肝总动脉和肝固有动脉，结扎胃、十二指肠动脉远端，以银夹阻断肝总动脉，于手术放大镜下在胃十二指肠动脉上切口并插入外径0.3mm导管后再送入肝固有动脉，然后按实验分组分别注入受试药物(给药量相同)，术后拔管结扎胃十二指肠动脉，放开肝总动脉银夹，再缝合切口，将大鼠置于动物室待苏醒，继续饲养观察，手术后8天，按上法检测肿瘤体积，实验结果见表4：

表4各组制剂对肿瘤的抑制比较

注：与生理盐水组比较^**P＜0.01；与阳性对照组市售艾迪注射液组比较#P＜0.05

实验4

物理、化学和生物因素均能诱发癌症，但人癌发病原因的80％-90％认为是环境化学物质引起的。

对二乙基亚硝胺(DENA)诱发大鼠肝癌的抑制

实验动物：大鼠，120g左右，雌雄不分，。

实验方法：用含二乙基亚硝胺(DENA)的饮水喂养大鼠，36周得原发性肝癌，按照实验3的方法进行实验，记录大鼠存活天数，实验结果见表5：

表5大鼠存活天数比较

注：将本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分与市售人参皂苷Rb₁单体进行小鼠记忆功能的实验、抗痴呆实验、改善性功能实验，实验结果显示，本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分比市售人参皂苷Rb₁单体药理活性好。

讨论：通过上述药理实验表明，本申请含有杂质人参皂苷Rd的人参皂苷Rb₁比含量接近100％的人参皂苷Rb₁单体药理活性要好，经过我们研究，初步解释为：人参皂苷Rd也是活性成分，同时也是人参皂苷Rb₁的降解产物，二者在进入体内，除具有相加作用外，还会具有协同作用，另外，含有一定量杂质人参皂苷Rd的人参皂苷Rb₁在药物代谢方面，能够促进人参皂苷Rb1的吸收，而含量接近100％的人参皂苷Rb₁可能是不含有人参皂苷Rd或含量微量，对人参皂苷Rb₁的影响很小，不能产生协同作用(药理和药代等方面)，因此，其药理活性要比本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分的药理活性低。

四、剂量筛选实验

对麻醉大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用

实验方法：

取健康SD大鼠，体重240-260g，随机分组：空白对照组、假手术组、模型组、盐酸地尔硫卓注射液对照组、人参皂苷Rb₁不同剂量组。置于相同环境预饲养2天，自由饮食。预饲养结束后，进行实验，动物称重，20％乌拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉满意后，仰卧固定于鼠板上，气管插管，接呼吸机，按10～12ml潮气量，70次/分的频率给予呼气，持续正压呼吸，吸∶呼比为1∶1。根据呼吸频率及深度调整呼吸参数。随后接心电图机，测正常心电图。剪去胸前手术区毛，碘酒消毒，剪开皮肤、皮下组织、胸前肌肉及筋膜3～4cm，用18#血管钳沿第三肋间钝性分离肋间肌3cm长，打开胸腔及心包膜，记录心电图，撑开3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右侧胸腔，助手用眼科镊将胸腺向上推，在左心耳与肺动脉圆锥之间找到结扎标志血管左冠状静脉，在左心耳下方2mm处用无创小圆针带6-0丝线穿线，进针深度为1～1.5mm，宽2～3mm，穿线后记录心电图，经尾静脉给予相应药液，给药10min后记录心电图，并用一带凹槽的小塑料管垫在结扎部位，两端线头在其上结扎。结扎后即刻记录心电图，以左室前壁呈紫绀或II导联S-T段弓背向上抬高大于0.1mv并持续0.5h以上为结扎成功标志(S-T段无改变者淘汰)。结扎后10min再次记录心电图，结扎30min后剪开结扎线，实现再灌注，并记录再灌注即刻心电图，清除胸腔内积血后逐层缝合胸壁，撤呼吸机，动物恢复自主呼吸，气管切口不做处理。再灌即刻、10min、20min、40min、1h、2h、3h分别记录心电图。再灌3小时，经腹主动脉取血，4000rpm离心10min取血清，采用全自动生化分析仪检测LDH、CK及CK-MB活性，并采用相应试剂盒检测血清SOD、MDA，解剖取心脏，冰生理盐水洗去残血，剪去心房及右心室，立即放入冰箱中冷冻。将心脏在冰箱中冷冻10min后，自心尖向心底平行房室沟方向将左室切成相等厚度的5片，放入1％TTC染液中，37℃染色10min，未坏死区为暗红色，坏死区呈灰白色。数码相机拍照。将坏死区和非坏死区分别称重，计算坏死区占左心室重量的百分比，即梗死范围。

检测指标分别为，心肌梗死范围。实验结果详见表6：

表6对结扎/再通大鼠左冠状动脉前降支所致心肌缺血/再灌注损伤心肌梗死范围(％)的影响(x±s)

注：与模型组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01，^***P＜0.001。

实验结论：通过剂量筛选实验表明，本申请人参皂苷Rb1随剂量增加药理活性也加强，与很多药物的药理活性不同(大部分药物随剂量增加而药理活性会到达一个平台期，即剂量再增加而活性不增加)，随着剂量增加活性一直增加，没有平台期，一直可以到出现毒性为止；经过我们剂量筛选实验和毒性实验，确定本申请人参皂苷Rb1的单位剂量为1mg-5000mg；优选单位剂量为5mg-2000mg(剂量大于5000mg出现毒性反应，小于1mg与模型组没有显著性差异)。

本申请标准人参皂苷Rb₁有效成分与现有技术人参皂苷Rb₁(“申请号为03127664.4的专利文献<环保型人参皂苷Rb₁高获取量产业化分离>，该文献公开了可以得到含量大于95％的人参皂苷Rb₁”等方法得到的)比较具有以下特点：

1、本申请将人参皂苷Rb₁中含量较大的杂质之一进行的归属，确定了其是人参皂苷Rd，进一步明确了物质基础，而现有技术中只是得到了一定含量的人参皂苷Rb₁，没有进行深入的研究，物质基础模糊；

2、本申请标注人参皂苷Rb₁有效成分可以作为药物制剂的原料，在临床应用中，发生任何不良反应或副作用，因为物质基础较明确，特别是杂质的明确可以在后续的药物临床研究中，明确出药物本身成分引起的，还是药物制剂制备过程中引入的无关物质(比如热源、污染等因素)造成的，有利于药物的发展，而现有技术中的人参皂苷Rb₁虽然是有效成分，但还存在着一定的暗箱，特别是发生不良反应或副作用时，无法追索渊源，造成药物发展的障碍(比如鱼腥草注射液事件)；

3、本申请在研究中，确定杂质人参皂苷Rd属于有效杂质，在一定基础上对有效成分人参皂苷Rb₁具有协同作用，属于有效杂质，而现有技术只是明确了人参皂苷Rb₁的含量，对其余物质属于有效杂质、无效杂质或有害杂质一无所知，研究属于起始阶段。

四、实施例

实施例1

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量90.01％，杂质含量9.99％，杂质包括人参皂苷Rd。

上述人参皂苷作为Rb₁药物原料，可以制备成药剂学上可以接受的药物制剂。

实施例2

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量99.9％，杂质含量0.1％，杂质包括人参皂苷Rd。

实施例3

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量95.4％，杂质含量4.6％，杂质包括人参皂苷Rd。

实施例4

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量99.12％，杂质人参皂苷Rd的含量0.10％。

实施例5

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量98.31％，杂质人参皂苷Rd的含量0.87％。

实施例6

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量97.35％，杂质人参皂苷Rd的含量0.50％。

实施例7

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量90.19％，杂质人参皂苷Rd的含量8.0％。

实施例8

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量90.03％，杂质人参皂苷Rd的含量8.6％。

实施例9

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量94.31％，杂质人参皂苷Rd的含量5.0％。

实施例10

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量91.50％，杂质人参皂苷Rd的含量7.17％。

实施例11

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量98.97％，杂质人参皂苷Rd的含量0.60％。

实施例12

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量95.91％，杂质人参皂苷Rd的含量3.0％。

实施例13

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量94.29％，杂质人参皂苷Rd的含量4.71％。

实施例14

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量98.27％，杂质人参皂苷Rd的含量1.0％。

实施例15

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量97.18％，杂质人参皂苷Rd的含量2.0％。

实施例16

一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量97.82％，杂质人参皂苷Rd的含量1.54％。

上述实施例1-16标准有效成分中人参皂苷Rd为杂质中含量较大之一，通过科学实验将其分离，再通过系列实验确定其结构。

上述实施例1-16标准有效成分可以由人参、三七、西洋参、越南人参、竹节参，葫芦科绞股蓝属绞股蓝、缘果绞股蓝等植物的根、茎、叶、花蕾中得到总皂苷，再经过高效液相色谱制备方法进行纯化得到，也可以由硅胶柱层析进行单体分离，高效液相色谱法控制终点得到，等等；

实施例17

取三七提取得到的三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液加入丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷通过市售购买；

实施例18

取人参提取得到的人参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100A大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用95％乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述人参总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例19

取西洋参提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-300大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮、乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述西洋参总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例20

取绞股蓝提取得到的总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-400大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述绞股蓝总皂苷的提取方法可以通根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例21

取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-400A大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到(欧来良、史作清、施荣富、等，强性大孔吸附树脂对三七皂苷的分离纯化研究，中草药，2003，34(10)：905-907；。

实施例22

取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-450大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用95％乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到(章观德，吸附树脂法测定三七及其制剂冠心宁总皂甙，中草药，1981，12(11)：23-25.)。

实施例23

取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过D101大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮、乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷通过市售购买。

实施例24

取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1300-I大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到(杨崇仁、王国燕、伍明珠、等，三七芦头的皂甙成分，药学通报，1985，20(6)：337-338)。

实施例25

取绞股蓝提取得到的总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1400大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用95％乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述绞股蓝总皂苷提取方法根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例26

取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过AB-8大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用95％乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到(欧来良、史作清、施荣富、等，强性大孔吸附树脂对三七皂苷的分离纯化研究，中草药，2003，34(10)：905-907；)。

实施例27

取西洋参提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过D101大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

实施例28

取人参提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1400大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述人参总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例29

取三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1300-I大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂丙酮，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到(杨崇仁、王国燕、伍明珠、等，三七芦头的皂甙成分，药学通报，1985，20(6)：337-338；)。

实施例30

取人参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100A大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂乙酸乙酯，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述人参总皂苷通过市售购买，

实施例31

取三七提取得到的三七总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷通过市售购买；

实施例32

取西洋参提取得到的西洋参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100A大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用95％乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

实施例33

取绞股蓝提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-300大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

实施例34

取三七提取得到的总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-400大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷的提取方法可以通根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例35

取西洋参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-400A大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述西洋参总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例36

取人参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-450大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用95％乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述人参总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例37

取人参提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过D101大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用正丁醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述人参总皂苷提取方法根据现有文献制备得到。

实施例38

取三七提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1300-I大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

实施例39

取西洋参提取得到的总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1400大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用95％乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

实施例40

取绞股蓝总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过AB-8大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用95％乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述绞股蓝总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到(。

实施例41

实施例42

取三七提取得到总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1400大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述三七总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例43

取绞股蓝总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过1300-I大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用甲醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述绞股蓝总皂苷根据现有专利文献或科技文献制备得到。

实施例44

取西洋参总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过HPD-100A大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，干燥物用乙醇溶解，滤过，滤液放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

所述西洋参总皂苷通过市售购买，

上述实施例17-44得到人参皂苷Rb₁有效成分中，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.1％且小于等于10％；或者人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于8.0％；或者人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于5.0％；或者人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.6％且小于等于3.0％；或者人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，杂质人参皂苷Rd的含量大于等于1.0％且小于等于2.0％。

上述实施例1-44的人参皂苷Rb₁为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为1mg-5000mg。

上述实施例1-44上述人参皂苷Rb₁为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为5mg-2000mg。

注：本发明所要求保护的具体技术方案，不限于上述实施例所表达的技术方案的具体组合。

Claims

1.一种人参皂苷Rb₁，人参皂苷Rb₁含量大于等于90％且小于100％，其特征在于杂质包括人参皂苷Rd，杂质人参皂苷Rd含量大于0且小于等于10％。

2.根据权利要求1所述的一种人参皂苷Rb₁，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.1％且小于等于10％。

3.根据权利要求1所述的一种人参皂苷Rb₁，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于8.0％。

4.根据权利要求1所述的一种人参皂苷Rb₁，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.5％且小于等于5.0％。

5.根据权利要求1所述的一种人参皂苷Rb₁，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于0.6％且小于等于3.0％。

6.根据权利要求1所述的一种人参皂苷Rb₁，其中杂质人参皂苷Rd的含量大于等于1.0％且小于等于2.0％。

7.根据权利要求1-6任一项所述的一种人参皂苷Rb₁，其制备方法为：取三七、人参、西洋参或绞股蓝提取得到的总皂苷，总皂苷加水溶解，滤过，滤液通过非极性或弱极性大孔吸附树脂柱，水洗、40％乙醇洗脱，洗脱液弃去，再用50％乙醇洗脱，收集50％洗脱液，干燥，所述非极性或弱极性大孔树脂为HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8；干燥物用乙醇、95％乙醇、正丁醇或甲醇溶解，滤过，滤液加入有机溶剂，有机溶剂为丙酮、乙酸乙酯中的一种或两种，放置析出，滤过、干燥，得到人参皂苷Rb₁。

8.一种如权利要求1-6任一项所述人参皂苷Rb₁的分析检测方法，其特征为：

采用高效液相色谱法进行检测分析；色谱柱：C₁₈反相色谱柱；色谱条件与系统适用性实验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流速1.0ml/min；柱温25℃；检测波长203nm；理论板数按人参皂苷Rb₁计应不低于2500；以水∶乙腈体积比＝33∶67为流动相；

9.根据权利要求1-6任一项所述的一种人参皂苷Rb₁为活性物质制备的单位剂量的药物制剂。

10.根据权利要求9所述的一种人参皂苷Rb₁为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为1mg-5000mg。

11.根据权利要求9所述的一种人参皂苷Rb₁为活性物质制备的药物制剂，其中单位剂量为5mg-2000mg。

12.根据权利要求1-6任一项所述的一种人参皂苷Rb₁在制备治疗和/或预防心脑血管疾病、肿瘤、衰老、记忆力减退药物中的应用。